KR101388061B1 - 멧돼지과 동물 또는 양(羊)용 항 구제역 바이러스제 및 멧돼지과 동물 또는 양의 구제역의 예방 또는 치료방법 - Google Patents
멧돼지과 동물 또는 양(羊)용 항 구제역 바이러스제 및 멧돼지과 동물 또는 양의 구제역의 예방 또는 치료방법 Download PDFInfo
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Abstract
3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 멧돼지과 동물용 항(抗)구제역 바이러스제는, 멧돼지과 동물의 구제역 예방 또는 치료에 극히 유용하다. 또한, 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 양용 항 구제역 바이러스제는, 양의 구제역 예방 또는 치료 등의 처치에 극히 유용하다.
구제역, 항 구제역 바이러스
Description
본 발명은, 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드(이하, T-1105라고 칭한다.) 또는 그 염을 함유하는 멧돼지과 동물 또는 양(이하, 멧돼지과 동물 등으로 칭한다.)용 항 구제역 바이러스제, T-1105 또는 그 염을 함유하는 멧돼지과 동물 등에게 제공하는 사료 및 멧돼지과 동물 등의 구제역 예방 또는 치료방법 등의 처치방법에 관한 것이다.
구제역은, 사육동물인 소, 돼지 및 양 등의 우제류 동물에게 전염성이 강한 질병의 하나로서, 가축의 발육장해, 운동장해 등을 발생시켜, 가축의 상품가치를 급격히 저하시키는, 인간에게는 비감염성의 가축특이성 감염증이다. 구제역은, 세계의 축산업에 있어서, 수출입국의 어느 입장에서도, 가장 경계해야할 중요한 가축전염병으로서 자리잡히고 있다.
구제역은, 국제전염병이며, 현재도 아시아, 아프리카 및 남아메리카 등 세계 각지에서 널리 유행하고 있다. 일본에서도 2000년에 구제역이 발생하였다. 일단, 구제역이 발생하면, 구제역 바이러스의 전염성이 극히 강하기 때문에, 바이러스의 전파를 막는데에는 다대한 곤란을 수반한다. 구제역이 일단 발생하면 축산업이 받는 타격은 막대하다. 그 때문에, 세계적으로 구제역의 예방 및 치료 등의 처치방법에 다대한 노력을 기울이고 있다.
구제역에 대한 대책은, 엄격한 수입규제, 위생관리, 검역의 실시 및 이환동물의 도살이며, 대유행시에는 국가, 지역레벨 또는 질병발증의 주변구역에 있어서 예방수단으로서의 불활화(不活化) 백신을 사용한 예방접종 프로그램이 실시된다. 그러나, 구제역은 조기발견이 어렵고, 대단히 빠른 속도로 전파되므로, 백신의 접종이 그 속도를 따라잡을 수가 없다. 또한, 바이러스는 변이가 일어나기 쉽기 때문에, 백신의 접종만으로는 감염을 완전히 방지할 수가 없다. 따라서, 현재, 우제목인 멧돼지과 동물 등에 대한 우수한 구제역의 치료방법은 존재하지 않는다.
국제공개 제00/10569호 팜플렛에는, T-1105가 우수한 항 인플루엔자바이러스 작용을 갖는다고 기재되어 있다(특허문헌1). 그러나, 멧돼지과 동물 등에 대한 항 구제역 바이러스제 및 멧돼지과 동물 등에 대한 구제역의 예방 또는 치료방법 등의 처치방법에 대해서는 구체적으로 개시되어 있지 않다.
특허문헌1 : 국제공개 제00/10569호 팜플렛
멧돼지과 동물 등을 위한 우수한 항 구제역 바이러스제 및 멧돼지과 동물 등을 위한 구제역의 예방 또는 치료방법 등 처치방법을 강력하게 요망하고 있다.
이와 같은 상황 하에서, 본 발명자들은 예의검토한 결과, T-1105 또는 그 염을 함유하는 항 구제역 바이러스제가, 멧돼지과 동물에 있어서 강한 구제역치료효과를 가지며, 멧돼지과 동물의 구제역치료 등의 처치에 유용하다는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
또한, T-1105 또는 그 염을 함유하는 항 구제역 바이러스제가, 양에 있어서 강한 구제역 치료효과를 가지며, 양의 구제역치료 등의 처치에 유용하다는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 T-1105 또는 그 염을 함유하는 항 구제역 바이러스제는, 멧돼지과 동물 등의 구제역 예방 또는 치료 등의 처치에 유용하다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해서 상세하게 설명한다.
본 명세서에 있어서, 특별히 언급하지 않는 한, T-1105 또는 그 염에 있어서, 용매화물 및 수화물이 존재할 경우, 이들 용매화물 및 수화물도 사용할 수가 있다. 또, 여러가지 형상의 결정도 사용할 수가 있다.
T-1105의 염으로서는, 통상적으로 알려져 있는 하이드록실기에 있어서의 염을 들 수가 있다. 하이드록실기에 있어서의 염으로서는, 예를 들면, 나트륨 및 칼륨 등의 알칼리금속과의 염; 칼슘 및 마그네슘 등의 알칼리 토류금속과의 염; 암모늄염; 및 트리메틸아민, 트리에틸아민, 트리부틸아민, 피리딘, N,N-디메틸아닐린, N-메틸피페리딘, N-메틸모르폴린, 디에틸아민, 디시클로헥실아민, 프로카인, 디벤질아민, N-벤질-β-페네틸아민, 1-에펜아민 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민 등의 함질 소유기염기와의 염 등을 들 수가 있다. 상기의 염 중에서, 바람직한 염으로서는, 약리학적으로 허용되는 염을 들 수가 있으며, 나트륨과의 염이 보다 바람직하다.
본 발명의 T-1105 또는 그 염을 함유하는 멧돼지과 동물 등을 위한 항 구제역 바이러스제는, 아프토바이러스속(Aphthovirus)에 속하는 구제역 바이러스에 대하여 우수한 항 바이러스작용을 나타낸다. 구제역 바이러스로서는, 예를 들면, 혈청형이, A, O 및 C인 유럽형; 혈청형이, Asia1인 아시아형 및 혈청형이, SAT1, SAT2 및 SAT3인 아프리카형과 그들 아류형(亞類型)을 들 수가 있다.
본 발명의 T-1105 또는 그 염을 함유하는 멧돼지과 동물 등을 위한 항 구제역 바이러스제는, 특히, 혈청형이, A, O 및 C와 아시아지역에서의 발생이 확인되고 있는 Asia1에 대해 보다 우수한 효과를 갖는다.
본 발명에 있어서 멧돼지과 동물이란, 척추동물문(門) 포유강(綱) 우제목(目) 멧돼지과(科)의 동물을 의미하며, 구체적으로는, 돼지 및 멧돼지 등을 들 수가 있고, 특히 돼지를 대표적으로 들 수 있다.
T-1105 또는 그 염은, 주사용 증류수 또는 생리식염수 등으로 희석하여 주사제로서 비경구적으로 멧돼지과 동물 등에 투여하여도 좋고, 공지의 제제학적 제조방법에 준하여, 필요에 따라서 제제학적으로 허용되는 희석제, 부형제를 사용하여, 정제, 대형 환제, 산제, 과립제, 세립제, 캡슐제, 유제, 액제, 현탁제, 프리믹스제, 시럽제, 페이스트제 또는 에어졸제 등의 동물용 제제로서 경구 또는 비경구로 투여할 수가 있다.
T-1105 또는 그 염 또는 그 동물용 제제는, 필요에 따라서, 사료에 혼합시켜 서 사용할 수가 있으며, 예를 들면, 건초, 볏짚류, 목초류, 풋베기(靑刈; Soiling crops)사료작물류, 근과채류, 야초류, 수엽류 및 사일리지 등의 조사료(粗飼料); 및 곡류, 깻묵류(유박류) 및 배합사료 등의 농후사료 등의 사료에 첨가하여 사용할 수가 있다. 또, 음료용 물 등에 첨가하여 사용할 수도 있다.
바람직한 투여형태로서는, 근육주사, 피하주사 및 복강내 주사 등의 주사제로서의 투여형태 및 T-1105를 사료에 혼합하여, 혼합사료로 하여 경구투여하는 형태를 들 수가 있다.
본 발명의 멧돼지과 동물 등을 위한 항 구제역 바이러스제 및 멧돼지과 동물등을 위한 사료는, 예를 들면, T-1105 또는 그 염을 고체상태 또는 액체상태의 담체로 희석 또는 피복 등에 의해 안정화시키고, 예를 들면, 정제, 대형 환제, 산제, 과립제, 세립제, 캡슐제, 유제, 액제, 현탁제, 프리믹스제, 시럽제, 페이스트제 또는 에어졸제 등으로 하거나, 또는 사료 또는 음료 등에 직접 또는 담체중에 분산시킨 것을 첨가하는 것에 의해 제조할 수가 있다. 고체 담체로서는, 예를 들면, 유당, 자당, 전분, 소맥분, 옥수수가루, 밀기울, 대두깻묵, 탈지쌀겨(脫脂米糠), 채종깻묵, 비지, 섬유소, 효모균체, 어분, 땅콩의 찌꺼기, 패각의 분말 및 탄산칼슘 등을 들 수가 있으며, 액상 담체로서는, 예를 들면, 물, 생리적 식염수 및 생리학적으로 무해한 유기용매 등을 들 수가 있다. 그 밖에, 필요에 따라서, 보조제, 예를 들면, 유화제, 분산제, 현탁화제, 습윤제, 농축제, 겔화제 및 가용화제 등을 첨가하여도 좋다. 또 프리믹스의 형태로 하여도 좋다. 또한, 방부제, 살균제, 구충제, 항산화제, 착색제, 방향제, 항균제, 항생물질, 효소제제, 유산균제제, 해열제, 진통제 및 소염제 등을 배합하여도 좋다. 또한 다른 동물약을 배합하여도 좋다. 또, 각종 비타민류, 미네랄류 및 아미노산류 등을 배합하여도 좋다.
본 발명의 멧돼지과 동물 등을 위한 항 구제역 바이러스제는, 구제역의 예방 또는/및 치료 등의 처치를 목적으로 하여 멧돼지과 동물 등의 가축 또는 동물에게 투여되는 바 특히, 돼지에게 바람직하게 적용된다.
투여량은, 대상동물의 연령, 체중, 증상 및 투여경로에 따라서 적당히 선택할 수가 있으나, 예를 들면, 동물의 체중에 대하여, 1일, 1~2000㎎/㎏을 1회~수회로 분할하여 투여하면 좋고, 증상에 따라서 횟수를 증가시킬 수도 있다. 또, 투여기간도 특별히 제한되지 않으나, 통상적으로, 1~10일간의 투여로 충분한 효과를 얻을 수가 있으며, 간헐적으로 투여할 수도 있다.
(실시예)
이어서, 본 발명을 시험예를 들어서 설명하는바, 본 발명은, 이들로 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 T-1105 또는 그 염은, 시판품을 구입해서 입수하거나, 또는 공지의 방법 또는 그에 준하는 방법 및 그것들을 조합시키는 것에 의해 제조할 수가 있다. 또한, 하기의 시험예 1~3은, 독립행정법인, 농업·식품산업기술종합연구기구, 동물위생연구소(도쿄도)에서 실시하였다.
시험예 1. in vitro 항 구제역 바이러스작용
(1) 구제역 바이러스(O/JPN/2000주)에 대한 T-1105의 효과를 측정하였다.
구제역 바이러스(O/JPN/2000주)를 돼지유래의 신장계대세포에 약 30~100개/dish가 되도록 흡착(37℃, 1시간)시켰다. 바이러스액을 제거하고, pH7.4로 조정한 MEM배지에서 세정한 후, T-1105를 20㎍/mL로부터 2단계 희석한 1.5% 메틸셀룰로스를 첨가한 2% 소(牛)혈청함유 MEM배지를 중층하였다. 3일간 배양하고, 0.2% 크리스탈 바이올렛 10% 중성 완충포르말린으로 세포를 고정한 후, 염색하고, 플라크의 수를 계수하였다. 약제 비첨가군의 플라크의 수와 비교하여, 50% 플라크형성 저지율(IC50)을 구하였다.
결과는, 1.6㎍/mL였다.
(2) 구제역 바이러스(A, C 및 Asia1)에 대한 T-1105의 효과를 측정하였다.
바이러스의 농도는, A, C 및 Asia1에 대하여, 각각, 10TCID50, 10TCID50, 101.5TCID50으로 하고, IBRS-2세포에 바이러스를 흡착시킨 후(37℃, 1시간), 20㎍/mL로부터 2단계 희석한 T-1105를 첨가하고, 48시간 후에 0.2% 크리스탈 바이올렛 10% 중성 완충포르말린으로 세포를 고정시킨 후, 염색하였다. 각 농도에 있어서 4well 중 1well 이상에서 세포변성효과의 저지가 인정된 경우에 효과있음으로 판정하였다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.
T-1105는, 구제역 바이러스에 대하여, 우수한 효과를 나타내었다.
시험예 2(1). T-1105 체내 동태시험(돼지, 소)
돼지(컨벤셔널, 체중 10㎏, 2마리) 및 소(흑모 일본소, 체중 200㎏, 2마리)에 1% T-1105 배합사료를 투여량이 100㎎/㎏이 되도록 경구투여하였다. 투여 후, 2 및 8시간 후에 각 동물의 경정맥으로부터 헤파린으로 린스한 주사통을 사용하여 1.5mL 채혈한 후, 신속하게 원심분리(4℃, 2000rpm, 10분간)하고, 혈장 250μL를 1.5mL의 마이크로튜브에 나누어 주입하였다. 블랭크혈장을 사용한 검량선을 기초로 하여 T-1105의 농도를 측정하였다. 또한, 검량선은, 블랭크혈장 200μL에 5배 농도의 T-1105용액 50μL를 첨가하여, 혈장의 전처리조작과 동일하게 실시하였다. 혈장검체 샘플 및 검량선용 혈장검체 샘플 250μL에 메탄올 500μL를 첨가하여 교반하고, 원심분리(10000rpm, 4℃, 10분간)하였다. 상청을 채취하여, 단백제거처리한 후, 감압하에서 건조시켰다. 잔사를 HPLC 이동상 500μL로 용해시키고, 원심분리(3000rpm, 10℃, 10분간)하고, 상청을 채취하여, 측정시료로 하였다. 측정은, 하기의 HPLC조건으로 실시하였다.
분석칼럼: Develosil ODS-MG-5(4.6㎜ I.D.×250㎜), Nomura Chemical Co., Ltd. 제)
가드칼럼: Develosil ODS-MG-5(4.0㎜ I.D.×10㎜), Nomura Chemical Co., Ltd. 제)
칼럼온도: 40℃
HPLC 이동상: 메탄올/1mol/L 인산완충액 (pH7.0)/증류수/TBA-Br (50:50:900:1.6, v/v/v/w)
유속: 1.0mL/min
검출파장: 350㎚
주입량: 100μL
오토샘플러의 온도: 설정온도 10℃
분석시간: 약 18분
검량선을 작성하고, 피크면적으로부터 혈장검체 샘플중의 각 고체의 T-1105의 농도를 구하고, 그 평균값을 산출하였다.
시험예 2(2). T-1105 체내 동태시험(양)
양(코리데일 종, 체중 63㎏ 및 67㎏, 2마리)에 1% T-1105 배합사료를 투여량이 100㎎/㎏이 되도록 경구투여하였다. 투여 후, 2 및 8시간 후에 각 개체의 경정맥으로부터 헤파린으로 린스한 주사통을 사용하여 1.5mL 채혈한 후, 신속하게 원심분리(4℃, 2000rpm, 10분간)하고, 혈장 250μL를 1.5mL의 마이크로튜브에 분주하였다. 혈장검체 샘플에 메탄올 500μL를 첨가하여 교반하고, 원심분리(10000rpm, 4℃, 10분간)하였다. 상청을 채취하여, 단백제거처리한 후, 감압하에서 건조시켰다. 잔사를 HPLC 이동상 500μL로 용해시키고, 원심분리(3000rpm, 10℃, 10분간)하고, 상청을 채취하여, 측정시료로 하였다. 측정은, 시험예 2(1)과 동일한 조건으로 실시하였다.
표준액으로 검량선을 작성하고, 피크면적으로부터 혈장검체 샘플중의 각 개체의 T-1105의 농도를 구하고, 그 평균값을 산출하였다.
시험예 2(1) 및 (2)의 결과를 표 2에 나타낸다.
T-1105는, 돼지 및 양에 있어서 높은 혈중농도를 유지하며, 우수한 체내 동태를 나타내었다.
시험예 3. 혼합사료투여의 유효성 시험
T-1105의 구제역에 대한 치료효과는, 돼지 전신감염모델을 사용하여 평가하였다.
돼지(컨벤셔널, 체중10㎏, 투여군 2마리(돼지번호 1 및 2), 비투여군 2마리(돼지번호 3 및 4)에 구제역바이러스 106TCID50을 앞다리 제구부(蹄球部)에 접종시켜, 감염을 일으켰다.
T-1105는, 바이러스접종 1시간 전에 200㎎/㎏을 투여하고, 이후, 1일 2회(400㎎/㎏/day), 6.5일간, 경구로 혼합사료를 투여하였다. 임상증상의 추이를 바이러스 접종 후 8일까지 관찰하였다. 또, 혈장 및 콧물걸레에 받은 액 중의 바이러스양의 경과를 바이러스 접종 후 3일까지 측정하였다.
임상증상의 추이를 표 3, 혈장중 바이러스양의 결과를 표 4, 비강 스웝(swab)중의 바이러스양의 결과를 표 5에 나타낸다.
T-1105 비투여군은, 바이러스 접종 후 2일째 이후, 파행·기립곤란이 되며, 발에 수포가 형성된 것에 대하여, T-1105 투여군은, 외관상의 변화는 전혀 보이지 않았다.
T-1105 비투여군의 혈장중 바이러스의 양은 급격하게 증가하였으나, T-1105 투여군의 혈장중 바이러스의 양은, 검출한계 이하였다.
T-1105는, 돼지 전신감염모델에 있어서, 우수한 치료효과를 나타내었다.
T-1105 비투여군의 비강 스웝중의 바이러스의 양은 증가하였으나, T-1105 투여군의 비강 스웝중 바이러스의 양은, 거의 증가하지 않았다.
T-1105는, 돼지 전신감염모델에 있어서, 우수한 치료효과를 나타내었다.
또한, T-1105 투여군의 돼지에는, 투여기간 중, 독성이라고 생각되는 소견은 발현하지 않았다.
시험예 4. 세포독성작용
96홀 플레이트(IWAKI사 제)에 소정의 농도의 T-1105를 함유시킨 배양액을 100μL/홀로 첨가하였다. 이어서, Vero세포를 2×104개/mL의 배양액으로 조제하고, 100μL/홀에서 파종하고, 37℃, 5% 탄산가스의 조건하에서 4일간 배양하였다. 배양종료시에 XTT법[예를 들면, CANCER RESEARCH, 제48권, p.4827-4833(1988년) 등]에 의해, 살아 있는 세포의 수를 측정하였다.
T-1105의 50% 세포증식 억제농도(IC50)는, 250㎍/mL 이상이었다.
상기의 결과로부터 명백해지듯이, T-1105는, 안전성이 높고, 또한, 멧돼지과 동물 등을 위한 항 구제역 바이러스제로서 구제역 바이러스에 의해 발생되는 구제역의 치료에 유효하다.
제제예 1. 정제
T-1105 10g을 유당 4.4g, 결정셀룰로스 4.4g, 카르복시메틸스타치나트륨 1.0g 및 스테아린산마그네슘 0.20g과 혼합하고, 1정당 200㎎이 되도록 혼합분말을 타정하여, 1정 중에 T-1105 100㎎을 함유하는 정제를 얻었다.
제제예 2(배합사료)
T-1105 30g을 돼지용 시판사료(JA ZEN-NOH 제) 2970g과 혼합하여, 1% T-1105 배합사료 3000g을 얻었다. 배합사료 중에서 T-1105는, 24시간 분해되지 않고, 안정적이었다.
T-1105 또는 그 염을 함유하는 항 구제역 바이러스제는, 멧돼지과 동물 등의 구제역의 예방 또는 치료 등의 처치에 유용하다.
Claims (10)
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 멧돼지과 동물용 항(抗)구제역 바이러스제.
- 제1항에 있어서,멧돼지과 동물이 돼지인 것을 특징으로 하는 항 구제역 바이러스제.
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 멧돼지과 동물용 사료.
- 제3항에 있어서,멧돼지과 동물이 돼지인 것을 특징으로 하는 사료.
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염의 유효한 양을, 멧돼지과 동물에 투여하는 것을 특징으로 하는 멧돼지과 동물의 구제역 처치방법.
- 제5항에 있어서,처치방법이 예방 또는 치료방법인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제5항 또는 제6항에 있어서,멧돼지과 동물이 돼지인 것을 특징으로 하는 방법.
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 양용 항 구제역 바이러스제.
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 양용 사료.
- 3-옥소-3,4-디하이드로-2-피라진카르복사미드 또는 그 염의 유효한 양을, 양에 투여하는 것을 특징으로 하는 양의 구제역 예방 또는 치료방법.
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