MX2007011153A - Metodos para reducir la calcificacion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a metodos para tratar la calcificacion vascular en sujetos usando calcimimeticos.

Description

MÉTODOS PARA REDUCIR LA CALCIFICACIÓN Campo de la Invención Esta invención se refiere generalmente al campo de la medicina y, más específicamente, a métodos para reducir, tratar o prevenir la calcificación.

Antecedentes de la Invención La calcificación vascular, una complicación bien reconocida y común de la enfermedad renal crónica (CKD) , incrementa el riesgo de morbilidad y mortalidad cardiovascular (Giachelli, C. JAm Soc Nephrol 15: 2959-64, 2004; Raggi, P. et al. J Am Coll Cardiol 39: 695-701, 2002). Aunque las causas de calcificación vascular en CKD se mantienen por aclarar, los factores de riesgo asociado incluyen edad, género, hipertensión, tiempo de diálisis, diabetes e intolerancia a la glucosa, obesidad, y fumadores de cigarrillos (Zoccali C. Nephrol Dial Transplant 15: 454-7, 2000). Estos factores de riesgo convencionales, sin embargo, no explican adecuadamente las altas relaciones de mortalidad de causas cardiovasculares en la población de pacientes. Las observaciones recientes sugieren que ciertas anormalidades en el metabolismo de calcio y fósforo, resulta en un producto de calcio-fósforo de suero elevado (Ca x P) contribuye, entre otros factores, al desarrollo de calcificación arterial, y Ref.: 185774 posiblemente a enfermedad cardiovascular, en pacientes con enfermedad renal en etapa terminal (Goodman, . et al . N Engl J Med 342: 1478-83, 2000; Guerin, A. et al. Nephrol Dial Transplant 15:1014-21, 2000; Vattikuti, R. & Towler, D . Am J Physiol Endocrinol Metab, 286: E686-96, 2004). Otra característica distintiva de CKD avanzado es el hiperparatiroisdismo secundario (HPT) , caracterizado por niveles de hormona paratiroide elevados (PTH) y metabolismo mineral trastornado. Las elevaciones en calcio, fósforo, y Ca x P observado en pacientes con HPT secundario se han asociado con un riesgo incrementado de calcificación vascular (Cherto , G. et al Kidney Int 62: 245-52, 2002; Goodman, W. et al. N Engl J Med 342: 1478-83, 2000; Raggi, P. et al. J.

Am Coll Cardiol 39: 695-701, 2002). Las intervenciones terapéuticas comúnmente usadas para HPT secundario, tal como aglutinantes de fosfato basados en calcio y dosis de esteróles de vitamina D activos puede resultar en hipercalcemia e hiperfosfatemia (Chertow, G. et al. Kidney Int 62: 245-52, 2002; Tan, A. et al. Kidney Int 51: 317-23, 1997; Gallieni, M. et al. Kidney Int 42: 1191-8, 1992), que se asocian con el desarrollo o exacerbación de calcificación vascular. La calcificación vascular es una complicación importante y potencialmente seria de insuficiencia renal crónica. Dos distintos patrones de calcificación vascular se han identificado (Proudfoot, D & Shanahan, C. Herz 26: 245-51, 2001) , y es común para ambos tipos que se presente en paciente urémicos (Chen, N. & Moe, S. Semin Nephrol 24: 61-8, 2004) . El primero, calcificación media, se presenta en el medio del vaso en conjunto con una transformación fenotípica de células de músculo liso en células tipo osteoblásticos, mientras el otro, aterogénesis, se asocia con macrófagos cargados de lípido e hiperplasia íntima. La calcificación de la pared media puede desarrollarse en personas relativamente jóvenes con insuficiencia renal crónica, y es común en pacientes con diabetes mellitus aún en ausencia de enfermedad renal. La presencia de calcio en la pared media de las arterias distingue este tipo de calcificación vascular de la que se asocia con ateroesclerosis (Schinke T. & Karsenty G. Nephrol Dial Transplant 15: 1272-4, 2000). La calcificación vascular ateroesclerótica se presenta en placas ateromatosas a lo largo de la capa íntima de las arterias (Farzaneh-Far A. JAMA 284: 1515-6, 2000). La calcificación usualmente es mayor en lesiones bien desarrolladas, grandes, y se incrementa con la edad (Wexler L. et al. Circulation 94: 1175-92, 1996; Rumberger J. et al. Mayo Clin Proc 1999; 74: 243-52.). La extensión de calcificación arterial en pacientes con ateroesclerosis corresponde generalmente a la severidad de la enfermedad. A diferencia de la calcificación de pared media, las lesiones vasculares ateroescleróticas, si contienen o no calcio, afectan el lumen arterial y comprometen el flujo sanguíneo. La eliminación localizada de calcio con placas ateroescleróticas puede suceder debido a la inflamación que resulta de lípidos oxidados y otras tensiones oxidantes y la infiltración por monocitos y macrófagos (Berliner J. et al. Circulation 91 : 2488-96, 1995) . Algunos pacientes con enfermedades renales en etapa terminal desarrollan una forma severa de enfermedad arterial oclusiva llamada calcifilaxis o arteriolopatía urémica calcificante. Este síndrome se caracteriza por la extensiva sedimentación de calcio en pequeñas arterias (Gipstein R. et al. Arch Intern Med 136: 1273-80, 1976; Richens G. et al . J Am Acad Dernatol . 6: 537-9, 1982). En paciente con esta enfermedad, la calcificación arterial y la oclusión, vascular lleva a isquemia y necrosis de tejido. La implicación de vasos periféricos puede causar la ulceración de la piel de la parte inferior de los pies o gangrena de las yemas de los dedos de los pies y manos. La isquemia y necrosis de la piel y tejido adiposo subcutáneo de la pared abdominal, muslos y/o trasero son características de una forma próxima de arteriolopatía uremica calcífica (Budisavljevic M. et al. J Am Seo Nephrol. 7: 978-82, 1996; Ruggian J. et al. Am J Kidney Dis 28: 409-14, 1996). Este síndrome ocurre más frecuentemente en individuos obesos y las mujeres son afectadas más que los hombres por razones que se mantienen no claras (Goodman W. J. Nephrol. 15(6): S82-S85, 2002). Las terapias actuales para normalizar los niveles minerales de suero o para disminuir, inhibir, o prevenir calcificación de tejidos vasculares o implantes son de eficacia limitada y causan efectos colaterales indeseable.

Por lo tanto, existe una necesidad para un método efectivo para inhibir y prevenir la calcificación vascular.

Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona métodos para inhibir, disminuir o prevenir la calcificación vascular en un sujeto que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético al sujeto. En un aspecto, la calcificación vascular puede ser calcificación ateroesclerótica . En otro aspecto, la calcificación vascular puede ser calcificación media. En un aspecto, el sujeto puede padecer de insuficiencia renal crónica o enfermedad renal de etapa terminal. En otro aspecto, el sujeto puede estar en la etapa de prediálisis. En un aspecto adicional, el sujeto puede padecer de uremia. En otro aspecto, el sujeto puede padecer de diabetes mellitus I o II. En otro sujeto, el sujeto puede padecer de un trastorno cardiovascular. En un aspecto, el sujeto puede ser humano. En un aspecto, el compuesto calcimimético puede ser un compuesto de la fórmula I en donde : Xx y X , los cuales pueden ser idénticos o diferentes, son cada uno un radical elegido de radicales CH3, CH30, CH3CH20, Br, Cl , F, CF3 , CHF2 , CH2F, CF30, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, N02, CH3CH2/ propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, acetoxi, y acetilo, o dos de Xx pueden juntos formar una entidad elegida de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi, o dos de X2 pueden juntos formar una entidad elegida de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi; con la condición de que X2 no es un radical 3 -t-butilo ; n en el rango desde 0 hasta 5; m en el rango desde 1 hasta 5; y el radical alquilo se elige de radicales alquilo C?-C3, los cuales son opcionalmente substituidos con al menos un grupo elegido de grupos alquilo Ci-C9 cíclicos, ramificados, lineales, saturados y no saturados, grupos dihidroindolilo y tiodihidroindolilo, y grupos 2, 3, y 4 -piperidinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En un aspecto, el compuesto calcimimético usado en los métodos de la invención puede ser N- (3- [2-clorofenil] -propil) -R-a-metil-3-metoxibencilamina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto, el compuesto calcimimético puede ser un compuesto de la fórmula II II en donde : R1 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; R2 es alquilo o haloalquilo; R3 es H, alquilo, o haloalquilo; R4 es H, alquilo, o haloalquilo; cada R5 presente es independientemente seleccionado del grupo que consiste de alquilo, alquilo substituido, alcoxi, alcoxi substituido, halógeno, -C(=0)OH, -CN, -NRdS (=0) mRd, - NRdC(=0)NRdRd, -NRdS(=0)raNRdRd, o -NRdC(=Ó)Rd; R6 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; cada Ra es, independientemente, H, alquilo o haloalquilo; cada Rb es, independientemente, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido por hasta 3 substituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, y nitro; cada Rc es, independientemente, alquilo, haloalquilo, fenilo o bencilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido; cada Rd es, independientemente, H, alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo en donde el alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo son substituidos por 0, 1, 2, 3 ó 4 substituyentes seleccionados de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, nitro, Rb, -C(=0)Rc, -0Rb, -NRaR , -NRaRb, -C(=0)0RC, -C(=0)NRaRa, -0C(=0)Rc, -NRaC(=0)Rc, NRaS(=0)nRc y -S (-0) nNRaRa; m es 1 ó 2 ; n es 0, 1 ó 2 ; y p es 0 , 1 , 2 , 3 , ó 4 ; con la condición de que si R2 es metilo, p es 0, y R6 es fenilo no substituido, luego R1 no es 2 , 4-dihalofenilo, 2,4- dimetilfenilo, 2 , 4-dietilfenilo, 2, 4 , 6-trihalofenilo, o 2,3, 4-trihalofenilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En un aspecto, el compuesto calcimimético usado en los métodos de la invención puede ser N- ( (6- (metiloxi) -4 ' - (trifluorometil) -1, 1' -bifenil-3-il)metil) -1-feniletanamina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En un aspecto, el compuesto calcimimético puede ser HCl cinacalcet . En un aspecto, la invención proporciona métodos para inhibir, disminuir o prevenir la calcificación vascular, en donde un esterol de vitamina D se ha administrado previamente al sujeto. En un aspecto, el esterol de vitamina D puede ser calcitriol, alfacalcidol, doxercalciferol, maxacalcitol o paricalcitol . En un aspecto, el compuesto calcimimético puede administrarse previo a o después de la administración de un esterol de vitamina D. En otro aspecto, el compuesto calcimimético puede administrarse en combinación con un esterol de vitamina D. En un aspecto, el compuesto calcimimético puede administrarse en combinación con RENAGEL®. La invención proporciona además métodos para disminuir los niveles de creatinina en el suero en un sujeto, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético al sujeto. En un aspecto, el sujeto puede padecer de niveles de creatinina en el suero incrementados inducidos por la administración de un esterol de vitamina D al sujeto.

Breve Descripción de las figuras La Figura 1 representa esquemáticamente el programa experimental de los tratamientos del animal . La Figura 2 representa esquemáticamente los niveles en suero de calcio ionizado en un modelo animal de CKD. La Figura 3 ilustra los niveles en suero de fósforo en un modelo animal de CKD. La Figura 4 es una representación esquemática de los niveles en suero de la hormona paratiroide en un modelo animal de CKD . La Figura 5 ilustra el contenido de calcio de la aorta en un modelo animal de CKD. La Figura 6 representa esquemáticamente el contenido de fósforo de la aorta en un modelo animal de CKD. Las Figuras 7A Y 7B representan secciones teñidas Von Kossa de la aorta en un modelo animal de CKD. La Figura 8 representa el contenido de calcio y fósforo de la aorta en un modelo animal de CKD. La Figura 9 es una representación esquemática del programa experimental de los tratamientos del animal en el modelo de calcificación vascular inducida por adenina.

La Figura 10 representa un esquema de calcificación vascular inducida por adenina. La Figura 11 es una representación esquemática de la atenuación de hiperplasia paratiroide en un modelo animal de CKD. La Figura 12 es una representación esquemática del cambio en los pesos paratiroides del modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. La Figura 13 demuestra cambios en PTH en el suero por el tratamiento en el modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. La Figura 14 ilustra el cambio en la densidad mineral del hueso aórtico por el tratamiento en el modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. Las Figuras 15A Y 15B ilustran el efecto del tratamiento en nitrógeno de urea en la sangre (BUN) y creatinina en el modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. La Figura 16 demuestra el efecto del tratamiento en calcio ionizado en el modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. La Figura 17 demuestra el efecto del tratamiento en fósforo en el suero en el CKD inducido por adenina con calcificación vascular. La Figura 18 demuestra el efecto del tratamiento en Ca en el suero en el CKD inducido por adenina con calcificación vascular. Las Figuras 19A-19F ilustran el efecto del tratamiento con el compuesto B en tejidos con calcificación inducida por calcitriol. Las Figuras 20A y 20B representan el efecto del tratamiento con el compuesto B en tejidos con calcificación inducida por paricalcitol .

Descripción Detallada de la Invención I . Resumen La invención se dirige a métodos para la reducción, inhibición, o prevención de calcificación vascular.

II. Definiciones "Calcificación vascular," como se usa en la presente, significa la formación, crecimiento o sedimentación de depósitos de cristal de hidroxiapatita de matriz extracelular (fosfato de calcio) en los vasos sanguíneos. La calcificación vascular abarca calcificación coronaria, valvular, aórtica, y otra de vaso sanguíneo. El término incluye calcificación ateroesclerótica y de paredes medias. "Calcificación ateroesclerótica" significa la calcificación vascular que se presenta en placas ateromatosas junto a la capa íntima de las arterias.

"Calcificación media," "calcificación de pared media," o "esclerosis Mónckeberg," como se usa en la presente, significa calcificación caracterizado por la presencia de calcio en la pared media de las arterias. El término "tratamiento" o "tratar" incluye la administración, a una persona que necesita, de una cantidad de un compuesto calcimimético, el cual inhibirá, disminuirá o invertirá el desarrollo de una condición de calcificación vascular patológica. "Inhibir," en conexión con inhibir calcificación vascular, se pretende que signifique prevenir, retardar, o invertir la formación, crecimiento o sedimentación de depósitos de cristal de hidroxiapatito de matriz extracelular. El tratamiento de las enfermedades y trastornos en la presente se pretende también que incluya administración terapéutica de un compuesto de la invención (o una sal, derivado o profármaco farmacéutico de los mismos) o una composición farmacéutica que contiene el compuesto para un sujeto (esto es, un animal, por ejemplo un mamífero, tal como un humano) considerados necesarios para el tratamiento preventivo, tales como, por ejemplo, dolor, inflamación y los similares. El tratamiento también abarca la administración del compuesto o composición farmacéutica a sujetos que no se les ha diagnosticado como que tienen una necesidad del mismo, esto es, administración profiláctica al sujeto. Generalmente, el sujeto se diagnostica inicialmente por un médico licenciado y/o practicante médico autorizado, y un régimen para tratamiento profiláctico y/o terapéutico por medio de la administración de los compuestos o composiciones de la invención se sugiere, recomienda o prescribe. La frase "cantidad terapéuticamente efectiva" es la cantidad del compuesto calcimimético que alcanzará el objetivo de mejorar la severidad del trastorno y la frecuencia de la incidencia. La mejora en el severidad del trastorno incluye la inversión de la calcificación vascular, así como disminuir completamente la progresión de la calcificación vascular. En un aspecto, "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad del compuesto calcimimético que disminuye los niveles de creatinina en el suero o previene un incremento en los niveles de creatinina en el suero. Como se usa en la presente, el término "sujeto" se pretende para significar un humano u otro mamífero, que muestra, o está en riesgo de desarrollar, calcificación. Tal individuo puede tener, o estar en riesgo de desarrollar, por ejemplo, la calcificación vascular asociada con condiciones tales como ateroesclerosis, estenosis, restenosis, insuficiencia renal, diabetes, implante de prótesis, lesión de tejido o enfermedad vascular relacionada con la edad. Las indicaciones prognósticas y clínicas de estas condiciones se conocen en la técnica. Un individuo tratado por un método de la invención puede tener un desequilibrio mineral sistémico asociado con, por ejemplo, diabetes, enfermedad del riñon crónica, insuficiencia renal, transplante de riñon o diálisis de riñon. Los modelos de animales que son indicadores confiables de ateroesclerosis humana, insuficiencia renal, hiperfosfatemia, diabetes, calcificación vascular relacionada con la edad y otras condiciones asociadas con la calcificación vascular se conocen en el arte. Por ejemplo, un modelo experimental de calcificación de la pared del vaso se describe por Yamaguchi et al, Exp. Path. 25: 185-190, 1984.

III . Compuestos calcimiméticos y composiciones farmacéuticas que los comprenden, administración y dosificación Como se usa en la presente, el término "compuestos calcimiméticos" se refiere a un compuesto que se enlaza a receptores sensibles de calcio e inducen un cambio conformacional que reduce el umbral para la activación de receptores sensibles de calcio mediante el ligando endógeno Ca2+, por ello reducen la secreción de la hormona paratiroide (PTH) . Estos compuestos calcimiméticos también se pueden considerar moduladores alostéricos de los receptores de calcio.

Los compuestos calcimiméticos útiles en la presente invención incluyen aquellos descritos en, por ejemplo, la Patente Europea No. 933 354 y 1 235 797; las Publicaciones Internacionales Nos. WO 01/34562, WO 93/04373, WO 94/18959, WO 95/11221, WO 96/12697, WO 97/41090; Las Patentes de EUA Nos. 5,688,938, 5,763,569, 5,962,314, 5,981,599, 6,001,884, 6,011,068, 6,031,003, 6,172,091, 6,211,244, 6,313,146, 6,342,532, 6,363,231, 6,432,656, 6,710,088, 6,908,935 y la Publicación de Solicitud de Patente de EUA No. 2002/0107406. En ciertas modalidades, el compuesto calcimimético se selecciona de compuestos de la fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos: I en donde : Xi y X , los cuales pueden ser idénticos o diferentes, son cada uno un radical elegido de radicales CH3, CH30, CH3CH20, Br, Cl , F, CF3 , CHF2 , CH2F, CF30, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, N02, CH3CH2, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, acetoxi, y acetilo, o dos de Xx pueden juntos formar una entidad elegidos de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi, o dos de X2 pueden juntos formar una entidad elegida de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi; con la condición de que X2 no es un radical 3-t-butilo; n en el rango desde 0 hasta 5; m en el rango desde 1 hasta 5; y el radical alquilo se elige de radicales alquilo C1.-C3, los cuales son opcionalmente substituidos con al menos un grupo elegido de grupos alquilo C1-C9 cíclicos, ramificados, lineales, saturados y no saturados, grupos dihidroindolilo y tiodihidroindolilo, y grupos 2, 3, y 4 -piperidinilo. El compuesto calcimimético puede ser elegido de los compuestos de la fórmula II: y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde : R1 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; R2 es alquilo o haloalquilo; R3 es H, alquilo, o haloalquilo; R4 es H, alquilo, o haloalquilo; cada R5 presente es independientemente seleccionado del grupo que consiste de alquilo, alquilo substituido, alcoxi, alcoxi substituido, halógeno, -C(=0)OH, -CN, -NRdS (=0) mRd, -NRdC ( =0) NRdRd, - RS ( =0) mNRdRd, o -NRdC (=0) Rd; R6 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; cada Ra es, independientemente, H, alquilo o haloalquilo; cada Rb es, independientemente, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido por hasta 3 substituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, y nitro; cada Rc es, independientemente, alquilo, haloalquilo, fenilo o bencilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido; cada Rd es, independientemente, H, alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo en donde el alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo son substituidos por 0, 1, 2, 3 ó 4 substituyentes seleccionados de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, nitro, Rb, -C(=0)Rc, -0Rb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=0)0Rc, -C(=0)NRaRa, -0C(=0)Rc, -NRaC(=0)Rc, NRaS(=0)nRc y -S (=0) nNRaRa; m es 1 ó 2 ; n es 0 , 1 ó 2 ; y p es 0 , 1 , 2 , 3 , ó 4 ; con la condición de que si R2 es metilo, p es 0, y R6 es fenilo no substituido, entonces R1 no es 2, 4-dihalofenilo, 2 , 4-dimetilf enilo, 2, 4-dietilfenilo, 2 , 4 , 6-trihalofenilo, o 2 , 3 , 4-trihalofenilo. Estos compuestos se describen en detalle en la Solicitud de Patente de E.U.A. publicada número 20040082625, la cual se incorpora en la presente para referencia. En un aspecto de la invención el compuesto de la Fórmula II puede tener la fórmula En ciertas modalidades de la invención el compuesto calcimimético puede ser elegido de los compuestos de la Fórmula III y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en donde: representa un enlace doble o sencillo; R1 es Rb; R2 es alquilo C1-8 o haloalquilo C?- ; R3 es H, haloalquilo C?-4 o alquilo C?-8; R4 es H, haloalquilo C1- o alquilo C?-4; R5 es, independientemente, en cada caso, H, alquilo C?-8, haloalquilo C?-4, halógeno, -Oalquilo C1-6, -NRaRd o NRdC(=0)Rd; X es -CRd=N-, -N=CRd-, O, S O -NRd-; cuando ----- es un enlace doble entonces Y es =CR6- o =N- y Z es -CR7= o -N=; y cuando es un enlace sencillo entonces Y es -CRaR6- o -NRd- y Z es -CRR7- o -NRd- ; y R6 es Rd, haloalquilo C1-4, -C(=0)RC, -Oalquilo C?-6/ -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=0)ORc, -C(=0)NRaRa, -OC(=0)Rc, -NRC(=0)Rc, ciano, nitro, -NRaS(=0)mRc o -S (=0) mNRaRa; R7 es Rd, haloalquilo C?-4, -C(=0)Rc, -Oalquilo C1-6, -0Rb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=0)0Rc, -C(=0)NRaRa, -OC(=0)Rc, -NRaC(=0)Rc, ciano, nitro, -NRaS (=0)raRc o -S (=0) mNRaRa; o R6 y R7 juntos forman un puente de 3 hasta 6 átomos saturado o no saturado que contiene 0, 1, 2 ó 3 átomos N y 0, 1 ó 2 átomos seleccionados de S y O, en donde el puente se substituye por 0, 1 ó 2 substituyentes seleccionados de R5; en donde cuando R6 y R7 forman un puente benzo, entonces el puente benzo puede substituirse adicionalmente por un puente de 3 ó 4 átomos que contiene 1 ó 2 átomos seleccionados de N y O, en donde el puente es substituido por 0 ó 1 substituyentes seleccionados de alquilo C1-4; Ra es, independientemente, cada que se presenta, H, o alquilo C?-6; Rb es, independientemente, cada que se presenta, fenilo, bencilo, naftilo o un heterociclo en el anillo de 5 ó 6 miembros saturado o no saturado que contiene 1, 2 ó 3 átomos seleccionados de N, 0 y S, con más de 2 de los átomos seleccionados de 0 y S, en donde el fenilo, bencilo o heterociclo son substituidos por 0, 1, 2 ó 3 substituyentes seleccionados de alquilo C?.6 , halógeno, haloalquilo C?- , Oalquilo C1-6, ciano y nitro; Rc es, independientemente, cada que se presenta, alquilo C1-6, haloalquilo C1-4/ fenilo o bencilo; Rd es, independientemente, cada que se presenta, H, alquilo C?-6, fenilo, bencilo o un heterociclo en el anillo de 5 ó 6 miembros saturado o no saturado que contiene 1, 2 ó 3 átomos seleccionados de N, O y S, con no más de 2 de los átomos seleccionados de O y S, en donde el alquilo C?-6, fenilo, bencilo, naftilo y heterociclo son substituidos por 0, 1, 2, 3 ó 4 substituyentes seleccionados de alquilo C?-6, halógeno, haloalquilo C?-4, -Oalquilo C?-6, ciano y nitro, Rb, -C(=0)Rc, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=0)ORc, -C(=0)NRaRa, 0C(=0)Rc, -NRaC(=0)Rc, -NRaS(=0)mRc y -S (=0) mNRaRa; y m es 1 ó 2.

Los compuestos de la Fórmula III se describen en detalle en la Solicitud de Patente de E.U.A. 20040077619, la cual se incorpora en la presente para referencia. En un aspecto, un compuesto calcimimético es HCl de N- (3- [2-clorofenil] -propil) -R-a-metil-3-metoxibencilamina (Compuesto A) . En otro aspecto, un compuesto calcimimético es N- ( (6- (metiloxi) -4' - (trifluorometil) -1, 1' -bifenil-3-il) metil) -l-feniletanamina (Compuesto B) . Los compuestos calcimiméticos útiles en el método de la invención incluyen los compuestos calcimiméticos descritos arriba, así como sus estereoisómeros, enantiómeros, polimorfos, hidratos, y sales farmacéuticamente aceptables de cualquiera de los anteriores . Los compuestos calcimiméticos útiles en la presente invención se pueden usar en la forma de sales farmacéuticamente aceptables derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos. Las sales incluyen, pero no se limitan a, lo siguiente: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, camforato, camforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodeciisulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, clorohidrato, bromohidrato, yodohidrato, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactato, maleato, mandelato, metansulfonato, nicotinato, 2 -naftalensulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 2-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, salcilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato, mesilato, y undecanoato. Cuando los compuestos de la invención incluyen una función acida tal como un grupo carboxi, entonces las sales farmacéuticamente aceptables apropiadas para el grupo carboxi son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica e incluyen, por ejemplo, cationes alcalinos, alcalinotérreos, de amonio, amonio cuaternarios y los similares. Para ejemplos adicionales de "sales farmacéuticamente aceptables", ver infra y Berge y colaboradores, J. Pharm. Sci. 66:1 (1977). En ciertas modalidades de la invención las sales de clorohidrato y sales de ácido metansulfónico se pueden usar. En algunos aspectos de la presente invención, el compuesto activo de receptor de calcio se puede seleccionar de cinacalcet, esto es, N- (1- (R) - (1-naftil) etil] -3- [3- ( rifluorometil) fenil] -1-aminopropano, HCl cinacalcet, y metansulfonato cinacalcet. El compuestos calcimimético, tales como HCl cinacalcet y el metansulfonato cinacalcet pueden estar en varias formas, tales como polvos amorfos, polvos cristalinos, y mezclas de los mismos. Los polvos cristalinos pueden estar en formas que incluyen polimorfismos, pseudospolimofismos, cristales de uso, micromeréticos, y morfología de partícula. Para administración, los compuestos de esta invención se combinan ordinariamente con uno o más adyuvantes apropiados para la ruta indicada de administración. Los compuestos pueden mezclarse con lactosa, sacarosa, polvo de almidón, esteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, alcohol de polivinil-pirrolidina, y/o polivinilo, y se hacen en tabletas o encapsulan para administración convencional. Alternativamente, los compuestos de esta invención pueden disolverse en solución salina, agua, polietilen glicol, propilen glicol, etanol, aceite de maíz, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de ajonjolí, goma de tragacanto, y/o diversas soluciones amortiguadoras. Otros adyuvantes y modos de administración son bien conocidos en la técnica farmacéutica. El portador o diluyente puede incluir material de liberación retardada, tales como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solos o con una cera, u otros materiales bien conocidos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas pueden hacerse en una forma sólida (por ejemplo, soluciones, suspensiones, o emulsiones) . Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, emulsificadores, soluciones amortiguadoras, etc. Las formas de dosificación sólida para administración oral pueden incluir cápsulas, tabletas, pildoras, polvos, y granulos. En tales formas de dosificación sólida, el compuesto activo puede mezclarse con al menos un diluyente inerte tales como sacarosa, lactosa, o almidón. Las formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica normal, substancias adicionales diferentes a diluyentes inertes, por ejemplo, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguadores. Las tabletas y pildoras pueden prepararse adicionalmente con recubrimientos entéricos . Las formas de dosificación líquida para administración oral puede incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes comúnmente usados en el arte, tales como agua. Tales composiciones pueden comprender adyuvantes, tales como humectantes, edulcorantes, saborizantes y agentes perfumantes . La cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto activo de receptor de calcio en las composiciones descritas aquí están en el rango desde alrededor de 1 mg hasta alrededor de 360 mg, por ejemplo desde alrededor de 5 mg hasta alrededor de 240 mg, o desde alrededor de 20 mg hasta alrededor de 100 mg del compuesto calcimimético por sujeto. En algunos aspectos, la cantidad terapéuticamente efectiva de HCl cinacalcet u otro compuesto calcimimético en la composición se puede seleccionar desde alrededor de 5 mg, alrededor de 15 mg, alrededor de 20 mg, alrededor de 30 mg, alrededor de 50 mg, alrededor de 60 mg, alrededor de 75 mg, alrededor de 90 mg, alrededor de 120 mg, alrededor de 150 mg, alrededor de 180 mg, alrededor de 210 mg, alrededor de 240 mg, alrededor de 300 mg, alrededor de 360 mg. Aunque es posible administrar un compuesto calcimimético a un sujeto solo, el compuesto administrado normalmente estará presente como un ingrediente activo en una composición farmacéutica. Así, una composición farmacéutica de la invención puede comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto calcimimético, o una cantidad de dosificación efectiva de por lo menos un compuesto calcimimético. Como se usa en la presente, una "cantidad de dosificación efectiva" es una cantidad que proporciona una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto calcimimético cuando se proporciona como una dosis sencilla, en dosis múltiples, o como una dosis parcial. Así, una cantidad de dosificación efectiva del compuesto calcimimético de la invención incluye una cantidad menor que, igual a o mayor que una cantidad efectiva del compuesto; por ejemplo, una composición farmacéutica en la cual dos o más unidades de dosificación, tales como en tabletas, cápsulas y similares, se requieren para administrar una cantidad efectiva del compuesto, o alternativamente, una composición farmacéutica de dosis múltiples, tal como polvos, líquidos y similares, en la cual una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto calcimimético se administra mediante la administración de una porción de la composición. Alternativamente, una composición farmacéutica en la cual dos o más unidades de dosificación, tales como en tabletas, cápsulas y similares, se requieren para administrar una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto calcimimético se puede administrar en menos que una cantidad efectiva de uno o más periodos de tiempo (por ejemplo, una administración una vez al día, y una administración dos veces al día), por ejemplo para determinar la dosis efectiva para un sujeto individual, para desensibilizar un sujeto individual para efectos colaterales potenciales, para permitir el reajuste o eliminación de la dosis efectiva de uno o más de otros terapéuticos administrados a un sujeto individual, y/o similares. La cantidad de dosificación efectiva de la composición farmacéutica descrita aquí está en el rango desde alrededor de 1 mg hasta alrededor de 360 mg a partir de una forma de dosificación unitaria, por ejemplo alrededor de 5 mg, alrededor de 15 mg, alrededor de 30 mg, alrededor de 50 mg, alrededor de 60 mg, alrededor de 75 mg, alrededor de 90 mg, alrededor de 120 mg, alrededor de 150 mg, alrededor de 180 mg, alrededor de 210 mg, alrededor de 240 mg, alrededor de 300 mg, alrededor de 360 mg de una forma de dosificación unitaria . En algunos aspectos de la presente invención, las composiciones descritas aquí comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético para el tratamiento o prevención de calcificación vascular. Por ejemplo, en ciertas modalidades, el compuesto calcimimético tales como HCl cinacalcet puede estar presente en una cantidad en el rango desde alrededor de 1%, hasta alrededor de 70%, tal como desde alrededor de 5% hasta alrededor de 40%, desde alrededor de 10% hasta alrededor de 30%, o desde alrededor de 15% hasta alrededor de 20%, en peso relativo al peso total de la composición. Las composiciones de la invención pueden contener uno o más ingredientes activos además del compuesto calcimimético. El ingrediente activo adicional puede ser otro compuesto calcimimético, o puede ser un ingrediente activo que tiene una actividad terapéutica diferente. Los ejemplos de tales ingredientes activos adicionales incluyen, por ejemplo, vitaminas, y sus análogos, tales como vitamina D y análogos de los mismos (incluyendo esteróles de vitamina D tales como calcitriol, alfacalcidol, doxercalciferol, maxacalcitol y paricalcitol) , antibióticos, carbonato de lantano, agentes que disminuyen el lípido, tales como LIPITOR®, anti-hipertensivos, agentes anti-inflamatorios (esteroidales y no esteroidales) , inhibidores de citoquina pro-inflamatoria (ENBREL®, KINERET®) , y agentes cardiovasculares. Cuando se administra como una combinación, los agentes terapéuticos pueden formularse como composiciones separadas que se dan al mismo tiempo o en tiempos diferentes, o los agentes terapéuticos pueden darse como una composición sencilla. En un aspecto de la terapia en combinación, las composiciones de la invención pueden usarse con esteróles de vitamina D y/o RENAGEL® . En un aspecto, las composiciones de la invención pueden administrarse antes de la administración de los esteróles de la vitamina D y/o RENAGEL®. En otro aspecto, las composiciones de la invención pueden administrarse actualmente con los esteróles de la vitamina D y/o RENAGEL®. En un aspecto adicional, las composiciones de la invención puede administrarse después de la administración de los esteróles de la vitamina D y/o RENAGEL®. El régimen de dosificación para tratar una condición de enfermadad con la terapia de combinación de esta invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, incluyendo el tipo, edad, peso, sexo y condición médica del paciente, la severidad de la enfermedad, la vía de administración, y el compuesto particular empleado, y de esta manera puede variar ampliamente .

IV. Evaluación de calcificación vascular Los métodos para detectar y medir la calcificación vascular son bien conocidos en el arte. En un aspecto, los métodos para medir la calcificación incluyen los métodos directos para detectar y medir la extensión de deposiciones de fósforo-calcio en vasos sanguíneos. En un aspecto, los métodos directos para medir la calcificación vascular comprende métodos formadores de imágenes in vivo tales como roentgenografía de película plana, arteriografía coronaria; fluoroscopia, incluyendo fluoroscopia de substracción digital; cinefluorografía; tomografía computarizada de haz convencional, de hélice, y de electrones; ultrasonido intravascular (IVUS) ; formador de imágenes de resonancia magnética; y ecocardiografía transtorácica y transesofagal. La fluoroscopia y EBCT son usados más comúnmente para detectar la calcificación no invasiva, mientras la cinefluorografia y IVUS se usan por intervencionalistas coronarios para evaluar la calcificación en lesiones específicas antes de la angioplastia. En un aspecto, la calcificación vascular puede detectarse por roentgenografía de película plana. La ventaja de este método es la disponibilidad de la película y el costo inferior del método, sin embargo, la desventaja es su baja sensibilidad. Kelley M. & Newell J. Cardiol Clin. 1: 575-595, 1983. En otro aspecto, la fluoroscopia puede usarse para detectar la calcificación en arterias coronarias. Aunque la fluoroscopia puede detectar desde moderadas hasta grandes calcificaciones, su capacidad para identificar depósitos calcíficos pequeños es inferior. Loecker et al. J Am Coll Cardiol. 19: 1167-1172, 1992. La fluoroscopia es ampliamente disponible en colocaciones tanto fuera del paciente como dentro de paciente y es relativamente barato, pero tiene diversas desventajas. Además de que sólo una sensibilidad moderada a baja, la detección fluoroscópica de calcio es dependiente en la persona y experiencia del operador así como el número de vistas estudiadas. Otros factores importantes incluyen variabilidad de equipo fluoroscópico, estado corporal del paciente, estructuras anatómicas subrayadas, y calcificaciones subrayadas en estructuras tales como vértebra y válvula anular. Con fluoroscopia, la cuantificación de calcio no es posible, y la documentación de película comúnmente no se obtiene. Aún en otro aspecto, la detección vascular puede detectarse por tomografía computada convencional (CT) . Debido a que el calcio aligera el haz de rayos x, la tomografía computada (CT) es extremadamente sensible en detección a la calcificación vascular. Aunque la CT convencional parece tener mejor capacidad que la fluoroscopia para detectar la calcificación de arteria coronaria, sus limitaciones son tiempos de barrido lentos resultando en artefactos de movimiento, promedio de volumen, mal registro de la respiración, e incapacidad para cuantificar la cantidad de placa. Wexler et al. Circulation 94: 1175- 1192, 1996. En un aspecto adicional, la calcificación puede detectarse por tomografía computarizada por hélice o por espiral, la cual tiene tiempos de barrido considerablemente más rápidos que el CT convencional. Las secciones traslapadas también mejoran la detección de calcio. Shemesh et al. reporta formadores de imágenes de calcio coronario por CT de hélice como que tiene una sensibilidad de 91% y una especificidad de 52% cuando se compara con enfermedad obstructiva coronaria angiográficamente importante. Shemesh et al. Radiology 197: 779-783, 1995. Sin embargo, otros datos preliminares han mostrado que aún a estos tiempos de barrido acelerados, y especialmente con CT de hélice sencilla, los depósitos calcíficos son confusos debido al movimiento cardiaco, y calcificaciones pequeñas pero no se aprecian. Baskin et al. Circulation 92 (suppl I): 1-651, 1995. De esta manera, los restos de CT de hélice superiores a fluoroscopia y CT convencional en detección de la calcificación. Los barridos de CT de hélice doble aparentan ser más sensibles que los barridos de hélice sencilla en detección de calcificación coronaria debido a su alta resolución y capacidades de un corte más delgado . Wexler et al., supra. En otro aspecto, la tomografía computarizada de haz de electrones (EBCT) puede usarse para la detección de calcificación vascular. LA EBCT usa un pistola de electrones y un "objetivo" de tungsteno estacionario en vez de un tubo de rayos X estándar para generar rayos X, permitiendo tiempos de barrido muy rápidos. Originalmente se refiere como cine o CT ultrarápido, el término EBCT se usa ahora para distinguirse de los barridos CT estándar debido a que los barridos de espiral de modernos también realizaron tiempos de barrido subusecundarios . Para propósitos de detectar el calcio coronario, las imágenes EBCT se obtienen en 100 ms con un grosor de corte de barrido de 3 mm. Treinta hasta 40 barridos axiales adyacentes se obtienen por el incremento de la tabla. Los barridos, los cuales se adquieren usualmente durante una o dos secuencias que mantienen la respiración separada, se disparan por la señal electrocardiográfica a 80% del intervalo RR, casi al final del diastol y antes de la contracción atrial, para minimizar el efecto de movimiento cardiaco. El tiempo de adquisición de imágenes rápida virtualmente elimina el artefacto de movimiento con relación a la contracción cardiaca. Las arterias coronarias sin opacificar se identifican fácilmente por EBCT debido a que la densidad CT inferior de grasa periarterial produce un contraste marcado para la sangre en las arterias coronarias, mientras que el calcio mural es evidente debido a su densidad CT alta con relación a la sangre. Adicionalmente, el software de barrido permite la cuantificación del área y densidad de calcio. Un sistema de registro arbitrario se ha divisado con base en el coeficiente de atenuación de rayos X, o medir el número CT en unidades Hounsfield, y el área de depósitos calcificados. Agatston et al. JAm Coll Cardiol. 15:827-832, 1990. Un estudio de separación por exclusión de calcio coronario puede completarse dentro de 10 ó 15 minutos, requiriendo solamente unos pocos segundos de tiempo de barrido. Los barridos CT de haz de electrones son más caros que los barridos CT convencionales o de espiral y están disponibles en relativamente pocos sitios. En un aspecto, el ultrasonido intravascular (IVUS) puede usarse para detectar calcificación vascular, en particular, ateroesclerosis coronaria. Waller et al. Circulation 85: 2305-2310, 1992. Al usar transductores con reflectores giratorios montados en las puntas de los catéteres, es posible obtener imágenes de sección cruzada de las arterias coronarias durante la cateterización coronaria. Los sonogramas proporcionan información no solamente acerca del lumen de la arteria, sino también acerca del grosor y características del tejido de la pared arterial. La calcificación se aprecia como un área hiperecoica con sombreado: las placas no calcificadas fibróticas se aprecian como áreas hiperecoicas sin sombreado. Honye et al. Trends Cardiovasc Med. 1: 305-311, 1991. Las desventajas en el uso de IVUS, al contrario de otras modalidades formadoras de imágenes, son que son invasivas y se llevan a cabo actualmente solamente en conjunto con angiografía coronaria selectiva, y visualiza solamente una porción limitada del árbol coronario. No obstante que es invasiva, la técnica es clínicamente importante debido a que puede mostrar involucramiento ateroesclerótico en pacientes con hallazgos normales en arteriogramas coronarias y ayuda a definir las características morfológicas de lesiones estenóticas antes de la angioplastia de globo y selección de dispositivos de aterectomia. Tuzcu et al . J Am Coll Cardiol. 27: 832-838, 1996. En otro aspecto, la calcificación vascular puede medirse por formador de imágenes de resonancia magnética (MRI) . Sin embargo, la capacidad de MRI para detectar la calcificación coronaria se limita de alguna manera. Debido a que las microcalcificaciones no alteran substancialmente la intensidad de señal de vóxeles que contiene una cantidad grande de tejido suave, el contraste puro en tales colecciones de calcio es menor. Por lo tanto, la detección MRI de cantidades pequeñas de la calcificación se dificulta, y no reporta o espera papeles para MRI en la detección de la calcificación arterial coronaria. Wexler et al., supra. En otro aspecto, la calcificación vascular puede medirse por ecocardiografica transtorácica (superficie) , la cual es particularmente sensible a la detección de calcificación mitral y aórtica valvular; sin embargo, la visualización de las arterias coronarias se han documentado solamente en raras ocasiones debido a las ventanas acústicas externas disponibles limitadas. La ecocardiografia transesofageal es una metodología ampliamente disponible que a menudo puede visualizar las arterias coronarias próximas. Koh et al. bit J Cardiol. 43: 202-206, 1994. Fernandes et al. Circulation 88: 2532-2540, 1993. En otro aspecto, la calcificación vascular puede evaluarse ex vivo por métodos Van Kossa. Este método depende del principio que los iones de plata pueden desplazarse de una solución por iones de carbonato o fosfato debido a sus posiciones respectivas en las series electroquímicas. La reacción argentafin es fotoquímica en naturaleza y la energía de activación se suministra de fuerte visible o luz ultravioleta. Ya que las formas demostrables de iones de carbonato o fósforo de tejido se asocian invariablemente con iones de calcio, el método puede considerarse como sitios que demuestran la sedimentación de calcio en el tejido.

Otros métodos para medir la calcificafion directa pueden incluir, pero no se limitan a, tinción inmunofluorescente y densitometría. En otro aspecto, los métodos para evaluar la calcificación vascular incluyen métodos para medir los factores determinantes y/o de riesgo de calcificación vascular. Tales factores incluyen, pero no se limitan a niveles de suero de fósforo, calcio y producto calcio x fósforo, la hormona paratiroide (PTH), colesterol de lipoproteína de baja densidad (LDL) , colesterol de lipoproteína de alta densidad (HDL), triglicéridos, y creatinina. Los métodos para medir estos factores son bien conocidos en el arte. Otros métodos para evaluar la calcificación vascular incluyen evaluar factores de formación de hueso. Tales factores incluyen marcadores de formación de hueso tales como fosfatasa alcalina específica del hueso (BSAP) , osteocalcina (OC) , propéptido carboxiterminal de colágeno tipo I (PICP), y propéptido aminoterminal de colágeno tipo I (PINP) ; marcadores de la reabsorción del hueso en el suero tales como telopéptido C reticulado de colágeno tipo I (ICTP), fosfatasa de ácido resistente al tartrato, TRACP y TRAP5B, telopéptido N de reticuladores de colágeno (NTx) , y telopéptido C de reticuladores de colágeno (CTx) ; y marcadores de la reabsorción del hueso en la orina, tales como hidroxiprolina, piridinolinas libres y totales (Pyd) , deoxipiridinolinas libres y totales (Dpd) , telopéptido N de reticuladores de colágeno (NTx) , y telopéptido C de reticuladores de colágeno (CTx) .

V. Métodos de tratamiento En un aspecto, la invención proporciona un método para inhibir, disminuir o prevenir la calcificación vascular en un individuo. El método comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto calcimimético de la invención. En un aspecto, la administración del compuesto de la invención retarda o invierte la formación, crecimiento o sedimentación de depósitos de cristal hidroxiapatita de matriz extracelular. En otro aspecto de la invención, la administración del compuestos de la invención previene la formación, crecimiento o sedimentación de depósitos de cristal hidroxiapatita de matriz extracelular. Los métodos de la invención pueden usarse para prevenir o tratar la calcificación ateroesclerótica y calcificación media y otras condiciones caracterizada por calcificación vascular. En un aspecto, la calcificación vascular puede asociarse con la insuficiencia renal crónica o enfermedad renal de etapa terminal. En otro aspecto, la calcificación vascular puede asociarse con diálisis previo o posterior o 3 uremia. En un aspecto adicional, la calcificación vascular puede asociarse con diabetes mellitus I o II. Aún en otro aspecto, la calcificación vascular puede asociarse con un trastorno cardiovascular. En un aspecto, la administración de una cantidad efectiva de calcimiméticos puede reducir el PTH en el suero sin provocar calcificación aórtica. En otro aspecto, la administración de calcimiméticos puede reducir el nivel de creatinina en el suero o puede prevenir el incremento del nivel de creatinina en el suero. En otro aspecto, la administración de calcimiméticos puede atenuarse por hiperplasia paratiroide (PT) . Los calcimiméticos pueden administrarse solos o en combinación con otros fármacos para tratar la calcificación vascular, tales como esteróles de vitamina D y/o RENAGEL®. Los esteróles de vitamina D pueden incluir calcitriol, alfacalcidol , doxercalciferol , maxacalcitol o paricalcitol . En un aspecto, los compuestos calcimiméticos pueden administrarse antes o después de la administración de esteróles de vitamina D. En otro aspecto, los calcimiméticos pueden co-administrarse con esteróles de vitamina D. Los métodos de la invención puede practicarse para atenuar el efecto mineralizante de calcitriol en tejido vascular. En un aspecto, los métodos de la invención pueden usarse para invertir el efecto de calcitriol de incrementar los niveles de suero de calcio, fósforo y producto Ca x P por ello previenen o inhiben la calcificación vascular. En otro aspecto, los métodos de la invención pueden usarse para estabilizar o disminuir los niveles de creatinina en el suero. En un aspecto, además para incrementar el nivel de creatinina debido a una enfermedad, un incremento adicional en el nivel de creatinina puede ser debido para tratar con esteróles de vitamina D tales como calcitriol. Además, los calcimiméticos pueden administrarse en conjunto con tratamientos quirúrgicos y no quirúrgicos. En un aspecto, los métodos de la invención puede ser practicados en conjunto con diálisis. Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar más completamente la invención, pero no se construyen como limitantes del alcance los mismos.

Ejemplo 1 Este ejemplo demuestra que el HCl N- (3- [2-clorofenil] -propil) -R-a-metil-3-metoxibencilamina calcimimético (compuesto A) reduce el PTH en el suero en ratas urémicas con hiperparatiroidismo secundario (HPT) sin provocar calcificación aórtica y atenuar el efecto mineralizado de calcitriol en tejido vascular.

Animales Las ratas Wistar macho que pesan 250 g se adquirieron de las Instalaciones de Reproducción de Animales de la Universidad de Córdoba (España) . Las ratas se alojaron con un ciclo 12hr/12hr luz/oscuridad y se da acceso ad libitum a dieta normal (calcio = 0.9%, fósforo = 0.6%). Los protocolos experimentales se revisaron y aprobaron por el Comité Ético para Investigación de Animales de la Universidad de Córdoba (España) , y todos los animales recibieron cuidado humano de acuerdo con los Principios de Cuidado para Animales de Laboratorio, formulados por la Sociedad Nacional para la Investigación Médica y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio preparada por la Academia Nacional de Ciencias .

Nefrectomia 5/6 El modelo de roedor de CKD usado en estos estudios se indujo por nefrectomia 5/6 (5/6 Nx) , un procedimiento de dos etapas que reduce la masa renal funcional original por cinco sextos (5/6) . En una primera etapa, los animales se anestesiaron usando xilazina (5 mg/kg, ip) y cetamina (80 mg/kg, ip) , una incisión de 5-8 mm se hizo en la superficie lateral media izquierda del abdomen, y el riñon izquierdo se expuso. La arteria renal izquierda se visualizó y 2 de los 3 ramificados se ligan herméticamente, después de lo cual el riñon se inspeccionó y regresó a una posición anatómicamente neutral dentro de la cavidad peritoneal . La pared abdominal y las incisiones de la piel se cerraron con sutura, y la rata se coloca de nuevo en su jaula de alojamiento. Después de 1 semana de registro, el animal se volvió a anestesiar y se hizo una incisión de 5-8 mm en la superficie lateral media derecha del abdomen. El riñon derecho se expuso y el pedículo renal sin encapsular, se coloca abrazadera y se liga, y el riñon se remueve. El pedículo ligado se regresó a una posición anatómica neutral y las incisiones en el abdomen y la piel se cierran con materiales de sutura. El animal se permitió que se recuperara en su jaula de alojamiento. Los animales operados del grupo quirúrgico de referencia siguen los mismos procedimientos sin manipulación renal. El programa experimental se muestra en la figura 1. Después de la segunda cirugía, la dieta se cambió a un contenido de calcio disminuido (0.6%) y fosfato incrementado (0.9%) . Las ratas se eligieron al azar (con base en la distribución normal de pesos corporales de línea base) en 6 grupos experimentales: operados del grupo quirúrgico de referencia (n = 13) (usados como un control), 5/6 Nx + vehículo (solución salina) (n = 10) , 5/6 Nx + calcitriol 80 ng/kg (Calcijex, Abbot) ip cada otro día (n = 10) , 5/6 Nx + compuesto A 1.5 mg/kg por día sc (n = 10) (Amgen, Thousand Oaks, CA USA) , 5/6 Nx + Compuesto A 3 mg/kg por día sc (n = ) , o 5/6 Nx + combinación de calcitriol 80 ng/kg y Compuesto A 1.5 mg/kg (n = 10) dosis como arriba. Los tratamientos se mantuvieron durante 14 días . Las ratas se sacrificaron por pinchado aórtico y exsangrado bajo anestesia general (ip de tiopental de sodio) 24 horas después de la última dosis del fármaco.

Análisis bioquímico de sangre La sangre para análisis bioquímico se recolectó de la aorta abdominal al término del periodo de tratamiento, la sangre para medir los niveles de calcio ionizado se recolectó en jeringas heparinizadas e inmediatamente se analizan usando un analizador Ciba-Corning 634 ISE Ca++/pH (Ciba-Corning Essex, Inglaterra) . Posteriormente, el plasma se separó por centrifugación y se almacena a -70°C hasta el ensayo. Los niveles PTH se cuantificaron de acuerdo a las instrucciones del vendedor usando un kit de ensayo inmunoradiométrico de rata PTH(I-34) (Im unotopics, San Clemente, CA) . La creatinina, fósforo, y calcio total en el suero se midió por espectrofotometría (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO, USA).

Evaluación ex vivo de calcificación vascular Después de sacrificarlos, las aortas abdominales se diseccionaron y dividieron en dos partes. Una parte se fijó en formalina amortiguada al 10% y posteriormente se pone en secciones y se tiñe para la mineralización por el método von Kossa. La otra se dimineralizó en ácido fórmico al 10%, y el contenido de calcio y fósforo en el tejido arterial se mide en el sobrenadante de acuerdo al método descrito por Price et al Arterioscler Thromb Vase Biol 20:317-27, 2000.

Estadís ti cas Los valores se expresaron como el error medio ± estándar (SE) . La diferencia entre los medios para dos diferentes grupos se determinó por prueba t; la diferencia entre los medios para tres o más grupos se evalúo por ANOVA. P < 0.05 se consideró importante.

Crea tinina La concentración de creatinina en suero medio en ratas del grupo quirúrgico de referencia fue 0.53 ± 0.02 mg/dl. Como se espera, todas las ratas 5/6 Nx tienen niveles de creatinina importantemente mayores (P < 0.05) (0.83 ± 0.04 hasta 0.89 ± 0.03 mg/dl) antes cualquier, tratamiento de fármaco con diferencias de intergrupo no importantes. El tratamiento con calcitriol resulta en un incremento importante adicional (P < 0.05) en los niveles de creatinina en el suero (1.05 ± 0.07 mg/dl) en relación a los grupos 5/6 Nx. La combinación de calcitriol y el compuesto A no eleva importantemente los niveles de creatinina (0.93 + 0.05 mg/dl) cuando se compara con el compuesto A o animales 5/6 Nx tratados con vehículo. La inclusión del compuesto A con calcitriol disminuye el calcitriol mediado incrementado en los niveles de creatinina en el suero.

Parámetros bioquímicos en el suero Los niveles de suero de calcio ionizado, fósforo y PTH se detallan en las Figuras 2-4. Los niveles de calcio ionizado en el suero en 5/6 Nx y grupo del grupo quirúrgico de referencia (1.21 ± 0.01 mmol/1 vs 1.23 ± 0.01 mmol/1) . Los niveles de calcio ionizado en el suero en ratas tratadas con el compuesto A a 1.5 (1.20 + 0.02 mmol/1) ó 3 mg/kg (1.22 ± 0.02 mmol/1) no fueron diferentes del grupo tratado con vehículo 5/6 Nx (1.21 ± 0.01 mmol/1) . Sin embargo, el tratamiento con calcitriol solo o en combinación con el compuesto A resultan en niveles de calcio ionizados en el suero importantemente mayores (P < 0.05) (1.28 ± 0.02 mmol/1, y 1.26 ± 0.01 mmol/1, respectivamente) cuando se compara con los grupos tratados solo con el compuesto A o tratados con vehículo 5/6 Nx (Figura 2) . Los niveles de fósforo en el suero (Figura 3) no fueron diferentes entre animales del grupo quirúrgico de referencia (6.9 + 0.7 mg/dl), y los animales 5/6 Nx tratados con vehículo (6.5 ± 0.4 mg/dl) o con el compuesto A a 1.5 (6.6 ± 0.3 mg/dl) o 3 mg/kg (6.9 ± 0.4 mg/dl). Los animales que recibieron calcitriol solo muestran niveles de fósforo en el suero importantemente elevados (P < 0.05) (10.2 ± 0.9 mg/dl) cuando se compara con los animales tratados con vehículo 5/6 Nx . La combinación del compuesto A y calcitriol tendieron hacia disminuir los niveles de fósforo en el suero (8.7 + 0,7 mg/dl), pero todavía es importantemente mayor (P < 0.05) que en los animales tratados con vehículo 5/6 Nx . La concentración de PTH en el suero se incrementó significativamente (P < 0.05) en ratas 5/6 Nx (118.7 ± 27.7 pg/ml) , cuando se compara con los animales operados por copia (39.3 ± 7.9 pg/ml). Todos los tratamientos empleados reducen las concentraciones de PTH en el suero a niveles que no son diferentes significativamente de las ratas del grupo quirúrgico de referencia. Sin embargo, la combinación de calcitriol y el compuesto A resulta en una supresión PTH significativamente más efectiva (P < 0.05) (13.8 + 2.6 pg/ml) que el compuesto A 1.5 mg/kg (73.5 ± 12.8 pg/ml) solo (Figura 4) .

Contenido mineral aórtico En línea con los niveles minerales de suero incrementados observados con la administración de calcitriol, el tratamiento de ratas 5/6 Nx con contenido de calcio aórtico significativamente incrementado (P = 0.009) (4.2 + 1.1 mg/g tejido) comparado con animales 5/6 Nx tratados con vehículo (2.3 ± 0.2 mg/g tejido) (Figura 5). El tratamiento con el Compuesto A, sin embargo, resulta en contenido de calcio aórtico similar a animales operados por copia (P = 0.777) o 5/6 Nx tratados con vehículo (P = 0.882) (Figura 5) . De forma sorpresiva, dado el efecto no significativo de combinación de calcitriol y Compuesto A en los niveles de calcio en el suero, el incremento inducido por calcitriol en calcio aórtico fue atenuado importantemente (P = 0.002) por tratamiento concurrente con el Compuesto A 1.5 mg/kg (Figura 5) . Los análisis adicionales demuestran que el contenido de fósforo de animales por copia no fueron diferentes que en los animales 5/6 Nx tratados con vehículo (Figura 6) . El tratamiento de animales 5/6 Nx con calcitriol significativamente (P = 0.01) eleva el contenido de fósforo (2.1 ± 1 mg/g tejido) en el tejido aórtico, mientras que no en el compuesto A (1.5 o 3 mg/kg) (Figura 6) . El incremento inducido por calcitriol en fósforo aórtico fue atenuado significativamente (P = 0.013) por tratamiento concurrente con el Compuesto A 1.5 mg/kg (Figura 6) . La mineralización aórtica in situ se examinó por medio de los métodos de tinción von Kossa (Figuras 7A Y7B) . Los depósitos minerales en la aorta no se observaran en ya sea los grupos 5/6 Nx tratados con el compuesto A o vehículo, por copia. Sin embargo, la tinción marcada von Kossa se detectó en el medio de ratas 5/6 Nx tratadas con calcitriol solo (Figura 7A) . De forma interesante, la adición del Compuesto A 1.5 mg/kg hasta el régimen de tratamiento de calcitriol previene el desarrollo de calcificación aórtica (Figura 7B) .

Regresión de calcificación vascular Los animales fueron 5/6 Nx como se describe previamente y colocan en una dieta alta en fósforo (0.6% Ca; 1.2% P) durante 14 días. Los animales se dividieron en cuatro grupos (A, B, C y D n= 4-5 animales por grupo) , un grupo (A) recibe vehículo (solución salina 0.2 ml i.p.) mientras que los tres grupos restantes (B, C y D) reciben calcitriol (80 ng/kg cada otro día i.p.) durante el curso del estudio (28 días) . El día 14 dos grupos (C y D) se convirtieron para dieta normal (Ca 0.9%; P 0.6%) y el grupo C se administró el compuesto A a 3mg/kg diariamente p.o.), mientras el grupo D recibe vehículo (0.5 ml de 10% captisol en agua p.o.) diariamente. Los grupos restantes (A y B) se mantuvieron en la dieta alta en fósforo y se administra ya sea calcitriol o vehículo durante el curso del estudio (28 días) . El día 28 todos los animales se sacrificaron (C02) y las aortas se remueven para determinar el contenido P y Ca aórtico (mg/g de tejido) como se describe previamente. Los animales que estuvieron en la dieta alta en fósforo y recibieron calcitriol durante los 28 días completos (Grupo B) , muestran incrementos importantes (p < 0.05) en el contenido de calcio y fósforo aórtico cuando se compara con ratas con dieta alta en fósforo que reciben vehículo (Grupo A) (ver Figura 8) . Esto indica que el calcitriol media el incremento en el contenido de calcio y fósforo aórtico (calcificación vascular) . Al cambiar la dieta de un dieta alta en fósforo (grupo B) a una normal en fósforo, se provoca una disminución ligeramente no importante en el contenido de calcio y fósforo aórtico (Grupo D) . Esto sugeriría que una dieta baja en fósforo podrá prevenir el progreso e/o invertir el proceso de calcificación vascular (pacientes CRI y ESRD se dice que comen una dieta baja en fósforo) . Los animales cambiados de la dieta alta en fósforo a una dieta normal en fósforo y que reciben el Compuesto A 3mg/kg mientras que todavía reciben calcitriol (grupo C) al término del estudio demuestra una reducción importante (p < 0.05) en el contenido de fósforo aórtico y disminuye el contenido de calcio aórtico, cuando se compara con el grupo D. Esto sugiere que la calcificación vascular establecida puede invertirse por un agente calcimimético tipo Compuesto A.

Ejemplo 2 Este ejemplo demuestra que la N- ( (6- (metiloxi) -4 ' -(trifluorometil) -1,1' -bifenil-3-il) metil) -1-feniletanamina calcimimética (Compuesto B) atenúa la hiperplasia de paratiroide (PT) , disminuye el PTH en el suero y reduce la calcificación vascular aórtica en un modelo animal de CKD. Ratas Sprague-Dawley macho (Charles River Laboratories) que pesan 300-350 gramos se usaron en estos estudios. Todos los animales reciben alimento de laboratorio estándar (Harían Teklad, Madison, Wl) previo al inicio de los estudios. El alimento de laboratorio estándar se cambió a un alimento de laboratorio de roedor estándar que contiene adenina al 0.75%. Los animales recibieron comida y agua ad libitum. El protocolo de animal se aprobó por el Institutional Animal Care and Use Committee de Amgen Inc. (Thousand Oaks, CA) . Los animales se alimentaron de alimento que contiene adenina durante 21 días, y previo al inicio de la dieta con adenina los animales se sangraron previamente para mediciones de la línea base de los niveles de calcio ionizado, PTH, BUN y creatinina y fósforo (Figura 9) .

Colección de sangre para PTH y perfil de química en el suero Previo a colocar los animales en una dieta de adenina o la administración de compuesto B o línea base del vehículo, las determinaciones de suero P, Ca, BUN, PTH y creatinina se realizaron. La sangre se remueve del seno orbital mientras que las ratas estuvieron bajo anestesia (isoflurano al 2% en 02) . Después del sangrado tiempo 0, los animales se colocaron en el alimento que contiene adenina y se administraron con el Compuesto B a 3mg/kg p.o. o vehículo (captisol al 12% en agua) diariamente durante 21 días. Al final del estudio (día 21) los animales se sacrificaron y la aorta y las glándulas paratiroides se removieron para análisis histopatológico. La sangre se remueve para química de la sangre y determinaciones PTH. Para medir los niveles de calcio ionizado en la sangre, la sangre se colecta de la aorta abdominal bajo anestesia (isofluorano al 2% en 02) , previo al sacrificio, con tubos capilares heparinizados y se analiza usando un analizador Ciba-Corning 634 ISE Ca++/pH (Ciba-Corning Diagnostics Corp, Medfield, MA) . De forma separada, la sangre se colecta para PTH, nitrógeno de urea en la sangre (BUN) , creatinina, y niveles de fósforo en el suero en tubos de sangre marcados con SST (activador de coágulos) (BD, Franklin Lakes, NJ) y se permitir la coagulación. El suero se removió y almacenó a -70°C hasta el que se evaluó. Los niveles PTH se cuantificaron de acuerdo a las instrucciones del vendedor usando un kit de ensayo inmunoradiométrico PTH en ratas (I- 34) (Lnmutopics, San Clemente, CA) . Los niveles de BUN, creatinina, y fósforo se determinaron usando un analizador de química en la sangre (Olympus AU 400, Melville, NY) .

Inmunohistoquímica de PCNA : La hiperplasia se determinó usando inmunoquímica de antígeno nuclear de célula proliferativa y peso de paratiroide (PCNA) . El complejo laringo-traqueal se removió al sacrificar y almacenar 2-3 días en formalina amortiguada con Zn, luego se transfiere a alcohol al 70% y se corta. En el corte, los paratiroides se disecaron nuevamente de la tiroides y se tiñen en seco en un paño Kim libre de pelusa (Kimberly Clark Corp., Roswell, GA) previo a pesarse individualmente en una balanza Sartorius BP21 ID (Goettingen, Alemania) . Los paratiroides luego se procesaron para alojamiento en parafina. Después del alojamiento, se cortaron secciones de 5 µm y colocaron en porta objetos cargados (VWR Scientific, West Chester PA) . La inmunotinción se realizó en las secciones de acuerdo a las instrucciones del vendedor usando un kit de tinción PCNA (Zymed Laboratories, Inc., S. San Francisco, CA) . El área paratioide se determinó a través del uso de un cuadrante que mide el área que contiene una serie de rejillas de 0.01 mm2 (área inicialmente determinada usando un cuadrante calibrado) traslapando la región central de una sección paratiroide. Las secciones se tomaron desde aproximadamente el mismo nivel de paratiroides individuales. Las muestras de tejido se visualizaron a lOOx en un microscopio Leitz Laborlux, y el número de rejillas que traslapan el tejido paratiroide se contó. El área total del paratiroide se determinó de esta manera al multiplicar el número de rejillas por 0.01 mm2, después de lo cual el número de células positivas PCNA en el área seccional de la rejilla se contaron y expresaron como el número de células positivas PCNA/mm2. El portaobjetos se codificó y un observador que no tiene conocimiento del grupo de tratamiento asignado realiza la cuantificación de proliferación de paratiroide.

Métodos para la calcificación vascular aórtica Al final del estudio los animales se sacrificaron (C02) , las aortas se remueven y se colecta sangre para determinaciones de P, Ca, BUN y creatinina como se describe previamente. Las aortas se colectaron y fijaron en formalina amortiguada neutral al 10% durante 3-7 días, luego se transfieren a etanol al 70%. El análisis de densidad mineral del hueso (BMD; g/cm2) se realizó en un densitómetro Lunar PlXImus 2 (Lunar PlXImus; Madison, Wl) con el siguiente parámetro: tiempo de corrida 4 min. Los resultados se analizaron usando el software Lunar piximus versión 2.0.

La administración del compuesto B durante 3 semanas reduce significativamente (p < 0.01) el número de células positivas PCNA comparadas con los animales tratados con vehículo (Figura 11) . De forma similar, los pesos paratiroides también se disminuyeron significativamente en los animales tratados con el compuesto B cuando se comparan con los animales tratados con vehículo (Figura 12) . La figura 13 demuestra que la administración del Compuesto B reduce significativamente los niveles de PTH en el suero (p < 0.0001; diferencias post-hoc ANOVA/cuadros mínimos protegidos por Fisher) cuando se compara con los animales tratados con vehículo. La figura 14 demuestra que la administración del Compuesto B en animales alimentados con la dieta de adeniria tiene una reducción de 75% en la densidad mineral del hueso aórtico, comparada con los animales tratados con vehículo en la misma dieta. Las figuras 15A y 15B ilustran el efecto del Compuesto B en nitrógeno urea en la sangre (BUN) y creatinina en el modelo CKD inducido por adenina con calcificación vascular. Brevemente, los niveles de tanto BUN como creatinina se incrementan significativamente (p < 0.05) después de 3 semanas del tratamiento con adenina (posterior) comparado con el vehículo de pretratamiento (n=4) ; Compuesto B (n=7) Figura 10. ?o hubo efecto en el tratamiento importante del Compuesto B (n=7) en BUN (p>0.05) cuando se compara con los controles tratados con vehículo (n=4) . Sin embargo, el compuesto B (n= 7) media una disminución en los niveles de creatinina (p < 0.05) comparado con animales tratados con vehículo (n = 4) . La figura 16 demuestra que efecto del Compuesto B en Ca ionizado en el CKD inducido por adenina con calcificación vascular. El calcio ionizado en el suero (iCa) se reduce significativamente después de 3 semanas de tratamiento con adenina (post) comparado con el pretratamiento (pre) p<0.05; ANOVA; vehículo (n=4 pre; n=3 post) ; Compuesto B (n=8 pre; n=6 post) . El tratamiento de compuesto B (n = 6) se reduce significativamente el iCa en el suero comparado con el tratamiento con vehículo (p=0.004; n = 3) . La figura 17 demuestra el efecto del Compuesto B en fósforo en el suero en el CKD inducido por adenina con calcificación vascular. El fósforo en el suero (P) se incrementa significativamente después de 3 semanas del tratamiento con adenina (post) comparado con el pretratamiento (pre) p>0.05; ANOVA; vehículo (n=4); Compuesto B (n=7) . No hubo efecto en el tratamiento importante (p > 0.05) del Compuesto B en los niveles P en el suero comparado con los animales tratados con vehículo. La figura 18 demuestra el efecto del Compuesto B en Ca en el suero en el CKD inducido por adenina con calcificación vascular. El calcio en el suero (Ca) se reduce significativamente después de 3 semanas del tratamiento de adenina (post) comparado con el pretratamiento (pre) p<0.05; ANOVA; vehículo (n=4) ; Compuesto B (n=7) . El tratamiento con el compuesto B reduce significativamente el calcio total en el suero comparado con el tratamiento con vehículo (p=0.0001) A?OVA; vehículo (n=4) ; Compuesto B (n=7) .

Ejemplo 3 Este ejemplo demuestra que el ?- ( (6- (metiloxi) -4 ' - (trifluorometil) -1,1' -bifenil-3-il) metil) -l-feniletanamina calcimimético (Compuesto B) reduce significativamente el incremento mediado por paricalcitol en contenido de Ca y P de tejido aórtico de animales urémicos.

Animales Ratas Wistar (200-25Og) , alimentadas con una dieta de 0.6% Ca y 1.2% P, se nefrectomizaron 5/6 (5/6 ?x) o se operaron por grupo quirúrgico de referencia (grupo quirúrgico de referencia) . Las ratas reciben los siguientes tratamientos iniciando el día uno posterior a la cirugía: grupo quirúrgico de referencia + vehículo, 5/6 ?x + vehículo, 5/6 ?x + paricalcitol 240 ng/kg cada 48 hr interperitonealmente, 5/6 ?x + paricalcitrol + Compuesto B (1.5 mg/kg cada 48 hr subcutáneamente) o 5/6 ?x + Compuesto B (1.5 mg/kg cada 48 hr subcutáneamente) . Después de 14 días, las ratas se anestesiaron y sacrificaron. La aorta torácica se removió y procesó para medir el contenido de Ca y P. La sangre se recolecta al sacrificarlos para medir el PTH en el suero, Ca ionizado, P y creatinina. Los resultados se resumen en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1 /6Nx + vehí culo El procedimiento de 5/6 Nx medió un incremento en la creatinina en el suero (p < 0.05) que es consistente con insuficiencia renal crónica. La disminución importante en Ca ionizado en el suero (p < 0.05), y el incremento importante en P y PTH en el suero (p < 0.05) observado en los animales con vehículo 5/6 Nx contra animales con vehículo del grupo quirúrgico de referencia son todos sellos de hiperparatiroidismo secundario. /6Nx + Pari cal ci tol La administración de paricalcitol a ratas 5/6 Nx disminuye significativamente (p < 0.05) los niveles de PTH en el suero comparados con 5/6 Nx + vehículo. No hubo cambios en el calcio ionizado en la sangre, los niveles de creatinina o P en el suero comparados con 5/6 Nx + vehículo. El paricalcitol incrementa significativamente el contenido de Ca aórtico y P (p < 0.05) comparado con los animales tratados con vehículo 5/6 Nx (Tabla 1) . /6Nx + Compuesto B La administración del Compuesto B a ratas 5/6 Nx disminuye significativamente (p < 0.05) los niveles de PTH en el suero comparado con los animales tratados con vehículo 5/6 Nx. No hubo cambios en niveles de calcio ionizado en la sangre, creatinina o P en el suero comparado con 5/6 Nx + vehículo. De forma similar, la administración del Compuesto B no cambió significativamente el contenido de Ca aórtico o P cuando se compara con cualesquiera de los animales del grupo quirúrgico de referencia tratado con vehículo o 5/6 Nx (Tabla 1) . /6Nx + Paricalcitol + Compuesto B La administración del Compuesto B a ratas 5/6 Nx tratadas con paricalcitol reduce significativamente (p < 0.05) el contenido de Ca aórtico y P comparado con ratas 5/6 Nx tratadas con paricalcitol. La disminución en contenido de Ca aórtico y P por la administración del Compuesto B no fue significativamente diferente de los controles del grupo quirúrgico de referencia tratados con el vehículo (niveles normales) . La combinación de paricalcitol y el Compuesto B reduce además los niveles de PTH en el suero significativamente (p < 0.05) cuando se compara solo con ratas 5/6 Nx tratadas con paracalci trol o Compuesto B. Los animales tratados con la combinación del Compuesto B y paricalcitol no muestran cambios en los niveles de calcio ionizado en la sangre, creatinina o P en el suero comparado con 5/6 Nx + vehículo (Tabla 1) .

Ejemplo 4 Este ejemplo demuestra que el N- ( (6- (metiloxi) -4 ' -(trifluorometil) -1, 1' -bifenil-3-il) metil) -l-feniletanamina calcimimético (Compuesto B) reduce significativamente paricalcitol y calcitriol que mide la mineralización del tejido suave.

Animales Ratas Wistar (200-250g) , alimentadas con una dieta 0.6% de Ca y 1.2% de P, se nefrectomizaron 5/6 (5/6 Nx) . Las ratas recibieron los siguientes tratamientos iniciado el día uno posterior a la cirugía: 5/6 Nx + vehículo, 5/6 Nx + paricalcitol 240 ng/kg cada 48 hr o calcitriol 80 ng/kg cada 48 hr interperitonealmente, 5/6 Nx + paricalcitrol o calcitriol + Compuesto B (1.5 mg/kg cada 48 hr subcutáneamente) o 5/6 Nx + Compuesto B (1.5 mg/kg cada 48 hr subcutáneamente) . Después de 14 días, las ratas se anestesiaron y sacrificaron y los tejidos se removieron y se procesaron para examen histológico (tinción Von Kossa para medir la mineralización y tinción H&E) . Las figuras 19A-19C (panel superior: A, B, C) ilustran que la administración de calcitriol a ratas 5/6 Nx incrementa la mineralización en el corazón (A) , riñon (B) , y pulmón (C) , los únicos tejidos examinados, como es evidente por la tinción del tejido oscuro.

Las figuras 19d-19F (panel inferior: D, E, F) demuestran que la administración del Compuesto B a ratas 5/6 Nx tratadas con calcitriol reduce la mineralización del corazón (D) , riñon (E) , y pulmón (F) como se muestra por la tinción oscura reducida de los tejidos. La figura 20A (panel superior: A) ilustra que la administración de paricalcitol a ratas 5/6 Nx incrementa la mineralización en el riñon (A) , como es evidente por la tinción del tejido oscuro. La figura 20B (panel inferior: B) demuestra que la administración del Compuesto B a ratas 5/6 Nx tratadas con paricalcitol reduce la mineralización en el riñon (B) como es evidente por la tinción oscura reducida de tej idos . Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patentes citadas en esta especificación se incorporan en la presente para referencia como si cada publicación individual o solicitud de patente se indicara específicamente o individualmente para incorporarse para referencia. Aunque la invención anterior se ha descrito en algún detalle a manera de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad de entendimiento, será fácilmente aparente para aquellos de experiencia ordinaria en la técnica en luz de las enseñanzas de esta invención que ciertos cambios y modificaciones puede hacerse a esta sin alejarse del espíritu o alcance de las reivindicaciones anexas . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (24)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético para la preparación de una composición farmacéutica para tratar la calcificación vascular en un sujeto.
2. 2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la calcificación vascular es calcificación ateroesclerótica .
3. 3. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la calcificación vascular es calcificación media.
4. 4. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto padece de insuficiencia renal crónica.
5. 5. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto padece de enfermedad renal en estado terminal.
6. 6. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto está en la etapa de prediálisis .
7. 7. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto padece de uremia.
8. 8. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto padece de diabetes mellitus I o II.
9. 9. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el sujeto padece de un trastorno cardiovascular.
10. 10. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde el sujeto es humano.
11. 11. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético es un compuesto de la fórmula I I en donde : Xi y X2, los cuales pueden ser idénticos o diferentes, son cada uno un radical elegido de radicales CH3, CH30, CH3CH20, Br, Cl, F, CF3 , CHF2, CH2F, CF30, CH3S, OH, CH20H, C0NH2, CN, N02, CH3CH2, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, acetoxi, y acetilo, o dos de Xi pueden juntos formar una entidad elegida de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi, o dos de X2 pueden juntos formar una entidad elegida de anillos cicloalifáticos fusionados, anillos aromáticos fusionados, y un radical metilen dioxi; con la condición de que X2 no es un radical 3-t-butilo; n en el rango desde 0 hasta 5; m en el rango desde 1 hasta 5; y el radical alquilo se elige de radicales alquilo C?-C3, los cuales son opcionalmente substituidos con al menos un grupo elegido de grupos alquilo C1-C9 cíclico, ramificados, lineales, saturados y no saturados, grupos dihidroindolilo y tiodihidroindolilo, y grupos 2, 3, y 4 -piperidinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
12. 12. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético es N- (3- [2-clorofenil] -propil) -R-a-metil-3-metoxibencilamina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
13. 13. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético es un compuesto de la fórmula II II en donde: R1 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; R2 es alquilo o haloalquilo; R3 es H, alquilo, o haloalquilo; R4 es H, alquilo, o haloalquilo; cada R5 presente es independientemente seleccionado del grupo que consiste de alquilo, alquilo substituido, alcoxi, alcoxi substituido, halógeno, -C(=0)0H, -CN, -NRdS (=0) raRd, -NRdC(=0)NRRd, -NRdS (=0) mNRdRd, o -NRdC(=0)Rd; R6 es arilo, arilo substituido, heterociclilo, heterociclilo substituido, cicloalquilo, o cicloalquilo substituido; cada Ra es, independientemente, H, alquilo o haloalquilo; cada Rb es, independientemente, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido por hasta 3 substituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, y nitro; cada Rc es, independientemente, alquilo, haloalquilo, fenilo o bencilo, cada uno de los cuales puede ser substituido o no substituido; cada Rd es, independientemente, H, alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, o heterociclilalquilo en donde el alquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo son substituidos por 0, 1, 2, 3 ó 4 substituyentes seleccionados de alquilo, halógeno, haloalquilo, alcoxi, ciano, nitro, Rb , -C(=0)Rc, -ORb, -NRaRa, -NR Rb, -C(=0)0Rc, -C(=0)NRaRa, -0C(0)Rc, NRaC(=0)Rc, -NRaS(=0)nRc y - S ( =0 ) nNRaRa ; m e s 1 ó 2 ; n es O, 1 ó 2 ; y p es 0, 1, 2, 3, Ó 4; con la condición de que si R2 es metilo, p es 0, y R6 es fenilo no substituido, luego R1 no es 2,4-dihalofeni lo , 2 , 4 - dime t ilf enilo , 2 , 4 -diet ilfenilo , 2 , 4 , 6 - t rihalof enilo , o 2 , 3 , 4 - trihalofenilo ; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos .
14. 14. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético es N- ( ( 6 - (met iloxi ) - 4 ' - (trifluorometil) -1, 1' -bifenil-3-il) metil) -1-feniletanamina , o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos .
15. 15. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético es HCl cinacalcet.
16. 16. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde un esterol de vitamina D se ha administrado previamente al sujeto.
17. 17. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el esterol de vitamina D es calcitriol, alfacalcidol , doxercalcif erol , maxacalcitol o paricalcitol .
18. 18. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el esterol de vitamina D es calcitriol.
19. 19. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el esterol de vitamina D es paricalcitol .
20. 20. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético se prepara para la administración previo a o después de la administración de un esterol de vitamina D .
21. 21. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético se prepara para la administración en combinación con un esterol de vitamina D.
22. 22. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el compuesto calcimimético se prepara para la administración en combinación con RENAGEL®.
23. 23. El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto calcimimético para la preparación de una composición farmacéutica para disminuir los niveles de creatinina en el suero en un suj eto .
24. 24. El uso de conformidad con la reivindicación 23, en donde el sujeto padece de niveles incrementados de creatinina en el suero inducidos por la administración de un esterol de vitamina D al suj eto .