MX2010010162A - Nutriente enterico. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con un nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo un compuesto correlacionado con hexosa activa obtenido cultivando los micelios de basidiomicetos. El nutriente entérico de la presente invención es un nutriente entérico que se espera muestre un efecto ventajoso del AHCC en pacientes enfermos con cáncer y una acción para aliviar la inflamación en enfermedades inflamatorias del intestino, y mostrar una acción .para inhibir la inflamación en pacientes que padecen colitis ulcerativa o la enfermedad de Crohn y por lo cual tienen la dificultad con la ingesta oral de nutrientes.

Description

NUTRIENTE ENTÉRICO Campo Técnico La presente invención se relaciona con un nutriente entérico que incluye un compuesto correlacionado con hexosa activa obtenido cultivando los micelios de basidiomicetos, que es beneficioso para pacientes que padecen de enfermedades inflamatorias del intestino o quienes con mayor probabilidad, mostrarán síntomas de estas enfermedades.

Antecedentes de la Técnica Un compuesto correlacionado con hexosa activa es un nombre genérico para composiciones que incluyen a-glucano acetilado y otros polisacáridos obtenidos cultivando los micelios de basidiomicetos en depósitos a gran escala durante un largo período de tiempo y extrayendo el cultivo. Un ejemplo representativo del compuesto correlacionado con hexosa activa es AHCC (marca registrada, el nombre abreviado del compuesto correlacionado con hexosa activa) elaborado y vendido por Amino Up Chemical Co., Ltd. (http : //www. aminoup . co. jp/índex . shtml) . El compuesto correlacionado con hexosa activa (a continuación abreviado como AHCC (marca registrada) ) es una de sustancias cada uno tiene una función inmunoestimulante llamada "modificadores de respuesta biológica principalmente implicados en respuestas inmunitarias" (modificadores de respuesta biológica o BRM) y tiene un potencial para mejorar enfermedades relacionadas con el estilo de vida, como el cáncer. Por lo tanto, el compuesto correlacionado con hexosa activa es uno de los polisacáridos funcionales en los cuales se han elaborado estudios básicos y ensayos clínicos más avanzados . Un alimento natural que contiene AHCC es un alimento cuyos efectos clínicos han sido farmacéuticamente y médicamente confirmados por médicos así como por varios estudios farmacéuticos y clínicos. En términos particulares, la ingesta de alimento que contiene AHCC por pacientes que se someten a tratamiento con un agente contra el cáncer puede reducir reacciones adversas, como la mielosupresión (leucopenia y eritropenia) , diarrea, vómitos, anorexia y alopecia, que se conocen como reacciones adversas de un agente contra el cáncer. En consecuencia, el alimento que contiene AHCC se ha utilizado en alimentos naturales para mejorar el QOL de enfermos por cáncer. Sin embargo, hay una situación en que AHCC es difícil para ser ingerido con eficacia por pacientes que tienen dificultad con la ingesta nutricional oral por motivos del sitio original del cáncer y período perioperatorio . Un nutriente para usarse en el caso donde la ingesta nutricional oral sea difícil de lograr por diversos motivos es un nutriente entérico. El nutriente entérico es un nutriente usado para suministrar directamente una sustancia nutricional en el estómago o intestino en adultos de mayor edad y bebés que generalmente probablemente reducirán ingesta nutricional oral, pacientes con la entrada, oral disminuida, pacientes perioperatorios en restricciones alimenticias, y lo similar. El nutriente entérico debe contener una cantidad suficiente de diversos componentes nutricionales necesarios para humanos, como un carbohidrato, una proteina, una grasa, un mineral, una vitamina, y agua en una manera bien balanceada. Adicionalmente, el nutriente entérico se prepara en una emulsión para la alimentación fácil. En estos ' días, hay necesidades cada vez mayores de obtener un novedoso nutriente entérico obtenido añadiendo deliberadamente, a un nutriente entérico, un componente activo capaz de mejorar afecciones físicas de pacientes que obtienen el nutriente así como nutrición complementaria, que también debería referirse como un nutriente entérico funcional. Por ejemplo, el JP 2006-50935 A (documento de patente 1) describe un nutriente entérico que incluye el hidroproducto de la lisis de quitina y/o el hidroproducto de la lisis de quitosán previsto para tener una acción que mejora en artralgia o efectos preventivos y terapéuticos en decúbito. Adicionalmente, el JP 2007-230998 A (documento de patente 2) describe a un agente de agente antiinflamatorio oral que tiene un efecto de inhibir la producción de TNF-a (factor de necrosis tumoral alfa) en el tracto intestinal, caracterizado por contener un xilooligosacárido ácido que tiene un residuo ácido urónico en la molécula de xilooligosacárido. Documento de patente 1: JP 2006-50935 A Documento de patente 2: JP 2007-230998 A Descripción de la Invención Problema a Solucionarse Mediante la Invención Un objetivo de la presente invención es proporcionar una novedosa forma de alimento que contiene AHCC capaz de suministrar AHCC a pacientes que tengan dificultad con la ingesta nutricional oral.

Medios Para Solucionar el Problema Los inventores de la presente invención han elaborado estudios del desarrollo de un nutriente entérico que contiene AHCC para enfermos de cáncer que tienen la dificultad con la ingesta nutricional oral. Como resultado, los inventores han encontrado que la administración entérica de AHCC o su fracción de polisacárido proporciona un efecto de agente, antiinflamatorio, que se espera para permiten el alivio de diversos síntomas de enfermedades inflamatorias del intestino. Así, los inventores han completado las invenciones respectivas' que siguen: (1) Un nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo un compuesto correlacionado con hexosa activa obtenido cultivando los micelios de basidiomicetos . (2) El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según (1) mayor que, en que los basidiomicetos son una clase o dos o más clases de basidiomicetos seleccionados del grupo que comprende Lentinulla edodes, Grifóla frondosa, Ganoderma lucidum, Ganoderma applanatum y Schizophyllum commune. (3) El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según (1) mayor que, en que el compuesto correlacionado con hexosa activa es el AHCC (marca registrada) o su fracción de polisacárido . (4) El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según (1) o (2) anteriormente para promover la producción de interleucina-10 'y/o interleucina-6. (5) El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según (1) o (2) mayor que, adicionalmente incluyendo una proteina y/o un producto metabolizado de lo mismo, un lipido y un carbohidrato, en el cual las calorías totales del nutriente entérico son 70 a 200kcal/100ml.

Efectos de la Invención El nutriente entérico de la presente invención es un nutriente entérico que se espera para mostrar un efecto ventajoso de AHCC en enfermos de cáncer y una acción de aliviar la inflamación en enfermedades inflamatorias del intestino, y mostrar una acción de inhibir la inflamación en pacientes que padecen de colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. En términos particulares, el nutriente entérico es directamente administrado a un tejido intestinal para mostrar la acción de inhibir la inflamación más con eficacia.

Mejor Modo de Llevar a Cabo la Invención La presente invención proporciona un nutriente entérico a pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo AHCC o su fracción de polisacárido . El nutriente entérico de la presente invención es un nutriente entérico capaz de sólo no proporcionar una acción satisfactoria de AHCC o su fracción de polisacárido en enfermos de cáncer que pero también proporcionan un efecto de aliviar la inflamación en pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino. La acción y el efecto no son atribuidos a componentes nutritivos tipificados por una proteina y lo similar contenida en el nutriente entérico, pero es atribuido a AHCC o su fracción de polisacárido que funciona como un aditivo funcional en el nutriente entérico. AHCC no es un mero extracto de basidiomicetos, pero una mezcla de polisacárido producida cultivando los micelios de basidiomicetos en depósitos líquidos durante un período largo de período de tiempo, por ejemplo, durante 45 a 60 días, y sometiendo el cultivo a una etapa de reacción enzimática, una etapa de esterilización, una etapa de concentración y lo similar. AHCC es estimado incluir -glucano acetilado como un componente principal, y también incluye ß-glucano y otros. Los ejemplos de los basidiomicetos que se pueden usar para la producción de AHCC incluyen Lentinulla edodes (nombre vulgar: seta de shiitake) , Agaricus bisporus (nombre vulgar: seta botón), Grifóla frondosa (nombre vulgar: Gallina de los Bosques), Pholiota nameko (nombre vulgar: seta de nameko) , Pleurotus ostreatus (nombre vulgar: seta ostión), Flammulina velutipes (nombre vulgar: seta de aguja de oro), Ganoderma lucidum (nombre vulgar: lingzhi) , Auricularia aurícula (nombre vulgar: hongo de la mazorca de Judas), Ganoderma applanatum (nombre vulgar: hongo del artista), Coriolus lucidum (cola de guajolote) , Grifóla umbellate (nombre vulgar: poliporo inclusivo), Schizophyllum commune (nombre vulgar: Papada Dividida) y Volvariella volvaceae (nombre vulgar: seta pajiza) . Aquellos basidiomicetos se pueden usar por sí solos o combinados con varias clases de lo mismo. De aquellos, se prefiere usar Lentinulla edodes (nombre vulgar: seta shiitake), Grifóla frondosa (nombre vulgar: Gallina de los Bosques), Ganoderma lucidum (nombre vulgar: lingzhi), Ganoderma applanatum (nombre vulgar: hongo del artista) y Schizophyllum commune (nombre vulgar: Papada dividida) . Los basidiomicetos como se ejemplifican anteriormente, son preferentemente cultivados usando una , materia prima tisular vegetal. La materia prima tisular vegetal se limita de forma no particular mientras el material se deriva de un tejido vegetal, y por ejemplo, el serrín también puede usarse. Sin embargo, los materiales de origen vegetal herbáceos, como salvado de arroz, salvado de trigo, bagazo, rizoma de maíz, paja de arroz, trigo o paja de cebada, y concentrado de soya se prefieren. Aquellos se pueden usar por sí solo o en la combinación adecuada de una pluralidad de clases de lo mismo. Adicionalmente, a fin de que la materia prima tisular vegetal sea fácilmente asimilada por los basidiomicetos, allí puédase usar un extracto obtenido tratando preliminarmente la materia prima tisular vegetal con celulasa, amilasa, proteasa, pectinasa, quitinasa o lo similar, y extrayendo el material tratado con el agua caliente. La materia prima tisular vegetal puede agregarse en el período de cultivo temprano o el período de cultivo tardío, según el estado de cultivo de los basidiomicetos. Adicionalmente, diversas fuentes de carbono o las fuentes de nitrógeno pueden agregarse a la materia prima tisular vegetal. Los ejemplos de las fuentes de carbono incluyen glucosa, sacarosa, maltosa, sacarosa, azúcar suave superior blanco, muscovado, melaza, blackstrap extracto de malta y melaza. Los ejemplos de las fuentes de nitrógeno incluyen el extracto de carne, la peptona, la comida de gluten, la harina de soya, la levadura seca, el extracto de levadura, sulfato de amonio, el tartrato de amonio y la urea. Además, si es necesario, las sales inorgánicas, como una sal de sodio, una sal de magnesio, una sal de manganeso, una sal de hierro, sal de calcio y una sal ácida fosfórica y vitaminas, como inositol, clorhidrato de vitamina Bl, L-asparagina y biotina pueden agregarse. El cultivo de los basidiomicetos que usa el medio anteriormente mencionado puede llevarse a cabo de acuerdo con condiciones generales para cultivar mesófilos, por ejemplo, afecciones a un pH de 2 a 6 y a una temperatura de 10 a 45°C o preferentemente 15 a 30 °C. El periodo de tiempo de cultivo puede ser generalmente aproximadamente 4 a 20 días según la cantidad de los basidiomicetos y la forma de la materia prima tisular vegetal. Los basidiomicetos pueden ser cultivados durante un periodo largo de periodo de tiempo de 40 a 60 días para producir AHCC más excelente. Después del cultivo, una enzima, como celulasa, amilasa, proteasa, pectinasa o quitinasa se agrega al cultivo consiguiente. Una reacción enzimática es llevada a cabo luego en una afección de temperaturas óptima durante 2 a 20 horas para descomponer los micelios de los basidiomicetos . Después de esto, un tratamiento térmico se lleva a cabo para inactivar la reacción enzimática, y un residuo de micelio se elimina del producto tratado por centrifugación o lo similar para recolectar una fracción de sobrenadante. Asi, una fracción que contiene AHCC de interés puede recolectarse. Cualquier AHCC puede emplearse como AHCC usado en la presente invención mientras esto se obtiene seleccionando y cultivando los micelios de los basidiomicetos como ejemplificado anteriormente' y sometiendo el cultivo consiguiente a un tratamiento enzimático. La calidad de AHCC probablemente variará enormemente según la afección de producción. Por lo tanto, a fin de mantener la constante de alta calidad, la afección de cultivo anteriormente mencionada y la recolección y la purificación deben ser estrictamente mantenidas. Actualmente, AHCC de alta calidad es elaborado y vendido establemente y continuamente por Amino Up Chemical Co., Ltd. (http://www.aminoup.co.jp/index.shtml) en conformidad con los patrones según la elaboración de productos farmacéuticos. En la presente invención, se prefiere usar un producto comercializado bajo el AHCC (marca registrada) por Amino Up Chemical Co., Ltd. Adicionalmente, en la presente invención, la fracción de polisacárido de AHCC también puede utili-zarse conjuntamente con AHCC o en vez de AHCC. La "fracción de polisacárido de AHCC" en la presente invención significa una fracción hidrosoluble que incluye polisacáridos derivados de AHCC, donde la fracción incluye una fracción hidrosoluble en caso del sometimiento de AHCC a la cromatografía hidrofóbica, una fracción precipitada obtenida agregando etanol a la fracción hidrosoluble, una fracción no adsorbente en caso del sometimiento de la fracción precipitada a un tratamiento de cromatografía de catión. La cantidad que mezcla de AHCC o su fracción de polisacárido en el nutriente entérico de la presente invención es apropiadamente determinada en el intervalo de 5 a 10 por ciento en peso con respecto a la masa total del nutriente. Adicionalmente, cualquier componente generalmente usado para un nutriente entérico se puede usar como los otros componentes. Los ejemplos de la proteína incluyen caseína o sales de caseína, como sodio de caseína y calcio de caseína; proteínas de animal, como una proteína de leche, una proteína de huevo de pollo, una proteína de peces y una proteína de carne; proteínas de verduras, como una proteína de soya; y un producto, de descomposición de lo mismo y aminoácidos. Aquellos se pueden usar por sí solo o combinados de dos o más clases de lo mismo. El contenido de la proteína es preferentemente 2.0 a 10.0 por ciento en peso o más preferentemente 3.5 a 6.0 por ciento en peso con respecto a la masa del nutriente entérico. Los ejemplos del lipido incluyen aceites vegetales, como aceite de soja, aceite de maíz, aceite de colza, aceite de coco, aceite de cártamo, perilla aceite, aceite de albahaca japonés y aceite de palma; aceites de animal, como manteca de cerdo y carne de res sebo; aceites de pescado; triglicéridos de ácido graso de cadena medios y otros triglicéridos sintéticos; y aceites procesados de lo mismo. Aquellos se pueden usar por si solo o combinados de dos o más clases de lo mismo. En términos particulares, con respecto a ácidos grasos como un componente del lipido, se prefiere para mezclar un ácido de grasa saturada, un monoácido graso insaturado y un ácido graso rico en enlaces no saturados en una manera bien balanceada. Adicionalmente, el contenido del lipido es preferentemente 1.0 a 10.0 por ciento en peso o más preferentemente 2.0 a 8.0 por ciento en peso con respecto a la masa del nutriente entérico. Los ejemplos del carbohidrato incluyen monosacáridos, como glucosa y fructosa; disacáridos, como maltosa y lactosa; oligosacáridos ; y polisacáridos . De aquellos, se prefiere usar la maltodextrina, la dextrina, oligosacáridos o lo similar debido a digestión fácil y absorción y presión osmótica apropiada. Aquellos se pueden usar por si solo o combinados de dos o más clases de lo mismo. Adicionalmente, el contenido del carbohidrato es preferentemente 10.0 a 30 por ciento en peso o más preferentemente 15.0 a 25.0 por ciento en peso con respecto a la masa del nutriente entérico.

A fin de suministrar suficientemente la nutrición necesaria para un cuerpo humano, el nutriente entérico de la presente invención preferentemente contiene, además de los componentes anteriormente mencionados, celulosa, polidextrosa, goma de guar enzimáticamente descompuesta, polisacáridos apenas digestibles y lo similar, fibra dietética, vitaminas, y minerales, por ejemplo. Las calorías totales del nutriente entérico de la presente invención son 70 a 200kcal/100ml o más preferentemente 100 .a 150kcal/100ml, y la cantidad de agua para agregarse es apropiadamente ajustada de modo que las calorías totales se incluyan dentro el intervalo anteriormente mencionado. El nutriente entérico de la presente invención preferentemente tiene una forma de una solución, una emulsión o una jalea suave. En la emulsión, se prefiere usar un emulsionante, como un fosfolípido de soya, un fosfolípido de yema, un monoglicérido, éster de ácido graso de sacarosa, éster de ácido graso de sorbitano, éster de ácido graso de propilenglicol , éster de ácido graso de poliglicerina, o un derivado de monoglicérido, como un monoglicérido ácido succínico o un monoglicérido de ácido cítrico. El contenido del emulsionante es preferentemente 0.05 a 1.0 por ciento en peso o más preferentemente 0.2 a 0.7 por ciento en peso con respecto a la masa total del nutriente entérico. El nutriente entérico de la presente invención puede prepararse de acuerdo con un método convencional. La solución puede prepararse disolviendo componentes que mezclan en agua. Adicionalmente, la emulsión puede prepararse disolviendo componentes que mezclan en agua o preferentemente agua caliente, adicionando aceite y un emulsionante al mismo, y emulsionando la mezcla con un homogeneizador o lo similar. La solución preparada y la emulsión pueden someterse para filtrar la esterilización o herméticamente lleno en una bolsita o una bolsa suave, y luego sometido a la esterilización por calor para producir un nutriente entérico de la presente invención. El nutriente entérico de la presente invención que incluye AHCC o su fracción de polisacárido se espera para ejercer un efecto de aliviar la inflamación en enfermedades inflamatorias del intestino. Como descrito detalladamente en siguientes Ejemplos, un efecto de inducir la producción de interleucina-10 (IL-10) ya que una citocina de agente antiinflamatorio es confirmada en un mamífero al cual AHCC o su fracción de polisacárido se administran entéricamente. Adicionalmente, es confirmado que AHCC tienen un efecto de inducir la producción de interleucina-6 (IL-6) capaz de inhibir la inflamación en un lipopolisacárido (LPS) estado sin estimulo. Más aún, es confirmado que AHCC tienen un efecto de inhibir la producción de interleucina-6, interleucina-2 (IL-2), TNF-OÍ, e interleucina-12 (IL-12) como citocinas proinflamatorias inducidas por el estimulo de LPS y lo similar. Además, se esclarece que AHCC mostró acción para inhibir la inflamación que se extiende en células dendriticas (DC) como sitios de acción. Con base en aquellas acciones fisiológicas, el nutriente entérico de la presente invención que incluye AHCC o su fracción de polisacárido se espera que ejerza un efecto de inhibir la inflamación en una variedad de enfermedades inflamatorias del intestino, como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa. Adicionalmente, el nutriente entérico también es efectivo con su acción de mejorando de agente antiinflamatorio en pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino en una afección postoperativa, una afección de herida, o lo similar. A continuación, la presente invención se describe más detalladamente por vía de ejemplos. Sin embargo, la presente invención no es limitada con estos ejemplos.

Ejemplos Ejemplo 1: 80mL de concentrado de AHCC (Amino Up Chemical Co., Ltd.) se cargan en una columna (5.0cm i.d.x25cm) llena con un gel de tipo poliestireno DIAION HP-20 (Mitsubishi Chemical Corporation) preliminarmente condicionada con agua. La elución se lleva a cabo sucesivamente con 1L cada uno de agua, metanol, y el 50 % de acetona. La fracción hidrica se concentra a presión reducida y luego sometido a la liofilización para proporcionar un sólido color blanco amarillento (18. lg) . A la fracción, 35mL de agua se agregan para la disolución. Luego, 180mL de etanol son disminuidos al mismo bajo agitación vigorosa. Después de centrifugación (3000 revoluciones por minutó, 15 minutos) , el sobrenadante se elimina por decantation. 35mL de agua se agregan al precipitado, seguido por mismos funcionamientos. Al resultado precipitado, una pequeña cantidad de agua se agrega para la disolución, y la solución se somete a la liofilización para proporcionar un sólido marrón ligero (5.87g) . A la fracción, lOOmL de agua se agregan para la disolución, y la solución es cargada en una columna (4.4 m i.d.x17 cm) llena con un gel de tipo intercambio catiónico Dowex 50W x-8 (Dow Chemical Company) . La elución se lleva a cabo sucesivamente cada una con 0.50L de agua y 3M de amoniaco acuoso. La fracción hidrica se concentra a presión reducida y luego sometido a la liofilización para proporcionar un sólido color amarillo pálido (la fracción de polisacárido de AHCC) (4.93g) .

Ejemplo 2: A ratones C57BL/6 de 6 semanas (hembras, n=30) , AHCC (Amino Up Chemical Co., Ltd.) se les administra con un tubo gástrico durante 10 días consecutivos (dosis de AHCC: 20mg/lml/ratón/dia) . Dos horas después de la administración intraperitoneal de LPS a 0. lmg/2mL/ratón durante el día 10, las células dendriticas se separan del bazo y los parches de Peyer de intestino delgado, y las cantidades de producción de IL-10 se cuantifican por un método de PCR en tiempo real usando el Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System. Deberse observar que un grupo de ratones en el cual un nutriente entérico que tiene la misma composición que en el •Ejemplo 2 excepto por estar libre de AHCC, se administra en la misma manera como se describe anteriormente, se prepara como un control. Los resultados mostraron que la cantidad de producción de IL-10 en las células dendriticas separadas del bazo aumentó en 67.1 % comparado con el control. Los resultados también mostraron que la cantidad de producción de IL-10 en las células dendriticas separadas de las placas de Peyer del intestino delgado aumentó en 22.5 % comparado con el control (Figura 1) .

Ej emplo 3 : A ratones C57BL/6 de 8 semanas (hembras, n=10) , AHCC (Amino Up Chemical Co . , Ltd.) se les ' administra con un tubo gástrico durante 15 días consecutivos (dosis de AHCC: 20mg/lml/ratón/dia) . Durante el día 10, Rhodococcus aurantiacus se administra intravenosamente lxl08CFU/0.2mL/ratón. A Rhodococcus aurantiacus se le conoce como un microorganismo que preferentemente se acumula en células de bazo y células hepáticas. Asi, a fin de estudiar afecciones infecciosas en los dos órganos, el bazo y el hígado se recolectan durante el día 1 y día 3 después de la administración, y las cantidades de expresión de IL-6 e IL-10 se cuantifican usando el DuoSet ELISA Development System (R&D) . Los resultados confirmaron que tanto las cantidades de producción de IL-6 (Figuras 2) como las cantidades de producción de IL-10 (Figuras 3) aumentaron en las células del bazo y las células hepáticas. En una enfermedad infecciosa con Rhodococcus aurantiacus, se sabe que tanto IL-10 como IL-6 se inducen como citocinas de agente antiinflamatorio. En consecuencia, los resultados experimentales anteriormente mencionados sugieren que AHCC promueve la producción de IL-10 e IL-6 funcionando como de citocinas de agente antiinflamatorio, es decir AHCC tiene una acción de agente antiinflamatorio.

Ejemplo 4: A ratones C57BL/6 de 8 semanas (hembras, n=10), cada uno de AHCC (Amino Up Chemical Co., Ltd.) o su fracción de polisacárido y ß-glucano como un control se administra con un tubo gástrico durante 15 días consecutivos (dosis de AHCC o su fracción de polisacárido : 20mg/lml/ratón/día ) . Durante el día 3 después de la administración intraperitoneal de LPS a 0. lmg/2mL/ratón durante el día 10, se recolectan el bazo e hígado. Con el uso de lOOOng de ARN total extraído de células dendríticas separadas del bazo y el hígado como una plantilla, el RT-PCR se lleva a cabo usando AMV Reverse Transcriptase XL. (Takara) y Random 9mer. Además, con el uso del ADNc obtenido mediante RT-PCR como una plantilla, las cantidades de expresión de IL-2, IL-6, IL-10 y TNF-OÍ se cuantifican mediante PCR en tiempo real (9500 Real Time Per System, Applied Biosystems) usando los siguientes grupos de series de cebadores específicos para las respectivas citocinas. IL-2:Cebador directo 51 -GGAGCAGCTGTTGATGGACCTAC-3 ' (SEQ ID NO: 1) Cebador inverso 51 -AATCCAGAACATGCCGCAGAG-3 ' (SEQ ID NO: 2) IL-6 ¡Cebador directo 51 -CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTC-3 ' (SEQ ID NO: 3) Cebador inverso 5 ' -GGTTTGCCGAGTAGATCTCAA-3 ' (SEQ ID NO: 4) IL-10:Cebador directo 5 ' -AGCCTTATCGGAAATGATCCAG-3 ' (SEQ ID NO: 5) Cebador inverso 5 ' -TGCTCCACTGCCTTGCTCTTA-3 ' (SEQ ID NO: 6) TNF-a:Cebador directo 5 ' -AGAAGAGGCACTCCCCCAAAAG-3 ' (SEQ ID NO: 7) Cebador inverso 5 ' -GGCTACAGGCTTGTCACTCGAA-3 ' (SEQ ID NO: 8) Las cantidades de expresión se cuantifican usando la GAP-DH como un control, graficando la cantidad de copias en la ordenada y la cantidad de ciclos en la abscisa, y determinando la cantidad de copias convertidas de la cantidad de ciclos. Adicionalmente, la diferencia en la cantidad de ARN total se corrige dividiendo la cantidad de copias de los objetivos respectivos por la cantidad de copias de la GAP-DH. Los resultados confirmaron que AHCC fuertemente inhibió la expresión de IL-2 (Figura 4), IL-6 (Figura 5), y TNF-o¡ (Figura 6) sé indujo por estimulo de LPS. Los resultados también confirmaron que AHCC o su fracción de polisacárido tienen una acción de inducir la producción de IL-10 (Figura 7) .

Ejemplo 5: Las células del bazo y las células hepáticas se recolectan 5 horas después de que la administración de Rhodococcus aurantiacus, y las cantidades de expresión de IL-12 se cuantifican mediante PCR en tiempo real (9500 Real Time Per System, Applied Biosystems) usando el grupo de series de cebadores que sigue. IL-12: Cebador directo 51 -CCAGAGACATGGAGTCATAGGC-3 ' (SEQ ID NO: 9) Cebador inverso 5 ' -CAAGTCCATGTTTCTTTGCACC-3 ' (SEQ ID NO: 10) Los resultados confirmaron que AHCC fuertemente inhibió la expresión de IL-12 inducida por el estimulo de LPS (Figura 8) .

Ejemplo 6: Las células dendríticas separadas de la médula ósea y bazo de ratones normales se colocan en placas plásticas para medir las apariencias externas de células dendríticas en caso de sólo la adición de LPS para lograr una concentración final de 5ug/ml y en caso de la adición de LPS y AHCC (concentración final: 5mg/ml) o ß-glucano (concentración final: lmg/ml) . La tabla muestra los resultados.

Tabla 1 Adicionalmente, el nivel de maduración de aquellas células dendríticas ' también se mide mediante el análisis de Facs usando las cantidades de expresión de CD86, CD40, y una molécula del Complejo Principal de Histocompatibilidad tipo II como indicadores . Los resultados confirmaron que la adición de AHCC dominantemente inhibió las cantidades de expresión de las tres clases anteriormente mencionadas de proteínas inducidas por la adición de LPS, es decir, las células dendriticas no maduraron aún cuando se estimularon con LPS (Figura 9) . Esto significa que AHCC puede inhibir la inflamación inducida por la adición de LPS.

Ejemplo de referencia 1: 70g de dextrina, 8g de sodio de caseína, 12g de AHCC (Amino Up Chemical Co., Ltd.), y una pequeña cantidad cada una de una mezcla de vitamina y sales inorgánicas se disuelve en agua caliente a 50°C. Después de esto, 9g de aceite de maíz y 0.025g de éster de azúcar se agregan para la emulsificación para preparar un nutriente entérico que tiene un volumen total de 1-OOml.

Ejemplo de referencia 2: 18g de dextrina, 4g de un hidroproducto de la lisis de clara de huevo, una mezcla de sal inorgánica, una mezcla de vitamina, y 4g de AHCC (Amino Up Chemical Co., Ltd.) se disuelven en agua de modo que el volumen total sea de 100ml. La solución consiguiente es luego sometida a esterilización por filtración para proporcionar un nutriente entérico líquido. El contenido de AHCC en el nutriente entérico es de 20mg/mL.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 es un gráfico que ilustra la potenciación de la capacidad para producir IL-10 en células dendriticas de ratones que han recibido entéricamente AHCC. Las Figuras '2 son gráficos donde cada uno ilustra la potenciación de la capacidad para producir IL-6 en ratones que han recibido entéricamente AHCC. Las Figuras 3 son gráficos donde cada uno ilustra la potenciación de la capacidad de producción de IL-10 en ratones que han recibido entéricamente AHCC. La Figura 4 es un gráfico que ilustra que AHCC inhibe la producción de IL-2 en ratone's estimulados con LPS. La Figura 5 es un gráfico que ilustra que AHCC inhibe la producción de IL-6 en ratones estimulados con LPS. La Figura 6 es un gráfico que ilustra que AHCC inhibe la producción de TNF-a en ratones estimulados con LPS. . La Figura 7 es un gráfico que ilustra la potenciación de la capacidad para producir IL-10 en ratones estimulados con LPS . La Figura 8 es un gráfico que ilustra que AHCC inhibe la producción de IL-12 en ratones estimulados con LPS. La Figura 9 es un gráfico que ilustra que AHCC inhibe la inducción de la expresión de CD86, CD40, y una molécula del Complejo Principal de Histocompatibilidad tipo II en células dendriticas estimuladas con LPS.

Listado de Secuencias

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo un compuesto correlacionado con hexosa activa obtenido cultivando los micelios de basidiomicetos . 2. El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según la reivindicación 1, donde los basidiomicetos son una clase o dos o más clases de basidiomicetos seleccionados del grupo que comprende Lentinulla edodes, Grifóla frondosa, Ganoderma lucidum, Ganoderma applanatum y Schizophyllum commune. 3. El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según la reivindicación 1, donde el compuesto correlacionado con hexosa activa es AHCC (marca registrada) o su fracción de polisacárido . 4. El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según las reivindicaciones 1 o 2 para promover la producción de interleucina-10 y/o interleucina-6. 5. El nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino según las reivindicaciones 1 o 2, que adicionalmente incluye una proteina y/o un producto metabolizado de la misma, un lipido y un carbohidrato, donde las calorías totales del nutriente entérico son- 70 a 200 kcal/100ml. RESUMEN La presente invención se relaciona con un nutriente entérico para pacientes con enfermedad inflamatoria del intestino, incluyendo un compuesto correlacionado con hexosa activa obtenido cultivando los micelios de basidiomicetos . El nutriente entérico de la presente invención es un nutriente entérico que se espera muestre un efecto ventajoso del AHCC en pacientes enfermos con cáncer y una acción para aliviar la inflamación en enfermedades inflamatorias del intestino, y mostrar una acción. para inhibir la inflamación en pacientes que padecen colitis ulcerativa o la enfermedad de Crohn y por lo cual tienen la dificultad con la ingesta oral de nutrientes. 1/5 Figura 1 Bazo Células Dendríticas Placas de Peyer Células Dendrítica o. * (L O. í U 3 Figura 2 tcoo Bazo Q Control Hígado O AHCC 2/5 Figura 3 1 1 Control Bazo Hígad o AHCC Figura 4 LPS (-) LPS (+) Sólo Solución Sólo Solución célula en existencia p-Glucano célula in existencia p-Glu cano de AHCC ^ de AaHurCC 3/5 Figura 5 LPS (-) LPS (+) Sólo Solución Sólo Solución célula en existencia p-Glucano célula en existencia p-Glu cano de AHCC de AHCC Figura 6 LPS (-) LPS (+) Sólo Solución Sólo Solución célula en existencia p-Glucano célula en existencia p-Glu cano de AHCC de AHCC 5/5 1 LISTADO DE SECUENCIAS <110> Amino Up Chemical Co., Ltd. <120> NUTRIENTE ENERGÉTICO <130> AUF-7100PCT <150> JP2008-070295 <151> 2008-03-18 <160> 10 <170> Patentln versión 3.3 <210> 1 <211> 23 <212> ADN <213> Sequencia Artificial <220> <223> primer ADN <400> 1 ggagcagctg ttgatggacc tac 23 <210> 2 <211> 21 <212> ADN <213> Secuencia Artificial <220> <223> primer ADN <400> 2 aatccagaac atgccgcaga g 21 <210> 3 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN 2 <400> 3 caagaaagac aaagccagag <210> 4 <211> 21 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 4 ggtttgccga gtagatctca a 21 <210> 5 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 5 agccttatcg gaaatgatcc ag <210> 6 <211> 21 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 6 tgctccactg ccttgctctt a <210> 7 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical 3 <220> <223> primer ADN <400> 7 agaagaggca ctcccccaaa <210> 8 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 8 ggctacaggc ttgtcactcg aa <210> 9 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 9 ccagagacat ggagtcatag gc 22 <210> 10 <211> 22 <212> ADN <213> Secuencia Artifical <220> <223> primer ADN <400> 10 caagtccatg tttctttgca ce 22