MX2012004037A

MX2012004037A - Material de andamiaje para el cuidado de heridas y/u otras aplicaciones para cicatrizacion de tejido.

Info

Publication number: MX2012004037A
Application number: MX2012004037A
Authority: MX
Inventors: Gudmundur Fertram Sigurjonsson; Dora Hlin Gisladottir; Gudmundur Gudmundsson
Original assignee: Kerecis Ehf
Priority date: 2009-10-07
Filing date: 2010-10-06
Publication date: 2012-10-15
Also published as: HUE038789T2; JP5893563B2; ZA201203175B; EP2485779B8; BR112012007597A2; US20110244054A1; DK2485779T3; PE20121798A1; WO2011042794A2; NZ599399A; BR112012007597B1; CA2778090C; CN102781485A; MY160388A; CL2012000891A1; EP2485779A2; PL2485779T3; AU2010304827A1; NO2485779T3; US8613957B2

Abstract

Se describe un material de andamiaje para cuidado de heridas y/o aplicaciones para cicatrización de tejido y métodos para fabricarlos. El material de andamiaje está constituido de una matriz extracelular descelularizada de la piel de pescado. El material de andamiaje también puede incluir lípidos de la capa lípida de la piel de pescado. También se describen los métodos para hacer y utilizar el material de andamiaje.

Description

MATERIAL DE ANDAMIAJE PARA EL CUIDADO DE HERIDAS Y/U OTRAS APLICACIONES PARA CICATRIZACION DE TEJIDO Campo de la Invención La invención se refiere a un material de andamiaje para el cuidado de las heridas y/u otras aplicaciones para cicatrización de tejidos y métodos para fabricarlo. El material de andamiaje comprende una matriz extracelular descelularizada de la piel del pescado.

Antecedentes de la Invención Actualmente se ha descrito una variedad de materiales humanos, animales y sintéticos o utilizado en procedimientos médicos para aumentar, reparar, o corregir defectos tisulares.

Por ejemplo, la Solicitud de Patente Publicada de E. U. A. 2003/0059460 describe un material polimérico híbrido que comprende polímeros sintéticos y naturales que pueden utilizarse en la regeneración del tejido corporal vivo. El híbrido comprende un polímero de existencia natural reticulado y un polímero sintético absorbible por biodegradación . Sin embargo, debe tomarse una serie de pasos de proceso complicados para producir material híbrido. Además el material híbrido resultante contiene materiales sintéticos así como de existencia natural.

La Patente de E. U. A. No. 6,541,023 describe el Ref. 229353 uso de geles de colágeno porosos derivados de la piel del pescado para utilizarse como andamios de ingeniería tisular. La preparación de los geles de colágeno involucra triturar la piel del pescado. Adicionalmente , la Patente China No. 1068703 describe un procedimiento para preparar la piel del pescado para tratar heridas por quemaduras, que involucra separar la piel del pescado del cuerpo del pescado y colocar la piel en una solución de conservación de tintura de yodo, etanol, borneol, zinc de sulfadiazina y ácido clorhídrico en cantidades suficientes para establecer un valor de pH de 2.5-3. Sin embargo, estos productos pueden ser difíciles de manejar como los productos de la Patente de E. U. A. No. 6,541,023, que están en una forma de gel y producto de la Patente de China No. 1068703 que se almacena en una solución.

Además, un número de productos de matriz extracelular para usos médicos se han derivado de la piel humana (ALLODERM® Regenerative Tissue Matrix (LifeCell) ; piel de bovino fetal (PRIMATRIX™ Dermal Repair Scaffold (TEI Biosciences) ) ; vejiga urinaria de porcino (MATRISTEM™ Extracellular Matrix ound Sheet (Medline Industries, Inc.)); y submucosa del intestino delgado del puerco (OASIS® Wound Matrix (Healthpoint Ltd.)). Sin embargo, existe la necesidad de productos mejorados y métodos para mejorar la curación de heridas y la reparación tisular. La presente invención satisface esta necesidad.

Breve Descripción de la Invención La matriz extracelular (EC , por sus siglas en inglés) de vertebrados es una entidad estructural compleja que rodea y soporta las células. La ECM se compone de mezclas complejas de proteínas estructurales, la más abundante de las cuales es colágeno, y otras proteínas especializadas y proteoglicanos . El material de andamiaje descrito en la presente es .un andamio acelular en su mayor parte intacto de componentes ECM biológicos naturales de la piel del pescado. El andamio también puede comprender lípidos de existencia natural de la piel del pescado. La estructura tridimensional nativa, la composición, y la función de la ECM dérmica no están esencialmente alteradas, y proporciona un andamio para dar soporte a la migración, la adherencia, la proliferación y la diferenciación celular, de esta forma facilitando la reparación y/o el reemplazo del tejido. La presente invención también se refiere a métodos para hacer y utilizar el material de andamiaje.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra una muestra ilustrativa de un producto ECM descelularizado (material de andamiaje) hecho de la piel del pescado de acuerdo con un procedimiento descrito en la presente .

Las Figuras 2A-2B muestran imágenes ópticas del material de andamiaje en secciones transversales a 100x(2A) y 400x(2B) de amplificación.

Las Figuras 3A-3B muestran imágenes de microscopio por electrón de exploración (SEM, por sus siglas en inglés) del material de andamiaje en secciones transversales a 300x(3A) y 600x(3B) de amplificación.

Descripción Detallada de la Invención Un material de andamiaje de acuerdo con la invención se obtiene de la piel de pescado intacta. Un ejemplo ilustrativo que muestra la apariencia de una muestra del material de andamiaje se muestra en la Figura 1. Cualquier especie de pescado, incluyendo pescado óseo o cartilaginoso, puede utilizarse como la fuente de la piel de pescado. Por ejemplo, la fuente puede ser un pescado redondo como bacalao, merluza, y bagre; pez plano como halibut, platija y lenguado; salmónidos como salmón y trucha; escómbridos como atún; o peces pequeños como arenque, anchoas, caballa y sardinas. En ciertas modalidades, la piel de pescado se obtiene de pescado oleoso de agua fría y/o pescado que se sabe que contiene grandes cantidades de aceite omega-3. Los ejemplos de pescado con alto contenido de aceite omega-3 son el salmón, las sardinas, el atún, arenque, bacalao, sardinas, caballa, pez sable, pez plateado, pez blanco, merluza de cola y algunas variedades de trucha.

La piel del pescado se remueve del pescado antes de procesarla. Si la piel del pescado es de una especie de pescado que tiene escamas, la piel del pescado deberá desescamarse de tal forma que una porción sustancial de las escamas se remueven o por lo menos la hidroxiapatita se remueve de las escamas. La frase "una porción sustancial de las escamas se remueve" o "sustancialmente sin escamas" significa que por lo menos el 95%, preferiblemente al menos el 99%, y más preferiblemente el 100% de las escamas de la piel del pescado se remueven. Piel de pescado "sustancialmente sin escamas" también puede referirse a la piel del pescado de una especie de pescado sin escamas. Las escamas ya sea se remueven antes de todo el procesamiento, con puramente presión mecánica (por ejemplo, a través de un cuchillo, agitando con abrasivos, con presión de agua, y un dispositivo para remoción de escamas especial que utiliza la misma fuerza mecánica que los cuchillos u otros dispositivos de presión, como el pulido con cerámica o plástico) o después de algún tratamiento químico (por ejemplo, descelularización) y después con presión mecánica con el fin de deslavar las escamas. Si la piel del pescado primero se trata químicamente y/o enzimáticamente (por ejemplo, tratamiento con TRITON® X-100) , la presión mecánica generalmente necesita ser ligera ya que la piel es más vulnerable a rasgarse después de la descelularización. Las escamas pueden removerse en más de un paso, por ejemplo, la remoción parcial antes de la descelularización seguida por una remoción adicional durante ß y/o después de la descelularización . Alterna ivamente, las escamas pueden removerse a través de tratamiento químico solo .

Después de que las escamas han sido removidas, la piel del pescado opcionalmente se congela antes de la descelularización. La piel del pescado puede congelarse rápidamente incubando la piel en nitrógeno líquido o utilizando otro equipo de congelamiento especial que pueden congelar a piel a -70 °C o inferior, con el fin de conservar la estructura del colágeno del andamio. Alternativamente, la piel de pescado puede congelarse en un tipo convencional de congelador que típicamente se encontraría en una fábrica de pescado. El procedimiento de congelamiento puede lisar o parcialmente lisar las células que comprenden la piel de pescado intacta, y ayudar a facilitar la descelularización de la piel del pescado. Si la piel del pescado se ha congelado, después puede descongelarse para procesamiento adicional.

Si la piel del pescado se congeló o no, puede lavarse con una solución reguladora del pH antes del procesamiento adicional. Por ejemplo, la piel del pescado puede lavarse de 1-3 veces con una solución reguladora del pH opcionalmente conteniendo uno o más antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico (tal como 50 mM de ácido ascórbico) , Vitaminas A, C, E, y beta carotenos) , antibióticos (por ejemplo, estreptomicina y penicilina) , proteasas (por ejemplo, dipasa II) e inhibidores de proteasa (por ejemplo, antipaína, aprotinina, benzamidina, bestatina, DFP, EDTA, EGTA, leupeptina, pepstatina, fosforamidón, y PMSF) para facilitar la desinfección y estabilización de la piel del pescado. La solución reguladora del pH puede estar a un pH de al menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades, el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo, entre 7.5 y 8.5. La solución reguladora del pH también puede utilizarse como un medio en el cual la piel del pescado puede almacenarse durante unos cuantos días hasta unas cuantas semanas o más. En ciertas modalidades, la piel del pescado se almacena en la solución reguladora del pH a una temperatura de aproximadamente 4°C.

Después de congelar y/o lavar y/o almacenar en una solución reguladora del pH, la piel del pescado se trata con una o más soluciones de descelularización para remover el material celular, incluyendo material antigénico, de la piel del pescado con un mínimo o sin daño a la integridad mecánica estructural y la actividad biológica de la matriz extracelular de existencia natural.

El término "matriz extracelular" o "ECM" , por sus siglas en inglés, como se utiliza en la presente se refiere al material tisular no celular presente dentro de la piel del pescado que proporciona soporte estructural a las células de la piel además de llevar a cabo varias otras funciones importantes. La ECM descrita en la presente no incluye material de matriz que ha sido constituido o re- formado completamente de componentes ECM extraídos, purificados o separados (por ejemplo, colágeno).

Los términos "acelular" , "descelularizado" , "piel de pescado descelularizada" , y similar como se utiliza en la presente se refieren a la piel del pescado de la cual una cantidad sustancial de un contenido celular y de ácido nucleico ha sido removida dejando una estructura intersticial tridimensional compleja de ECM. "Agentes de descelularización" son aquellos agentes que son efectivos en la remoción de una cantidad sustancial de contenido celular y ácido nucleico de ECM. La ECM está "descelularizada" o "sustancialmente libre de" contenido celular y ácido nucleico (es decir, una "cantidad sustancial" ha sido removida) cuando por lo menos 50% de los ácidos nucleicos viables y no viables y otro material celular han sido removidos de las ECM. En ciertas modalidades, aproximadamente 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, o 100% de los ácidos nucleicos viables y no viables y material celular sea removido. La descelularización puede verificarse a través de, por ejemplo, ensayando la piel de pescado tratada para contenido de ADN. La remoción de los ácidos nucleicos de ECM pueden determinarse, por ejemplo, mediante examen histológico de la ECM, y/o a través de ensayo bioquímico tal como el ensayo PICOGREEN®, el ensayo de difenilamina, o a través de PCR.

La descelularización altera las membranas celulares y libera el contenido celular. La descelularización puede involucrar uno o más tratamientos físicos, uno o más tratamientos químicos, uno o más tratamientos enzimáticos, o cualquier combinación de éstos. Los ejemplos de tratamientos físicos son sonicación, agitación mecánica, masaje mecánico, presión mecánica, y congelamiento/descongelamiento. Los ejemplos de agentes de descelularización químicos son sales iónicas (por ejemplo, azida de sodio), bases, ácidos, detergentes (por ejemplo, detergentes no iónicos y iónicos), agentes de oxidación (por ejemplo, peróxido ácido y peroxi-ácidos) , soluciones hipotónicas, agentes quelantes (por ejemplo, EDTA y EGTA) , solventes orgánicos (por ejemplo, tri (n-butil )- fosfato) , ácido ascórbico, metionina, cisteína, ácido maleico, y polímeros que se unen al ADN (por ejemplo, poli-L-lisina, polietilimina (PEI), y poliamindoamina (PAMAM) . Los detergentes no iónicos incluyen 4-(l, 1,3,3-tetrametilbutil) fenil-polietilenglicol, t-octilfenoxipolietoxietanol , polietilenoglicol ter-octilfenil éter 8TRITON® X-100) (Dow Chemical Co . ) . Los detergentes iónicos incluyen dodecil sulfato de sodio (SDS) , desoxicolato de sodio, TRITON® X-200, y detergentes zwiteriónicos (por ejemplo, CHAPS) . Otros detergentes de descelularización adecuados incluyen mono-oleato de polioxietilen (20) sorbitán y mono-oleato de polioxietilen (80) de sorbitán (Tween 20 y 80) , 3- [ (3-cloramidopropil) -dimetilamino] -1-propan-sulfonato, octil-glucosida y dodecil sulfato de sodio. Los ejemplos de agentes de descelularización enzimática son proteasas, endonucleasas , y exonucleasas . Las proteasas incluyen serina proteasas (por ejemplo, tripsina), treonina proteasas, cisteína proteasas, aspartato proteasas, metaloproteasas (por ejemplo, termolisina) , y proteasas de ácido glutámico. La descelularización generalmente se lleva a cabo a un pH de por lo menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo entre 7.5 y 8.5.

Un ejemplo de un paso de descelularización es incubar la piel del pescado en una solución que comprende 1M de NaCl, 2% de ácido desoxicólico, 0.02% de azida de sodio y 500 ppm de estreptomicina. En otro ejemplo, la piel del pescado se incuba primero con una solución de descelularización que comprende una proteasa (por ejemplo, 2.5 U/ml de dispasa II), y otros componentes (por ejemplo, 0.02% de azida de sodio). La primera solución de descelularización se vierte y la piel del pescado después se trata con una segunda solución de descelularización tal como una solución que comprende un detergente (por ejemplo, 0.5% de TRITON® X-100) y otros componentes (por ejemplo, 0.02% de azida de sodio. En otro ejemplo, la piel del pescado primero se trata con una solución de descelularización que comprende detergente (por ejemplo, 0.5% de TRITON® X-100) con otros componentes (por ejemplo, 0.02% de EDTA, azida de sodio, y/o ácido de desoxicólico) y después se incuba en una segunda solución de descelularización que comprende un detergente tal como SDS .

La piel del pescado puede o no puede incubarse bajo agitación. El paso(s) de descelularización puede repetirse según sea necesario partiendo de cualquier solución de descelularización restante, opcionalmente lavando la piel del pescado con una solución reguladora del pH (por ejemplo, solución salina balanceada de Hank) , y después tratando la piel del pescado de nuevo con otro paso de descelularización. Una vez que se ha removido una cantidad suficiente del material celular, la solución de descelularización puede removerse (por ejemplo, por aspiración o vaciando delicadamente la solución) .

Después de la descelularización, la piel del pescado puede opcionalmente lavarse con agua, solución reguladora del pH, y/o solución salina. Los ejemplos de soluciones de lavado adecuadas incluyen solución salina regulada con fosfato de Dulbecco (DPBS) , solución salina balanceada de Hank (HBSS) , Medio 199 (M199, SAFC Biosciences, Inc.) y/o L-glutamina. El paso(s) de lavado generalmente se lleva a cabo a un pH de por lo menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades, el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo, entre 7.5 y 8.5.

La piel del pescado puede opcionalmente blanquearse para mejorar la apariencia del producto final. El blanqueado puede llevarse a cabo antes, después, y/o concurrentemente con la descelularización . Por ejemplo, se pueden incorporar uno o más agentes de blanqueo en una o más de las soluciones de descelularización y/o en una o más soluciones reguladoras del pH. Los ejemplos de agentes de blanqueo incluyen sulfito de sodio, peróxido ácido, persulfato de amonio, persulfato de potasio, y persulfato de sodio. En ciertas modalidades, si se utiliza un persulfato de tipo agente blanqueador fuerte, el blanqueo y la descelularización pueden combinarse en un solo paso que comprende incubar la piel del pescado en una mezcla de uno o más agentes de blanqueo, espesantes, y fuentes de peróxido. Por ejemplo, se pueden preparar una mezcla de blanqueo seca (ver, por ejemplo, las "mezclas de blanqueo" descritas en el Ejemplo 5) , seguido por la adición de agua, peróxido ácido, o una combinación de éstos a la mezcla seca para formar una solución de blanqueo que también puede ser suficiente para la descelularización. Los agentes de blanqueo (por ejemplo, sulfito de sodio, peróxido ácido, persulfato de amonio, persulfato de potasio, y persulfato de sodio) deberán ser aproximadamente de 40-60% p/p de la mezcla seca. Una combinación de EDTA y persulfatos puede agregarse a la mezcla para acelerar el blanqueo así como la descelularización . En ciertas modalidades la concentración de EDTA en la mezcla seca es de aproximadamente 0.25-5% p/p. El peróxido ácido puede ser de aproximadamente 15-25% de la mezcla; la fuente de peróxido puede ser percarbonato de sodio y percarbonato de potasio. El fosfato sódico prehidratado y el carbonato de sodio o el metasilicato de magnesio y el silicato de silicio también pueden utilizarse como una fuente de peróxido. La mezcla seca también puede incluir sílice y sílice hidratada, a por ejemplo 1-10% p/p y opcionalmente uno o más estearatos (por ejemplo, estearato de amonio, estearato de sodio y/o estearato de magnesio) . Además la mezcla seca puede opcionalmente incluir espesantes tales como hidroxipropilmetil celulosa, hidroxietil celulosa, algina (es decir, alginato) , gomas orgánicas (por ejemplo, celulosa, goma de xantana) , metasilicato sódico, y sus combinaciones para aumentar la viscosidad de la solución blanqueadora/ descelularización y proteger de daño las fibras de proteína. El blanqueo, y/o el blanqueo más la descelularización, generalmente se lleva a cabo a un pH de por lo menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo entre 7.5 y 8.5. Después del blanqueo y/o blanqueo más descelularización, la piel del pescado opcionalmente se lava con una solución que comprende L-glutamina bajo las condiciones de pH descritas anteriormente.

En ciertas modalidades, la piel del pescado se trata con una enzima de digestión. Similar al blanqueo, la digestión puede llevarse a cabo antes, después y/o concurrentemente con la descelularización. Las enzimas adecuadas incluyen proteasas, por ejemplo serina proteasas, treonina proteasas, cisteína proteasas, aspartato proteasas, metaloproteasas , y proteasas de ácido glutámico. En ciertas modalidades la enzima de digestión es una serina proteasa tal como tripsina. La enzima de digestión puede ser una enzima que funciona en un entorno alcalino, limita el entrelazamiento con la ECM, y ablanda la piel del pescado. La digestión generalmente se lleva a cabo a un pH de por lo menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo entre 7.5 y 8.5.

La' piel del pescado descelularizada puede opcionalmente ser crioconservada . La crioconservación puede involucrar sumergir la piel del pescado en una solución crioprotectora antes del congelamiento. La solución crioprotectora generalmente comprende un regulador de pH apropiado, uno o más crioprotectores , y opcionalmente un solvente, por ejemplo, un solvente orgánico que en combinación con agua experimenta una expansión y contracción mínima. Los ejemplos de crioprotectores incluyen sacarosa, rafinosa, dextrina, trehalosa, dimetilacetamida , dimetilsulfóxido, etilenglicol , glicerol, propilenglicol , 2-metil-2 , 4-pantadial , ciertas proteínas anticongelantes y péptidos, y sus combinaciones. Alternativamente, si la piel del pescado descelularizada se congela rápidamente (congelamiento instantáneo) antes de la sublimación con el fin de minimizar los cristales de hielo formados durante el paso de congelamiento, las pieles pueden opcionalmente congelarse en una solución reguladora de pH que no incluye crioprotectores. La crioconservación generalmente se lleva a cabo a un pH de por lo menos 5.5, tal como 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0 o más. En ciertas modalidades el pH está entre 7.0 y 9.0, por ejemplo entre 7.5 y 8.5.

La piel de pescado descelularizada puede empacarse dentro de un envase estéril, tal como un recipiente de vidrio o una bolsa. En una modalidad, se utiliza la bolsa TYVEK®. Por ejemplo, la piel del pescado puede incubarse en una solución crioprotectora, empacarse en una bolsa TYVEK®, y después colocarse en un secador por congelamiento y congelarse a un grado en el cual es compatible con el crioprotector .

La piel del pescado descelularizada puede liofilizarse, es decir, congelarse a una baja temperatura y bajo condiciones de vacío de tal forma que el agua se elimina secuencialmente de cada fase de cristal de hielo sin recristalización de hielo. Durante la liofilización, el agua generalmente se elimina primero a través de sublimación y después de desabsorción si es necesario. Otro método para eliminar el exceso de agua después del procesamiento y antes de la esterilización es la presión al vacío.

En ciertas modalidades, la piel de pescado descelularizada se esteriliza antes y/o después de ser congelada. Los métodos de esterilización son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la piel descelularizada puede colocarse en una cámara de óxido de etileno y tratarse con ciclos adecuados de óxido de etileno. Otros métodos de esterilización incluyen esterilización con ozono, dióxido de carbono, formaldehído gaseoso o radiación (por ejemplo, radiación gama, rayos X, procesamiento de rayo de electrón, y partículas subatómicas) .

Como alternativa o además del congelamiento, el secado por congelamiento, y/o la presión al vacío del agua, la piel del pescado descelularizada puede conservarse en una solución no acuosa tal como alcohol.

El producto resultante (material de andamiaje) es una matriz a base de colágeno, estéril que posee propiedades que pueden facilitar la regeneración, reparación y/o reemplazo del tejido (por ejemplo, reparación, regeneración y/o crecimiento de tejido endógeno). El término "material de andamiaje" se refiere al material que comprende piel de pescado que ha sido descelularizada y opcionalmente blanqueada, digerida, liofilizada, etc., como se explicó anteriormente. El material de andamiaje puede proporcionar un andamio intacto para soporte de células endoteliales y/o epiteliales, puede integrarse por el hospedero, y ser biocompatible , no se calcifica significativamente, y puede almacenarse y transportarse a temperatura ambiente. La frase "integrado por el hospedero" significa en la presente que las células y tejidos del paciente que se está tratando con el material de andamiaje pueden crecen el material de andamiaje y que el material de andamiaje actualmente se integra/absorbe en el cuerpo el paciente. El término "biocompatible" se refiere a un material que sustancialmente no tóxico en el entorno in vivo de su uso previsto, y que no se rechaza sustancialmente por el sistema fisiológico del paciente (es decir, no es antigénico) . Esto puede calibrarse a través de la habilidad de un material para pasar las pruebas de biocompatibilidad establecidas por Estándar No. 10993 de la Organización de Estándares Internacional (ISO, por sus siglas en inglés), y/o la Farmacopea de E. U. A. (USP, por sus siglas en inglés) 23 y/o la Administración de Alimentos y Fármacos de E . U. A. (FDA, por sus siglas en inglés) en el memorándum del libro azul No. G95-1, titulado "Use of International Standard ISO-10993, Biological Evaluation of Medical Devices Part 1: Evaluation and Testing" . Típicamente, estas pruebas miden la toxicidad, inefectividad, pirogenicidad, irritación potencial, reactividad, actividad hemolítica, caranogeniadad y/o inmunogenicidad del material. Una estructura o material biocompatible , cuando se introduce en la mayor parte de los pacientes, no causará una reacción o respuesta significativamente adversa, de larga duración o de escalación biológica, y se distingue por una inflamación temporal, ligera que típicamente acompaña cirugía o implante de objetos foráneos en una organismo viviente.

Los niveles persistentemente altos de metaloproteasas de matriz (MMP, por sus siglas en inglés) , pueden contribuir a la cronicidad de la herida. El material de andamiaje descrito en la presente puede absorber metaloproteasas de matriz (MMP) de esta forma promoviendo la curación de heridas y la transición de una herida crónica a aguda .

El material de andamiaje contiene proteínas de la matriz extracelular (ECM, por sus siglas en inglés) de la piel de pescado. Los componentes de la ECM en el material de andamiaje pueden incluir, por ejemplo, proteínas estructurales; glicoproteínas adhesivas; proteoglicanos ,· polisacáridos no de proteoglicanos; y proteínas de matriz celular. Los ejemplos de proteínas estructurales incluyen colágenos (la proteína más abundante en la ECM) , tales como colágenos fibrilares (tipos I, II, III, V, y XI) ; colágenos facit (tipos IX, XII, y XIV), colágenos de cadena corta (tipos VIII y X) , colágeno de membrana de basamento (tipo IV), y otros colágenos (tipos VI, VII, y XIII); elastina; y laminina. Los ejemplos de glicoproteínas adhesivas incluyen fibronectina , tenascinas; y trombospondina . Los ejemplos de proteoglicanos incluyen sulfato de heparina; sulfato de condroitina ; y sulfato de queretano. Un ejemplo, un polisacárido no proteoglicano es el ácido hialurónico. Las proteínas de matriz celular son un grupo estructuralmente diverso de proteínas extracelulares que regulan la función de los receptores de superficie celular, citocinas, factores de crecimiento, proteasas y las ECM. Los ejemplos incluyen trombospondinas (TSP) 1 y 2; tenanscinas ; y proteína secretada, ácida y rica en cisteína (SPARC, por sus siglas en inglés) .

En ciertas modalidades, la descelularización (y otros pasos de procesamiento opcionales) no elimina todos los lípidos de existencia natural de la capa lipida de la piel del pescado. De esta forma, el material de andamiaje puede comprender uno o más lípidos de la piel del pescado, particularmente de la capa lipida de la piel del pescado. Por ejemplo, el material de andamiaje puede incluir hasta aproximadamente 25% p/p de lípidos (o peso seco del material de andamiaje total después de la liofilización) , tal como 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, o 24% p/p de lípidos. La presencia de lípidos en el material de andamiaje puede verificarse, por ejemplo, a través de la extracción del solvente orgánico seguido por cromatografía. Los ejemplos de solventes orgánicos adecuados incluyen acetona y cloroformo.

Los lípidos en el material de andamiaje pueden incluir, por ejemplo, acilos grasos (es decir, ácidos grasos, sus conjugados y derivados); glicerolípidos ; glicerofosfolípidos (es decir, fosfolípidos ) , esfingolípidos , sacarolípidos ; policetidas ; esterolípidos (es decir, esteróles) ; ciertas vitaminas solubles en grasa; prenolípidos ; y/o policetidas. Los ejemplos de acilos incluyen ácidos grasos saturados, tales como ácidos grasos poliinsaturados ; ésteres grasos; amidas grasas; y eicosanoides . En ciertas modalidades los ácidos grasos incluyen ácidos grasos de omega-3, tales como el ácido eicosapentanoico (EPA) y ácido docosahexanoico (DHA) (encontrado en altas concentraciones en el aceite de pescado) . Otros ácidos grasos encontrados en el aceite de pescado incluyen ácido araquídico, ácido gadoleico, ácido araquidónico, ácido butírico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido capricho, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido palmitoleico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido vecénico, ácido linoleico, ácido alfa-linoleico, ácido gama-linoleico, ácido behénico, ácido erúcico, y ácido lignocérico. Los ejemplos de glicerolípidos incluyen mono-, di-, y tri -gliceroles sustituidos, tales como monoacilgliceroles, diacilgliceroles , y triacilgliceroles (es decir, monoglicéridos , diglicéridos , y triglicéridos) . Los ejemplos de glicerolfosfolípidos incluyen fosfatidilcolina; fosfatiletanolamina ; y fosfatidilserina . Los ejemplos de esfingolípidos incluyen fosfoesfingolípidos y glicoesfingolípidos . Los ejemplos de esterol lípidos incluyen colesterol, esteroides; y secoesteroides (varias formas de la Vitamina D) . Los ejemplos de prenol lípidos incluyen isoprenoles ; carotenoides ; y quininas e hidroquinonas, tales como Vitamina E y K.

El material de andamiaje puede contener uno o más agentes activos adicionados (es decir, un agente que se agrega durante o después del procesamiento del material de andamiaje), tales como antibióticos, antisépticos, agentes antimicrobianos, antivirales, antifúngicos , antiparasitarios, y agentes anti-inflamatorios . Lo ingredientes activos pueden ser un compuesto o composición que facilita el cuidado de las heridas y/o la cicatrización del tejido tales como un antioxidante, o fármaco. También puede ser una proteína o proteínas y/u otros biológicos. Los agentes antibióticos, antisépticos y antimicrobianos pueden agregarse en una cantidad suficiente para proporcionar propiedades antimicrobianas efectivas al material de andamiaje. En ciertas modalidades, el agente antimicrobiano es uno o más metales antimicrobianos, tales como plata, oro, platino, cobre, zinc o sus combinaciones. Por ejemplo, la plata puede agregarse al material de andamiaje durante el procesamiento en una forma iónica, metálica, elemental y/o coloidal. La plata también puede estar en combinación con otros antimicrobianos. Los agentes anti-inflamatorios pueden agregarse en una cantidad suficiente para reducir y/o inhibir la inflamación en el área de la herida o el tejido en donde se aplica el material de andamiaje.

El material de andamiaje puede utilizarse en formas secas. Alternativamente, el material de andamiaje puede rehidratarse antes de uso. En ciertas modalidades, uno o más materiales de andamio se laminan juntos para formar un material de andamiaje más grueso.

Generalmente, el material de andamiaje es de aproximadamente 0.1 a 4.0 mm de espesor (es decir, en sección transversal), tal como 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 ó 3.5 mm de espesor. El espesor puede depender de un número de factores, que incluyen las especies de pescado utilizado como el material de partida, el procesamiento, la liofilización, y/o la rehidratación (ver Ejemplo 14) . Por supuesto, el espesor es proporcionalmente mayor cuando el producto prende más de una capa del material de andamiaje.

El material de andamiaje descrito en la presente puede utilizarse para una variedad de aplicaciones médicas. Por ejemplo, el material de andamiaje puede utilizarse como un vendaje para heridas y/o material de sutura, en donde el material de andamiaje se aplica en o a una porción del área de la herida o del tejido. El término "herida" se refiere a cualquier daño que resulta en un daño tisular, penetración tisular, laceración o lesiones. Las heridas sensibles a tratamiento por el material de andamiaje incluyen daños que localizarse en cualquier sitio, incluyen interno, interfacial, externo, intersticial, intracorpóreo, y/o extracorpóreo . Los ejemplos de heridas adecuadas a ser cubiertas con el material de andamiaje incluyen cortaduras, cuchilladas, heridas abiertas, rupturas tisulares, decúbitos, dermatitis, lesiones, heridas crónicas, heridas del campo de batallas, heridas necróticas, agudas, crónicas, traumáticas, laceraciones, abrasiones, contusiones, facitis necronizante , necrólisis epidérmica tóxica, heridas de presión, úlceras de insuficiencia venosa, úlceras arteriales, úlceras diabéticas y neuropáticas , úlceras por presión, úlceras mixtas, heridas por quemaduras, mucomicosis, heridas vasculíticas , pioderma, gangrenosas y equivalentes y/o sus combinaciones conocidas por el experto en la técnica. Se contempla el tratamiento de heridas en sujetos humanos y animales.

En ciertas modalidades, el material de andamiaje se utiliza para la reconstrucción de la pared abdominal, por ejemplo, para reparar hernias. Por ejemplo, en la reparación de una hernia, un cirujano hará una incisión cerca de la ubicación de la hernia. Para una hernia inguinal la incisión se hace justo por arriba del pliegue en donde el abdomen se pone en contacto con el muslo. Para reparar una hernia umbilical, se hace cerca del ombligo. Si la hernia ha ocurrido en el sitio de una operación previa, la incisión de esa cirugía se re-abre. La cirugía avanza en mucho la misma forma, independientemente de si se hace la incisión. La hernia del saco se abre cuidadosamente y el intestino u otro tejido se colocan de nuevo dentro del abdomen. El área debilitada se repara y se refuerza con una malla sintética, o una sutura que impulsa el tejido del músculo abdominal hacia atrás de nuevo.

El material de andamiaje descrito en la presente puede utilizar como un material de malla o sutura, o utilizarse para reforzar un material de malla o sutura. El material de andamiaje puede utilizarse para reforzar o mejorar un producto para el cuidado de heridas o cicatrización de tejido tal como un vendaje para heridas, un material de malla, una venda o una sutura. Por ejemplo, el material de andamiaje puede utilizarse en seguida de, o entrelazarse con una venda para heridas, un material de malla o una sutura. Cuando se utiliza un material de malla o sutura, o para reforzar un material de malla o sutura, el material de andamiaje puede tratarse para aumentar el reticulado de los materiales de la ECM del componente, utilizando por ejemplo, reticulantes químicos tales como glutaraldehído o cromo. El material de andamiaje también puede utilizarse para reemplazar la pérdida gingival debido a la enfermedad periodontal, formar un cabestrillo en la vejiga y facilitar la reconstrucción del piso pélvico.

Como se utiliza en la presente, las formas singulares "uno", "una" y "el, la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto claramente dicte lo contrario .

Las publicaciones descritas en la presente son provistas solamente para su descripción antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada en la presente deberá interpretarse como una admisión de que la presente descripción no está facultad para preceder tal publicación en virtud de la descripción anterior. Además, las fechas de publicación provistas pueden ser diferentes de las fechas de publicación actuales, que pueden necesitar confirmarse independientemente. Todas las publicaciones, patentes, solicitudes de patentes y otras referencias citadas en la presente se incorporan por referencia en su totalidad.

Aunque la descripción ha sido descrita con detalle con referencia a ciertas de sus modalidades, será evidente para un experto en la técnica que pueden hacerse varios cambios y equivalentes utilizados, sin apartarse del alcance de la descripción. Además, los siguientes ejemplos son ilustrativos solamente y no deberán considerarse como limitantes de la descripción en ninguna forma.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado, junto con tanta grasa epidérmica cómo fue posible. La piel de pescado se desescamó en una tabla de corte raspando la superficie de la piel de pescado con un cuchillo.

Desinfección y estabilización La piel desescamada se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente .

Descelularización a) La piel de pescado se colocó en 1M de NaCl por 8 horas seguido por incubación en 2% de ácido desoxicólico conteniendo 0.02% de azida de sodio y 500 ppm de estreptomicina . b) La solución en a) se vació. La piel de pescado se colocó en Solución Salina Balanceada de Hank por 10 minutos a 40 RPM a temperatura ambiente. El paso se repitió y la piel de pescado se colocó en un envase en una campana de flujo laminar, se abrió y la solución se aspiró. El procedimiento se repitió dos veces más. c) La piel de pescado se trató con una solución de descelularización conteniendo 0.5% de SDS, y el envase se colocó en un centrifugador a 40 RPM por 1 hora a temperatura ambiente . d) La solución de descelularización se removió como se describe en b) por aspiración. La piel de pescado se lavó con 50 mi of salina regulada en pH con fosfato de Dulbecco.

Digestión La piel de pescado se incubó por 18 horas a temperatura ambiente en una solución de digestión que consistió de 1M de Tris-HCl, tripsina a 0.05 yg/ml , a un pH de 8.5.

Crioprotección La piel de pescado se sumergió en una solución de pre-congelante conteniendo 7% de dextrina, 6% de sacarosa, 6% de rafinosa y 1 mM de EDTA en Solución Salina Balanceada de Hank.

Lavado La piel de pescado se lavó con la solución pre-congelante y colocó en una centrífuga a 40 RMP por 120 minutos a temperatura ambiente.

Embalaje La piel de pescado se insertó en una bolsa que se cerró por sellado por calor. La bolsa fue una bolsa de membrana TYVEK® porosa de grado médico de DuPont, adecuada para esterilización con Oxido de Etileno (EtOx) .

Liofilización La bolsa conteniendo la piel de pescado se insertó en un secador por congelamiento y secó por congelamiento.

Esterilización La bolsa conteniendo la piel de pescado se insertó en una cámara de óxido de etileno y trató con 1 a 5 ciclos de óxido de etileno para esterilizar la piel de pescado.

Ejemplo 2 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado, junto con tanta grasa epidérmica cómo fue posible. La piel de pescado se desescamó en una tabla de corte raspando la superficie de la piel de pescado con un cuchillo.

Desinfección y estabilización La piel desescamada se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente .

Descelularización a) La piel de pescado se colocó en salina regulada en H con fosfato conteniendo 2.5 U/ml de dispasa II (o pronasa) y 0.02% de azida de sodio y se incubó a 4°C por 8 horas con agitación continua. La solución después se vació y la muestra se incubó bajo agitación ligera en una segunda solución de 0.5% de TRITON® X-100 y 0.02% de azida de sodio por 24 horas. b) La segunda solución en a) se vació. La piel de pescado se colocó en Solución Salina Balanceada de Hank por 10 minutos a 40 RPM a temperatura ambiente. El paso se repitió y la piel de pescado se colocó en un envase en una campana de flujo laminar, se abrió y la solución se aspiró. El procedimiento se repitió dos veces más. c) La piel de pescado se trató con una solución de descelularización conteniendo 0.5% de SDS, y el envase se colocó en un centrifugador a 40 RPM por 1 hora a temperatura ambiente. d) La solución de descelularización de c) se removió como se describe en b) por aspiración. La piel de pescado se lavó con 50 mi de salina regulada en pH con fosfato de Dulbecco.

Digestión La piel de pescado se incubó por 18 horas a temperatura ambiente en una solución de digestión de 1M de Tris-HCl, tripsina a 0.05 µg/ml( a un pH de 8.5.

Lavado La piel de pescado se lavó con la solución pre-congelante y colocó en una centrífuga a 40 RMP por 120 minutos a temperatura ambiente .

Embalaje La piel de pescado se insertó en una bolsa de membrana TYVEK® y se cerró por sellado por calor.

Ejemplo 3 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado, junto con tanta grasa epidérmica cómo fue posible. La piel de pescado se desescamó en una tabla de corte raspando la superficie de la piel de pescado con un cuchillo.

Congelamiento La piel de pescado se congeló en un congelador rápido de fábrica de pescado estándar. Durante el proceso de congelamiento las células se lisaron. El congelamiento inhibe el crecimiento microbiano.

Descongelamiento Las pieles de pescado se descongelaron a 4°C.

Desinfección y estabilización La piel desescamada se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 nM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente.

Descelularización a) La piel de pescado se trató con una solución de descelularización conteniendo 0.5% de SDS, y el envase se colocó en un centrifugador a 40 PM por 1 hora a temperatura ambiente. b) La solución de descelularización se removió por aspiración. La piel de pescado se lavó con 50 mi de salina regulada en pH con fosfato de Dulbecco.

Digestión La piel de pescado se incubó por 18 horas a temperatura ambiente en una solución de digestión de 1M de Tris-HCl, tripsina a 0.05 g/ml, a un pH de 8.5.

Crioprotección La piel de pescado se sumergió en una solución de pre-congelante conteniendo 7% de dextrina, 6% d sacarosa, 6% de rafinosa y 1 mM de EDTA en Solución Salina Balanceada de Hank.

Lavado La piel de pescado se lavó con a solución pre-congelante y colocó en una centrífuga a 40 RMP por 120 minutos a temperatura ambiente.

Ejemplo 4 Las pieles de pescado se procesaron como se describe en cada uno de los ejemplos 1-3, excepto que también se agregó un agente de blanqueo (sulfito de sodio) a la solución pre-congelante a 0.5% de concentración en el paso de lavado para obtener una matriz de andamio blanqueada.

Ejemplo 5 Las mezclas de blanqueo/descelularización se prepararon como sigue: Nota: los porcentajes son en peso de la mezcla de blanqueo total (seca) .

Ejemplo 6 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado. La piel de pescado se desescamó sustancialmente raspando la superficie de la piel de pescado con un cepillo de alambra de acero y un cuchillo.

Congelamiento La piel se congeló en un congelador rápido (es decir, se colocó directamente en el congelador a 80°C) . La piel después se sacó del congelador y descongeló a temperatura ambiente por aproximadamente 2 horas .

Descelularización a) El tejido se incubo en una solución de 0.5% de TRITON® X-100 y 0.02% de azida de sodio en Salina Regulada en pH con Fosfato de Dulbecco (DPBS) , agitó a 40 rpm por 2 horas a temperatura ambiente, y la solución se vació. b) El proceso de desescamado se continuó con un cuchillo. El resultado fue un producto sin escamas (sin escamas visibles) . c) El te ido después se colocó en 2 mM de L-Glutamina en Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS) por 10 minutos a 40 rpm y temperatura ambiente, y la solución se vació . d) El tejido se colocó en una solución de 0.5% de Dodecil Sulfato de Sodio (SDS) en HBSS por 1 hora a temperatura ambiente, agitó a 40 rpm, y la solución se vació.

Digestión El tejido se incubó por 18 horas a temperatura ambiente en una solución de digestión de 1 mM de EDTA y 0.05 g/ml de tripsina, a un pH de 8.5.

Blanqueo El tejido se blanqueó con la mezcla de blanqueo C y 2% de de peróxido ácido por 30 minutos.

Lavado El tejido se lavó en un un flujo de agua continuo por 48 horas a 6°C.

Crioprotección La piel de pescado se sumergió en una solución de pre-congelante conteniendo 7% de dextrina, 6% de sacarosa, 6% de rafinosa y 1 mM de EDTA en Salina Regulada en pH con Fosfato de Dulbecco (DPBS) .

Esterilización La bolsa conteniendo la piel de pescado se insertó en una cámara de óxido de etileno y trató con 1 a 5 ciclos de óxido de etileno para esterilizar el andamio.

Ejemplo 7 El producto se hizo como en el Ejemplo 6 aparte del paso de congelamiento después de la remoción de la piel. En lugar del paso de congelamiento el tejido se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente.

Ejemplo 8 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado. La piel de pescado se desescamó raspando la superficie de la piel de pescado con un cepillo de alambre de acero y cuchillo.

Congelamiento La piel se congeló en un congelador rápido a 80°C) . La piel después se sacó del congelador y descongeló a temperatura ambiente por aproximadamente 2 horas.

Descelularización a) El tejido se incubó en una solución de 0.5% de TRITON® X-100 y 0.02% EDTA en Salina Regulada en pH con Fosfato de Dulbecco (DPBS) , agitó a 40 rpm por 24 horas a temperatura ambiente, y la solución se vació. b) El proceso de desescamado continuó con un cuchillo. El resultado fue un producto sin escamas (sin escamas visibles) . c) El tejido se colocó en una solución de 0.5% de Dodecil Sulfato de Sodio (SDS) en HBSS por 1 hora a temperatura ambiente, agitó a 40 rpm, y la solución se vació. d) El tejido después se colocó en 2 mM de L-Glutamina en Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS) por 10 minutos a 40 rpm y temperatura ambiente, y la solución se vació.

Blanqueo El tejido se blanqueó con la mezcla de blanqueo C y 2% de peróxido ácido por 30 minutos.

Lavado „ El tejido se lavó en un un flujo de agua continuo por 48 horas a 6°C.

Crioprotección La piel de pescado se sumergió en una solución de pre-congelante conteniendo 7% de dextrina, 6% de sacarosa, 6% de rafinosa y 1 mM de EDTA in Salina Regulada en pH con Fosfato de Dulbecco (DPBS) .

Ejemplo 9 El producto se hizo como en el Ejemplo 8 aparte del paso de congelamiento después de la remoción de la piel.

En lugar del paso de congelamiento el tejido se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente.

Ejemplo 10 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado. La piel de pescado se desescamó raspando la superficie de la piel de pescado con un cepillo de alambre de acero y cuchillo.

Congelamiento La piel se congeló en un congelador rápido a -80°C. La piel después se sacó del congelador y descongeló a temperatura ambiente por aproximadamente 2 horas.

Descelularización a) El tejido se incubó en una solución de 0.5% TRITON® X-100 y 0.02% de EDTA en Salina Regulada en pH con Fosfato de Dulbecco (DPBS) , agitó a 40 rpm por 48 horas a temperatura ambiente, y la solución se vació. b) El tejido después se colocó en 2 mM de L-Glutamina en Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS) por 10 minutos a 40 rpm y temperatura ambiente, y la solución se vació .

Blangueo El tejido se blanqueó con Kerecis la mezcla de blanqueo C y 2% de peróxido ácido por 30 minutos.

Lavado El tejido se lavó en un un flujo de agua continuo por 12 horas a 6°C.

Ejemplo 11 El producto se hizo como en el Ejemplo 10 aparte del paso de congelamiento después de la remoción de la piel. En lugar del paso de congelamiento el tejido se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente.

Ejemplo 12 Remoción de la piel La piel se removió del filete de pescado. La piel de pescado se desescamó raspando la superficie de la piel de pescado con un cepillo de alambre de acero y cuchillo. El resultado fue un producto sin escamas.

Descelularización y Blanqueo a) El tejido se incubo con la mezcla de blanqueo C y 2% de peróxido ácido por 30 minutos. b) El tejido se colocó en una solución de 0.5% de Dodecil Sulfato de Sodio (SDS) en HBSS por 1 hora a temperatura ambiente, agitó a 40 rpm, y la solución se vació. c) El tejido después se colocó en 2 mM de L-Glutamina en Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS) por 10 minutos a 40 rpm y temperatura ambiente, y la solución se vació.

Lavado El tejido se lavó en un un flujo de agua continuo por 12 horas a 6°C.

Embalaj e La piel de pescado se insertó en una bolsa de membrana TYVEK® y se cerró por sellado por calor.

Ejemplo 13 El producto se hizo como en el Ejemplo 12 aparte del paso de congelamiento después de la remoción de la piel. En lugar del paso de congelamiento el tejido se lavó dos veces por 1 hora a 4°C con salina regulada en pH con fosfato estéril conteniendo 50 mM de ácido ascórbico, 500 ppm de estreptomicina, respectivamente.

Ejemplo 14 El espesor del producto se midió antes y después de la liofilización. El espesor se midió con un calibrador digital. El espesor promedio antes y después de la liofilización fue de 0.29 mm y 0.46 ram, respectivamente. El producto puede rehidratarse (por ejemplo en solución de agua salina) después de la liofilización y antes del uso en una herida. Cuando e producto liofilizado y rehidratado se ensayó, el espesor promedio fue de 0.30 mm. La pérdida de agua (con base en el diferencial en peso antes y después de la liofilización) se calculó como siendo de aproximadamente 80-82% .

Ejemplo 15 La permeabilidad del producto se midió bajo presión atmosférica y al vacío (0.2 attn. ) . La permeabilidad promedio bajo presión atmosférica fue de 3.73 mg de agua por mm cuadrado de muestra por 24 horas. La permeabilidad promedio al vacío fue de 4.93 mg de agua por mm cuadrado de muestra por 180 segundos.

Ejemplo 16 Se realizaron pruebas de biodegradabilidad preliminares incubando las muestras del producto en ya sea agua de sal isotónica o en Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) (Gibco) a 32°C. Después de aproximadamente 6-10 días, las muestras se degradaron en más del 50% (en peso) .

Ejemplo 17 Las pruebas de citotoxicidad preliminares se llevaron a cabo incubando las muestras del producto con células de fibroblasto de prepucio humano (línea de células Hs27, ATCC CRL-1634) en DMEM, glucosa, y 10% de suero de bovino fetal . Las muestras no causaron ningún cambio fenotípico observable, reducción o muerte celular .

Ejemplo 18 El producto se ensayó para determinar la fuerza del rendimiento, la resistencia a la tensión, y la elongación. Las muestras uniformes que midieron 33 mm por 6 mm se analizaron y aseguraron en sujetadores a 0.4 bares de presión en una célula cargada de 500 N. Las muestras se mantuvieron húmedas durante todo el ensayo. Los resultados se muestran en la Tabla 1 siguiente : Tabla 1 Nota: 1 Mpa (Mega Pascal) = 1 N/mm2 El material de andamiaje descrito en la presente es más fuerte y se alarga considerablemente más que los injertos de matriz acelular hechos de vejigas urinarias de ratas, puercos y humanos (véase Dahms y otros, Composition y biomechanical properties of the bladder acellular matrix graft: comparative analysis in rat , pig y human. British Journal of Urology. 1998; 82 (3) :411-419) y ALLODERMDERM® aprobado por la FDA (véase Bottino y otros, Freeze-dried acellular dermal matrix graft: Effects of rehydration on physical, chemical, y mechanical properties. Dental Materials. 2009; 25 (9) : 1109-1115) .

Se intentó probar la resistencia a la tensión de OASIS® (submucosa de intestino delgado de porcino) y MATRISTEM™ (vejiga urinaria de porción), pero las muestras de ambos productos se desintegraron antes de poder hacer la medición.

Se hace constar que con relación a esta fecha, mejor método conocido por la solicitante para llevar a práctica la citada invención, es el que resulta claro de presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. - Un material de andamiaje caracterizado porque comprende piel de pescado descelularizado .

2. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende material de matriz extracelular de la piel de pescado.

3. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque además comprende lípidos de la capa lípida de la piel de pescado.

4. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque está en la forma de un vendaje, aposito, material de sutura y/o material de malla para una herida.

5. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque está sustancialmente sin escamas.

6. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es biocompatible .

7. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende uno o más agentes activos adicionados.

8. - El material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el agente activo adicionado se selecciona del grupo que consiste de antibióticos, antisépticos, agentes antimicrobianos, antivirales, antifúngicos , antiparasitarios, agentes anti-inflamatorios , antioxidantes, fármacos, proteínas, péptidos y sus combinaciones.

9. - Un método para producir un material de andamiaje, caracterizado porque: (a) obtener una piel de pescado; y (b) descelularizar la piel de pescado.

10. - El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque además comprende desescamar, lavar, congelar, blanquear, digerir y/o crioconservar la piel de pescado.

11. - El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la descelularización comprende uno o más tratamientos físicos, uno o más tratamientos químicos, uno o más tratamientos enzimáticos o cualquier combinación de éstos.

12. - El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el tratamiento químico comprende tratar la piel de pescado con uno o más agentes de descelularización seleccionados del grupo que consiste de sales iónicas, bases, ácidos, detergentes, agentes oxidantes, soluciones hipertónicas, agentes de quelación, solventes orgánicos, metionina, cisteína, ácido maleico, polímeros que se unen al ADN, y sus combinaciones.

13. - El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el tratamiento enzimático comprende tratar la piel del pescado con una o más enzimas seleccionadas del grupo que consiste de proteasas, endonucleasas , y exonucleasas .

14. - Un material de andamiaje caracterizado porque se produce utilizando el método de conformidad con la reivindicación 9.

15. - Un método para tratar una herida, caracterizado porque consiste en aplicar el · material de andamiaje de conformidad con la reivindicación 1, a la herida.