JPH07507770A

JPH07507770A - Ｎ−（ホスホノアセチル）−ｌ−アスパラギン酸組成物，および広域抗ウイルス剤としてのその使用方法

Info

Publication number: JPH07507770A
Application number: JP5516700A
Authority: JP
Inventors: ブロー，　ハーバート　エイ．
Original assignee: ユー．エス．バイオサイエンス，インコーポレーテッド
Priority date: 1992-03-18
Filing date: 1993-03-18
Publication date: 1995-08-31
Also published as: EP0660710A1; CA2109435C; CA2109435A1; AU3965993A; IS3987A; IL105090A; CN1080853A; BR9306123A; MX9301527A; EP0660710A4; WO1993018763A1; IL105090A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸組成物、および広域抗ウィルス剤としてのその使用方法■、発明の分野本発明は、ヒトおよび動物（トリを含む）の広範囲なウィルス感染を、有効成分がＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸（以下ｒＰＡＬＡ」と称する）または薬学的に許容されるその類似体を含む医薬組成物を用いて治療する方法に関する。これらの組成物は強力な広域抗ウィルス活性を有し、単独でも、または他の治療剤と併用してもウィルス感染の治療に使用できる。ＰＡＬＡは最初アスパルテートトランスカルバミラーゼの遷移状態類似体阻害剤として開発された。５ｔａｒｋら、　（１９７４）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２４６：６５９９参照。その後、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　（ＮＳＣＮｏ、　２２４１３１）は抗Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、３６：２７２０−２７２５；　Ｂｒｌｉｃｈｍａｎら、（１９８２）　Ｊ、　Ｎａｔ、　Ｃａｎｅｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　６８：２２７−２３１参照。ＰＡＬＡ、その塩および類似体、ならびにそれらの調製は５ｃｈｕｌｔｚらの米国特許Ｎｏ、　４．１７９．４６４．　Ｎｏ、　４．２１５．０７０．　Ｎｏ、　４．２６７、１２６゜Ｎｏ、　４．３４８．５２２および英国特許Ｎｏ、ＧＢ２００８１１ＢおよびＧＢ２０５１０７０、ならびにＰａｒｓｏｎｓらの米国特許Ｎｏ、　４．１５４．７５９、Ｎｏ、　４．１７８．３０６に記述されている。Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）は、Ｌ−アスパラギン酸トランスカルバミラーゼ（ＡＴＣａｓｅ）という酵素をブロックすることにより初めからピリミジンの生合成を阻害する。この酵素はＬ−アスパラギン酸とカルバミルリン酸の縮合を触媒するものであるが、この縮合はオロト酸とその最終産物ウリジンの合成に不可欠である。ＰＡＬＡによる阻害の最終的結果は、オリゴ糖鎖の伸長に不可欠なヌクレオチドプール、すなわちＵＴＰ、ＣＴＰ、およびヌクレオチド中間体、すなわちＵＤＰ−ＧｌｃＮ、ＣＭＰ−ＮｅｕＮＡｃの枯渇をもたらす。Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｒ，に、、　Ａｃｏｎ、　Ｔ、、　Ｇｏｌｄｅｎ、　Ａ、および５ｔａｒｋ、　Ｇ、Ｒ，（１９８５）　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　２８：２７２０−２６２；　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｂｒｏｃｈｕｒｅ、　ＮＳＣＮｏ、２２４１３１、　Ｄｉｖ、　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔａ＋ｅｎｔ、　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ。Ｂｅｔｈｅｓｄａ、　ＭＤ、　１９７７参照。このようにＰＡＬＡは主としてヌクレオチド生合成を阻害することによって作用するが、その中間体に及ぼす影響はその最終産物である炭水化物、タンパク質および核酸（ＲＮＡおよびＤＮＡ）にも反映される。ＰＡＬＡはカルバモイルリン酸の競合的阻害剤として、またアスパラギン酸の非競合的阻害剤として作用する。ＨＯＯｅｎｇｒａａｄ、　Ｎ。Ｊ、　（１９７４）　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　１６１ニア６−８２参照。ＰＡＬＡのＫａは、その天然の基質カルバミルリン酸より１０００倍強力である。Ｍｏｏｒｅ、　Ｅ、Ｃ，、Ｆｒｉｅｄｍａｎ、　Ｊ、、　Ｖａｌｄｉｖｉｅｓｏ、　Ｍ、、　Ｐｌｕｎｋｅｔｔ、ｗ、Ｍａｒｔｉ、Ｊ、Ｒ，ら、（１９８２）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、３１：３３１７ −３３２１参照。ＰＡＬＡは比較的毒性がなく、またいくつかのネズミ固形ガン系に感受性があるので、実験的腫瘍学の研究に使用されてきた。最近の研究は、ハロゲン化ピリミジン（例えば５−フルオロウラシル）と組み合わせて使用すると、ＰＡＬＡはｉｎ　ｖｉｖ。においてもｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいても独特の変調活性を有することを示した。Ｌｉａｎｇ　Ｃ，、Ｄｏｎｃｈｏｗｅｒ、　Ｒ，Ｃ，Ｃｈａｂｎｅｒ、　Ｂ、Ａ、　（１９８２）　Ｍｏ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　２１：２２４−２３０；　Ａｒｄａｌａｎ、　Ｂ、、　Ｇａ１ｚｅｒ、　Ｒ，１，Ｋｅｎｓｌｅｒ、　Ｔ、Ｗ、ら、（１９８１）　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３０：２０４５−２−４９；　Ａｎａｋａｒａｈａｎｏｎｔａ、　Ｔ、、　Ｈｏｌｓｔｅｇｅ、　Ａ、およびＫｅｐｐｌｅｒ、　Ｄ、０．Ｒ，（１９８０）　Ｂｕｒ。Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　１６：１１７１−１１８０参照。最も最近になって、ＰＡＬＡは自己免疫疾患、慢性炎症性疾患、および臓器移植拒絶反応の治療に有用なピリミジン生合成阻害剤として開示された。ＷＯ９１１０６８６３として１９９１年５月１６日に公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９０１０５９４２参照。文献を調べると、ＰＡＬＡはガン（新形成）の治療に単独で用いると臨床の場では比較的効果がないことが示されている。Ｖａｌｄｉｖｉｅｓ、　Ｍ、、　Ｍｏｏｒｅ、　Ｅ、Ｃ，、Ｂｕｒｇｅｓｓ、　Ａ、Ｍ、、　Ｍａｒｔｉ、　Ｊ、Ｒ，、Ｒｕ５ｓ。Ｊ、　Ｐｌｕｎｋｅｔｔ、　ｗ、　（１９８０）　Ｃａｎｃｅｒ　’ｒｒｅａｔ、　Ｒｅｐ、　４６：１３０１−１３０５；　Ｅｈｒｉｃｈｍａｎ、　Ｃ，、Ｓｔｒｏｎｇ　Ｊ、Ｍ、、　Ｗｉｅｒｎｉｋ、　Ｐ、Ｈ，、ＭｃＡｖｏｙ、　Ｌ、Ｍ、、　Ｃｏｈｅｎ、　Ｍ、Ｈ，Ｌｅｖｉｎｅ、　Ａ、Ｓ、、　Ｈｕｂｂａｒｄ、　Ｓ、Ｍ、、およびＣｈａｂｎｅｒ、　Ｂ、（１９７９）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　３９：３９９２−３９９５；　ＧｒｅｆｆＩ、　Ｊ、Ｌ、　Ｋｉｎｇ、　Ｓ、Ａ、、　０°Ｄｗｙｅｒ、　Ｐ、Ｊ、およびＬｅｙｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓ、　Ｂ、　（１９８８）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４８：４４１１−４４５４参照。ホスホ酢酸（以下ｒＰＡＡ」と称する）とその類似体における構造と活性の関係に関する報告が現れた［Ｍａｏ、　Ｊ、Ｃ，Ｍ、ら、　１９８？Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、　２７（２）：１９７−２０２　参照］。これらの研究者らは、ＦＡＡが選択的抗ヘルペスウィルス剤で、ＰＡＡの誘導は例外なくウィルス活性の低下をもたらすことを発見した。特に、ＰＡＬＡはその親ＦＡＡよりも２００倍以上著しく効果が劣っていることが分かった。２．２　抗ウィルス剤の開発全般ハロゲン化ヌクレオシドが抗ウィルス剤としてヘルペス・ケラティティス（ｈｅｒｐｅｓ　ｋｅｒａｔｉｔｉｓ）の治療に使用し得ることが発見されてから、チェーンターミネータ−の合成を可能とする高度な技法が開発されるまでには長い遅滞期間があった。チェーンターミネータ−には、例えば、Ｈ５Ｖに対するアシクログアノシン；ＨＩＶに対するＡ、ＺＴ、ｄｄｌおよびｄｄＣ等の２′、３′ −ジデオキシチミジン類似体；ラサ熱ウィルス、ハンターン（Ｈａｎｔａａｎ）ウィルスおよびＲＳウィルスに対するリバビリン［登録商標ピラゾール（ｖｉｒａｚｏｌｅ）　］　；　ＨＩ　Ｖおよびヘルペスウィルス（ＣＭＷ、Ｈ５Ｖ、水痘ウィルス）に対して広域抗ウィルス活性を有する炭素環式ヌクレオシドであるシクロプツト（ｃｙｃｌｏｂｕｔ）−Ａ　、およびＲＮＡならびにＤＮＡウィルスに対して広範囲な活性を有する非環式ヌクレオシドであるホスホニル−メトキシエチルアデニン（ＰＭＥＡ）がある。これらの化合物の多くは、しばしば臨床の使用には毒性が強すぎること、および／または急速に薬剤耐性株ができることが判明した。上記のうち後者のウィルスでは、多くが匹敵する化合物、例えばＡＺＴとｄｄＣｌに対して交差耐性を示すようである。薬剤耐性の発生または毒性は、付加的および／または相乗的効果を狙った、組み合わせ療法（初めはＨＩＶに対するものであった）の採用に至った。Ｌａｒｄｅｒ、　Ｂ、Ａ、、　Ｐｕｒｉｆｏｙ。Ｄ、Ｊ、Ｍ、、　Ｐｏｗｅｌｌ、　Ｋ、Ｌ、およびＤａｒｂｙ、　Ｇ、　（１９８７）　Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄ、）　３２７：７１６−７＋７；　ＤｅＣＩｅｒｃｑ、　Ｅｒ１ｋ　Ｅ、　（１９８７）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　７：１０２３−１０３８参照。米国特許Ｎｏ、　４．３１５．００１に開示されている２−デオキシグルコース（２−ｄＧｌｃ）はもう１つの抗ウィルス剤である。この化合物は「外来のＪ　ＲＮＡウィルス（すなわち、米国に土着のものではないウィルス）に対してほとんど効果がなかった。これは、おそらく、Ｎ−結合グリコシル化が感染過程において重大な役割を果たさないように思われるがらである。（また、上記の後者ウィルスグループにはたった２〜３本のオリゴ糖鎖しがないことがあるという事実にもよる）。しかし、Ｂｌｏｕｇｈ、　Ｈ，Ａ、、　Ｋｅｆａｕｖｅｒ、　Ｄ。、　Ｃ１ａｕｓｅｎ、　！（、およびＨａｎｓｅｎ、　Ｊ、−３，（１９９１）　Ｐｒｏｃ、　Ａｍｅｒ、　Ｓｏｃ、　Ｔｒｏｐ、　Ｍｅｄ、　＆　Ｈｙｇ、　４５：１６８　Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ　（アブストラクト）は、最近、原始的な炭水化物新抗原の存在を報告しており、この抗原はサシチョウバエ熱つィルス（ＳＦＳ）および黄熱病ウィルス（ＹＦ）粒子上に〇−結合している可能性がある。これらのＲＮＡウィルスを上記の炭水化物に対する特異的モノクローナル抗体で前処理すると、これらブンヤウィルスおよびフラビウィルスは中性化された。ＨＩＶのＲＴに結合するより新しい薬剤、および融合を防ぎ、その結果ウィルスの侵入を防ぐグリコジル化阻害剤（例えば３−ｄＧＩｃ）が公知である。サイトヵイン（例えばインターフェロン）、調節遺伝子の阻害剤、インフルエンザウィルスの脱外波をブロックするアダマンチジン、およびレセプターレベルで標的化されるより新しい化合物もまた公知である。しがし、ここで明らかなことは、本発明の時点においては、主として推定上の毒性と「標的化」の欠如から、広域抗ウィルス剤は可能とは考えられなかっだのである。新しいアプローチの多くは遺伝子的および／または分子的なものであった。アンチセンスまたはナンセンスオリゴマー、ワクチンとして遺伝子工学的に作られたおよび／または合成のペプチド、および／または標的を定めたプロテアーゼ阻害剤、これらすべては単一のウィルス（すなわち、独特のまたは保存されたヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列を有するウィルス）を対象としている。本技術分野の現状を考えると、ウィルス感染を治療または予防するために、単独でまたは他の治療薬、特に他の抗ウィルス剤と併用して使用できる広域抗ウィルス剤をもつことが望ましい。併用療法に関しては、このような広域抗ウィルス剤は明らかに、現在使用されている抗ウィルス剤の毒性または副作用を減じるという恩恵をもたらし、その結果より良い治療指数をもたらすにちが本発明は、十分な量のＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を単独でまたは他の治療剤と併用して投与することにより、ヒト、動物およびトリのウィルス感染を治療しまたは予防する方法に関する。本発明はさらにヒトまたは動物のウィルス感染を治療または予防するための、有効な量のＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を含む医薬組成物および製剤を包含する。本発明は部分的に以下の発見に基いている。すなわち、ＰＡＬＡを単独で使用するとガンの治療には比較的効果がないと報告されているが、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａを抗ウィルス剤として使用すると効果がある。単独で使用するとＰＡＬＡは広域抗ウィルス活性を有し、また他の治療剤と一緒に作用する時は、ＰＡＬＡは付加的および／または相乗的効果を有する。他の治療剤には抗ウィルス剤および／またはウィルス複製の阻害剤が含まれるが、これらだけには限定されない。よって、本発明の目的は広範囲のウィルスに対して有効な抗ウイルス性化合物を提供することである。本発明のさらに１つの目的は、ウィルスがＰＡＬＡの効果を回避する可能性があるのを防ぐ併用治療法を提供することである。さらに、本発明の目的は、ＰＡＬＡおよび／またはＰＡＬＡと併用する治療剤の毒性低下を可能とする併用治療法を提供することである。本発明のもう１つの目的は、レトロウィルスを含むウィルスによって引き起こされた感染に苦しむ（または可能性としてそれにさらされている）ヒト、動物およびトリを治療する方法を提供することである。また、ヒト、動物およびトリにおけるそのような感染を予防する方法を提供することである（化学的予防法）。本発明のさらなる目的は、ウィルス感染に苦しむ（または可能性としてそれにさらされている）ヒト、動物およびトリを治療するための医薬組成物を提供することである。このような医薬組成物は、ヒト、動物およびトリにおけるそのような感染の予防にも効果がある。本発明の目的は、毒性レベルが低く、したがってより高い治療指数を有する広域抗ウイルス性化合物を提供することにある。さらに本発明のもう１つの目的は、単独で使用、または抗ウィルス剤および／またはウィルス複製の阻害剤を含むが、これらだけに限定されない他の治療剤と併用した時に、薬剤耐性ウィルス株に対して独特の有用性を持つ、広域抗ウィルス剤を提供することである。さらに本発明のもう１つの目的は、経口投与において抗ウィルス活性を示す、ＰＡＬＡの薬学的に許容される類似体を提供することである。本発明のこれらおよび他の目的は、本明細書の記述と添付の請求の範囲を読めば当業者には明白となろう。４、

【図面の簡単な説明】

図１は、ＤＨＰＣ（ガンシクロビル）と共にインキュベートした後の、上清のアッセイより回収したＡＤ１６９ＨＣＭＶ（ヒトサイトメガロウィルス）の力価のグラフである。図２は、ＤＨＰＧ、ＰＡＬＡまたはブラシーボと共にインキュベートした後の、超音波処理した細胞ペレットより回収したＡＤ１６９細胞結合ＨＣＭＶの力価のグラフである。図３は、ＤＨＰＧ、ＰＡＬＡまたはブラシーボと共にインキュベートした後の、上清のアッセイより回収したＨＣＭＶ臨床分離株の力価のグラフである。図４は、ＤＨＰＧ、ＰＡＬＡまたはブラシーポと共にインキュベートした後の、超音波処理した細胞ペレットより回収したＨＣＭＶ細胞結合臨床分離株の力価のグラフである。図５は、ＤＨＰＧ、ＰＡＬＡまたはプラシーボと共にインキュベートした後の、上清のアッセイより回収したＨＣＭＶのＤＨＰＧ耐性分離株の力価のグラフである。図６は、ＤＨＰＧ、ＰＡＬＡまたはブラシーボと共にインキュベートした後の、超音波処理した細胞ペレットより回収したＨＣＭＶ細胞結合ＤＨＰＧ耐性ウィルスの力価のグラフである。図７は、後述の実施例５の動物中に発見された硝子体炎の重症度を表す棒グラフである。図８は、実施例６の単一薬剤治療グループおよび併用薬剤治療グループにおける硝子体炎の重症度の平均を表す棒グラフである図９は、実施例７の治療グループに見られた硝子体炎の重症度の平均を表す棒グラフである。図１０は、実施例７の治療グループにおける視神経疾患の重症度の平均を表す棒グラフである。図１１は、ＰＡＬＡ投与群、ＰＡＬＡ＋リバビリン投与群、および対照群からなる治療グループのウィルス力価を表す棒グラフである。図１２は、それぞれＰＡＬＡ、リファンピシン、およびＰＡＬＡ＋リファンピシンの投与を受けた治療グループのワクシニアウィルスによる病変スコアをプロットしたものである。図１３は、それぞれＰＡＬＡ、リファンピシン、およびＰＡＬＡ＋リファンピシンの投与を受けた治療グループのワクシニアウィルスの力価の対数をプロットしたものである。５、発明の詳細な説明本発明は、ヒトおよび動物（トリを含む）における広範囲のウィルス感染を治療する方法であって、ウィルス感染の治療または予防を必要とするヒトまたは動物患者に有効な量のＰＡＬＡまたは薬理学的に活性なその類似体を投与することからなる方法を包含する。本発明の方法はまた、ＰＡＬＡと少なくとも１種の他の治療剤を混合物としてまたは時間をおいて投与する併用治療法をも包含する。本発明はまた、有効成分が化合物ＰＡＬＡまたは適切な類似体、および場合により混合物として少なくとも１種の選択された薬剤を含む、ヒト、動物およびトリにおけるウィルス感染治療に使用するための医薬組成物を包含する。本発明は、部分的に以下の発見に基いている。すなわち、単独で使用するとガンの治療には効果がないと報告されていたＰＡＬＡは、広域抗ウィルス剤として使用すると効果があるという発見である。単独で、または他の薬剤と併用して使用すると、ＰＡＬＡはヒト用の医薬としてもまた動物用の医薬としても有用な抗ウィルス剤として広範囲の効用を示す。５、Ｉ　ＰＡＬＡを用いたウィルス感染の治療ウィルスは、定義から判断すれば、必ず宿主細胞の機構を乗っ取り、現存の細胞内構造物（例えば、ポリソーム、小胞体、ゴルジ体）およびウィルスｍＲＮＡのテンプレートまたは転写物を産生ずるための特異的宿主細胞巨大分子（すなわち酵素、ｔ　ＲＮＡ等）を使用する細胞内寄生体である。ウィルスの核酸は特別なポリメラーゼを使って転写され、ウィルスのタンパク質は（構造タンパク質も非構造タンパク質も）ウィルスのｍＲＮＡを使って翻訳される。翻訳後の修飾（プロテアーゼによる開裂およびグリコジル化）が起こり得る。ウィルスの組み立ては初め（裸のヌクレオキャプシド）から、または脂質膜を使用して起こり、この膜に繰り返し表面突起部が埋め込まれる（糖タンパク質）。後者の場合は、エンベロープがヌクレオキャプシドを取り囲む。ＰＡＬＡを用いた本発明の治療法によって防御しやすいウィルスには、ＤＮＡおよびＲＮＡウィルス（ポジティブ鎖およびネガティブ鎖ウィルスの両方）を含むあらゆる型およびクラスの公知のウィルスが包含される。ＰＡＬＡはＤＮＡおよびＲＮＡウィルスに対して、および下記のものを含むがこれらだけには限定されないウィルス型に対して使用できる：アデノウイルスボックスウィルスワクシニアウィルス伝染性軟ゆう腫ウィルスワクシニアウィルス構築体ブンヤウイルスリフトバレー熱ウィルスサシチョウバエ熱つイルスデング熱ウイルスブンタ・トロ（ＰｕｎｔａＴＯ「０）フラビウイルス黄熱病ウィルス日本脳炎ウィルスヘルペスウィルスサイトメガロウィルス水痘ウィルスヒトヘルペスウィルス−６マレック病ウィルスウマ貧血ウイルスヘルペスウィルスｌおよび２ＥＢウィルス（Ｅ　Ｂ　Ｓ）バラミクソウィルスＲＳウィルス（ＲＳ　Ｖ）麻疹ウィルスバラインフルエンザウィルス牛痘ウィルスニューカッスル病ウィルスムンプス（おたふくかぜ）ウィルスオルソミクソウィルスインフルエンザ　Ａ（Ｈ２Ｎ２およびＨ３Ｎ２）　インフルエンザ　Ｂ（特定の株）Ｂ型肝炎他の肝炎ウィルス（まだ十分に分類されていない）Ａ型肝炎（ＨＡＶ）Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）Ｂ型肝炎（ＨＥＶ）ピコルナウィルスポリオウィルスコクサラキーウィルスＥＣＨＯウイルスロ蹄疫ウィルス（ＦＭＤＶ）（動物の）ライノウィルスラブドウィルス狂犬病ウィルストガウィルスベネスエラウマ脳炎ウィルスフィロウィルスエボラウイルスマールブルグウイルスパポバウイルスヒトパピローマウィルスラビウイルス風疹ウィルスオルビウイルスコロラドダニ熱ウイルスンユニンおよびマチュポ（Ｊｕｎｉｎ　＆　Ｍａｃｈｕｐｏ）ハンターン出血熱ウィルスコンゴ／クリニア出血熱ウィルスレトロウィルスおよびレンチウィルスＨＴＬＶ　１および２ＨＩＶ　１および２ここで用いる「ウィルス感染」または「ウィルス感染症」という用語は、ウィルスが健康な細胞に侵入し、細胞の再生機構を使って増殖または復製し、最終的にはその細胞を溶解し、その結果、細胞の死、ウィルス粒子の放出、および新たに作られた子ウィルスによる別の細胞の感染が引き起こされる疾患状態をいう。あるウィルスによる潜伏的感染もまたウィルス感染のありうる結果である。当業者であればこれらの用語との意味とそれが関連している疾患および／または感染症を理解できることは明白である。さらにここで用いる「ヒト、動物またはトリにおけるウィルス感染を治療または予防する」という表現は、特定のウィルスの複製を阻害するか、またはウィルスがその宿主の中でをれ自身を確立するのを防ぎ、そしてウィルス感染によって引き起こされた病状を改善または軽減することを意味する。これらのウィルスに対して使用する際は、ＰＡＬＡおよびその薬学的に許容される類似体は単独で、または他の治療剤と併用して使うことができる。ヘルペスウィルスに対して使用する際は、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａを他の治療剤、例えば抗ウイルス剤アシクロビルやガンンクロビル等とを併用することが望ましいと判明した。ヘルペスウィルスに対する併用治療法におけるＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体の使用は、現在行なわれている治療法よりも利点を提供する。例えば、現在これらのウィルス感染の治療に使われている抗ウィルス剤の毒性低下である。さらに、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体は、アシクロビルまたはガンノクロビル耐性株なとの薬剤耐性株に対して独自の効用を有する。さらに、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体は、例えばＤ　ＨＰ　Ｇまたはアシクロビルに対する薬剤耐性株の発生を引き伸ばす、またはブロックするのに有用であり得る。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体は、単独でまたは抗ウイルス剤リファンピシンなどと併用して、ワクシニアウィルスまたはワクチンを調製するのに使用されたワクシニアウィルスの構築物による感染を治療または予防するのに使用できることが発見された。このようなワクシニアウィルス構築体の使用がもたらす職業的災害は、これによって最小限となるであろう。一般に、免疫無防備状態の個人は、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体によって保護または治療され得る。また、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体は、ＲＳウィルスに対するｉｎ　ｖｉｖｏの単一薬剤療法においてリバビリンよりも効果的であることが分かった。ウィルス性肝炎の５つの主要型が同定され（ＣｏｎｓｏｌｏおよびＦｒｅｎｉ、　Ｎｅｐｈｒｏｎ　６１：２５２−２５４．１９９２）　、これらはウィルスの異なった分子グループを表す（ＤＮＡおよびＲＮＡの両方）。これらのウィルス性肝炎ウィルスはＡ型肝炎（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎（非Ａ非Ｂ型肝炎またはＨＣＶ）、Ｂ型肝炎（デルタエージェントまたはＨＤＶ）およびＢ型肝炎（ＨＥ　Ｖ）である。これらのウィルスに対しては、その遺伝子的および分子的多様性のために、広域抗ウィルス剤が理想的である。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を、単独で、または他の抗ウィルス剤を含む他の治療剤と併用で、Ａ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびＢ型肝炎によるウィルス感染を治療または予防するのに使用することは、本発明の範囲内である。特に、ＰＡＬＡは単独で、または肝炎における炎症性反応をブロックし、Ｂ型肝炎によるウィルス感染を治療または予防するのによく使用されるＤＨＰＧ　（ガンシクロビル）、ホスホノホルメート、３　Ｔ　Ｃ（ＢｉｏｃｈｅＩＩＰｈａｒｍａ　＆Ｇｌａｒｏ製）、α−インターフェロン（α−２ｂ　ＩＦ）またはステロイドと併用で使われる。ＰＡＬＡの広範囲な抗ウィルス活性を示すため、本発明者らは多数のウィルス（例えばフラビウイルス、ブンヤウイルス及びトガウィルスのような軍隊が連れてきたウィルス）に対して、またワクシニアウィルスを含むスクリーンでＰＡＬＡを試験した。後者のウィルスの存在は、生ワクチンを生産するのにベクターとしてワクシニアをその中に使うプラスミド構築体の広い利用のゆえに、独特な輸入品である。次に、実験をフラビウイルス、ブンヤウイルス及びトガウィルスから米国大陸の大衆の健康にとって重大なウィルス、例えばミクソウィルス、ヘルペスウィルス（ＣＭＶ、水痘）、パラミクソウィルス、および陽極性ＲＮＡウィルス（ピコルナウィルス）ならびにレトロウィルスへと拡大した。何らかの学説に制限されるものではないが、本発明者らは、ＰＡＬＡはピリミジン生合成の初期の段階（すなわちＡＴＣａｓｅ）を阻害してヌクレオチドプールを減少させることにより、またはウィルスＤＮＡポリメラーゼを阻害して後述の表１−３に示す活性をもたらすことにより、その抗ウイルス性効果を発揮するものと信じる。さらに、ＰＡＬＡを以下のウィルスに対して試験した。すなわち、アヒル肝細胞の初代培養におけるアヒルＢ型肝炎に対して、アフリカミドリザルにおけるサル水痘ウィルスに対して、アフリカミドリザルにおけるワクシニアウィルスに対して、ならびに１ｎｖｉｔｒｏおよびウサギにおける、ヒトサイトメガロウィルス（ＨＣＭＶ）に対して行なった。この結果は後述の実施例に示す。ＰＡＬＡは、達成される抗ウイルス効果を増強するために、他の治療剤と併用して使用することができる。そのような付加的抗ウィルス剤には以下のものが含まれるがそれらだけに限定されない。すなわち、ウィルス複製に関与する異なった対象分子に機能するもの、同じ分子の異なる場所に機能するもの、ウィルス耐性の出現を防止し、または減じるために再利用経路（後述）を阻害するもの、等である。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を併用療法に用いる際は、ＰＡＬＡは他の薬剤と分けて、しかし同時に投与することが望ましい。さらに、ＰＡＬＡは間欠的に投与することができる。ウィルスはそれ自体のＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼを有するが、より複雑なウィルス（例を挙げるとヘルペスウィルスおよびポックスウィルス）もまた、ヌクレオチド生合成に関与する個々の酵素、例えば宿主細胞酵素としても存在するホスホリボシルトランスフェラーゼまたはホスホリラーゼ等である。これらの酵素は、抗ウィルス剤の阻害効果を回避してピリミジン合成のための代替経路または再利用経路を与えることが可能である。したがって、ある種の腫瘍におけるように、抗ウイルス性化合物に対するウィルスの耐性が出現し得る。しかし、この可能性は、例えば以下のものを含むがそれらだけに限定されないヌクレオシド類似体をＰＡＬＡおよび他の抗ウィルス剤と共に使用する併用療法によって阻止することができる。すなわち、アデニンアラビノシド、アデニンアラビノシドモノホスフエート、イドクスウリジン、トリフルオロチミジン、アシクログアノシン、ブロモビニルデオキシウリジン、ブロモビニルデオキシアラウリジン（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　５ｑｕｉｂｂ製ＢＶａｒａＵ）　、　フルオロヨードアラシトシン、ＤＨＰＡおよびリバビリン（登録商標ｖｉｒａｚｏｌｅ）　、グリコジル化阻害剤（例えば２−ｄＧＩｃ）、プロテアーゼ阻害剤、インターフェロン、ジビリダモールおよびニトロベンジルチオイノシン等のヌクレオシド輸送阻害剤、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤［例えばリファンピシン（登録商標ｒｉｆａｄｉｎ　）］、および］チェーンターミネーター例えば、ガンシクロビル（ＤＨＰＧ）　、アシクロビル（ＡＣＶ）、ＡＺＴ、　ｄｄｅ、　ｄｄｌ］。後述の表１−３に要約した実験に加え、本発明者らはＰＡＬＡを他の抗ウイルス性化合物と併用して用いる実験を行なった。例えば、ＰＡＬＡをサシチョウバエ熱つィルスに対してリバビリン（登録商標ｖｉｒａｚｏｌｅ）と併用し、またＨ３Ｖに対する公知の抗ウィルス剤でヒトを対象として広範囲にわたる臨床試験を受けた２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２−ｄＧｌｃ）と併用した。Ｂｌｏｕｇｈ、　Ｈ，Ａ、およびＧｉｕｎｔｏｌｉ、　Ｒ，Ｇ、（１９７９）　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｍｅｄ、　Ａｓ５ｏｃ、　２４１：２７９８−２８０１参照。ＰＡＬＡはまた場合により、ワクシニアウィルスに対してリファンピシン（登録商標ｒｉｆａｄｉｎ　）と共に、　ＨＩ　Ｖ−１および２に対してＡＺＴ、ｄｄｌ、ｄｄＣおよびこれらの組み合わせと共に；インフルエンザウィルスに対してアダマンチジンと共に；ラサ島ウィルス、ハンターンウイルスおよびＣＣＨＦウィルスに対してリバビリン（登録商標ｖｉｒａｚｏｌｅ）と共に：水痘帯状庖疹ウィルスに対してアシクロビンＡＣＶと共におよびヒトパピローマウィルスに対してインターフェロン−αまたはフルオロウラシルと共に使用することができる。上記の実験の結果は、他のウィルス阻害剤と併用したＰＡＬＡは、各化合物の単独使用のときよりも高い阻害効果を達成することを実証した。例えば、２−ｄＧＩｃ自体はフラビウイルスに対して何ら効果をもたなかったが、ＰＡＬＡと２− ｄＧｌｃの併用ではＳＦＳに対する増強的な効果が見られた。さらに、ＰＡＬＡとＡＺＴを用いた併用療法は、治療を受けない対照群および単−抗ウィルス剤（ＡＺＴのみ、またはＰＡＬＡのみ）を投与されたＨＩＶ感染細胞に比較して、ＨＩＶ−１の複製において約２０％の付加的低下をもたらした。このＨＩＶ−１の複製低下は、ラジオイムノブレシピテーションまたはウェスタンプロット法（濃度計によって定量）を用いたｐ２４の減少量によって測定された。さらに、他の抗ウィルス剤を組み合わせたＰＡＬＡの使用は、片方または療法の有効成分のより低い投与量での使用を可能にし、そのため治療指数は上がり、毒性副作用は減少する。ＰＡＬＡは体液性免疫応答を、少なくとも腫瘍を持つ動物において、有意に変えるようには思われないので［Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｒ，に、、　Ｓｗｙｒｄ、　Ｅ、Ａ、および５ｔａｒｋ、　Ｇ、Ｒ，（１９７８）　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　３８：３７１−３７８参照］、本発明によるＰＡＬＡの使用は、ある種のウィルスに対する同時免疫感作（例えば不活性化ウィルスまたは合成ペプチドを免疫原とする適切なワクチンを用いる）を許すであろう。上記のように、遭遇する可能性のある問題は、突然変異または選択をへて、またはある種のウィルス（または細胞）の再利用経路をＤＮＡ合成に使用する能力のために、耐性株が生まれる可能性である。これらの再利用経路は、Ｈ３Ｖ感染細胞内で作用するようである。ゆえに、効果がない。さらに、ＰＡＬＡは血液脳関門を越えることができ、その結果、網膜および脳において比較的高濃度が達成される。したがって、ＰＡＬＡはＨＩＶによって誘発される脳炎、およびＣＭＶならびに水痘ウィルスによって誘発される網膜炎に対しても有効であることが実証され得る。５．２　ＰＡＬＡの予防的およびその他の使用法ＰＡＬＡは、ある「異国のＲＮＡウィルスｊが存在する地域へは入っていくヒトで、（そのウィルスについては）まだ免疫感作が利用できない、またはまだ効果がないヒトに対して、予防薬として用いることができる。また、多価の、遺伝子工学的に作製されるワクチンにワクシニアウィルス構築体を使用することがあり、このため患者またはラボの作業者にワタシニアウィスが広汎に広がる可能性は現実のものである。ＰＡＬＡのような薬剤単独またはリフアンピシン（登録商標ｒｉｆａｄｉｎ　）との組み合わせの受入れ易さは、治療医に介入への独自の機会を提供する。遺伝子工学的に作製されたウィルスに職業的にさらされている上記の個人の多くは、外来患者ベースで予防的にまたは治療的にＰＡＬＡによって処置され得るであろう。ＰＡＬＡはまた妊娠においても、もし奇形発生的作用がないのであれば、産周期のウィルス伝播を予防するために使用するという用途があろう。臓器または骨髄移植片はしばしばＣＭＶによって汚染されるので、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａは移植手術（例えば、化学療法を受けている腎臓および骨髄移植のレシピエンドならびにガン患者）に有効であろう。ドナーの組織内に存在するウィルスの複製を防ぐため、治療医の任意により、レシピエンドとドナーの両方が、例えば組織片または臓器片の贈与または受けとりの前に、ＰＡＬＡの単独または併用療法によって処置される。ＰＡＬＡは、ヒトに伝染するパラミクソウィルス（麻疹ウィルスを含む）に加え、ＲＳウィルス（ＲＳ　Ｖ）にも使用し得る。したがって、ＰＡＬＡは幼児の静脈内に、おそらくリバビリン（登録商標ｖｉｒａｚｏｌｅ）には必要な高価な陽圧機なしで、投与され得るであろう。さらに、フラビウイルス、トガウィルスおよびブンヤウイルスに対するＰＡＬＡの成果（表１参照）は、世界の遠隔の地で遭遇するかもしれないこれら「異国の」ウィルスに対する、新しい治療的および化学予防法的アプローチを提供する。ＰＡＬＡはエボラウイルス、マールブルグウイルスおよびラサ熱ウィルスに対して有効であるに違いない。さらに、動物において重要なウィルス、例えば口蹄疫ウィルス（ＦＭＤＶ）　、牛痘ウィルス、ニューカッスル病ウィルス、仮性狂犬病ウィルス、ウマ貧血ウィルス、およびウシ鼻気管炎ウィルスは、ＰＡＬＡを用いた介入により防御され得る。このようにして、ＰＡＬＡは家畜の流行病を予防または抑制でき、ウィルス性疾患に伴なうひどい経済的損害（家畜類、トリ、またはウマ、特に競争馬を含むがこれらだけに限定されない）を予防または軽減し得る。５．３　用量ウィルスに感染した動物、特にヒトを治療する場合、薬学上有効な量（例えばウィルスの複製を阻害するのに十分な投与量）のＰＡＬＡを投与する。−例を挙げると、ＰＡＬＡは注入液（ＩＶ）として１日につき約ｌ〜約１００ｍｇ／ｋｇを約１週間から約１か月間投与できる。望ましい投与量は、約２５〜約５０ｍｇ／ｋｇである。体表面積に基っ＜　ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体の１日あたりの同等な投与量は、約１００〜約６００　ｍ　ｇ　／　ｍ　’である。最も好ましい投与量は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇを１週間から約１か月間投与することである。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体の投与は、約１週間から約１か月間、好ましくは約７日から約ＩＯ日間にわたって投与すべきである。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体の最大血漿濃度が約５０〜約１００μｍとなるように、好ましい用量を投与する。これは、例えば、緩衝化された生理食塩水（約ｐＨ７，５）中の投与成分を約０．０５％〜約１０％含む無菌溶液を静脈注射することによって達成できる（医薬化学の分野において当業者に公知の任意の適切な生理食塩水を使用し得る）。望ましい血中濃度は、ＨＰ　Ｌ　Ｃによって測定される血漿レベルによって確認されるＰＡＬＡの継続的注入によって、維持することがてきる。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を使用する併用療法は、各薬剤の投与量を約２５〜５０％下げることによって行なわれる。主治医であれば、毒性または骨髄、肝臓あるいは腎臓の機能不全によっては、いかにして、またいつ療法を終わらせ、中断し、または低用量に変更すべきかを知っているであろうことに注意すべきである。逆に、もし臨床反応が十分てない場合、主治医は高レベルに治療を変更する（毒性を排除しつつ）ことも知っているであろう。上記の投与プログラムに匹敵するものを動物薬においても採用できる。ウィルス感染の急性または慢性管理における予防的または治療的なＰＡＬＡ投与量の大きさは、治療すべき症状の重症度および投与経路によって変わるであろう。ここで再度、臨床家または医師であれば、毒性または骨髄、肝臓あるいは腎臓の機能不全によっては、いつ療法を中断し、および／または用量を調整すべきが知っているであろうことに注意すべきである。投与量および、おそらくは投与回数も、各患者の年齢、体重および応答によって変わるであろう。一般的には、上述の通り、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体の１日の合計投与量の範囲は、ここに記載した大多数のウィルスについて、約１〜約１ｏ　Ｏｍｇ／ｋｇである。好ましくは、１日の投与量範囲は約５〜約７５ｍｇ／ｋｇの間であり、最も好ましくは約５〜約６０ｍｇ／ｋｇの間である。別の好ましい範囲は、１日当たり約２５〜約ｓｏｍｇ／ｋｇの間である。患者を管理するにあたって、治療は約５ｍｇ／ｋｇがら約１０ｍｇ／ｋｇの低用量から始め、その後患者各自の応答によって約２５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上に上げるべきである。さらに、幼児、子供、６５才以上の患者、ならびに腎または肝機能に障害のあるヒトには、最初は低用量を投与し、その後各自の臨床応答と血中濃度に基づきその用量を定めることを推奨する。いくつかの場合においては、当業者には明らかなことであるが、上記の範囲を逸脱した投与量を用いることが必要となることもある。「ウィルス感染を軽減または予防するのに十分な量」、「ウィルス感染を治療または予防するのに十分な量」または「抗ウィルス有効量Ｊ等の表現は、上述の投与量および投与頻度スケジュールを包含するものである。以下にさらに述べるように、患者に効果的な用量のＰＡＬＡを投与するため、任意の適切な投与経路を用い得る。例えば、経口、非経口（皮下、静脈内、および筋肉内）、直腸、経皮、腟、等への投与経路が使用できる。投与形態は、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁剤、座剤、溶液、カプセル、軟膏、パッチ、ミニパンプス（ｍｉｎｉｐｕｍｐｓ）　（Ａｌｚａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）　、等がある。５．４　医薬組成物ヒト、動物およびトリのウィルス感染の治療または予防に有用な本発明の医薬組成物は、有効成分として、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を含有する。これらの医薬組成物は、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体のほかに、他の抗ウィルス剤を含む他の治療剤を含有することができる。これらの新しい組成物は、ウィルス感染の治療のための併用療法を提供する。そのような併用療法は、付加的および／または相乗的の両方の効果を提供する。例えば、ＰＡＬＡを含有する医薬組成物は場合により少なくとも１つの他の治療剤を含むことができる。他の治療剤には、例えば、ヌクレオシド輸送阻害剤を含むヌクレオシド類似体、およびジデオキシヌクレオシドなどのチェーンターミネータ−がある。ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体と共に併用療法に使用するのに適切ないくつかの化合物を、Ｆｉｅｌｄｓ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　２ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ、　Ｒａｖｅｎ　１９９０：　Ｗｈｉｔｅ、　Ｄ、Ｏ，、およびＦｅｎｎｅｒ、　Ｆ、、　ｃｈａｐｔｅｒ　１１．　”Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｖｉｒａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ″ｉｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、、　０ｒｌａｎｄｏ、　Ｆｌａ、　１９８６に見出すことができ、これらの開示は参照としてここに組込んだ。本発明の範囲内でＰＡＬＡと共に併用療法に使用し得る適切ないくつかの化合物は、以下のものを含むがそれらだけに限定されない：２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２−ｄＧＩｃ）、デオキシノジリマイシン、アシクログアノシン、リバビリン（登録商標ｖａｒａｚ。Ｉｅ）　、リファンピシン（登録商標ｒｉｆａｄｉｎ）、アダマンチジン、リファブチン、ガンシクロビル（ＤＨＰＧ）　、３　＝−アジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴまたは登録商標ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）　、２−１３′−ジデオキシイノシン（ｄｄｌ）、２−、ｌ”−ジデオキシイノン（ｄｄｅ）、フルオロヨードアラシトシン、イドクスウリジン、トリフルオロチミジン、アデニンアラビノシド（ａｒａ−Ａ）　、ａ　ｒ　ａ−ＡＭＰ、ブロモビニルデオキシウリジン、ブロモビニルアラウラシル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ　５ｑｕｉｂｂ製ＢＶ−ａｒａＵ）、（１−β−Ｄ−アラビノフラノシドーＥ−５−［２−ブロモビニル］ウラシル））リマンタジン、アリルトン（ａｒｉｌｄｏｎｅ）　、ジアリルアミジン、（Ｓ）−９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−アデニン（ＤＨＰＡ）　、インターフェロン−α、ジピリダモール、ニトロベンジルチオイノシン、Ｓ　−（ｐ−ニトロベンジル−）６−チオイノシンおよびホスホノホルメート。本発明が包含する新規医薬組成物は以下のものを含むかつそれらだけに限定されない：　ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体およびリバビリン（登録商標ｖａｒａｚｏｌｅ）　；　ＰＡＬＡおよびリファンピシン（登録商標ｒｉｆａｄｉｎ）　；　Ｐ　Ａ　Ｌ　ＡおよびＡＺＴ　、ＰＡＬＡおよびｄｄ　Ｉ　、ＰＡＬＡおよびｄｄＣ，ＰＡＬＡおよびアマンチジン、ＰＡＬＡおよびアシクログアノシン；ＰＡＬＡおよび２−デオキシ−Ｄ−グルコース、ＰＡＬＡおよびデオキシノジリマイシン；　ＰＡＬＡおよびインターフェロン−α；ならびにＰＡＬＡおよびガンシクロビル。本発明はまた、ＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体および、場合により１つ以上の付加的治療剤を含有する、併用療法を提供するための医薬組成物を包含する。５．４．ｌ　ＰＡＬＡの調製ＰＡＬＡおよび多数のその類似体は、米国特許Ｎｏ、　４．１７９．４６４．　Ｎｏ、　４．２１５．０７０．　Ｎｏ、　４．２６７、１２６．　Ｎｏ、　４．３４８．５２２．　Ｎｏ、　４．１５４．７５９．　Ｎｏ。４D１７８、３０６および英国特許ＢＧ２００８１１６ならびにＧＢ２０５１０７０に記述の方法にしたがって調製することができる。これらの開示は全体を参照としてここに組み込んだ。あるいは、ＰＡＬＡはまたＧｌｏｅｄｅ。Ｊ、ら、（１９８８）　Ｐｈａｒｗ＋ａｚｉｅ　４３（６）：４３４；　Ｈｅｎｋｌｅｉｎ、　Ｐ、ら、（１９８９）ＤＤ２７２０９２　ＡＩ　５ｅｐｔ、２７，１９８９；　Ｋａｒａｒｓｋｉ、　Ｐ、ら、（１９８２）　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ３：２１９−２２１；　Ｍｏｎｔｅｒｏ、Ｊ、Ｌ、ら、（１９Ｂ２）　Ｅｕｒ、Ｊ、　Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、−Ｃｈｉｔｎ、Ｔｈｅｒ、１７（１）：９７−９９；　５ｔｉｅｂｉｔｚ、Ｂ、ら、（１９９１）、ＤＤ　２８６５８９　Ａ５Ｊａｎ、２１．　１９９１；　Ｇｏｏｄｓｏｎ、Ｊ、Ｊ、ら、（１９８０）　Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、　１（１２）：２７２１−２７２７に開示されている方法にしたがって調製することができる。これらの開示は、全体を参照としてここに組み入れた。５．４．２　ＰＡＬＡの類似体本発明のまた別の特定な実施態様では、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）の広範囲な類似体が広域抗ウィルス剤として使用し得る。当業者には明白であるが、ＰＡＬＡは強酸性の４つの水素原子（すなわち、２つのカルボン酸プロトンと２つのホスホン酸プロトン）を塩基性窒素置換基と共に有する。したがって、遊離酸、エステル、無機または有機塩官能基の間で多数の組合わせが可能である。このような可能性は、有機酸、塩、エステルまたはこれら官能基を結合している化合物を包含するＰＡＬＡの一般式の構造的提示（下記参照）があればよりよく理解される。ここで使用されているｒＰＡＬＡの類似体」という用語は、ＰＡＬＡからその利用可能な官能基を使用して作ることのできる任意の塩、エステルまたは他の誘導体を包含するものである。ここで使用しているｒＰＡＬＡ」という用語は、Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸のプロトンが付加されている酸、または薬学的に許容されるその類似体の両方を意味するものである。好ましい塩の１つは２ナトリウム塩である。もう１つは、後述の４ナトリウム塩である。ＰＡＬＡの類似体は、本発明の医薬組成物、中でも経口投与用の製剤において特に有用である。Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸（ＰＡＬＡ）の核上記に図示した一般的なＰＡＬＡ原子核において、Ｒは独立して水素、炭化水素、シラン、有機塩、無機塩およびこれらのあらゆる可能な組み合わせを表す。Ｒが炭化水素の場合は、その結果できる類似体はカルボン酸エステルまたはリン酸エステルといえる。その炭化水素基は、１〜２０の炭素原子をもつことができ、好ましくは１〜８で、その性状は環状、非環状、芳香族または脂肪族で、場合によっては水酸基、エーテル基、アミノ基、チオエーテル基、スルフヒドリル基、フルオロ基、などの官能基を含有することもある。適切な炭化水素置換基の例には以下のものが含まれるが、れそらだけに限定されない：メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、５ｅｃ−ブチル、イソブチル、１−ブチル、シクロへキシル、フェニル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、等。対応するシランエステルが得られ、ここでＲは当然トリアルキルシリル基（例えば、トリメチルシリル、トリーｔ−ブチルシリルまたはメチル−ジ−ｔ−ブチルシリル、等）のようなンラン基である。本発明はまた、ＰＡＬＡ類似体の調製および抗ウィルス剤としての使用をも意図している。本発明の特定の実施態様においては、ＰＡＬＡのアンモニウム、モノ −、ジー、トリーおよびテトラ置換アンモニウム塩が、ＰＡＬＡとアミンの間の単純な酸塩基反応およびイオン交換カラムを通すことを含むがそれらだけには限定されない、当業者には周知の方法で調製され得る。当業者にはすぐ分かるように、広範囲のアミンが、第１級、第２級または第３級を含むアミン塩の形成に活用し得る。実際、第４級アンモニウム基でも、ＰＡＬＡがすでに塩の形になってさえいれば、ＰＡＬＡの塩を形成し得る。もちろん、ＰＡＬＡのアミン塩は化学量論、つまり分子の別の酸性部分に存在する特定の塩基または置換基の強度によって、リン酸基のみと、１つまたは両方のカルボン酸基、またはＰＡＬＡ原子核（上記の図番照）のすべての酸性部分と会合することができる。ここに開示する種類のみに限定する意図はないが、読者の便宜のために以下のアミンを挙げる。他の適切な無機塩については、本明細書の別の箇所ですでに述べた。そのような無機塩は、炭化水素またはシランエステル基、および有機アミンによって例示される有機塩とともに存在し得ることを理解すべきである。このように、アンモニウムイオンという無機源（水酸化アンモニウム、ヨウ化アンモニウム、臭化アンモニウム、塩化アンモニウム等、およびアンモニウムそのもの）は有利に活用され得る。すでに述べたように、有機アミンもまた適切である。例えば、低級アルキル（Ｃ，−Ｃ，炭化水素など）アミン基は有用性が大きい。分子内にアミノ基と水酸基の両方が存在するアルカノールアミンは、特に意図される。したがって、メタノールアミン、プロパツールアミン、イソプロパツールアミン、ブタノールアミン、等が魅力的なアミン塩つまりＰＡＬＡの類似体を作る。同様に、ンアルカノール、トリアルカノール、またはテトラアルカノールアンモニウム基が意図される。アミノ基を含有する多くの化合物もまた意図される。たとえば、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、またはそれらのＮ−アルキル−１またはＮ−アルカノール−置換誘導体、等である。さらに、Ｎ−炭化水素置換基は、上記のエステル炭化水素基と同様に定義される。すなわち、それらの置換基は環状、非環状、脂肪族または芳香族で、場合によっては水酸基以外の官能基、エーテル基、アミノ基、チオエーテル基、スルフヒドリル基、フルオロ基、などを含有することもある。ＰＡＬＡまたはその類似体の製造のための説明的な方法が、以下の参照文献に非常に詳細に記述されており、その完全な開示を参照としてここに組み入れた：　５ｔｉｅｂｉｔｚら、　ＤＤ　２８６５８９　Ａ５　（１９９１）；　Ｈｅｎｋｌｅｉｎ　ら、ＤＤ　２７２０９２　Ａｌ　（１９８９）；　Ｃ１ｏｅｄｅら、Ｐｈａｒｍａｚｉｅ４３（６）：４３４　（１９８８）；　Ｍａｏ　ら、　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、２７（２）：１９７− ２０２（１９８５）；　Ｋａｆａａｒｓｋｉら、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ３：２１９ −２１　（１９８２）；Ｇｏｏｄｓｏｎら、Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、Ｐｅｒｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、１（１２）＋２７２１−７（１９８０）ＨＭｏｔｅｒｏ　ら、Ｅｕｒ、Ｊ、　Ｍｅｄ、Ｃｈｅａ＋、−Ｃｈｉｔ　Ｔｈｅｒ、１７（１）：９７−９（１９８２）；　５ｔａｒｋｓ　ら、ＤＢ　２８４９３９Ｂ　（１９７９）；　Ｂａｋｕｎｉａｋ　ら、Ｊ、Ｅｎｖｉｒａｎ、Ｓｃｉ、Ｈｅａｌｔｈ、Ｐａｒｔ　Ｂ　Ｂ１８（４−５）：４８５−９６（１９８３）；　Ｃｏ１１ｉｎｓ　ら、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ＋＋＋、　２４６（２１）：６５９９−６０５（１９７１）。５、　４．　３　医薬組成物本発明の医薬組成物は、有効成分としてＰＡＬＡまたは薬学的に許容されるその類似体を含むが、さらに薬学的に許容されるキャリアーと場合により他の治療成分を含有することができる。すでに述べたように、［薬学的に許容される類似体」という表現はＰＡＬＡの塩、エステル、および他の誘導体を含む。塩は薬学的に許容される非毒性の酸または塩基（無機酸または塩基、および有機酸または塩基を含む）から調製される。このような塩には、ナトリウムまたはカリウム等のアルカリ金属塩、およびアルカリ土類金属塩またはアンモニウム塩が含まれる。ＰＡＬＡの種々の塩は、前述の５ｃｈｕｌｔｚら、およびＰａｒｓｏｎらの特許に見出すことができる。さらに、本発明の化合物は両性なので、塩は薬学的に許容される非毒性の酸または塩基（無機および有機の酸または塩基、および金属を含む）から調製することができる。本発明の化合物として適切な、薬学的に許容される塩基付加塩は以下のものを含むが、それらだけに限定されない。すなわち、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛より作られた金属塩、またはＮ、Ｎ”−ジペジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジェタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから作られた有機塩である。好ましい塩は、ＰＡＬＡの４ナトリウム塩で、もう１つの好ましい塩はＰＡＬＡの２ナトリウム塩である。本発明の１つの実施態様には、経口、直腸、経皮、局所、腟、および非経口（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に適した調製物が開示されている。どの場合においても、最も適切な投与経路は、治療すべきまたは予防すべきウィルス性疾患の性質および重症度によって決まるのであるが。さらに、小児用組成物も本発明の範囲に入り、そこでは矯臭剤の添加と投薬量を下げることが必要となろう。好ましい投与経路は静脈注射である。本発明の組成物は投薬単位剤形として便利に提供することができ、また、医薬化学の技術谷野における周知の任意の方法で調製できる。実際の使用では、有効成分としてのＰＡＬＡは通常の製薬調合技法にしたがって製薬キャリアーと混ぜ合わせて、よくまざった混和物とする。キャリアーは、投与に所望される剤形、例えば経口か非経口か、によって多様な形を取り得る。この組成物を経口投与剤形に調製するにあたっては、任意の通常の製薬手段を使用し得る。通常の製薬手段には、例えば、経口液体調製物（懸濁剤、溶液、エリキシル等）の場合は、水、グリコール、油、アルコール、矯臭剤、防腐剤、着色剤、等；エアロゾル剤の場合には、粘膜を介しての輸送のための界面活性剤；または、経口固形調製物（例えば、粉剤、カプセル剤、および錠剤）の場合は澱粉、砂糖、微小結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、等のキャリアーがある。経口固形調製物は、経口液体調製物よりも好ましい。最も好ましい経口固形調製物は、錠剤またはカプセル剤の形をとるものである。直腸に投与する調製物はカーポワックス組成物の形で調製することができる。錠剤とカプセル剤は投与が容易なので、この２つは最も有利な経口投薬単位剤形である。この場合には固形製薬キャリアーが使用される。所望であれば、標準的水性または非水′性技法により錠剤をさらにコーティングすることができる。上記した普通の投薬剤形に加えて、本発明の化合物は、制御された放出手段および／またはアルゼット（登録商標Ａｌｚｅｔ）浸透ポンプ（Ａｌｚａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより入手可能）を含む輸送手段によっても投与し得る。適切な輸送手段は、米国特許Ｎｏ、　３．８４５．７７０．　Ｎｏ、　３゜９１６、８９９．　Ｎｏ、　３．５３６．８０９．　Ｎｏ、　３．５９８．１２３．　Ｎｏ、　３．９４４．０６４およびＮｏ、　４．００８、７１９に記述されており、その開示を参照としてそのままここに組み入れた。経口投与に適する本発明の医薬組成物は、その各々があらかじめ定められた量の有効成分を含有している別個の単位として（例えば、カプセル剤、カシェ剤、錠剤、またはエアロゾルスプレーとして）提供することができる：粉剤または顆粒剤として；溶液または、水性液体、非水性液体、水中油滴型エマルジョン、または油中水滴型液体エマルジョン中の懸濁剤として；または適切な軟膏に入っている局所または膣投与用の調製物として。このような組成物は、薬学で使用されている周知の方法のうち任意の方法によって調製できる。しかし、すべての方法は有効成分を、１つまたはそれ以上の必要成分を構成するキャリアーと組み合わせる過程を含んでいる。一般に、これらの組成物は、均一かつ十分に有効成分を液体キャリアーまたは微細に分割した固体キャリアーまたはその両方と混和し、次に、必要であれば所望の形に産物を形成することによって調製される。例えば、錠剤は圧縮または成形によって、場合により１つまたはそれ以上の補助的成分と共に調製される。圧縮錠剤は、粉末または顆粒等の自由流動形の有効成分で、場合により結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、界面活性剤または分散剤と混合されたものを、適切な機械で圧縮して作製することができる。成形錠剤は、適切な機械で、粉末化した化合物の混合物を不活性液体希釈剤で湿潤化したものを成形することによって作製することができる。好ましくは、錠剤１個が約１００ｍｇから約５００ｍｇの有効成分を含有し、そしてカシェ剤１個またはカプセル１個かは約ｌｏ。ｍｇから約５００ｍｇの有効成分ＰＡＬＡを含有する。最も好ましくは、錠剤、カシェ剤またはカプセルが次の３つの投薬量のうち１つを含有する：約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、または約５００ｍｇの有効成分。本発明の化合物は特にカプセル化（例えば、リボゾームの中）、またはタンパク質キャリアー等との架橋に適している。この性質をもついくつかのデリバリ−システムが“Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｏｆ　Ｄｒｕｇｓ”、　ｅｄｉｔｏｒ　Ｒ，Ｌ、　Ｊｕｌｉａｎｏ、Ｖｏｌｕｍｅ　５０７、ＡｎｎａＩｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　（１９８７）に記述されており、その開示は参照としてここに組入れられた。以下に列挙する組成物は、静脈、皮下、または筋肉注射に適する。適量のＰＡＬＡを添加した、ＥＤＴＡ（１，０＋ｎｇ／ｍｌ）を含む滅菌した、２５　５０　１００発熱物質不含のＨ２Ｏ（全５＋ｎｌ）　ｍｇ／ｍｌ　ｕ＋ｇ／ｎｌ　ｍｇ／ｍ１（ＰＡＬＡを含有する）適当な錠剤またはカプセル剤組成物を処方　錠剤】個当たりの量（ｍｇ表示）活性成分ＰＡＬＡ　２ナトリウム塩　１００　２００　５００５．５　組み合わせ治療の評価のための動物モデルシステム以下の動物モデルシステムは、ＰＡＬＡ及びその類似物を使用する種々の治療法を上述のいずれかの化合物と組み合わせた際の効力を評価するために使用しうる。５、５．　ｌブンヤ及びフラビウイルスに対するマウスモデルシステムブンタ　トロ　ウィルス（Ｐｕｎｔａ　Ｔｏｒｏ　ｖｉｒｕｓ）　：先に、リバビリン（ピラゾール（登録商標））（陽性のコントロールとして使用）及びリバミジンについて記載したとおり、３周令のＣ５７ＢＬ／６　マウス（９，６〜１３．６ｇ）にプンタ　トロ（アダムス）ウィルスを２１日間皮下（Ｓ、　Ｃ，）接種して引き起こした肝親和性の感染に対する化合物のｉｎ　ｖｉｖＯ評価を行なう。シトウェル（Ｓｉｄｗｅｌｌ）ら、（１９８８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、、３２　：　３３１−３３６゜日本脳炎ウイルスニ１２〜１４ｇの重さの１０匹のＣ５７Ｂ１／６マウス（ＶＡＦ”　、チャールズ　リバー　ラボ）の群に、ウィルス感染の前の日（−１日）に第１回目の用量を投与しつつ、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）又は薬物で毎日２回（ｂ、ｉ、ｄ）、５日間ｉ、ｐ、処理する。各群の１０匹の動物のうちの５匹は、第１回目の化合物の用量の投与（第０日）の後で、希釈したコントロールにおいて１００％死を生じしめるのに十分なｌＯ〜１００　ＬＤ、。のＪＥウィルス（北東系）にＳ、　Ｃ，感染させる。コントロールは、未処理、未感染マウス；未処理、ウィルス感染マウス、希釈処理、ウィルス感染（及び未感染）のマウスを含む。ポリ（ＩＣＬＣ）、リバリビン（登録商標）を陽性の処理コントロールとして使用する。ウィルス感染の後６日目（＋６日）に、ウィルス力価のため感染マウスから脳を採取した。脳の懸濁液（１０％Ｗ／Ｖ）についてベロ（Ｖｅｒｏ）細胞培養においてプラークアッセイにより力価の測定を行う。体重量は一１日目から千６日目まで記録する。重量変化は、薬物毒性の尺度として測定される。５．５．２　ＨＣＭＶに対するウサギモデルシステム合計２０匹の着色したウサギをこの研究のために使用する。動物は、正常の目の形態及び既存の病状の不存在を確認するために、スリットランプ及び間接検眼鏡検査法により観察する。動物は以下のように処理する：［１１０日目１．：、ｔヘテノウサキｉ、：１０’　（７）ＰＦＬＩ　ＨＣＭＶ系ＡＤ　１６９を接種する（ミドビトリオール（＋＋＋１ｄｖｉ　ｔｒｉｏｌ）注射）。（２）動物は別々のかごに入れ、脈絡網膜性のＨＣＭＶ疾病の発症および進行を接種後第２日にモニターする。接種後第２日に、ＨＣＭ　Ｖ−接種の動物は、匹敵する脈絡網膜性疾患の点数を有する４つの動物群に分け、次に記載するような静脈内治療を受ける第１群−５匹、接種後第２．　３．　４．　５及び６日に毎日２回に分けた用量で薬物を静脈内投与する。薬物の濃度は、インビトロアッセイで決定したＥＤ９０値の％である。第２群−５匹、接種後第２．　３．　４．　５及び６日に毎日２回に分けた用量で、薬物を静脈注射する。薬物の濃度は、インビトロアッセイで決定したＥＤ９０値である。第３群−５匹、接種後第２．　３．　４．　５及び６日に毎日２回の用量に分けた用量で、薬物を静脈注射する。薬物の濃度は、インビトロアッセイで決定したＥＤ９０値の１〜２倍である。第４群−５匹、接種後第２．　３．　４．　５及び６日にプラセーボ　（滅菌食塩水）を静脈注射する。（３）全ての動物は臨床上のＨＣＭＶ病の進行を評価するために毎日、間接検眼鏡検査法試験を受ける。間接検眼鏡検査法試験は、ウサギに与えた治療を隠して、２人の判断により別個になされる。（４）全ての動物は接種後第８日に殺す。脈絡網膜及び虹彩組織及び眼の硝子液（及び成る場合には肺組織）試料をとり出し、Ｈｓ６８細胞の単層上での細胞超音波アッセイによりＨＣＭＶを回収するために処理する。選択した組織試料は、処理及び未処理の群におけるＨＣＭＶ−誘引の眼疾病を評価するために、組織学的に処理する。すべての薬物処理、静脈治療群についてウィルスを回収するとともに、臨床的及び組織学的な結果が評価され、互いの群及びプラセーボ治療を受けた群との相関関係が算定される。この研究結果から、ＣＭＶ誘引の網膜炎のための静脈治療として使用するための最適の薬物濃度が選択できる。５．５．３　Ｒ３Ｖに対する霊長類モデルＲＳＶに血清学的に陰性の２３匹の若い、アフリカミドリザルを使用４−る。すべての動物は霊長類センターの一室で別個のかご中に飼われる。それらは、５０〜６０％の相対湿度、７５″±３°Ｆの温度に維持される。ブリナ（Ｐｕｒｉｎａ）猿の食物及び水は自由に与えられ、動物は毎日、臨床的症状及び食物の消費がモニターされる。実験の終了時に、全ての動物をボイサンシア（Ｂｅｕｔｈａｎｓｉａ）　Ｄスペシャル（安楽死溶液、シエーリング社）でケタミノ麻酔時に殺し、剖検する。Ｒ８ｖの２つの株を使用する；Ｉつは長形の株（ＡＴＣＣＶＲ−２６）で、２つ目はゲイルウェルツ博士（Ｇａｉｌ）、バーミンガムのアラバマ大学、医学校により提供されたオーストラリア人Ｒ３Ｖ分離体に由来するものである。このウィルスをアフリカミトリ猿に２度投与し、Ｂ５Ｃ−４０細胞（アフリカミトリ猿の腎臓）において保存用プールとして調製する。ウィルスのプールはおよそ１０’ ＴＣＩＤＩ。／ｍＬの力価を有しており、−７０℃に維持される。ウィルス接種は、気管内カーテル（１，０ｍ１）及び鼻内滴注（１，０Ｄ１１）により投与される１０−　’又はｌｏ−２のストックＦＳＶ希釈液から構成される。のどの分泌物を毎日採取し、１．　Ｏｍｌの組織培養液（１０パーセントのウシ胎児血清及び抗生物質を有する最少必須培地）中に入れる。力価測定は分泌物から液体を圧搾した後、１．０ｍ１の培地上で実施される（第１表）。力価測定は各試料の階段１０倍希釈液を調製し、Ｂ５Ｃ−４０細胞をまいた２４ウエルプレートの二重ウェルに各希釈液を接種することにより実施される。力価はウィルスにより誘引される細胞病理学について培養物を顕微鏡的に試験することにより得られ、この力価はｍｌ当たりのＴＣＩＤ、。とじて表現される。肺の小部分を剖検時に各々の猿から取り出し、重量を測定し、ガラスの組織粉砕器ですりつぶしてｐＨ７，２のリン酸緩衝食塩水中の１０％ホモゲネートとし、この０．１ｍｌを血液寒天上で培養し、細菌学的評価を行う。このホモゲネート及び肺洗浄物の一部をＢＳ（、−４０細胞中のウィルスの力価測定のために１０倍希釈液に希釈する。著しい変化が記録され、次いで空気通路に１０％の緩衝化されたホルマリンを潅流させる。次に組織試料を気管及び鼻腔から集め、完全な肺構造体を１０％の緩衝化されたホルマリンに浸す。固定後４８時間して、各肺葉ごとに切片をつくり、気管及び鼻甲介（ｔｕｒｂｉｎａｔｅｓ）を標準パラフィン手法を使用して処理し、４〜６μに切断し、ヘマトキシリン−エオシン（ＨＥ）で染色する；一部の切片は過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）及びイムノパーオキシダーゼにより猿に対するヤギ産生ポリクローナル抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｃ３）（ノルディックイムノロジックラボラトリ−、キャピストラ、ビーチ、ＣＡ）及びヒストマーク（）ｌｉｓｔ＋ｎａｒｋ）　、イムノパーオキシダーゼキット（キルケガードアンドペリーラボラトリー（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ　ａｎｄ　Ｐｅｒｒｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｇａｉ　ｔｈｅｒｂｕｒｇ、　ＭＤ）を使用して染色する。大きな変化及び顕微鏡的変化をウィルス力価とともに評価する。イムノパーオキシダーゼ手法は、Ｒ３ＶのＡ−２（ウェルツ）株で顕著に見られる基部の膜変化を明確にするために使用する。本発明は、さらに、この発明を記述する以下の実施例を参照して明確にされる。本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、材料及び方法に対して多くの修正がなし得ることは当業者にとって明らかであろう。ＰＡＬＡは２ナトリウム塩の結晶性粉末として入手した。これは防化学線作用をもつガラス製品中に保存し、滅菌水中又は１％の牛血清アルブミンを（１０Ｘ又は１００Ｘの溶液として）有する最小イーグル培地中に溶解した。全ての溶液をミリポアのフィルタ−を通して通過させることにより滅菌した。次のセルラインを使用した：べ口（Ｖｅｒｏ）又はＣＥＭ　；　Ｈｅｐ−２及びヒト包皮細胞。ウィルス抑制は、パラエルらの（１９８８）　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０　：　３０９−３２１　（ここに記載された開示は参考として取り入れられる。）に記載された方法により、３−（４，５−ジメチル−チアゾール− ２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムプロミド（ＭＴＴ）を使用して測定された。６、１．２　インビトロの抗ウィルス及び細胞毒性アッセイすべてのアッセイは、ＨＩＶ−１アツセイにおいてＯＥＭ細胞を使用することを除いて、ベロ細胞で実施した。化合物は、以下のウィルス（ウィルス株）に対して抗ウイルス効果を評価した；ａ）日本脳炎ウィルス、ＪＥ、（申出）；ｂ）黄熱病ウィルス、ＹＦ（アシビ）；　Ｃ）サシチジウバエ熱ウィルス（Ｓａｎｄｆｌｙ　ｆｅｖｅｒ）、Ｓ　Ｆ　、　（Ｓｉｃｉｌｉａｎ）　；　ｄ　）ブンタ　トロウィルス（Ｐ　Ｔ）、（Ａｄａｍｅｓ）　；ｅ）ベネズエラウマ脳を髄炎ウィルス（Ｖ　Ｅ　Ｅ）　、（Ｔｒｉｎｉｄａｄ　ｄｏｎｋｅｙ）；　ｆ）ワクチニアウィルス（ＶＶ）　（Ｌｅｄｅｒｌｅ　ｖａｃｃｉｎｅ）　；　ｇ）デンジ４型（カリブ）ウィルス；ｈ）ヒト免疫不全ウィルスｌ型又は２型、ＨＩＶＩ又は２゜ウィルス（ａ〜ｆ）は、薬物が評価されるための標準グループを含む。試験化合物のインビトロ抗ウィルス及び細胞毒性作用は、ａ）ＭＴＴアッセイ［ＪＥ、ＹＦ。ＳＦ、ＰＴ、ＶＥＥ、ＶＶ及びＨＩＶ−１ウイルスコ、バラエルら、　（１９８８）　ＪＪｉｒｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０　：　３０９−３２１を使用してウィルスの細胞変性作用の抑制を観察することにより、又はｂ）一般のプラーク還元アッセイ（他のすべてのウィルス）のいずれかにより測定した。本明細書で使用される基本的な測定及び定義は次のものを含む：（ａｌ　細胞毒性又は５０％濃度、Ｔ　Ｃｓ　ａ、はＭＴＴアッセイにおける二重試験ウェルにおいて未感染のコントロール細胞の生存力に比べて細胞数又はその代謝活性を５０％減少させる薬物の濃度（μｇ／ｍｌ）として定義される。（ｂｌ　ウィルスの抑制濃度５０％、Ｉｃｅ。は３重の試験ウェルにおいてウィルスの細胞毒性作用が５０％だけ減少するのが観測される薬物の濃度（μｇ／＋ｎｌ）として定義される。治療（又は抗ウィルス）指標、ＴＩは全体的なインビトロ活性に比例する値である。それは、（ＴＣ，。／Ｉ　Ｃ，。）の比として計算される。これは、同じ試験及び同じ時間内での化合物の相対的な抗細胞及び抗ウィルス作用の単一薬物濃度測定である。記載されているすべてのインビトロのＭＴＴアッセイ結果は、２〜６の個別試験結果の平均を表わす。６．１．３結果上述のアッセイ方法は、ウィルス複製及び毒性レベルの両方の測定を可能にする。生存している細胞はＭＴＴテトラゾリウムを青色のＭＴＴホルマリンに（ミトコンドリア酵素を使用して）変換させる：死細胞はこの変換を行うことができない。加えて、スクリーニングは、さらに、（光学顕微鏡による）通常の細胞病理学及び毒性アッセイにより補足した。一連の濃度のＰＡＬＡを、細胞シートをウィルス感染させる前に１６時間ＰＡＬＡで予め処理することを除き、前述のようにアッセイした。（例えば、クマラサミイ（Ｋｕｍａｒａｓａｍｙ）　Ｒ１及びブラフ（Ｂｌｏｕｇｈ）　、Ｈ，Ａ　らにより記載された方法（１９８４）　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　１３８　：　１５６−１６１を参照のこと）適当な抑制剤及びウィルスコントロールが使用され、毒性が評価された。治療指標は前述のように通常の方法で計算された；フラビー、トガ−及びブンヤウィルス（ＲＮＡウィルス）のスクリーニングの結果は、第１表に示される；同様に、これらのウィルスについての確認データは第２表に示される。注　Ｔｌは治療指標、即ちＴＣ／ＩＣである；ａ）５０％抑制におけるμｇ／＋ｎｌ；ｂ）５０％抑制におけるμｇ／＋ｎｌ；ｃ）　５０％抑制　；　ｄ）　９５％抑制注　Ｔｌは治療指標、即ち、ＴＣ／ＩＣである；ａ）５０％抑制における　μｇ／ｎｌ；ｂ）５０％抑制におけるμｇ／ｗＩｌ；ｃ）５０％抑制　；　ｄ）　９５％抑制インビトロでのＰＡＬＡ単独の結果は不明瞭である：　ＰＡＬＡは（ＶＥＥを除いて）これらＲＮＡウィルスのすべてに対して約１０から約２５μｇ／ｍｌの濃度で広域スペクトルの抗ウィルス活性を有し、又、約３２０μ ｇ／ｍｌより大きいＴＣ，。値で確認されるように試験したすべてのシステムにおいて最小の毒性を有している；こうして、ＰＡＬＡは大多数の試験したウィルスに対して約２０から約３０の治療指標（ＴＩ）を有している。この研究は、ＤＮＡウィルス及び他のＲＮＡウィルス（陽性及び陰性鎖（ｓ　ｔｒａｎｄｅｄ）のウィルス並びにレトロウィルス）に拡大したとき、４個のＤＮＡ−含有ウィルスの３個が同等にＰＡＬＡによる抑制に感受性であることを示した。ヘルペスウィルス−１及び２（これに対しては何らの抑制活性も観察されなかった。）を除いて、ＰＡＬＡは約ｌＯμｇ／ｍｌの濃度で上記の全てに対して活性を示した。ＲＮＡ陽性鎖ウィルスのコクサッキ−（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ）　Ｂ３は、第３表に示されるように５０％抑制のために約３３μｇ／＋ｎｌを必要とした・これらの大部分のウィルスに対する治療指標は約３２であった。＊　ヒト包皮フィブロブラスト；（ａｌ　５０％抑制７、実施例２アヒル肝炎モデル（ＤＨＢＶ）を用いて、アヒル初代培養肝細胞を様々なａ度のＰＡＬＡ　にナトリウム塩）で処理し、細胞変性効果を評価した。さらに、ウィルスＤＮＡ複製を、「スロット（細孔）」　ドツトプロット法を用いて評価した。４０−５０μＭの濃度で、プラークの５０％減少が観察され（ＩＣ！。）；高濃度、すなわち５００μＭでは、毒性はないか、あっでもわずかで、９５％阻害を示した。このような実験を３回行い、結果を確認した。８、実施例３以下の項では、アフリカミドリザルをサル水痘ウィルスに感染させ、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ、アシクロビルまたは両者の組合せで処置する実験を説明する。その結果は、ＰＡＬＡが、アシクロビルと組み合わせた場合、特に感染サイクルの最終段階で発疹を減少させ、ウィルス血症を最低に抑えることを示す。高濃度では、ある程度の濃度依存性免疫抑制が認められた。さらに、ＰＡＬＡはＢＶ−アラＵ　（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　５ｑｕｉｂｂ）との曲性れた相乗効果を示した。８．１　材料および方法１５匹のアフリカミドリザルの体重を測定し、臨床化学的、血液学的基準値をめるために採血した。これらのサルは、サル水痘ウィルスに対する抗体を持たないことがあらかじめ明らかになっていた。サル水痘ウィルスの３．７ＸＩＯ’プラ一ク形成単位（ＰＦＵ）を気管内に接種することによって、１５匹のサルをそれぞれサル水痘ウィルスに感染させた。サルを３匹ずつ５グループに分け、第４表に示すような処置群に割当てた。実験記録から次のような処置群トなった。感染コントロールとして使用するコントロールのサルは、毎日２回、１．Ｏｍｌ／ｋｇ体重のリン酸緩衝塩類溶液を投与する静脈注射を受けた。第２群の３匹のサルは、伏在静脈への静脈ポーラス注射によって、５０ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡの投与を受けた。第３群は、同様の方法で投与され、より少ない用量の２０ｏ＋ｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡを与えられた。また、やはり伏在静脈への静脈ポーラス注射によって、効果の不十分な用量であるＩＯ＋ｎｇ／　ｋｇ／日のアシクロビルで処置が施された。第５群の３匹のサルは、ＰＡＬ　Ａ　２０Ｂ／　ｋｇ／日とアシクロビル１０ｍｇ／ｍｌ／日を組み合わせた処置を受けた。処置−回毎に反対側の静脈に薬剤を注射した。薬剤溶液は、毎日、処置の前に調製した。ウィルス接種の２４時間後に処置を開始した。ＰＡＬＡは、　１００ｍｇ／ｍｌで５ｍｌ入りのバイアル中の溶液として提供された。３本のバイアルの内容物を集め、集めた薬剤のうち７ｍｌを２８ｍ１に希釈して２５ｍｇ／ｍｌとした。上記溶液５ｍｌを５０ｍ１に希釈して１０ｍｇ／ｍｌとした。−日の総用量が５０または２０＋ｎｇ、／　ｋｇ／日となるように、毎日２回薬剤を投与した。８ｕｒｒｏｕｇｈｓ　Ｗｅｌｌｃｏｍｅより提供をうけたアシクロビルを、２００ｍｇに計り分けた。これを５ｍｌのＰＢＳで希釈し、１ＮＮａＯＨでｐＨを１１．０に調整して溶液とした。次に、これを４０ｍ１に希釈して５ｍｇ、／ｍｌの溶液とし、濾過により滅菌した。用量が１０ｍｇ／ｋｇ／日となるように、体重ｋｇあたりｌ＋ｎｌを毎日２回静脈注射により投与した。接種後２，５，７，９．および１１日回し、２ｍｌ血液をヘパリン中に採取することに誹って、サル水痘感染の臨床経過を追った。２ｍｌ検体中のリンパ球をフィコール−ハイバーク密度勾配で分離し、Ｒ１’Ｍ＋−１６４０培地で２回洗浄し、１０ｍ１の上記培地中に懸濁した。１０ｎ＋１の容量を、２４時間前にＶｅｒｏ細胞を播種した二つの２５ｃｎｆ組織培養フラスコに分注した。接種の５〜７日後、フラスコから培養液を捨て、細胞単層をメタノールで固定し、メチレンブルー−塩基性ツクシンで染色した。乾燥後、各フラスコのプラーク数を数え、二個−組のフラスコのプラー・り数の平均をめ、これを、血液ｍｌあたりのウィルス血症の程度を量的に表すものとして表現した。発疹は、重症度を±から４＋まで主観的に記録することによって、毎日評価した。±の記録は、１０より少ない水泡がサルの皮膚に見られたことを示し、他方、４＋は、体表面の大部分を覆う移しい水泡を表す。全体的な臨床症状を毎日評価し、毎日消費される食料ビスケットの数を数えることにより食欲不振に注意を払った。実験途中で死亡したサルを剖検し、典型的な病理学に基づいて、サル水痘が死亡原因であると判定した。基準となる血液学的、および臨床化学的検査を、ウィルス接種の三日前、およびウィルス接種の直前である０日に再度、行なった。サル水痘ウィルスの接種後、血液学的、および臨床化学的検査のために、３．　７．　９および１１日回し採血した。ウィルス接種後Ｊ４および２１日日目採血し、抗体を定量するために血清を分離した。抗体価は、プラーク抑制アッセイを利用した血清中和試験で得られた。抗体価は、血清を添加しないコントロール培養で生じるプラーク数からプラーク数として８０パーセント抑制をもたらす血清の希釈倍率で表される。８．２結果第４表は、毎日の発疹の評価に関するデータを提供する。３匹のコントロールのサルはいずれも発疹が現われ、１匹は最大４十の発疹が１１１日目現われた。このサルは、サル水痘が肺および肝臓に影響を及ぼして、その翌日死亡した。残りの２匹のコントロールのサルは、最大で２＋および３＋の発疹を生じ、いずれも二日間持続した。５０ＩＩＩｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡで処置した３匹のサルのうち２匹は、最大４＋の発疹が現われた。第３のサルは、９日目に１＋の発疹を示したのみであるが、全身性のサル水痘で１ｏ日目に死亡した。低用量のＰＡＬＡは、結果として、１匹のサルに１十の発疹をもたらし、第２のサルに２＋の発疹を生じた。第３のサルはｌＯ０日目３＋の発疹を示し、その後、同じ日に死亡した。のサルでは中程度に重症な３＋の発疹をもたらし、第３のサルでは軽症の１＋の発疹を生じた。１０ｍｇ／ｋｇ／日での組合せは、実験日数のほとんどでわずか士の記録であり、１匹のサルでは最大で１＋であって、発疹を抑制することが明らかになった。ウィルス血症は、１匹のコントロールのサルでは重症であって（＞　１０００　ＰＦＵ／ｍｌ血液）、他の２匹のコントロールのサルでは中程度であった（１００−３００　ＰＦυ／＋ｎｌ血液）（第５表）。ＰＡＬＡ。５０ｍｇ／ｋｇ／日の投与を受けたサルのうち、１匹は重症のウィルス血症になって死亡し、第２のサルは中程度に重症なウィルス血症（３００−８００ＰＦＵ／ｍｌ）になったが、第３のサルは、中程度のウィルス血症であった。２０ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡで処置したサルにおいても同様の結果が観察された。１０ｍｇ／ｋｇ／日のアシクロビルは、ウィルス血症を抑制する効果のないことが明らかになった。２匹のサルが重症なウィルス血症となり、１匹は中程度に重症なウィルス血症が現われた。ＰＡＬＡとアシクロビルを組み合わせた処置には、わずかながら利点がみられた。１匹のサルは中程度に重症なウィルス血症であり、もう１匹は中程度のウィルス血症であり、第３のサルは最も軽いウィルス血症であった。血液学的検査では、異常値の一貫した傾向はみられなかった。Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　５０ｍｇ／　ｋｇ／日で処置した１匹のサル（Ｍ６３６）とアシクロビルで処置した２匹のサル（Ｍ６４２およびＭ６３９）では、１１１日目血小板減少が見られた。化学的な値は、サル水痘ウィルスの結果として存在する肝炎を反映しなかった。用いられた用量では、薬剤による処置に起因する異常は見られなかった。血清中和抗体の力価は、コントロール群のサルと、２種類の用量のＰＡＬＡまたはアシクロビルで処置したサルにおいて、同等であった。ＰＡＬＡおよびアシクロビルの組合せで処置したサルは、他のサルの抗体価と比較して、サル水痘ウィルスに対してより低い抗体価を示した。このことは、組合せ治療によるウィルス複製の阻害効果を反映していると思われる。第４表サル水痘ウィルスの組合せ処置におりるＰＡＬＡおよびアシクロビルの効果：発疹発疹の重症度−感染後の日数処理群　サル番号　７　８　９　１０　１１　１２　１３　１４　１６コントロール　Ｍ６４４　−　−　１４　３＋　４＋　死亡ＰＢＳ　Ｍ６３４　−　±　２＋　２＋　１＋　±　−−−Ｍ６４７　±　１＋　２＋　３＋　３４　１＋　士　士　±ＰＡＬＡ二　Ｍ６４６　−　±　ｌ十　死亡５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３６　−　１＋　２４　２÷　２４　３４　４＋　４＋　３４Ｍ６３５　−　 −　２＋　２＋　２＋　３＋　４＋　４＋　３＋ＰＡＬＡ：　Ｍ６３３　−　１＋　２＋　３＋　死亡２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３７　−　−　−　−　１＋　２＋　２＋　２＋　−ＩＪ６３１１　−　−　±　１キ　１４　１４　１４　１４　−ア／クロビル：　Ｍ６４２　−　士　±　１＋　１＋　士　士　士　−１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　１Ｊ６３９　１＋　１４　１４　２＋　３＋　３４　３＋　２＋　１＋Ｍ６４３　１４　２＋　２＋　３＋　２４　２＋　１４　１＋　±ＰＡＬＡ：　Ｍ６４０　−　−　−　±　１十　±　−−−２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６４５　−　−　士　士　士　士　±　士　−＋　アンクロビル　Ｍ６４１　 −　−　±　±　士　士　−−−１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ処置はウィルス接種の２４時間後に開始し、分割した用量で毎日２回静脈注射（こよって行なわれた。第５表サル水痘ウィルスの組合せ処置におけるＰＡＬＡおよびアシクロビルの効果：ウィルス血症感染後の日数における平均ＰＦＵ処理群　サル番号　３　５　７　９　１１コントロール　Ｍ６４４　６　１０５　＞１０００　＞１０００　死　亡ＰＢＳ　Ｍ６３４　１６　１３８　５１　０　０Ｍ６４７　１９　１８１　２３３　０　０ＰＡＬＡ：　Ｍ６４６　１　１３６　＞１０００　＞１０００　死亡５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３６　７　１５４　５０Ｂ　８９　２Ｍ６３５　７　１４８　２１３　１０　０ＰＡＬＡ：　１Ｊ６３３　１３　１９５　＞１０００　＞１００　死亡２０ａ＋ｇ／ｋｇ／ｄ　局３７　９　１３０　１７３　４　０Ｍ６３８　５　７９　３０５　７　０アンクロビル・　Ｍ６４２　９　３４２　＞１０００　３２２　０１０ａ＋ｇ／ｋｇ／ｄ　１Ｊ６３９　２　９０　＞１０００　７０６　０罰４３　５　２１（１５０４Ｑ　０ＰＡＬＡ：　Ｍ６４０　０　Ｂ　１６１　１３　０１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６４５　１２　１１３　５５０　１１　０＋７ンクロビル　Ｍ６４１　７　４８　３０　０　０１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ処置はウィルス接種の２４時間後に開始し、分割した用量で毎日２回静脈注射によって行なわれた。第６表サル水痘ウィルスに対する血清中和抗体価へのＰＡＬＡおよびアシクロビルによる処置の効果血清中和抗体価−接種後の日数処理群　サル番号　１４日　２１日コン）ロール　Ｍ６４４　死亡　死亡ＰＢＳ　ＩＪ６３４　１　・６４０　１　＋　１２８０）Ｊ６４７　１　：　３２０　１　：　１２８０１”ＡＬＡ：　１Ｊ６４６　死亡　死亡５（ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３６　１　：　８０　１　：　１２８０）Ｊ６３５　１　：　３２０　２１　：　１２８０ＰＡＬＡ＋　１Ｊ６３３　死亡　死亡２０１Ｉ１ｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３７　１　：　６４０　２１　＋　１２８０Ｍ６３８　１　：　１６０　１　：　３２０了ノクロビル：　Ｍ６４２　１：６４０　１：６４０１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６３９　１　：　１６０　１　：　１２８０Ｍ６４３　１　：　１６０　１　：　１６０ＰＡＬＡ：　Ｍ６４０　１　：　８０　１　・６４０１０ｍｇ／ｋｇ／ｄ　Ｍ６４５　１　＋　２０　１　：　３２０＋７１クロヒル１Ｊ６４１１：８０１：６４０１０１１ｇ／ｋｇ／’ｄ力価は、コントロール培養で現れるプラーク数に対して８０ツク−セントまたはそれ以上ウィルスプラーク数の減少をもたらす血清の希釈倍率として表わされる。９、実施例４Ｈｓ６８細胞単層にＡＤ１６９を感染させたときのインビトロでの薬剤の効能。この実験は、ＨＣＭＶ感染中の１０μｇ／＋ｎｌ濃度のＰＡＬＡのインビトロでの効能を確認するために行なわれた。Ｈｓ６８細胞単層へのインビトロ感染および効能評価は、以下のＨＣＭＶウィルス分離株について行なわれた：　［１］　ＡＤ１６９、サイトメガロウィルスの標準実験株；　［２］　ＤＨＰＧ耐性ＨＣＭＶ分離株（チミジンキナーゼ耐性ＤＨＰＧ　；　ＥＤ、。−〉５５μｇ）および［３］最近得られたＨＣＭＶ臨床分離株。また、この研究は、試験薬およびＤＨＰＣによる能動的抑制中のＨＣＭＶ力価の低下も評価した本項では、ＣＭＶ実験株、ＨＣＭＶのヒト分離株、およびＤＨＰＧ耐性株の３種の株すべてがＰＡＬＡに感受性であって、ウィルス収量が２〜３桁減少したことを示す。９．１方法上記のような特徴を有する［１］ＡＤ１６９株、［２］　ＤＨＰＧ耐性ＨＣＭＶ、または［３］　！近臨床分離されたＨＣＭＶ株、のそれぞれの１０’　ＰＦＵ／ｍ１ｌ（ＣＭＶを、集密的Ｈｓ６８細胞単層（３５ｍｍ培養皿）上に接種し、３７℃で１時間単層に吸着させた。接種物を吸引して、試験薬またはＤＨＰＧを含有する培地、または薬剤を含有しない培地を１−（ＣＭ　Ｖを接種した単層に添加した。適当な薬剤添加物を含有する培地を毎日交換した。１日目から７８目まで２４時間間隔で、ＨＣＭＶ接種し薬剤処理した単層を以下のように操作した。無細胞ウィルスを含有する上清を細胞から除去し、上清中のＨＣＭ　Ｖ無細胞ウィルスの力価を標準プラーク試験によって測定した。残存する薬剤を除去するために、細胞単層をＨＢ　Ｓ　Ｓで洗浄し、細胞をかきとって集めた。細胞を超音波破砕し、遠心分離して細胞残渣をペレットにした。感染した細胞単層から遊離した無細胞ＨＣＭＶの力価を測定した。薬剤の効能は、薬剤処理しないＨＣＭ　ＶのＰＦＵ／ｎ＋１およびＤＨＰＣのＨＣＭＶ阻害に比較したＨ　ＣＭ　Ｖ　ＰＦＬＩ／　ｍ＋の減少として表される。３μｇ／ｍｌ濃度で用いられたＰＡＬＡは、偽薬で処理したコントロールと比較して、ＨＣＭ　Ｖ力価の減少に有効であった。インビトロの処理てＰＡＬＡをＤ　ＨＰ　Ｇと比較すると（１９μｇ／ｍｌ　；Ａｌ１６９に関するＥＤ５０）　、ＨＣＭＶ力価の減少はＤＨＰＧ処理単層と同様であったが、残存する力価はＤ　ＨＰ　Ｇ力価よりわずかに高かった。ＰＡＬＡ処理後のＨＣＭＶ力価の減少は、上清（無細胞ＨＣＭＶ）および細胞ペレット（細胞結合ＨＣＭＶ力価）について同様であった。ＨＣＭ　Ｖ力価が元に戻る現象（ここでは説明しない）は、細胞上清および細胞ペレットアッセイから３８目に明らかであった。接種後４日および５日日にＤＨＰＧと比較すると、力価は依然として上昇していた。単層から細胞が失われたため５白目以降はいずれの試料も処理しなかった。接種後５８目までに、薬剤処理試料中の単層の約５０％が失われた。ＨＣＭＶ力価を第７ａ表および第１および第２図に示す。９．２．２　ＨＣＭＶ臨床分離株ＨＣＭ　Ｖ新生児感染の確認された症例から、臨床分離株を得た。そのウィルスは中和によってＨＣＭＶと確認された。ＰＡＬＡおよびＤ　Ｉ−Ｉ　Ｐ　ＧはこのＨＣＭＶ臨床分離株の力価の減少に有効であった。これら二つの処理とそれらのＨＣＭＶ力価減少効果に相違点は存在しなかった。ＨＣＭＶ力価を第７ｂ表および第３および４図に示す。９．２．３　ＤＨＰＧ耐性ＨＣＭＶこのインビトロアッセイには、ＤＨＰＧ耐性ＨＣＭＶ分離株（インビトロでのＤＨＰＧ感受性の低下によって、すでにＤＨＰＧ耐性分離株として特徴づけられている；このウィルスは変化したチミジンキナーゼ活性を有する）を用いた。ＤＨＰＧは、細胞結合アッセイ、無細胞アッセイのいずれにおいても、ＨＣＭＶの力価の減少に有効ではなかった。ＤＨＰＧ処理群におけるＤＨＰＧ耐性ＨＣＭＶの力価は、偽薬で処理した単層と同じか、またはより高かった（統計学的に有意ではない）。ＰＡＬＡはＤＨＰＧ耐性ＨＣＭ　Ｖ力価の減少に有効であった。接種後４〜５日目までに、ＰＡＬＡ処理単層はＤＨＰＧ処理または偽薬処理した単層に比べてＨＣＭＶ力価が有意に低くなった。ＨＣＭＶ力価を第８表および第５および６図に示す。（本頁以下余白）第７表ａＤＨＰＧ、ＰＡＬＡおよび偽薬とインキュベートした後の無細胞（上清）ＨＣＭＶ力価０　１０’　１０’　１０’　１０”　１０’　１０’　１０’１１０：１０′ １０１１ｏ１１ｏ１１０１１ｏ：２　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’ 　１０’　１０’３１０’１０’１０’１０’１０’１０二１０’４　１０″　０　１０’　１０’　１０’　１０’　１０゜Ｓ　１０’　０　１０’　０　１０’　１０’　１０’第７表ｂＤＨＰＧＳＰＡＬＡおよび偽薬とインキュベートした後の細胞結合（細胞ペレット超音波破砕物）ＨＣＭＶ力価０　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’１　１０’　ｉｏ’　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’ ２１０″　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’３　１０”　１０ ’　１０’　１０’　１０’　１０’　１０’４　１０’　１０’　１０’　１０’　１０°　１０’　ＩＱ’Ｓ　１０’　０　１０”　０　１０’　ＯＯ６１０’　１０’　１０″　１０’　１０’　１０’　１０’？　１０’　Ｏｉｏ’ 　１０’　０　１０’　１０’１０、実施例５ウサギのＨＣＭＶ脈絡網膜炎モデルにおける、ＰＡＬＡおよ七ＤＨＰＧ　（ガンシクロビル）の単用薬剤および併用薬剤の用量および頻度増加の効能の評価。この研究は、用量濃度および頻度を上昇させ、静脈注射により治療したときの、ＰＡＬＡおよびＤＨＰＧの単用薬剤および併用薬剤の効能を、臨床的なウィルスの回収およびＨＣＭＶで誘発された疾病の組織病理学的な重症度を比較することによって評価するために行なわれた。試験薬の二段階の濃度、２０および５０＋ｎｇ／ｋｇを、二つの異なる投与頻度、毎日および１日おきで、接種後１日目から１００日目で評価した。インビボでの試験薬の効能をＤＨＰＧ静脈注射による治療と比較した。その結果、静脈注射の効能は、低用量ＰＡＬＡプラス低用量ＤＨＰＧの併用薬剤による治療（グループ＃６）＞ＤＨＰＧ単用薬剤（グループ＃７））コントロール（グループ＃８）−高用量（グループ＃ｌおよび２）および低用量（グループ＃　３）ＰＡＬＡ単用薬剤）高層量ＰＡＬＡプラス低用量ＤＨＰＧ　（グループ＃５）併用薬剤）高層量ＰＡＬＡプラス低用量ＤＨＰＧ　（グループ＃４）併用薬剤の評価であることが明らかになった。１０．１方法全部で３２匹の有色ウサギをこの研究に用いた。細隙灯および間接検眼法によって動物を評価し、正常な眼の形態および既存の病変がないことを判定した。動物は以下のように取り扱った＝［１］　０日目に、すヘテノウサギに、１００μ／中１０’ＰＦＵ（７）ＨＣＭＶ株ＡＤ１６９を、ガラス体中への注入によって接種した。［２］　動物を個々のケージに維持し、出現する脈絡網膜のＨＣＭＶ疾患を毎日観察した。接種後２日目に、ＨＣＭＶ接種した動物を、脈絡網膜疾患スコアの釣合のとれた４匹ずつの８グループに分けた。ＨＣＭＶに感染したウサギは、以下に示すような静脈注射による治療を受けたニゲループ＃ｌ−４匹の動物、接種後２日目からＩＯ０日目で毎日廃用量の試験薬（５０＋ｎｇ／　ｋｇ）の静脈注射。静脈注射は全部で９回グループ＃３−４匹の動物、接種後２日目からＩＯ０日目で毎日低用量の試験薬（２０ｎ＋ｇ／ｋｇ）の静脈注射。静脈注射は全部で９回グループ＃４−４匹の動物、接種後２日目から１００日目で毎日廃用量の試験薬（５０ｍｇ／　ｋｇ）の静脈注射（静脈注射は全部で９回）プラス接種後２臼目からｌＯ０日目で高用量のＤ　ＨＰ　Ｇ　１０ｍｇ／　ｋｇ／日を２分割した用量で静脈注射（静脈注射は全部で１８回）。グループ＃５−４匹の動物、接種後２日目から１００日目で毎日廃用量の試験薬（５０＋ｎｇ／　ｋｇ）の静脈注射（静脈注射は全部で９回）プラス接種後２臼目から１００日目で低用量のＤ　ＨＰ　０５　ｍｇ／ｋｇ／日を２分割した用量で静脈注射（静脈注射は全部で１８回）。グループ＃６−４匹の動物、接種後２日目からｌＯ０日目で毎日低用量の試験薬（２０ｍｇ／　ｋｇ）の静脈注射（静脈注射は全部で９回）プラス接種後２臼目から１００日目で低用量のＤ　ＨＰ　Ｇ　５　ｍｇ／ｋｇ／日を２分割した用量で静脈注射（静脈注射は全部で１８回）。グループ＃７−４匹の動物、接種後２日目からｌＯ０日目でＤＨＰ　Ｇ　１０ｍｇ／　ｋｇ／日を２分割した用量で静脈注射。静脈注射は全部で１８回。グループ＃８−４匹の動物、接種後２日目から１００日目で滅菌生理食塩水の静脈注射。［３］　すべでの動物が、臨床的なＨＣＭＶ疾患の進行を評価するために毎日間接検眼性検査を受けた（接種後２日目から１００日目で）。間接検眼性検査は、ウサギの受けている治療に関しては真実を知らされていない二人の判定者によって独立に行なわれた。［４］　すべでの動物は、１２２日目犠牲にした。脈絡網膜および虹彩組織とガラス体試料は取り除かれ、ＨＣＭＶ回収のためにＨｓ６８細胞単層上での細胞超音波破砕アッセイによって処理された。運ばれた眼球および肺組織試料は組織化学的に処理され、ＨＣＭＶによって引き起こされた眼球の病変を治療を受けたグループと治療を受けないグループについて評価した。薬剤で処理された静脈注射による治療グループすべてに関する臨床的なウィルスの回収および組織学的な効能の結果は、相互に関係があり、偽薬治療グループとも相関していた。１０．２　結果図５は、ウサギのＨＣＭＶ誘導性脈絡網膜疾患に対して、薬剤単用ならびに薬剤併用静脈内投与治療を行った際の効果のデータをまとめたものである。各治療について、以下にまとめておく。治療群番号ｌ：　接種後２日から１０日まで、高投与量のＰＡＬＡ（５０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に連日投与した薬剤単用治療濃度５０ｍｇ／ｋｇのＰＡＬＡを、連日、１回で静脈内に投与しても、ＨＣＭＶを接種した動物での疾患の発症を抑えるうえで周辺的な効果しかなかった。接種後３日−４日以内に硝子体炎が発症して、中程度のレベルとなった。硝子体炎がさらに進行し、これらの動物での脈絡網膜疾患の包括的な評価を行うことができなくなったので、脈絡網膜疾患の程度ならびにＰＡＬＡ製剤の単用効果を判断するうえで、組織学的な評価が一段と重要となった。接種後３日から７日にかけて、視神経頭部の水腫と赤み（このウサギモデルでのＨＣＭＶ感染症の臨床上の徴候）がみられた。研究の結論としては、眼底を部分的に見ることのできた動物については、視神経頭部の炎症ならびに赤みは軽減しつつあった。これらの動物では、硝子体炎の進行によって、眼底の見え方ならびにＨＣＭＶ脈絡網膜疾患の発症が不明瞭となったものの、高投与量のＰＡＬＡで処置したこれらの動物についての臨床所感は、この治療の効果が最小限にとどまるもので、ＨＣＭＶ誘導性脈絡網膜疾患の発症ならびに進行が、こうした高投与量の薬剤単用治療によって停止することはないというものであった。組織学的性質を予備的に評価したところ、脈絡網膜ＨＣＭＶ疾患の中程度の領域は網膜内側に限定されており、播種性の疾患では、場合によって、ＨＣＭＶ感染症が脈絡網膜の一層広い領域に広がっていた。中程度のレベルでは、脈絡膜の水腫ならびに血管のうっ血が顕著であった。これらのＰＡＬＡ処置眼のＨＣＭＶ誘導性疾患の領域は、巣状ないし地図状で、中程度の脈絡網膜感染症であることが示唆された。免疫細胞病変領域は、単球ならびに冬型性細胞が浸潤していた。予備的な組織学的評価でのこうした結果は、臨床上の疾患の印象を裏付けるものである。犠牲によれば、肺は透明で、うっ血は認められなかった。サンプルは、通常の組織学的検査用に処理を行い、結果は判定中である。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭＶの回収時点、すなわち接種後１２日という時点と直接関係している可能性がある（可能性が高い）。こうした薬剤単用治療の効果をもっと十分に評価するには、治療の全過程を通じて、動物の犠牲を時間を追って行うことが必要となる。（未処置眼の場合、ＨＣＭＶは、通常、接種後８日ないし９日まで存在する。接種後９日ないし１０日以降の回収の有無にはばらつきがある。）濃度５０ｍｇ／ｋｇのＰＡＬＡを、隔日、１回で静脈内に投与しても、ＨＣＭＶを接種した動物での疾患の発症を抑えるうえで周辺的な効果しかなかった。この濃度のＰＡＬＡで処置した動物での疾患の発症のしかたは、ｓｏｍｇ／ｋｇを連日静脈内に投与した治療群でのＨＣＭＶ疾患の進行と類似していた。接種後３日 −４日以内に硝子体炎が発症して、中程度から重症のレベルとなった。硝子体炎がさらに進行し、これらの動物での脈絡網膜疾患の包括的な評価を行うことができなくなったので、脈絡網膜疾患の程度ならびにＰＡＬＡ製剤の単用効果を判断するうえで、組織学的な評価が一段と重要となった。接種後３日から４日にかけては、視神経頭部の水腫と赤み（このウサギモデルでのＨＣＭＶ感染症の臨床上の徴候）がみられ、接種後５日から７日までは評価を行うこともできず、治療にもかかわらず眼のＨＣＭＶ疾患が進行したことが示唆された。これらの動物では、硝子体炎の進行によって、眼底の見え方ならびにＨＣＭＶによる脈絡網膜疾患の発症が不明瞭となったものの、高投与量のＰＡＬＡで隔日ごとに処置を行ったこれらの動物についてのＨＣＭＶ誘導性疾患の臨床所感は、この治療法はＨＣＭＶ疾患の発症をおさえるうえで有効ではないというものであった。高投与量のＰＡＬＡを投与するこれらの２種の治療群の間では、ＨＣＭＶ誘導性疾患の発症に差はなかった（図７）。犠牲によれば、肺は透明で、うつ血は認められなかった。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、Ｉ−Ｉ　ＣＭ　Ｖは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されな力１つだことは、選んだＨＣＭＶの回収時点と直接関係している可能性がある（可能性が高い）。匂すリｊユニ」１遣１シ巨づ１且Ｌζ」１亙」シソ１Ａ（２ユニＬりにｌ陣五づ鼾達亙以］因見町蓮１濃度２０ｍｇ／ｋｇのＰＡＬＡを、隔日、薬剤単用で静脈内（こ投与しても、他の治療群やブラセポ治療の場合と比べて、ＨＣＭＶを接種した動物での疾患の発症を抑えるうえで周辺的な効果しかなかった。疾患の進行は、治療群番号２について報告したものと類似していた。組織学的性質を予備的に評価したところ、中程度ないし重症の脈絡網膜疾患をともなった散在性の疾患であることが示唆された。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭＶの回収時点と直接関係している可能性がある。治療群番号７：　ＨＣＭＶを接種し、接種後２日から１０日まで、ＤＨＰＧを静脈内に投与して（１０ｍｇ／ｋｇ／日を２回に分けて投与）処置した動物ＤＨＰＧは、この実験では対照の治療として使用した。動物は、接種後２日から接種後１０日まで、ＤＨＰＧによる治療を継続して受けた。ＤＨＰＧをｌｏｍｇ／ｋｇ／日、２回に分けて投与する治療によって、ＨＣＭＶ脈絡網脈絡網膜細胞びに疾患の発症が抑えられた。接種後６−７日で、ＤＨＰＧ処置眼の７０％で、ＨＣＭＶ脈絡網膜疾患の平均的な病変が安定化し、接種後８日で、疾患は快方に向かった。硝子体炎の発症によって眼底の見え方は部分的に不明瞭となったものの、脈絡網膜疾患は総じて巣状のままで、視神経の頭部が炎症を起こして中程度の病変となっていた。脈絡膜は、接種後１０日までうっ血したままであった。これらの動物の硝子体炎は、接種後４日から１０日まで、中程度のレベルのままであった。これらの処置眼についての臨床上の疾患の印象は、このＤＨＰＣ薬剤準用治療群が、全治療群のうちで最も優れていたというものであった。調べた全期間について、ＤＨＰＧ治療群は、常に、３種のＰＡＬＡ薬剤単用治療群より、硝子体炎（間接的には、脈絡網膜疾患の病変）が軽症であった。この治療群では中程度ないし重症の硝子体炎を発症したので、ブラセボ処置群との統計上の比較を行うことは不可能である（対照群とＤＨＰＧ処置群は、類似した硝子体炎の病変を呈した）。犠牲によれば、肺は正常なようであった。サンプルは通常の組織学的検査用に処理し、結果は判定中である。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭＶの回収時点と直接関係している可能性がある（可能性が高い）。治療群番号８：　ＨＣＭＶを接種し、ブラセボ（プラセボ＋ＥＤＴＡ）で処置した動物プラセボ処置動物は、接種後２日から接種後１０日まで、滅菌食塩水＋ＥＤＴＡの注射を毎日１回継続して受けた。プラセボ処置眼は、接種後２日目に、軽症の脈絡網膜ならびに硝子体の疾患を発症した。この疾患では、網膜が巣状に浸潤し、視神経が炎症を起こして赤みを帯び、軽症の硝子体炎が発症した。硝子体炎では、硝子体がストランドとなり、周縁部の細胞が浸潤し、混濁していた。これらの動物では、プラセボ治療によって、脈絡網膜疾患ならびに硝子体炎の発症が抑制されることはなかった。接種後３−４日で、脈絡網膜疾患が増大し、これらの）（Ｃ’ＭＶ感染眼感染症しつつあった硝子体炎が重症のレベルまで進行し、脈絡網膜疾患の包括的な評価を行うことができなくなりな。接種後５日以降は、硝子体炎によって、網膜ならびに脈絡膜の疾患の包括的な評価が不明瞭となった。ブラセボ処置眼の組織学的性質を予備的に評価したところ、ＨＣＭＶ感染症が網膜内側の領域から進行して、光受容体層にまで進行したことが示された。組織学的観察では、網膜の水腫と、細胞浸潤に、場合によって網膜剥離が混交した領域とが認められた。網膜ＨＣＭＶ疾患の病変が広がった領域が、正常な網膜の領域に隣接していた。組織学的観察では、脈絡膜ならびに網膜の中程度ないし広範な病変が認められた。犠牲を行って肺を観察したところ、２匹のウサギで、軽症ないし中程度の混濁ならびに出血が見られた。軽症ないし中程度の水腫（うっ血）も見られた。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭＶの回収時点と直接関係している可能性がある（可能性が高い）。２７日を２回に分けて）静脈内に投与接種後２日から接種後１０日まで、高投与量のＰＡＬＡ　（５０ｍｇ／ｋｇ）とＤＨＰＣ（Ｉ　Ｏｍｇ／ｋｇ）を連日静脈内に投与する薬剤併用治療（治療群番号４）、あるいは高投与量のＰＡＬＡ　（５ｏｍｇ／ｋｇ）とＤＨＰＧ　（５ｍｇ／ｋｇを２回に分けて投与）を静脈内に投与する薬剤併用治療を行っても、ＨＣＭＶ誘導性脈絡網膜疾患の発症を抑えるうえで有効ではなかった。実際、これらの薬剤併用治療群の硝子体炎（ＨＣＭＶ疾患の間接的な指標）は、薬剤単用治療群、薬剤併用治療群、あるいはプラセボ治療群での疾患より重症であった。ＨＣＭＶ誘導性疾患が他の治療と比べて重症であったのは、２種の化合物の拮抗作用、具体的には、５０ｍｇ／ｋｇのＰＡＬＡと、１０あるいは５ｍｇ／ｋｇのＤＨＰＣの拮抗作用によるものであると解することができる。硝子体炎が発症して眼底が不明瞭にしか見えなくなる以前に、視神経頭部が、ＨＣＭＶ誘導性疾患に特徴的な赤みならびに炎症性の変化を示していた。視神経頭部が見ることのできた動物では、接種後１０日の時点でも、視神経頭部の変化が軽減してはいなかった。高投与量のＰＡＬＡを他の薬剤と併用して用いることによって処置した眼についての臨床上のＨＣＭＶ誘導性疾患の印象では、薬剤併用治療を行った結果、疾患は、ブラセボ治療群、あるいは薬剤単用治療群の疾患より重症となった。高投与量でＰＡＬＡを投与した薬剤併用治療群のうち、８個の眼しか評価していないものの、この併用は拮抗的であるようで、すなわち、薬剤併用群の疾患は、５０ｍｇ／ｋｇのＵＳＮＵＧＯ８、あるいはｌｏｍｇ／ｋｇのＤＨＰＧの薬剤単用治療群より重症であった。犠牲によれば、肺の病変は顕著ではなかった。いくつかのサンプルを、組織学検査用に処理中である。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭＶの回収時点と直接関係している可能性がある（可能性が高（す。治療群番号６：　接種後２日から１ｏ日まで、低投与量のＰＡＬＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に連日投与して治療し、加えて、低投与量のＰＡＬＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）と低投与量のＤＨＰＧ（１０ｍｇ／ｋｇ’）を連日静脈内に投与する薬剤併用治療（治療群番号６）は、最も有効な薬剤併用治療であった。この薬剤併用治療は、評価を行った他の薬剤単用あるいは薬剤併用治療法のいずれよりも、硝子体炎ならびに視神経頭部の変化を軽減するうえで有効であった。この薬剤併用治療は、（接種後２日から１ｏ日までの）治療の全過程を通じて、他のいずれの治療よりも優れていた。実際、この薬剤併用治療群の硝子体炎（ＨＣＭＶ疾患の間接的な指標）は、他のいずれの薬剤単用治療群、薬剤併用治療群、あるいはプラセポ治療群より軽症であった。ＨＣＭＶ誘導性疾患が他の治療と比べて軽症であったのは、２種の化合物の相加性によるものであると解することができる（この結論を統計的分析によって裏づけるためには、さらにサンプルの評価を行う必要がある）。硝子体炎が発症して眼底が不明瞭にしか見えなくなる以前に、視神経頭部が、ＨＣＭＶ誘導性疾患に特徴的な中程度の赤みならびに炎症性の変化を示していた。視神経頭部が見ることのできた動物では、接種後１０日の時点で、視神経頭部の変化が軽減していた。低投与量のＰＡＬＡを他の薬剤と併用して用いることによって処置した眼についての臨床上のＨＣＭＶ誘導性疾患の印象では、薬剤併用治療の結果、疾患は、ブラセポ治療群の疾患、あるいは薬剤単用治療群の疾患より軽症となった。犠牲によれば、肺の病変は顕著ではなかった。いずれの接種後１２日の脈絡網膜細胞の超音波処理物の共培養からも、ＨＣＭＶは回収されなかった。ＨＣＭＶが回収されなかったことは、選んだＨＣＭ　Ｖの回収時点と直接関係している可能性がある（可能性が高い）。１０．３結論［：１）ＰＡＬＡは、ウサギのＨＣＭＶ誘導性感染症に対して、高投与量あるいは低投与量の薬剤単用治療で使用しても、（硝子体炎ならびに、視神経頭部のＨＣＭＶ誘導性の変化がら判断すると）、眼の疾患の発症ならびに進行を抑えるうえで有効ではなかった。（２］　ＤＨＰＧは、薬剤単用治療で使用すると、ウサギのＨＣＭＶ誘導性脈絡網膜疾患の症状を軽減するうぇで有効であった。〔３〕高投与鳳のＰＡＬＡを投与する薬剤併用治療も、眼のＨＣＭＶ誘導性疾患の進行を抑えるうえで有効ではなかった。実際、こうした高投与量の薬剤併用治療は、拮抗的な抗ウイルス効果を示し、その結果、ＨＣＭＶ誘導性の眼の疾患の症状は、他の薬剤単用ならびに薬剤併用治療群で観察される症状より重症となった。〔４〕低投与量のＰＡＬＡと低投与量のＤＨＰＧを静脈内に投与する薬剤併用治療は、このモデルでは、ＨＣＭＶ誘導性疾患の発症ならびに症状を抑えるうえで有効であった。この薬剤併用療法は、相加的あるいは相乗的な抗ＨＣＭＶ効果を示すものである。［５］　ＰＡＬＡを単用、あるいはＤＨＰＧと併用すると、間質肺炎が予防された。したがって、ＰＡＬＡは、関連疾患に対する薬剤単用治療で有用である可能性がある。（本頁以下余白）Ｉｌ、実施例６ウサギにおけるＰＡＬＡ有効性の評価；治療後、３．　４．　５および６日後の脈絡網膜におけるＨＣＭＶの力価の低下の厳密な分析による、単一および併用薬剤の臨床上の効果の確認。これらの実験は、ウサギモデルのＨＣＭＶによる感染後、ＨＣＭＶ−誘導性疾患の症状を比較することにより、静脈注射治療中のＰＡＬＡの効果を確認するために実施された。ＰＡＬＡ静脈注超音波処理物の共培養からのＨＣＭＶ力価を、ＤＨＰＧおよび偽薬実験の回収力価と比較した。高投与量のＰＡＬＡ療法は単一薬剤として、およびＤＨＰＧと組み合わせた薬剤併用療法として評価した。１１、．１方法合計４１匹の有色ウサギをこの実験で用いた。ウサギは、スリットランプおよび間接検眼鏡によって評価し、正常な眼の形態および既存の病変の欠如を検査した。動物は以下のように取り扱った［ｌ］　０日目、すべての動物は、検眼鏡検査によって評価し、すべての後部は正常であることを確認した。眼底の検査に引き続いて局所点眼を受け、ウサギの瞳孔を拡大した。実験を通じて、局所点眼治療を毎日継続した。［２１０日目、すべてのウサギに、ＨＣＭＶ、ＡＤ１６９株の１０’　ＰＦＵ　（１００μＬ中）を硝子体中央の注射によって接種した。他のウサギは、非感染Ｈ３６８細胞の単層培養の上清を虚偽接種した。これらの虚偽接種を受けたウサギは第＋Ｖ治療群のための対照とした。［３コ　ウサギを個々のケージ内で飼育し、発症している脈絡網膜ＨＣＭＶ疾患を毎日観察した。接種後２日目に、ＨＣＭＶ接種ウサギを、４−６匹のＨＣＭＶ接種ウサギに１匹の虚偽接種したウサギを加えて分けた。該ＨＣＭＶ−感染該ＨＣＭＶ感染及び虚偽接種ウサギに、以下に示す通り静脈内治療を行った。単一薬剤ＰＡＬＡの毎日の静脈内治療：治療群＃ｌ：　４匹のＨＣＭＶ接種及び１匹の虚偽接種したウサギ、接種後２日目から１００日目で高投与量のＰ　Ａ　Ｌ　Ａ　（５０ｆｆｉｇ／ｋｇ）の静脈内注射、全９回の静脈内注射。この治療群のウサギを経時的試験において接種後３．４．５及び６日目に犠牲にし、ＨＣＭＶ回収の低下及び力価を評価した。眼球を取り除き、ＨＣＭＶの細胞超音波処理物回収のための処理を行った。虚偽接種したウサギを接種後１２２日目犠牲にし、これを用いて静脈内投与後の網膜及び脈絡膜に対するＰＡＬＡの毒性効果を評価した。併用薬剤ＰＡＬＡ及びＤＨＰＧの静脈内投与後　力価測定及び臨床効果の確認治療群＃２ニア匹のＨＣＭＶ接種および１匹の虚偽接種ウサギ。接種後２日目からｌＯ０日目かけて高投与量（５０ｍｇ／ｍ＋）のＰＡＬＡの静脈注射（合計９回の静脈注射）に、接種後２日目からｌＯ０日目かけて高投与量（１０＋ｎｇ／ｋｇ／日）のＤＨＰＧを１日２回に分けた静脈注射（合計１８回の静脈注射）を加えたこの治療群のウサギを接種後３．４．５および６日目に１匹ずつ犠牲にした。眼球を摘出し、細胞超音波処理物の回収物によるＨＣＭＶの回収のための処理を行い、ＨＣＭＶの存在と脈絡網膜中のウィルスの力価の測定を行った。残る２匹のＨＣＭＶ接種および１匹の虚偽接種ウサギを投与後１２日を通して評価した。これら残りのウサギを用いて、先に実施例５において示したようなＰＡＬＡ併用効果の臨床的影響を確認した。治療群４３１６匹のＨＣＭＶ接種および１匹の模擬接種ウサギ。接種後２日目からＩＯ０日目かけて中投与量（２５＋ｎｇ／　ｋｇ）のＰＡＬＡの静脈注射（合計９回の静脈注射）に、接種後２日目からｌＯ０日目かけて中投与量（７，５ｍｇ／　ｋｇ／日）のＤＨＰＧの１日２回に分けた静脈注射を加えた（合計１８回の静脈注射）この治療群からのウサギを接種後３．　４．　５および６日目に１匹ずつ犠牲にした。眼球を摘出し、細胞超音波処理物の回収物によるＨＣＭＶ回収のための処理を行い、ＨＣＭＶの存在及び脈絡網膜中のウィルスの力価を測定した。残る２匹のＨＣＭＶ接種および１匹の虚偽接種ウサギは投与後１２日間を通して評価した。これらの残りのウサギを用いて、さきに実施例５において示したようなＰＡＬＡ併用効果の臨床的影響の確認及び効果の評価を詳細に調整した。治療群＃４：６匹のＨＣＭＶ接種および１匹の模擬接種ウサギ。接種後２日目からｌＯ０日目かけて低投与量（１０ｍｇ／　ｋｇ）のＰＡＬＡの静脈注射（合計９回の静脈注射）に、接種後２日目からＩＯ０日目かけて低投与量（５ｉ＋ｇ／　ｋｇ／日）のＤＨＰＧの１日２回に分けた静脈注射（合計１８回の静脈注射）を加えたこの治療群からのウサギを接種後３．４．５および６日目に１匹ずつ犠牲にした。眼球を摘出し、細胞超音波処理物の回収物によるＨＣＭＶの回収のための処理を行い、ＨＣＭＶの存在及び脈絡網膜中のウィルスの力価を測定した。残る２匹のＨＣＭＶ接種および１匹の虚偽接種ウサギは投与後１２日間を通して評価した。これらの残りのウサギを用いて、先に実施例５において示したようなＰＡＬＡ併用効果の臨床的影響を確認した。単一薬剤の陽性および陰性対照：治療群＃５：６匹のＨＣＭＶ接種ウサギ、接種後２日目からｌＯ０日目かけてＤ　ＨＰ　Ｇ　１０＋ｎｇ／　ｋｇ／日の１日２回に分けた静脈注射。合計１８回の静脈注射。この治療群のウサギを経時的試験において接種後３，４．５および６日目に犠牲にしてＨＣＭＶの回収及び力価の低下を評価した。眼球を摘出し、網膜からの）（ＣＭＶの細胞超音波処理物を回収するために処理した。残る２匹のウサギを接種後１２２日目犠牲にし、これを用いて静脈注射後の網膜および脈絡膜に対するＰＡＬＡの臨床的効果の経過を評価した。治療群＃６：６匹のＨＣＭＶ接種ウサギ、接種後２日目から１００日目かけて滅菌食塩水の静脈注射を行った。この治療群のウサギを、経時的試験において接種後３，４．５および６日目に犠牲にし、網膜におけるＨＣＭＶの回収及びと力価の低下を評価した。眼球を摘出し、細胞音波破砕物のＨＣＭＶを回収するために処理した。残る２匹のウサギを接種後１２２日目犠牲にし、これを用いて静脈注射後の網膜および脈絡膜に対するＰＡＬＡの臨床的効果の経過を評価した。［４コ　すべでのウサギについて、間接的な検眼鏡検査または手持ち式の９０ジオプターのレンズを用いたスリットランプ試験を毎日（接種後２日目から１００日目かけて）行い、臨床的なＨＣＭＶ病の進行を評価した。眼底検査は、ウサギの受けた治療を知らない二名の検査者によって独立に行われた。［５］　すべでのウサギは、ＰＡＬＡの単一および併用薬剤によるＨＣＭＶの力価の低下を評価するために経時的試験で犠牲にされるか、またはＰＡＬＡの治療効果の臨床的経過を確認するために接種後１２２日目犠牲にされた。すべての薬剤処理した静脈注射治療群に対する臨床的、ウィルスの回収および組織学的効果の結果は、互いに、及び、偽薬治療群と相関していた。効果の評価の経過を通しての各ウサギにかかる要約。第１日日、すべてのウサギはスリットランプ顕微鏡生検および眼底検査による前評価を受けた。ウサギは１から３６まで、及び、Ｓｌから８６まで番号が付された。ウサギを直ちに以下のような静脈注射治療をうけた動物群に無作為に分けた。治療群＃ｌ：ウサギ＃ｌ、２．　３．　４および虚偽接種ウサギ＃Ｓ１−５０＋ｎｇ／ｋｇ　Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ０治療群＃２：ウサギ＃５．　６．　７．　８．　９　１０．１１および１匹の虚偽接種ウサギ＃Ｓ２−毎日高投与量（５０＋ｎｇ／　ｋｇ）のＰＡＬＡおよび高投与量（１０ａ＋ｇ／　ｋｇ／日）のＤＨＰＧの静脈注射を受けた。治療群＃３：ウサギ＃Ｉ２．１３．１４．１５．１６．１７および１匹の虚偽接種ウサギ＃Ｓ３−毎日中投与量（２５＋ｎｇ／ｋｇ）のＰＡＬＡおよび中投与量（７，５ｍｇ／ｋｇ／日）のＤＨＰＧの静脈注射を受けた。治療群＃４：ウサギ＃１８．１９．２０．２１．２２．２３および１匹の虚偽接種ウサギ＃Ｓ４−毎日低投与量（１０ｍｇ／　ｋｇ）のＰＡＬＡおよび低投与量（ｓｍｇ／ｋｇ／日）のＤＨＰＧの静脈注射を受けた。治療群＃５：ウサギ２４．２５．２６．２７．２８．２９および１匹の虚偽接種ウサギ＃Ｓ５−毎日高投与量のＤ　ＨＰ　Ｇ　（ｌｏｍｇ／　ｋｇ／日）の静脈注射を受けた。治療群＃６：ウサギ３０．３１．３２．３３．３４．３５および３６−毎日偽薬の静脈注射治療（滅菌食塩水の注射）を受けた。ＨＣＭＶ接種を受け、薬剤単用および薬剤併用処置を受けたウサギの犠牲：接種後３日目：　ＨＣＭＶの回収のための犠牲および脈絡網膜の細胞超音波処理物の培養−治療群＃ｌ：ウサギ＃ｌ治療群＃２：ウサギ＃ｌｌ治療群＃３：ウサギ＃１６治療群＃４：ウサギ＃２３治療群＃５．ウサギ＃２８治療群＃６：ウサギ＃３４接種後４日目：ＨＣＭＶの回収のための犠牲および脈絡網膜の細胞超音波処理物培養−治療群＃ｌ：ウサギ＃２治療群＃２：ウサギ＃７治療群＃３：ウサギ＃１２治療群＃４：ウサギ＃１８治療群＃５．ウサギ＃２４治療群＃６：ウサギ＃３０接種後５日目：ＨＣＭＶの回収のための犠牲および脈絡網膜の細胞超音波処理物の培養−治療群＃１：ウサギ＃３治療群＃２：ウサギ＃８治療群＃３：ウサギ＃１３治療群＃４．ウサギ＃１９治療群＃５：ウサギ＃２６治療群＃６；ウサギ＃３１接種後６日目：ＨＣＭＶの回収のための犠牲および脈絡網膜の細胞音波処理物の培養−治療群＃１：ウサギ＃４治療群＃２：ウサギ＃６治療群＃３：ウサギ＃１４治療群＃４：ウサギ＃２１治療群＃５：ウサギ＃２７治療群＃６：ウサギ＃３３接種後１２日回目：織学的評価のための、または脈絡網膜細胞の超音波処理物培養物からの培養ＨＣＭＶの回収のための犠牲および組織の処理。効果の評価の判定で犠牲にされたウサギを間接的な検眼鏡検査によって毎日観察した。。これらのウサギにおけるＨＣＭＶ疾患の臨床的影響を用いて、この報告中に図表で示された硝子体疾患および脈絡網膜疾患の概略を構成した。評価の判定で犠牲にされたウサギは以下を含む。治療群＃ｌ：ＨＣＭＶ非感染ウサギ：＃Ｓ１治療群＃２：ウサギ＃９．１０．Ｓ２治療群＃３・ウサギ＃　１５．１７．　Ｓ　３治療群＃４：ウサギ＃２０．２２．　Ｓ　４治療群＃５：ウサギ＃　２５．２９．　Ｓ　５治療群＃６：ウサギ＃３２．３５．　３６臨床的疾患所見：硝子体炎および脈絡網膜炎の発症。図６および図７は、静脈内の薬剤併用及び薬剤単用治療群における、脈絡網膜及び硝子体炎の発症に対するデータを要約する。脈絡網膜疾患の炎の発症は、さきの効果の評価に示されているほど、接種後５〜８日目の硝子体炎の発症によっては一部はっきりしなかった。接種後のこれらの日の平均スコアは、臨床的所見および先の日の眼底検査評価に基づいている。表８．　９．１０．１１は硝子体炎、脈絡網膜炎および視神経頭部の評点、並びに接種後３．　４．　５および６日目の２個の眼球／治療群からのＨＣＭ　Ｖの回収を要約する。治療群＃　１　：　ＰＡＬＡ単一薬剤治療５０ｍｇ／ｋｇ／日この治療群のすべてのウサギを、経時的ＨＣＭ　Ｖ回収試験で犠牲にした。この単−薬剤治療群では、静脈内注射治療の経過を通じて連続的に評価を受けたウサギはいなかった。虚偽接種した、Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　５０ｍｇ／　ｋｇ／日の処置を受けたウサギ＃Ｓｌは、この試験の経過中、硝子体疾患および脈絡網膜疾患のいずれをも発症しなかった。この単−薬剤治療群の細胞超音波処理物検査によるＨＣＭＶの回収は、接種後３，４．５および６日目に脈絡網膜中のウィルスの存在を示した。培養サンプル中のＨＣＭＶ力価は接種後３日目にもっとも高く、このサンプルからは平均１０４　ＰＦＵのＨＣＭＶが回収された。ＨＣＭＶは経時　評価において犠牲にされたウサギの両眼から回収した。ＨＣＭ　Ｖの力価は経時的回収の過程を通して低下し、接種後６日目では培養物中に平均１０１　ＰＦＵのＨＣＭＶＬか検出できなかった。この単用薬剤治療群におけるＨＣＭＶの回収は、偽薬処理を受けた眼における回収よりも良かったが、この治療群のＨＣＭ　Ｖ力価は他の併用薬剤またはＤＨＰＧ単−薬剤治療群のものよりも高かった。治療群＃　２　：　Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　（５０ｍｇ／　ｋｇ／日）およびＤ　Ｅ　Ｐ　Ｇ　（ｌｏｎｇ／ｋｇ／日）の薬剤併用硝子体炎および脈絡網膜疾患いずれの臨床所見（ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ）もこの高投与量ＰＡＬＡおよび高投与量ＤＨＰＧの併用治療群において最少であった。脈絡網膜ＨＣＭＶの関与の間接的な表われである硝子体炎は、接種後第５日を除いては、すべての時点でＤＨＰＧ薬剤単用治療と同程度であった。この高投与量併用治療群における脈絡網膜疾患は、ＤＨＰＧ薬剤単用治療群にくらべると累積的な効能効果を示しているようである。この高投与量併用治療群は他のＰＡＬＡおよびＤＨＰＧ併用治療群よりは顕著に良好であり、ブラセボ治療よりも大幅に良好であった。視神経炎（ｏｐｔｉｃ　ｎｅｕｒｉｔｉｓ）はこの治療群では接種後すべての時点で低かった。この治療群における神経炎の平均の成績は、他のあらゆる薬剤併用および薬剤単用治療群よりも良好だった。この観察は重要であり、他の薬剤単用ならびに併用治療に比較してこの治療方法が有利であることを示している。このＨＣＭＶ感染モデルにおける視神経頭部の病変は、脈絡網膜疾患およびＨＣＭＶ−誘導病理の展開の信頼できる測定法と検定法である。この高投与量薬剤併用治療群の網膜組織の検定によるＨＣＭＶの回収は、脈絡網膜におけるウィルスが接種後第３日および第４日のみに存在することを示した。一時点／治療群で処理されたのは２サンプルのみであったが、接種後第５日、第６日にはウィルスが回収されなかったという事実は興味深い。培養サンプル中、接種後第３日のＨＣＭＶ力価が最も高く、サンプルより平均１０３．５ｐｆｕのＨＣＭＶが回収された。接種され、薬剤処理を施されたウサギの両眼からのＨＣＭＶの回収がみられたのは、経時評価の第３日に殺されたもののみであった。第４日では培養によって示されたＨＣＭＶの存在は２つの目の一方にしかみられなかった。この脈絡網膜のサンプルにおけるＨＣＭＶの力価は１０’　ｐｆｕ　ＨＣＭＶであった。接種後第３日から第４日にかけてのＨＣＭＶ力価の劇的な低下は、この薬剤併用治療方法の累積的な応答の可能性を示すものである。併用処理を用いた脈絡網膜サンプルからはＨＣＭＶは回収されなかった。この高投与量薬剤併用治療群におけるＨＣＭＶ回収はブラセポ処理をうけた眼における回収よりも良好で、以前のＰＡＬＡとＤＨＰＧの併用治療群におけるＨＣＭＶの回収（ＨＣＭＶの頻度および力価）よりも良好であった。この治療群における力価の減少は他の薬剤併用治療群よりも良好で、ＤＨＰＧ薬剤単用処理群でみられたＨＣＭＶ力価の減少と同程度に良好だった。治療群＃　３　：　Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　（２５ｍｇ／ｋｇ／日）およびＤ　ＨＰ　Ｃ（７，５＋ｎｇ／ｋｇ／日）の薬剤併用［中投与量薬剤併用治療］および治療群＃　４　：　Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａ　（２５Ｈ／　ｋｇ／日）およびＤＨＰＧ（５ｍｇ／　ｋｇ／日）の薬剤併用［低投与量薬剤併用治療］。臨床所見、硝子体膜および脈絡網膜疾患は中投与量および低投与量ＰＡＬＡおよび中投与量ＤＨＰＧの併用治療群においては中程度であった。これらの薬剤併用治療群における硝子体膜の成績は高投与量併用またはＤＨＰＧ薬剤単用治療群に比較すると改善がなかった。中投与量併用治療群に於いて第１θ日の硝子体膜のレベルは上昇したままだった。脈絡網膜疾患の検定を行うと、両方の併用治療群において接種後筒１Ｏ日の網膜の病理としてはっきりと目にみえる中程度の病状の所見を示した。これら併用治療群における脈絡網膜および硝子体疾患の平均の所見は、高投与量併用治療群のものよりもより重症であった。中投与量併用治療群における病状の進行は、低投与量併用治療群における病状と差異がみられなかった。これらの併用群のいずれにおいても、硝子体膜および脈絡網膜疾患は中程度のレベルで明らかであった。中投与量および低投与量併用治療群のいずれにおいても、硝子体膜および脈絡網膜疾患は、高投与量併用およびＤＨＰＧ薬剤単用治療群におけるよりも、より重症であった。視神経炎および視神経頭部の病変は、当研究を通じて中投与量および低投与量治療群に存在した。どちらの併用治療群も中程度のレベルの視神経頭部の神経炎および病理所見がみられた。これらの治療群における視神経頭部病変は、ＤＨＰＧ薬剤単用治療群またはブラセボ治療群のそれとは違いはなかった。これらの治療群における視神経頭部の病変は高投与量薬剤併用治療群に比較すると、より重症であった。これらの併用治療群における脈絡網膜細胞音波破砕培養物のＨＣＭＶの回収は、ブラセボのＨＣＭＶ回収とＤＨＰＧ薬剤単用のＨＣＭＶ回収との間の中間であった。中投与量回収群においては、ＨＣＭｖは接種後第３．４および６日の音波破砕培養物から回収した。力価は接種後第３日の平均１０４から第６日の平均１０１に減少した。ＨＣＭＶ回収はプラセポ治療群における回収より低かった。中投与量治療群における）（ＣＭＶの回収の低下は高投与量併用治療群またはＤＨＰＧ薬剤単用治療群の場合はどには速やかではなかった。低投与量薬剤併用治療群における脈絡網膜細胞音波破砕培養物からのＨＣＭＶの回収は中投与量治療群のものと同程度であった。この低投与量併用治療群における方がブラセボ治療群またはＰＡＬＡ薬剤単用治療群における場合より、第４．５．６日において陽性を示した脈絡網膜サンプルが少なかった。この低投与量治療群における、ＨＣＭＶの力価および回収の頻度は、中投与量併用ＨＣＭＶ治療群の回収頻度およびＨＣＭＶ力価と同程度であった。中投与量および低投与量併用治療群について組織学的検討を加えた。組織学は以下のように要約される。中投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＧ併用治療。この中投与量併用治療群における組織学は、網膜および網膜に隣接した硝子体に混合細胞浸潤物の若干から中程度の蓄積を示した。網膜の破壊は、浮腫、壊死、および完全な厚さの網膜の完全な消失を伴う、巣状から全域に及ぶものがある。脈絡膜は中程度に充血し、浮腫を形成していた。視神経頭部の病変は神経の巣状の浸潤および硝子体の界面における混合細胞浸潤物の蓄積を含んでいた。このサンプルでの病理ははっきりしていた。この病理は、実施例５に示された病理に比較すると、高投与量Ｐ　Ａ　Ｌ　ＡおよびＤＨＰＧ併用治療群および薬剤単用治療群の場合にみられた病理よりもより重篤であった。この中投与量併用治療群における病理は、ブラセボ処理の脈絡網膜サンプル（実施例５）にみられたものほど重症ではなかった。低投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＧ併用治療。このサンルでは硝子体膜は中程度から重篤であった。脈絡網膜の病理は、正常な網膜および脈絡膜の領域で分離された、はっきりそれを区別できる免疫細胞の浸潤の領域に限局されていた。ＨＣＭＶ反応に関与する領域では、網膜は浮腫、免疫細胞の浸潤、壊死および正常な細胞構築の消失を示していた。脈絡膜は脈絡膜血管の顕著な充血と数多くの脈絡膜の領域を重篤に伴っていた。この低投与量併用治療群における病理は、中投与量治療群における病理に類似していた。病理は高投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＧ併用治療群およびＤＨＰＧ薬剤単用治療群にみられるよりはより重く広範囲に及んでいる。治療群＃　５　：　ＤＨＰＧ薬剤単用（ｌｏｍｇ／ｋｇ／日）。この薬剤単用治療群のウサギは、接種後２日目から始まるＤＨＰＧ治療をうけ、接種後１０日までこれを続けた。１０＋ｎｇ／　ｋｇ／日ＤＨＰＧ治療は一日二度にわけて行われた。実施例（５）で示されたように、ＤＨＰＧ治療はＨＣＭＶの脈絡網膜への感染および病変と硝子体膜の発症と進行を低下させた。脈絡網膜疾患は炎症および視神経頭部の免疫細胞の浸潤への、視神経頭部の穏やかな関与を伴って、巣状を保った。脈絡膜は中程度に充血したままであった。これら処置を受けた眼の臨床的な所見は、高投与量のＰＡＬＡおよびＤＨＰＧ併用治療群のものと類似していた。この薬剤単用治療群におけるＨＣＭＶ疾患は、中投与量および低投与量併用治療群よりも良好で、ブラセボ処理群よりも良好だった。ＤＨＰＧ薬剤単用治療群における臨床的な病状所見は、高投与量ＰＡＬＡ併用治療群におけるものと類似していた。実際、高投与量併用治療方法は、ＤＨＰＧ薬剤単用治療よりも若干良好かもしれず、従って二つの静脈注射治療群には累積的な効果があることを示している。細胞音波破砕物からのＨＣＭＶの回収は、ＨＣＭＶ回収率およびサンプルから回収されるＨＣＭＶＯ力価の急速な低下を示した。接種後３日目、この治療群においてＨＣＭＶは両眼の脈絡網膜から回収された。ＨＣＭＶの力価を決定すると１０３ｐｆｕであった。接種後４日目になると、ＨＣＭＶの回収は力価ｌｏｔにまで減少し、二つの脈絡網膜サンプルのうち、明らかに一方のみにしたみられなかった。接種後５日目になるとＨＣＭＶは回収されなかったが、低い力価（１０１）が接種後６日目の一つの脈絡網膜サンプルから回収された。ＨＣＭＶ回収の頻度およびＨＣＭＶの力価の減少は、中投与量および低投与量併用治療群およびＰＡＬＡ薬剤単用治療群およびブラセボ治療群よりも良好だった。ＨＣＭＶの回収のパターンは高投与量併用治療群で示されたものと違わなかった。治療群＃６：ブラセボ治療ブラセポ治療ウサギは、接種後２日目に始まり１００日目で続けられる、滅菌食塩水＋ＥＤＴＡの一回の注射を毎日うけた。ブラセボ治療をうけた眼は微弱から中程度にがけての硝子体膜を発症した。ブラセボ治療をうけた治療群における硝子体膜は、他の薬剤単用および薬剤併用治療群におけるほどに重症ではなかった。これらブラセボ治療の眼における脈絡網膜疾患は、他の治療群におけるよりも顕著に重症だった。網膜血管の巣状の出血および網膜内の出血が数多くみられた。ＨＣＭＶ疾患の巣状の領域は数多く、平均の脈絡網膜疾患のスコアが１．５から２＋という結果を得た。この疾患は巣状から広範囲に及ぶ網膜の浸潤視神経の炎症、および赤目（ｒｅｄｎｅｓｓ）および若干の硝子体膜などよりなっている。硝子体膜は周辺の細胞の浸潤、細胞の凝集塊および雲状様の状態などを伴う、硝子状の糸状体よりなる。プラセボ治療は脈絡網膜症患の発症と進行を止めなかった。プラセボ治療をうけた眼における視神経炎（ｏｐｔｉｃ　ｎｅｕｒｉｔｉｓ）および炎症の平均のレベルは、他の治療群と同程度であった。ブラセボ治療群からのＨＣＭＶ回収により、接種後３〜６日のＨＣＭＶの回収は経時的な評価において１０４から１０２に力価が減少していることが示された。ブラセポ治療群は他の治療群に比較すると、最高の力価の回収を示した。１１．３結論［１］　高投与ＩＰＡＬＡおよびＤＨＰＧを用いた薬剤併用治療は、他のすべての薬剤併用治療より優っている。実際、この高投与量治療は、ＤＨＰＧ治療のみと比較すると、累積的な効能をもつことを示した。［２］　ＨＣＭＶはすべての治療群の経時的分析において回収された。回収の頻度（即ち、ＨＣＭＶ陽性であったウィルス回収サンプルの数は、治療後の時間経過とともに低下した。脈絡網膜音波破砕物から回収されたウィルスの力価もまた、接種後の時間経過とともに低下した。ＨＣＭＶの回収およびＨＣＭＶの力価の低下は、ウサギが受けていた治療と対応をみせた。［３］　高投与量のＰＡＬＡおよびＤＨＰＧの薬剤併用（治療群＃２）２は臨床的病状の所見の軽減および脈絡網膜培養中のＨＣＭＶの回収の低下にたいして、もっとも有効な薬剤併用治療であった。この併用治療はＤＨＰＧ薬剤単用治療と同程度に有効だった。こ薬剤併用治療はＤＨＰＧ薬剤単用治療に比較すると累積的な抗ウイルス効果を示した。［４］　ＨＣＭＶ回収の低下についてみた場合の併用および薬剤単用治療群の有効性の序列：高投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＣ薬剤併用（治療群＃２）ＤＨＰＧ薬剤単用（治療群＃５））中投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＣ薬剤併用（治療群＃３）〉低投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＣ薬剤併用（治療群＃４）＞ＰＡＬＡ薬剤単用（治療群＃１）〉ブラセポ（治療群＃６）。［５］　高投与量ＰＡＬＡおよびＤＨＰＣ薬剤併用は、網膜構造の保持（検眼鏡観察による）にもっとも有効であり、これは最終的に組織病理学的に確認された。表９薬剤単用および併用の静脈注射治療をうけたウサギの視神経炎の評点視神経炎の評点２　Ｓ２　０　０　０　０　０　０ＯＮＨ−視神経頭部す。表１Ｏ培養物は静脈注射治療中のＨＣＭＶ細胞音細胞音波破砕物ことで準のプラーク検定によって決定した。表１１薬剤単用および併用治療群からの経時的ＨＣＭＶ回収脈絡網膜培養から回収されたＨＣＭＶの平均力価治療群　培養後日数治療群＃　Ｉ　２／２”；　２／２　；　２／２　；　２／２　；［５０ｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡコ　１０’　。　１０”　’　１０”　１０’治療群＃２　２／２；１０”１／２；　Ｏ／２；Ｏ／２；［５０ｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ　＋　１０’Ｌｏｎｇ／ｋｇ／日　Ｄ）ＩＰＧコア、　ｓ＋ｎｇ／ｋｇ／日　ＤＨＰＧ］治療群＃４　２／２．ＩＯ’　１ノ２　；　Ｏ／２　；　０／２　；［１０ｎｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ　＋　１０’　１０’５＋ｎｇ／ｋｇ／日　ＤＨＰＧ］治療群＃　５　２／２；　１０’　ｌ／２　、０／２　、０／２　。［１０ｍｇ／ｋｇ／日　ＤＨＰＧコ　１０’　ｔｏ’ウサギにおけるＰＡＬＡ投与量増大の効能評価：時間経過評価における臨床所見およびＨＣＭＶ回収これらの実験はモデルウサギへのＨＣＭＶ感染後、ＨＣＭＶ疾患の臨床所見、培養の細胞音波破砕物からのＨＣＭＶの回収、およびＨＣＭＶ誘導疾患の組織病理学的な重篤さを比較することによって、静脈注射治療の投与量を増加させたときのＰＡＬＡの効能を評価するために行った。脈絡網膜細胞音波破砕物の共培養物（ｃｏ−ｃｕｌｔｕｖｅ）からのＨＣＭＶ力価をＤＨＰＧおよびブラセボ治療を行ったウサギのＨＣＭＶ回収力価と比較した。１２．１方法合計６０匹の有色ウサギがこの研究に用いられた。ウサギは正常な眼の形態をもちかつ既存の病理をもたないことを確認するためにスリットランプおよび間接的な検眼鏡検査によって評価をうけた。ウサギは以下のように処置された：（Ｉ）０８目、すべてのウサギは、すべての後部（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ　ｓｅｇｍｅｎｔ）が正常であることを確認するために間接的な検眼鏡検査によって評価をうけた。眼底（ｒｕｎｄｕｓ）の検査の後、ウサギは瞳孔を拡大させるための外用点眼薬の点眼をうけた。外用点眼薬の処置は接種後１０日まで続けられた。（２）θ８目、すべてのウサギは硝子体内に１００μβ中のＩＯ“ＰＦＵのＡＤ１６９株のＨＣＭＶの注射をうけた。（３）ウサギは個別のケージで飼育され、脈絡網膜のＨＣＭＶ疾患の発症と進行について毎日検査をうけた。接種後２８目、ＨＣＭＶ接種ウサギは１０匹のＨＣＭＶ接種ウサギおよび１匹の模擬接種ウサギよりなる治療群に分けられた。ＨＣＭＶ感染ウサギおよび模擬接種ウサギは以下に述べるような静脈注射治療をうけた。ＰＡＬＡ薬剤単用の投与量増加静脈注射治療：治療群＃１：ｌＯ匹のＨＣＭＶ− 接種ウサギ。接種後２日から１０日にかけたＰ　Ａ　Ｌ　Ａ　（５０ｍｇ／　ｋｇ）の静脈注射。１匹のウサギあたり合計９回の注射。この治療群のウサギは経時的な研究のなかで接種後３．　４．　５９６日に殺されＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞音波破砕物におけるＨＣＭＶの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通じて、継続的な観察をうけた。治療群＃２１０匹のＨＣＭＶ接種ウサギ。接種後２日から１０日にかけたＰ　Ａ　Ｌ　Ａ　（７５ｍｇ／ｋｇ）の静脈注射。１匹のウサギあたり合計９回の注射。この治療群のウサギは経時的な研究のなかで接種後３，４．５゜６日に犠牲にされ、ＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞音波破砕物におけるＨ　ＣＭ　Ｖの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通じて、継続的な観察をうけた。治療群＃３：ｌＯ匹のＨＣＭＶ接種ウサギ。接種２日から１０日にかけたＰ　Ａ　Ｌ　Ａ　（１００ｍｇ／ｋｇ）の静脈注射。１匹のウサギあたり合計９回の注射。この治療群のウサギは経時的研究のなかで接種後３．　４．　５゜６日に犠牲にされ、ＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞音波破砕物におけるＨＣＭＶの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通じて、継続的な観察をうけた。ＰＡＬＡおよびデキサメタソンの薬剤併用の結膜下治療治療群＃４：ＨＣＭＶ接種の１時間前に、４＋ｇのデキサメタソンの結膜上付着をうけた１０匹のウサギ。ウサギはＰＡＬＡの静脈注射治療をうけた（接種後２日から１０日にかけて７５ｍｇ／　ｋｇ／日）。この治療群のウサギは経時的な研究のなかで接種後３，４．５゜６日に犠牲にされ、ＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞音波破砕物におけるＨＣＭＶの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通して継続的な観察をうけた。陽性および陰性対照治療群治療群＃５：１０匹のＨＣＭＶ接種ウサギ。接種後２日から１０日にかけた、−日２回に分けたＤＨＰ０１０ｍｇ／　ｋｇ／日の静脈注射。この治療群のウサギは経時的研究のなかで接種後３．　４．　５゜６日に犠牲にされ、ＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞破砕物におけるＨＣＭＶの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通じて継続的を観察をうけた。治療群＃６：ｌＯ匹のＨＣＭＶ接種ウサギ。接種後２日から１０日にかけた、滅菌食塩水の静脈注射。この治療群のウサギは経時的研究のなかで接種後３，４，５゜６日に犠牲にされ、ＨＣＭＶの回収と力価の低下の評価をうけた。２匹のウサギ（４眼球）から眼を摘出し、接種後の各時点での細胞破砕物におけるＨＣＭＶの回収を調べるための処理をうけた。残る２匹のウサギは９日間の治療期間を通じて、継続的な観察をうけた。［４］　すべでのウサギは、ＨＣＭＶ疾患の臨床所見の進行を評価するために、毎日間接的な検眼鏡検査またはハンドホールド型の９０ジオプトリーのレンズによるスリットランプ検査をうけた（接種後２日から１０日）。眼底（ｆｕｎｄｕｓ）検査はウサギのうけた治療について知らされていない二人の検査者によって独立に検査された。［５］　すべでのウサギはＰＡＬＡ薬剤単用による接種後３，４゜５．６日のＨＣＭＶの力価の低下を評価するために経時的な実験のなかで犠牲にされるか、またはＰＡＬＡの治療効果の臨床的な経過を組織学的に確認するために１２日１に犠牲にされた。薬剤の静脈注射治療をうけたすべての治療群の臨床所見、ウィルス回収および組織学的な有効性は互いに相関しており、またブラセポ治療群とも相関していた。この投与量増大有効性評価の経過における個々のウサギについての要約。０日目、すべてのウサギはスリットランプによる顕微鏡生検および眼底（ｆｕｎｄｕｓ）検査による事前評価をうけた。ウサギは１から６０まで、およびＳＬからＳ３まで番号をつけられた。事前検査が終ってすぐにウサギは硝子体内への注射によるＨＣＭＶの接種をうけた。ウサギは直ちに無作為にグループ分けされた。第１日、ウサギは下記のように静脈注射治療（第１日から第１０日まで）をうけた：治療群＃ｌ：ウサギ＃ｌ、２．　３．　４．　５．　６．　７．　８．　９．１０および１匹の模擬接種をうけたウサギＳＬ　−５０ｍｇ／　ｋｇ　ＰＡＬＡ。治療群＃２：ウサギ＃　１１．１２．１３．１４．　＋５．１６．１７．１８．　Ｈｌ、　２０および１匹の模擬接種をうけたウサギ＃２−毎日７５＋ｎｇ／ｋｇＰＡＬＡの静脈注射をうけた。治療群＃３：ウサギ＃２１．２２．２３．２４．２５．２６．２７．２８．２９．３０および１匹の模擬接種をうけたウサギ＃３−毎日ｔｏｏｍｇ／ｋｇＰＡＬＡの静脈注射をうけた。治療群＃４：ウサギ＃３１．３２．３３．３４．３５．３６．３７．３８．３９および４０は１回のみの４＋ｎｇのデボメトロール（ステロイド）の結膜上注射をＰＣＭＶ接種の直前にうけた。これらウサギは次いで毎日７５ｍｇ／ｋｇ　Ｐ　Ａ　Ｌ　Ａの静脈注射をうけた。治療群＃５：ウサギ＃４１．４２．４３．４４．４５．４６．４７．４８．４９および５０はＤ　ＨＰ　Ｇ　（１０ｍｇ／　ｋｇ／日）の静脈注射治療を毎日うけた。治療群＃６：ウサギ＃５１．５２．５３．５４．５５．５６．５７．５８．５９および６０は毎日プラセポの静脈注射治療（滅菌０．１９％食塩水＋１％ＥＤＴＡの注射）をうけた。ＨＣＭＶ接種、薬剤単用治療ウサギの犠牲：接種後６日：犠牲およびＨＣＭＶ回収のための脈絡網膜細胞音波破砕物の培養− 治療群＃ｌ：ウサギ＃ｌおよび２治療群＃２：ウサギ＃ｌｌおよび１２治療群＃３：ウサギ＃２１および２２治療群＃４：ウサギ＃３１および３２治療群＃５：ウサギ＃４１および４２治療群＃６：ウサギ＃５１および５２接種後第４日：犠牲およびＨＣＭＶ回収のための脈絡網膜細胞音波破砕物の培養 − 治療群＃ｌ：ウサギ＃３および４治療群＃２：ウサギ＃１３および１４治療群＃３：ウサギ＃２３および２４治療群＃４：ウサギ＃３３および３４治療群＃５：ウサギ＃４３および４４治療群＃６．ウサギ＃５３および５４接種後第５日：犠牲およびＨＣＭＶ回収のための脈絡網膜細胞音波破砕物の培養 − 治療群＃ｌ：ウサギ＃５および６治療群＃２：ウサギ＃１５および１６治療群＃３：ウサギ＃２５および２６治療群＃４；ウサギ＃３５および３６治療群＃５：ウサギ＃４５および４６治療群＃６：ウサギ＃５５および５６接種後第６日：犠牲およびＨＣＭＶ回収のための脈絡網膜細胞音波破砕物の培養 − 治療群＃１；ウサギ＃７および８治療群＃２：ウサギ＃１７および１８治療群＃３：ウサギ＃２７および２８治療群＃４：ウサギ＃３７および３８治療群＃５：ウサギ＃４７および４８治療群＃６：ウサギ＃５７および５８接種後第１２日目：犠牲および組織培養による脈絡網膜細胞音波破砕物からのＨＣＭＶ回収のため、または組織学的評価のための組織の処理。効能の評価が終って犠牲にされたウサギは間接的な検眼鏡検査で毎日観察をうけた。これらウサギのＨＣＭＶ疾患臨床所見は本報告について図で示した、硝子体−網膜疾患の概要を構築するために用いられた。評価を終って犠牲にされたウサギは以下である。臨床的病理所見：硝子体膜および脈絡網膜疾患の発症と進行図９およびＩＯは薬剤単用静脈注射治療をうけた治療群における、硝子体−網膜疾患の発症と進行についてのデータをまとめたものである。脈絡網膜疾患の発症と進行は、接種後５〜６日までに４０％の眼について硝子体膜の発症と進行のために部分的に不明確となった。棒グラフはＰＡＬＡの投与量増大治療および対照治療をうけた動物における、硝子体−網膜疾患の経過の傾向を示している。表１２．１３．１４．１５は硝子体膜および視神経頭部疾患の重篤さについての生のデータ、および接種後３，４，５．６日の４ＩＩ／治療群からのＨＣＭＶ回収についてまとめたものである。１２．２結果ＰＡＬＡ薬剤単用静脈注射治療治療群＃　１　：　ＰＡＬＡ薬剤単用治療５０ｍｇ／ｋｇ／日この治療群のウサギ＃ｌから＃８までがこの経時的ＨＣＭＶ回収研究において犠牲にされた。この５０　ｍｇ／ｋｇ／日の薬剤単用治療群のウサギ＃９および＃ＩＯは、静脈注射治療の全経過にわたって継続的な評価をうけた。硝子体膜として表わされた臨床所見は接種後６日間にわたって増強した。接種後７日、硝子体膜（炎症反応）は低いレベルに軽減した。この観察は５０ｗ＋ｇ／ｋｇのＰＡＬＡ薬剤単用治療における硝子体疾患の発症と進行についてのこれまでの観察に類似していた。視神経頭部疾患の重篤さもまた、過去に報告された５０＋ｎｇ／　ｋｇ／日治療の眼と類似していた。この研究では、視神経頭部の病変は接種後４日で最大となり、その後実験を終了するまで一貫して低いレベルに軽減した。この薬剤単用治療群における細胞音波破砕物の検定によるＨＣＭＶの回収の検討により、接種後３．　４．　５．　６日に脈絡網膜におけるウィルスの存在が示された。培養サンプル中のＨＣＭＶの力価は接種後３日に最高を示し、４脈絡網膜細胞音波破砕サンプルから、平均１０”・’　ｐｆｕのＨＣＭＶが回収された。治療をうけた眼からのＨＣＭＶの回収の頻度は接種後４．５日に低下した。ウィルス回収（ＨＣＭＶ回収の頻度）の再上昇は接種後６日に認められ、脈絡網膜細胞音波破砕サンプルから、ＨＣＭＶが回収された（４／４）。ＨＣＭＶの力価は、ＨＣＭＶの力価の１０’　Ｉ）ｆｕ／１１１へのわずかな再上昇をみせた接種後６８目を除いて、経時的な回収実験の全過程を通じて低下した。この薬剤単用治療群におけるＨＣＭＶ回収は、プラセボ治療をうけた眼における回収より良好だった。（ＤＨＰＣ治療の眼はわずかに低いＨＣＭＶ力価を示し、また回収実験において陽性を示した脈絡網膜サンプルの数か少なかった）。模擬接種をうけ５０＋ｎｇ／ｋｇ／日のＰＡＬ、Ａ治療をうけたウサギ＃Ｓｌは、この研究の過程で温和な硝子体膜を発症した。５０ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡ治療をうけた模擬接種ウサギにおける硝子体膜のレベルは接種後７日で０．５から０．７５であった。第２群：　ＰＡＬＡ薬剤単用治療　７５ｍｇ／ｋｇ／日この治療群の１１−１８番のウサギをＨＣＭＶ回復試験中に犠牲にした。この７５ｍｇ／ｋｇ／日　薬剤単用治療群の１９番と２０番の動物は静脈内治療中に連続して評価した。硝子体長として示される臨床疾患は接種後の６日を通して増加した。接種後７日目には、硝子体長（炎症応答）は上昇したままであった。視神経頭部疾患の重篤度も、以前報告したｓｏｍｇ／ｋｇ／日で治療した目のものと同様であった。視神経頭部の病変は接種後４日目に最高となり、急速に減少した。接種後７日目までは、臨床評価によっては視神経頭部の変化は明らかではなかった。ＰＡＬＡ５０ｍｇ／ｋｇ／日を虚偽接種治療した動物、Ｓ１番は試験中、硝子体長も脈絡網膜疾患も生じなかった。この薬剤単用治療群における細胞音波処理検定によるＨＣＭＶ回復により、接種後３．４．５および６日目に脈絡網膜内にウィルスが存在することが示された。培養試料中のＨＣＭＶ力価は接種後３および４日目に最高となり、このとき各時点で脈絡網膜細胞音波処理試料から平均ｔｏ”ｐｆｕのＨＣＭＶおよび１０３７ ”ｐｆ　ｕ　ＨＣＭＶが回復した。接種後５日目にはＨＣＭ　Ｖ力価は低レベルに減少した。治療した目からのＨＣＭＶ回復頻度は接種後４および５日目に減少した。接種後６日目には、力価は低いままであった。しかしながら、ウィルスが回復した試料の数は接種後６日目には増加し、５０ｍｇ／ｋｇ／日　治療群で観察された反動を示した。この７５ｍｇ／ｋｇ／日　治療群では接種後６日目に、３／４の試料が細胞音波処理によるＨＣＭＶに対して陽性であった。薬剤単用ＰＡＬＡ治療群におけるＨＣＭＶ回復頻度のこの増加は再現可能であった。この薬剤単用治療群におけるＨＣＭＶ回復はブラセポ治療と匹敵するものであった。この薬剤単用治療群は、脈絡網膜組織から回復したＨＣＭＶ力価の減少、およびＨＣＭＶ回復頻度の減少においてＤＨＰＧはどには効果的でなかった。第３群：　ＰＡＬＡ薬剤単用治療　１０　ｏｍｇ／ｋｇ／日この治療群の２１〜２８番のウサギを）（ＣＭＶ回復試験中に犠牲にした。このｌｏ　Ｏｍｇ／ｋｇ／日　薬剤単用治療群の２９番と３０番の動物は静脈内治療中に連続して評価した。硝子体長として示される臨床疾患は試験中を通して上昇した。接種後７日目には、硝子体長（炎症応答）は上昇したままであり、７５ｍｇ／ｋｇ／日群で観察された硝子体長に匹敵した。視神経頭部疾患の重篤度も、５０ｍｇ／ｋｇ／日で治療した目における疾患以上に上昇した。視神経頭部の病変は接種後４日目に最高となった。接種後７日目まで、臨床評価によって中程度から高レベルの視神経頭部の変化が明らかであった。硝子体長および視神経頭部疾患重篤度はいずれも他の薬剤単用ＰＡＬＡ、ＤＨＰＧおよびブラセポ治療と比較して増加した。おそらく、投与量１０　ｏｍｇ／ｋｇ／日がこの化合物の毒性閾値であるか、毒性閾値のやや上であろう。１００ｍｇ／ｋｇ／日で治療した動物においてＨＣＭＶ疾患が改善されなかったという事実は重要である。これらの増加する投与量での耐性に関する結果は、高濃度のＰＡＬＡが耐性でないことを示す。実際、投与量ｌｏ　ｏｍｇ／ｋｇ／日は動物に毒性であった。ＰＡＬＡｍｇ／ｋｇ／日で虚偽接種して治療した動物、８３番は試験中、接種後５〜７日目に中程度の硝子体長と一過性の視神経頭部変化を生じた。これらの結果は、１００ｍｇ／ｋｇ／日での治療が毒性領域であることを示す。この薬剤単用治療群における細胞音波処理培養によるＨＣＭＶ回復により、接種後３．４．５および６日目に脈絡網膜内にウィルスが存在することが示された。培養試料中のＨＣＭＶ力価は接種後３日目に最高となり、このとき脈絡網膜細胞音波処理試料から平均１０’ｐｆｕのＨＣＭＶが回復した。接種後５日目にはＨＣＭＶ力価は低回復レベル（ｌ　Ｏ”ｌ）ｆ　ｕ／ｍりに減少した。最も重要なことに、接種後４および５日目には、治療した目からのＨＣＭ　Ｖの回復頻度は減少した。しかしながら、接種後６日目には、脈絡網膜細胞音波処理培養から回復されたＨＣＭＶの力価は、陽性培養の数（例えば、細胞音波処理試料からのＨＣＭＶ回復頻度）と同様に増加した。このｌｏｏｍｇ／ｋｇ／日　治療群では接種後６日目に、３／４の試料が細胞音波処理回復によるＨＣＭＶに対して陽性であった。ＨＣＭＶの力価は接種後３日目のＨＣＭＶ回復力価と同様のレベルに増加した。この薬剤単用治療群におけるＨＣＭＶ回復はブラセボ治療された動物におけるＨＣＭＶ回復よりも有意に高かった。この薬剤単用治療群は、臨床疾患の進行または細胞音波処理培養からのＨＣＭＶ回復の減少において効果的でなかった。第４群：　ＰＡＬＡ薬剤単用治療　１００ｍｇ／ｋｇ／日プラス４ｍｇ結膜下ステロイド注入この治療群の３１〜３８番のウサギをＨＣＭＶ回復試験中に犠牲にした。この７５ｍｇ／ｋｇ／日　薬剤単用治療プラス４ｍｇ結膜エステロイド治療群の３９番と４０番の動物は静脈内治療中に連続して評価した。硝子体長として示される臨床疾患は評価期間を通して穏やかであった。視神経頭部疾患重篤度も他のすべての治療群と比較して減少した。臨床疾患重篤度におけるこれらの減少は、目を沈静化し、かっＨＣＭＶ接種に対する宿主免疫応答を減少させる結膜下ステロイド注入に直接応答していた。この薬剤単用治療群における細胞音波処理検定によるＨＣＭＶ回復により、接種後３．４．５および６日目に脈絡網膜内にウィルスが存在することが示された。培養試料中のＨＣＭＶ力価は試験中を通して上昇したままであった。回復されたＨＣＭＶの平均力価は接種後３〜６日目でＩＯ’ｐｆｕであった。ステロイド治療群で回復された高いＨＣＭＶ力価に加えて、ＨＣＭＶ回復頻度（陽性試料の数）は、５０ｍｇ／ｋｇ／日および７５ｍｇ／ｋｇ／日　治療群と同様であった（例えば、ＨＣＭＶ回復頻度がだんだんと減少し、次いで接種後６日目にＨＣＭＶ回復の反動がある）。このステロイド治療群においては硝子体長の進行および視神経頭部変化は減少したが、ウィルスの力価は上昇しており、このことによりステロイドがＨＣＭＶ複製（または検出）を増強する可能性があることが示された。７５ｍｇ／ｋｇ／日でのＰＡＬＡを用いたこの治療は、疾患の進行およびＨＣＭＶ復製および脈絡網膜組織からの回復を抑制するのに効果的でなかった。第５群：薬剤単用ＤＨＰＧ　（１０ｍｇ／ｋｇ／日）この治療群の４１〜４８番のウサギをＨＣＭＶ回復試験中に犠牲にした。このｔｏｍｇ／ｋｇ／日　薬剤単用ＤＨＰＧ治療プラス群の４９番と５０番の動物は静脈内治療中に連続して評価した。この薬剤単用治療群の動物は、接種後２日目から始めて接種後ｌＯ０日目で続＜ＤＨＰＧ治療を受けた。ｌｏｍｇ／ｋｇ／日　ＤＨＰＧ治療を２つの投与量に分けた。先の研究で示されたように、ＤＨＰＧ治療はＨＣＭＶ−誘導の視神経疾患重篤度の進行を減少させた。硝子体膜の進行はＤＨＰＧ治療によってほんのわずか影響された。細胞音波処理培養からのＨＣＭＶ回復により、ＨＣＭＶ回復率および試料から回復されたＨＣＭＶの力価が急速に減少することが示された。接種後３日目に、ＨＣＭＶの力価はＩＯ”ｐｆｕであることが示された。接種後４日目までに、ＨＣＭＶ回復は１０１０の力価まで減少した。ＨＣＭＶ回復頻度および力価は接種後６日を通して減少し続けた。ＤＨＰＣ治療群ではＨＣＭＶ力価または陽性ＨＣＭＶ組織の数に反動は見られなかった。ＨＣＭＶ回復および力価減少のパターンは、他の薬剤単用ＤＨＰＧ治療群で先に示された結果と異ならない。第６群：ブラセボ治療この治療群の５１〜５８番のウサギをＨＣＭＶ回復試験中に犠牲にした。このブラセボ治療群の５９番と６０番の動物は静脈内治療中に連続して評価した。接種後２日目から、プラセボ治療の動物は、滅菌食塩水＋ＥＤＴＡの注射を毎日１回受け、これを接種後ｌＯ０日目で続けた。プラセボ治療された目は軽度から中程度の硝子体膜を生じた。ブラセボ治療群の硝子体膜は試験中を通して進行し続けた。硝子体膜は、末梢細胞浸潤、細胞凝集および曇りを伴う硝子体線維から成っていた。ブラセボ治療した目における視神経炎および炎症の平均レベルは他の治療群に匹敵した。ブラセボ治療群からのＨＣＭＶ回復により、接種後３〜６日におけるＨＣＭＶ力価が評価期間中に１０”″から１０”に減少したことが示された。ブラセボ治療群は他の治療群と比較して最も高い力価回復を示した。ＰＡＬＡ薬剤単用治療群で示されたような６日目のＨＣＭＶ回復または力価の反動は見られなかった。日に増加してウサギを治療しても、有効性に増加は見られなかった。実際、１００ｍｇ／ｋｇ／日群は動物に毒性であった。眼病は高レベルのままであった。投与量７５ｍｇ／ｋｇ／日は、ＰＡＬＡ投与量５０ｍｇ／ｋｇ／日またはＤＨＰＣ投与量ｔｏｍｇ／ｋｇ／日と比較して改善が見られなかった。（２）すべての治療群の分析中においてＨＣＭＶが回復した。回復頻度（例えば、陽性ＨＣＭＶであったウィルス回復試料の数）の相違は、治療後の時間経過とともに減少した。脈絡網膜音波処理試料から回復されたウィルスの力価も接種後の時間経過とともに減少することは明白である。興味深いことに、ＰＡＬＡ薬剤単用治療群のすべてにおいて、接種後６日目におけるＨＣＭＶ検出および接種後６日目におけるＨＣＭＶ力価に反動があったという結果が得られた。この力価および頻度の観察はＰＡＬＡ治療の濃度が高いほど顕著であった。（３）結膜下ステロイド注入群の結果は、ステロイド治療が硝子体膜および視神経頭部病変を抑制することを示した。この疾患経過を、ステロイド治療群で評価するのは容易であった。７５ｍｇ／ｋｇ／日　治療は、非ステロイド治療の７５ｍｇ／ｋｇ／日治療における場合と同様、ＤＨＰＧ治療はどには有効でなかった。ステロイドを使用した場合の１つの潜在的な問題点は、接種後３〜６日間を通してＨＣＭＶ力価が上昇したままであったことである。力価の上昇に加えて、ＨＣＭＶ回復頻度が、薬剤単用７５ｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ治療した目で観察されたのと同様であった。（４）上記の投与量を増加させた治療の評価におけるＨＣＭＶ回復の減少に関して、薬剤単用治療群の有効性のランク付けは以下の通りである：ＤＨＰＧ治療（第５群）＞ＰＡＬＡ薬剤単用ｓｏｍｇ／ｋｇ／日（第１群）＞＞ＰＡＬＡ薬剤単用７５ｍｇ／ｋｇ／日（第２群）〉または同等：プラセボ治療（第６群）〉〉薬剤単用ＰＡＬＡ１ｏｏｍｇ／ｋｇ／日（第３群）〉薬剤単用ＰＡＬＡ７５ｍｇ／ｋｇ／日プラス４ｍｇ結膜下ステロイド注入（第４群）。この研究および以前の研究の結果から、網膜内でのＨＣＭＶ疾患の進行の減少、およびＨＣＭＶウィルス回復の減少（回復したＨＣＭＶの力価および脈絡網膜試料からのＨＣＭＶ回復頻度の双方）においては、薬剤単用ＰＡＬＡ治療はＤＩ− ＩＰＧ治療はどには有効でないことは明白である。したがって、実施例６に示すように、ＣＭＶウィルス感染を治療するときには、併用治療でＰＡＬＡを使用することが好ましい。ＨＣＭＶに対する結果は明瞭であったり、矛盾していたりするようにみえるが、低投与量ＰＡＬＡプラスＤＨＰＧ、ならびに高投与量ＰＡＬＡプラスＤＨＰＧはいずれも、視神経の保存およびウィルス力価の減少において、単独投与ＰＡＬＡまたは単独投与ＤＨＰＧよりも有効であった。表１２硝子体−網膜スコア群　動物　３４５６７１　９　１．０會　０．７５　０．６５　０．７５　０．４１　１０　１．５　２．５　１．２５　０．６　０．４２　１９２．２５　２．７５　１．７ｓ　２．Ｏｎ口５ｃｏｒｅ２　２０　１、ｓ　３．５　３．５　５．５　５．０３　２９　１．０　４．５　３．５　４．０　コ、２５３　コＯＯ，７５３，７５３，０４，０４，２５４３９１，００，７５０，７５１，５１，０４４０１，０１，ｓ　１．０　１．７５　２．２５Ｓ　４９　４．７５　３．７５　４．０　２．５　３．２５５　Ｓｏ　５．０　５．７５　５．０　５．２５　５．５６　５９　１．０　２．２５　３．０　３．０　１．７ｓ６　６０　１．２ｓ　２．７５　２，７５　３．０　３．０＊　スコアは両目／ウサギの合計を表す。＊＊　片方だけが評価できた。＊＊＊　白色反射のみ。表１３視神経炎スコア＊群　動物　ＯＮＨＯＮＨＯＮＨＯＮＨ０ＮＨＯＮＨ−視神経頭部ＮＲ−読み取れず＊　スコアは両目／ウサギの視神経頭部変化（神経炎）の合計を表す。？　基底部観察（ｆｕｎｄｕｓ　ｖｉｅｗ　）不明瞭＊＊　片方だけが評価できた。表１４接種後３〜６日の組織培養による脈絡網膜細胞音波処理からのＨＣＭＶ回復回復ＨＣＭ　Ｖ　ＨＣＭ　Ｖ力価群　犠牲口　動物番号　００　０Ｓ　ＯＤ　ＯＳコー――＋−― 表１４続き回復）（ＣＭＶ　ＨＣＭＶ力価群　犠牲口　動物番号　ＯＤ　Ｏ３ＯＤ　Ｏ３培養の結果物は、！Ｐ脈注射治療によるＨＣＭＶｉｌｌ胞の超音波処理培養物である。培養物をコースタ−クラスターの１２ウエルに置いた。全ての陰性培養物を、２８日の全てにおいて別々に３回培養した。陽性培養物のＨＣＭＶタイターは、培養物におけるＨＣＭＶの存在量の検出の後、標準プラーク分析により決定した。培養結果は静脈内治療中のＨＣＭＶ細胞音波処理培養である。培養物はコスタ−クラスター（ｃｏｓｔｅｒ　ｃｌｕｓｔｅｒ）中の１２ウエル（ｗｅｌｌｓ　）上においた。すべての陰性培養物は、合計２８日の培養中の３つの別々の期間で目視されなかった。陽性培養物のＨＣＭＶ力価は、培養物中のＨＣＭＶ存在（陽性）を決定した後に標準的プラークアッセイによって決定した。表Ｉ５単葉および併用治療群からの時間経過ＨＣＭＶ回復：脈絡網膜音波処理物から回復したＨＣＭＶの平均力価接種後日数治療群　３　４　５　６第１群（５０ｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ）　４／４＊、１ｏ’ζ　１／４７１０”　２／４ｊ　１０’　４／４７１０’第２群（７５＋＋＋ｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ）　４／４；　１０”　３／４；　ｘｏ” ’　□／４＋　１０’　２／４１　、ｏ、、ｌ第３群（ｌｏＯｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ）　４／４ｒ　１０’　３／４７１０’　ｌ／４．１０：　、、４．　、。、。第４群（７５ｍｇ／ｋｇ／日　ＰＡＬＡ　２／４７１０’　２／４ｒ　１０１１１１４；　１０’　３／４７１０．Ｊプラス４ｍｇ結膜下ステロイド）第５群（ｌｏｍｇ／ｋｇ／日ＤＨＰＧ）３／４７１０’　２／４＋ｌＯ”　２／４７１０’　ｌ／４；１０’第６群１３、実施例８アフリカミドリザルの皮膚におけるワクシニアウィルス複製の抑制に関するＰＡＬＡおよびリファンピシンの評価以下のサブセクションは、アフリカミドリザルをワクシニアウィルスに感染させ、ＰＡＬＡ、リファンピシンおよびこれらの組み合わせで処置した実験について記載する。その結果は、リファンピシンと組み合わせたＰＡＬＡが他の治療より良好に病変を減少させたことを実証している（第１２図）。さらに、ＰＡＬＡのみを５０　ｍｇ／ｋｇ７日で投与したサルおよびＰＡＬＡおよびリファンピシンを組み合わせた治療を受けたサルの両方において、ウィルス力価はより低かった（第１３図）。１３．１　材料および方法１５匹の成体アフリカミドリザルを実験に使用して、ワクシニアウィルスによる感染を抑制する能力について、ＰＡＬＡと命名された化合物を単独およびリファンピシンと組み合わせて評価した。試験の開始前に、１５匹のサルの各々からの血清を１：１０の希釈で、ワクシニアウィルスに対する血清陰性（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｉｔｙ）について試験した。用いた試験は、１００　ＴＣＩＤｉ。のウィルスを用いる血清中和ア１ソセイであった。ワクシニアウィルスによる感染は、各サルの毛を剃った背中の８個所の各々に１　＋　１００希釈の保存ウィルス０．１＋ｎｌを経皮的に注入することにより生じた経皮膚感染であった。ウィルス接種の力価は、各注入個所が１０’　ＴＣＩＤ、。のウィルスを受けたことを示していた。ウィルス感染に続いて、サルを３匹ずつの５群にグループ分けしたが、その割当は表１に表示しである。ウィルス接種の前に、各サルの重量を測定し、ベースラインの血漿およびリンパ球サンプル用に５ａ＋Ｉの血液を採取した。ウィルス接種の２４時間後に、ＰＡＬＡおよび／またはりファンビシンによる処置を開始した。置薬物とも処置の前に毎日新鮮なものを作製した。１００　ｍｇ／ｎｌの溶液５岨を含有するバイアルにＰＡＬＡを入れた。ｐＨ７，２のＰＢＳでｌ；４希釈を作製し、薬物濃度を２５　ｍｇ／ｍｌにした。ｌおよび３群のサルには、毎日午前８時と午後８時に分割した投与で静脈注射により、５０　ｍｇ／ｋｇ／日でＰＡＬＡを投与した。２５　ｍｇ７ｍｌのＰＡＬＡ溶液をｋｇ体重当たり１　ｍｌで伏在静脈に投与した。リファンピシンを３００　ｗｌｇのアリコートに検量し、これを１０＋＋＋ｌのＤＭＳＯに溶解して、６０ｍ１の体積にした。この希釈により５１ｇ／ｗ＋１の濃度となった。２および３群には、ｋｇ体重当たり１ａ＋Ｉまたは５ｎａｇ／ｋｇの静脈注射をした。午前８時と午後８時の日に２回の処置により、毎日の投与量を１０　＋ｎｇ／ｋｇとした。５群のサルには、感染後１日目および７日目に一回の静脈注射で与えるｔ２５　ｍｇ／ｋｇのＰＡＬＡを投与した。４群は、毎日午前８時および午後８時に静脈注射でＰＢＳを投与した感染コントロール群であった。すべての処置をｌＯ日間継続した。病変部を毎日検査し、重症度の増加に関して士〜４＋のスケールでスコアをつけることにより、感染を評価した。個々のサルの病変スコアを足すことにより各サルの総スコアを出し、そのスコアを病変部の数で割ることにより平均値を出した。これにより、各サルの毎日の平均病変スコアが得られた。さらに、感染後３．７、およびＩＯ０回目、各サルの病変部のひとつを８１１１ｆｆｌの皮膚パンチを用いて生検した。生検部を縫合により閉じた。生検した皮膚の各月をガラス組織グラインダーに移し、その組織を２＋ｎｌの組織培養培地（２％ウシ胎児血清および抗生物質を含む最小必須培地）中で均質化した。Ｖｅｒｏ細胞を含む２４ウエルの培養プレート中で２重に培養した階段１０倍希釈を調製して、この組織ホモジネートのワクシニアウィルス力価を測定した。４日間のインキュベーション後、培養物をメタノールで固定し、メチレンブルー−塩基性ツクシンで染色し、プラークの数を計測した。感染後Ｏ１３，６，８およびｌＯ０回目、５＋ｏｌの血液をヘパリン中に採取し、血漿および細胞を分離した。血漿を一２００℃で凍結させ、細胞をＰＢＳでＩｌｌに希釈してフィコール−ハイバーク勾配上に重ねた。１４００　ｒｐｍで３０分間遠心分離した後、白血球バンドを回収し、１５％５％ウシ胎清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で２回洗浄した。この２回の洗浄の後、培養培地を除去し、沈殿した細胞を１ｍＭジチオスレイトール、ｌ　ｍＭ　ＥＤＴＡおよび１０　ｍＭ酢酸マグネシウムの溶液中に懸濁させ、−７０℃で凍結させた。上記のサルを１０．１４および２１１回目重量測定し、ワクシニアウィルスに対する抗体力価の測定のために１４および２１１回目採血した。抗体力価は血清中和アッセイにより測定した。１３．２　結果各サルの平均病変スコアを表１６に示す。３．６．７．８．９、ＩＯおよび１３３回目各サルの背中のすべての接種部位から病変のスコアをつけ、その平均を計算した。各群のサルの平均スコアは各評価日ごとに出し、太字タイプで示す。このデータは、５０ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡおよびＩｏ　ｍｇ／ｋｇ／日のりファンビシンと組み合わせた５０　ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡが病変の発生と進行および大きさを減少させるのに効果があったことを示している。２匹の感染コントロールサルには識別できる病変があり、１匹のコントロールサルには中程度の病変があった。リファンピシンで処置したサルにも識別できる皮膚の病変が見られたが、２匹のサルは３番目のサルより重度の感染を示した。感染後１日および７日目に１２５　ｆ１ｇ／ｋｇのＰＡＬＡを（ポーラスで）投与した群においては、１匹のサルが投与後４時間で死亡した。全病理学的所見によれば肝臓が暗赤色に変色しており、このことから急性ショックまたは毒性の可能性が示唆される。組織病理学的所見については後に報告することとする。病変の様相に関しては、ＰＡＬＡの投与量が高かった１匹のサルがかなり重度の病変を示したが、残りはそれより中程度の病変を有していた。感染後１日および７日に高投与量のＰＡＬＡで処置したサルの病変の重症度は、低投与量のＰＡＬＡで毎日処置したサルに見られるそれよりも高かった。上記のサルの各々からの皮膚生検におけるウィルス力価はコントロールと同様に各処置群内でサルごとに差異を示した（表３）。感染コントロール群、リファンピシン群および高投与量ＰＡＬＡ群では、より高いワクシニアウィルスの力価が見られた。５０　ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡを投与した群およびＰＡＬＡおよびリフ１ンピシンの両方を投与した群では、より低いウィルス力価が見られた。ＰＡＬＡを１２５　ｍｇ／ｋｇ　（ポーラス）で投与した後に１匹のサルが死亡した他は、ＰＡＬＡまたはりファンビシンで処置したサルのいずれにも、毒性の認識できる徴候は見られなかった。この投与量で投与した生き残った２匹のサルは、感染後７回目に１２５　ｍｇ／ｋｇで２回目の注入を受けても何の有害な徴候も示さなかった。表１７アフリカミドリザルの皮膚病変生検試料のホモジネートのワクシニアウィルス１力価表１８ワクシニアウィルスに感染させ、ＰＡＬＡおよび／またはりファンピシンで処置したサルのワクシニアウィルスに対する中和抗体力価表１９ワクシニアウィルスに感染させ、ＰＡＬＡおよび／または１４、実施例９コドンラットによるＲＳウィルス（ＲＳ　Ｖ）に対するＰＡＬＡの検討以下のサブセクションは、コドンラットをＲＳウィルスに予め感染させ、４日間、ＰＡＬＡ、リバビリンまたはこれらの組み合わせで処置した実験について記載する。その結果は、１０　ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡがリバビリンまたは組み合わせ治療より効果が高いことを実証している（組織病理学およびウィルス力価の減少により確認−コントロールに対し１１０ｇ＋。ひとつ分減少した）。１４．１　材料および方法両性側の５０〜１００　ｇのコドンラット（異系交配したＳｉｇｍｏｄｅｎ　ｈｉｓｐｉｄｕｓ）に約１００コドンラツト中央感染量（ＣＲＩＤ５０；　１００ μｌをｌ。ｎ、で与えた）でＲ３Ｖ　（ＡＩ株）を接種した。治療は、ＰＡＬＡ　（３０ｍｇ／ｋｇ／日）、リバビリン（３０ｍｇ／ｋｇ／日）、または組み合わせの治療で行った。すべての試験化合物は４日間腹腔内（ｉ、ｐ、）投与した。動物を（＋）４日目に層殺し、肺を均質化し、Ｒ３Ｖの力価測定をした。使用動物の総数は２４であった。実験プロトコール：コドンラットにおけるＲＳウィルス（Ｒ３Ｖ）を前もってｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニングした（１６匹の動物を用いた。）。 ”　（Ｏ日日＝ウィルス接種日；各薬物の投与量および計画は、実験１の結果に応じて変更した。）２つの平均の間の統計的評価の差：ウィルス活性を試験する実験結果のまとめ１４．２．１　玉！１．５０〜１００　ｇの両性側のコトンラ・ントに０８目１こＲ３Ｖ　Ａ２　（ブール８−２８−９２）をｉ、ｎ、により接種した。２、＋１日目に、動物にブラシーボまたはＰＡＬＡを以下のよう（こ投与した。１群：ブラシーボ（Ｈ＊０）　＋、ｐ、　＋　１日日〜＋３日目２群：　ＰＡＬＡ　３　ｍｇ／ｋｇ／日　ｉ、ｐ、　＋１日日日＋３日目３群：　ＰＡＬＡ　１０　ｍｇ／ｋｇ／日　ｉ、ｐ、　＋１日日日＋３日目４群：リバビリン４０　ｍｇ／ｋｇ／日　ｉ、ｐ、＋１日日日＋３日目５群、リバビリン４０　ｍｇ／ｋｇ／日　十　＋１日日日＋３日目ＰＡＬＡ　３　ｍｇ／ｋｇ／日　ｉ、ｐ。３、すべての動物を＋４日目に層殺し、その肺のＲ８Ｖレベルを試験した。ＰＡＬＡ　ＶＳ　リバビリンの統計的評価１■４．３　結論上記の結果は、ＲＳウィルスに対する単独の薬物としてのＰＡＬＡの統計的に有意な効果を示している。ＰＡＬＡはリバビリンより統計的に効果が高かった。ＰＡＬＡとリバビリンとの間には、相加的および／または相乗的効果はないようである。本発明の修正および変更が上記の開示に照らして可能であることは、当業者にとって明らかであろう。そのような修正は、添付されている請求の範囲により定義される本発明の精神および範囲内にあることが理解されよう。（本頁以下余白）ＦＩＧ、１接種後の日数ＦＩＧ、　２接種後の日数ＦＩＧ、　３接種後の日数ＦＩＧ、　４ＦＩＧ、５接種後の日数ＦＩＧ、　６ＦＩＧ、　７接種後の日数ＦＩＧ、　９ＦＩＧ、１０ＦＩＧ、　１１日数ＦＩＧ、１２日数ＦＩＧ、１３１０コ日数フロントページの続き、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　ＭＬ、　ＭＲ，ＳＮ、　ＴＤ。ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＺ、　ＦＩ。ＨＵ、　Ｊ　Ｐ、　ＫＲ，ＫＺ、　ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＯ，ＮＺ、　ＰＬ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＫ、　ＵＡ

Claims

【特許請求の範囲】

１．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体および少なくとも１種の他の抗ウイルス剤を含有する、ヒトまたは動物のウイルス感染症を治療または予防するのに有用な抗ウイルス組成物。
２．他の抗ウイルス剤がリファンピシン、ガンシクロビル、アシクロビル、アダマンチジン、リバピリンおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項１記載の抗ウイルス組成物。
３．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体、および少なくとも１種の２−デオキシ−Ｄ− グルコースおよびデオキシノジリマイシンよりなる群から選ばれる他のグリコシル化阻害剤を含有する、ヒトまたは動物のウイルス感染症を治療または予防するのに有用な抗ウイルス組成物。
４．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体、および有効量のインターフェロン−α、フルオロウラシルおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる治療剤を含有する、ヒト乳頭腫ウイルスにより引き起こされる疾病を治療または予防するのに有用な抗ウイルス組成物。
５．Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体、少なくとも１種の他の抗ウイルス剤および製剤上許容される担体を含有する、ヒトまたは動物のウイルス感染症を治療または予防するのに有用な医薬組成物。
６．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を抗ウイルス治療を必要とするヒトまたは動物の患者に投与することからなる、ヒトまたは動物のウイルス感染症の治療または予防方法。
７．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量の少なくとも１種の他の治療剤と併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトまたは動物の患者に投与することからなる、ヒトまたは動物のウイルス感染症の治療または予防方法。
８．他の治療剤が抗ウイルス剤である、請求項７記載の方法。
９．抗ウイルス剤がヌクレオシド類似体、ヌクレオシド輸送阻害剤、ＤＮＡまたはＲＮＡチェーンターミネーター、グリコシル化阻害剤またはこれらの組合せである、請求項８記載の方法。
１０．非経口的にまたは経口的に投与する、請求項６または７記載の方法。
１１．局所に、膣内にまたは直腸内に投与する、請求項６または７記載の方法。
１２．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項６または７記載の方法。
１３．約２５ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項１２記載の方法。
１４．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項１２記載の方法。
１５．ウイルス感染症がＲＮＡウイルスによって引き起こされる、請求項６または７記載の方法。
１６．ＲＮＡウイルスがフラビウイルス、ブンヤウイルス、ハンターン（Ｈａｎｔａａｎ）ウイルスおよびフィロウイルスよりなる群から選ばれる、請求項１５記載の方法。
１７．ＲＮＡウイルスが黄熱病ウイルス、サシチョウバエ熱ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、デング熱ウイルス１−４、コクサッキーウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌ）ウイルス、パラインフルエンザウイルスおよびインフルエンザＡ型（Ｈ２Ｎ２およびＨ３Ｎ２）ウイルスよりなる群から選ばれる、請求項１５記載の方法。
１８．ウイルス感染症がＤＮＡウイルスによって引き起こされる、請求項６または７記載の方法。
１９．ウイルス感染症が水痘ウイルス、サイトメガロウイルスおよびヒトヘルペスウイルス−６よりなる群から選ばれるＤＮＡウイルスによって引き起こされる、請求項６記載の方法。
２０．ヌクレオシド類似体がアデニンアラビノシド、アデニンアラビノシドーリン酸、イドクスウリジン、トリフルオロチミジン、ブロモビニルデオキシウリジン、ガンシクロビル、アシクロビル、ブロモビニルアラウラシルおよび（Ｓ）− ９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）−アデニンおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項９記載の方法。
２１．抗ウイルス剤がリファンピシン、アシクロビル、リバビリン、アダマンチジンおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項９記載の方法。
２２．ＤＮＡまたはＲＮＡチェーンターミネーターが２′，３′−ジデオキシシトシン、２′，３′−ジデオキシイノシン、３′−アジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）およびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項９記載の方法。
２３．グリコシル化阻害剤が２−デオキシ−Ｄ−グルコースおよびデオキシノジリマイシンよりなる群から選ばれる、請求項９記載の方法。
２４．他の治療剤を前記のＰＡＬＡまたはその薬学的に許容される類似体と一緒に投与する、請求項７記載の方法。
２５．他の治療剤を前記のＰＡＬＡまたはその薬学的に許容される類似体の前に投与する、請求項７記載の方法。
２６．他の治療剤を前記のＰＡＬＡまたはその薬学的に許容される類似体の後に投与する、請求項７記載の方法。
２７．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量のインターフェロン−α、フルオロウラシルおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる化合物と併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
２８．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、Ｃ型肝炎ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
２９．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、治療上有効な量の少なくとも１種の他の治療剤と併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、Ｃ型肝炎ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
３０．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体をヒトに投与する、請求項２７記載の方法。
３１．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項３０記載の方法。
３２．治療剤が抗ウイルス剤、ステロイドおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項２９記載の方法。
３３．抗ウイルス剤がヌクレオシド類似体、ヌクレオシド輸送阻害剤、ＤＮＡまたはＲＮＡチェーンターミネーターおよびグリコシル化阻害剤よりなる群から選ばれる、請求項３２記載の方法。
３４．抗ウイルス剤がガンシクロビル、ホスホノホルメートおよびこれらの組合せよりなる群から選ばれる、請求項３３記載の方法。
３５．治療剤が３ＴＣまたはα−インターフェロンである、請求項３０記載の方法。
３６．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、Ｂ型肝炎ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
３７．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量の少なくとも１種の他の治療剤と併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、Ｂ型肝炎ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
３８．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体をヒトに投与する、請求項３６記載の方法。
３９．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項３８記載の方法。
４０．治療剤が抗ウイルス剤またはステロイドである、請求項３８記載の方法。
４１．抗ウイルス剤がヌクレオシド類似体、ヌクレオシド輸送阻害剤、ＤＮＡまたはＲＮＡチェーンターミネーターおよびグリコシル化阻害剤よりなる群から選ばれる、請求項４０記載の方法。
４２．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量のアシクロビルと併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトまたは動物の患者に投与することからなる、水痘ウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
４３．非経口的に投与する、請求項４２記載の方法。
４４．経口的に投与する、請求項４２記載の方法。
４５．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項４２記載の方法。
４６．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項４５記載の方法。
４７．約２０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項４５記載の方法。
４８．約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日のアシクロビルを患者に投与する、請求項４２記載の方法。
４９．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量のリファンピシンと併用して、ヒトまたは動物の患者に投与することからなる、ワクシニアウイルスまたはワクシニアウイルス構築物によって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
５０．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項４９記載の方法。
５１．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項５０記載の方法。
５２．約２０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項４９記載の方法。
５３．約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日のリファンピシンを患者に投写する、請求項４９記載の方法。
５４．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を、有効量のガンシクロビルと併用して、抗ウイルス治療を必要とするヒトに投与することからなる、サイトメガロウイルスによって引き起こされる疾病の治療または予防方法。
５５．約５ｍｇ／ｋｇ／日〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル） −Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項５４記載の方法。
５６．約２０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項５５記載の方法。
５７．約５ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日のガンシクロビルをヒトに投与する、請求項５４記載の方法。
５８．非経口的に投与する、請求項４９または５４記載の方法。
５９．経口的に投与する、請求項４９または５４記載の方法。
６０．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を免疫欠損のヒトまたは動物患者に投与することからなる、免疫欠損患者におけるヒトまたは動物ウイルス感染症の治療または予防方法。
６１．有効な抗ウイルス量のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体および有効量の少なくとも１種の他の治療剤を免疫欠損のヒトまたは動物患者に投与することからなる、免疫欠損患者におけるヒトまたは動物ウイルス感染症の治療または予防方法。
６２．約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＡＬＡまたはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項６１記載の方法。
６３．約５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日のＮ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパラギン酸またはその薬学的に許容される類似体を患者に投与する、請求項６２記載の方法。
６４．ウイルス感染症がＤＮＡまたはＲＮＡウイルスによって引き起こされる、請求項６０または６１記載の方法。
６５．ウイルス感染症がＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２、化学療法、もしくは伝染性軟ゆう腫ウイルス、サイトメガロウイルス、水痘−帯状庖疹ウイルスよりなる群から選ばれる免疫抑制の他の原因により二次的に生じる日和見ウイルス感染症である、請求項６０または６１記載の方法。