MX2014005542A - Derivados de polimixina. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan los compuestos, el uso de dichos compuestos en el tratamiento, por ejemplo el tratamiento de infecciones microbianas, particularmente por bacterias Gram negativas. Los compuestos están basados en polimixina y son representados por la fórmula (I): y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, donde X es - NHC(O)-, -C(O)-, -OC(O)-, -CH2- o SO2-; R5 representa alquilo de 10 a 12 átomos de carbono(heterociclilo de 4 a 6 átomos de carbono), o alquilo de 2 a 12 átomos de carbono o alquil de O a 12 átomos de carbono(cicloalquilo de 3 a 8), y el alquilo o el cicloalquilo lleva uno, dos o tres grupos hidroxilo, o un grupo -NF6R7, o un grupo -NR6R7 y uno o dos grupos hidroxilo; y R1 a R4 y R6 a R8 son como se definen en la descripción.

Description

DERIVADOS DE POLIMIXINA Campo de la Invención La presente descripción se refiere a los nuevos compuestos, las composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y el uso de esos compuestos y las composiciones farmacéuticas para el tratamiento, por ejemplo el tratamiento de infecciones microbianas, particularmente por bacterias Gram negativas.

Antecedentes de la Invención En individuos susceptibles, ciertas bacterias Gram negativas pueden provocar complicaciones e infecciones serias, tales como neumonía, infecciones del tracto urinario, infecciones de heridas, infecciones del oído, infecciones oftálmicas, infecciones intra-abdominales , sobre-crecimiento bacteriano oral y sepsis. El tratamiento de las infecciones bacterianas serias en la práctica clínica puede ser complicado por la resistencia a los antibióticos. En los años recientes se ha observado una elevación en las infecciones por bacterias Gram negativas que son resistentes a muchos tipos de antimicrobianos, incluyendo los antibióticos de amplio espectro tales como los aminoglucósidos , cefalosporinas e incluso los carbapenems . Por lo tanto, existe una necesidad para identificar nuevos antimicrobianos que sean efectivos contra las bacterias Gram ef. 248085 negativas, en particular contra las bacterias Gram negativas resistentes a múltiples fármacos.

Las polimixinas son una clase de antibióticos producidos por la bacteria Gram positiva Bacillus polymyxa. Primeramente identificadas a finales de los años 1940s, las polimixinas, particularmente la polimixina B y la polimixina E (colistina) fueron utilizadas en el tratamiento de infecciones por Gram negativos. Sin embargo, estos antibióticos mostraron efectos colaterales tales como nefrotoxicidad . En consecuencia, su uso en terapia está limitado al tratamiento de último recurso.

El documento O 2008/017734 intenta enfrentar este problema de toxicidad al proporcionar derivados de polimixina que lleven al menos dos pero no más de tres cargas positivas. Se dice que estos compuestos son agentes antibacterianos efectivos con toxicidad reducida. Se lanza la hipótesis en la descripción de que el número reducido de cargas positivas disminuye la afinidad del compuesto por el tejido aislado de riñon de rata, lo cual a su vez puede conducir a una reducción en la nefrotoxicidad.

Sorprendentemente, los presentes inventores han encontrado que ciertos compuestos tipo polimixina, alternativos, incluyendo algunos con 4 o más cargas tienen actividad antibacteriana adecuada mientras que también aparentemente muestran menos toxicidad, especialmente nefrotoxicidad.

Breve descripción de la Invención Se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en donde : X representa un grupo -NHC(O)-, -O(O)-, -OC(O)-, -CH2- o -S02- ; y R1 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de fenilalanina, leucina o valina; R2 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de leucina, isoleucina, fenilalanina, treonina, valina o norvalina ; R3 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de treonina o leucina; R4 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa el ácido a,?-diaminobutírico o un residuo de serina; R5 representa (alquil de 0 a 12 átomos de carbono) - (heterociclilo de 4 a 6 átomos de carbono) , o Alquilo de 2 a 12 átomos de carbono o (alquil de 0 a 12 átomos de carbono) - (cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono) , en donde el alquilo o el cicloalquilo lleva: i) uno, dos o tres grupos hidroxilo, o ii) un grupo -NR6R7, o iii) un grupo -NR6R7 y uno o dos grupos hidroxilo; R6 representa hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R7 representa hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R8 representa hidrógeno o metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los compuestos de la fórmula (I) son caracterizados porque la parte peptídica de la molécula contiene únicamente nueve aminoácidos mientras que las polimixinas naturales comprenden 10 aminoácidos .

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra la concentración de NAG (ng/24 horas) a los días 0, 4 y 7 para los compuestos 2, 6 y 14 y la Colistina. La gráfica a mano izquierda muestra de izquierda a derecha la Colistina (2 mg/kg BID) , Colistina (8 mg/kg BID) , compuesto 2 (8 mg/kg BID) y 6 (8 mg/kg BID) . La gráfica a mano derecha muestra la Colistina (2 mg/kg BID) , Colistina (8 mg/kg BID) y el compuesto 14 (8 mg/kg BID) .

La Figura 2 muestra la concentración de la albúmina (ng/24 h) en los días 0, 4 y 7 para los compuestos 2, 6 y 14 y la Colistina. La gráfica a mano izquierda muestra de izquierda a derecha la Colistina (2 mg/kg BID) , Colistina (8 mg/kg BID) , compuesto 2 (8 mg/kg BID) y 6 (8 mg/kg BID) . La gráfica a mano derecha muestra la Colistina (2 mg/kg BID) , Colistina (8 mg/kg BID) y el compuesto 14 (8 mg/kg BID) .

La Figura 3 muestra la concentración de la cistatina C (ng/24 horas) en los días 0, 4 y 7 para los compuestos 2, 6 y 14 y la Colistina. La gráfica a mano izquierda muestra de izquierda a derecha la Colistina (2 mg/kg BID) , Colistina (8 mg/kg BID) compuesto 2 (8 mg/kg BID) y 6 (8 mg/kg BID) . La gráfica a mano derecha muestra la Colistina (2 mg/kg BID) ID) , Colistina (8 mg/kg BID) y el compuesto 14 (8 mg/kg BID) .

Descripción Detallada de la Invención Sorprendentemente, los compuestos de la fórmula (I) parecen tener menor toxicidad que los compuestos de polimixina progenitores, mientras que conservan la actividad antibacteriana útil.

Se sabe que el nanopéptido de polimixina que carece de la cadena de acilo tiene la toxicidad reducida, pero carece de actividad antibacteriana útil. Sin embargo, un estudio de las longitudes de cadena de los derivados del nonapéptido acil-polimixina B, simples (K. Okimura et . al Bull. Chem. Soc . Jpn, 2007, 80, 543) sugirió la importancia de la longitud de cadena para la actividad antibacteriana, con un óptimo de alrededor de 8 átomos de carbono, y demostró que el derivado de acetilo tuvo muy pobre actividad con E.coli y Salmonella typhlmurlum. Esto fue consistente con las conclusiones provenientes de la serie del acil-decapéptido (P.C de Visser et al, J. Peptide Res, 2003, 61, 298), donde los análogos de pentanoilo y butanoilo mostraron una caída marcada en la actividad.

Hemos encontrado sorprendentemente buena actividad antibacteriana junto con la toxicidad reducida en los nanopéptidos de polimixina B, de acuerdo a la invención, incluyendo aquellos acil-nanopéptidos sustituidos, con cadenas de acilo cortas, especialmente aquellas que poseen un sustituyente amino.

Se sospecha que la toxicidad de los compuestos tipo polimixina resultan de una interacción similar al detergente, con las membranas de las células eucarióticas . Además, la nefrotoxicidad de los compuestos tipo polimixina puede resultar del hecho de que éstos son retenidos en las células renales y de este modo se acumulan en vez de ser excretados del cuerpo. Mientras que no se desee estar comprometido por alguna teoría, se lanza la hipótesis de que los compuestos de la presente invención tienen un grupo R5 que comprende un sustituyente que perturba la hidrofobicidad del componente alquilo de los mismos. Los inventores creen que esta perturbación cambia el balance de la naturaleza hidrofóbica e hidrofílica de las moléculas, lo cual significa que éstas son menos adecuadas para alinearse por sí mismas en capas bilipídicas las cuales forman membranas. A su vez esta incapacidad para alinearse en la membrana puede dar como resultado menor tiempo de residencia en ésta, y de este modo puede dar como resultado menor toxicidad.

El Nanopéptido de polimixina como es empleado en la presente, está destinado a referirse a los aminoácidos 2-10 de la polimixina B o la polimixina E.

Un residuo de aminoácido (por ejemplo, un residuo de leucina, etc.) como es empleado en la presente, está destinado a referirse a un aminoácido que ha perdido una molécula de agua y forma un enlace con otra entidad (tal como otro aminoácido) a través del extremo carbonilo del mismo, y también forma un enlace a través del extremo de nitrógeno del mismo a otra entidad (tal como otro aminoácido) . Los enlaces formados pueden ser por ejemplo enlaces amida.

Alquilo, como se utiliza en la presente se refiere al alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada, tal como, pero no limitado a, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, butilo, n-butilo y ter-butilo. En una modalidad, alquilo se refiere al alquilo de cadena lineal.

El alquilo en el contexto de una molécula ligadora (es decir, el sustituyente alquilo) se extiende claramente a los fragmentos alquileno, incluyendo las versiones de cadena ramificada y lineales de los mismos. Las ramificaciones pueden terminar en el radical alquilo tal como -CH3.

Heterociclilo como es empleado en la presente, es un anillo carbocíclico saturado que comprende al menos un átomo se nitrógeno en el anillo, por ejemplo 1 ó 2 átomos de nitrógeno en el anillo, tal como únicamente 1 átomo de nitrógeno en el anillo, y que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional del anillo seleccionado de oxígeno y azufre.

Los ejemplos de grupos heterociclilo de 4 a 6 átomos de carbono incluyen azetidina, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo. En una modalidad, el heterociclilo es enlazado al resto de la molécula a través del nitrógeno. En el término "heterociclilo de 4 a 6 átomos de carbono", la expresión 4 a 6 átomos de carbono representa el número total de átomos en el anillo, incluyendo carbono y heteroátomos .

En una modalidad, 1 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de fenilalanina, por ejemplo una D-fenilalanina o un residuo de leucina, tales como un residuo de D-leucina.

En una modalidad R2 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de leucina.

En una modalidad R3 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de treonina.

En una modalidad R4 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un ácido , ?-diaminobutírico (Dab) o un residuo de serina, por ejemplo L-Dab o D-Ser.

En una modalidad X representa -C(=0) .

En una modalidad R5 representa azetidina, pirrolidinilo o piperidinilo .

En una modalidad, R5, el componente alquilo de 2 a 12 átomos de carbono es alquilo de 2 átomos de carbono, alquilo de 3 átomos de carbono, alquilo de 4 átomos de carbono, alquilo de 5 átomos de carbono, alquilo de 6 átomos de carbono, alquilo de 7 átomos de carbono, alquilo de 8 átomos de carbono, alquilo de 9 átomos de carbono, alquilo de 10 átomos de carbono, alquilo de 11 átomos de carbono o alquilo de 12 átomos de carbono.

En una modalidad, R5 el componente alquilo de 2 a 12 átomos de carbono es alquilo de 3 a 10 átomos de carbono, por ejemplo alquilo de 4 a 8 átomos de carbono.

En una modalidad R5 es cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono, por ejemplo cicloalquilo de 5 átomos de carbono o cicloalquilo de 6 átomos de carbono.

En una modalidad R5 lleva un sustituyente .

En una modalidad R5 lleva dos sustituyentes .

En una modalidad R5 lleva tres sustituyentes .

En una modalidad R5 lleva uno, dos o tres grupos hidroxilo, por ejemplo, un grupo hidroxilo.

En una modalidad R5 lleva un grupo amina, por ejemplo alquilo de 2 a 12 átomos de carbono, que posee una amina, tal como un alquilo de 2 a 4 átomos de carbono que posee una amina.

En una modalidad R5 lleva uno, dos o tres grupos hidroxilo, tales como un hidroxilo.

En una modalidad R5 lleva un grupo amino y un grupo hidroxilo .

En una modalidad R5 lleva un grupo amino y dos grupos hidroxilo.

En una modalidad en donde R5 lleva uno o más hidroxilos, entonces la cadena de alquilo es de 5 a 12 átomos de carbono.

En una modalidad R5 no lleva más de un grupo amino. En una modalidad en donde R5 lleva más de un sustituyente, los sustituyentes no están localizados sobre el mismo átomo de carbono.

En una modalidad, al menos un sustituyente R5 (tal como un sustituyente) está localizado sobre el alquilo de 2 átomos de carbono, alquilo de 3 átomos de carbono, alquilo de 4 átomos de carbono, alquilo de 5 átomos de carbono, alquilo de 6 átomos de carbono, alquilo de 7 átomos de carbono, alquilo de 8 átomos de carbono, alquilo de 9 átomos de carbono, alquilo de 10 átomos de carbono, alquilo de 11 átomos de carbono o alquilo de 12 átomos de carbono.

En una modalidad, al menos un sustituyente R5 (tal como un sustituyente) está sobre un carbono terminal de una cadena de alquilo lineal o una ramificación de alquilo, por ejemplo, una cadena de alquilo ramificada.

Cuando el sustituyente está sobre el carbono terminal de una cadena de alquilo lineal (o más bien el carbono terminal de una ramificación) la parte restante de la cadena de alquilo (o más bien la parte que enlaza el alquilo de una ramificación) formará un enlace alquileno. De este modo, el término alquilo como se utiliza en la presente, es de hecho un término genérico que cubre la situación en donde parte o toda de una porción alquilo es de hecho una porción alquileno .

El carbono terminal como se emplea en la presente, está destinado a referirse al carbono que podría ser un -CH3 si éste no llevara sustituyentes .

En una modalidad, al menos un sustituyente (tal como solo uno) no está sobre un carbono terminal, es decir, -CH (sustituyente) - .

En una modalidad R6 es hidrógeno.

En una modalidad R6 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como alquilo de 1 átomo de carbono, alquilo de 3 átomos de carbono, o alquilo de 4 átomos de carbono, por ejemplo metilo.

En una modalidad R7 es hidrógeno.

En una modalidad R7 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como alquilo de 1 átomo de carbono, alquilo de 2 átomos de carbono, alquilo de 3 átomos de carbono, o alquilo de 4 átomos de carbono, por ejemplo metilo.

En una modalidad ambos de R6 y R7 representan metilo .

En una modalidad R6 representa hidrógeno y R7 representa metilo.

En una modalidad R5 se selecciona de CH(OH) (CH2) 5CH3, -CH2NH2, - CH2CH2NH2 , - CH2CH2CH2NH2 , -(CH2)5NH2, -(CH2)7NH2, -CH2CH2NHCH3, -CH2CH2N (CH3) 2 , y -(CH2)7OH.

En una modalidad R8 es metilo.

En una modalidad R8 es hidrógeno.

En una modalidad, el compuesto es de la fórmula (la) : o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Donde R1 (junto con los grupos asociados) representa fenilalanina, R2 (junto con los grupos asociados) representa leucina, R3 (junto con los grupos asociados) representa treonina, R4 (junto con los grupos asociados) representa ácido OÍ, ?-diaminobutírico; y R8 representa metilo (y junto con los grupos asociados representa treonina) , el compuesto de la fórmula (la) es un nanopéptido de polimixina que tiene los aminoácidos 2-10 de la polimixina B.

Donde R1 (junto con los grupos asociados) representa leucina, R2 (junto con los grupos asociados) representa leucina, R3 (junto con los grupos asociados) representa treonina, R4 (junto con los grupos asociados) representa ácido a, ?-diaminobutírico; y R8 representa metilo (y junto con los grupos asociados representa treonina) , el compuesto de la fórmula (la) es un nanopéptido de polimixina que tiene los aminoácidos 2-10 de la polimixina E.

En una modalidad, un compuesto de la fórmula (I) tiene tres cargas positivas.

En una modalidad, un compuesto de la fórmula (I) tiene cuatro o cinco cargas positivas, tal como cuatro.

En una modalidad, un compuesto de la fórmula (I) tiene cinco cargas positivas.

En una modalidad, un compuesto de la fórmula (I) tiene seis cargas positivas.

En una modalidad, el compuesto se selecciona de: Nonapéptido de 2-hidroxioctanoil-polimixina B; Nonapéptido de 2 -aminoetanoil polimixina B; Nonapéptido de 3 -aminopropropanoil-polimixina B; Nonapéptido de 3 - (?,?-dimetilamino) -propanoil-polimixina B; Nonapéptido de 4 -aminobutanoil-polimixina B; Nonapéptido de 6-aminohexanoil-polimixina B; Nonapéptido de 8-hidroxioctanoil-polimixina B; Nonapéptido de 8 -aminooctanoil-polimixina B; Nonapéptido de 3- (N-metilamino) propanoil-polimixina B; Nonapéptido de 2 -amino-ciclopentan-carbonil-polimixina B; Nonapéptido de 3 -aminopropropanoilcolistina (polimixina E) Nonapéptido de 3 -pirrolidin-3 -carbonil-polimixina B; Nonapéptido de 3 -amino-3-ciclohexanpropanoil] polimixina B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Adicional o alternativamente, el compuesto se selecciona de: Nonapéptido de 5-aminopentanoil-polimixina B Nonapéptido de hidroxiacetil-polimixina B Nonapéptido de 3-hidroxioctanoil-polimixina B Nonapéptido de 4 - (N, -dimetilamino) -butanoil-polimixina B Nonapéptido de 7-aminoheptanoil-polimixina B Nonapéptido de 4 -morfolinilbutanoil-polimixina B Nonapéptido de 6-hidroxi exanoil-polimixina B Nonapéptido de 3 -hidroxibutanoil-polimixina B Nonapéptido de 4- (N-metilamino) -butanoil -polimixina B, Nonapéptido de trans-4-aminociclohexancarbonil-polimixina B, Nonapéptido de 4 -aminobutanoil-polimixina E, Nonapéptido de 2 -hidroxioctanoil-polimixina E, Nonapéptido de cis-4-aminociclohexan-carbonil-polimixina B, Nonapéptido 4 -amino-4 -metil-pentanoil-polimixina B Nonapéptido 4-amino-5-metilhexanoil-polimixina B, incluyendo por ejemplo nonapéptido de 4 - (R) -amino-5-metilhexanoil-polimixina B Nonapéptido de 3- (l-pirrolidin-2-il) -propionil-polimixina B, incluyendo por ejemplo Nonapéptido de 3- (S) - (1-pirrolidin-2-il) -propionil-polimixina B Nonapéptido de 4-aminopentanoil-polimixina B, incluyendo por ejemplo nonapéptido de 4 - (S) -aminopentanoil-polimixina B Nonapéptido de trans-4-hidroxiciclohexancarbonil-polimixina B, Nonapéptido de 3 -hidroxipropanoil -polimixina B Nonapéptido de (2-hidroxi-2 -ciclohexil) etanoil-polimixina B Nonapéptido de 2-amino octanoil-polimixina B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Los ejemplos de sales del compuesto de la fórmula (I) incluyen todas las sales farmacéuticamente aceptables, tales como, sin limitación, las sales por adición de ácidos minerales fuertes tales como las sales de HCl y HBr y las sales por adición de ácidos orgánicos fuertes tales como la sal del ácido metansulfónico . Los ejemplos adicionales de sales incluyen sulfatos y acetatos tales como trifluoroacetato o tricloroacetato .

En una modalidad, los compuestos de la presente descripción son proporcionados como una sal de sulfato.

Un compuesto de la descripción puede ser también formulado como profármaco. Los profármacos pueden incluir un compuesto antibacteriano descrito en la presente, en el cual uno o más grupos amino son protegidos con un grupo que puede ser escindido in vivo, para liberar el compuesto biológicamente activo. En una modalidad, el profármaco es un "profármaco de amina". Los ejemplos de profármacos de amina incluyen sulfometilo, como se describe, por ejemplo en Bergen et al, Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 2006, 50, 1953 o HSO3-FMOC, como se describe por ejemplo, en Schechter et al, J.Med Chem 2002, 45(19) 4284, y sales de los mismos. Los ejemplos adicionales de ejemplos de profármacos de amina son dados por Krise y Oliyai in Biotechnology: Pharmaceutical AspectS, 2007, 5(2), 101-131.

En una modalidad, los compuestos de la invención son proporcionados como un profármaco.

La descripción se extiende en la presente a los solvatos de los compuestos de la fórmula (I) . Los ejemplos de solvatos incluyen hidratos .

Los compuestos de la descripción incluyen aquellos donde el átomo especificado es reemplazado por isótopo de origen natural o de origen no natural. En una modalidad, el isótopo es un isótopo estable. De este modo, los compuestos de la descripción incluyen, por ejemplo compuestos que contienen deuterio y similares.

La presente invención proporciona los compuestos que tienen los aminoácidos 2-10 de la polimixina B, o una variante de los mismos como se describe más adelante, en el extremo N del aminoácido que corresponde al residuo 2 en la polimixina B, es modificado con un grupo R5-X- . Las variables R5 y X son como se definen anteriormente. En los compuestos de la invención, el residuo 1 de la polimixina B está ausente.

Una variante del compuesto es un compuesto en el cual uno o más, por ejemplo, de 1 a 5, tales como 1, 2, 3 ó 4 aminoácidos están sustituidos con otro aminoácido. El aminoácido está en una posición seleccionada de las posiciones 2, 3, 6, 7 ó 10 (con referencia a la numeración de los residuos utilizados en la polimixina B) . La sustitución puede ser por otro aminoácido o por un estereoisomero.

En la posición 2, la variante puede tener una sustitución D-Ser.

En la posición 3, la variante puede tener una sustitución Ser.

En la posición 6, la variante puede tener una sustitución Leu o Val.

En la posición 7, la variante puede tener una sustitución lie, Phe, Thr, Val o Nva (norvalina) .

En la posición 10, la variante puede tener una sustitución Leu.

Un compuesto de polimixina E puede ser considerado como un compuesto de polimixina B que tiene una sustitución Leu en la posición 6.

Por conveniencia, los compuestos de la invención son representados por la fórmula (I) donde los aminoácidos en las posiciones 2, 3, 6, 7 ó 10 son determinados por la naturaleza de los grupos 8, R4, R1, R2 y R3 respectivamente. Los compuestos de la invención, los cuales incluyen las variantes descritas anteriormente, son biológicamente activos .

Los compuestos de la fórmula (I) pueden ser preparados mediante síntesis de péptidos convencionales, utilizando los métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica. Los métodos adecuados incluyen la síntesis en fase de solución tal como es descrito por Yamada et al. J. Peptide Res. 64, 2004, 43-50, o mediante síntesis en fase sólida tal como se describe por Visser et al, J. Peptide Res, 61, 2003, 298-306, y Vaara et al., Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 52, 2008. 3229-3236. Estos métodos incluyen una estrategia de protección adecuada, y los métodos para el paso de ciclización. Alternativamente, los compuestos pueden ser preparados a partir de las polimixinas fácilmente disponibles, por ejemplo mediante la eliminación del aminoácido N-terminal de la polimixina (residuo 1) . Tal método es descrito en la presente para la preparación de los compuestos basados en los residuos 2-10 de las polimixinas B y E.

La invención también proporciona un método para preparar ciertos compuestos de la fórmula (I) al hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (II) : o un derivado protegido del mismo en donde: R1 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de fenilalanina, leucina o valina; R2 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de leucina, iso-leucina, fenilalanina, treonina, valina o nor-valina; R3 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de treonina o leucina; R4 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un ácido a,?-diaminobutírico o un residuo de serina; con un compuesto de la fórmula (III) : R'X L^ (III) o un derivado protegido del mismo en donde R5 es definido anteriormente para los compuestos de la fórmula (I) ; X1 representa el grupo que después del acoplamiento a los compuestos de la fórmula (II) es convertido o puede ser convertido en -NHC(O)-, -C(0)-, -0C(0)- , -CH2- o -S02; y L representa un grupo saliente, m representa 0 ó 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente seguido por la desprotección para proporcionar un compuesto de la fórmula (I) .

En general, los compuestos de formula (II) serán empleados en una forma donde todas las aminas libres, las cuales no se desea que participen en la reacción propuesta, son protegidas por un grupo protector adecuado, por ejemplo ter-butiloxicarbonilo (BOC) , 9-fluorenilmetoxicarbonilo (FMOC) , u otro grupo protector de amina adecuado tales como aquellos descritos en "Protective groups in Organic Synthesis" por Theodora W. Green y Peter G. M. Wuts, Wiley, New York, 1999.

Después de las reacciones químicas requeridas, puede ser llevada a cabo la desprotección para proporcionar un compuesto de la fórmula (I) , utilizando métodos estándares tales como aquellos descritos en "Protective groups in Organic Synthesis" por Theodora W. Green y Peter G. M. Wuts, Wiley, New York, 1999.

En los compuestos de la fórmula (I) en donde X representa -NHC(=0)-, pueden ser sintetizados empleando un compuesto de la fórmula (III) la cual corresponde a un isocianato tal como: R5-N=C=0 (Fórmula Illa) , en donde R5 se definió anteriormente.

La reacción puede ser realizada en un solvente adecuado tal como diclorometano, opcionalmente en presencia de base tal como trietilamina o N-etildiisopropilamina (DIPEA) .

Alternativamente, los compuestos de la fórmula (I) en donde X representa -NHC(=0)-, pueden ser sintetizados empleando un compuesto de la fórmula (Illb) : en donde R5 es como se definió anteriormente, en presencia de base, como se describe en Gallón et al., J. Org, Chem. , 2005, 70, 8960.

En los compuestos de la fórmula I en donde X representa -C(=0)-, -OC(=0)-, o -S02- pueden ser sintetizados empleando un compuesto de la fórmula (III) en donde R5 es como se describió anteriormente, X1 representa -C(=0)-, OC(=0)-, o -S02- y L representa un grupo saliente, por ejemplo cloro o bromo.

La reacción puede ser realizada en un solvente adecuado, tal como un solvente aprótico polar tal como diclorometano .

Los compuestos de la fórmula (I) en donde X representa -C(=0)-, pueden ser preparados empleando un compuesto de la fórmula (lile) : R5-CC0H (IIIc) en donde R5 es como se definió anteriormente, por ejemplo en presencia de un agente de acoplamiento tal como HATU, (hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il) -?,?,?' ,?' -tetrametiluronio) , HBTU (hexafluorofosfato de (2- (1 H-benzotriazol-l-il) -1, 1, 3 , 3 -tetrametiluronio) , DCC (diciclohexil-carbodiimida) , o PYBOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tri-pirrolidono-fosfonio) , bajo condiciones básicas en un solvente polar.

Los compuestos de la fórmula (I) en donde X representa -CH2- pueden ser preparados empleando un aldehido de la fórmula (Illd) : R5-C(=0)H (IHd) en donde R5 es como se definió anteriormente en la presente, por ejemplo en presencia de un agente reductor tal como triacetoxiborohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio, o cianoborohidruro soportado en polímero en un solvente tal como metanol, diclorometano, DMF, utilizando condiciones tales como se describen en March's Advanced Organic Chemistry, iley, 2001.

En un aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I), por ejemplo una cantidad terapéuticamente efectiva del mismo y un excipiente, diluyente, y/o portador farmacéuticamente activo (incluyendo combinaciones de los mismos) .

Las vías de administración (distribución) incluyen, pero no están limitadas a, una o más de: oral (por ejemplo, como una formulación de polvo seco/partícula de flujo libre, tableta, cápsula, o como una solución o suspensión ingerible) bucal, sublingual.

Las composiciones de la descripción incluyen aquellas en una forma especialmente formulada para el uso parenteral, oral, bucal, rectal, tópico, implante, oftálmico, nasal, rectal o genitourinario. En un aspecto de la invención, los agentes son distribuidos oralmente, por lo tanto, el agente está en una forma que es adecuada para la distribución oral.

En algunos casos, puede ser posible distribuir los compuestos de la descripción mediante una vía tópica, parenteral (por ejemplo, por una forma inyectable) , o transdérmica, incluyendo mucosal (por ejemplo, como un rocío nasal o aerosol para inhalación) , administración nasal, gastrointestinal, intraespinal , intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intrauterina, intraocular, intradérmica, intracraneal, intratraqueal , intravaginal , intracerebroventricular, intracerebral , subcutánea, oftálmica (incluyendo intravitreal o intracameral ) .

Pueden existir diferentes requerimientos de la composición/formulación, dependiendo de los diferentes sistemas de distribución o las diferentes vías de administración. A manera de ejemplo, la composición farmacéutica de la presente descripción puede ser formulada para ser distribuida utilizando una mini-bomba o mediante una vía mucosal, por ejemplo, como un rocío nasal o aerosol para inhalación o solución ingerible, o parenteralmente en la cual la composición es formulada en una forma inyectable, para la distribución mediante, por ejemplo, una vía intravenosa, intramuscular o subcutánea. Alternativamente, la formulación puede ser diseñada para ser distribuida por ambas vías. Donde sea apropiada, las composiciones farmacéuticas pueden ser administradas mediante inhalación, en la forma de un supositorio o pesario, tópicamente en la forma de una loción, solución, crema, ungüento o polvo de espolvoreo, mediante el uso de un parche dérmico, oralmente en la forma de tabletas que contienen excipientes tales como almidón o lactosa, o en cápsulas u óvulos ya sea solos o en mezcla con excipientes, o en la forma de elíxires, soluciones o suspensiones que contienen agentes saborizantes o colorantes, o pueden ser inyectadas parenteralmente, por ejemplo intravenosamente, intramuscularmente o subcutáneamente.

Para la administración parenteral, las composiciones pueden ser utilizadas mejor en la forma de una solución acuosa estéril la cual puede contener sustancias, por ejemplo suficientes sales o sacáridos, en particular un monosacárido, para hacer la solución isotónica con sangre. Los ejemplos de administración parenteral incluyen una o más de: la administración intravenosa, intraarterial , intraperitoneal , intratecal, intraventricular, intrauretral , intraesternal , intracraneal, intramuscular o subcutánea del agente, y/o mediante el uso de técnicas de fusión o venoclisis .

En una modalidad la formulación de los compuestos de la invención es proporcionada como una formulación liposomal. Los liposomas pueden variar en tamaño desde intervalo micrométrico bajo hasta decenas de micrómetros, los liposomas unilaminares están típicamente en el intervalo de tamaño menor con diversos ligandos objetivo enlazados a su superficie, permitiendo su enlace superficial y acumulación en áreas patológicas para el tratamiento de la enfermedad o trastorno. Los liposomas son vesículas artificialmente preparadas elaboradas de una bicapa lipídica.

En una modalidad, la formulación está adaptada para la distribución por infusión o inyección lenta.

En una modalidad, la formulación está adaptada para la distribución por inyección de bolo.

Para la administración bucal o sublingual, las composiciones pueden ser administradas en la forma de tabletas o pastillas para chupar, las cuales pueden ser formuladas de una manera convencional.

Los compuestos de la descripción pueden ser administrados (por ejemplo, oral o tópicamente) en la forma de tabletas, cápsulas, óvulos, elíxires, soluciones o suspensiones, que pueden contener agentes saborizantes o colorantes, para aplicaciones de liberación inmediata, retardada, modificada, sostenida, pulsada o controlada.

Los compuestos de la descripción pueden también ser presentados para el uso humano o veterinario en una forma adecuada para la administración oral o bucal, por ejemplo en la forma de soluciones, geles, jarabes, lavados bucales o suspensiones, o un polvo seco para la constitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso, opcionalmente con agentes saborizantes y colorantes.

Las composiciones sólidas tales como tabletas, cápsulas, pastillas para chupar, pastillas, pildoras, polvos, pastas, gránulos, tabletas oblongas, o preparaciones de pre-mezcla pueden ser también utilizadas. Las composiciones sólidas y líquidas para el uso oral pueden ser preparadas de acuerdo a los métodos bien conocidos en la técnica. Tales composiciones pueden también contener uno o más portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables los cuales pueden estar en forma sólida o líquida.

Las tabletas pueden contener excipientes tales como celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, sulfato de calcio, fosfato dibásico de calcio, y glicina, manitol, almidón pregelatinizado, almidón de maíz, almidón de papa, desintegradores tales como glicolato de almidón de sodio, croscarmelosa de sodio, y ciertos silicatos complejos, y aglutinantes de granulación tales como polivinilpirrolidona, hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , hidroxipropilcelulosa (HPC) , sacarosa, gelatina y acacia .

Además, los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato de glicerilo y talco pueden ser incluidos.

Las composiciones sólidas de un tipo similar pueden ser también administradas en cápsulas de gelatina o de HPMC (hidroxipropil-metilcelulosa) . Los excipientes adecuados a este respecto incluyen celulosa microcristalina, lactosa, carbonato de calcio, sulfato de calcio, fosfato dibásico de calcio, y manitol, almidón pregelatinizado , almidón de maíz, almidón de papa o polietilenglicoles de alto peso molecular.

Para las suspensiones acuosas y/o elíxires, el agente puede ser combinado con diversos agentes endulzantes o saborizantes , material colorante o pigmentos, con agentes emulsificantes y/o suspensores y con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol y glicerina, y combinaciones de los mismos.

Las cápsulas pueden ser llenadas con un polvo (de medicamento solo o como mezcla con uno o varios rellenadores seleccionados) o alternativamente un líquido, cada uno comprendiendo una o más sales de la presente descripción y opcionalmente un portador. Donde la cápsula es rellena con un polvo, las sales de la presente descripción y/o el portador, pueden ser molidas o micronizadas para proporcionar el material con un tamaño de partícula apropiado.

Alternativamente, la tableta o una cápsula, como sea apropiado, puede ser llenada dentro de otra cápsula (preferentemente, una cápsula de HPMC tal como Capsugel®) para proporcionar ya sea una configuración de tableta en cápsula o cápsula en cápsula, la cual, cuando se administra a una paciente produce la disolución controlada en el tracto gastrointestinal, con lo cual se proporciona un efecto similar a un recubrimiento entérico.

De este modo, en un aspecto, la descripción proporciona una formulación de dosis sólida de una sal de la presente descripción, por ejemplo donde la formulación tiene un recubrimiento entérico.

En otro aspecto más, la descripción proporciona una formulación de dosis sólida que comprende una cápsula protectora como capa externa, por ejemplo, como una tableta en una cápsula o una cápsula en una cápsula. El recubrimiento entérico puede proporcionar un perfil de estabilidad mejorado sobre las formulaciones no recubiertas.

Los compuestos de la descripción pueden ser también administrados oralmente, en medicina veterinaria, en la forma de una porción purgativa líquida tal como una solución, una suspensión o dispersión del ingrediente activo, junto con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la invención pueden ser también, por ejemplo, formulados como supositorios, conteniendo, por ejemplo, bases para supositorios convencionales para el uso en medicina veterinaria o humano o como pesarios, por ejemplo, conteniendo bases convencionales para pesario.

En una modalidad, la formulación es proporcionada como una formulación para la administración tópica incluyendo inhalación .

Las preparaciones inhalables adecuadas incluyen polvos inhalables, aerosoles de dosificación que contienen gases propelentes o soluciones inhalables libres de gases propelentes. Los polvos inhalables de acuerdo a la descripción que contienen la sustancia activa pueden consistir únicamente de las sustancias activas anteriormente mencionadas o de una mezcla de las sustancias activas anteriormente mencionadas con excipiente fisiológicamente aceptable.

Estos polvos inhalables pueden incluir monosacáridos (por ejemplo, glucosa o arabinosa) , disacáridos (por ejemplo, lactosa, sacarosa, maltosa) , oligo- y polisacáridos (por ejemplo, dextranos) , polialcoholes (por ejemplo, sorbitol, manitol, xilitol) , sales (por ejemplo, cloruro de sodio, carbonato de calcio) o mezclas de éstos con otro más. Los mono- o disacáridos son preferentemente utilizados, utilizando lactosa o glucosa, particularmente, pero no de manera exclusiva en la forma de sus hidratos.

Las partículas para deposición en el pulmón requieren un tamaño de partícula menor de 10 micrometros, tal como 1-9 micrometros, adecuadamente de 0.1 a 5 µp?, particularmente y de manera preferida de 1 a 5 \im.

Los gases propelentes que pueden ser utilizados para preparar los aerosoles inhalables son conocidos de la técnica anterior. Los gases propelentes adecuados son seleccionados de entre los hidrocarburos tales como n-propano, n-butano o isobutano y halohidrocarburos tales como derivados clorados y/o fluorados de metano, etano, propano, butano, ciclopropano o ciclobutano. Los gases propelentes anteriormente mencionados pueden ser utilizados por si solos o en mezclas de los mismos.

Los gases propelentes particularmente adecuados son derivados de alcano halogenados seleccionados de entre TGll, TG12, TG134a y TG227. De los hidrocarburos halogenados anteriormente mencionados, TG134a ( 1 , 1 , 1 , 2 -tetrafluoroetano) y TG227 ( 1 , 1 , 1 , 2 , 3 , 3 , 3 -heptafluoropropano) y mezclas de los mismos, son adecuados para el uso en las formulaciones de la presente invención.

Los aerosoles inhalables que contienen gas propelente pueden también contener otros ingredientes tales como co-solventes , estabilizadores, agentes activos de superficie (tensioactivos) , antioxidantes, lubricantes y medios para ajustar el pH. Todos esos ingredientes son conocidos en la técnica.

Los aerosoles inhalables que contienen gas propelente de acuerdo a la invención pueden contener hasta 5% en peso de la sustancia activa. Los aerosoles de acuerdo a la descripción pueden contener, por ejemplo, 0.002 a 5% en peso, 0.01 a 3% en peso, 0.015 a 2% en peso, 0.1 a 2% en peso, 0.5 a 2% en peso ó 0.5 a 1% en peso del ingrediente activo .

Las sales de la descripción pueden también ser utilizadas en combinación con otros agentes terapéuticos. La descripción proporciona de este modo, en un aspecto adicional, una combinación que comprende una sal de la presente descripción junto con un agente terapéutico adicional. La combinación puede ser, por ejemplo una combinación de una sal del compuesto de la fórmula (I) y un antibiótico, tal como vancomicina, fosfomicina, rifamicina, una beta-lactama (tal como una cefalosporina o carbapenem) , un aminoglucósido, un macrólido, una tetracilina, un lipopéptido, una oxazolidinona y/o un anti- inflamatorio tal como un esteroide. La combinación puede ser proporcionada como una co-formulación o simplemente empacada conjuntamente como formulaciones separadas, para distribución simultánea o secuencial.

En una modalidad, se proporcionan las sales de la presente descripción en combinación con un agente terapéutico adicional .

Se debe entender que no todos los compuestos/sales de la combinación necesitan ser administrados por la misma vía. De este modo, si la terapia comprende más de un componente activo, entonces esos componentes pueden ser administrados por diferentes vías.

Los componentes individuales de tales combinaciones pueden ser administrados ya sea secuencialmente o de manera simultánea en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas, mediante cualquier vía convencional.

Cuando la administración es secuencial, ya sea la sal de la descripción o bien el segundo agente terapéutico puede sr administrado primeramente. Cuando la administración es simultánea, la combinación puede ser administrada ya sea en la misma o en una misma composición farmacéutica.

Las combinaciones referidas anteriormente pueden ser convenientemente presentadas para el uso en la forma de una formulación farmacéutica y de este modo las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se definió anteriormente junto con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, comprenden un aspecto adicional de la descripción.

Cuando se combinan en la misma formulación, se apreciará que los dos compuestos/sales deben ser estables y compatibles uno con el otro y con los otros componentes de la formulación. Cuando se formulan separadamente, éstos pueden ser proporcionados en cualquier formulación conveniente, de una manera tal como son conocidos para tales compuestos en la técnica.

Las composiciones pueden contener de 0.01-99% del material activo. Para la administración tópica, por ejemplo, la composición contendrá en general de 0.01-10%, más preferentemente tales como 0.01-1 % del material activo.

Cuando una sal de la descripción es utilizada en combinación un segundo agente terapéutico activo contra el mismo estado de enfermedad, la dosis de cada compuesto/sal puede ser la misma o diferir de aquella empleada cuando el compuesto/sal es utilizado solo. Las dosis apropiadas serán comúnmente apreciadas por aquellos expertos en la técnica. Se apreciará también que la cantidad de una sal de la descripción, requerida para el uso en el tratamiento, variará con la naturaleza de la condición que se trate y la edad y la condición del paciente, y al final será a la discreción del médico o veterinario que atiende.

Típicamente, un médico determinará la dosis efectiva que será la más adecuada para un sujeto individual. El nivel de dosis específico y la frecuencia de dosis para cualquier individuo particular pueden ser variados, y dependerán de una variedad de factores incluyendo la actividad de la sal específica empleada, la estabilidad metabólica y la longitud de acción de esa sal, la edad, el peso corporal, la salud general, el género, la dieta, el modo y el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la combinación del fármaco, la severidad de la condición particular, y el individuo que sufre terapia.

Para la administración oral y parenteral en humanos, el nivel de dosis diaria del agente puede ser en dosis simples o divididas. Para la administración sistémica la dosis diaria, como es empleada para el tratamiento de humanos a adultos, estará en el intervalo de 2-100 mg/kg de peso corporal, tal como 5-60 mg/kg de peso corporal, los cuales pueden ser administrados en 1 a 4 dosis diarias, por ejemplo, dependiendo de la vía de administración y la condición del paciente. Cuando la composición comprende unidades de dosis, cada unidad contendrá preferentemente 100 mg a 1 g del ingrediente activo. La duración del tratamiento será dictada por la velocidad de la respuesta en vez de por los números arbitrarios de días.

En una modalidad, el régimen de tratamiento es continuado por 1, 2, 3, 4, 5, 8, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 o más días.

Como se describió anteriormente, las sales de la presente descripción pueden ser empleados en el tratamiento o profilaxis de humanos y/o de animales.

Es proporcionado además por la presente descripción un proceso de preparación de una composición farmacéutica, cuyo proceso comprende mezclar una sal de la descripción o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un excipiente, diluyente y/o portador farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición que comprende el mismo para el uso en terapia, y en particular, en el tratamiento de infección tal como una infección bacteriana, tal como una infección por bacterias Gram negativas.

En una modalidad, los compuestos y composiciones de la descripción son útiles en el tratamiento de la neumonía, infecciones del tracto urinario, infecciones de heridas, infecciones del oído, infecciones del ojo, infecciones intra-abdominales, crecimiento bacteriano excesivo y/o sepsis.

En una modalidad, los compuestos son útiles en el tratamiento de infecciones por bacterias que son resistentes a múltiples fármacos.

Los ejemplos de bacterias Gram negativas incluyen, pero no están limitados, a Escherichia spp., Klebsiella spp . , Enterobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp., Citrobacter spp., Morganella morganii, Yersinia pseudotuberculosis y otras Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., Acinetobacter spp., Moraxelia, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, bacterias de ácido acético, Legionella y alfa-proteobacterias tales como Nolbachia y otras numerosas. Otros grupos notables de bacterias Gram negativas incluyen las cianobacterias , espiroquetas, bacterias de azufre verdes y bacterias no de azufre verdes.

Los cocos Gram negativos médicamente relevantes incluyen tres organismos, los cuales provocan una enfermedad sexualmente transmitida (Neisseria gonorrhoeae) , una meningitis (Neisseria meningitidis) , y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis) .

Los bacilos Gram negativos médicamente relevantes incluyen una pluralidad de especies. Algunos de ellos provocan principalmente problemas respiratorios (He ophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa) , principalmente problemas unirarios {Escherichia coli, Enterobacter cloacae) , y principalmente problemas gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella entérica) .

Las bacterias Gram negativas asociadas con infecciones nosocomiales incluyen Acinetobacter baumannii , que provoca bacteremia, meningitis secundaria, y neumonía asociada a ventiladores, en unidades de cuidado intensivo de establecimientos hospitalarios.

En una modalidad, los compuestos y composiciones de la presente invención son útiles en el tratamiento de la infección de una o más de las siguientes bacterias Gram negativas: E, coli, S. entérica, Klebsiella: K, pneumoniae, K. oxytoca; Enterobacter : E. cloacae, E. aerogenes, E. agglomerans, Acinetobacter: A. calcoaceticus, A, baumannii ; Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophila, Providencia stuartii , Proteus : P. mirabilis, P. vulgaris .

En una modalidad, los compuestos de la fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables del mismo o las composiciones que comprenden el mismo son útiles para el tratamiento de infecciones por Pseudomonas incluyendo la infección por P. aeruginosa, por ejemplo infecciones de la piel y del tejido blando, infección gastrointestinal, infección del tracto urinario, neumonía y sepsis.

En una modalidad los compuestos de la fórmula (I), o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, o las composiciones que comprenden los mismos, son utilizados para el tratamiento de infecciones por AcinetOjactez- incluyendo infección por A. baumanii , para la neumonía, infección del tracto urinario y sepsis.

En una modalidad los compuestos de la fórmula (I) , o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, o las composiciones que comprenden los mismos, son utilizados para el tratamiento de las infecciones por Klebsiella incluyendo infección por K. neumoniae, para la neumonía, infección del tracto urinario, meningitis y sepsis.

En una modalidad los compuestos de la fórmula (I) , o las sales farmacéuticamente aceptable de los mismos, o las composiciones que comprenden los mismos, son utilizados para el tratamiento de la infección de E. coli incluyendo infección de E. coli, para bacteremia, colecistitis, colangitis, infección del tracto urinario, neonatal meningitis y neumonía.

En una modalidad los compuestos de la fórmula (I) o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos o las composiciones que comprenden los mismos, pueden ser útiles para el tratamiento a largo plazo.

En un aspecto se proporciona un compuesto de la fórmula (I) o una composición que comprende el mismo, para la fabricación de un medicamento para una o más de las indicaciones definidas anteriormente.

En un aspecto, se proporciona un método de tratamiento que comprende el paso de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición que comprende el mismo, a un paciente (humano o animal) en necesidad del mismo, por ejemplo para el tratamiento de una infección como se describe en la presente.

Donde las modalidades técnicamente apropiadas pueden ser combinadas y de este modo la descripción se extiende a todas las permutaciones/combinaciones de las modalidades proporcionadas en la presente.

Las preferencias dadas para los compuestos de la fórmula (I) pueden aplicar igualmente a otros compuestos de la invención, descritos en la presente, como sea técnicamente apropiado.

Abreviaturas Significado PMBN Nonapéptido de polimixina B Thr Treonina Ser Serina DSer D-serina Leu Leucina lie Isoleucina Phe Fenilalanina DPhe D- fenilalanina Val Valina Dab Ácido , ?-diaminobutírico DIPEA N, -diisopropiletilamina Ejemplos Intermediario 1. Nonapéptido de polimixina B Una mezcla de la polimixina B (20 g) , papaína inmovilizada (185 ELU/g) , amortiguador de fosfato de potasio (25 mM; pH 7, 1.25 litros), cloruro de potasio (30 mM) , EDTA (10 mM) y cisteína (1 mM) se incubaron a 37°C por 18 horas con agitación suave. El progreso de la reacción fue monitorizada mediante LC-MS utilizando las condiciones detalladas en la Tabla 1. La papaína inmovilizada fue eliminada mediante filtración y el filtrado fue concentrado a vacío para dejar un residuo sólido el cual se resuspendió en metanol acuoso al 10% y se dejó a temperatura ambiente toda la noche . El sobrenadante se decantó y se concentró a vacío. El nonapéptido de polimixina B fue purificado a partir del residuo mediante SPE sobre sílice C18, eluyendo con metanol acuoso al 0-10%. La evaporación de las fracciones apropiadas dio el producto como un sólido blanco, m/z 482, [M+2H]2+.

Tabla 1. Condiciones de LC-MS Plataforma de Micromasa LC Columna: Zorbax 5µ C18 (2) 150 x 4.6 mm Fase Móvil A: 10% de acetonitrilo en 90% de agua, 0.15% de TFA o 0.1% de ácido fórmico Fase Móvil B: 90% de acetonitrilo en 10% de agua, 0.15% de TFA o 0.1% de ácido fórmico Velocidad de flujo: 1 ml/min Gradiente : Tiempo 0 min 100% A 0% B Tiempo 10 min 0% A 100% Tiempo 11 min 0% A 100% Tiempo 11.2 min 100% A 0% B Tiempo del ciclo 15 min Volumen de inyección: 20 L Detección: 210 nm Intermediario 2. Nonapeptido de tetra- (Boc) -polimixina Peso molecular =1363.63 Masa Exacta = 362 Fórmula Molecular =CS3Hio6Ni4Oi9 La protección selectiva con BOC de los grupos ?-amino libres son los residuos Dab de nonapéptido de polimixina B fue llevada a cabo utilizando el procedimiento de H. O'Dowd et al., Tetrahedron Lett,, 2007, 48, 2003-2005. El nonapéptido de polimixina B (intermediario 1 7.5 g, 7.78 mmol) fue suspendido en agua (85 mi) con sonicación. Se agregaron dioxano (85 mi) y trietilamina (65 mi) y la mezcla se enfrió en hielo por 10 minutos antes de la adición del 1- (Boc-oxiimino) -2-fenilacetonitrilo (Boc-ON) (7.67 g; 31.15 mmol) . El progreso de la reacción fue seguido mediante LC-MS y alcanzó la terminación después de 30 minutos, después de lo cual la mezcla fue apagada por la adición de amoniaco etanólico al 20% (50 mi) . La fase líquida fue decantada y el sólido residual fue purificado mediante cromatografía (eluyente 0-20% de metanol en diclorometano) sobre gel de sílice para proporcionar el nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B como un sólido blanco (2.5 g, 24%) . TLC, Rf 0.2 (10% de metanol en diclorometano). m/z 1362.8[MH]+.

Intermediario 3. Nonapéptido de Colistina (Polimixina ?) La colistina (polimixina E, 5 g) fue tratada con papaína inmovilizada (185 ELU/g) , amortiguador de fosfato de potasio (25 mM; pH 7, 1.25 litros), cloruro de potasio (30 m) , EDTA (10 mM) y cisteína (1 mM) a 37°C por 32 horas con agitación suave para producir el nonapéptido de colistina (polimixina E) . El progreso de la reacción fue monitorizado mediante LC-MS utilizando las condiciones detalladas en Intermediario 1, Tabla 1. La papaína inmovilizada fue eliminada mediante filtración y el filtrado se concentró a vacío para dejar un residuo sólido el cual fue resuspendido en metanol acuoso al 10% y se dejó a temperatura ambiente toda la noche. El sobrenadante fue decantado y concentrado a vacío. El nonapéptido de colistina (Polimixina E) fue purificado a partir del residuo mediante SPE sobre sílice C18 (10 g) , eluyendo con metanol acuoso al 0-25%. La evaporación de las fracciones apropiadas dio el producto como un sólido blanco, m/z 485.32 [M+2H]2+.

Intermediario 4. Nonapéptido de tetra- (Boc) -colistina (polimixina E) Peso Molecular = 1329.61 Masa Exacta = 1328 Fórmula Molecular =C60Hio8Ni 019 El nonapéptido de colistina (Polimixina E) (2.5 g, 2.89 mmol) fue suspendido en agua (35 mi) con sonicación. Se agregaron dioxano (35 mi) y trietilamina (35 mi) y la mezcla se enfrió en hielo por 10 minutos antes de la adición de 1- (Boc-oxiimino) -2-fenilacetonitrilo (Boc-ON) (2.65 g ; 10.76 mmol) . El progreso de la reacción fue seguido mediante LC-MS y alcanzó la terminación después de 10 minutos, después de lo cual la mezcla fue apagada por la adición de amoniaco metanólico al 20% (25 mi) . La fase líquida fue decantada y el sólido residual fue redisuelto en agua y extraído secuenc ialmente con diclorometano e iso-butanol . Con base en el análisis de LC-MS, el líquido decantado y el di c 1 orómetaño y los extractos de iso-butanol fueron combinados conjuntamente seguido por la concentración a vacío para dar una goma amarilla, la cual fue cargada sobre la cromatografía instantánea (Si 60A-35-70) . La columna fue eluida con 0-20% de metanol (que contenía 2% de amoniaco) en diclorometano . Las fracciones de la columna eluyeron con 7-10% de metanol (que contenía 2% de amoniaco) en diclorometano y proporcionó el nonapéptido de tetra- (Boc) colistina (polimixina E) como un sólido blanco (1.18 g, 33%) . m/z 1329.7 [ +H] " .

Ejemplo 1. Nonapéptido de [2 (R, S) -2 -hidroxioctanoil] -polimixina B, trifluoroacetato .

Pe£30 molecular = 1105.36 Masa Exacta = 1104 Fórmula Molecular ==C5iH88 i40i3 a) Nonapéptido de [2 (R, S) -2 -hidroxioctanoil] - [tetra- (Boc) ] polimixina B Peso molecular = 1505.83 Masa Exacta = 1504 Fórmula Molecular = C7iH12o i402i El ácido 2 -hidroxioctanoico 1.16 g. 7.34 mmol) se disolvió en diclorometano (2 mi). La N, -diisopropiletilamina (1.19 mL, 7.34 mmol) y el hexafluorosfato de 2-(lH-7- azabenzotriazol-l-il) -1, 1 , 3 , 3 -tetrametiluronio (HATU) (2.79 g, 7.34 mmol) se agregaron luego a la mezcla de reacción. Después de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente, el compuesto del intermediario 2 (2.0 g, 1.47 mmol) fue agregado. Después de 16 horas, la terminación de la reacción fue confirmada mediante LC-MS y la mezcla de reacción se evaporó hasta sequedad y se purificó utilizando cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente 0-10% de metanol en diclorometano) . Las fracciones apropiadas fueron concentradas para dejar el nonapéptido de la [2(R,S)-2-hidroxioctanoil] [tetra- (Boc) ] -polimixina B como un aceite incoloro (1.28 g, 58 %) . TLC, Rf 0.6 (10% MeOH en diclorometano). m/z 1527.5 [M+Na]+. b) Compuesto del título: nonapéptido de [2(R,S)-2-hidroxioctanoil] -polimixina B, trifluoroacetato El nonapéptido de 2 -hidroxioctanoil- [tetra- (Boc) ] -polimixina B (1.28 g, 0.85 mmol) se disolvió en diclorometano (2 mi) . Se agregó ácido trifluoroacético (3.9 mi, 51.02 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 16 horas, después de cuyo tiempo la LC-MS confirmó la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se concentró a vacío para dejar el nonapéptido de la [2(R,S)-2-hidroxioctanoil] -polimixina B, trifluoroacetato como un aceite incoloro (1.3 g, 93 %) . TLC, Línea base de Rf (10% de MeOH en diclorometano). m/z 1104.8 [MH] " .

Ejemplo 2. Nonapéptido de [2(R,S)-2- Hidroxioctanoil] olimixina B, sal de sulfato Peso molecular =1105.36 Masa Exacta = 1104 Fórmula Molecular =C5iH88 i4013 Al compuesto del Ejemplo 1 (1.3 g) se agregó agua (1 mi) y la mezcla se sónico por 5 minutos. A la suspensión resultante se agregó NaHC03 1M (20 mi) hasta que la mezcla alcanzó pH 9. La mezcla se pasó luego a través de una columna C18 SPE de 10 g, eluyendo secuencialmente con 0, 40, 50, 60, 70, 80 y 100% de metanol acuosos. El análisis de LC-MS de cada fracción mostró que el producto deseado eluía en las fracciones de metanol acuoso al 60, 70 y 80%. Estas fracciones fueron combinadas y evaporadas para dejar un sólido blanco (0.5 g) , al cual se agregó H2S04 0.1 M (30 mi) hasta que fue alcanzado un pH de 7. Se agregó ter-butanol (10 mi) y la mezcla se agitó por 16 horas a temperatura ambiente y subsecuentemente se liofilizó para dejar el nonapéptido de [2 (R, S) -2-hidroxioctanoil] -polimixina B, sal de sulfato, como un sólido blanco (0.52 g) . El análisis mediante HPLC de acuerdo a las condiciones detalladas en la Tabla 2, dio un tiempo de retención de 5.93 minutos, m/z 1104.9 [MH]+.

Tabla 2. Condiciones Analíticas de HPLC Columna: Zorbax 5µ C18 (2) 150 x 4.6 mm Fase Móvil A: 10% de acetonitrilo en 90% de agua, 0.15% de TFA o 0.1% de ácido fórmico Fase Móvil B: 90% de acetonitrilo en 10% de agua, 0.15% de TFA o 0.1% de ácido fórmico Velocidad de flujo: 1 ml/min Gradiente: Tiempo 0 min 100% A 0% B Tiempo 10 min 0% A 100% B Tiempo 11 min 0% A 100% B Tiempo 11.2 min 100% A 0% B Tiempo de ciclo 15 min Volumen de inyección: 20 µ? Detección: 210 nm Ejemplo 3. Nonapéptido de 2 -aminoetanoil-polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de 2 -aminoetanoil-polimixina B, sal de sulfato, fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido 2- (ter-butoxicarbonilamino) - etanoico siguiendo la secuencia de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 4.99 min,- m/z 1020.8 [MH]+.

Ejemplo 4. Nonapéptido de 3 -aminopropanoil-polimixina B, sal de sulfato.

El nonapéptido de 3 -aminopropropanoil -polimixma B, sal de sulfato fue preparada a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido 3- (ter- butoxicarbonilamino) -propanoico siguiendo la secuencia de reacciones descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 4.97 min; m/z 1034.42, [MH] + .

Ejemplo 5. Nonapéptido de 3 - (?,?-dimetilamino) -propanoil- polimixina B, sal de sulfato nonapéptido de 3 - (N, -dimetilamino) -propano polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido 3- (N,N- dimetilamino) propanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 5.01 min; m/z 531.92, [M+2H]2+.

Ejemplo 6. Nonapéptido de -aminobutanoil-polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de 4-aminobutanoil-polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) - polimixina B y el ácido 4- (ter-butoxicarbonilamino) -butanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 4.97 min; m/z 524.91 [M+2H]2+. Ejemplo 7. Nonapeptido de 6 -aminohexanoil -polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de 6-aminohexanoil-polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido 6- (ter-butoxicarbonilamino) -hexanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 4.97 min m/z 1077.15 [MH]+. Ejemplo 8. Nonapéptido de 8 -hidroxioctanoil-polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de 8-hidroxioctanoil-polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra-(Boc) -polimixina B y el ácido 8-hidroxioctanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2, Tiempo de retención (HPLC) 5.29 min; m/z 1104.87, [M]+.

Ejemplo 9. Nonapéptido de 8 -aminooctanoil-polimixina B, sal de fosfato nonapéptido de 8 - aminoooc t anoi 1 polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra - ( Boc ) -pol imixina B y el ácido 8 - ( ter-butoxicarbonilamino) -octanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 5.02 rain; m/i 1 105.2, [MH] ~ .

Ejemplo 10. Nonapéptido de 3 - (N-metilamino) ropanoil-polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de 3 - (N-metilamino) ropanoil-polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra -( Boc ) -pol imixina B y l ß -alaniña N- [ (l,l-dimetiletoxi)carbonil] -N-metilo, siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 5.0 min; m/z 525.05, [M+2H]2+.

Ejemplo 11. Nonapé tido de (1, S/2R,S) -2-aminociclopentancarbonil-polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de (1R,S/2R,S) -2-aminociclopentancarbonil-polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido carboxílico de cis-2- (ter-butoxicarbonilamino) -ciclopentano siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 5.07 min; m/z 1074.87, [MH] + .

Ejemplo 12. Nonapéptido de 3 -aminopropanoil-colistina (polimixina ?) , sal de sulfato Siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2, el nonapéptido de 3 -arainopropanoil -colist ina (pol imixina E), sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra - ( Boc ) - col i st ina (polimixina E) (intermediario 4) y Boc - ß - al aniña . Tiempo de retención (HPLC) de 4.98 minutos, m/z 501 [M+2H]2+.

Ejemplo 13. Nonapéptido de [3 - (R, S) -pirrolidin- 3 -carbonil] -polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de [ 3 ( R , S ) -pi ol i din- 3 -carbonil] -polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tet ra -( Boc )- pol imixina B y el ácido 3 - (N- ter - butoxi carboni 1 ) -pirrolidincarboxí 1 ico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2. Tiempo de retención (HPLC) 4.91 min; m/z 1080.58 [MH]+.

Ejemplo 14. Nonapéptido de [3 (R, S) -3 -amino-3 - ciclohexanpropanoil] -polimixina B, sal de sulfato El nonapéptido de [3 (R,S) -3-amino-3-ciclohexanpropropanoil- polimixina B, sal de sulfato fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B y el ácido 3- (ter-butoxicarbonilaird.no) -3- ciclohexanpropanoico siguiendo las secuencias de reacción descritas para los ejemplos 1 y 2, Tiempo de retención (HPLC) 5.24 min; m/z 1116.78, [MH]+.

Ejemplos Adicionales 15-35 Los compuestos adicionales de los Ejemplos 15-35 fueron preparados utilizando los métodos de preparación descritos para los Ejemplos 1 y 2 anteriores. De este modo, un compuesto que tiene un sustituyente en el extremo N del nonapéptido de polimixina B fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -polimixina B (intermediario 2) y un ácido carboxílico apropiado en presencia de agentes de acoplamiento (por ejemplo HATU) y base (por ejemplo DIPEA) (como se describe en el Ejemplo la) , seguido por tratamiento con ácido (por ejemplo TFA) (como se describe en el Ejemplo la) , y un tratamiento apropiado (como se describe en Ejemplo 2) . Similarmente, un compuesto que tiene un sustituyente en el extremo N del nonapéptido de polimixina E fue preparado a partir del nonapéptido de tetra- (Boc) -colistina (polimixina E) (Intermediario 4) y un ácido carboxílico apropiado en presencia de los agentes de acoplamiento (por ejemplo HATU) y base (por ejemplo DIPEA) (como se describe en el Ejemplo Ib) , seguido por el tratamiento con ácido (por ejemplo TFA) (como se describe en el Ejemplo Ib) , y la conversión a la sal de sulfato (como se describe en el Ejemplo 2) .

Los compuestos adicionales de los Ejemplos 15-35 se presentan en la Tabla 3 siguiente.

Los tiempos de retención registrados y las masas dadas en la Tabla fueron obtenidos utilizando las condiciones de LC-MS descritas anteriormente en la Tabla 2.

Los compuestos fueron aislados como las formas de sal de sulfato de los compuestos mostrados.

Tabla 3 Actividad Antibacteriana Para evaluar la potencia y espectro de los compuestos, se realizó la prueba de susceptibilidad contra cuatro cepas de cada uno de los patógenos Gram negativos, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae y Acinetobacter baumannii.

El día antes de la prueba, 3 a 4 colonias fueron recogidas del agar fresco de Agar Mueller-Hinton (MHA) en placa, y transferidas dentro de 10 mi de MHB ajustado en Cationes (CaMHB) . Los cultivos fueron incubados a 37°C a 250 rpm por 18-20 horas antes de ser diluidos a 100 veces en CaMHB fresco. Los subcultivos fueron desarrollados adi c ionalmente hasta que la OD6oo alcanzó 0.2-0.3, lo que corresponde a 105-106 UFC/ml. Los cultivos que crecen activamente fueron diluidos 100 veces en medio fresco y utilizados para el inoculo .

La prueba de MIC fue realizada por dos diluciones con antibiótico en serie a 50% en CaMHB en placas de microt i tulación estériles de 96 pozos en un volumen total de 170 µL (caldo de 150 µL que contenía el agente antimicrobiano, inoculo de 20 L) . Los ensayos fueron realizados por duplicado. Las placas fueron incubadas aeróbicamente sin agitación por 18-20 horas a 37°C con el MIC definido como la concentración más baja del fármaco que previno el crecimiento visible .

La Tabla 4 muestra el MIC (microgramos/ml ) de los Ejemplos 2 al 14 comparados a la Polimixina B (PMB) .

Estudios adicionales sobre la actividad antibac eriana La Tabla 4A muestra los valores de MIC obtenidos para los compuestos de los Ejemplos Adicionales 15 al 35 más los Ejemplos 2, 6 y 14. Los datos fueron obtenidos bajo condiciones similares a la Tabla 4 excepto que fueron utilizados diferentes lotes de caldo Muí ler-Hinton ajustado en cationes. Los valores de MIC para estos compuestos son comparados con aquellos valores obtenidos para la Polimixina B, Sulfato de Colistina, CB-182,804 y NAB739 (como la sal de TFA) . CB-182,804 es un derivado del decapéptido de polimixina con un sustituyente de aril-urea en el extremo N, el cual se ha reclamado que tiene menor toxicidad que la Polimixina B (compuesto 5 en el documento WO 2010/075416. Ver página 37) . NAB739 ha sido descrito previamente por Vaara et al.

Tabla 4. Datos de MIC para los compuestos 2 al 14 ( g/ml) ND: no determinado Tabla 4A. Datos de MIC para Ejemplos Adicionales 15 a 35 más Ejemplos 2, 6 y 14 (microgramos/ml) ND ; no determinado Las actividades antibacterianas in vitro de los compuestos de los ejemplos 2 y 6 fueron evaluadas contra un panel de 500 aislados bacterianos Gram negativos con la Colistina. El panel consistió de 100 aislados clínicos de cada uno de A. baumannií , E, coli, K, neumoniae y P. aeruginosa. El panel representó la epidemiología actual en Europa y en los Estados Unidos e incluyó un número de cepas relevantes con fenotipos resistentes definidos a los agentes antibacterianos actualmente utilizados en la clínica. Estas cepas resistentes incluyeron 20 de A. baumannii , 22 de E. coli, 25 de K. neumoniae y 20 de P. aeruginosa.

Los resultados de los estudios fueron resumidos en la Tabla 4B. Todos los compuestos fueron probados hasta una concentración máxima de 64 µ9/??1 con la excepción de la colistina, la cual fue evaluada hasta una concentración máxima de 16 ug/ml .

Tabla 4B - Resumen de los valores de MIC ( g/ml) de los Ejemplos 2 y 8, y Colistina contra un panel de 400 aislados clínicos Gram negativos y 100 cepas Gram negativa de fenotipos resistentes definidos E f icacia in vivo contra la infección del mus lo por E. coli en ratones La eficacia in vivo de 8 compuestos de la invención (Ejemplos 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, y 11) fue evaluada en un modelo de infección de muslo en ratón por E. coli, los resultados se resumen en la Tabla 5.

Grupos de 5 ratones CD-1 hembras, libres de patrones específicos que pesaban 22 ± 2 g fueron utilizados. Los animales fueron hechos neutropénicos mediante la administración intraperitoneal de ciclofosfamida en los días -4 (150 mg/kg) y -1 (100 mg/kg) . En el Día 0, los animales fueron inoculados intramuscularmente con 10 UFC/ratón de Escherichia coli aislado a ATCC25922 dentro del muslo derecho. A 1 hora, las cuentas de UFC fueron determinadas de los 5 ratones y los ratones restantes (cinco por grupo) fueron tratados con una inyección subcutánea del fármaco a +1 y 6 horas después de la infección. En tal estudio, existieron dos grupos de dosis por compuesto de prueba, 1.5 y 5 mg/kg BID, respectivamente. Los Ejemplos 2, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11 y polimixina B fueron preparados en solución salina normal a 2 mg/ml y la solución fue ajustada a pH 6-7 por la adición de H2S04 0.1 M o NaHC03 al 4.2% como se requiriera. Veinticuatro horas después de la infección, los ratones fueron sacrificados humanamente. El músculo del muslo derecho de cada animal fue cosechado, homogeneizado, diluido serialmente y colocado en placa sobre agar de infusión cerebro-corazón + 0.5% de carbono mineral (p/v) para la determinación de las UFC. La disminución de la UFC totales del muslo derecho en comparación a las cuentas control a las 24 horas después de la infección, fue determinada para cada grupo de dosis. Los compuestos 2 y 6 a 10 mg/kg/día demostraron una eficacia comparable a aquella de la polimixina B sobre la reducción de 3 log10 en las cuentas bacterianas .

Tabla 5: Eficacia in vivo versus infecciones en el muslo por E. coli ATCC25922 en ratones neutropenicos a valor medio de 5 estudios independientes; valor medio de 2 estudios independientes .

Estudios adicionales sobre la eficacia in vivo contra la infección por E. coli en muslo de ratón La eficacia in vivo del compuesto del Ejemplo 14 fue evaluada en un modelo de infección de muslo en ratón por E. coli utilizando los métodos descritos en los ejemplos anteriores. El resultado es resumido en la Tabla 5A en comparación con la Polimixina B.

Tabla 5A: Eficacia in vivo versus las infecciones en muslo por E. coli ATCC25922 en ratones neutropenicos Los compuestos 14 a 10 mg/kg/día demostraron una eficacia comparable a aquella de la polimixina B con una reducción mayor de 3 log10 en las cuentas bacterianas.

Estudios adicionales sobre la eficacia in vivo contra la infección en muslo por Klebsiella neumoniae en ratones Utilizando el mismo procedimiento que se describe anteriormente, se evalúa la eficacia in vivo de tres compuestos de la invención (Ejemplos 2,6, y 14) en un modelo de infección de muslo en ratón por Klebsiella neumoniae ATCC 10031, utilizando Colistina (Polimixina E) como comparador. Los resultados se resumen en la Tabla 5B. Los compuestos 2, 6 y 14 a 10 mg/kg/día, demostraron una eficacia comparable a aquella de la Colistina con una reducción de aproximadamente 2 logio en las cuentas bacterianas.

Tabla 5B: Eficacia in vivo versus infecciones del muslo por K. neumoniae ATCC10031 en ratones neutropénicos Estudios Farmacocineticos y de depuración urinaria La farmacocinética y la depuración urinaria de los 3 compuestos (Ejemplo 2, 4 y 6) de la invención y la polimixina B fueron evaluadas en ratas.

Las soluciones del fármaco fueron preparadas a 4 mg/ml en solución salina normal y el pH ajustado a 6-7 por la adición del volumen apropiado de H2SO4 0.1 M o NaHC03 al 4.2 %. Las soluciones fueron esterilizadas por filtración y almacenadas a -80°C antes del uso. En el día del experimento, las soluciones de fármaco fueron diluidas a 1 mg/ml con solución salina normal estéril.

Grupos de 3 ratas macho Sprague Dawley fueron aclimatadas por un mínimo de 4 días antes del estudio. Las ratas fueron anestesiadas utilizando isofluorano y se insertó una cánula dentro de la vena yugular. Un día después de la cirugía, las ratas fueron dosificadas con una inyección de bolo intravenoso de la solución a 1 mg/kg a través de la cánula, seguido por lavado con solución salina normal. La sangre fue recolectada manualmente a través de la cánula antes de la administración del compuesto y a 0.08, 0.25, 0.5, 1, 3, 8, 8 y 24 horas después de esto. El plasma fue cosechado mediante centrifugación inmediatamente después de la recolección de la sangre. Fueron recolectadas las muestras de orina de veinticuatro horas antes de y después de la administración del compuesto a intervalos de 0-4 horas 4-6 horas, y 6-24 horas. Las muestras de plasma y orina fueron congeladas a -20°C.

La determinación de las concentraciones de plasma y orina del fármaco fueron realizadas mediante espectrometría de masa y cromatografía líquida (LC-MS/MS) . Antes del análisis las muestras de plasma y orina fueron preparadas como sigue. Las muestras de plasma fueron descongeladas en el día del análisis y mezcladas con 3 volúmenes de acetonitrilo que contenía 0.1 % (v/v) de ácido fórmico y 100 ng/mL del estándar interno. Después de la centrifugación, los sobrenadantes fueron transferidos a una placa de 96 pozos y diluidos uno a uno con agua lista para el análisis LC-MS/MS. Las muestras de orina fueron purificadas mediante extracción en fase sólida (SPE) en cartuchos Oasis HLB (Waters, Reino Unido) eluyendo con metanol al 100 %. Una alícuota fue transferida a una placa de 96 pozos y diluida 1:1 con agua antes de la adición de la solución del estándar interno, lista para el análisis mediante LC-MS/MS.

Columna: Kinetex 2.6 µ? XB-C18 de 50 x 2.1 mm Fase Móvil A: agua + 0.15 % de TFA o 0.1 % de ácido fórmico Fase Móvil B: acetonitrilo + 0.15 % de TFA o 0.1 % de ácido fórmico Velocidad de flujo: 0.5 ml/min.

Gradiente : iempo 0 minuto 95 % A 5 % B Tiempo de 1.20 minuto 5 % A 95 % B Tiempo de 1.50 minuto 5 % A 95 % B Tiempo de 1.51 minuto 95 % A 5 % B Tiempo 3.00 minuto 95 % A 5 % B Tiempo de ciclo 4.5 minuto Volumen de inyección: 20 µ?? Los parámetros farmacocinéticos fueron determinados mediante análisis no compartimental utilizando WinNonLin v5.3. La recuperación urinaria fue registrada como el porcentaje de fármaco intacto recuperado en la orina para las primeras 24 horas después de la inyección.

Tabla 6 Farmacocinética de los derivados de polimixina B y PMBN manera interesante, todos los compuestos muestran más alta recuperación urinaria que la polimixina B. Los estudios previos reportaron que la polimixina E (colistina) sufre reabsorción tubular renal extensa (Li et al., Abtimicrob. Agents and Chemotherapy, 2003, 47(5); Yousef et al., Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 2011, 55(9)). Mientras que no se desea estar comprometido por alguna teoría, la depuración urinaria más alta de los compuestos podría reflejar una reabsorción tubular renal disminuida lo cual podría a su vez reducir su potencial de nefrotoxicidad. Ensayo de toxicidad celular renal in vitro La toxicidad de células renales de los compuestos fue evaluada en un ensayo in vitro utilizando la línea celular HK-2, una línea inmortalizada de células del túbulo proximal, derivada de un riñon humano normal. El punto final para describir la toxicidad de los compuestos fue la reducción de la resazurina que correlaciona con la actividad metabólica de las células.

Las células fueron cultivadas en matraces de 150 cm2 en 25 mL de KSF suplementado (con 5 ng/mL de EGF y 50 µg/mL de BPE) . Las células fueron mantenidas a una confluencia del 70 % con un máximo de 25 pases. Día 1: El medio fue retirado y las células fueron lavadas con 10 mi de DPBS. Seis mi de una solución de tripsina al 0.25 % con EDTA fueron luego agregados al matraz y las células regresadas a la incubadora. Después de una incubación de 1 a 2 minutos, se agregaron 14 mi del medio al matraz para inactivar la tripsina. La suspensión celular fue transferida a un tubo de centrífuga y las células fueron concentradas a 1000 rpm por 6 minutos. El botón celular fue luego resuspendido en medio fresco suplementado con EGF y BPE . El número de células fue contado y las células fueron diluidas a 46875 células/mL en medio fresco suplementado con EGF y BPE. 7500 células fueron surtidas en cada pozo en un volumen de 160 µ? e incubadas a 37 °C por 24 horas.

Día 2 : Los compuestos de prueba fueron preparados directamente dentro del medio. Se prepararon nueve concentraciones puntuales desde 1000 µg/mL hasta 1.95 g/mh en diluciones al cincuenta por ciento en medio fresco. Las placas de microtitulacion fueron retiradas de la incubadora y los medios remplazados con 100 µ? de las diluciones de la solución del compuesto. Cada grupo de concentraciones fue realizado por triplicado, y se agregaron a cada placa controles positivos y negativos. Las placas fueron luego incubadas por 24 horas a 37 °C con 5 % de C02 en una atmósfera humidif icada .

Día 3 : El reactivo que contenía la resazurina (CellTiter-Blue, Promega) fue diluido en PBS (1:4) y se agregó al 20 % (v/v) a cada pozo. Las placas fueron luego incubadas a 37°C por 2 horas antes de que se detectara el producto de reducción fluorescente.

Los valores antecedentes del medio únicamente fueron sustraídos antes de que los datos fueran analizados utilizando el programa GraphPad Prism. Los valores de concentración del compuesto fueron trazados gráficamente como valores logarítmicos para hacer posible que una curva de dosis-respuesta fuera ajustada y fueron determinados los valores de IC50 (Tabla 7) .

Tabla 7: Datos de IC50 para la Polimixina B y Ejemplos 2-14 a Valores medios de hasta 6 estudios independientes; b Valor medio de 16 estudios independientes.

Estudios adicionales sobre el ensayo de toxicidad de células renales in vi ro La toxicidad de células renales de los compuestos ejemplares adicionales fue evaluada en un ensayo in vitro utilizando las células HK-2 como se describe en el Ejemplo anterior. Los valores de IC50 para estos compuestos son descritos en la Tabla 7A siguiente. Para comparación, fueron evaluadas la Colistina, CB182,804 (compuesto 5 en WO2010/075416) y NAB739 para la toxicidad de células renales. Tabla 7?: Datos de IC50 para la Colistina y los Ejemplos 15-35 a Valores medio de hasta 6 estudios independientes; c problemas de solubilidad notados a la concentración superior. Estudios adicionales sobre nefrotoxicidad in vivo Fue establecido en ratas un modelo de nefrotoxicidad de las polimixinas (adaptado de Yousef et al., Antimicrob. Agents Chemother., 2011, 55 (9) : 4044-4049). Los ejemplos de los compuestos 2, 6 y 14 fueron examinados en el modelo y comparados a la Colistina (en su forma de sulfato) . Después de una semana de aclimatamiento, ratas macho Sprague-Dawley fueron quirúrgicamente preparadas con una cánula yugular y fueron alojadas individualmente, como se requiriera, ya sea en jaulas de alojamiento preasignadas o en jaulas metabólicas. La colistina y los compuestos ejemplares fueron preparados en solución salina. Los compuestos fueron introducidos vía la cánula yugular dos veces al día, con 7 horas de separación por siete días. Cada dosis fue incrementada progresivamente por tres días hasta la dosis superior que fue luego administrada hasta la terminación del estudio. La recolección de orina de veinticuatro horas (sobre hielo) fue realizada a la predosis y en los días 4 y 7. El régimen de dosificación es descrito en la Tabla 8 siguiente. Tabla 8 - Régimen de Dosificación utilizado en el estudio de nefrotoxicidad in vivo. Son indicadas las dosis en mg de fármaco base/kg.

La actividad en la orina de la N-acetil-beta-D-glucosaminidasa (NAG) fue determinada espectrofotométricamente utilizando el kit de ensayo NAG de Roche Applied Science. Los biomarcadores del daño renal fueron determinados utilizando el Panel II de Daño Renal del Sistema de Ensayo Multi-Spot® (Meso Scale Discovery) .

Los Ejemplos 2, 6 y 14 dosificados utilizando el régimen de 8 mg/kg mostraron niveles significativamente reducidos de los biomarcadores renales NAG, albúmina y cistatina C, en comparación a la Colistina al mismo régimen de dosificación (ver Figuras 1 a la 3) . La respuesta fue similar a aquella promovida por la Colistina a una concentración máxima de 2 mg/kg.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (16)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto de la fórmula (I) : caracterizado porque: X representa un grupo -NHC(O)-, -0(0)-, -0C(0)-, -CH2- o -S02-; y R1 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de fenilalanina, leucina o valina; R2 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de leucina, isoleucina, fenilalanina, treonina, valina o norvalina,- R3 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de treonina o leucina; R4 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa el ácido a,?-diaminobutírico o un residuo de serina; R5 representa (alquil de 0 a 12 átomos de carbono) - (heterociclilo de 4 a 6 átomos de carbono) , o Alquilo de 2 a 12 átomos de carbono o (alquil de 0 a 12 átomos de carbono) - (cicloalquilo de 3 a 8 átomos de carbono) , en donde el alquilo o el cicloalquilo lleva: i) uno, dos o tres grupos hidroxilo, o ii) un grupo -NR6R7, o iii) un grupo -NR6R7 y uno o dos grupos hidroxilo; R6 representa hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R7 representa hidrógeno o alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, R8 representa hidrógeno o metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de fenilalanina .

3. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la fenilalanina es un residuo de D-fenilalanina .

4. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de leucina.

5. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 4, caracterizado porque R3 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un residuo de treonina.

6. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 5, caracterizado porque R4 junto con el grupo carbonilo y el nitrógeno alfa al carbono al cual está enlazado, representa un ácido Oí, ?-diaminobutírico .

7. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 6, caracterizado porque R5 se selecciona de -CH(OH) (CH2)5CH3, -CH2NH2 , -CH2CH2NH2, -CH2CH2CH2NH2 , - (CH2) 5NH2 , - (CH2) 7NH2 , CH2CH2NHCH3, -CH2CH2N(CH3)2, y -(CH2)70H.

8. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 7, caracterizado porque R6 es hidrógeno o metilo.

9. El compuesto de la fórmula (I) de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 8, caracterizado porque R7 es hidrógeno o metilo.

10. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque X es -C(0)-.

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se seleccionada del grupo que comprende : nonapéptido de 2-hidroxioctanoil-polimixina B; nonapéptido de 2 -aminoetanoil polimixina B; nonapéptido de 3 -aminopropropanoil-polimixina B; nonapéptido de 3- (?,?-dimetilamino) -propanoil-polimixina B; nonapéptido de -aminobutanoil -polimixina B; nonapéptido de 6 -aminohexanoil -polimixina B; nonapéptido de 8-hidroxioctanoil-polimixina B; nonapéptido de 8 -aminooctanoil-polimixina B; nonapéptido de 3 - (N-metilamino) propanoil-polimixina B; nonapéptido de 2 -amino-ciclopentan-carbonil-polimixina B; nonapéptido de 3 -aminopropropanoilcolistina (polimixina E) ; nonapéptido de 3 -pirrolidin-3 -carbonil-polimixina B; nonapéptido de 3 -amino-3 -ciclohexanpropanoil polimixina B nonapép ido de 5 -aminopentanoil -polimixina B nonapéptido de hidroxiacetil-polimixina B nonapéptido de 3-hidroxioctanoil-polimixina B nonapéptido de 4- (?,?-dimetilamino) -butanoil-polimixina B nonapéptido de 7 -aminoheptanoil -polimixina B nonapéptido de 4 -morfolinilbutanoil-polimixina B nonapéptido de 6 -hidroxihexanoil -polimixina B nonapéptido de 3 -hidroxibutanoil-polimixina B nonapéptido de - (N-metilamino) -butanoil-polimixina B, nonapéptido de trans-4-aminociclohexancarbonil-polimixina B, nonapéptido de 4 -aminobutanoil -polimixina E, nonapéptido de 2 -hidroxioctanoil -polimixina E, nonapéptido de cis-4-aminociclohexan-carbonil-polimixina B, nonapéptido 4-amino-4-metil-pentanoil-polimixina B nonapéptido 4 -amino- 5 -metilhexanoil -polimixina B, nonapéptido de 3 - ( l-pirrolidin-2 - il ) -propionil-polimixina B, nonapéptido de 4 -aminopentanoil -polimixina B, nonapéptido de trans-4 -hidroxiciclohexancarbonil-polimixina B, nonapéptido de 3 -hidroxipropanoil-polimixina B nonapéptido de (2-hidroxi-2-ciclohexil) etanoil-polimixina B nonapéptido de 2-amino octanoil-polimixina B, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

12. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto para la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 11, junto con un portador farmacéuticamente aceptable .

13. El compuesto de la fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 11 o una composición de conformidad con la reivindicación 12, para el usarse en tratamiento.

14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, para usarse en el tratamiento de una infección bacteriana.

15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la bacteria es resistente en múltiples fármacos.

16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 14 o 15, caracterizado porque la bacteria es Gram negativa.