MX2012013999A - Proceso para elaborar composiciones hemostaticas secas y estables. - Google Patents

Abstract

Se describe un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis, c) mezclar dicho primer componente y dicho segundo componente bajo condiciones efectivas para formar una pasta mojada mientras que evita esencialmente la degradación del segundo componente mediante dicho primer componente en un contenedor final o transferir dicha pasta mojada en un contenedor final, d) congelar y liofilizar dicha pasta en dicho contenedor, obteniendo de esta manera una composición hemostática seca y estable que comprende dicho primer y dicho segundo componentes en forma liofilizada, y e) terminar dicha composición hemostática seca y estable en dicho contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar que contiene dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada en la forma de una composición hemostática seca y estable.

Description

PROCESO PARA ELABORAR COMPOSICIONES HEMOSTÁTICAS SECAS Y ESTABLES Campo de la Invención La presente invención se refiere a procesos para elaborar composiciones hemostáticas en forma estable para almacenamiento.

Antecedentes de la Invención Las composiciones hemostáticas en la forma de almacenamiento estable secas que comprenden material biocompatible, biodegradable, granular estable seco son conocidas, por ejemplo de los documentos de patente WO 98/008550A o WO 2003/007845A. Estos productos han sido aplicados con éxito en la materia para hemostasis. Floseal® es un ejemplo para un agente hemostático poderoso y versátil que consiste en una matriz de gelatina granular dilatada en una solución que contiene trombina para formar una pasta que puede fluir.

Debido a que dichos productos tienen que ser aplicados en humanos, es necesario proporcionar los estándares de seguridad más altos para calidad, estabilidad de almacenamiento y esterilidad de los productos finales y los componentes de los mismos. Por otra parte, la fabricación y manejo deben realizarse de la mantea más conveniente y eficiente posibles. Si las composiciones hemostáticas requieren un componente de trombina para utilizarse, es un desafío la provisión de este componente de trombina en el producto final. Debido a que la trombina y el material de matriz normalmente tienen propiedades diferentes con respecto a los requerimientos de fabricación, éstos tienen que ser fabricados y provistos por separado. Por ejemplo, los requerimientos de esterilización pueden diferir de manera significativa entre el material de matriz granular relativamente estable (con frecuencia también reticulado) y los componentes de proteína, tales como trombina. Mientras que dichos materiales de matriz pueden ser esterilizados normalmente mediante métodos de esterilización poderosos (tales como autoclave, irradiación gama, etc.), la trombina(es una enzima) que tiene que ser tratada con más cuidado. Esos métodos de esterilización poderosos normalmente no son posibles para la trombina, debido a la pérdida de actividad enzimática producida por dichos tratamientos rudos. Por razones de estabilidad, dichos productos (así como también los productos de acuerdo con la presente invención) normalmente son provistos en una forma seca y se lleva a la forma "lista para utilizarse" (la cual normalmente es en la forma de un (hidro)gel, suspensión o solución) inmediatamente antes del uso, que necesitan la adición de agentes de humectación o solución (suspensión) y la mezcla del componente de material de matriz con el componente de trombina. La reconstitución de trombina o el paso de mezclado de una solución de trombina con el material de matriz granular son pasos, los cuales normalmente requieren de cierto tiempo y manejo y pueden producir problemas, especialmente en el cuidado intensivo de la salud.

Es un objeto de la presente invención superar dichos problemas y proporcionar los métodos adecuados para elaborar una composición hemostática seca y de almacenamiento estable que se puede proporcionar y utilizar en forma conveniente. Estos métodos deben proporcionar formatos de producto que permiten una provisión conveniente de las composiciones hemostáticas "listas para utilizarse", especialmente en la medicina de cuidados intensivos, en donde el número de pasos de manejo debe mantenerse tan bajo como sea posible.

Breve Descripción de la Invención Por consiguiente, la presente invención proporciona un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende: a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como una preparación de trombina seca, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis, c) mezclar dicho primer componente y dicho segundo componente bajo condiciones efectivas para formar una pasta mojada mientras que evita esencialmente la degradación del segundo componente por dicho primer componente en un contenedor final o transferir dicha pasta mojada dentro de un contenedor final, d) congelar y liofilizar dicha pasta en dicho contenedor obteniendo de esta manera una composición hemostática seca y estable que comprende dicho primer componente y dicho segundo componente en forma liofilizada, y d) terminar dicha composición hemostática seca y estable en dicho contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar, dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada como una composición hemostática seca y estable.

El procedimiento proporciona la composición seca y estable de acuerdo con la presente invención en una forma conveniente que permite que la composición sea reconstituida fácilmente para su uso médico. La presente invención se refiere adicionalmente a un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento de la presente invención al sitio objetivo. De acuerdo con otro aspecto, la presente invención se refiere a un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención. La presente invención también se refiere a un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento de la presente invención con un diluyente farmacéuticamente aceptable, así como también a un equipo que comprende el contenedor final terminado y otros medios para aplicar la composición (por ejemplo, un contenedor de diluyente). Las composiciones de acuerdo con la presente invención son particularmente útiles para proporcionar hemostasis en sitios de sangrado, incluyendo sitios de sangrado quirúrgico, sitios de sangrado traumático y los similares. Un uso de ejemplo de las composiciones puede ser en el sellado del tracto de tejido sobre una penetración de vaso sanguíneo creada para la cateterización vascular.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona un mejoramiento para la administración y manejo de composiciones hemostática, principalmente al proporcionar un producto de dos componentes en un formato de composición única conveniente. Las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención contienen un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como una preparación de trombina seca (el "componente de agente que induce la coagulación" o "componente de trombina") y un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis (el "componente polimérico biocompatible hemostático"). Pueden estar presentes componentes adicionales. Los productos de este tipo son conocidos en principio en la materia, todavía en un formato diferente: normalmente, los componentes son provistos como entidades separadas en forma seca. Antes de mezclar los componentes para la administración a un paciente, los componentes secos normalmente se ponen en contacto por separado con los diluyentes adecuados. La mezcla de los componentes se realiza entonces mezclando los componentes reconstituidos por separado. Por ejemplo, puede proporcionarse una preparación seca de un agente que induce la coagulación, tal como, por ejemplo, un componente de trombina, el cual es reconstituido mediante un diluyente farmacéuticamente aceptable (acuoso). La solución de un agente que induce la coagulación, tal como una solución de trombina obtenida después de la reconstitución es utilizada entonces para mojar o solubilizar el polímero, normalmente bajo la formación de un hidrogel, el cual es aplicada entonces al paciente. Debido a que esto es por lo menos un procedimiento de dos pasos, el producto es "listo para utilizarse", sería más conveniente si un producto pudiera necesitar únicamente de un paso antes de estar listo para utilizarse. Sin embargo, como se estableció anteriormente, la naturaleza de los dos componentes evita una mezcla simple de los componentes en el curso del método de producción, principalmente debido a las pérdidas de estabilidad y actividad.

Con la presente invención, se proporcionan los procedimientos de producción, los cuales permiten que los dos componentes son provistos listos en una forma seca combinada lista para que se reconstituyan juntas. Los procedimientos de acuerdo con la presente invención no son únicamente factibles para los experimentos científicos de la mesa de trabajo, sino que son adecuados para la producción farmacéutica masiva industrial. Con la presente invención, fue posible proporcionar esta composición hemostática ya mezclada sin el riesgo de una degradación no deseada o pérdida de la actividad enzimática. Las composiciones resultantes tienen una estabilidad de almacenamiento que se puede comparar con la de los productos conocidos con anterioridad, aunque son más convenientes para el manejo debido a que la reconstitución y mezcla separada antes de la administración médica no es necesaria con los productos que se pueden obtener con la presente invención. Proporcionar un hidrogel, suspensión o solución lista para utilizarse de la composición hemostática es posible en un procedimiento de un paso, agregando simplemente un diluyente farmacéuticamente aceptable adecuado a la composición en el contenedor final. El contenedor final preferentemente es una jeringa diseñada para administrar directamente la composición hemostática después del contacto con el diluyente.

El agente que induce la coagulación es una sustancia seleccionada del grupo que consiste en trombina, un veneno de serpiente, un activador de plaquetas, un receptor de trombina que activa péptidos y un agente de precipitación de fibrinógeno, preferentemente es trombina.

La "solución de trombina" puede ser elaborada a partir de cualquier preparación de trombina, la cual es adecuada para utilizarse en humanos (es decir, farmacéuticamente aceptable). Las fuentes adecuadas de trombina incluyen sangre, plasma o suero de humano o bobino (trombina de otras fuentes animales puede ser aplicada si no se esperan reacciones inmunes adversas) y la trombina de origen recombinante (por ejemplo, trombina recombinante humana); la trombina humana autóloga puede ser preferida para algunas aplicaciones. La concentración de la solución de trombina provista en el primer componente, normalmente es ajustada a una concentración de trombina planeada en la composición hemostática reconstituida. Preferentemente, la composición hemostática contiene de 10 a 100,000 Unidades internacionales (I.U.) de trombina, más preferentemente de 100 a 10,000 I.U., especialmente de 500 a 5,000 I.U. La concentración de trombina en la composición "lista para utilizarse" preferentemente está dentro del rango de 10 a 10,000 I.U., más preferentemente de 50 a 5,000 I.U., especialmente de 100 a 1,000 I.U. El diluyente se utiliza en una cantidad para lograr la concentración final deseada en la composición "lista para utilizarse".

La "preparación seca de un polímero biocompatible" de acuerdo con la presente invención es conocido, por ejemplo, del documento WO 98/08550 A. Preferentemente, el polímero es un material granular biocompatible, biodegradable, estable en seco. El polímero "seco" de acuerdo con la presente invención, normalmente es provisto con tamaños de partícula de 0.1 a 5,000 pm. Normalmente, las partículas poliméricas tienen un diámetro de partícula medio ("diámetro de partícula medio" es el tamaño mediando medido por difractometría láser; "tamaño mediano (o diámetro de partícula mediano de masa) es el diámetro de partícula que divide la distribución de frecuencia por la mitad; cincuenta por ciento de las partículas de una preparación determinada tienen un diámetro más grande, y cincuenta por ciento de las partículas tienen un diámetro más pequeño) desde 10 hasta 1000 µ?t?, especialmente, de 50 a 500 pm (tamaño mediano). Aplicar partículas más grande depende principalmente de las necesidades médicas; las partículas con diámetros de partícula medios más pequeños, con frecuencia son más difíciles de manejar durante los procedimientos de producción. El polímero seco, por consiguiente, es provisto en la forma de gránulos. Aunque los términos de polvo y gránulos (o granulados) en algunas ocasiones son utilizados para distinguir las clases separadas de material, los polvos son definidos en la presente como una sub-clase especial de materiales granulares. En particular, los polvos se refieren a aquellos materiales granulares que tienen los tamaños de grano más finos, y que por consiguiente, tienen una mayor tendencia a formar aglomeraciones cuando fluyen. Los granulos incluyen materiales granulares más toscos que no tienden a formar aglomeraciones excepto cuando están mojados.

Una composición hemostática "seca" de acuerdo con la presente invención únicamente tiene un contenido residual de humedad, el cual puede corresponder aproximadamente al contenido de humedad de productos disponibles comparables, tales como Floseal® (Floseal, por ejemplo, tiene aproximadamente el 12% de humedad en la forma de un producto seco). Normalmente, la composición seca de acuerdo con la presente invención tiene un contenido de humedad residual por debajo de estos productos, preferentemente por debajo del 10% de humedad, más preferentemente por debajo del 5% de humedad, especialmente, por debajo del 1% de humedad. La composición hemostática de acuerdo con la presente invención también puede tener un contenido menor de humedad, por ejemplo, del 0.1% o incluso menor. Los contenidos de humedad preferidos de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención son del 0.1 al 10%, especialmente del 0.5 al 5%.

De acuerdo con la presente invención, la composición hemostática es provista en forma seca en el contenedor final.

En la forma seca, los procedimientos de degradación o desactivación para los componentes, son reducidos de manera significativa y adecuada para permitir la estabilidad de almacenamiento. La estabilidad de almacenamiento adecuada puede determinarse con base en la actividad de trombina. Por consiguiente, una composición hemostática seca del tipo presente es estable en el almacenamiento, si no es menor que 400 I.U. /mi (para un producto de 500 I.U./ml) después de la reconstitución pasados 24 meses de almacenamiento en la forma seca a temperatura ambiente (25°C) todavía están presentes (es decir, el 80% de la actividad de trombina o más permanecen en comparación con la actividad inicial antes de la liofilización). Preferentemente, la composición de acuerdo con la presente invención tiene una estabilidad de almacenamiento mayor, es decir, de por lo menos el 90% de actividad de trombina permanece, especialmente por lo menos el 95% de actividad de trombina permanece después de estos 24 meses de almacenamiento.

Sin embargo, proporcionar una pasta mojada elaborada mezclando una solución de un agente que induce la coagulación, tal como, por ejemplo, una solución de trombina y un polímero biocompatible con una pasta mojada y la liofilización de los mismos no es trivial, debido a que la mezcla y liofilización tienen que ser realizadas en una forma que se evita la degradación relevante del polímero y/o el agente que induce la coagulación, por ejemplo, la trombina. Esto es protegido por la presente invención, llevando a cabo el paso de mezclado bajo condiciones que esencialmente evitan la degradación y congelamiento de la pasta mojada que resulta del procedimiento de mezclado en el contenedor final. Entonces, la composición puede ser liofilizada en forma adecuada sin el riesgo de los procedimientos de degradación adicionales. Es importante para la presente invención que incluso el tiempo de contacto (entre la solución de un agente que induce la coagulación, por ejemplo, la solución de trombina y el polímero) en el estado mojado durante la mezcla y antes de la liofilización en la pasta se mantenga tan corto como sea posible. Los tiempos de contacto máximos durante el estado mojado de acuerdo con la presente invención dependen de varios parámetros con base en los cuales, los tiempos de contacto adecuados para el método presente pueden ser ajustados fácilmente por un experto en la materia con base en la información descrita en la presente descripción. Los parámetros más importantes para la definición del tiempo de contacto adecuado son la temperatura, contenido de agua y concentración de trombina. Por ejemplo, para una solución de trombina con 500 I.E./ml en una pasta con 4 mi de solución de trombina y 0.8 g de polímero (por ejemplo, gránulos de gelatina asociados con agua y que corresponden a 0.704 g de polvo de gelatina seco), los tiempos de contacto máximos con el polímero en el estado mojado (es decir, en la forma de pasta) son - de aproximadamente 4°C, 15°C y temperatura ambiente (25°C) - 25 h, 6 h y 2 h. Las temperaturas utilizadas de manera especial en la presente invención son desde aproximadamente 2°C hasta aproximadamente 25°C, preferentemente desde aproximadamente 2°C hasta 15°C, especialmente preferidas de aproximadamente 4°C. Las concentraciones más altas del agente que induce la coagulación, tal como trombina, o con una cantidad de contenido de agua superior a tiempos de contacto máximo más cortos durante el estado seco. Por consiguiente, los tiempos de contacto preferidos en el estado seco están dentro del intervalo de 5 minutos a 6 horas, incluso más preferido de 5 minutos a 2 horas, especialmente de 5 a 30 minutos. Preferentemente, el paso de mezclado es llevado a cabo a temperaturas bajas, por ejemplo, entre 1 y 10°C, especialmente entre 2 y 6°C.

También es importante que el paso de mezclado de acuerdo con la presente invención tenga como resultado una pasta seca la cual no contienen una fase líquida considerable, es decir, la pasta de acuerdo con la presente invención casi está libre de líquido. La pasta mojada de acuerdo con la presente invención puede fluir (tiene un grado de fluidez), todavía es lo suficientemente viscosa para ser manejada como una pasta (por ejemplo, las viscosidades preferidas de aproximadamente 10 a 100 Pa.s y superiores). Esto es importante para evitar los procedimientos de degradación durante el mezclado antes de la liofilización. La mezcla de los componentes en la forma soluble (suspendida) (y no en la forma de pasta de acuerdo con la presente invención) y entonces empezar el procedimiento de secado tiene como resultado una degradación intolerable del material. Por ejemplo, incluso si la trombina y gelatina se mantienen a una temperatura de 4°C, es visible una degradación clara después de 24 horas.

Otro parámetro importante en esta conexión es la cantidad del agente que induce la coagulación, por ejemplo, componente de trombina en el paso de mezclado. Éste tiene que ser los suficientemente alto para crear una pasta mojada pero no tan alto para crear una fase líquida significativa. Por consiguiente, la adición de más del 85% de p/p del agente que induce la coagulación, por ejemplo, solución de trombina, puede tener como resultado más que un exceso insignificante de agente que induce la coagulación líquido, por ejemplo, trombina en la pasta mojada, de manera que preferentemente, debe evitarse más del 85% p/p. Las proporciones de mezclado preferidas empiezas aproximadamente a 80% p/p hacia abajo (es decir, 80 mi de solución de trombina/20 g de polímero seco. El contenido más bajo de un agente que induce la coagulación, por ejemplo, el contenido de trombina puede ser ajustado fácilmente para los polímeros específicos probando el desempeño de manejo de la pasta mojada resultante. Normalmente, una pasta, la cual está cerca de un 60 al 80% de solución de un agente que induce la coagulación, por ejemplo, el contenido de solución de trombina es más fácil de manejar; para mezclas de extrusión, también los contenidos menores de agente que induce la coagulación, por ejemplo, contenido de trombina no crean obstáculos mayores en el manejo. Las pastas mojadas formadas con menos del 50% de solución de un agente que induce la coagulación, por ejemplo, la solución de trombina podrían volverse problemáticas debido a una posible pérdida de fluidez lo cual podría hacer difícil su manejo (por ejemplo, en las jeringas).

Por consiguiente, la presente invención utiliza en principio dos modalidades para llegar a esta meta. El primer principio incluye mezclar los dos componentes en el contenedor final, liofilizando entonces la mezcla; de manera alternativa, los componentes pueden ser mezclados fuera del contenedor para formar la pasta seca y entonces transferir al interior del contenedor final, por ejemplo, por medio de extrusión. El mezclado puede lograrse, por ejemplo, con el "movimiento" entre los dos contenedores conectados (por ejemplo, jeringas) o poniendo los dos componentes en un extrusor y sometiendo a extrusión el producto de extrusión dentro del contenedor final. Preferentemente, la mezcla obtenida (es decir, en la pasta mojada) es congelada y liofilizada.

Preferentemente, el procedimiento de acuerdo con la presente invención es llevado a cabo en un ambiente antiséptico, especialmente el paso de mezclado debe realizarse en forma antiséptica. También se prefiere empezar el procedimiento mediante los componentes que ya han sido esterilizados en forma adécuada y entonces realizar todos los pasos adicionales en forma antiséptica.

El paso final del método es el paso de terminado. Durante este paso, el contenedor final es sellado de manera adecuada y se deja listo para almacenamiento y/o venta. El paso de terminado puede comprender el etiquetado del contenedor final, empaque y realización (adicionalmente) de los procedimientos de esterilización (realizados, por ejemplo, sobre el contenedor final o sobre el producto empacado o equipo que comprende el contenedor final).

Preferentemente, el paso de terminado comprende un paso de esterilización de EO (óxido de etileno). La esterilización EO es común en el campo presente de la tecnología. El gas de óxido de etileno aniquila las bacterias (y sus endosporas), moho y hongos. La esterilización EO es utilizada para esterilizar las sustancias que podrían resultar dañadas por las técnicas que utilizan temperaturas altas tales como la pasteurización y autoclave.

Otras modalidades preferidas para la esterilización son la aplicación de irradiación ionizante, tales como irradiación ß o y, o el uso de peróxido de hidrógeno vaporizado De acuerdo con una modalidad preferida, el contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

El contenedor final puede ser cualquier contenedor adecuado para alojamiento (y almacenamiento) de compuestos que se pueden administrar farmacéuticamente. Las jeringas, frascos, tubos, etc., pueden utilizarse; sin embargo, se prefiere de manera específica proporcionar las composiciones hemostáticas de acuerdo con la presente invención en una jeringa. Las jeringas han sido un medio de administración preferido para las composiciones hemostáticas, como se describió en la técnica anterior, debido a las ventajas de manejo de las jeringas en la práctica médica. Las composiciones pueden entonces ser aplicadas de manera preferida (después de la reconstitución) por medio de agujas específicas de la jeringa o por medio de los catéteres adecuados. Las composiciones hemostáticas reconstituidas (las cuales son reconstituidas preferentemente para formar un hidrogel) también se puede aplicar mediante otros medios diversos, por ejemplo, mediante una espátula, un cepillo, rocío, manualmente por presión, o mediante cualquier otra técnica convencional. Normalmente, las composiciones hemostáticas reconstituidas de acuerdo con la presente invención se aplicarán utilizando una jeringa o aplicador similar que tiene la capacidad de extrudir la composición reconstituida a través de un orificio, abertura, aguja, tubo u otro pasaje para formar un lecho, capa o porción similar de material. La alteración mecánica de las composiciones puede realizarse mediante extrusión a través de un orificio en la jeringa u otro aplicador, que normalmente tiene un tamaño dentro del intervalo desde 0.01 mm hasta 5.0 mm, preferentemente desde 0.5 mm hasta 2.5 mm. Preferentemente, sin embargo, la composición hemostática será preparada inicialmente a partir de una forma seca que tiene un tamaño de partícula deseado (el cual, a partir de la reconstitución, especialmente por hidratación, produce sub-unidades del tamaño de requisito (por ejemplo, sub-unidades de hidrogel)) o será alterada mecánicamente ya sea de manera parcial o total al tamaño requisito antes de un paso de extrusión final u otra aplicación. Esto es, desde luego evidente, que estos componentes mecánicos tienen que ser provistos en forma estéril (dentro y fuera) con el objeto de cumplir con los requerimientos de seguridad para uso en humanos.

El diseño del contenedor final puede ser adaptado preferentemente para el procedimiento de liofilización en el contenedor final.

Las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención son reconstituidas normalmente (re- hidratadas) antes de utilizar poniendo en contacto la composición seca con un diluyente adecuado. El diluyente de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier medio de reconstitución adecuado para la composición hemostática seca, el cual permite el mojado adecuado de la composición seca. Preferentemente, la composición hemostática seca es reconstituida en un hidrogel como un formato "listo para utilizarse".

Los diluyentes adecuados son fluidos acuosos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, agua desionizada de grado farmacéutico (si todos los componentes iónicos o de regulador ya son provistos en la composición seca; "agua para inyección") o soluciones acuosas de grado farmacéutico que contienen iones y/o reguladores específicos. Estas soluciones acuosas pueden contener adicionalmente otros ingredientes, tales como excipientes. Un "excipiente" es una sustancia inerte, la cual es agregada a la solución, por ejemplo, para asegurar que, por ejemplo, la trombina retiene su estabilidad química y su actividad biológica al ser almacenados (o esterilización (por ejemplo, por irradiación)), o por razones estéticas, por ejemplo, color. Los excipientes preferidos incluyen albúmina humana, manitol o acetato de sodio. Las concentraciones preferidas para la albúmina en el producto reconstituido son desde 0.1 hasta 100 mg/ml, preferentemente desde 1 hasta 10 mg/m. Las concentraciones de manitol preferidas pueden estar en el intervalo de concentración desde 0.5 hasta 500 mg/ml, especialmente desde 10 hasta 50 mg/ml. Las concentraciones de acetato de sodio preferidas están dentro del intervalo desde 1 hasta 10 mg/ml, especialmente desde 2 hasta 5 mg/ml.

Por ejemplo, un diluyente adecuado comprende agua para inyección, y -independientemente unos de los otros - NaCI (preferentemente de 50 a 150 mM, especialmente 110 nM), CaCI2 (preferentemente de 10 a 80 mM, especialmente 40 mM), albúmina de humano (preferentemente de hasta el 2% p/p, especialmente el 0.5% p/p), acetato de sodio (preferentemente de 0 a 50 mM, especialmente 20 mM) y manitol (preferentemente hasta el 10% p/p, especialmente el 2% p/p). Preferentemente, el diluyente también puede incluir un regulador o sistema de regulador, de manera que regule el pH de la composición seca reconstituida, preferentemente a un pH de 6.4 hasta 7.5, especialmente a un pH de 6.9 a 7.1.

En una modalidad preferida, el diluyente es provisto en un contenedor separado. Éste, preferentemente puede ser una jeringa. El diluyente en la jeringa puede entonces ser aplicado fácilmente al contenedor final para la reconstitución de las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención. Si el contenedor final también es una jeringa, ambas jeringas pueden ser terminadas juntas en un paquete. Por consiguiente, es preferido proporcionar las composiciones hemostáticas secas de acuerdo con la presente invención en una jeringa, la cual es terminada con una jeringa de diluyente con un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstituir dicha composición hemostática seca y estable.

La preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis (los "polímeros hemostáticos secos") de la presente invención puede formarse a partir de polímeros biológicos y no biológicos. Los polímeros biológicos adecuados incluyen proteínas, tales como gelatina, colágeno soluble, albúmina, hemoglobina, caseína, fibrinógeno, fibrina, fibronectina, elastina, queratina, y laminina, o derivados o combinaciones de los mismos. Es particularmente preferido el uso de gelatina o colágeno no fibrilar soluble, más preferentemente gelatina, y las formulaciones de gelatina de ejemplo son establecidas más adelante. Otros polímeros biológicos adecuados incluyen polisacáridos, tales como glicosaminoglicanos, derivados de almidón, xilano, derivados de celulosa, derivados de hemicelulosa, agarosa, alginato y quitosán; o derivados o combinaciones de los mismos. Los polímeros no biológicos adecuados serán seleccionados para poder degradarse, mediante cualquiera de dos mecanismos, es decir (1) la destrucción de la columna polimérica o (2) la degradación de las cadenas laterales, lo cual tiene como resultado la solubilidad acuosa. Los polímeros de formación de hidrogel no biológicos de ejemplos incluyen polímeros sintéticos, tales como poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinilo, glicólidos poliláctidos, policaprolactonas, y polioxietilenos; o derivados o combinaciones de los mismos. También son posibles las combinaciones de clases diferentes de polímeros (por ejemplo, proteínas con polisacáridos, proteínas con polímeros de formación de hidrogel no biológico, etc.).

Un polímero no reticulado junto con un auxiliar de rehidratación adecuado puede se reticulado en cualquier forma adecuada para reconstituir, por ejemplo, para formar una base de hidrogel adecuada. Por ejemplo, las moléculas poliméricas pueden ser reticuladas utilizando agentes de reticulación bifuncionales o polifuncionales, los cuales se unen de manera covalente a dos o más cadenas de moléculas poliméricas. Los agentes de reticulación bifuncionales de ejemplo incluyen aldehidos, epóxidos, succinimidas, carbodiimidas, maleimidas, azidas, carbonatos, isocianatos, divinilsulfona, alcoholes, aminas, imidatos, anhídridos, haluros, silanos, diazoacetato, aziridinas y los similares. Alternativamente, la reticulación puede lograrse utilizando oxidantes y otros agentes, tales como periodatos, los cuales activan cadenas laterales o porciones sobre el polímero de manera que éstos pueden reaccionar con otras cadenas laterales o porciones para formar los enlaces de reticulación. Un método adicional de reticulación comprende exponer los polímeros a radiación, tal como radiación gama, para activar las cadenas poliméricas para permitir las reacciones de reticulación. También son adecuados los métodos de reticulación dehidrotérmicos. Los métodos preferidos para la reticulación de moléculas de gelatina son los que se describen a continuación.

De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis, por consiguiente, contiene un polisacárido reticulado, una proteína reticulada, o. un polímero no biológico reticulado; o mezclas de los mismos.

Preferentemente, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis es un material granular. Este material granular puede dilatarse rápidamente cuando es expuesto a un fluido (es decir, el diluyente) y en su forma dilatada tiene la capacidad de contribuir a una pasta que puede fluir que puede aplicarse a un sitio con sangrado. El polímero biocompatible, por ejemplo, gelatina, puede ser provisto en la forma de una película, la cual puede entonces ser molida para formar un material granular. La mayor parte de las partículas contenidas en este material granular, preferentemente tienen tamaño de partículas de 100 a 1,000 pm, especialmente de 300 a 500 pm.

De acuerdo con una modalidad preferida, el polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis es una gelatina reticulada. El polvo de gelatina reticulado seco puede prepararse para volverse a hidratar rápidamente si se pone en contacto con un diluyente adecuado. El polvo de gelatina, preferentemente comprenden partículas relativamente grandes, también denominadas como fragmentos o sub-unidades, como las que se describen en los documentos WO 98/08550 A y WO 2003/007845 A. Un tamaño de partícula preferido (mediano) estará dentro del rango desde 20 hasta 1 ,000 µ?t?, preferentemente desde 100 hasta 750 µ?t?, especialmente desde 150 hasta 500 pm, aunque los tamaños de partícula fuera de este rango preferido pueden encontrarse útiles en muchas circunstancias. Las composiciones secas también desplegarán un "equilibrio de dilatación" significativo cuando son expuestas a un medio de rehidratación acuoso ( = diluyentes). Preferentemente, la dilatación estará en el rango desde el 400% hasta el 1000%. "El equilibrio de dilatación" puede determinarse sustrayendo el peso seco del polvo de hidrogel de gelatina de su peso cuando está hidratado por completo y por consiguiente, está dilatado por completo. La diferencia es entonces dividida entre el peso y multiplicada por 100 para dar la medida de dilatación. El peso seco debe ser medido después de la exposición del material a una temperatura elevada durante un tiempo suficiente para remover substancialmente toda la humedad residual, por ejemplo, dos horas a una temperatura de 120°C. El equilibrio de hidratación del material puede lograrse sumergiendo el material seco en un diluyente adecuado, tal como solución salina acuosa, durante un período de tiempo suficiente para que el contenido de agua se vuelva constante, normalmente desde 18 hasta 24 horas a temperatura ambiente.

Una gelatina no reticulada junto con un auxiliar de rehidratación puede ser reticulada en cualquier forma adecuada, por ejemplo, para formar una base de hidrogel adecuada. Los polvos de gelatina reticulados secos de acuerdo con esta modalidad preferida, se obtienen preferentemente preparando los polvos en la presencia de determinados auxiliares de rehidratación. Dichos auxiliares de rehidratación estarán presentes durante la preparación de los polvos, aunque normalmente son removidos de los productos finales. Por ejemplo, los auxiliares de rehidratación los cuales están presente aproximadamente al 20% del contenido de sólidos total normalmente se reducirán por debajo del 1% en el producto final, con frecuencia por debajo del 0.5% por peso. Los auxiliares de rehidratación de ejemplo incluyen polietilénglicol (PEG), preferentemente que tiene un peso molecular de aproximadamente 1000; polivinilpirrolidona (PVP), preferentemente que tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 50,000; y dextrano que normalmente tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 40,000. Se prefiere emplear por lo menos dos de estos auxiliares de rehidratación cuando se preparan las composiciones de la presente invención, y más particularmente se prefiere emplear los tres.

Los métodos de ejemplo para producir gelatinas reticuladas son los siguientes. La gelatina se obtiene y es suspendida en una solución acuosa para formar un hidrogel no reticulado, que tiene normalmente un contenido de sólidos del 1% al 70% por peso, normalmente desde el 3% hasta el 10% por peso. La gelatina es reticulada, normalmente por la exposición ya sea a glutaraldehído (por ejemplo, del 0.01% al 0.05% p/p, durante la noche a una temperatura desde 0°C hasta 15°C en regulador acuoso), periodato de sodio (por ejemplo, 0.05 M, mantenido a una temperatura desde 0°C hasta 15°C durante 48 horas) o 1 -etil-3-(dimetilaminopropil)carbodiimida ("EDC") (por ejemplo, del 0.5% al 1.5% p/p durante la noche a temperatura ambiente), o mediante la exposición desde aproximadamente 0.3 hasta 3 megaradios de radiación de rayos gama o electrón. De manera alternativa, las partículas de gelatina pueden ser suspendidas en un alcohol, preferentemente alcohol metílico o alcohol etílico, a un contenido de sólidos del 1% al 70% por peso, normalmente del 3% al 10% por peso, y reticulados por exposición a un agente de reticulación, normalmente glutaraldehído (por ejemplo, el 0.01 % al 0.1 % p/p, durante la noche a temperatura ambiente). En el caso de aldehidos, el pH debe mantenerse durante aproximadamente desde 6 hasta 11, preferentemente de 7 a 10. Cuando la reticulación con glutaraldehído, las reticulaciones se forman por medio de bases Schiff, las cuales pueden ser estabilizadas mediante reducción subsiguiente, por ejemplo, mediante tratamiento con borohidruro de sodio. Después de la reticulación, los gránulos resultantes pueden ser lavados en agua y opcionalmente ser enjuagados en alcohol, y se secaron. Los polvos secos resultantes pueden entonces ser provistos en el contenedor final como se describe en la presente.

Después de la reticulación, por lo menos el 50% (p/p) del auxiliar de rehidratación se removerá del hidrogel resultante. Normalmente, el auxiliar de rehidratación es removido por filtración del hidrogel, seguido por el lavado del pastel de filtro resultante. Dichos pasos de filtración/lavado pueden ser repetidos una o más veces adicionales con el objeto de limpiar el producto hasta un nivel deseado y para remover por lo menos el 50% del auxiliar de rehidratación, removiendo preferentemente por lo menos el 90% (p/p) del auxiliar de rehidratación presentes originalmente. Después de la filtración, la gelatina se seca, normalmente secando el pastel de filtro final que se produjo. El pastel de filtro seco puede entonces ser separado o molido para producir el polvo reticulado que tiene un tamaño de partícula en los rangos deseados establecidos anteriormente.

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención también proporciona un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención al sitio objetivo. Aunque en ciertas modalidades, también la composición seca puede ser aplicada directamente al sitio objetivo (y, opcionalmente ponerse en contacto con el diluyente en el sitio objetivo, si es necesario), se prefiere poner en contacto la composición hemostática seca con un diluyente farmacéuticamente aceptable antes de la administración al sitio objetivo, de manera que obtiene una composición hemostática en una forma mojada, especialmente una forma de hidrogel.

La presente invención, también se refiere a un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención. Este contenedor terminado contiene los componentes combinados en una forma estéril, estable para almacenamiento y que se puede comercializar.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento de acuerdo con la presente invención con un diluyente farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también se refiere a un equipo que comprende la composición hemostática seca y estable de acuerdo con la presente invención en forma terminada y un contenedor con un diluyente adecuado. Los componentes adicionales del equipo pueden ser las instrucciones de uso, los medios de administración, tales como jeringas, catéteres, cepillos, etc. (si las composiciones no son provistas ya en el medio de administración) u otros componentes necesarios para utilizar en la práctica médica (quirúrgica), tales como agujas substituto o catéteres, frascos adicionales o medios de cubiertas para heridas adicionales. Preferentemente, el equipo de acuerdo con la presente invención comprende un alojamiento de jeringa de la composición hemostática seca y estable y una jeringa que contiene el diluyente (o es provista para tomar el diluyente de otro contenedor de diluyente). Preferentemente, estas dos jeringas son provistas en una forma adaptada una con la otra, de manera que el diluyente puede ser administrado a la composición hemostática seca mediante otra entrada que la salida para administrar la composición reconstituida.

La presente invención se describe adicionalmente en los ejemplos que se encuentran a continuación, sin estar restringida a los mismos.

EJEMPLOS 1. Preparación de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención.

Materiales y Métodos Todas las variantes utilizan el mismo esquema de presentación de un equipo con una jeringa que contiene tanto la matriz de gelatina Floseal como la trombina en una forma estable, y una jeringa que contiene un medio de reconstitución líquido adecuado (por ejemplo, 0.9% de NaCI o 40 mM de CaCI2). Ambas jeringas son esterilizadas por dentro y por fuera, de manera que la reconstitución puede ser realizada por la enfermera auxiliar en la sala de operaciones. La reconstitución se logra acoplando las dos jeringas de una manera familiar y mezclando los contenidos de las dos jeringas "moviéndolas" (es decir, la transferencia repetida de los contenidos de atrás hacia adelante entre las dos jeringas).

"En jeringa de liofilización" La composición de acuer4do con la presente invención es elaborada mezclando la gelatina y la solución de trombina dentro de una pasta mojada y liofilizando la pasta dentro de una jeringa única. La matriz de gelatina puede ser esterilizada por volumen antes de la irradiación. La irradiación gama o beta son adecuadas para la esterilización de la gelatina. La gelatina estéril es hidratada en volumen con una solución de trombina estéril. Esto produce una pasta mojada, es decir, una pasta sin una fase libre de líquidos. Preferentemente, este paso es llevado a cabo en volumen dejando caer por gotas gradualmente los gránulos de gelatina dentro de la solución de trombina agitada de manera constante y mezclar hasta que se forma una pasta homogénea o mediante una alimentación en forma simultánea de los gránulos y la solución de trombina en una máquina de extrusión configurada en forma adecuada en donde los dos componentes son mezclados de manera íntima dentro de una pasta que puede fluir, la cual puede entonces ser dispensada directamente en jeringas para procesamiento adicional.

La pasta puede entonces colocarse dentro de jeringas para permitir la liofilización dentro de la jeringa.

Después de congelar las jeringas llenas, la pasta es liofilizada utilizando un programa de liofilización adecuado. La jeringa se cierra dentro del liofilizador colocándolo sobre los émbolos inicialmente colocados en la jeringa. En el mismo paso, la matriz liofilizada es compactada para cerrar el volumen, el cual podría ser ocupado por los grá nulos de gelatina solos, para reducir al mínimo la cantidad de aire mezclado dentro del producto en la reconstitución. El producto está listo ahora para empacarse con la jeringa de diluyente, EO, esterilización de las bolsas y almacenamiento.

Jeringa de diluyente La jeringa de diluyente contiene un medio de reconstitución adecuado para hidratar el producto. Este puede ser acoplado con la jeringa Floseal, ya sea directamente o por medio de un conector. El diluyente es transferido dentro de la jeringa Floseal, y el producto hidratado es transferido de atrás a adelante entre las jeringas acopladas en forma repetida para generar una pasta que puede fluir. La jeringa de diluyente puede ser preparada, por ejemplo, mediante un procedimiento tal como el siguiente: el medio es filtrado estéril y lleno en jeringas adecuadas (jeringas Toppac comunes, Clearshot, ...); y si es necesario, terminan esterilizadas por irradiación.

Granulado de gelatina.

La fabricación en volumen de los gránulos de gelatina se realiza de acuerdo con los método establecidos (WO 98/08550 A; WO 2003/00785 A; etc.). Los gránulos (gránulos de "Floseal"; matriz de "Floseal") son esterilizados mediante irradiación gama. Para la esterilización pre-clínica, la matriz de Floseal se llena en botellas de vidrio Schott del tamaño adecuado.

La dosis de irradiación requerida en el nivel de bio-carga máxima actual (1000 cfu/muestra) es de 25 a 40 kGy para el producto en el contenedor final. El material de volumen es entonces almacenado a una temperatura de -20°C para fabricación adicional.

Floseal "en jeringa de liofilización" 0.81 g de gelatina de Floseal (asociada con agua y que corresponde a 0.704 g de polvo de gelatina seco) son pesados dentro de una jeringa de liofilización. El émbolo de la jeringa es colocado entonces sobre los gránulos de gelatina desde atrás. Por otro lado, una jeringa de trombina de Floseal se llena con 4.0 mi de trombina 500 ??/ml. Entonces las jeringas son conectadas y movidas durante por lo menos 21 pases. Después del último pase, el producto tiene que estar dentro de la jeringa de liofilización. El luer de esta jeringa se cierra utilizando las tapas luer Floseal. El producto experimenta la liofilización dentro de esta jeringa. Para la liofilización, se utilizó el programa de liofilización para trombina STIM5 500IU/ml. Las jeringas son colocadas en anaqueles de construcción común elaboradas de acero inoxidable. El anaquel es construido de manera que la tapa luer de la jeringa reposta en la base inferior del anaquel, mientras que el descanso de los dedos de las jeringas reposan sobre la base superior. Esto asegura la estabilidad máxima de las jeringas durante el paso de compactación de pastel de liofilización.

El producto seco es compactado bajo vacío haciendo descender la placa de "tapón" hidráulica del liofilizador y de esta manera empujar los émbolos más allá de los orificios de liofilización y en el interior de las jeringas. Esto cierra las jeringas y compacta el pastel de liofilización, de manera que éste ocupa tan poco volumen como sea posible después del paso de liofilización. El nivel bajo al cual las placas de tapón son descendidos está limitado por los separadores metálicos, lo cual asegura que las jeringas son compactadas hacia el nivel derecho sin poner una presión indebida sobre el producto/dispositivos. 2. Efectividad en el modelo de abrasión de hígado porcino El propósito de este estudio es comparar la efectividad de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención con un producto estándar establecido (Floseal VH S/D; Baxter Healthcare) en el modelo de abrasión de hígado porcino. Floseal VH S/D es una matriz de gelatina que administra trombina para detener el sangrado activo dentro de un período de 2 minutos de la aplicación. Este producto requiere de una preparación de 2 pasos, (1) reconstitución de trombina y (2) hidratación de las partículas de gelatina con la trombina reconstituida. El producto de acuerdo con la presente invención está diseñado para reconstituir la composición hemostática seca en 1 paso y es un mejoramiento principal para la preparación de 2 pasos, la cual es desfavorable cuando el producto se necesita rápidamente o en grandes cantidades.

Modelo de abrasión de hígado porcino.

Seis cerdos hembra domésticos, peso medio de 55.0 kg (rango de 52.4 a 58.4 kg), se obtuvieron de Oak Hill Genetics (Ewing, Illinois) y se pesaron en el momento de la cirugía. A la llegada, los animales fueron aislados en cuarentena durante 6 días. En el momento de la cirugía, los seis cerdos no mostraron señales de enfermedad clínica. Se utilizaron etiquetas de orejas para identificar a los animales y se hicieron referencias cruzadas a los números de identificación asignados. Los animales fueron agrupados en corrales. Los cerdos recibieron agua ad libitum y una dieta estándar para cerdos una vez al día.

Los cerdos son un modelo cardiovascular bien aceptado y son adecuados para este tipo de estudio. Los lóbulos grandes, múltiples del hígado dejaron lesiones múltiples para comparaciones directas de los diferentes artículos de prueba.

Anestesia y terapia de fluidos.

Los cerdos son medicados con Midazolam (0.3 mg/kg, 1M) e inducidos con máscara con Isoflurano en un portador a 2:1 de portador de nitrógeno a oxígeno. Los cerdos fueron intubados y ventilados a un índice de 10 a 15 respiraciones por minuto. La anestesia se mantuvo con Isoflurano en un portador de oxígeno. Los cerdos recibieron una infusión de índice continuo de Solución de Ringer Lactada calentada.

Procedimiento de abrasión de hígado Se utilizó un modelo de abrasión de hígado porcino para este estudio. Seis cerdos son preparados con el objeto de que 120 lesiones (40 por grupo de tratamiento) son evaluados y suficientes para detectar una diferencia en los índices del 80 por ciento contra el 40 por ciento con a = 0.05 y potencia = 90%. Cada serie es confiada ya sea al lóbulo medial, lateral izquierdo o lateral derecho.

Cada serie de lesiones contiene tres abrasiones de hígado de 1 cm de diámetro, 3-4 mm de profundidad creadas utilizando un taladro de mano fijo con papel esmerilado. El sangrado es evaluado y la lesión es tratada en forma aleatoria y ciega con la referencia o el artículo de prueba. El artículo de referencia y de prueba es aleatorizado utilizando un generador de número aleatorio. Cada artículo es colocado sobre la lesión, mantenido en su lugar con una gaza húmeda durante 2 minutos y se evaluó en forma ciega para hemostasis a los 2, 5 y 10 minutos después del tratamiento. El exceso de referencia o artículo de prueba es irrigado lejos después de una evaluación de 5 minutos.

Protocolo de heparinización Se tomó un tiempo de coagulación activado en la línea de base (ACT) y cada cerdo recibe una dosis de carga de heparina, 200 lU/kg. El ACT es evaluado cada 10 minutos hasta que el ACT es por lo menos 2 veces la línea de base. Si el ACT mide menos que o casi igual a 2 veces la línea de base, el cerdo se trató con un bolo de dosis de heparina, 75 I.U./kg.

Una vez que es mayor que 2 veces la línea de base, el ACT es medido cada 20 minutos. Si el ACT mide menos que o casi igual al objetivo de 2 veces la línea de base, el cerdo recibe un bolo de dosis de heparina, 40 I.U./kg. Si el ACT mide más que el objetivo de 2 veces la línea de base, el cerdo no es tratado o recibe un bolo de dosis de mantenimiento de heparina, limitado a no más de 2,000' IU/hora.

Toda la heparina es suministrada mediante un catéter venoso periférico. Todas las muestras de sangre son tomadas de un catéter yugular. Los valores de referencia de la presión sanguínea y el ritmo cardíaco son registrados en el momento de las mediciones ACT.

Evaluación de hemostasis La hemostasis es evaluada a 0, 2, 5 y 10 minutos después de que se ha creado y tratado la serie de lesiones, en donde 0 minutos se refiere a previo al tratamiento. Las calificaciones de O, 1, 2, 3, 4, y 5, son asignadas a no sangrado, exudado, muy suave, suave, moderado y severo, respectivamente. Las tres lesiones son tratadas aproximadamente al mismo tiempo para evitar la diferencia en ubicación y coagulación que puede ser el resultado del tratamiento de cada una en forma independiente. La sangre de la lesión es limpiada después de cada evaluación según sea necesario.

Mediciones y registros El ACT, hemostasis, presión sanguínea y ritmo cardíaco son evaluados de acuerdo con los métodos estándar.

Análisis estadístico La unidad de muestra para este estudio es el sitio de lesión del hígado con 40 lesiones por grupo de tratamiento para un total de 120 lesiones.

Se utilizó la regresión logística múltiple para evaluar el efecto del tratamiento en la clasificación de sangrado (0 = no, 1 = exudado, 2 = muy ligero, 3 = ligero, 4 = moderado y 5 = severo) a 2, 5 y 10 minutos posteriores al tratamiento. Las variables independientes incluyen grupo de tratamiento, cerdo, lóbulo del hígado (medio, derecho o izquierdo) y clasificación de sangrado inicial. Las proporciones de exudado para los efectos de FB/FS, Lyo/FS, FB/Lyo, y sus intervalos de confianza son calculadas en cada punto de tiempo después del tratamiento.

Las ubicaciones de las lesiones no son distribuidas de manera uniforme a través de los tres lóbulos y los cerdos. El efecto de lóbulo no se encontró ser significativo, y por consiguiente, los análisis son realizados nuevamente sin este efecto. Las conclusiones se basan en los análisis sin el efecto de lóbulo en el modelo.

Resultados El desempeño de la composición hemostática seca de acuerdo con la presente invención no es significativamente diferente de Floseal VH S/D en todos los puntos de tiempo. Esto muestra que el método de producción de acuerdo con la presente invención y el modo de reconstitución de 1 paso no tienen un impacto negativo sobre el desempeño de la composición, sino que proporcionan la ventaja deseada en el manejo práctico, proporcionando de esta manera la solución del objeto de la presente invención.

Experimentos animales adicionales Una evaluación pre-clínica es realizada para comparar la eficacia in vivo de Floseal "dentro de la jeringa de liofilización" con Floseal VH en un modelo muy estricto (altamente anti-coagulado). Este modelo consiste en una perforación de hígado de espesor completo de 5 mm con 4 incisiones adicionales que radian desde el defecto de perforación en una forma transversal. Se utilizaron 6 animales por grupo de estudio, estos animales fueron heparinizados a 4,000 I.U./kg. Después de realizar la lesión, el Floseal reconstituido es aplicado, y se aplica presión ligera con una gaza húmeda durante 2 minutos.

Después de este tiempo, se evalúa la hemostasis primaria. Si la hemostasis primaria no es lograda, se vuelve a aplicar el producto hasta que se logra la hemostasis, o se acaba el producto (5 ml)/tiempo (15 minutos). Los puntos finales primarios son el logro de la hemostasis primaria (si/no) y el tiempo de la hemostasis (minutos).

Si se logra la hemostasis primaria, los animales son cerrados quirúrgicamente, y después de 24 horas, los animales son evaluados en búsqueda de nuevo sangrado.

La composición présente proporciona resultados en términos de tiempo para hemostasis que son equivalentes o mejor que el Floseal estándar en esta sesión de laboratorio pre-clínica particular.

Claims (23)

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para elaborar una composición hemostática seca y estable, dicho procedimiento comprende: a) proporcionar un primer componente que comprende una preparación seca de un agente que induce la coagulación, b) proporcionar un segundo componente que comprende una preparación seca de un polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis, c) mezclar dicho primer componente y dicho segundo componente bajo condiciones efectivas para formar una pasta mojada mientras que evita esencialmente la degradación del segundo componente por dicho primer componente en un contenedor final o transferir dicha pasta mojada dentro de un contenedor final, d) congelar y liofilizar dicha pasta en dicho contenedor obteniendo de esta manera una composición hemostática seca y estable que comprende dicho primer componente y dicho segundo componente en forma liofiliza.da, y e) terminar dicha composición hemostática seca y estable en dicho contenedor final para un dispositivo farmacéutico que se puede almacenar, dicho primer componente y dicho segundo componente en una forma combinada como una composición hemostática seca y estable.

2. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 1, caracterizado además porque el paso c) es realizado bajo condiciones antisépticas.

3. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 1 o 2, caracterizado además porque el paso c) es realizado por extrusión.

4. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque el paso d) comprende un paso de esterilización de óxido de etileno o una irradiación de ionización.

5. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado además porque dicho primer componente contiene trombina en una solución de CaCI2.

6. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque dicho componente contiene trombina en una concentración de 10 a 10,000 I.U.., más preferentemente de 50 a 5,000 I.U., especialmente de 100 a 1,000 I.U. /mi.

7. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado además porque dicha pasta es congelada en dicho contenedor final después del desempeño del paso c).

8. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque se utiliza una jeringa como dicho contenedor final.

9. El procedimiento tal y como se describe en la reivindicación 8, caracterizado además porque dicha jeringa es una jeringa terminada junto con una jeringa de diluyente con un diluyente farmacéuticamente aceptable para reconstituir dicha composición hemostática seca y estable.

10. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque dicho primer componente comprende trombina humana.

11. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado además porque dicho primer componente comprende trombina humana recombinante.

12. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis contiene una proteína seleccionada del grupo que consiste de gelatina, colágeno soluble, albúmina, hemoglobina, fibrinógeno, fibrina, caseína, fibronectina, elastina, queratina, y laminina; o derivados o combinaciones de los mismos.

13. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis contiene un polisacárido seleccionado del grupo que consiste de glicosaminoglicanos, derivados de almidón, derivados de celulosa, derivados de hemicelulosa, xilano, agarosa, alginato y quitosán; o derivados o combinaciones de los mismos.

14. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis contiene un polímero seleccionado del grupo que consiste de poliacrilatos, polimetacrilatos, poliacrilamidas, resinas de polivinilo, poliláctido-glicólidos, policaprolactonas, y políoxietilenos; y derivados y combinaciones de los mismos.

15. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizarse en hemostasis; contiene un polisacárido reticulado, una proteína reticulada, o un polímero no biológico reticulado; o mezclas de los mismos.

16. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis es un material granular.

17. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado además porque dicho polímero biocompatible adecuado para utilizar en hemostasis es una gelatina reticulada.

18. El procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado además porque dicho contenedor final contiene adicionalmente una cantidad de un estabilizador efectiva para inhibir la modificación del polímero cuando es expuesto a radiación de esterilización, preferentemente ácido ascórbico, ascorbato de sodio, otras sales de ácido ascórbico o un antioxidante.

19. Un método para administrar una composición hemostática a un sitio objetivo en un cuerpo del paciente, dicho método comprende administrar una composición hemostática producida mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 al sitio objetivo.

20. El método tal y como se describe en la reivindicación 19, caracterizado además porque comprende adicionalmente el paso de poner en contacto dicha composición hemostática con un diluyente farmacéuticamente aceptable, de manera que se obtiene una composición hemostática en una forma de hidrogel.

21. Un contenedor final terminado obtenido mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18.

22. Un método para proporcionar una composición hemostática lista para utilizarse que comprende poner en contacto una composición hemostática producida mediante el procedimiento tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, con un diluyente farmacéuticamente aceptable.

23. Un equipo para la administración de una composición hemostática que comprende el contenedor terminado tal y como se describe en la reivindicación 21 y un contenedor con un diluyente farmacéuticamente aceptable.