MX2008015181A - Agente viral contra la fiebre aftosa para animal perteneciente a la familia de los suidae u ovinos, y metodo para la prevencion o el tratamiento de la fiebre aftosa en animales que pertenecen a la familia de los suidae u ovinos. - Google Patents
Agente viral contra la fiebre aftosa para animal perteneciente a la familia de los suidae u ovinos, y metodo para la prevencion o el tratamiento de la fiebre aftosa en animales que pertenecen a la familia de los suidae u ovinos.Info
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Abstract
Se divulga un agente viral contra la fiebre aftosa para un animal perteneciente a la Familia de los Suidae, que consta de 3-oxo-3, 4-dihidro-2-pirazinacarboxamida o una sal de la misma. El agente es extremadamente útil para la prevención o tratamiento de la fiebre aftosa en un animal perteneciente a la Familia de los Suidae. También se divulga un agente viral contra la fiebre aftosa para oveja, que consta de 3-oxo-3,4-dihidro-2-pirazinacarbo xamida o una sal de la misma. El agente es extremadamente útil para la prevención, terapia o similares de la fiebre aftosa en ovejas.
Description
AGENTE VIRAL CONTRA LA FIEBRE AFTOSA PARA ANIMAL PERTENECIENTE A LA FAMILIA DE LOS SUIDAE U OVINOS, Y MÉTODO PARA LA PREVENCIÓN O EL TRATAMIENTO DE LA FIEBRE AFTOSA EN ANIMALES QUE PERTENECEN A LA FAMILIA DE LOS SUIDAE U OVINOS La presente invención trata sobre un agente viral contra la fiebre aftosa en un animal que pertenece a la Familia de los Suidae (Porcinos) u ovinos (en lo sucesivo denominados como "Animales porcinos, etc."), que contiene 3-oxo-3, 4-dihidro-2-pirazinacarboxamida (en lo sucesivo denominada como T-1105) o una sal de la misma; un pienso para animales porcinos, etc., que contiene T-1105 o una sal de la misma; y un método de tratamiento que incluye un método preventivo y terapéutico para la fiebre aftosa de los animales porcinos, etc. ANTECEDENTES La fiebre aftosa es una de las enfermedades transmisibles más fuertes entre los animales domésticos, es decir, los animales artiodáctilos que incluyen un bovino, un cerdo y una oveja, etc. Además, esta enfermedad causa trastornos del desarrollo, movimiento y similares en animales domésticos, disminuyendo rápidamente su valor comercial, y es una enfermedad infecciosa específica en animales domésticos y no infecciosa para los humanos. En cuanto al negocio mundial de la cría de ganado, desde el punto de vista tanto de los países exportadores como de los países importadores, la
fiebre aftosa está posicionada como la enfermedad animal más importante que debe ser alertada. La fiebre aftosa también es una enfermedad infecciosa internacional y en la actualidad su preponderancia se encuentra en todo el mundo incluyendo Asia, África, y Sudamérica. En Japón, el brote ocurrió en el año 2000. Una vez que se presenta la enfermedad, surgen muchas dificultades al prevenir su propagación debido a que el virus es altamente transmisible. La aparición de la enfermedad implica un gran golpe para el negocio de la cría de ganado. Por lo tanto, se invierte mucho esfuerzo en el tratamiento incluyendo la prevención y terapia de la fiebre aftosa en todas partes del mundo . Las contramedidas para controlar esta enfermedad son restricciones estrictas de importación, control de higiene, cuarentena, y matanza de los animales afectados. Cuando hay un brote, se conduce un programa de vacunación usando la vacuna inactivada como contramedida preventiva a nivel nacional o regional, o en los alrededores del área de aparición del brote. Sin embargo, esta enfermedad es difícil de detectar en la etapa temprana, por lo que se propaga de manera tan rápida que la vacunación no puede mantener el paso. Además, como el virus es altamente mutante, la vacunación sola no puede prevenir la infección en su totalidad. Es decir, en este momento, no hay un método terapéutico excelente para
los animales porcinos, etc., artiodáctilos . El panfleto WO 00/10569 describe que T-1105 tiene un excelente efecto antigripal (Documento de Patente 1) . Sin embargo, no divulga de manera específica un agente viral contra la fiebre aftosa para los animales porcinos, etc., ni un método de tratamiento que incluya un método de prevención o terapéutico para la fiebre aftosa de animales porcinos, etc. Documento de Patente 1: panfleto WO 00/10569 DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN Ha existido una gran necesidad de obtener un agente viral contra la fiebre aftosa de animales porcinos, etc., y un método de tratamiento que incluya un método preventivo o terapéutico para la fiebre aftosa de los animales porcinos, etc . Bajo dichas circunstancias, el presente inventor, como resultado de una prueba minuciosa, descubrió que un agente viral contra la fiebre aftosa que contiene T-1105 o una sal de la misma tiene un potente efecto terapéutico sobre la fiebre aftosa en un animal porcino, y es útil para el tratamiento incluyendo la terapia de la fiebre aftosa del animal porcino; y de esta manera, se completa la invención. Además, el presente inventor ha descubierto que el agente viral contra la fiebre aftosa que contiene T-1105 o una sal de la misma tiene un fuerte efecto terapéutico en la fiebre aftosa en una oveja, y es útil para el tratamiento que
incluye terapia de la fiebre aftosa en la oveja; y así, se ha concluido la invención. El agente viral contra la fiebre aftosa que contiene T-1105 o una sal de la misma es útil para el tratamiento que incluye la prevención y terapia de la fiebre aftosa de los animales porcinos, etc. MEJOR FORMA DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN En adelante, se ilustrará con detalle la presente invención . En esta especificación, a menos que se indique lo contrario, cuando existe un solvato y un hidrato de T-1105 o una sal de la misma, se pueden utilizar. También se pueden utilizar varias formas de cristales. Una sal de T-1105 incluye una sal normalmente conocida que se forma en un grupo hidroxilo. La sal formada en un grupo hidroxilo incluye, por ejemplo, una sal con un metal alcalino, como lo son el sodio y el potasio; una sal con metal alcalinotérreo, como el calcio y el magnesio,- una sal de amonio; así como también una sal con una base orgánica que contiene nitrógeno, como la triemtilamina , trietilamina , tributilamina, piridina, N, N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, dietilamina, diciclohexilamina, procaina, dibencilamina, N-bencil-ß-fenetilamina, 1-efenamina y N, N' -dibenciletilenodiamina . Entre estas sales antes descritas, una sal preferente incluye
a una sal farmacológicamente aceptable, y se prefiere más una sal sódica. El agente viral contra la fiebre aftosa de animales porcinos, etc., que contiene T-1105 o una sal de la misma de la invención muestra un excelente efecto antiviral en el virus de la fiebre aftosa que pertenece al género Aphthovirus. El virus de la fiebre aftosa incluye, por ejemplo, serotipos A, 0 y C del tipo europeo, serotipos Asia 1 del tipo asiático, serotipos SAT1, SAT2 y SAT3 del tipo africano, y subtipos de los mismos. El agente viral contra la fiebre aftosa de animales porcinos, etc., que contiene T-1105 o una sal de la misma de la invención es más efectivo, en particular en los serotipos A, 0 y C, así como también en Asia 1 cuya aparición se ha observado en Asia. El porcino en la presente invención significa un animal que pertenece a- la Familia de los Suidae, artiodáctilos , Mamíferos, Vertebrados; en específico incluye a un cerdo y un jabalí y de preferencia un cerdo. Puede administrarse T-1105 o una sal de la misma a los animales porcinos, etc., de forma parenteral como inyecciones después de diluirlo con aguá destilada para inyección o suero fisiológico; o puede ser administrado de manera oral o parenteral en formulaciones animales, por ejemplo, tabletas, pildoras de gran tamaño, polvos, gránulos,
gránulos divididos de forma fina, cápsulas, emulsiones, líquidos, suspensiones, fórmulas premezcladas , jarabes, pastas o aerosoles, de acuerdo con el método farmacéutico de fabricación conocido, usando a conveniencia diluyentes y excipientes farmacéuticamente aceptables. T-1105 o una sal de la misma o la formulación animal de la misma puede utilizarse mezclado con el pienso según sea necesario, por ejemplo, piensos bastos, tales como el heno, la paja, la pastura, los cultivos de forraje verde, los cultivos de raíces, tubérculos y frutos, las plantas silvestres, las hojas de árbol, y el ensilado; y piensos concentrados, tales como granos, cereales y fertilizantes mixtos. También se puede utilizar mediante su adición al agua para beber y similares. La forma preferida de administración incluye la administración en inyección, como lo son las inyecciones intramuscular, subcutánea, e intraperitoneales , y la administración oral mezclada en los piensos mediante la mezcla de T-1105 en el pienso. El agente viral contra la fiebre aftosa de animales porcinos, etc., y el pienso para animales porcinos, etc., de la presente invención pueden fabricarse, por ejemplo, al estabilizar al T-1105 o una sal de la misma a través de su disolución o encapsulación con portadores sólidos o líquidos para hacer, por ejemplo, tabletas, pildoras de gran tamaño,
polvos, gránulos, gránulos divididos de forma fina, cápsulas, emulsiones, líquidos, suspensiones, fórmulas premezcladas , jarabes, pastas o aerosoles, de manera alternativa al dispersarlo de manera directa en los alimentos o bebidas, o portadores y agregándolo. Los portadores sólidos incluyen por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, harina, harina de maíz, salvado, pastel de aceite de soya, salvado de arroz sin grasa, tortas de colza, residuos de soya fermentada, celulosa, células de levadura, pescado, orujos de cacahuate, cáscaras, y carbonato de calcio; los portadores líquidos incluyen, por ejemplo, agua, suero fisiológico, y disolventes orgánicos fisiológicamente inocuos. También, se pueden agregar coadyuvantes, como los agentes emulsionantes, agentes dispersores, agentes suspensores, agentes humidificadores , agentes espesantes, agentes gelificantes , y agentes solubilizantes según sea necesario. Puede tomar una forma premezclada. Además, se pueden componer preservativos, bactericidas, vermicidas, antioxidantes, agentes colorantes, saborizantes, agentes antibacterianos, antibióticos, preparaciones enzimáticas, preparaciones de lactobacilos , antipiréticos, agentes analgésicos y agentes antiinflamatorios. Se pueden componer otros fármacos para animales. También se pueden componer varios tipos de vitaminas, minerales, y aminoácidos. El agente viral contra la fiebre aftosa de animales
porcinos, etc., de la presente invención se administra para el propósito de tratamiento incluyendo la prevención y/o terapia de la fiebre aftosa en el ganado o animales de los animales porcinos, etc. De preferencia, se administra de forma particular en el cerdo. La dosis se puede seleccionar de manera apropiada dependiendo de la edad, peso corporal, síntomas del sujeto animal y la ruta de administración. Por ejemplo, una dosis de 1 a 2000 mg/kg del peso corporal de un animal puede administrarse mediante su división en una a varias veces diarias. La frecuencia puede aumentar dependiendo de los síntomas. El período de administración no se encuentra limitado en particular, mientras que en general de 1 a 10 días de administración es suficiente para obtener una suficiente eficacia. También se puede administrar sin regularidad . EJEMPLOS A continuación, la presente invención se ilustrará mediante Ejemplos de Prueba, los cuales no limitan de ninguna forma a la presente invención. Se puede obtener T-1105 o una sal de la misma de la presente invención mediante la compra del producto comercial o puede producirse mediante cualquiera de los métodos conocidos o aquellos métodos basados en los mismos o la combinación de los mismos. Los siguientes experimentos en los Ejemplos de Prueba 1 a 3 se condujeron en
el Instituto Nacional de Salud Animal en Tokio de la Organización Nacional de Investigaciones en Agricultura y Alimentos, la institución administrativa independiente. Ejemplo de Prueba 1. Efecto del virus contra la fiebre aftosa, in vitro (1) Se determinó el efecto de T-1105 en el virus contra la fiebre aftosa (Cepa O/JPN/2000) . El virus de la fiebre aftosa (Cepa O/JPN/2000) fue adsorbido en células de riñon subcultivadas de cerdo- a aproximadamente 30 a 100 copias/plato a 37 °C durante 1 hora. La solución con el virus se removió y se lavaron las células con un medio de cultivo MEM que se había ajustado a un pH de 7.4, seguido de un recubrimiento con suero bovino 2% que contiene un medio de cultivo MEM suplementado con 1.5% metilcelulosa en donde se diluyeron 20 µg/mL de T-1105 mediante 2 pasos y luego se añadió. Después de 3 días de cultivo, las células fueron introducidas y teñidas con formalina amortiguadora neutral al 10% que contiene 0.2% de violeta cristal, y después se contó el número de placas. Al comparar el número de placas con aquellas del grupo sin tratar, se determinó la proporción inhibitoria al 50% de la formación de placas (IC50) . El resultado fue 1.6 µg/mL. (2) Se determinó el efecto de T-1105 en el virus de la fiebre aftosa (serotipos A, C, y Asia 1) .
Las concentraciones virales para A, C, y Asia 1 fueron 10 TCID50, 10 TCID50, y 101-5 TCID50, de manera respectiva. Después de que el virus fuera adsorbido en células IBRS-2 a 37°C durante 1 hora, se diluyeron 20 µ9/G?? de T-1105 mediante 2 pasos y cada una de las soluciones diluidas se añadió a las células, y 48 horas después las células fueron introducidas y teñidas con formalina amortiguadora neutral al 10% que contiene 0.2% de violeta cristal. Cuando se observó la inhibición del efecto citopatógeno en cada concentración, se determinó que la concentración fue efectiva. El resultado se muestra en la
Tabla 1. [Tabla 1] Serotipos del virus de la Concentración inhibitoria del fiebre aftosa 25% o más {µg/mL) Asia 1 0.625 A 0.313 C 1.25 T-1105 exhibe un excelente efecto en el virus de la fiebre aftosa. Ejemplo de Prueba 2(1). Estudio farmacocinético de T-1105
(cerdos, bovinos) Se administró 1% de pienso compuesto de T-1105 de manera oral a cerdos (convencional, 10 kg de peso corporal, 2 especímenes) y bovinos (reses japonesas de pelaje negro, 200
kg de peso corporal, 2 especímenes) una dosis de 100 mg/kg. Después de 2 y 8 horas de la administración, se extrajeron 1.5 mL de sangre de la vena yugular en cada animal usando una jeringa lavada con heparina, se centrifugó a 4°C y 2000 rpm durante 10 minutos, y se prepararon 250 µ?? del plasma sanguíneo en un microtubo de 1.5 mL. Con base en la curva de calibración preparada usando plasma sin contaminar, se midió la concentración de T-1105. Para preparar una curva de calibración, se condujo el mismo procedimiento que el pre-tratamiento para el plasma al añadir 50 µL de 5 veces la solución de T-1105 concentrada a 200 µL de plasma sin contaminar. A cada una de las muestras de prueba de 250 µL de plasma y muestra de prueba de plasma para la curva de calibración, se añadieron 500 µL de metanol, y cada uno de los resultados se agitó y centrifugaron a 4°C y 10000 rpm por 10 minutos. Se recolectó el líquido sobrenadante, se desproteinizó y después se evaporó hasta secarse. El residuo se disolvió en 500 µL de la fase móvil de HPLC, la solución resultante se centrifugó a 10°C y 3000 rpm durante 10 minutos, y se recolectó el líquido sobrenadante para su medición. Las condiciones de medición para HPLC fueron las siguientes. Columna analítica: Develosil ODS-MG-5 (4.6 mm I.D. x 250 mm) , Nomura Chemical Co., Ltd. Columna de protección: Develosil ODS-MG-5 (4.0 mm I.D. x 10 mm) , Nomura Chemical Co., Ltd.
Temperatura de columna: 40°C Fase móvil de HPLC: metanol/ 1 mol/L amortiguador de fosfato (pH 7.0)/ agua destilada/ TBA-Br (50:50:900:1.6, v/v/v/w) Velocidad de flujo: 1.0 mL/min Onda de detección: 350 nm Volumen de inyección: 100 µ?. Temperatura de automuestreador : 10°C preestablecido Tiempo de análisis: aproximadamente 18 min Se preparó la curva de calibración, y se determinaron las concentraciones de T-1105 en las muestras de prueba en plasma para los especímenes respectivos con base en el área del pico y se promediaron. Ejemplo de Prueba 2(2). Estudio farmacocinético de T-1105 (oveja) Se administró 1% de pienso compuesto de T-1105 de manera oral a ovejas (Corriedale, 63 kg y 67 kg de peso corporal, 2 especímenes) una dosis de 100 mg/kg. Después de 2 y 8 horas de la administración, se extrajeron 1.5 mL de sangre de la vena yugular en cada animal usando una jeringa lavada con heparina, se centrifugó a 4°C y 2000 rpm durante 10 minutos, y se prepararon 250 µ?> del plasma sanguíneo en un microtubo de 1.5 mL. Se añadieron 500 µ?. de metanol a la muestra de prueba en plasma, la cual fue agitada y centrifugada a 4°C y 10000 rpm por 10 minutos. Se recolectó el líquido sobrenadante, se desproteinizó y después se
evaporó hasta secarse. El residuo se disolvió en 500 µ?. de la fase móvil de HPLC, la solución resultante se centrifugó a 10°C y 3000 rpm durante 10 minutos, y se recolectó el líquido sobrenadante para su medición. La medición se condujo bajo las mismas condiciones que el Ejemplo de Prueba 2(1). Se preparó una curva de calibración con la solución estipulada, y se determinaron las concentraciones de T-1105 en las muestras de prueba en plasma para los especímenes respectivos con base en el área del pico y se promediaron. Los resultados de los Ejemplos de Prueba 2(1) y (2) se muestran en la Tabla 2. [Tabla 2] Concentración de plasma ^g/mL) 2hrs después de la 8hrs después de la administración administración
Cerdos 75.0 36. .4 Ovej as 30.9 10. .2 vacas 7.86 0.1 73 T-1105 retuvo una alta concentración de sangre en los cerdos y ovejas, exhibiendo excelente farmacocinética . Ejemplo de Prueba 3. Prueba de eficacia de la administración de mezcla en pienso Se evaluó el efecto terapéutico de T-1105 en la fiebre aftosa usando un modelo de infección sistémico de cerdo . Se inoculó a cerdos (convencional, 10 kg de peso
corporal, 2 especímenes en grupo administrado (No. 1 y 2) , y 2 en grupo no administrado (No. 3 y 4)) con 106 TCID50 del virus de la fiebre aftosa en su pata delantera e inició la infección . 5 Se administró T-1105 de manera oral como pienso mezclado a 200 mg/kg 1 hora antes de la inoculación del virus, después dos veces al día (400 mg/kg/día) por 6.5 días. El curso de signos clínicos se observó hasta después de 8 días de inoculado el virus. También, se determinaron el curso de
la carga viral en el plasma y el frotis nasal hasta los 3 días después de la inoculación del virus. El curso de signos clínicos se muestra en la Tabla
3, la carga viral en plasma en la Tabla 4, y la carga viral en el frotis nasal en la Tabla 5 a continuación . 15 [Tabla 3] No. del Días posteriores a la inoculación del virus cerdo 0 1 2 3 4 5 6 7 8
Grupo 1 - - - - -administrado T-1105 2 Grupo no 3 - + ++ ++ ++ ++ ++ ++ administrado T-1105 4 - - + + ++ ++ ++ ++ -: normal, +: cojera, ++ : astasia Los animales del grupo no administrado T-1105 mostraron cojera, disestasia, y formación de ampollas en sus patas durante y después del 2°. día de la inoculación del
virus , mientras que los animales del grupo administrado T- 1105 no exhibieron cambio alguno en su apariencia. [Tabla 4] No. del Días posteriores a la inoculación del virus cerdo 1 3 Grupo 1 <0.14 <0.14 administrado T-1105 2 <0.14 <0.14 Grupo no 3 <0.14 34891 administrado T-1105 4 0.18 282.7 Unidad: TCID50^L
La carga viral de plasma aumentó de forma brusca en el grupo no administrado T-1105, mientras que en el grupo administrado T-1105 permaneció en el límite de detección o por debajo de la misma. T-1105 exhibió un excelente efecto terapéutico en
el modelo de infección sistémico del cerdo. [Tabla 5] No. del Días posteriores a la inoculación del virus cerdo 1 3 Grupo 1 <0.07 <0.07 administrado T-1105 2 <0.07 <0.07 Grupo no 3 <0.07 160 administrado T-1105 4 <0.07 0.66 Unidad: TCID50/^L de solución del frotis La carga viral en el frotis nasal aumentó en el
grupo no administrado T-1105, mientras que apenas aumentó en el grupo administrado T-1105. T-1105 exhibió un excelente efecto terapéutico en el modelo de infección sistémico del cerdo. Además, los cerdos en el grupo administrado T-1105 exhibieron una falta de toxinas durante el periodo de administración . Ejemplo de Prueba 4. Citotoxicidad En una placa de 96 pocilios (IWAKI Co., Ltd.), se cargó un medio de cultivo que contenía una concentración predeterminada de T-1105 a 100 µ????????? . Después se prepararon células Vero a 2xl04 células/mL con el medio de cultivo, el resultado se sembró a 100 µ?/pocillo y se cultivó bajo las condiciones de 5% C02 a 37°C por 4 días. Al final del cultivo, se determinó el número de células viables mediante el método XTT (por ejemplo, CANCER RESEARCH, vol . 48, pp. 4827-4833 (1998) ) . El 50% de la concentración inhibitoria del crecimiento de la célula (IC50) de T-1105 fue de 250 µg/mL o más . Debido al resultado anterior es evidente que T-1105 es bastante seguro, y efectivo como un agente viral contra la fiebre aftosa para un porcino, etc., en el tratamiento de la fiebre aftosa inducida por el virus de la fiebre aftosa. Ejemplo de Formulación 1. Tabletas
Se mezclaron 10 g de T-105 con 4.4 g de lactosa, 4.4 g de celulosa cristalina, 1.0 g de almidón de carboximetilo de sodio y 0.20 g de estearato de magnesio, y después la mezcla en polvo se comprimió para crear una tableta de 200 mg para dar como resultado una tableta que contiene 100 mg de T-1105 por tableta. Ejemplo de Formulación 2. Pienso compuesto Se mezclaron 30 g de T-1105 con 2970 g de pienso disponible comercialmente para cerdos (JA ZEN-NOH) para obtener 3000 g de 1% de pienso compuesto. En este pienso, T-1105 estuvo estable sin ser degradado por 24 horas. APLICACIÓN INDUSTRIAL El agente contra la fiebre aftosa que contiene T-1105 o una sal de la misma es útil para el tratamiento que incluye la prevención o terapia de la fiebre aftosa para los animales porcinos, etc.
Claims (10)
- REIVINDICACIONES 1. Un agente viral contra la fiebre aftosa para un animal perteneciente a la Familia de los Suidae, caracterizado en que ese agente consta de 3-oxo-3 , 4-dihidro-2-pirazinacarboxamida o una sal de la misma.
- 2. El agente viral contra la fiebre aftosa de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el animal perteneciente a la Familia de los Suidae es un cerdo.
- 3. Un pienso para un animal perteneciente a la Familia de los Suidae, caracterizado porque el pienso consta de 3-oxo-3 , 4-dihidro-2-pirazinacarboxamida o una sal de la misma.
- 4. El pienso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde el animal perteneciente a la Familia de los Suidae es un cerdo .
- 5. Un método de tratamiento para la fiebre aftosa en un animal perteneciente a la Familia de los Suidae, caracterizado por la administración de una cantidad efectiva de 3-???-3 , 4-dihidro-2-pirazinacarboxamida o una sal de la misma en el animal perteneciente a la Familia de los Suidae.
- 6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el método de tratamiento es preventivo o un método terapéutico .
- 7. El método de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en donde el animal perteneciente a la Familia de los Suidae es un cerdo.
- 8. Un agente viral contra la fiebre aftosa para una oveja, caracterizado en que el agente consta de 3-oxo-3,4-dihidro-2 -pirazinacarboxamida o una sal de la misma.
- 9. Un pienso para una oveja, caracterizado en que el pienso consta de 3-oxo-3 , 4 -dihidro-2 -pirazinacarboxamida o una sal de la misma.
- 10. Un método preventivo o terapéutico para la fiebre aftosa en una oveja, caracterizado por la administración de una cantidad efectiva de 3 -oxo-3 , 4 -dihidro-2 -pirazinacarboxamida o una sal de la misma en una oveja.
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