KR20110005796A

KR20110005796A - 경장영양제

Info

Publication number: KR20110005796A
Application number: KR1020107022213A
Authority: KR
Inventors: 케이코 후지카와
Original assignee: 가부시키가이샤 아미노 압 가가쿠
Priority date: 2008-03-18
Filing date: 2009-03-17
Publication date: 2011-01-19
Also published as: EP2275111A1; CN101977617A; WO2009116507A1; BRPI0911135A2; US20110065629A1; CA2718640A1; AU2009227183A1; EP2275111A4; JPWO2009116507A1; CN101977617B; MX2010010162A

Abstract

　본 발명은, 담자균의 균사체를 배양해서 얻을 수 있는 활성화 당류 관련 화합물을 함유한 염증성 장질환 환자용 경장영양제에 관한 것이다. 본 발명의 경장영양제는, 암환자에 대한 AHCC의 유리한 효과에 더하여, 염증성 장질환의 염증을 완화하는 작용을 나타내며, 경구적으로 영양을 보급하는 것이 곤란한 궤양성 대장염이나 쿠론병에 이환한 환자에 대해서, 그 염증을 억제하는 작용이 기대되는 경장영양제이다.

Description

경장영양제{ENTERAL NUTRIENT}

본 발명은, 담자균의 균사체를 배양해서 얻을 수 있는 활성화 당류 관련 화합물을 포함하며, 염증성 장질환을 앓고 있는, 또는 그러한 증상에 걸리기 쉬운 사람에 대해서 유익한 경장영양제에 관한 것이다.

활성화 당류 관련 화합물(Active Hexose Correlated Compound)은, 담자균의 균사체를 대형 탱크에서 장기간 배양하여 추출한, 아세틸화α-글루칸, 그외의 다당류를 함유한 조성물의 총칭이다. 활성화 당류 관련 화합물의 대표예는, 주식회사 아미노 업 화학(http://www.aminoup.co.jp/index.shtml)에서 제조, 판매되고 Active Hexose Correlated Compound의 약칭을 등록상표로 하는 AHCC이다.

활성화 당류 관련 화합물(이하, 등록상표로서 사용되고 있는 약칭을 사용하여 AHCC라 표시한다.)은, 「면역 반응을 주로 하는 생체 응답 조절 물질」(Biological Response Modifiers, BRM)이라고 하는, 면역 활성 기능을 가진 물질이며, 암을 비롯하여 생활 습관병의 개선에 도움이 된다고 하여, 기초 연구나 임상시험이 가장 진행된 기능성 다당류의 하나이다.

AHCC를 함유한 건강식품은, 수많은 약학적 연구나 의학적 연구에 더하여 의사에 의해서 의학적·약학적으로 임상적인 효과가 확인되어 온 식품이다. 특히, 항암제 치료를 받고 있는 환자에게 AHCC를 함유한 식품을 섭취시키므로서, 항암제의 부작용으로서 알려져 있는 골수 억제(백혈구, 적혈구의 감소), 설사, 구토, 식욕 부진, 탈모 등의 부작용을 경감할 수 있으므로, AHCC를 함유한 식품은, 암환자의 QOL를 높이는 건강식품으로서 이용되어 왔다.

그러나, 암의 발생 부위나 수술 전후를 위해서 경구에 의한 영양물의 섭취가 곤란한 환자에 대해서는, AHCC를 효과적으로 섭취시키는 것이 어려운 상황도 발생하고 있다.

여러가지 사정으로 영양물의 경구 섭취가 곤란한 경우에 사용되는 영양제가, 경장영양제이다. 경장영양제는, 일반적으로 경구 섭취에 의한 영양 섭취량이 적어지기 쉬운 고령자나 유아, 경구 섭취 기능에 장해가 있는 사람, 수술 전후로 식사 제한을 받고 있는 사람 등에 대하여, 직접 위나 장에 영양물을 공급하기 위해서 사용되는 영양제이다. 경장영양제는, 당질, 단백질, 지방, 미네랄, 비타민, 수분 등의 사람에 필요한 여러가지 영양소를 충분한 양을, 균형있게 배합되는 것이 요구되고 또한 접종하기 쉬운 유화 액상으로 조제된다.

최근에는, 경장영양제에 대하여, 영양의 보급 뿐만 아니라, 섭취자의 컨디션을 개선할 수 있는 유효 성분을 적극적으로 첨가한, 기능성경장영양제라고도 할 수 있는 새로운 경장영양제의 요구가 높아지고 있다. 예를 들면 일본특허 공개공보 제2006-50935호 공보(특허 문헌 1)에는, 키친 가수분해물 및/또는 키토산 가수분해물을 함유한, 관절통 개선 작용 또는 욕창의 발생 방지 및 치료 효과를 기대한 경장영양제가 개시되어 있다. 또한, 일본특허 공개공보 제2007-230998호 공보(특허 문헌 2)에는, 키실로올리고당 분자중에 우론산잔기를 가진 산성 키실로올리고당을 함유 하는 것을 특징으로 하는, 장관의 TNF-α 생산과 생성 억제에 효과가 있는 경구성항염증제가 개시되어 있다.

일본특허 공개공보 제2006-050935호 일본특허 공개공보 제2007-230998호

없슴.

본 발명의 목적은, 경구적으로 영양을 보급하는 것이 곤란한 환자에 대해서도 AHCC를 공급할 수 있다, 새로운 형태의 AHCC 함유 식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자 등은, 경구적으로 영양 섭취가 곤란한 암환자 전용의 AHCC 함유경장영양제의 개발을 검토중에, AHCC 또는 그 다당류획분을 경장적으로 투여하므로서, 여러가지 염증성 장질환의 증상을 완화할 수 있다고 기대되는 염증 억제 효과가 있는 것을 발견하여, 아래와 같은 발명을 완성하였다.

(1) 담자균의 균사체를 배양하여 얻을 수 있는 활성화 당류 관련 화합물을 함유한 염증성 장질환 환자용 경장영양제.

(2) 담자균이, 렌티뉼라 에도데스(Lentinulla edodes), 그리폴라 후론도사(Grifola frondosa), 가노데르마 루시둠(Ganoderma lucidum), 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum) 및 시조필럼 코뮤네(Schizophyllum commune)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 담자균인 상기 (1)에 기재된 염증성 장질환 환자용 경장영양제.

(3) 활성화 당류 관련 화합물이 AHCC(등록상표) 또는 그 다당류획분인 상기 (1)에 기재한 염증성 장질환 환자용 경장영양제.

(4) 인터류킨 10 및/또는 인터류킨 6의 생산 생성을 촉진시키기 위한 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 염증성 장질환 환자용 경장영양제.

(5) 또한 단백질 및/또는 그 분해물, 지방질, 당질을 포함하고, 총칼로리가 70~200 kcal/100 ml인 상기(1) 또는(2)에 기재된 염증성 장질환 환자용 경장영양제.

본 발명의 경장영양제는, 암환자에 대한 AHCC의 유리한 효과에 더하여, 염증성 장질환의 염증을 완화하는 작용을 나타내고, 궤양성 대장염이나 크론병에 이환된 환자에 대해서, 그 염증을 억제하는 작용이 기대되는 경장영양제이다. 특히, 장조직에 직접 투여되므로서, 보다 효과적으로 염증 억제 작용이 발휘된다.

도 1은 AHCC를 경장투여된 마우스 수지상 세포에 있어서의 IL-10의 생산 생성능의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 2는 AHCC를 경장투여된 마우스에 있어서의 IL-6의 생산 생성능의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 3은 AHCC를 경장투여된 마우스에 있어서의 IL-10의 생산 생성능의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 4는 마우스에 대한 LPS 자극에 의한 IL-2의 생산 생성을, AHCC가 억제하는 것을 나타내는 그래프이다.
도 5는 마우스에 대한 LPS 자극에 의한 IL-6의 생산 생성을, AHCC가 억제하는 것을 나타내는 그래프이다.
도 6은 마우스에 대한 LPS 자극에 의한 TNF-α의 생산 생성을, AHCC가 억제하는 것을 나타내는 그래프이다.
도 7은 마우스에 대한 LPS 자극에 있어서, IL-10의 생산 생성능의 항진을 나타내는 그래프이다.
도 8은 마우스에 대한 LPS 자극에 의한 IL-12의 생산 생성을, AHCC가 억제하는 것을 나타내는 그래프이다.
도 9는 수지상 세포에의 LPS 자극에 의한 CD86, CD40 및 MHC 클래스 2 분자의 발현 유도를 AHCC가 억제하는 것을 나타내는 그래프이다.

본 발명은, AHCC 또는 그 다당류획분을 함유한, 염증성 장질환 환자용 경장영양제를 제공한다. 본 발명의 경장영양제는, 단백질 등으로 대표되는 영양소로서가 아니고, 기능적 부가 성분으로서 AHCC 또는 그 다당류획분을 포함하므로서, 암환자에 대한 AHCC 또는 그 다당류획분의 양호한 작용 뿐만 아니라, 염증성 장질환 환자에 대해서 그 염증을 완화하는 효과를 줄 수 있는, 경장영양제이다.

AHCC는, 단순한 담자균으로부터의 추출물이 아니고, 담자균의 균사체를 액체 탱크내에서 장기간, 예를 들면 45~60일간 배양하고, 효소 반응, 멸균, 농축등의 공정을 거쳐서 제조되는 다당류 혼합물이다. 그 주요 성분은 아세틸화α-글루칸이라고 생각되고 있으나, β글루칸 그 외도 포함된다.

AHCC의 제조에 사용 가능한 담자균은, 예를 들면, 렌티뉼라 에도데스(Lentinulla edodes, 일반명 표고버섯), 아가리쿠스 비스포러스(Agaricus bisporus, 일반명 머시룸), 그리폴라 후론도사(Grifola frondosa, 일반명 마이타케), 포리오타 나메코(Pholiota nameko, 일반명 나도팽나무버섯), 프류로투스 오스트레아투스(Pleurotus ostreatus, 일반명 느타리), 플람무리나 벨루티페스(Flammulina velutipes, 일반명 팽나무버섯), 가노데르마 루시둠(Ganoderma lucidum, 일반명 영지), 아우리컬라리아 아우리컬라(Auricularia auricula, 일반명 목이버섯), 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum, 일반명 말굽버섯), 코리올러스루시둠(Corioluslucidum, 카와라타케), 글리폴라 언벨랏테(Grifola umbellate, 일반명 쵸레이마이타케), 시조필럼 콤뮤네(Schizophyllum commune, 일반명 스에히로타케), 보르바리에라 보르바세아에(Volvariella volvaceae, 일반명 후크로타케) 등을 들 수 있다.

이러한 담자균은, 단독으로, 또는 여러종류를 조합해서 사용할 수 있다. 이들 중에서도, 렌티뉼러 에도데스(Lentinulla edodes, 일반명 표고버섯), 글리폴라 프론도사(Grifola frondosa, 일반명 마이타케), 가노데르마 루시둠(Ganoderma lucidum, 일반명 영지), 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum, 일반명 코후키사르노코시카케), 시조필럼 콤뮤네(Schizophyllum commune, 일반명 스에히로타케)의 사용이 바람직하다.

위에 예시한 바와 같은 담자균의 배양은, 식물 조직 원료를 사용하여 실시하는 것이 바람직하다. 식물 조직 원료는, 식물 조직에 유래하는 것이면 특히 제한되지 않고, 톱밥 등을 사용하는 것도 가능하지만, 초본류 식물 유래의 재료, 예를 들면, 쌀겨, 밀기울, 바가스, 옥수수의 뿌리와 줄기, 볏짚, 밀짚, 대두 등이 바람직하다. 이들은 단독으로 사용해도 되고, 또는 복수를 적당히 조합해서 사용해도 된다. 또한, 담자균에 의해서 자화(資化) 되기 쉽게 미리 식물 조직 원료를 셀룰라아제, 아미라제, 프로테아제, 펙티나아제, 키티나아제 등으로 처리하고, 그것을 열수 추출한 엑기스를 이용해도 된다. 식물 조직 원료는 담자균의 배양 상태에 따라 배양 초기부터 첨가해도 되고, 배양 후기에 가해도 된다.

또한, 식물 조직 원료에, 각종 탄소원 또는 질소원을 첨가해도 된다. 탄소원의 예로서는, 포도당, 자당류, 말토스, 자당, 상백당, 흑설당, 당밀, 폐당밀, 맥아 엑기스 등을 들 수 있다. 질소원의 예로서는, 고기 엑기스, 펩톤, 글루텐밀, 대두분, 건조 효모, 효모 엑기스, 황산암모늄, 주석산 암모늄염, 요소 등을 들 수 있다. 그 외에, 필요에 따라서, 나트륨염, 마그네슘염, 망간염, 철염, 칼슘염, 인산염 등의 무기 염류나, 이노시톨, 비타민 B1염산염, L-아스파라긴, 비오틴 등의 비타민류를 첨가해도 된다.

상기 배양지를 사용한 담자균의 배양은, 통상 중온균(中溫菌)의 배양 조건에 준하고, 예를 들면 pH2~6, 10~45℃, 바람직하게는 15~30℃의 온도에서 하면 된다. 배양 시간은, 균의 양이나 식물 조직 원료의 형태에 따라서, 통상은 4~20일간 정도라면 되지만, 40~60일간의 장기간에 걸쳐서 배양하므로서, 보다 뛰어난 AHCC를 제조할 수 있다.

배양 후는, 배양물에 셀룰라아제, 아밀라제, 프로테아제, 펙티나아제, 키티나제 등의 효소를 첨가해서 최적온도 조건에서 2~20시간 반응을 하여 균체를 파쇄 하고, 그 후, 가열 처리하여 효소 반응을 실활시켜서, 그 처리물로부터 원심분리 등에 의해서 균사체 찌꺼기를 제거하고, 상등획분을 회수하므로서, 목적하는 AHCC를 함유한 획분을 회수할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 AHCC는, 상기에 예시되는 균체를 선택하여 배양하고, 효소 처리한 것이라면 어느 것이나 사용 가능하지만, AHCC의 품질은 그 제조 조건에 따라 크게 변화하기 쉽고, 높은 품질을 일정하게 유지하려면, 상기 배양 조건과 회수 정제의 관리를 엄격하게 실시하는 것이 필요하다. 현재, 주식회사 아미노 업 화학(http://www.aminoup.co.jp/index.shtml)은, 의약품의 제조에 준한 규격에 따라, 고품질의 AHCC를 안정적이고 계속적으로 제조 판매를 하고 있다. 본 발명에서는, 주식회사 아미노 업 화학으로부터 AHCC(등록상표)로서 시판되고 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다.

또한 본 발명은, AHCC의 다당류획분도, AHCC와 함께 또는 AHCC를 대신하여 이용할 수가 있다. 본 발명에 있어서의 「AHCC의 다당류획분」은, AHCC에 대해서 소수성 크로마토그래피를 실시했을 때의 수용성획분, 해당 수용성획분에 에탄올을 첨가함으로서 얻을 수 있는 침전획분, 또한 해당 침전획분을 양이온 크로마토그래피 처리했을 때의 비흡착획분 등을 포함하는, AHCC에 유래하는 다당류를 함유한 수용성획분을 의미한다.

본 발명의 경장영양제에 있어서의 AHCC 또는 그 다당류획분의 배합량은, 영양제 전체질량 당 5~10 질량%의 범위에서 적당히 설정하면 된다. 또한 그 외의 성분은, 일반적인 경장영양제에 사용되는 것을 임의로 사용할 수 있다.

예를 들면, 단백질로서는, 카제인 또는 카제인나트륨, 카제인칼슘 등의 카제인염, 유단백질, 계란 단백질, 물고기 단백질, 고기 단백질 등의 동물성 단백질, 대두 단백질 등의 식물성 단백질, 및 그들의 분해물, 아미노산 등을 들 수 있다. 이것들은 1종류만을 사용해도 되고, 2종류 이상을 조합해 사용해도 된다. 단백질의 함유량은, 경장영양제질량 당 2.0~10.0 질량%인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 3.5~6.0 질량%이다.

지방질로서는, 예를 들면, 콩기름, 옥수수기름, 유채유, 야자유, 사플라워유, 들깨기름, 차조기유, 팜유 등의 식물유, 라드, 우지 등의 동물유, 어유, 중쇄지방산 트리글리세리드 및 그 외의 합성 트리글리세리드, 그리고 이들의 가공 유지를 들 수 있다. 이들은 1종류만을 사용해도 되고, 2종류 이상을 조합해서 사용해도 된다. 특히, 지질의 구성 성분인 지방산은, 포화 지방산, 단가 불포화 지방산, 다가 불포화 지방산을 균형있게 배합하는 것이 바람직하다. 또한, 지방질의 함유량은, 경장영양제 질량 당 1.0~10.0 질량%인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 2.0~8.0 질량%이다.

당류로서는, 포도당, 과당 등의 단당류, 말토스, 유당 등의 이당류, 소당류 및 다당류를 들 수 있다. 그 중에서도, 이소화 흡수성 및 적정한 침투압의 이유에서 말토 덱스트린, 덱스트린, 올리고당 등을 사용하는 것이 바람직하다. 이것들은 1종류만을 사용해도 되고, 2종류 이상을 조합해서 사용해도 된다. 또한, 당질의 함유량은, 경장영양제질량 당 10.0~30 질량%인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 15.0~25.0 질량%이다.

본 발명의 경장영양제는, 인체에 필요한 영양을 충분히 보급하기 위해서, 상기 이외의 성분 외에, 예를 들면 셀룰로스, 폴리덱스트로스, 구아껌 효소 분해물, 난소화성 다당류 등, 식물 섬유, 비타민류, 미네랄류를 배합하는 것이 바람직하다.

본 발명의 경장영양제는, 총칼로리가 70~200 kcal/100 ml, 보다 바람직하게는 100~150 kcal/100 ml이며, 총칼로리가 상기 범위가 되도록 물의 첨가량을 적당히 조정한다.

본 발명의 경장영양제의 바람직한 형태는, 액제, 유화 액제 내지 연젤리이다. 유화 액제에는, 예를 들면 대두 인지질, 난황 인지질, 모노글리세리드, 자당 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르, 폴리 글리세린 지방산 에스테르, 모노글리세리드의 코하크산 모노글리세리드 또는 구연산 에스테르 등의 모노글리세리드 유도체 등의 유화제를 사용하는 것이 바람직하다. 유화제의 함유량은, 전체 경장영양제 질량당 0.05~1.0 질량%인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 0.2~0.7 질량%이다.

본 발명의 경장영양제는, 통상의 방법에 따라 조제할 수 있다. 액제는, 배합 성분을 물에 용해하면 된다. 또한 유화제는, 배합 성분을 물, 바람직하게는 온수에 용해시켜서, 유분과 유화제를 첨가하여 호모지나이저 등을 사용해서 유화시켜서 조제할 수 있다. 조제된 액제나 유화제는 필터 멸균, 또는 파우치나 소프트백에 충전 밀봉한 후, 가열살균해서 제조할 수 있다.

AHCC 또는 그 다당류획분을 포함한 본 발명의 경장영양제에는, 염증성 장질환에 대해서 염증을 완화하는 효과를 거두는 것이 기대된다. 다음 실시예에 상세하게 설명하는 바와 같이, AHCC 또는 그 다당류획분을 경장적으로 투여된 포유동물에 있어서, 항염증 사이토카인인 인터루킨 10(IL-10)의 생산 생성 유도 효과가 확인되었다.

또한, AHCC에는, 리포 다당(Lipopolysaccharide, LPS) 자극이 없는 상태에서 염증 억제에 작용하는 인터루킨 6(IL-6)의 생산 생성을 유도하는 효과도 확인되었다. 한편, AHCC는, LPS 자극등을 받았을 때에 유도되는 염증 활성화 사이토카인인 인터루킨 6, 인터루킨 2(IL-2), TNF-α, 인터루킨 12(IL-12)의 생산 생성을 억제하는 효과도 있는 것이 확인되었다. 또한, AHCC는 수지상 세포(DC)를 작용점으로서 항염증 확대 작용도 나타내는 것이 밝혀졌다.

이러한 생리 작용으로부터, AHCC 또는 그 다당류획분을 함유한 본 발명의 경장영양제는, 여러 가지 염증성 장질환, 예를 들면 크론병이나 궤양성 대장염 등의 염증을 억제하는 효과를 거두는 것으로 기대된다. 또한, 수술후, 창상(創傷)시 등의 병의 용태에 있어서의 염증성 장질환 환자에 대한 항염증 개선 작용으로서의 경장영양제로서도 유효하다.

이하, 실시예를 나타내어 본 발명을 더욱 자세하게 설명하지만, 본 발명은 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1：

AHCC((주) 아미노 업 화학) 농축액 80 mL를, 미리 물로 순화 시킨 폴리스틸렌형 겔 DIAION HP-20(Mitsubishi Chemical Corporation)을 충전한 컬럼(5.0cm i.d.×25 cm)에 차지하였다. 각 1 L의 물, 메타놀, 50%아세톤으로 차례로 용출시켰다. 이 물획분을 감압 하에서 농축하여, 동결건조하여 황백색 개체를 얻었다(18.1 g). 이 획분에 35 mL의 물을 첨가하여 용해시킨 후, 격렬하게 교반 하면서 180 mL의 에탄올을 적하하였다. 원심(3000 rpm, 15 min) 후, 상층을 따라 제거하였다. 침전에 35 mL의 물을 첨가하여 같은 조작을 하여, 얻은 침전에 소량의 물을 첨가하여 용해시켜서, 동결건조하여 담갈색의 개체를 얻었다(5.87 g). 이 획분에 100 mL의 물을 첨가하여 용해시키고, 양이온 교환형 겔, Dowex 50W X-8(The Dow Chemical Company)을 충전한 컬럼(4.4cm i.d.×17 cm)에 차지하였다. 각 0.50 L의 물 및 3 M 암모니아수로 차례로 용출시켰다. 이 물획분을 감압 하에서 농축 후, 동결건조하여 담황색 고체(AHCC의 다당류획분)를 얻었다(4.93 g).

실시예 2：

6주령의 C57BL/6 마우스(암컷, n=30)에, AHCC((주) 아미노 업 화학)를, 위존데를 사용해서 10일간 계속해서 투여했다(AHCC의 투여량은, 20 mg/1ml/마리/일). 10일째에 LPS를 0.1mg/2mL/마리 복강내 투여하고 나서 2시간 후에 비장 및 소장 파이 엘판에서 수지상 세포를 분리하여, IL-10의 생산 생성량을, Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System을 사용한 리얼타임 PCR법에 의해서 측정하였다. 또한 컨트롤로서 AHCC를 포함하지 않는 것 외에는 실시예 2와 동일 조성의 경장영양제를, 상기와 같게 하여 투여한 마우스군을 준비하였다.

그 결과, 비장으로부터 분리한 수지상 세포에 있어서의 IL-10의 생산 생성량은, 컨트롤에 비해 67.1% 상승하고 있었다. 또한, 소장 파이 엘판으로부터 분리한 수지상 세포에 있어서의 IL-10의 생산 생성량은, 컨트롤에 비해 22.5%상승하고 있었다(도 1).

실시예 3：

8주령의 C57BL/6 마우스(암컷, n=10)에, AHCC((주) 아미노 업 화학)를, 위 존데를 사용해서 15일간 계속해서 투여하였다(AHCC의 투여량은, 20 mg/1ml/마리/일). 10일째에 1×10⁸CFU/0.2mL/마리의 로도코커스균(Rhodococcus aurantiacus)을 경정맥 투여하였다. 로도코커스균은 비장 세포와 간장 세포에 많이 집적하는 미생물로서 알려져 있으므로, 두 개의 장기에서 감염 상태를 검토하기 위해서, 투여로부터 1일째 및 3일째에 비장 및 간장을 채취하여, DuoSet ELISA Development System(R＆D사)를 사용해서 IL-6와 IL-10의 발현량을 측정하였다.

그 결과, 비장 세포 및 간장 세포에 있어서, IL-6(도 2), IL-10(도 3)의 생산 생성량이 모두 상승하고 있는 것이 확인되었다. 로도코커스균에 의한 감염증에 있어서는, IL-10과 IL-6이 모두 염증 억제성 사이토카인으로서 유도되는 것이 알려져 있으므로, 상기 실험 결과는, 염증 억제성 사이토카인인 IL-10와 IL-6의 생산 생성을 AHCC가 촉진하는, 즉 AHCC가 염증을 억제하는 작용이 있음을 나타내는 것이라고 할 수 있다.

실시예 4：

8주령의 C57BL/6 마우스(암컷, n=10)에, AHCC((주) 아미노 업 화학) 또는 그 다당류획분, 대조로서 β글루칸 각각을, 위 존데를 이용해서 15일간 계속해서 투여하였다(AHCC, 다당류획분의 투여량은, 20mg/1ml/마리/일). 10일째에 LPS를 0.1mg/2mL/마리로 복강내 투여하고 나서 3일째에 비장 및 간장을 채취하였다.

비장 및 간장으로부터 분리한 수지상 세포에서 추출한 전체 RNA 1000ng을 주형으로 해서, AMV Reverse TranscriptaseXL(Takara사)와 Random 9 mer를 사용하여 RT-PCR을 실시하였다. 또한 RT-PCR에 의해서 얻은 cDNA를 주형으로 해서, IL-2, IL-6, IL-10, 및 TNF-α의 발현량을, 각각 특이적인 하기 프라이머 세트를 사용한 리얼타임 PCR(9500 Real Time Pcr System, Applied Biosystems사)을 실시하여 측정하였다.

IL-2：포워드 5＇-GGAGCAGCTGTTGATGGACCTAC-3＇(서열 번호 1)

리버스 5＇-AATCCAGAACATGCCGCAGAG-3＇　(서열 번호 2)

IL-6：포워드 5＇-CAAGAAAGACAAAGCCAGAGTC-3＇　(서열 번호 3)

리버스 5＇-GGTTTGCCGAGTAGATCTCAA-3＇　(서열 번호 4)

IL-10：포워드 5＇-AGCCTTATCGGAAATGATCCAG-3＇(서열 번호 5)

리버스 5＇-TGCTCCACTGCCTTGCTCTTA-3＇　(서열 번호 6)

TNF-α：포워드 5＇-AGAAGAGGCACTCCCCCAAAAG-3＇(배열 번호 7)

리버스 5＇-GGCTACAGGCTTGTCACTCGAA3-＇(배열 번호 8)

GAP-DH를 컨트롤로 하여, 세로축에 카피수를, 횡축에 사이클수를 취하고, 사이클수로부터 카피수를 환산하여, 발현량을 정량화하였다. 또한, 전체 RNA량의 차이는, GAP-DH의 카피수로 각 대상의 카피수를 나누는 것으로 보정하였다.

그 결과, AHCC는, LPS 자극에 의한 IL-2(도 4), IL-6(도 5), 및 TNF-α(도 6)의 발현을 강하게 억제하는 것이 확인되었다. 또한, AHCC와 그 다당류획분은, IL-10(도 7)의 생산 생성을 유도하는 작용을 한다는 것이 확인되었다.

실시예 5：

로도코커스균을 투여하고 5시간 후에 비장 세포 및 간장 세포를 채취하여, IL-12의 발현량을, 아래와 같은 프라이머 세트를 사용한 리얼타임 PCR(9500 Real Time Pcr System, Applied Biosystems사)을 실시하여 측정하였다.

IL-12：포워드 5＇-CCAGAGACATGGAGTCATAGGC-3＇ (서열 번호 9)

리버스 5＇-CAAGTCCATGTTTCTTTGCACC-3＇ (서열 번호 10)

그 결과, AHCC는, LPS 자극에 의한 IL-12의 발현을 강하게 억제하는 것이 확인되었다(도 8).

실시예 6：

정상 마우스의 골수 및 비장으로부터 분리한 수지상 세포를 플라스틱 샬레에 놓고, LPS만을 최종 농도가 5μg/ml가 되도록 첨가했을 때, 및 LPS와 AHCC(최종 농도 5 mg/ml) 또는 β글루칸(최종 농도 1 mg/ml)을 첨가했을 때의 수지상 세포의 외관 관찰을 실시하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.

	정상시			LPS 자극
	(-)	AHCC	β글루칸	(-)	AHCC	β글루칸
세포의 형태	구형	구형	구형	변형	구형	변형
극성	+	±	-	+++	-	++
집적도	-	++	±	±	++	+

또한, 그들 수지상 세포의 성숙도에 대해서도, CD86, CD40 및 MHC 클래스 2 분자의 발현량을 지표로 한 Facs 해석에 의해서 측정하였다.

그 결과, AHCC를 첨가하므로써, LPS 첨가에 의한 상기 3 종류의 단백질의 발현량이 우위로 억제되는, 즉 수지상 세포가 LPS의 자극을 받아도 성숙하지 않는 것이 확인되었다(도 9). 이것은, LPS 첨가에 의한 염증을 AHCC가 억제할 수 있음을 의미한다.

참고예 1：

덱스트린 70 g, 카제인 나트륨 8 g, AHCC((주) 아미노 업 화학) 12 g, 비타민 혼합물과 무기 염류 모두 소량을 50℃의 뜨거운 물에 용해시킨 후, 콘유 9 g 및 0.025 g 슈가 에스테르를 첨가해서 유화시켜 총량이 100 ml가 되는 경장영양제를 조제하였다.

참고예 2：

덱스트린 18 g, 난백 가수분해물 4 g, 무기 염류 혼합물, 비타민 혼합물, AHCC((주) 아미노 업 화학) 4 g을 물에 용해해서 총량을 100 ml로 한 다음, 필터 멸균하여, 액상 경장영양제를 얻었다. 이 경장영양제에 있어서의 AHCC의 함유량은 20 mg/mL이다.

<110> Amino Up Chemical Co., Ltd. <120> Enteral nutrition <130> AUF-7100PCT <150> JP2008-070295 <151> 2008-03-18 <160> 10 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 1 ggagcagctg ttgatggacc tac 23 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 2 aatccagaac atgccgcaga g 21 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 3 caagaaagac aaagccagag tc 22 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 4 ggtttgccga gtagatctca a 21 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 5 agccttatcg gaaatgatcc ag 22 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 6 tgctccactg ccttgctctt a 21 <210> 7 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 7 agaagaggca ctcccccaaa ag 22 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 8 ggctacaggc ttgtcactcg aa 22 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 9 ccagagacat ggagtcatag gc 22 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer DNA <400> 10 caagtccatg tttctttgca cc 22

Claims

담자균의 균사체를 배양해서 얻을 수 있는 활성화 당류 관련 화합물을 함유한 염증성 장질환 환자용 경장영양제.
제1항에 있어서,　담자균이, 렌티뉼라 에도데스(Lentinulla edodes), 그리폴라 후론도사(Grifola frondosa), 가노데르마 루시둠(Ganoderma lucidum), 가노데르마 아플라나툼(Ganoderma applanatum) 및 시조필럼 코뮤네(Schizophyllum commune)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류 또는 2종류 이상의 담자균인 염증성 장질환 환자용 경장영양제.
제1항에 있어서,　활성화 당류 관련 화합물이 AHCC(등록상표) 또는 그 다당류획분인 염증성 장질환 환자용 경장영양제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 인터루킨 10 및/또는 인터루킨 6의 생산 생성(産生)을 촉진시키기 위한 염증성 장질환 환자용 경장영양제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 단백질 및/또는 그 분해물, 지방질, 당질을 추가로 포함하여, 총칼로리가 70~200 kcal/100 ml인 염증성 장질환 환자용 경장영양제.