KR20070116817A - 석회화를 감소시키는 방법 - Google Patents

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데이비드 마틴
후안 마리아노 뽀르띨로
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Abstract

본 발명은 칼슘 유사 작용제(calcimimetics)를 사용하여 실험대상 내의 혈관 석회화를 치료하는 방법에 관한 것이다.
혈관 석회화(calcification), 칼슘 유사 작용성 화합물, 죽상경화성, 중막성, 비타민 D 스테롤, 만성 신장 질환, 칼슘, 인, 크레아티닌, 부갑상선 호르몬

Description

석회화를 감소시키는 방법{METHODS OF DECREASING CALCIFICATION}
본 발명은 일반적으로 의학 분야, 더욱 구체적으로 석회화 감소, 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
만성 신장 질환(CKD)의 잘-알려진 보편적 합병증인 혈관 석회화 (vascular calcification)는 심혈관계 질환의 발병 및 사망 위험성을 증대시킨다(Giachelli, C. J Am Soc Nephrol 15: 2959-64, 2004; Raggi, P. et al. J Am Coll Cardiol 39: 695-701, 2002). CKD 에서의 혈관 석회화는 그 원인이 완전히 규명되지는 않았으나, 관련 위험 인자로는 연령, 성별, 고혈압, 투석 시점, 당뇨병 및 내당력(glucose intolerance), 비만 및 흡연이 포함된다(Zoccali C. Nephrol Dial transplant 15:454-7, 2000). 그러나 통상적인 상기 위험 인자들은 환자의 심혈관계 병인으로 인한 높은 사망률을 설명하는데 적당치 않다. 최신 보고에 따르면, 다른 요인 중에서도 칼슘 및 인의 특정 대사 이상이 혈청 내 칼슘-인 산물(Ca x P)의 수치 상승을 야기시켜, 말기 신장 질환 환자에게서 동맥 석회화를 발생시키고 잠재적으로는 심혈관계 질환을 발병시킴이 제시되었다(Goodman, W. 등의 N Engl J Med 342: 1478-83, 2000; Guerin, A. 등의 Nephrol Dial Transplant 15:1014-21, 2000; Vattikuti, R. & Towler, D. Am J Physiol Endocrinol Metab, 286: E686-96, 2004).
진행성 CKD 의 다른 징후로는 부갑상선 호르몬(PTH) 수치의 상승 및 무기질 대사 이상에 의해 특징지어지는 이차성 부갑상선기능항진증 (hyperparathyroidism; HPT)이 있다. 이차성 HPT 환자에게서 관찰되는 칼슘, 인 및 Ca x P 수치의 상승은 혈관 석회화의 위험성 증대와 관련이 있다(Chertow, G. 등의 Kidney Int 62: 245-52, 2002; Goodman, W. 등의 N Engl J Med 342: 1478-83, 2000; Raggi, P. 등의 J Am Coll Cardiol 39: 695-701, 2002). 칼슘-의거 인산염 결합제 및 활성 비타민 D 스테롤류의 투여와 같이 이차성 HPT 에 보편적으로 사용되는 치료적 중재는 혈관 석회화의 발생 또는 악화와 연관이 있는 고칼슘혈증(hypercalcemia) 및 고인산혈증(hyperphosphatemia)을 유발시킬 수 있다(Chertow, G. 등의 Kidney Int 62: 245-52, 2002; Tan, A. 등의 Kidney Int 51: 317-23, 1997; Gallieni, M. 등의 Kidney Int 42: 1191-8, 1992).
혈관 석회화는 만성 신부전의 잠재적으로 심각한 중요 합병증이다. 혈관 석회화에서 2 종류의 독특한 패턴이 확인되었는데(Proudfoot, D & Shanahan, C. Herz 26: 245-51, 2001), 보편적으로 두 종류 모두 요독증 환자에게 존재한다(Chen, N. & Moe, S. Semin Nephrol 24: 61-8, 2004). 그 중 하나인 중막성 석회화는 평활근 세포의 조골세포-유사 세포로의 표현형 형질전환과 관련하여 혈관의 중막에서 발생하는 반면에, 다른 하나인 죽종형성(atherogenesis)은 지질-함유 대식세포 및 내막 증식증(intimal hyperplasia)과 관련이 있다.
내막 벽 석회화는 비교적 젊은 만성 신부전 환자에게서 발생할 수 있으며, 신장 질환이 없어도 진성 당뇨병을 앓고 있는 환자에게 보편적으로 나타난다. 동맥의 내막 벽내 칼슘의 존재 여부에 따라, 상기 종류의 혈관 석회화를 죽상경화증 관련 혈관 석회화와 구별한다(Schinke T. & Karsenty G. Nephrol Dial Transplant 15: 1272-4, 2000). 죽상경화성 혈관 석회화는 동맥의 내막 층을 따라 죽종 플라크에서 발생된다 (Farzaneh-Far A. JAMA 284: 1515-6, 2000). 석회화는 보통 크고 상당히-진행된 병변에서 가장 크게 나타나며, 연령에 따라 증가한다(Wexler L. 등의 Circulation 94: 1175-92, 1996; Rumberger J. 등의 Mayo Clin Proc 1999; 74: 243-52). 죽상경화증 환자의 동맥 석회화 정도는 일반적으로 질환의 중증도에 부합한다. 내막 벽 석회화와는 달리, 죽상경화성 혈관 병변은 칼슘 함유 여부와는 상관없이 동맥 내강을 침범하여 혈류를 방해한다. 산화 지질 및 기타 산화성 스트레스로 인한 염증 및 단핵구 및 대식세포에 의한 침윤 때문에 죽상경화성 플라크 내에서 칼슘의 국소 침착이 일어날 수도 있다(Berliner J. 등의 Circulation 91: 2488-96, 1995).
일부 말기 신장 질환 환자에게서는 칼슘형성증(calciphylaxis) 또는 석회 요독성 동맥병증(arteriolophathy)으로 불리는 심각한 형태의 폐색성 동맥 질환이 발병된다. 이러한 증후군은 소 동맥내 광범위한 칼슘 침착에 의해 특징지어진다(Gipstein R. 등의 Arch Intern Med 136: 1273-80, 1976; Richens G. 등의 J Am Acad Dermatol. 6: 537-9, 1982). 상기 질환의 환자에서, 동맥 석회화 및 혈관 폐색은 조직 허혈과 괴사를 초래한다. 말초 혈관의 관여는 종아리 피부의 궤양 또는 수족 괴저를 야기시킬 수 있다. 복벽, 대퇴부 및/또는 둔부의 피부 및 피하 지방 조직의 허혈 및 괴사는 석회 요독성 동맥병증의 전조 형태의 특징들이다(Budisavljevic M. 등의 J Am Soc Nephrol. 7: 978-82, 1996; Ruggian J. 등의 Am J Kidney Dis 28: 409-14, 1996). 상기 증후군은 비만 개체에서 더욱 빈번히 발생하며, 그 이유가 명확하지는 않지만 남성에 비해 여성에게서 더욱 자주 발병된다(Goodman W. J. Nephrol. 15(6): S82-S85, 2002).
혈청 내 미네랄 수치를 정상화하거나 혈관 조직 또는 이식편의 석회화를 감소, 억제 또는 예방하기 위한 현행 치료법은 그 효력에 한계가 있으며, 수용불가능한 부작용들을 유발시킨다. 그러므로, 효과적인 혈관 석회화 억제 및 예방 방법에 대한 요구가 필요하다.
발명의 요약
본 발명은 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성(calcimimetic) 화합물을 실험대상(subject)에게 투여하여, 상기 실험대상의 혈관 석회화를 억제, 감소 또는 예방하는 방법을 제공한다. 하나의 양상에서, 상기 혈관 석회화는 죽상경화성 석회화일 수 있다. 다른 양상에서, 상기 혈관 석회화는 중막성 석회화일 수 있다.
하나의 양상에서, 상기 실험대상은 만성 신부전 또는 말기 신장 질환을 앓고 있는 환자일 수 있다. 다른 양상에서, 상기 실험대상은 투석전 환자일 수 있다. 추가의 양상에서, 상기 실험대상은 요독증을 앓고 있는 환자일 수 있다. 다른 양상에서는, 상기 실험대상은 제 I 형 진성 당뇨병 또는 제 II 형 진성 당뇨병을 앓고 있는 환자일 수 있다. 다른 양상에서는, 상기 실험대상이 심혈관계 질병을 앓고 있는 환자일 수 있다. 하나의 양상에서, 상기 실험대상은 사람일 수 있다.
하나의 양상에서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물은 다음 화학식 I 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이다 :
Figure 112007065860556-PCT00001
이 식에서, X2 가 3-t-부틸 라디칼이 아닌 경우에, X 1 및 X 2 는 동일하거나 또는 상이할 수 있으며, 각각의 X1 및 X2 는 CH3, CH3O, CH3CH2O, Br, Cl, F, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 아세톡시 및 아세틸 라디칼 중에서 선택한 라디칼이거나, 또는 X1 중 2 개가 함께 융합된 시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한 구조체(entity)를 형성하거나, 또는 X2 중 2 개가 함께 융합된 시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한 구조체를 형성하고 ; n 은 0 내지 5 이고 ; m 은 1 내지 5 이며 ; 알킬 라디칼은 포화 및 불포화된 선형, 분지형 및 고리형 C1-C9 알킬기, 디히드로인돌일 및 티오디히드로인돌일기, 및 2-, 3- 및 4-피페리딘일기 중에서 선택한 적어도 하나의 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬 라디칼 중에서 선택한 것이다.
하나의 양상에서, 본 발명의 방법에 사용된 칼슘 유사 작용성 화합물은 N-(3-[2-클로로페닐]-프로필)-R-α-메틸-3-메톡시벤질아민 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.
다른 양상에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 다음 화학식 II 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 가능하다 :
Figure 112007065860556-PCT00002
이 식에서, R2 가 메틸이고, p 는 0 이며, R6 이 치환되지 않은 페닐일 때, R1 은 2,4-디할로페닐, 2,4-디메틸페닐, 2,4-디에틸페닐, 2,4,6-트리할로페닐 또는 2,3,4-트리할로페닐이 아닌 경우에는, R 1 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이고 ; R 2 는 알킬 또는 할로알킬이고 ; R 3 은 H, 알킬 또는 할로알킬이고 ; R 4 는 H, 알킬 또는 할로알킬이며 ; 각각의 R 5 는 독립적으로 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 할로겐, -C(=O)OH, -CN, -NRdS(=O)mRd, -NRdC(=O)NRdRd, -NRdS(=O)mNRdRd 및 -NRdC(=O)Rd 중에서 선택한 것이고 ; R 6 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이며 ; 각각의 R a 는 독립적으로 H, 알킬 또는 할로알킬이고 ; 각각의 R b 는 독립적으로, 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노 및 니트로 중에서 선택한 3 개 이하의 치환기로 각각 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는 헤테로시클일알킬이며 ; 각각의 R c 는 독립적으로, 각각 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 할로알킬, 페닐 또는 벤질이고 ; 각각의 R d 는 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는 헤테로시클일알킬이며, 여기에서 상기 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 및 헤테로시클일알킬은 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노, 니트로, Rb, -C(=O)Rc, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, -NRaS(=O)nRc 및 -S(=O)nNRaRa 중에서 선택한 0, 1, 2, 3 또는 4 개의 치환기로 치환된 것이며 ; m 은 1 또는 2 이고 ; n 은 0, 1 또는 2 이며 ; p 는 0, 1, 2, 3 또는 4 이다.
하나의 양상에서, 본 발명의 방법에 사용된 칼슘 유사 작용성 화합물은 N-((6-(메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염일 수 있다.
하나의 양상에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 시나칼셋(cinacalcet) HCl 일 수 있다.
하나의 양상에서, 본 발명은 종전에 비타민 D 스테롤을 투여받은 바 있는 실험대상에게서 혈관 석회화를 억제, 감소 또는 예방하는 방법을 제공한다. 하나의 양상에서, 상기 비타민 D 스테롤은 칼시트리올 (calcitriol), 알파칼시돌(alfacalcidol), 독세칼시페롤(doxercalciferol), 막사칼시톨(maxacalcitol) 또는 파리칼시톨(paricalcitol)일 수 있다. 하나의 양상에서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물은 비타민 D 스테롤 투여 전 또는 투여 후에 투여할 수 있다. 다른 양상에서는, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물을 비타민 D 스테롤과 병용 투여할 수 있다.
하나의 양상에서 상기 칼슘 유사 작용성 화합물은 RENAGEL® 과 병용하여 투여할 수 있다.
본 발명은 또한 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물을 실험대상에게 투여하여, 실험대상의 혈청 내 크레아티닌(creatinine) 수치를 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 양상에서, 상기 실험대상은 비타민 D 스테롤 투여에 의해 유발된 혈청 내 크레아티닌 수치의 증가를 겪고 있는 환자일 수 있다.
도 1 은 동물 치료에 대한 실험 스케쥴을 도식적으로 나타내는 도면이다.
도 2 는 CKD 의 동물 모델에서 혈청 내 이온화된 칼슘의 수치를 나타내는 도표이다.
도 3 은 CKD 의 동물 모델에서 혈청 내 인의 수치를 나타내는 도표이다.
도 4 는 CKD 의 동물 모델에서 혈청 내 부갑상선 호르몬의 수치를 나타내는 도표이다.
도 5 는 CKD 의 동물 모델에서 대동맥의 칼슘 함량을 나타내는 도표이다.
도 6 은 CKD 의 동물 모델에서 대동맥의 인 함량을 나타내는 도표이다.
도 7A 및 도 7B 는 CKD 의 동물 모델에서 대동맥의 폰 코사(Von Kossa) 염색된 단면을 나타내는 도면이다.
도 8 은 CKD 의 동물 모델에서 대동맥의 칼슘 및 인 함량을 나타내는 도표이다.
도 9 는 아데닌-유도된 혈관 석회화 모델에서 동물 치료에 대한 실험 스케쥴을 도식적으로 나타내는 도면이다.
도 10 은 아데닌 유도된 혈관 석회화의 계획을 나타내는 도면이다.
도 11 은 CKD 의 동물 모델에서 부갑상선 증식증의 약화를 나타내는 도표이다.
도 12 는 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델에서 부갑상선의 중량 변화를 나타내는 도표이다.
도 13 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델의 치료 결과, 혈청 PTH 의 변화를 나타내는 도표이다.
도 14 는 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델의 치료 결과, 대동맥의 골밀도의 변화를 나타내는 도표이다.
도 15A 및 도 15B 는 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델에서 혈중 요소 질소(BUN) 및 크레아티닌에 대한 치료 효과를 나타내는 도표이다.
도 16 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델에서 이온화된 칼슘에 대한 치료 효과를 나타내는 도표이다.
도 17 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델에서 혈청 내 인 성분에 대한 치료 효과를 나타내는 도표이다.
도 18 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도된 CKD 모델에서 혈청 내 Ca 성분에 대한 치료 효과를 나타내는 도표이다.
도 19 는 칼시트리올-유도된 석회화를 가진 조직에 대한 화합물 B 의 치료 효과를 나타내는 도면이다.
도 20 은 파리칼시톨-유도된 석회화를 가진 조직에 대한 화합물 B 의 치료 효과를 나타내는 도면이다.
I. 개요
본 발명은 혈관 석회화의 감소, 억제 또는 예방 방법에 관한 것이다.
II. 용어 정의
본원에서 사용된 바와 같이, “혈관 석회화(vascular calcification)”란 혈관 내에 세포외성 기질(matrix) 수산화인회석(hydroxyapatite)(인산 칼슘) 결정 침착물(crystal deposits)의 형성, 성장 또는 침착을 의미한다. 혈관 석회화는 관상 동맥, 판막, 대동맥 및 기타 혈관의 석회화를 포괄한다. 이 용어는 죽상경화성 및 중막 벽 석회화를 포함한다.
“죽상경화성 석회화(atherosclerotic calcification)”는 동맥의 내막층을 따라 죽종성 플라크(artheromatous plaques)내에 발생하는 혈관 석회화를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, “중막성 석회화(medial calcification)”, “중막 벽 석회화(medial wall calcification)” 또는 “묀케베르그 경화증(Moenckeberg's sclerosis)”은 동맥 중막 벽 내에 칼슘의 존재에 의해 특징지어진 석회화를 의미한다.
용어 “치료” 또는 “치료하는”은 치료가 필요한 사람에게 병리학적 혈관 석회화 증상을 억제, 감소 또는 호전시키는 일정량의 칼슘 유사 작용성 화합물의 투여를 포함한다. 혈관 석회화를 억제하는 점에서, “억제”란 세포외성 기질 수산화인회석 결정 침착물의 형성, 성장 또는 침착을 방지, 지연 또는 반전시키는 것을 의미한다. 또한, 본원에서 질환 및 장애의 치료란, 예를 들어 통증, 염증 등과 같이 예방적 치료가 필요할 것으로 여겨지는 실험대상(즉, 동물, 예를 들면 사람과 같은 포유류)에게 본 발명의 화합물(또는 이의 약학적 염, 유도체 또는 약물전구체) 또는 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 치료학적으로 투여하는 것을 포함한다. 치료는 또한 그 필요성이 진단되지 않은 실험대상에게 상기 화합물 또는 약학적 조성물을 투여하는 것 즉, 예방학적 투여도 포함한다. 일반적으로, 상기 실험대상은 면허 의사 및/또는 인가된 의료 종사자에 의해 초기 진단되며, 본 발명의 화합물(들) 또는 조성물의 투여를 통한 예방학적 및/또는 치료학적 치료 요법이 제시, 권고 또는 처방된다.
“치료학적 유효량”은 질병 중증도의 호전 목표 및 발생 빈도를 달성하는 칼슘 유사 작용성 화합물의 용량을 의미한다. 질병 중증도의 호전에는 혈관 석회화의 반전뿐만 아니라, 혈관 석회화의 진행 속도를 저하시키는 것도 포함된다. 하나의 양상에서, “치료학적 유효량”이란 혈청 내 크레아티닌 수치를 감소시키거나 혈청 내 크레아티닌 수치의 증가를 저해하는 칼슘 유사 작용성 화합물의 용량을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 “실험대상”은 석회화를 나타내거나, 석회화의 발생 우려가 있는 인체 또는 기타 포유류를 의미한다. 이러한 개체는 예를 들면 동맥경화증(atherosclerosis), 협착증(stenosis), 재협착증(restenosis), 신부전(renal failure), 당뇨병(diabetes), 보형물 설치술(prosthesis implantation), 조직 손상 또는 연령-관련성 혈관계 질환과 같은 증상과 관련된 혈관 석회화를 가지거나 또는 혈관 석회화 발생의 우려가 있는 환자일 수 있다. 상기 증세의 예후 및 임상학적 징후는 당해 분야에 공지되어 있다. 본 발명의 방법에 의해 치료된 개체는 예를 들면 당뇨병, 만성 신장 질환, 신부전, 신장 이식 또는 신장 투석에 따른 전신적 무기질 불균형을 가질 수 있다.
인체의 동맥경화증, 신부전, 고인산혈증, 당뇨병, 연령-관련성 혈관 석회화 및 기타 다른 혈관 석회화 관련 증상의 신뢰할만한 지표인 동물 모델이 당해 분야에 공지되어 있다. 그 일례로, 혈관벽의 석회화에 대한 실험 모델이 문헌 [Yamaguchi 등의 Exp . Path. 25:185-190, 1984]에 기술되어 있다.
III. 칼슘 유사 작용성 화합물 및 이를 포함하는 약학적 조성물, 투여 및 투여량
본원에 사용된 바와 같이, “칼슘 유사 작용성 화합물(calcimimetic compound)”이란 용어는 칼슘 감지 수용체에 결합하여 형태 변화를 유도하는 화합물을 지칭하는 것으로, 이러한 형태 변화는 내인성 리간드 Ca2 + 에 의해 칼슘 감지 수용체 활성화에 대한 역치값을 저하시키고, 이로 인해 부갑상선 호르몬(PTH) 분비가 감소된다. 이러한 칼슘 유사 작용성 화합물은 또한 칼슘 수용체의 다른자리입체성(allosteric) 조절인자로 간주할 수 있다.
본 발명에 유용한 칼슘 유사 작용성 화합물은 그 일례로서 유럽 특허 제 933 354 호 및 제 1 235 797 호 ; 국제 공개 제 WO 01/34562 호, 제 WO 93/04373 호, 제 WO 94/18959 호, 제 WO 95/11221 호, 제 WO 96/12697 호, 제 WO 97/41090 호 ; 미국 특허 제 5,688,938 호, 제 5,763,569 호, 제 5,962,314 호, 제 5,981,599 호, 제 6,001,884 호, 제 6,011,068 호, 제 6,031,003 호, 제 6,172,091 호, 제 6,211,244 호, 제 6,313,146 호, 제 6,342,532 호, 제 6,362,231 호, 제 6,432,656 호, 제 6,710,088 호, 제 6,908,935 호 및 미국 특허 출원 공개 제 2002/0107406 호에 개시된 것들을 포함한다.
특정 실시형태에 있어서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 다음 화학식 I 의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 중에서 선택한다 : 화학식 I
Figure 112007065860556-PCT00003
이 식에서, X2 가 3-t-부틸 라디칼이 아닌 경우에, X 1 및 X 2 는 동일하거나 또는 상이할 수 있으며, 각각의 X1 및 X2 는 CH3, CH3O, CH3CH2O, Br, Cl, F, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 아세톡시 및 아세틸 라디칼 중에서 선택한 라디칼이거나, 또는 X1 중 2 개가 함께 융합된 시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한 구조체를 형성하거나, 또는 X2 중 2 개가 함께 융합된 시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한 구조체를 형성하고 ; n 은 0 내지 5 이고 ; m 은 1 내지 5 이며 ; 알킬 라디칼은 포화 및 불포화된 선형, 분지형 및 고리형 C1-C9 알킬기, 디히드로인돌일 및 티오디히드로인돌일기, 및 2-, 3- 및 4-피페리딘일기 중에서 선택한 적어도 하나의 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬 라디칼 중에서 선택한 것이다.
칼슘 유사 작용성 화합물은 또한 다음 화학식 II 의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 중에서 선택할 수 있다 : 화학식 II
Figure 112007065860556-PCT00004
이 식에서, R2 가 메틸이고, p 는 0 이며, R6 이 치환되지 않은 페닐일 때, R1 은 2,4-디할로페닐, 2,4-디메틸페닐, 2,4-디에틸페닐, 2,4,6-트리할로페닐 또는 2,3,4-트리할로페닐이 아닌 경우에는, R 1 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이고 ; R 2 는 알킬 또는 할로알킬이고 ; R 3 은 H, 알킬 또는 할로알킬이고 ; R 4 는 H, 알킬 또는 할로알킬이며 ; 각각의 R 5 는 독립적으로 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 할로겐, -C(=O)OH, -CN, -NRdS(=O)mRd, -NRdC(=O)NRdRd, -NRdS(=O)mNRdRd 및 -NRdC(=O)Rd 중에서 선택한 것이고 ; R 6 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이며 ; 각각의 R a 는 독립적으로 H, 알킬 또는 할로알킬이고 ; 각각의 R b 는 독립적으로, 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노 및 니트로 중에서 선택한 3 개 이하의 치환기로 각각 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는 헤테로시클일알킬이며 ; 각각의 R c 는 독립적으로, 각각 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 할로알킬, 페닐 또는 벤질이고 ; 각각의 R d 는 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는 헤테로시클일알킬이며, 여기에서 상기 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 및 헤테로시클일알킬은 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노, 니트로, Rb, -C(=O)Rc, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, -NRaS(=O)nRc 및 -S(=O)nNRaRa 중에서 선택한 0, 1, 2, 3 또는 4 개의 치환기로 치환된 것이며 ; m 은 1 또는 2 이고 ; n 은 0, 1 또는 2 이며 ; p 는 0, 1, 2, 3 또는 4 이다. 이들 화합물들은 본원에 참고문헌으로 인용된 공개 미국 특허 출원 제 20040082625 호에 상세히 기술되어 있다.
본 발명의 하나의 양상에서, 화학식 II 의 화합물은 다음 화학식을 가질 수 있다 :
Figure 112007065860556-PCT00005
.
본 발명의 특정 실시형태에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 다음 화학식 III 의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염 중에서 선택할 수 있다 :
Figure 112007065860556-PCT00006
이 식에서,
Figure 112007065860556-PCT00007
는 이중 또는 단일 결합을 나타내고 ; R 1 은 Rb 이고 ; R 2 는 C1 -8 알킬 또는 C1 -4 할로알킬이고 ; R 3 은 H, C1 -4 할로알킬 또는 C1 -8 알킬이고 ; R 4 는 H, C1 -4 할로알킬 또는 C1 -4 알킬이며 ;
R 5 는 각각의 경우에 있어 독립적으로 H, C1 -8 알킬, C1 -4 할로알킬, 할로겐, -OC1 -6 알킬, -NRaRd 또는 -NRdC(=O)Rd 이고 ; X 는 -CRd=N-, -N=CRd-, O, S 또는 -NRd- 이고 ;
Figure 112007065860556-PCT00008
가 이중 결합일 때, Y 는 =CR6- 또는 =N- 이고, Z 는 =CR7- 또는 -N= 이며 ;
Figure 112007065860556-PCT00009
가 단일 결합일 때, Y 는 -CRaR6- 또는 -NRd- 이고, Z 는 -CRaR7- 또는 -NRd- 이며 ; R 6 은 Rd, C1 -4 할로알킬, -C(=O)Rc, -OC1 -6 알킬, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, 시아노, 니트로, -NRaS(=O)mRc 또는 -S(=O)mNRaRa 이고 ; R 7 은 Rd, C1 -4 할로알킬, -C(=O)Rc, -OC1 -6 알킬, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, 시아노, 니트로, -NRaS(=O)mRc 또는 -S(=O)mNRaRa 이고 ; 또는 R6 및 R7 은 함께 0, 1, 2 또는 3 개의 N 원자와 S 및 O 중에서 선택한 0, 1 또는 2 개의 원자를 포함하는 포화 또는 불포화된 3- 내지 6-원자 다리(bridge)를 형성하며, 여기에서 상기 다리는 R5 중에서 선택한 0, 1 또는 2 개의 치환기로 치환되고, R6 및 R7 이 벤조 다리(benzo bridge)를 형성할 때, 이 벤조 다리는 N 및 O 중에서 선택한 1 또는 2 개의 원자를 포함하는 3- 또는 4-원자 다리로 추가로 치환될 수 있으며, 상기 다리는 C1 -4 알킬 중에서 선택한 0 또는 1 개의 치환기로 치환되며 ; R a 는 각각의 경우에 있어 독립적으로 H, C1 -4 할로알킬 또는 C1 -6 알킬이고 ; R b 는 각각의 경우에 있어 독립적으로, 페닐, 벤질, 나프틸이거나, 또는 O 및 S 중에서 선택한 2 개 이하의 원자와 함께, N, O 및 S 중에서 선택한 1, 2 또는 3 개의 원자를 포함하는 포화 또는 불포화된 5- 또는 6-원자 고리로 이루어진 헤테로사이클이며, 여기에서 상기 페닐, 벤질 또는 헤테로사이클은 C1 -6 알킬, 할로겐, C1 -4 할로알킬, -OC1 -6 알킬, 시아노 및 니트로 중에서 선택한 0, 1, 2 또는 3 개의 치환기로 치환되고 ; R c 는 각각의 경우에 있어 독립적으로 C1 -6 알킬, C1 -4 할로알킬, 페닐 또는 벤질이고 ; R d 는 각각의 경우에 있어 독립적으로 H, C1 -6 알킬, 페닐, 벤질이거나, 또는 O 및 S 중에서 선택한 2 개 이하의 원자와 함께 N, O 및 S 중에서 선택한 1, 2 또는 3 개의 원자를 포함하는 포화 또는 불포화된 5- 또는 6-원자 고리로 이루어진 헤테로사이클이며, 여기에서 상기 C1 -6 알킬, 페닐, 벤질, 나프틸 또는 헤테로사이클은 C1 -6 알킬, 할로겐, C1 -4 할로알킬, -OC1 -6 알킬, 시아노 및 니트로, Rb, -C(=O)Rc, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, -NRaS(=O)mRc 및 -S(=O)mNRaRa 중에서 선택한 0, 1, 2, 3 또는 4 개의 치환기로 치환된 것이며 ; m 은 1 또는 2 이다.
상기 화학식 III 의 화합물은 본원에 참고문헌으로 인용된 미국 특허 출원 제 20040077619 호에 상세히 기술되어 있다.
하나의 양상에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 N-(3-[2-클로로페닐]-프로필)-R-α-메틸-3-메톡시벤질아민 HCl(화합물 A)이다. 다른 양상에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 N-((6-(메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비 페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민(화합물 B)이다.
본 발명의 방법에 유용한 칼슘 유사 작용성 화합물에는 전술한 칼슘 유사 작용성 화합물 뿐만 아니라, 이들의 입체이성질체, 거울상 이성질체, 다형체, 수화물 및 상기한 것들의 약학적으로 허용가능한 염이 포함된다.
본 발명에 유용한 칼슘 유사 작용성 화합물은 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 이러한 염들로는 다음의 것들이 포함되나, 이것으로만 한정되지 않는다 : 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 중황산염, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트, 디글루코네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로아이오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락테이트, 말레이트, 만델레이트, 메탄술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 팔모에이트, 펙티네이트, 과황산염, 2-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 황산염, 타르트레이트, 티오시아네이트, 토실레이트, 메실레이트 및 운데카노에이트. 본 발명의 화 합물이 카르복시기와 같은 산성 작용기를 포함하는 경우, 이 카르복시기에 적합한 약학적으로 허용가능한 염은 당해 분야의 숙련자들에게 널리 공지되어 있으며, 예시하면 알칼리, 알칼리 토금속, 암모늄, 4 차 암모늄 양이온 등이 이에 포함된다. “약리학적으로 허용가능한 염”의 또다른 예에 대해서는 후술 내용 및 문헌 Berge 등의 J. Pharm . Sci. 66: 1(1977)을 참조한다. 본 발명의 특정 실시형태에서, 하이드로클로라이드의 염 및 메탄술폰산의 염이 사용될 수 있다.
본 발명의 일부 양상에서, 칼슘-수용체 활성 화합물은 시나칼셋, 즉 N-[1-(R)-(1-나프틸)에틸]-3-[3-(트리플루오로메틸)페닐]-1-아미노프로판, 시나칼셋 HCl 및 시나칼셋 메탄술포네이트 중에서 선택할 수 있다. 시나칼셋 HCl 및 시나칼셋 메탄술포네이트 같은 칼슘 유사 작용성 화합물은 무정형 분말, 결정형 분말 및 이들의 혼합물과 같은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 결정형 분말은 다형체(polymorphs), 유사다형체 (psuedopolymorphs), 결정 습성(crystal habits), 입자 조밀도(micromeretics) 및 입자 형태를 포함한 형태로 존재할 수 있다.
투여를 위해, 본 발명의 화합물은 통상 목적하는 투여 경로에 적합한 1 종 이상의 보조제와 병용한다. 상기 화합물은 락토스, 수크로스, 전분 분말, 알카노산의 셀룰로스 에스테르류, 스테아르산, 활석, 스 테아르산 마그네슘, 산화 마그네슘, 인산 및 황산의 나트륨 및 칼슘 염류, 아카시아, 겔라틴, 알긴산 나트륨, 폴리비닐-피롤리딘 및/또는 폴리비닐 알콜과 혼합하여 통상적으로 투여하기 위한 정제 또는 캡슐로 만들 수 있다. 대안으로, 본 발명의 화합물은 식염수, 물, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수유, 땅콩유, 면실유, 참기름, 트라가칸스 검 및/또는 각종 완충제에 용해시킬 수도 있다. 그밖의 다른 보조제와 투여 양식은 약학 분야에 널리 공지되어 있다. 담체 또는 희석제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트 같은 시간 지연 물질을 단독으로, 또는 왁스 또는 당해 분야에 널리 공지된 기타 다른 물질과 함께 포함할 수도 있다.
약학적 조성물은 고형(과립, 분말 또는 좌약 포함) 또는 액형(예, 용액, 현탁액 또는 유탁액)으로 조제할 수도 있다. 상기 약학적 조성물은 멸균과 같은 통상의 약학적 공정으로 처리될 수 있으며/있거나 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 완충제 등과 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.
고형의 경구 투여용 제형으로는 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립이 포함될 수 있다. 상기한 고형의 제형에서, 활성 화합물은 적어도 하나의 수크로스, 락토스 또는 전분 같은 불활성 희석제와 혼합할 수 있 다. 상기 제형은 또한 정상적인 실시 시에, 불활성 희석제 이외에 다른 부가적인 물질, 예를 들면 스테아르산 마그네슘 같은 윤활제를 포함할 수도 있다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에서, 제형은 또한 완충 제제를 포함할 수도 있다. 정제 및 환제는 부가적으로 장용성 코딩제를 사용하여 조제할 수 있다.
액형의 경구 투여용 제형은 물과 같이 당해 분야에서 보편적으로 사용되는 불활성 희석제를 포함하는 약학적으로 허용가능한 유탁액, 용액, 현탁액, 시럽 및 일릭서제를 포함할 수 있다. 상기한 조성물은 또한 습윤제, 감미제, 향미제 및 방향제와 같은 보조제를 포함할 수도 있다.
본원에 기재된 조성물에서 칼슘 수용체-활성 화합물의 치료학적 유효량의 범위는 실험대상 당 칼슘 유사 작용성 화합물 약 1 ㎎ 내지 약 360 ㎎ 이고, 예를 들어 약 5 ㎎ 내지 약 240 ㎎ 또는 약 20 ㎎ 내지 약 100 ㎎ 이다. 일부 양상에서, 조성물내 시나칼셋 HCl 또는 기타 다른 칼슘 유사 작용성 화합물의 치료학적 유효량은 약 5 ㎎, 약 15 ㎎, 약 20 mg, 약 30 ㎎, 약 50 ㎎, 약 60 ㎎, 약 75 ㎎, 약 90 ㎎, 약 120 ㎎, 약 150 ㎎, 약 180 ㎎, 약 210 ㎎, 약 240 ㎎, 약 300 ㎎ 또는 약 360 ㎎ 중에서 선택할 수 있다.
실험대상에게 칼슘 유사 작용성 화합물을 단독으로 투여하는 것도 가능하겠지만, 투여되는 화합물은 일반적으로 약학적 조성물 내에서 활성 성분으로서 존재하게 된다. 즉, 본 발명의 약학적 조성물은 치료학적 유효량의 적어도 1 종의 칼슘 유사 작용성 화합물 또는 유효 투여량의 적어도 1 종의 칼슘 유사 작용성 화합물을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, “유효 투여량”이란 1 회 투여량, 수회 투여량 또는 부분 투여량으로 제공시에, 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물을 제공하는 용량을 이른다. 따라서, 유효 투여량의 본 발명의 칼슘 유사 작용성 화합물은 유효량보다 적은 양, 유효량과 동일한 양 또는 유효량보다 많은 양의 화합물 ; 예를 들면 유효량의 화합물 투여를 위해 정제, 캡슐 등과 같은 둘 또는 그 이상의 단위 투여량이 요구되는 약학적 조성물 또는 대안적으로, 조성물의 일부분을 투여함으로써 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물이 투여되는 분말, 액제 등과 같은 수회 투여 약학적 조성물을 포함한다.
대안적으로, 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물 투여를 위해 정제, 캡슐 등과 같은 둘 또는 그 이상의 단위 투여량이 요구되는 약학적 조성물은 예를 들어 개별 실험대상에 대한 유효 투여량을 확인하고, 잠재적인 부작용에 대한 개별 실험대상의 과민성을 줄이고, 개별 실험대상에게 투여되는 1 종 이상의 다른 치료제의 효과적인 투여의 재적응 또는 감소를 가능케 하기 위해 하나 또는 그 이상의 주기(즉, 1 회/1 일 투여 및 2 회/1 일 투여) 동안 유효량 보다 적게 투여될 수 있다.
본원에 기재된 약학적 조성물의 유효 투여량 범위는 단위 제형으로부터 약 1 ㎎ 내지 약 360 ㎎ 이고, 예를 들어 단위 제형으로부터 약 5 ㎎, 약 15 ㎎, 약 30 ㎎, 약 50 ㎎, 약 60 ㎎, 약 75 ㎎, 약 90 ㎎, 약 120 ㎎, 약 150 ㎎, 약 180 ㎎, 약 210 ㎎, 약 240 ㎎, 약 300 ㎎ 또는 약 360 ㎎ 이다.
본 발명의 일부 양상에서, 본원에 기재된 조성물은 혈관 석회화의 치료 또는 예방을 위해 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 시나칼셋 HCl 과 같은 칼슘 유사 작용성 화합물은 조성물의 전체 중량 대비 약 1 중량 % 내지 약 70 중량 %, 예를 들어 약 5 중량 % 내지 약 40 중량 %, 약 10 중량 % 내지 약 30 중량 % 또는 약 15 중량 % 내지 약 20 중량 % 범위의 양으로 존재할 수 있다.
본 발명의 조성물은 칼슘 유사 작용성 화합물 이외에 1 종 이상의 유효성분들을 포함할 수도 있다. 부가적인 유효성분은 다른 칼슘 유사 작용성 화합물이거나 또는 상이한 치료 활성을 가진 유효성분일 수 있다. 상기한 부가적인 유효성분의 일례로는 비타민류 및 이의 유사체, 예를 들어 비타민 D 및 이의 유사체(칼시트리올, 알파칼시돌, 독세칼시페롤, 막사칼시톨 및 파리칼시톨 같은 비타민 D 스테롤류 포함), 항생제, 란탄 카보네이트, 지질 저하제, 예를 들면 LIPITOR®, 항고혈압제, 소염제(스테로이드성 및 비-스테로이드성), 전-염증 사이토킨의 억제제(ENBREL®, KINERET®) 및 심혈관제가 포함된다. 병용 투여시에, 상기 치료제들은 동시 또는 다른 시점에 제공되는 별도의 조성물로서 제형화될 수 있거나, 또는 상기 치료제들은 단일 조성물로서 제공될 수 있다.
병용 치료의 하나의 양상에서, 본 발명의 조성물은 비타민 D 스테롤류 및/또는 RENAGEL® 과 함께 사용할 수 있다. 하나의 양상에서, 본 발명의 조성물은 비타민 D 스테롤류 및/또는 RANEGEL® 투여 전에 투여할 수 있다. 다른 양상에서, 본 발명의 조성물은 비타민 D 스테롤류 및/또는 RENEGEL® 과 동시에 투여할 수도 있다. 또 다른 양상에서, 본 발명의 조성물은 비타민 D 스테롤류 및/또는 RENEGEL® 투여 후에 투여할 수도 있다. 본 발명의 병용 치료법으로 질환 증상을 치료하기 위한 투여 처방은 환자의 유형, 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태, 질환 중증도, 투여 경로 및 사용되는 특정 화합물의 종류를 비롯 한 각종 요인들에 따라 선택되며, 따라서 이는 광범위하게 달라질 수 있다.
IV. 혈관 석회화의 평가
혈관 석회화의 검출 및 측정 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 하나의 양상에서, 석회화 측정 방법으로는 혈관 내 칼슘-인 침착 정도를 검출 및 측정하는 직접적인 방법이 포함된다.
하나의 양상에서, 혈관 석회화를 측정하는 직접적인 방법으로는 단순 필름 X 선 촬영술(plain film roentgenography), 관상 동맥 조영술(coronary arteriography), 디지털 감산 형광투시술(digital subtraction fluoroscopy)을 비롯한 형광투시술 ; 영화 투시 촬영술(cinefluorography) ; 일반, 나선형 및 전자 빔 컴퓨터 단층촬영술(computed tomography) ; 혈관 내 초음파술(IVUS) ; 자기 공명 영상술 ; 및 경흉부(transthoracic) 및 경식도(transesophageal) 심장 초음파술(echocardiography) 같은 체내 영상화 방법이 포함된다. 형광투시술 및 EBCT 가 비침투적으로 석회화를 검출하는데 가장 보편적으로 사용되는 기술인데 반해, 영화 투시 촬영술과 IVUS 는 혈관 성형술 (angioplasty)에 앞서 특정 병변의 석회화 진단을 위해 관상동맥 중재술 시술자에 의해 시행된다.
하나의 양상에서, 혈관 석회화는 단순 필름 X 선 촬영술에 의해 검출할 수 있다. 이 방법의 장점은 필름의 이용가능성과 저렴한 비용에 있으나, 감도가 낮다는 단점이 있다(Kelley M. & Newell J. Cardiol Clin. 1: 575-595, 1983).
다른 양상에서, 형광투시술은 관상 동맥에서 석회화를 검출하는데 사용할 수 있다. 형광투시술은 중형 내지 대형의 석회화는 검출할 수 있으나, 소형의 석회 침착물을 식별하는 능력은 낮다(Loecker et al. J Am Coll Cardiol. 19: 1167-1172, 1992). 형광투시술은 입원 환자 및 외래 환자 세팅 모두에 널리 이용가능하며 비교적 비용도 저렴하지만, 몇 가지 단점을 가지고 있다. 감도가 하급 내지 중급 정도라는 점 이외에도, 검토된 장면의 수뿐 아니라 작업자의 기술 및 경험에 의해 칼슘의 형광 검출이 좌우된다. 다른 중요한 요인들로는 형광 장비의 다양성, 환자의 체질, 해부학적 구조 및 척추(vertebrae) 및 판막 고리(valve annuli) 같은 구조 내에서 석회화의 위치가 포함된다. 형광투시술에 의해서는, 칼슘의 정량화가 불가능하며, 보편적으로 문서화된 필름도 얻을 수 없다.
또 다른 양상에서, 혈관 검출은 일반 컴퓨터 단층 촬영술(CT)에 의해 검출할 수 있다. 칼슘은 x-선 빔을 감쇠시키기 때문에, 컴퓨 터 단층 촬영술(CT)은 혈관 석회화를 검출하는데 극도로 민감하다. 일반 CT 는 관상 동맥 석회화를 검출하는데 있어 형광투시술보다는 나은 성능을 가지는 것으로 여겨지지만, 스캔 시간이 느려서, 움직임 아티팩트 (motion artifact), 용적 평균화, 호흡 오기록 및 플라크 양의 정량화 불가능을 야기시키는 한계점이 있다(Wexler et al. Circulation 94: 1175-1192, 1996).
추가의 양상에서는, 일반 CT 에 비해 스캔 시간이 상당히 빠른 나선형 컴퓨터 단층 촬영술에 의해 석회화를 발견할 수 있다. 영역 중첩이 또한 칼슘 검출을 향상시킨다. 쉐메시 등의 보고에 따르면, 나선형 CT 에 의한 관상 동맥 칼슘 영상화가 폐색성 관상동맥 질환에 대한 혈관 조영술과 비교하여 91 % 의 감도 및 52 % 의 특이성을 가지는 것으로 발표되었다(Shemesh et al. Radiology 197: 779-783, 1995). 그러나 다른 이전의 자료에서는, 단축된 스캔 시간과 특별히 단일 나선형 CT 를 사용한 경우라도 심장 박동으로 인해 석회 침착물이 희미하게 보이고, 소형 석회화는 보이지 않을 수도 있음을 밝혀왔다(Baskin et al. Circulation 92(suppl I): I-651, 1995). 즉, 나선형 CT 는 석회화 검출에 있어 형광투시술과 일반 CT 보다는 우수한 것으로 인정된다. 이중-나선형 CT 스캐너는 높은 해상도와 박편화 능력 때문에, 관상 동맥 석회화 검출시 단일-나선형 스캐너에 비해 감도가 나은 것으로 보인다 (Wexler et al., 상기 문헌 참조).
다른 양상에서는, 혈관 석회화 검출을 위해 전자 빔 컴퓨터 단층 촬영술(EBCT)을 이용할 수 있다. EBCT 는 x-선을 발생시키는 표준 x-선 튜브가 아닌 전자 총과 고정상 텅스텐 “표적”을 사용하므로 스캐닝 시간이 매우 빠르다. 원래는 씨네(cine) CT 또는 초고속 CT 로 지칭되었던, 용어 EBCT 는 현대 나선형 스캐너가 초속 이하의 스캐닝 시간을 달성했기 때문에 지금은 표준 CT 스캔과 구분하기 위해 사용한다. 관상 동맥 칼슘을 검출하기 위해서는, 100 ms 내에 스캔 박편 두께가 3 mm 이어야 EBCT 영상이 얻어진다. 30 내지 40 개의 인접 축의 스캔이 테이블 이동간격(table incrementation)에 의해 얻어진다. 보통 1 또는 2 회의 분리된 호흡-정지 순서 중에 얻어진 스캔은 RR 간격의 80 % 시점, 심장 이완기 말기 시점 및 심방 수축기 이전 시점에 심전도 신호에 의해 유도되며 심장 박동의 효과를 최소화시킨다. 영상 취득 시간 단축은 심장 수축과 관련된 움직임 아티팩트를 거의 없애준다. 동맥주위 지방은 CT 밀도가 낮아 관상 동맥 내 혈액과 현저히 대비를 이루므로, 투명해진 관상 동맥은 EBCT 에 의해 용이하게 식별되는 반면에, 벽의 칼슘은 혈액 대비 높은 CT 밀도로 인해 명확하게 드러난다. 부가적으로, 스캐너 소프트웨어를 사용하면 칼슘 면적 및 밀도의 정량화가 가능해진다. X-선 감쇠 계수 또는 하운스필드(Hounsfield) 유니트에 서 측정된 CT 수치, 및 석회 침착물의 면적을 기준으로 임의의 평점 시스템이 고안되었다(Agatston et al. J Am Coll Cardiol. 15: 827-832, 1990). 관상동맥 칼슘에 대한 선별 연구는 스캐닝 시간으로 단 수초만을 필요로 하여 10 분 또는 15 분 이내로 완료할 수 있다. 전자 빔 CT 스캐너는 일반 또는 나선형 CT 스캐너에 비해 고가이며 비교적 적은 부위에만 이용가능하다.
하나의 양상에서는, 특히 관상동맥 죽상경화증에서 혈관 석회화를 검출하는데 혈관 내 초음파(IVUS)를 사용할 수 있다(Waller et al. Circulation 85: 2305-2310, 1992). 카테터(catheter)의 팁 위에 장착된 회전식 반사경을 구비한 변환기를 사용하면, 심장 도관술 중에 관상 동맥의 단면 영상을 수득하는 것이 가능하다. 초음파도(sonogram)는 동맥 내강에 관한 것뿐 아니라 동맥 벽의 두께와 조직 특징에 관한 정보까지도 제공한다. 석회화는 그림자 진 과에코 부위(hyperechoic area)로 보이며 ; 섬유성 비석회 플라크는 그림자 없는 과에코 부위로 보인다(Honye et al. Trends Cardiovasc Med. 1: 305-311, 1991). IVUS 사용시 단점은 다른 영상화 방식과 달리, 침투성이며 현재는 선택적 관상 동맥 조영술과 병행하여서만 수행된다는 점과 관상 동맥의 제한된 부위만을 보여준다는 것이다. 침투성이기는 하지만, 이 기술은 관상 동맥 조영 시 정상 소견을 보이는 환자에게서 죽상경화성과의 연루 여부를 나타낼 수 있어 풍선 혈관 성형술에 앞서 협착 병변의 형태적 특징 규명과 죽종 제거술(atherectomy) 장치의 선택에 도움을 준다(Tuzcu et al. J Am Coll Cardiol. 27:832-838, 1996).
다른 양상에서, 혈관 석회화는 자기 공명 영상술(MRI)에 의해 측정할 수 있다. 그러나, MRI 의 관상 동맥 석회화 검출 능력은 다소 제한적이다. 미세석회화는 다량의 연 조직(soft tissue)을 포함하는 복셀(voxel)의 신호 강도를 거의 변화시키기 않기 때문에, 이러한 칼슘 퇴적물에서의 전체 대비는 낮다. 그러므로, 소량의 석회화는 MRI 검출이 어려우며, 관상 동맥 석회화 검출에 대한 MRI 관련 보고서나 예상 역할은 전무하다(Wexler et al., 상기 문헌 참조).
다른 양상에서, 혈관 석회화는 승모판 및 대동맥판(mitral and aortic valvular)의 석회화 검출에 특히 민감한 기술인, 경흉부(표면) 심장 초음파술에 의해 측정할 수 있으나 ; 관상 동맥의 가시화는 이용가능한 외이창 (external acoustic window)에 제한이 있기 때문에 드문 경우에서만 문서로 제공된다. 경식도 심장 초음파술은 종종 관상 동맥 근위부를 가시화할 수 있어 널리 이용되고 있는 방법이다(Koh et al. Int J Cardiol. 43: 202-206, 1994; Fernandes et al. Circulation 88: 2532-2540, 1993).
다른 양상에서, 혈관 석회화는 반 코사 방법(Van Kossa method)에 의해 체외에서 평가할 수 있다. 이 방법은 은 이온이 용액 중에서 전기화학 계열상 개별 위치에 따라 탄산염 또는 인산염에 의해 치환될 수 있다는 원리에 의거한다. 호은성(argentaffin) 반응은 실재 광화학적 반응으로, 강한 가시광선 또는 자외선으로부터 활성화 에너지가 공급된다. 조직 탄산염 또는 인산염 이온의 입증가능한 형태는 예외없이 칼슘 이온과 결합하므로, 이 방법은 조직 칼슘 침착 부위를 입증하는 것으로 간주할 수 있다.
석회화를 직접 측정하는 기타 다른 방법으로는 면역형광 염색법 및 밀도측정법이 포함되지만, 이것으로만 한정되지 않는다. 다른 양상에서는, 혈관 석회화를 평가하는 방법으로, 혈관 석회화의 결정인자 및/또는 위험 인자들을 측정하는 방법이 포함된다. 이러한 인자로는 혈청 내 인, 칼슘 및 칼슘 x 인 산물, 부갑상선 호르몬(PTH), 저-밀도 리포 단백질 콜레스테롤(LDL), 고-밀도 리포 단백질 콜레스테롤(HDL), 트리글리세라이드류 및 크레아티닌의 수치가 포함되지만, 이것으로만 한정되지 않는다. 상기한 인자들을 측정하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 혈관 석회화를 평가하는 기타 다른 방법으로는 골 형성 인자들을 평가하는 방법이 있다. 이러한 인자로는 다음과 같은 것들이 포함된다 : 골-특이적 알칼리성 포스파타제(BSAP), 오스테오칼신(OC), 제 I 형 콜라겐의 카르복시 말단 프로펩티드(PICP) 및 제 I 형 콜라겐의 아미노 말단 프로펩티드(PINP) 같은 골 형성 표지자 ; 제 I 형 콜라겐의 가교된 C-텔로펩티드(ICTP), 타르트레이트-내성 산 포스파타제, TRACP 및 TRAP5B, 콜라겐 가교의 N-텔로펩티드(NTx) 및 콜라겐 가교의 C-텔로펩티드(CTx) 같은 혈청 골 재흡수 표지자 ; 및 하이드록시프롤린, 유리 및 전체 피리디놀린류(Pyd), 유리 및 전체 데옥시피리디놀린류(Dpd), 콜라겐 가교의 N-텔로펩티드(NTx) 및 콜라겐 가교의 C-텔로펩티드(CTx) 같은 뇨중 골 재흡수 표지자.
V. 치료 방법
하나의 양상에서, 본 발명은 개체에서 혈관 석회화를 억제, 감소 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 개체에게 치료학적 유효량의 본 발명의 칼슘 유사 작용성 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 하나의 양상에서, 본 발명의 화합물 투여는 세포외성 기질 수산화인회석 결정 침착물의 형성, 성장 또는 침착을 지연 또는 반전시킨다. 본 발명의 다른 양상에서는, 본 발명의 화합물 투여로 세포외성 기질 수산화인회석 결정 침착물의 형성, 성장 또는 침착이 예방된다.
본 발명의 방법은 죽상경화성 석회화, 중막성 석회화 및 혈관 석회화에 의해 특징지어지는 기타 다른 증상들을 예방 또는 치료하는데 사용 할 수 있다. 하나의 양상에서, 혈관 석회화는 만성 신부전 또는 말기 신장 질환과 관련된 것일 수 있다. 다른 양상에서는, 혈관 석회화가 투석 전, 후 또는 요독증과 관련된 것일 수 있다. 추가의 양상에서, 혈관 석회화는 제 I 형 진성 당뇨병 또는 제 II 형 진성 당뇨병과 관련된 것일 수 있다. 또 다른 양상에서는, 혈관 석회화가 심혈관계 질병과 관련된 것일 수 있다.
하나의 양상에서, 유효량의 칼슘 유사 작용제 투여는 대동맥 석회화를 유발시키지 않으면서 혈청 내 PTH 를 감소시킬 수 있다. 다른 양상에서는, 칼슘 유사 작용제의 투여로 혈청 내 크레아티닌 수치를 감소시키거나 또는 혈청 내 크레아티닌 수치의 상승을 예방할 수 있다. 다른 양상에서, 칼슘 유사 작용제의 투여는 부갑상선 증식증을 약화시킬 수 있다.
칼슘 유사 작용제는 단독으로 또는 비타민 D 스테롤류 및/또는 RENAGEL® 같은 혈관 석회화 치료용 기타 다른 약물과 병용하여 투여할 수 있다. 비타민 D 스테롤류로는 칼시트리올, 알파칼시돌, 독세칼시페롤, 막사칼시톨 또는 파리칼시톨이 포함될 수 있다. 하나의 양상에서, 칼슘 유사 작용성 화합물은 비타민 D 스테롤류 투여 전 또는 후에 투여할 수 있다. 다른 양상에서, 칼슘 유사 작용제는 비타민 D 스테롤류와 공동-투여할 수 있다. 본 발명의 방법은 혈관 조직에 미치는 칼시트리올의 무기질화 효과를 약화시키고자 실시할 수 있다. 하나의 양상에서 본 발명의 방법은 혈청 내 칼슘, 인 및 Pa x P 산물의 수치를 증가시키는 칼시트리올의 효과를 반전시키고, 그럼으로써 혈과 석회화를 방지 또는 억제시키기 위해 사용할 수 있다. 다른 양상에서는, 혈청 내 크레아티닌 수치의 안정화 또는 감소에 본 발명의 방법을 사용할 수 있다. 하나의 양상에서는, 질환으로 인한 크레아티닌 수치 증가 이외에, 칼시트리올 같은 비타민 D 스테롤류를 사용한 치료에 의한 또 다른 크레아티닌 수치 증가가 있을 수 있다.
부가적으로, 칼슘 유사 작용제는 수술 및 비-수술 치료와 병행하여 투여할 수 있다. 하나의 양상에서, 본 발명의 방법은 투석과 병행하여 실시할 수 있다.
하기 실시예들은 본 발명을 더욱 상세히 설명하기 위해 제공된 것으로, 그 범위를 제한하는 것으로 간주해서는 안 된다.
실시예 1
본 실시예는 N-(3-[2-클로로페닐]-프로필)-R-α-메틸-3-메톡시벤질아민 HCl(화합물 A)이 대동맥 석회화를 유발시키지 않으면서 이차성 부갑상선 기능 항진증(hyperparathyroidism; HPT)을 수반하는 요독증에 걸린 쥐에게서 혈청 PTH 를 저하시키고, 혈관 조직에 미치는 칼시트리올의 석회화 효과를 약화시킴을 입증하기 위한 것이다.
동물
체중이 250 g 인 수컷 비스타(Wistar) 쥐를 코도바 대학(the University of Cordoba; 스페인에 소재함)내 동물 사육 시설로부터 구매하였다. 이 쥐들은 12 시간/12 시간 광/암 주기에서 사육하면서 정상 식단에 근접한 자유식(ad libitum)으로 섭생시켰다(칼슘 = 0.9 %, 인 = 0.6 %). 실험 프로토콜은 코도바 대학(스페인에 소재함) 내 동물 연구소 부설 윤리 위원회가 검토, 승인하였으며, 모든 동물들을 국립 의료 연구소 협회에 의해 제정된 실험 동물 관리 규정 및 국립 과학 학회에 의해 마련된 실험 동물 관리 안내서에 따라 온정으로 돌보았다.
5/6 신적출술
본 연구에서 사용된 CKD 의 설치류 모델에게, 원래의 기능 신장을 5/6 감소시키는 2-단계 절차로 이루어지는 5/6 신적출술(5/6 Nx)을 시행하였다. 1 단계에서는, 동물들을 크실라진(xylazine; 5 mg/kg, 복강내 투여) 및 케타민(ketamine; 80 mg/kg, 복강내 투여)을 사용하여 마취시키고, 좌측 복부의 중-측방 피부를 5-8 mm 절개하여 좌측 신장을 노출시켰다. 좌측 신 동맥을 육안 확인하고 3 개의 분지 중 2 개를 단단히 결찰한 후, 신장 경색을 검사하고 신장을 복막강 내부 해부학적 중립 위치로 복귀시켰다. 복벽과 피부 절개선을 봉합하고 쥐를 우리 안으로 갖다 놓았다. 회복 1 주일 후, 동물을 재마취시키고, 우측 복부의 중-측방 피부를 5-8 mm 절개하였다. 우측 신장이 노출되면, 낭을 제거한 후, 신장 족경(renal pedicle)을 조여 결찰하고 신장을 제거하였다. 결찰된 족경을 해부학적 중립 위치에 복귀시키고 복부와 피부 절개선을 봉합용 재료로 봉합하였다. 우리에서 동물이 회복되도록 하였다. 신장 조작 없이 동일 절차로 동물에게 겉보기 수술(sham-operated)을 시행하였다.
실험 스케쥴이 첨부한 도 1 에 도시되어 있다. 2 차 수술 후, 식단을 칼슘 함량은 감소시키고(0.6 %) 인 함량은 증가시킨(0.9 %) 식단으로 변경하였다. 쥐들을(정상적인 체중 기준선 분포를 기준으로) 다음의 6 개 실험군으로 무작위 분류하였다 : 겉보기-수술군(n = 13)(대조군으로 사용), 5/6 Nx + 비히클(식염수) 투여군(n = 10), 5/6 Nx + 칼시트리올(격일 80 ng/kg 복강내 투여 ; Calcijex, Abbot) 투여군(n = 10), 5/6 Nx + 화합물 A(1 일 3 mg/kg 피하 투여 ; 미국 캘리포니아 사우전드 오크스에 소재하는 Amgen 에서 입수) 투여군(n = 10) 또는 5/6 Nx + 칼시트리올(80 ng.kg) 및 화합물 A(1.5 mg/kg) 병용 투여군(n = 10). 14 일간 상기 치료를 계속하였다. 쥐들을 대동맥 천자에 의해 살생하고 최종 약물 투여 24 시간 후에 일반 마취(나트륨 티오펜탈 복강내 투여)하에 방혈(exsanguination)시켰다.
혈액 화학분석
치료 기간 말기에 복부 대동맥으로부터 화학 분석용 혈액을 채취하였다. 이온화된 칼슘 수치 측정용 혈액은 헤파린처리된 주사기에 채혈하여 시바 코닝(Ciba-Corning) 634 ISE Ca++/pH 분석기(잉글랜드에 소재하는 Ciba-Corning Essex 에서 입수)를 사용하여 즉시 분석하였다. 이후, 원심분리에 의해 혈장을 분리시키고 분석 때까지 -70℃ 에서 보관하였다. 쥐 PTH(1-34) 면역방사계측(immunoradiometric) 분석용 키트(캘리포니아 샌클러멘터에 소재하는 Immunotopics 에서 입수)를 사용하여 사용 설명서에 따라 PTH 수치를 정량하였다. 혈청 내 크레아티닌, 인 및 전체 칼슘은 분광측정기(spectrophotometry; 미국 미주리 세인트 루이스에 소재하는 Sigma Diagnostics 에서 입수)에 의해 측정하였다.
혈관 석회화의 체외 평가
살생 후, 복부 대동맥을 절단하여 두 부분으로 분류하였다. 한 부분은 10 % 완충 포르말린 중에서 고착시키고 이후 절단하여 폰 코사 방법(the von Kossa method)에 의해 석회화를 위해 염색하였다. 다른 부분은 10 % 포름산 중에서 미네랄 제거를 수행하였으며, 문헌 [Price et al Arterioscler Thromb Vasc Biol 20: 317-27, 2000]에 기술된 방법에 따라 상청액 중 동맥 조직 칼슘 및 인 함량을 측정하였다.
통계
수치들은 평균치 ± 표준 오차(SE)로 표시하였다. 두 개의 다른 실험군에 대한 평균치간의 편차는 t 테스트에 의해 결정하였으며 ; 3 또는 그 이상의 실험군에 대한 평균치간의 편차는 ANOVA 에 의해 평가하였다. P < 0.05 를 유의한 것으로 간주하였다.
크레아티닌
겉보기 수술한 쥐들의 평균 혈청 크레아티닌 농도는 0.53 ± 0.02 mg/dl 이었다. 예상대로, 모든 5/6 Nx 쥐들은 약물 치료 전 유의적으로(P < 0.05) 높은 크레아티닌 수치(0.83 ± 0.04 내지 0.89 ± 0.03 mg/dl)를 나타냈으며, 실험군간 유의적 편차는 없었다. 칼시트리올 치료 결과, 다른 5/6 Nx 실험군에 비해 혈청 내 크레아티닌 수치(1.05 ± 0.07 mg/dl)에 추가의 유의적(P < 0.05) 증가가 나타났다. 칼시트리올과 화합물 A 의 병용 치료는 화합물 A 또는 비히클(부형제라고도 함)-치료한 5/6 Nx 동물과 비교하였을 때, 크레아티닌 수치(0.93 ± 0.05 mg/dl)를 유의적으로 상승시키지 않았다. 칼시트리올과 함께 화합물 A 를 포함시키는 것이 혈청 내 크레아티닌 수치에서 칼시트리올 매개된 증가를 감소시켰다.
혈청 생화학적 파라미터
혈청 내 이온화된 칼슘, 인 및 PTH 의 수치는 첨부하는 도 2 내지 도 4 에 도시되어 있다. 혈청 내 이온화된 칼슘의 수치는 5/6 Nx 실험군 및 겉보기 수술군(1.21 ± 0.01 mmol/l 및 1.23 ± 0.01 mmol/l)에서 유사하게 나타났다. 화합물 A 1.5 mg/kg(1.20 ± 0.02 mmol/l) 또는 화합물 A 3 mg/kg(1.22 ± 0.02 mmol/l)으로 치료한 쥐들의 혈청 내 이온화된 칼슘 수치는 5/6 Nx 비히클-치료군(1.21 ± 0.01 mol/l)과 상이하지 않았다. 그러나, 칼시트리올을 단독 또는 화합물 A 와 병용하여 치료한 결과, 혈청 내 이온화된 칼슘의 수치(각각 1.28 ± 0.02 mmol/l 및 1.26 ± 0.01 mmol/l)가 5/6 Nx 비히클-치료군 또는 화합물 A 단독-치료군과 비교하였을 때, 유의적으로(P < 0.05) 높게 나타났다(도 2 참조).
혈청 내 인의 수치(도 3 참조)는 겉보기 수술군(6.0 ± 0.7 mg/dl)과 비히클(6.5 ± 0.4 mg/dl), 화합물 A 1.5 mg/kg(6.6 ± 0.3 mmol/dl) 또는 3 mg/kg(6.9 ± 0.4 mmol/dl)으로 치료한 5/6 Nx 동물군 간에 차이가 없었다. 칼시트리올만을 투여받은 동물군은 비히클-치료한 5/6 Nx 동물군과 비교하였을 때, 혈청 내 인의 수치(10.2 ± 0.9 mmol/dl)에서 유의적(P < 0.05) 상승이 나타났다. 화합물 A 와 칼시트리올의 병용 투여군에서는 혈청 내 인의 수치(8.7 ± 0.7 mmol/dl)가 감소되는 경향이었으나, 비히클-치료한 5/6 Nx 동물군에 비해 여전히 유의적으로(P < 0.05) 높았다.
혈청 내 PTH 농도는 겉보기-수술한 동물군(39.3 ± 7.9 pg/ml)과 비교하였을 때, 5/6 Nx 쥐(118.7 ± 27.7pg/ml)에서 유의적으로(P < 0.05) 증가하였다. 사용된 모든 치료군에서 혈청 내 PTH 농도가 겉보기 수술한 쥐와 유의적으로 차이가 없는 수치로 감소하였다. 그러나, 칼시트리올과 화합물 A 의 병용 투여 결과, 화합물 A 1.5 mg/kg 단독 투여(73.5 ± 12.8 pg/ml)에 비해 유의적으로(P < 0.05) 더욱 효과적인 PTH 억제(13.8 ± 2.6 pg/mg)가 나타났다(도 4 참조).
대동맥 미네랄 함량
칼시트리올 투여로 나타난 혈청 내 미네랄 수치의 증가에 대한 선에서, 칼시트리올로 치료한 5.6 Nx 쥐는 비히클-치료한 5/6 Nx 동물군(2.3 ± 0.2 mg/g 조직)에 비해 유의적으로(P = 0.009) 높은 대동맥 칼슘 함량(4.2 ± 1.1 mg/g 조직)을 나타냈다(도 5 참조). 그러나 화합물 A 치료군은 비히클-치료한 5/6 Nx 군(P = 0.882) 또는 겉보기-수술한 동물군(P = 0.777)과 유사한 대동맥 칼슘 함량을 나타냈다(도 5 참조). 놀랍게도, 혈청 내 칼슘 수치에 대한 칼시트리올과 화합물 A 의 병용 투여의 비유의적 효과를 볼 때, 대동맥 칼슘의 칼시트리올-유도된 증가는 화합물 A 1.5 mg/kg 과의 병용 치료에 의해 유의적으로(P = 0.002) 약화되었다(도 5 참조).
추가 분석 결과, 겉보기 수술한 동물군의 인 함량이 비히클-치료한 5/6 Nx 동물군에서의 인 함량과 상이하지 않았다(도 6 참조). 칼시트리올로 치료한 5/6 Nx 동물군은 대동맥 조직에서 인 함량(2.1 ± 1 mg/g 조직)을 유의적으로(P = 0.01) 상승시켰으나, 화합물 A(1.5 또는 3 mg/kg)는 다른 결과를 나타냈다(도 6 참조). 대동맥 인의 칼시트리올-유도 증가는 화합물 A 1.5 mg/kg 과의 병용 치료에 의해 유의적으로(P = 0.013) 약화되었다(도 6 참조).
대동맥의 석회화는 폰 코사 염색법에 의해 검사하였다(도 7 참조). 겉보기 수술군, 비히클 또는 화합물 A-치료한 5/6 Nx 군 어디에서도 대동맥 내 미네랄 침착물이 관찰되지 않았다. 그러나 칼시트리올 단독 치료한 5/6 Nx 쥐의 기질에서는 눈에 띄는 폰 코사 염색이 검출되었다(도 7A 참조). 칼시트리올에 화합물 A 1.5 mg/kg 을 부가한 치료가 대동맥 석회화 발생을 방지하였다는 점은 흥미롭다(도 7B 참조).
혈관 석회화의 감퇴
전술한 바와 같이 5/6 Nx 한 동물을 사용하여 14 일 동안 고 함량 인 식단(0.6 % Ca; 1.2 % P)을 섭생시켰다. 동물들을 4 개의 실험군(A, B, C 및 D; n = 실험군별 4-5 마리씩)으로 분류하고, 연구 과정(28 일) 중에 하나의 실험군(A)에게는 비히클(식염수 0.2 ml, 복강내 투여)을 제공하는 반면, 나머지 3 개의 실험군(B, C 및 D)에게는 칼시트리올(격일 80 ng/kg 씩 복강내 투여)을 제공하였다. 14 일 째에, 두개의 실험군(C 및 D)은 정상 식단(Ca 0.9 %; P 0.6 %)으로 전환하고, 실험군 C 에게는 화합물 A(3 mg/kg 씩 구강내 투여)를 투여하는 반면, 시험군 D 에게는 매일 비히클(수중 10 % 캡티졸 0.5 ml 씩 구강내 투여)을 제공하였다. 나머지 실험군(A 및 B)은 계속 고함량 인 식단을 유지하였으며 연구 과정(28 일) 중에 칼시트리올 또는 비히클을 투여하였다. 28 일 째에, 모든 동물을 살생하고(CO2), 대동맥 내 P 및 Ca 함량(mg/g 조직) 측정을 위해 전술한 바와 같이 대동맥을 제거하였다.
28 일 전 기간에 걸처 고함량 인 식단과 칼시트리올이 제공된 동물군(실험군 B)은 고함량 인 식단과 비히클을 제공한 쥐(시험군 A)와 비교하였을 때, 대동맥 내 칼슘 및 인 함량에서 유의적(p < 0.05) 증가가 나타났다(도 8 참조). 이는 칼시트리올이 대동맥 내 칼슘 및 인 함량 의 증가(혈관 석회화)를 매개함을 의미한다.
고함량 인 식단(실험군 B)에서 정상 함량 인 식단으로 식단을 변경한 결과, 대동맥 내 칼슘 및 인 함량에서 다소 비-유의적인 감소가 유발되었다(실험군 D). 이는 저함량 인 식단이 혈관 석회화 과정의 진행을 저해 및/또는 반전시킬 수 있음을 암시한다(CRI 및 ESRD 환자들에게는 저함량 인 식단을 제안한다). 고함량 인 식단에서 정상 함량 인 식단으로 변경하고 칼시트리올을 제공하면서 연구 말기에 화합물 A 3 mg/kg 를 제공한 동물군(실험군 C)에서는 실험군 D 와 비교하였을 때, 대동맥 내 인 함량에서 유의적(p < 0.05) 감소와 낮은 대동맥 내 칼슘 함량이 나타났다. 이러한 결과는 확립된 혈관 석회화가 화합물 A 와 같은 칼슘 유사 작용제에 의해 반전될 수 있음을 암시한다.
실시예 2
본 실시예는 칼슘 유사 작용성 N-((6-(메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민(화합물 B)이 CKD 동물 모델에서 부갑상선(PT) 증식증을 약화시키고, 혈청 내 PTH 를 감소시키며, 대동맥의 혈관 석회화를 감소시킴을 입증하기 위한 것이다.
본 연구에서는 체중 300-350 g 의 수컷 스프래그-다우리(Sprague-Dawley) 쥐(Charles River Laboratories 에서 입수)를 사용하였다. 모든 동물에게는 연구 개시에 앞서 표준 실험실 식이(위스콘신 매디슨에 소재하는 Harlan Teklad 에서 입수)를 제공하였다. 표준 실험실 식이를 0.75 % 아데닌을 함유하는 표준 설치류 실험실 식이로 변경하였다. 동물들에게 사료와 물을 자유식으로 제공하였다. 동물 프로토콜은 암젠 인코포레이티드(캘리포니아 사우전드 오크스에 소재)의 실험 동물 관리 위원회에 의해 승인되었다.
동물들에게 21 일 동안 아데닌 함유 식이를 제공하였으며, 이온화된 칼슘, PTH, BUN, 크레아티닌 및 인 수치의 기준선 측정을 위해 아데닌 식단 개시에 앞서 동물들을 사전-채혈하였다(도 9 참조).
PTH 및 혈청의 화학적 프로필을 위한 혈액 채취
동물에게 아데닌 섭생 또는 화합물 B 나 비히클을 투여하기 전에, 혈청 내 P, Ca, BUN, PTH 및 크레아티닌의 기준선 측정을 실시하였다. 마취(O2 중 2 % 이소플루란) 상태 하에서 쥐의 안구동(orbital sinus)으로부터 채혈을 하였다. 채혈 시점 O 이후, 동물에게 아데닌 함유 식이를 제공하고, 21 일 동안 매일 화합물 B(3 mg/kg 구강내 투여) 또는 비 히클(수중 12 % 캡티졸)을 투여하였다. 연구 말기(21 일)에, 동물을 살생하고, 조직 생리학적 분석용으로 대동맥과 부갑상선을 제거하였다. 혈액의 화학분석용 및 PTH 측정용으로 혈액을 채취하였다. 살생에 앞서, 혈중 이온화된 칼슘 수치 측정용으로, 마취(O2 중 2 % 이소플루란) 하에서 복부 대동맥으로부터 헤파린처리된 모세관으로 혈액을 채취하고 시바-코닝 634 ISE Ca++/pH 분석기(매사추세츠 메드필드에 소재하는 Ciba-Corning Diagnostics Corp 에서 입수)를 사용하여 분석하였다. 이와는 별도로, PTH, 혈중 요소 질소(BUN), 혈청 내 크레아티닌 및 인의 수치 측정용으로, 혈액을 SST(혈병 활성화제) 브랜드 혈액관(뉴저지 프랭클린 레이크에 소재하는 BD 에서 입수)으로 채취하고 응혈되도록 하였다. 혈청을 제거하여 분석 때까지 -70 ℃ 에서 보관하였다. 쥐 PTH(1-34) 면역방사계측(immunoradiometric) 분석용 키트(캘리포니아 샌클러멘터에 소재하는 Immutopics 에서 입수)를 사용하여 사용 설명서에 따라 PTH 수치를 정량하였다. BUN, 크레아티닌 및 인 수치는 혈액 화학 분석기(Olympus AU 400, 뉴욕 멜빌에서 입수)를 사용하여 측정하였다.
PCNA 의 면역조직화학적 분석
부갑상선 중량 및 증식 세포 핵 항원(PCNA) 면역화학법을 이용하여 증식증을 측정하였다. 살생 시에, 후두 기관 복합체(laryngo- tracheal complex)를 제거하여 Zn-완충 포르말린에 2-3 일간 보관한 후, 이를 70 % 알콜로 이전하고 손질하였다. 손질 시에, 갑상선으로부터 부갑상선을 절단해 내고 사토리우스(Sartorius) BP211D 저울(독일에 소재하는 Goettingen 에서 입수) 상에서 개별 중량을 계측하기 전에, 무-보풀 킴 수건(lint-free Kim wipe; 조지아 로스웰에 소재하는 Kimberly Clark Corp. 에서 입수) 상에서 물기를 제거하고 건조시켰다. 이후, 부갑상선을 파라핀 매설 처리 하였다. 매설 후, 5 μm 절편으로 절단하고 이를 충전된 슬라이드(펜실베이니아 웨스트 체스터에 소재하는 VWR Scientific 에서 입수) 상에 위치시켰다. PCNA 염색용 키트(캘리포니아 사우스 샌프란시스코에 소재하는 Zymed Laboratories 에서 입수)를 사용하여 사용 설명서에 따라 상기 절편에 대해 면역 염색을 시행하였다.
상기 부갑상선 절편의 중앙 부위 위에 일련의 0.01 mm2 그리드(눈금 있는 그래티클을 사용하여 초기 측정한 면적)를 포함하는 면적-측정용 그래티클을 올려 놓고 부갑상선의 면적을 측정하였다. 대략 동일 수준의 개별 부갑상선으로부터 절편을 채취하였다. 조직 샘플을 라이츠 래이버럭스(Leitz Laborlux) 현미경에서 100x 로 관찰하고, 부갑상선 조직 위에 놓인 그리드의 수를 계수하였다. 이 후, 그리드 수에 0.01 mm2 를 곱셈하여 부갑상선의 전체 면적을 측정한 후, 그리드 절편 면 적 내 PCNA 양성 세포의 수를 계수하여 이를 PCNA 양성 세포수/mm2 로 표시했다. 슬라이드를 암호화하고, 치료군 배정을 모르는 관찰자가 부갑상선 증식 정량을 수행하도록 하였다.
대동맥 혈관 석회화에 대한 방법
연구 말기에, 동물들을 살생하고(CO2), 대동맥을 제거하여 전술한 바와 같이 P, Ca, BUN 및 크레아티닌 측정용으로 혈액을 채취하였다. 대동맥을 수거하여 10 % 중성 완충 포르말린 중에서 3-7 일간 고정시킨 후, 70 % 에탄올로 이전하였다. 다음의 파라미터를 사용하여 루나 픽시머스 2 밀도계(Lunar PIXImus; 위스콘신 매디슨에서 입수) 상에서 골밀도(BMD; g/cm2) 분석을 수행하였다 : 실행 시간 4 분. 그 결과를 루나 픽스머스 소프트웨어 버전 2.0 을 사용하여 분석하였다.
3 주간 화합물 B 투여 결과, 비히클-치료한 동물에 비해 PCNA-양성 세포 수가 유의적으로(p < 0.01) 감소되었다(도 11 참조). 이와 마찬가지로, 부갑상선 중량 또한 비히클 치료한 동물과 비교하였을 때, 화합물 B-치료한 동물에서 유의적으로 감소되었다(도 12 참조).
도 13 은 화합물 B 의 투여가 비히클 치료한 동물군과 비교하였을 때, 혈청 내 PTH 수치를 유의적으로(p < 0.0001; ANOVA/Fisher's protected least squares differences post-hoc) 감소시킴을 입증한 것이다.
도 14 는 아데닌 식단을 섭생한 동물의 화합물 B 투여가 동일 식단의 비히클 치료한 동물과 비교하여 동맥의 골밀도를 75 % 감소시킴을 입증한 것이다.
도 15 는 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도 CKD 모델에서 혈중 요소 질소(BUN) 및 크레아티닌에 미치는 화합물 B 의 효과를 나타낸 것이다. 간단하게 설명하면, 아데닌 치료 3 주 후(post), BUN 과 크레아티닌 모두의 수치가 비히클(n = 4) ; 화합물 B(n = 7) 치료 전에 비해 유의적으로(p < 0.05) 증가하였다(도 10). 비히클로 치료한 대조군(n = 4)과 비교하였을 때, BUN 에 미치는 화합물 B(n = 7)의 치료 효과는 유의하지 않았다(p > 0.05). 그러나, 화합물 B(n = 7)는 비히클(n = 4) 치료한 동물과 비교하여 크레아티닌 수치 감소(p < 0.05)를 중개하였다.
도 16 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도 CKD 에서 이온화된 Ca 에 미치는 화합물 B 의 효과를 입증한 것이다. 혈청 내 이온화된 칼슘(iCa)은 치료 전(pre)에 비해 아데닌 치료 3 주 후(post) 유의적으로( p < 0.05) 감소하였다 ; ANOVA ; 비히클(치료 전 n = 4 ; 치료 후 n = 3) ; 화합물 B(치료 전 n = 8 ; 치료 후 n = 6). 화합물 B(n = 6) 치료가 비히클 치료(n = 3)에 비해 혈청 내 iCa 를 유의적으로(p = 0.004) 감소시켰다.
도 17 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도 CKD 에서 혈청 내 인 성분에 미치는 화합물 B 의 효과를 입증한 것이다. 혈청 내 인 성분(P)은 치료 전(pre)에 비해 아데닌 치료 3 주 후(post) 유의적으로( p < 0.05) 증가하였다 ; ANOVA ; 비히클(n = 4) ; 화합물 B(n = 7). 비히클 치료한 동물과 비교하였을 때, 혈청 내 P 의 수치에 미치는 화합물 B 의 치료 효과는 유의하지 않았다(p > 0.05).
도 18 은 혈관 석회화를 가진 아데닌-유도 CKD 에서 혈청 내 Ca 성분에 미치는 화합물 B 의 효과를 입증한 것이다. 혈청 내 칼슘 성분(Ca)은 치료 전(pre)에 비해 아데닌 치료 3 주 후(post) 유의적으로( p < 0.05) 감소하였다 ; ANOVA ; 비히클(n = 4) ; 화합물 B(n = 7). 화합물 B 치료가 비히클 치료에 비해 전체 혈청 내 칼슘 성분을 유의적으로(p = 0.001) 감소시켰다 ; ANOVA ; 비히클(n = 4) ; 화합물 B(n = 7).
실시예 3
본 실시예는 칼슘 유사 작용성 N-((6-(메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민(화합물 B)이 요독증 동물의 대동맥 조직에서 Ca 및 P 함량의 파리칼시톨-중개된 상승을 유의적으로 저하시킴을 입증하기 위한 것이다.
동물
0.6 % Ca 및 1.2 % P 식단을 섭생시킨 비스타 쥐(200-250 g)를 5/6 신적출하거나(5/6 Nx) 또는 겉보기-수술하였다. 수술 후 1 일째 부터 쥐를 다음과 같이 치료하였다 : 겉보기 수술 + 비히클, 5/6 Nx + 비히클, 5/6 Nx + 파리칼시톨(240 ng/kg 48 시간 마다 복강내 투여), 5/6 Nx + 파리칼시톨 + 화합물 B(1.5 mg/kg 48 시간 마다 피하 투여) 또는 5/6 Nx + 화합물 B(1.5 mg/kg 48 시간 마다 피하 투여). 14 일 후, 쥐를 마취하고 살생하였다. 흉부 대동맥을 제거하고 Ca 및 P 함량 측정 과정을 수행하였다. 살생 시에 혈액을 채취하여 혈청 내 PTH, 이온화된 Ca, P 및 크레아티닌을 측정하였다. 그 결과가 하기 표 1 에 요약되어 있다.
Figure 112007065860556-PCT00010
5/6 Nx + 비히클
5/6 Nx 는 혈청 내 크레아티닌의 증가(p < 0.05)를 중개하여 만성 신부전과 일치되는 결과를 나타냈다. 겉보기 수술한 비히클 동물 대비 5/6 Nx 비히클 동물에서 이차성 부갑상선 기능 항진증의 모든 특징인, 혈청 내 이온화된 Ca 의 유의적(p < 0.05) 감소와 혈청 내 P 및 PTH 의 유의적(p < 0.05) 증가가 관찰되었다.
5/6 Nx + 파리칼시톨
5/6 Nx 쥐에 파리칼시톨을 투여한 결과, 5/6 Nx + 비히클에 비해 혈청 내 PTH 수치가 유의적으로(p < 0.05) 증가하였다. 혈중 이온화된 칼슘, 크레아티닌 또는 혈청 내 P 수치는 5/6 Nx + 비히클에 비해 변화가 없었다. 파리칼시톨은 비히클로 치료한 5/6 Nx 동물에 비해 대동맥의 Ca 및 P 함량을 유의적으로(p < 0.05) 증가시켰다(표 1 참조).
5/6 Nx + 화합물 B
5/6 Nx 쥐에 화합물 B 를 투여한 결과, 비히클 치료한 5/6 Nx 동물에 비해 혈청 내 PTH 수치가 유의적으로(p < 0.05) 감소하였다. 혈중 이온화된 칼슘, 크레아티닌 또는 혈청 내 P 수치는 5/6 Nx + 비히클에 비해 변화가 없었다. 마찬가지로, 화합물 B 의 투여는 비히클 치료한 겉보기 수술 또는 5/6 Nx 동물과 비교하였을 때, 대동맥의 Ca 또는 P 함량을 유의적으로 변화시키지 않았다(표 1 참조).
5/6 Nx + 파리칼시톨 + 화합물 B
파리칼시톨 치료한 5/6 Nx 쥐에 화합물 B 를 투여한 결과, 파리칼시톨 치료한 5/6 Nx 쥐에 비해 대동물의 Ca 및 P 함량이 유의적으로(p < 0.05) 감소하였다. 화합물 B 투여에 의한 대동맥 Ca 및 P 함량의 감소는 비히클 치료한 겉보기 수술 대조군(정상 수치)과 유의적 차이가 없었다. 파리칼시톨과 화합물 B 의 병용 투여 결과, 파리칼시톨 또는 화합물 B-단독 치료한 5/6 Nx 쥐와 비교하였을 때, 혈청 내 PTH 수치가 유의적으로(p < 0.05) 추가 감소하였다. 화합물 B 와 파리칼시톨을 병용 치료한 동물에서 혈중 이온화된 칼슘, 크레아티닌 또는 혈청 내 P 수치는 5/6 Nx + 비히클에 비해 변화가 없는 것으로 나타났다(표 1 참조).
실시예 4
본 실시예는 칼슘 유사 작용성 N-((6-(메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민(화합물 B)이 연조직의 파리칼시톨 및 칼시트리올 중개된 석회화를 유의적으로 저하시킴을 입증하기 위한 것이다.
동물
0.6 % Ca 및 1.2 % P 식단을 섭생시킨 비스타 쥐(200-250 g)를 5/6 신적출하였다(5/6 Nx). 수술 후 1 일째 부터 쥐를 다음과 같이 치료하였다 : 5/6 Nx + 비히클, 5/6 Nx + 파리칼시톨(240 ng/kg 48 시간 마다 복강내 투여) 또는 칼시트리올(80 ng/kg 48 시간 마다 복강내 투여), 5/6 Nx + 파리칼시트롤 또는 칼시트리올 + 화합물 B(1.5 mg/kg 48 시간 마다 피하 투여) 또는 5/6 Nx + 화합물 B(1.5 mg/kg 48 시간 마다 피하 투여). 14 일 후, 쥐를 마취하고 살생한 다음 조직을 분리해내어 조직학적 검사 과정을 수행하였다(석회화 측정을 위한 폰 코사 염색 및 H&E 염색).
도 19(상단 패널 : A, B, C)는 5/6 Nx 쥐에게 칼시트리올을 투여한 결과, 어두운 조직 염색 반점에 의해 드러난 바와 같이 심장(A), 신장(B) 및 폐(C)에서 석회화가 증가하였음을 입증한 것이다.
도 19(하단 패널 : D, E, F)는 칼시트리올-치료한 5/6 Nx 쥐에게 화합물 B 를 투여한 결과, 어두운 조직 염색 반점의 감소로 알 수 있는 바와 같이 심장(C), 신장(E) 및 폐(F)에서 석회화가 감소하였음을 입증한 것이다.
도 20(상단 패널 : A)은 5/6 Nx 쥐에게 파리칼시톨을 투여한 결과, 어두운 조직 염색 반점에 의해 드러난 바와 같이 신장(A)에서 석회화가 증가하였음을 입증한 것이다.
도 20(하단 패널 : B)은 파리칼시톨-치료한 5/6 Nx 쥐에게 화합물 B 를 투여한 결과, 어두운 조직 염색 반점의 감소로 알 수 있는 바와 같이 신장(B)에서 석회화가 감소하였음을 입증한 것이다.
본 명세서에 인용된 모든 문헌, 특허 및 특허 출원들은 각각의 개별 문헌 또는 특허 출원에 대해 참고 문헌으로 인용된 것이라는 구체적이고 개별적인 표시가 없을지라도 본원에 참고 문헌으로 인용된 것이다. 상기 발명은 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 기술하였으나, 당해 기술 분야의 숙련자는 본 발명의 교시를 고려한다면 첨부하는 청구 범위의 사상 또는 범주로부터 벗어나지 않는 범위에서 특정 변경 및 변형이 이루어질 수 있음을 쉽게 파악할 것이다.

Claims (24)

  1. 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물(calcimimetic compound)을 실험대상에게 투여하여 상기 실험대상에서 혈관 석회화를 치료하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 혈관 석회화가 죽상경화성 석회화 (atherosclerotic calcification)임을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 혈관 석회화가 중막성 석회화(medial calcification)임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 만성 신부전을 앓고 있음을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 말기 신장 질환을 앓고 있음을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 투석전 상태임을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 요독증을 앓고 있음을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 제 I 형 진성 당뇨병 또는 제 II 형 진성 당뇨병을 앓고 있음을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 심혈관계 장애를 앓고 있음을 특징으로 하는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 실험대상이 사람임을 특징으로 하는 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물이 다음 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 방법
    화학식 I
    Figure 112007065860556-PCT00011
    이 식에서,
    X2 가 3-t-부틸 라디칼이 아닌 경우에,
    X 1 및 X 2 는 동일하거나 또는 상이할 수 있으며,
    각각의 X1 및 X2 는 CH3, CH3O, CH3CH2O, Br, Cl, F, CF3, CHF2, CH2F, CF3O, CH3S, OH, CH2OH, CONH2, CN, NO2, CH3CH2, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 아세톡시 및 아세틸 라디칼 중에서 선택한 라디칼 이거나, 또는 X1 중 2 개가 함께 융합된 시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한
    구조체(entity)를 형성하거나, 또는 X2 중 2 개가 함께 융합된
    시클로지방족 고리, 융합된 방향족 고리 및 메틸렌 디옥시 라디칼 중에서 선택한 구조체를 형성하고;
    n 은 0 내지 5 이고;
    m 은 1 내지 5 이며;
    알킬 라디칼은 포화 및 불포화된 선형, 분지형 및 고리형 C1-C9 알킬기, 디히드로인돌일 및 티오디히드로인돌일기, 및 2-, 3- 및 4- 피페리딘일기 중에서 선택한 적어도 하나의 기로 임의로 치환된 C1-C3 알킬 라디칼 중에서 선택한 것이다.
  12. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물이 N-(3-[2-클로로페닐]-프로필)-R-α-메틸-3-메톡시벤질아민 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물이 다음 화학식 II 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 방법
    화학식 II
    Figure 112007065860556-PCT00012
    이 식에서,
    R2 가 메틸이고, p 는 0 이며, R6 이 치환되지 않은 페닐일 때, R1 은 2,4-디할로페닐, 2,4-디메틸페닐, 2,4-디에틸페닐, 2,4,6-트리할로페닐 또는 2,3,4-트리할로페닐이 아닌 경우에는,
    R 1 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이고;
    R 2 는 알킬 또는 할로알킬이고;
    R 3 은 H, 알킬 또는 할로알킬이고;
    R 4 는 H, 알킬 또는 할로알킬이며;
    각각의 R 5 는 독립적으로 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 할로겐, -C(=O)OH, -CN, -NRdS(=O)mRd, -NRdC(=O)NRdRd, -NRdS(=O)mNRdRd 및 -NRdC(=O)Rd 중에서 선택한 것이고;
    R 6 은 아릴, 치환된 아릴, 헤테로시클일, 치환된 헤테로시클일, 시클로알킬 또는 치환된 시클로알킬이며;
    각각의 R a 는 독립적으로 H, 알킬 또는 할로알킬이고;
    각각의 R b 는 독립적으로 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노 및 니트로 중에서 선택한 3 개 이하의 치환기로 각각 치환되거나 치환되지 않은 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는
    헤테로시클일알킬이며;
    각각의 R c 는 독립적으로 각각 치환되거나 치환되지 않은 알킬, 할로알킬, 페닐 또는 벤질이고;
    각각의 R d 는 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 또는 헤테로시클일알킬이며, 여기에서 상기 알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로시클일 및 헤테로시클일알킬은 알킬, 할로겐, 할로알킬, 알콕시, 시아노, 니트로, Rb, -C(=O)Rc, -ORb, -NRaRa, -NRaRb, -C(=O)ORc, -C(=O)NRaRa, -OC(=O)Rc, -NRaC(=O)Rc, -NRaS(=O)nRc 및 -S(=O)nNRaRa 중에 서 선택한 0, 1, 2, 3 또는 4 개의 치환기로 치환된 것이며;
    m 은 1 또는 2 이고;
    n 은 0, 1 또는 2 이며;
    p 는 0, 1, 2, 3 또는 4 이다.
  14. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물이 N-((6-메틸옥시)-4'-(트리플루오로메틸)-1,1'-비페닐-3-일)메틸)-1-페닐에탄아민 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염임을 특징으로 하는 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물이 시나칼셋 HCl 임을 특징으로 하는 방법.
  16. 제 1 항에 있어서, 사전에 상기 실험대상에게 비타민 D 스테롤을 투여함을 특징으로 하는 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 비타민 D 스테롤이 칼시트리올(calcitriol), 알파칼시돌(alfacalcidol), 독세칼시페롤(doxercalciferol), 막사칼시톨(maxacalcitol) 또는 파리칼시톨(paricalcitol)임을 특징으로 하는 방법.
  18. 제 16 항에 있어서, 상기 비타민 D 스테롤이 칼시트리올임을 특징으로 하는 방법.
  19. 제 16 항에 있어서, 상기 비타민 D 스테롤이 파리칼시톨임을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물을 비타민 D 스테롤 투여 전 또는 투여 후에 투여함을 특징으로 하는 방법.
  21. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물을 비타민 D 스테롤과 병용 투여함을 특징으로 하는 방법.
  22. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 칼슘 유사 작용성 화합물을 RENAGEL® 과 병용 투여함을 특징으로 하는 방법.
  23. 치료학적 유효량의 칼슘 유사 작용성 화합물을 실험대상에게 투여하여, 상기 실험대상에서 혈청 내 크레아니틴 수치를 감소시키는 방법.
  24. 제 23 항에 있어서, 상기 실험대상은 비타민 D 스테롤 투여에 의해 유발된 혈청 내 크레아티닌 수치 증가를 겪고 있음을 특징으로 하는 방법.
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