CN109985228A

CN109985228A - 拟钙剂及其使用方法

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Publication number: CN109985228A
Application number: CN201910103503.4A
Authority: CN
Inventors: S·沃尔特; G·贝尔; J·E·汤林森
Original assignee: Kai Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Kai Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2011-11-10
Filing date: 2012-11-12
Publication date: 2019-07-09
Also published as: US20160175383A1; US20140315809A1; EP2776129A1; MX355063B; JP2017160269A; JP6204369B2; US20170252397A1; MX2014005662A; AU2012335009A1; CN104168955A; CA2854911A1; JP2015502346A; AU2012335009B2; EP2776129B2; CA2854911C; HK1202086A1; WO2013071262A1; EP2776129B1

Abstract

本发明涉及拟钙剂及其使用方法。描述了用于治疗患有慢性肾病矿物质骨症或者其他导致原发性或继发性甲状旁腺功能亢进的病症的受试者的方法。该方法有效减少经历血液透析的患者中的血清甲状旁腺激素(PTH)水平和钙水平。本文描述的方法还有效减慢肾疾病的进展且保存肾功能。还提供了在所述方法中使用的组合物，并包含充当钙敏感受体(CaSR)激动剂的拟钙剂。

Description

拟钙剂及其使用方法

与相关申请的交叉参考

本申请是国际申请日为2012年11月12日的国际申请PCT/US2012/064717进入中国、申请号为201280066707.1的题为“拟钙剂及其使用方法”的发明专利申请的分案申请。本申请要求于2011年11月10日提交的美国临时申请号61/558,389的利益，所述美国临时申请整体引入本文作为参考。

对序列表的提及

序列表经由EFS以文本文件的形式电子提交，所述文本文件于2012年11月12日创建并命名为″632008022WO00.txt″(85,400字节)，其内容整体引入本文作为参考。

技术领域

本公开内容涉及拟钙剂、包含CaSR激动剂的药物组合物及其用于治疗患者的方法。

背景技术

钙稳态是身体通过其维持足够的钙水平的机制。该过程是高度调节的，并且涉及钙吸收、转运、在骨中贮存、在其他组织中沉积和排泄的复杂相互影响。PTH是血清钙水平的调节剂，并且通过经由骨再吸收过程增强来自骨的钙释放而作用于增加血液中的钙浓度；增加来自肾小管的钙再吸收；并且通过增加1，25-(OH)2维生素D(活性形式的维生素D)的产生而增强肠中的钙吸收。PTH还刺激来自肾的磷排泄，并且增加来自骨的释放。

PTH分泌通过钙敏感受体(CaSR)调节，所述CaSR是在甲状旁腺细胞的细胞表面上表达的G蛋白偶联受体，其检测细胞外钙离子(Ca²⁺)浓度中的小波动并且通过改变PTH的分泌来响应。通过Ca²⁺的CaSR活化在数秒至数分钟内抑制PTH分泌，并且这个过程可以通过受体的蛋白质激酶C(PKC)磷酸化进行调节。CaSR也在成骨细胞上和在肾中表达，在其中它调节肾Ca²排泄。

另外，PTH调节磷稳态。PTH刺激在顶膜(刷状缘膜)和基底外侧膜上的甲状旁腺激素受体1(PTHR1)。由于通过在刷状缘膜上的肾Na+/磷酸盐(NaPi-IIa)协同转运蛋白的内在化的减少，PTHR1刺激导致磷酸盐(Pi)的尿排泄中的增加。

PTH还涉及骨中的成骨细胞和破骨细胞调节。PTH通过增加钙的骨再吸收和肾吸收来增加血清Ca2+。PTH刺激成骨细胞产生RANK配体(RANKL)，其与RANK受体结合并活化破骨细胞，导致骨再吸收中的增加和血清Ca2+中的增加。骨保护素(OPG)是RANKL的诱饵受体，其阻断骨再吸收。骨质疏松症通过经由破骨细胞的骨再吸收和经由成骨细胞的骨形成过程之间的失衡引起。

人体含有大约1kg钙，其中99％位于骨中。在正常条件下，循环钙离子(Ca²⁺)紧密维持在约8-10mg/dL(即，2.25-2.5mmol/L；～600mg)的水平下。每天摄入大约1g元素钙(Ca²⁺)。在这个量中，大约200mg/天被吸收，并且800mg/天被排泄。另外，大约500mg/天由骨吸收释放或沉积到骨内。每天约10g Ca2+通过肾过滤，其中约200mg出现在尿中，并且剩余部分被再吸收。

高钙血症是血液中升高的钙水平。急性高钙血症可以导致胃肠道(厌食症、恶心、呕吐)；肾(多尿、烦渴)、神经肌肉(抑郁、意识混乱、木僵、昏迷)和心脏(心动徐缓、一度房室传导)症状。慢性高钙血症也与胃肠道(消化不良、便秘、胰腺炎)；肾(肾结石、肾钙质沉着症)、神经肌肉(虚弱)和心脏(高血压块(hypertension block)、洋地黄敏感性)症状相关。可以产生异常心律，并且短QT间期和宽大T波的EKG发现提示高钙血症。高钙血症可以是无症状的，其中症状最通常在高钙水平(12.0mg/dL或3mmol/l)下出现。严重高钙血症(超过15-16mg/dL或3.75-4mmol/l)视为医学急诊；在这些水平下，可以导致昏迷和心脏骤停。

高钙血症通常由甲状旁腺功能亢进引起，导致过度骨再吸收和升高水平的血清钙。在原发性散发性甲状旁腺功能亢进中，PTH由单一甲状旁腺腺瘤过度生产；较不常见地，多发性腺瘤或弥漫性甲状旁腺腺体增生可以是原因。增加的PTH分泌导致骨再吸收中的净增加，伴随Ca2+和磷酸盐(Pi)的释放。PTH还增强Ca2+的肾再吸收且抑制磷酸盐(Pi)的再吸收，导致血清钙中的净增加和磷酸盐中的降低。

当血清Ca2+水平中的降低刺激PTH分泌时，发生继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)。继发性甲状旁腺功能亢进的一个原因是慢性肾功能不全(也被称为慢性肾病或CKD)，例如在肾多囊性疾病或慢性肾盂肾炎中的那种，或慢性肾功能衰竭，例如血液透析患者(也被称为晚期肾病或ESRD)中的那种。过量PTH可以响应低钙血症而产生，所述低钙血症起因于低钙摄入、GI紊乱、肾功能不全、维生素D缺乏和肾高钙尿症。在长期继发性甲状旁腺功能亢进和低钙血症后，可以发生三发性甲状旁腺功能亢进。

CKD的特征在于肾功能的进行性丧失。国家肾脏基金会的肾脏疾病预后质量倡议(National Kidney Foundation′s Kidney Disease Outcomes Quality Initiative)(NKFKDOQI^TM)已将CKD定义为持续3个月或更久的肾损害或肾小球滤过率(GFR)＜60mL/分钟/1.73m²。肾损害可以表现为病理学异常或肾损害的标记，包括在血液或尿测试或成像研究中的异常。

两个最常见的CKD原因是高血压和糖尿病(1型和2型)。其他CKD原因包括肾小球肾炎、肾盂肾炎和多囊性疾病。另外，布洛芬和乙氨酚经过长时间段的使用可以导致痛觉缺失神经病变，CKD的另一个原因。

基于估计的GFR水平和尿蛋白的存在或不存在，KDOQI指南将CKD患者分成五个时期。1期患者具有肾损害和正常或高GFR(≥90mL/分钟/1.73m²)。2期患者具有在其GFR中具有轻度降低的肾损害(60-89mL/分钟/1.73m²)。3期患者具有适度降低的GFR(30-59mL/分钟/1.73m²)。4期患者具有严重降低的GFR(15-29mL/分钟/1.73m²)。5期患者具有肾衰竭(GFR≤15mL/分钟/1.73m²)。

1或2期中的患者通常不具有指示肾受损的任何症状，并且它们的状况通常未被诊断。然而，随着肾功能继续下降，过量尿及通常由肾排泄的其他含氮废物产物开始在血液中积累，导致被称为尿毒症的状况。3期中的患者更可能经历肾衰竭的并发症，例如高血压、贫血和/或早期骨丢失。4期中的患者具有晚期肾损害，并且心血管并发症是更可能的。肾衰竭也被称为晚期肾病(ESRD)在5期CKD中达到，并且随后为具有透析或肾移植的治疗选项的肾替代疗法。

慢性肾病矿物质骨症(CKD-MBD)是与CKD和ESRD相关的复杂病症，其中血液和骨矿物质稳态(钙和磷)以及维生素D代谢[1，25(OH)₂D]的损害导致过量PTH水平。这些改变在CKD中早期与肾功能的显著丧失结合开始，所述肾功能的显著丧失在3期和4期CKD患者中出现，并且随着CKD进展至ESRD而逐渐恶化。升高的PTH水平进一步恶化矿物质失衡(特别是钙和磷)，并且与多种器官系统中的病理效应关联，所述病理效应包括骨发育不全、血管钙化、左心室肥大和增加的心血管事件危险，其是这些患者中的发病率和死亡率(～66％5年死亡率)的最主要原因。

恶性肿瘤是非PTH介导的高钙血症的常见原因。恶性肿瘤的高钙血症是罕见但严重的癌症并发症，影响10％-20％的癌症患者，并且可以伴随实体瘤和白血病发生。该状况具有突然发生且具有极差的预后，具有仅六周的生存中值。生长因子(GF)调节甲状旁腺激素相关蛋白质(PTHrP)在肿瘤细胞中的产生。肿瘤细胞可以通过自分泌GF刺激以增加PTHrP的产生，导致增强的骨再吸收。转移至骨的肿瘤细胞也可以分泌PTHrP，其可以再吸收骨且释放另外的GF，所述GF依次又以旁分泌方式作用，以进一步增强PTHrP产生。

西那卡塞HCl经口施用的小分子拟钙剂在美国和欧洲批准用于治疗在诊断时在CKD患者中的SHPT和用于治疗具有甲状旁腺癌的患者中的高钙血症。肽拟钙剂也已得到描述(美国专利公开号2011/0028394和2009/0023652(两者均整体引入本文作为参考))。

本文描述的是用于给有此需要的对象施用拟钙剂(有时被称为CaSR激动剂)的方法。在一些实施方案中，拟钙剂根据剂量方案进行施用，所述剂量方案提供在减少有此需要的患者中的血清钙水平中的稳定和长期功效。

发明内容

在一个方面，本公开内容提供了用于在对象中提供延长的PTH抑制的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。通常，对象具有特征在于升高的PTH水平的疾病、病症或状况。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，对象具有CKD。在其他实施方案中，对象不具有CKD。在一些实施方案中，PTH抑制在拟钙剂的最后一个剂量后继续超过16小时。在一些实施方案中，PTH抑制在拟钙剂的最后一个剂量后继续超过48小时。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。

在一个实施方案中，对象患有尿毒症、甲状旁腺腺体增生、软组织钙化和/或肾功能不全。

在一个实施方案中，本公开内容提供了用于治疗对象中的慢性肾病矿物质骨症(CKD-MBD)的方法。

在一个实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在另一个实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。

在一个实施方案中，对象是透析前的。在另一个实施方案中，对象目前经历透析。

在一个实施方案中，对象已诊断有3期慢性肾病。在另一个实施方案中，对象已诊断有4期慢性肾病。

在另一个方面，本公开内容提供了用于减少对象中的甲状旁腺腺体增生的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。通常，对象具有特征在于升高的PTH水平或高钙血症的疾病、病症或状况。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，对象具有CKD。在其他实施方案中，对象不具有CKD。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在另一个方面，本公开内容提供了用于减少对象中的软组织钙化的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。通常，对象具有特征在于高钙血症的疾病、病症或状况。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，对象具有CKD。在其他实施方案中，对象不具有CKD。在一个实施方案中，血管钙化是动脉壁钙化。在一个实施方案中，血管钙化是主动脉钙化。在一些实施方案中，软组织钙化是肾实质钙化或血管钙化。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在另一个方面，本公开内容提供了用于减慢对象中的肾功能下降的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。在一个相关方面，本公开内容提供了用于保留或改善对象中的肾功能的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。通常，对象具有特征在于升高的血清肌酸酐水平的疾病、病症或状况。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，对象具有CKD。在其他实施方案中，对象不具有CKD。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在另一个方面，本公开内容提供了用于增加或保留对象中对正常生理学控制的甲状旁腺腺体应答性的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。通常，对象具有特征在于降低的甲状旁腺腺体应答性的疾病、病症或状况。在一些实施方案中，甲状旁腺腺体受体是增加的或保留的。在一些实施方案中，甲状旁腺腺体受体是CaSR。在一些实施方案中，甲状旁腺腺体受体是FGFR1。在一些实施方案中，甲状旁腺腺体受体是维生素D受体。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，对象具有CKD。在其他实施方案中，对象不具有CKD。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在另一个方面，本公开内容提供了用于减慢对象中的慢性肾病进展的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。在一个相关实施方案中，本公开内容提供了用于保留或逆转对象中的慢性肾病进展的方法，其包括给对象施用治疗有效剂量的拟钙剂。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在一个实施方案中，提供了用于在对象中提供延长的PTH抑制的方法，其包括给对象施用治疗有效量的拟钙剂。

在一个实施方案中，PTH抑制在拟钙剂的最后一个剂量后继续超过16小时。在另一个实施方案中，PTH抑制在拟钙剂的最后一个剂量后继续超过48小时。

在一个实施方案中，该方法包括提供具有相对于在施用前的血清PTH浓度降低对象中的PTH的活性的拟钙剂的第一个剂量(所述拟钙剂的第一个剂量有效)，并且在提供第一个剂量后48-96小时、48-76小时或40-65小时提供拟钙剂的后续剂量。在另一个实施方案中，第一个剂量在施用后30分钟内使血清PTH浓度有效降低至少约40％。在另外一个实施方案中，第一个剂量在施用后有效维持减少的血清PTH浓度至少40小时。

在一个实施方案中，施用包括肠胃外施用。在另一个实施方案中，施用包括每3天施用。

在一个实施方案中，施用在施用后有效维持减少的血清PTH浓度至少72小时。

在一个实施方案中，提供后续剂量包括提供肠胃外施用的后续剂量。

在一个实施方案中，提供后续剂量包括在提供第一个剂量后约3天提供后续剂量。

在一个实施方案中，拟钙剂的治疗有效剂量是约0.5-10mg/kg、约1-8mg/kg、约2-7mg/kg、约3-5mg/kg或约1-5mg/kg。在另一个实施方案中，化合物的剂量是约0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg、5.0mg/kg、6.0mg/kg、7.0mg/kg、8.0mg/kg、9.0mg/kg或10.0mg/kg。

在另一个方面，本公开内容提供了用于给对象施用拟钙剂的给药方案。在一些实施方案中，给药方案包括提供拟钙剂的第一个剂量，并且在提供第一个剂量后24-96小时提供拟钙剂的后续剂量。在一些实施方案中，对象具有继发性甲状旁腺功能亢进。在其他实施方案中，对象不具有继发性甲状旁腺功能亢进。在一些实施方案中，拟钙剂是肽。在一些实施方案中，拟钙剂是提供延长的PTH抑制的拟钙剂。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量有效降低对象中的PTH，其中所述降低是相对于在第一个剂量施用前的血清PTH浓度。在一个实施方案中，血清PTH浓度在拟钙剂施用后约20分钟(分钟)、25分钟、30分钟、35分钟或40分钟内降低至少约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％或约55％。在另一个实施方案中，第一个剂量在拟钙剂施用后约20分钟(分钟)、25分钟、30分钟、35分钟或40分钟内使血清PTH浓度有效降低约20％-50％、25％-50％、约25％-40％、约30％-50％、约35％-50％或约30％-45％。

在一个实施方案中，第一个剂量是在施用后使减少的血清PTH浓度有效维持至少约24小时、30小时、35小时、40小时、45小时、48小时、50小时或55小时的量。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量是约0.5-10mg/kg、约1-8mg/kg、约2-7mg/kg、约3-5mg/kg或约1-5mg/kg。在另一个实施方案中，化合物的剂量是约0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg、5.0mg/kg、6.0mg/kg、7.0mg/kg、8.0mg/kg、9.0mg/kg或10.0mg/kg。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量肠胃外、静脉内或经皮施用。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量在血液透析前施用。在另一个实施方案中，第一个剂量在血液透析前约60分钟、约30分钟、约15分钟或约5分钟施用。在另外一个实施方案中，第一个剂量在血液透析前约1-5分钟、约1-10分钟、约5-15分钟、约15-10分钟或约30-60分钟施用。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量在血液透析过程中施用。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量在血液透析完成后施用。在另一个实施方案中，第一个剂量在血液透析完成后约60分钟、约30分钟、约15分钟或约5分钟施用。在另外一个实施方案中，第一个剂量在血液透析完成后约1-5分钟、约1-10分钟、约5-15分钟、约15-10分钟、约30-60分钟、约0.5-1小时(小时)、约1-2小时、约1-3小时、约2-3小时或约3-4小时施用。

在一个实施方案中，拟钙剂的后续剂量在提供第一个剂量后约24小时-48小时、24小时-36小时、36小时-48小时、36小时-72小时、38小时-72小时或48小时-96小时。

在一个实施方案中，后续剂量每2天、3天或4天施用。

在一个实施方案中，拟钙剂的第一个剂量和/或后续剂量肠胃外、静脉内或经皮施用。

在一个实施方案中，治疗方案包括施用与第二种治疗试剂组合的拟钙剂。

在一个实施方案中，第二种治疗试剂是维生素D、维生素D类似物或盐酸西那卡塞。

在另一个实施方案中，拟钙剂不与西那卡塞竞争结合钙敏感受体。

在一个实施方案中，提供了包含式X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇的肽拟钙剂，其中X₁是包含含硫醇基团的亚单位；X₅是阳离子亚单位；X₆是非阳离子亚单位；X₇是阳离子亚单位；并且X₂、X₃和X₄中的至少一个、优选两个独立地是阳离子亚单位；并且其中拟钙剂具有降低甲状旁腺激素浓度的活性。

在一个实施方案中，拟钙剂是肽。

在一个实施方案中，甲状旁腺激素浓度中的降低是相对于在治疗前对象中的血液或血浆甲状旁腺激素浓度，用拟钙剂治疗的对象中的血液或血浆甲状旁腺激素浓度中的降低。在另一个实施方案中，甲状旁腺激素浓度中的降低在不存在组胺应答的情况下实现。

在另一个实施方案中，X₃和X₄是非阳离子的，而X₁、X₅、X₆和X₇是阳离子的。

在一个实施方案中，X₁亚单位是含硫醇氨基酸残基。在另一个实施方案中，X₁亚单位的硫醇基团是有机含硫醇部分。

在另一个实施方案中，当X₁亚单位是含硫醇氨基酸残基时，它选自L-半胱氨酸、D-半胱氨酸、谷胱甘肽、乙酰化(nacetylated)半胱氨酸、高半胱氨酸和聚乙二醇化半胱氨酸。

在另外一个实施方案中，有机含硫醇部分选自硫醇-烷基、或硫醇酰基部分例如3-巯丙基或3-巯基丙酰基、巯基丙酸、巯基乙酸、苄硫基或硫丙基。在另外一个实施方案中，有机含硫醇部分是巯基丙酸。

在另外一个实施方案中，X₁亚单位进行化学修饰，以包含乙酰基、苯甲酰基、丁基、或另一种氨基酸例如乙酰化β-丙氨酸。

在另外一个实施方案中，当X₁亚单位包含硫醇部分时，X₁亚单位通过共价键合与第二个硫醇部分连接。

在另一个实施方案中，式X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇由氨基酸残基的邻接序列(本文指定为(X_aa1)-(X_aa2)-(X_aa3)-(X_aa4)-(X_aa5)-(X_aa6)-(X_aa7)SEQ ID NO：1)或有机化合物亚单位(非氨基酸残基)序列构成。

在另一个实施方案中，氨基酸残基的邻接序列是L-氨基酸残基的邻接序列、D-氨基酸残基的邻接序列、L-氨基酸残基和D-氨基酸残基的混合物的邻接序列、或氨基酸残基和非天然氨基酸残基的混合物。

在另一个实施方案中，氨基酸残基的邻接序列连接至化合物以促进跨越细胞膜的转运。在另一个实施方案中，氨基酸残基的邻接序列连接至这样的化合物，其增强序列递送到一层或多层组织内或跨越一层或多层组织。

在另一个实施方案中，氨基酸残基的邻接序列包含在下述长度的氨基酸残基序列内：8-50个氨基酸残基、8-40个氨基酸残基、8-30个氨基酸残基或8-20个氨基酸残基。在另外一个实施方案中，氨基酸残基的邻接序列包含在下述长度的氨基酸残基序列内：8-19个氨基酸残基、8-18个氨基酸残基、8-17个氨基酸残基、8-16个氨基酸残基、8-15个氨基酸残基、8-14个氨基酸残基、8-13个氨基酸残基、8-12个氨基酸残基、8-11个氨基酸残基、8-10个氨基酸残基或8-9个氨基酸残基。

在另一个实施方案中，X₃亚单位是阳离子氨基酸残基。

在另一个实施方案中，X₂亚单位是非阳离子氨基酸残基，并且在另一个实施方案中，X₄亚单位是非阳离子氨基酸残基。在一个实施方案中，非阳离子氨基酸残基是D-氨基酸。

在另一个实施方案中，X₃和X₄是阳离子D-氨基酸残基。

在另一个实施方案中，X₅亚单位是D-氨基酸残基。

在另一个方面，在所需化合物的任一种中的邻接序列经由X₁亚单位中的含硫醇基团与第二种邻接序列共价附着。例如，第二种邻接序列可以与邻接序列相同(以形成二聚体)，或可以是不同的，如当附着至促进邻接序列跨越细胞膜转移的部分时的情况。

在另一个方面，提供了包含肽carrrar(SEQ ID NO：2)的拟钙剂，其中肽在其N末端残基处与Cys残基缀合。

在一个实施方案中，肽拟钙剂在N末端、C末端或两者处进行化学修饰。

在另一个实施方案中，肽拟钙剂的N末端通过乙酰化进行化学修饰，并且C末端通过酰胺化进行化学修饰。

在另一个实施方案中，肽拟钙剂是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

在一个实施方案中，拟钙剂肠胃外施用。在另一个实施方案中，拟钙剂经皮或皮下施用。

在本文描述的方面或实施方案的任一个中，考虑任何一种或多种序列从权利要求的范围中个别排除或去除。在某些实施方案中，个别或以任何组合的通过SEQ ID NO：162-182中的任何一个或多个鉴定的肽从请求保护的化合物、组合物和方法中排除。

附图说明

图1是显示在用以1mg/kg(IV)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)、以10mg/kg(PO)剂量的西那卡塞(cinacalcet)或盐水(IV)处理的5/6 Nx大鼠中，在最后一个剂量后6、16和48小时的PTH水平(从剂量前基线的％改变)的图。

图2A-B是已使用BrdU染色的组织切片的显微照片。切片是得自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)(图2A)处理的5/6 Nx大鼠和未经处理的对照(图2B)的甲状旁腺腺体组织。

图2C是提供BrdU染色的定量结果的图，比较得自经处理的和未经处理的5/6 Nx大鼠的组织切片中的BrdU阳性细胞数目。图2D是显示来自经处理的和未经处理的5/6 Nx大鼠的标准化甲状旁腺腺体重量的图。

图3A-B是使用von Kossa方法已就钙进行染色的组织切片的显微照片。切片是得自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的5/6 Nx大鼠(图3A)和给予媒介物的对照5/6Nx大鼠(图3B)的肾组织。

图3C是如通过原子发射光谱法测量的，提供来自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)处理的5/6 Nx大鼠(图2A)和未经处理的对照的主动脉和肾切片钙化的定量结果的曲线图。

图4是显示在用以0.3、1或3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或媒介物处理的5/6 Nx大鼠中，血清肌酸酐(sCr)水平中的改变百分比的图。

图5A-C各自包括已分别就CaSR、FGFR1和VDR染色的组织切片的显微照片，以及提供定量结果(总面积％)的图。切片是得自正常大鼠和用以3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或媒介物处理的5/6 Nx大鼠的甲状旁腺组织。

图6A是概括给药方案的示意图。图6B是显示根据图6A中概括的给药方案，在用以0.3、1和3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的5/6 Nx大鼠中，在1周洗脱期后的血浆PTH水平(pg/mL)的图。

图7是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，剂量前以及在处理2和4周后的PTH水平(pg/mL)的图。

图8是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的SCr(mg/dL)的图。

图9是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的血清磷(P)(mg/dL)的图。

图10是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的总Ca(mg/dL)的图。

图11是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的Ca和P产物的图。

图12是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)PTG重量的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的标准化甲状旁腺腺体重量(mg/kg体重)的图。

图13是显示与正常大鼠(无腺嘌呤)的那种相比较，在用以0.3和1mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)或媒介物(SC)处理的具有腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠中，在处理4周后的von Kossa得分(主动脉钙化)的图。von Kossa得分0指示未检测到钙化；1：0-20％钙化；2：20-40％钙化；3：40-60％钙化；4：60-80％钙化；5：＞80％钙化。

图14是在接受血液透析的具有SHPT的CKD-BMD对象中，作为时间(小时)的函数的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)水平(ng/ml)的图，所述对象接受作为单个IV推注(5、10、20、40或60mg)的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

图15是在接受血液透析的具有SHPT的CKD-BMD对象中，作为时间(小时)的函数的从血清iPTH基线的改变百分比的图，所述对象接受作为单个IV推注(5、10、20、40或60mg)的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂。

图16是在接受血液透析的具有SHPT的CKD-BMD对象中，作为时间(小时)的函数的校正钙(cCa)(mg/dL)的图，所述对象接受作为单个IV推注(5、10、20、40或60mg)的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂。

图17是作为时间的函数，作为剂量前基线值百分比的血清iPTH的图，其中血清样品在对象接受其下一个10mg剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)前立即获得(在“药谷”过程中)。

图18是通过用10mg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的四周治疗期，作为剂量前基线值百分比的iPTH平均改变百分比的图。

图19是得自对象的样品中的血清iPTH量的图，所述对象经过4周时期施用10mgAc-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)，随后为不施用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的4周随访期。

本主题可以通过参考本文包括的优选实施方案和实施例的下述详述更容易地理解。

具体实施方式

I.定义

在本申请内，除非另有说明，否则本申请的术语的定义和技术的举例说明可以在几个众所周知的参考文献的任何中发现，例如：Sambrook，J.，等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；Goeddel，D.，编辑，Gene Expression Technology，Methods in Enzymology，185，Academic Press，SanDiego，CA(1991)；“Guide to Protein Purification”in Deutshcer，M.P.，编辑，Methodsin Enzymology，Academic Press，San Diego，CA(1989)；Innis，等人，PCR Protocols：AGuide to Methods and Applications，Academic Press，San Diego，CA(1990)；Freshney，R.I.，Culture of Animal Cells：A Manual of Basic Technique，第2版，Alan Liss，Inc.New York，NY(1987)；Murray，E.J.，编辑，Gene Transfer and ExpressionProtocols，第109-128页，The Humana Press Inc.，Clifton，NJ and Lewin，B.，Genes VI，Oxford University Press，New York(1997)。

如本文使用的，除非另有说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数参考。例如，“一种”调节肽包括多种调节肽之一。

如本文使用的，当相对于在化合物施用前的血浆PTH浓度，化合物在施用于对象后降低血浆甲状旁腺激素(PTH)时，化合物具有“降低甲状旁腺激素水平的活性”或“PTH降低活性”。在一个实施方案中，PTH水平中的降低在化合物施用后一小时比在化合物施用前的PTH水平低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。

如本文使用的，“不存在组胺应答”或“缺乏组胺应答”意指在如本文描述的测定中体外测量的，产生组胺中的小于15倍、14倍、13倍、12倍、11倍、10倍、9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍或3倍增加的化合物剂量，其中倍数变化基于在与化合物一起温育前和在与化合物一起温育后15分钟的组胺水平进行测定。

如本文使用的，“对象”指人对象或动物对象。人对象还可以被称为“患者”。

如本文使用的，“治疗有效量”是产生所需疗效需要的量。例如，在治疗状况的方法中，治疗有效量是将抑制、降低或逆转状况发展的量。在一个方面，治疗有效量意指降低血清肌酸酐水平，或预防血清肌酸酐水平中的增加的拟钙剂化合物的量。在另一个方面，治疗有效量意指减少血管或其他软组织钙化的量，或减慢血管或其他软组织钙化的进展的拟钙剂化合物的量。在另一个方面，治疗有效量意指增加PTH受体表达，或减慢PTH受体表达降低的拟钙剂化合物的量。在另一个方面，治疗有效量意指减少肥大的甲状旁腺腺体的尺寸或重量，或减慢甲状旁腺腺体增生的进展的拟钙剂化合物的量。在另一个方面，治疗有效量意指减少血管或其他软组织钙化的量，或减慢血管或其他软组织钙化的进展的拟钙剂化合物的量。在用于减少高钙血症对象中的血清钙的方法中，治疗有效量是使血清钙水平减少至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或25％所需的量。钙可以测量为总钙或离子钙。作为另一个例子，在用于降低体内PTH的方法中，治疗有效量是使PTH水平减少至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或25％所需的量。

如本文使用的，术语“治疗”或“处理”包括给有此需要的个人施用一定量的化合物或药物组合物，所述化合物或药物组合物将抑制、降低或逆转病理状况的发展。本文疾病和病症的治疗预期还包括本发明的化合物(或其药物盐、衍生物或前体药物)或含有所述化合物的药物组合物对认为有此需要的对象(即，动物例如哺乳动物例如人)的治疗施用。治疗还包含化合物或药物组合物对未诊断为有此需要的对象的施用，即对对象的预防施用。一般地，对象最初通过执业医师和/或被授权的医学从业者诊断，并且提议、推荐或开出经由本发明的一种或多种化合物或组合物的施用用于预防和/或治疗性处理的方案。

如本文使用的，术语“经皮”意指在本文描述的治疗方法中，将治疗有效量的拟钙剂试剂应用于皮肤，以将化合物递送至全身循环并且因此实现所需疗效。

如本文使用的，“氨基酸”指天然和非天然氨基酸。二十种天然存在的氨基酸(L-同分异构体)通过前缀为“L-”(除其为非手性的甘氨酸之外)三字母密码或以大写字母的单字母密码指定：丙氨酸(“L-Ala”或“A”)，精氨酸(“L-Arg”或“R”)，天冬酰胺(“L-Asn”或“N”)，天冬氨酸(“L-Asp”或“D”)，半胱氨酸(“L-Cys”或“C”)，谷氨酰胺(“L-Gln”或“Q”)，谷氨酸(“L-Glu”或“E”)，甘氨酸(“Gly”或“G”)，组氨酸(“L-His”或“H”)，异亮氨酸(“L-Ile”或“I”)，亮氨酸(“L-Leu”或“L”)，赖氨酸(“L-Lys”或“K”)，甲硫氨酸(“L-Met”或“M”)，苯丙氨酸(“L-Phe”或“F”)，脯氨酸(“L-Pro”或“P”)，丝氨酸(“L-Ser”或“S”)，苏氨酸(“L-Thr”或“T”)，色氨酸(“L-Trp”或“W”)，酪氨酸(“L-Tyr”或“Y”)和缬氨酸(“L-Val”或“V”)。L-正亮氨酸和L-正缬氨酸可以分别表示为(NLeu)和(NVal)。其为手性的十九种天然存在的氨基酸具有相应的D-同分异构体，其通过前缀为“D-”的三字母密码或以小写字母的单字母密码指定：丙氨酸(“D-Ala”或“a”)，精氨酸(“D-Arg”或“r”)，天冬酰胺(“D-Asn”或“a”)，天冬氨酸(“D-Asp”或“d”)，半胱氨酸(“D-Cys”或“c”)，谷氨酰胺(“D-Gln”或“q”)，谷氨酸(“D-Glu”或“e”)，组氨酸(“D-His”或“h”)，异亮氨酸(“D-Ile”或“i”)，亮氨酸(“D-Leu”或“l”)，赖氨酸(“D-Lys”或“k”)，甲硫氨酸(“DMet”或“m”)，苯丙氨酸(“D-Phe”或“f”)，脯氨酸(“D-Pro”或“p”)，丝氨酸(“D-Ser”或“s”)，苏氨酸(“D-Thr”或“t”)，色氨酸(“D-Trp”或“w”)，酪氨酸(“D-Tyr”或“y”)和缬氨酸(“D-Val”或“v”)。D-正亮氨酸和D-正缬氨酸可以分别表示为(dNLeu)和(dNVal)。尽管“氨基酸残基”通常在提及肽、多肽或蛋白质的单体亚单位中使用，并且“氨基酸”通常在提及游离分子中使用，但这些术语在本领域中的使用重叠且改变。术语“氨基酸”和“氨基酸残基”可互换使用，并且取决于上下文，可以指游离分子或者肽、多肽或蛋白质的单体亚单位。

为了测定两个氨基酸序列的百分比“同源性”或百分比“同一性”，序列就最佳比较目的进行比对(例如可以在一个多肽的序列中引入缺口，用于与其他多肽的最佳比对)。随后比较在相应的氨基酸位置处的氨基酸残基。当一个序列中的位置由与其他序列中的相应位置相同的氨基酸残基占据时，则分子在该位置处是相同的。如本文使用的，氨基酸或核酸“同源性”等价于氨基酸或核酸“同一性”。相应地，两个序列之间的序列同一性百分比是由序列共享的相同位置数目的函数(即，序列同一性百分比＝相同位置数目/总位置数目x100)。两个多肽序列之间的序列同一性百分比可以使用Vector NTI软件包(InvitrogenCorporation，5791 Van Allen Way，Carlsbad，CA 92008)进行测定。缺口开放罚分10和缺口延伸罚分0.1用于测定两种多肽的序列同一性。所有其他参数设为缺省设置。

“阳离子氨基酸”意指在生理学pH(7.4)下具有净正电荷的氨基酸残基，如例如在其中侧链或“R基”含有胺官能团或其他官能团的氨基酸残基中的情况，所述官能团可以接受质子以变得在生理学pH下带正电，例如胍或咪唑部分。阳离子氨基酸残基包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸、2，3-二氨基丙酸(Dap)、2，4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸和高精氨酸。

“阳离子亚单位”意指在生理学pH(7.4)下具有净正电荷的亚单位。

“非阳离子氨基酸”意指在生理学pH(7.4)下不带电荷或具有净负电荷的氨基酸残基，同样例如在其中侧链或“R基”是中性(中性极性和中性非极性)和酸性的氨基酸残基。非阳离子氨基酸包括具有下述R基的那些残基：其为烃烷基或芳香族部分的R基(例如缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸)；中性、极性R基(天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸)；或中性、非极性R基(甘氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)。具有酸性R基的非阳离子氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。

如本文使用的，“保守氨基酸置换”是不导致所选多肽或蛋白质的活性或三级结构中的显著改变的置换。此类置换通常涉及将所选氨基酸残基替换为具有相似理化性质的不同氨基酸残基。氨基酸和氨基酸残基通过理化性质的分组是本领域技术人员已知的。例如，在天然存在的氨基酸中，具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中进行限定，并且包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

“亚单位”意指与超过一个其他单体单元连接以形成聚合化合物的单体单元，其中亚单位是聚合化合物中最短的重复元件模式。示例性亚单位是氨基酸，其在连接时形成聚合物化合物，例如在本领域中被称为肽、多肽或蛋白质的那些。

如本文使用的，“化学交联”指两种或更多种分子的共价键合。

如果肽或肽片段具有与亲本肽或多肽的至少五个氨基酸残基、更优选八个氨基酸残基的邻接序列相同或同源的氨基酸序列，则它“衍生自”亲本肽或多肽。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“甲状旁腺功能亢进”指原发性、继发性和三发性甲状旁腺功能亢进。

术语“真皮内”意指在本文描述的治疗方法中，将治疗有效量的拟钙剂化合物应用于皮肤，以将化合物递送至角质层下的皮肤层，并且因此实现所需疗效。

如本文使用的，“分离的”或“纯化的”多肽或其生物学活性部分不含当通过重组DNA技术产生的一些细胞材料，或当化学合成时不含化学前体或其他化学品。语言“基本上不含细胞材料”包括其中多肽与它在其中天然或重组产生的细胞的一些细胞组分分离的多肽制剂。当多肽或其生物学活性部分重组产生时，它还优选基本上不含培养基，即培养基代表小于约20％、更优选小于约10％、且最优选小于约5％的多肽制剂体积。语言“基本上不含化学前体或其他化学品”包括其中多肽与涉及多肽合成的化学前体或其他化学品分离的多肽制剂。在一个实施方案中，语言“基本上不含化学前体或其他化学品”包括这样的多肽制剂，其具有小于约30％(按干重计)化学前体或其他化学品、优选小于约20％化学前体或其他化学品、更优选小于约15％化学前体或其他化学品、再更优选小于约10％化学前体或其他化学品、且最优选小于约5％化学前体或其他化学品。在优选实施方案中，分离的多肽或其生物学活性部分缺乏来自结构域多肽由其衍生的相同生物的污染多肽。

如本文使用的，“大分子”指通常具有大于约900道尔顿的分子量的分子，例如肽、多肽、蛋白质或核酸。

“聚合物”指通过共价键连接的两个或更多个相同或不同亚单位的直链。

如本文使用的，“肽”和“多肽”指由通过肽键连接的氨基酸残基链构成的任何聚合物，与其大小无关。尽管“蛋白质”通常在提及相对大的多肽中使用，并且“肽”通常在提及小多肽中使用，但这些术语在本领域中的使用重叠且改变。因此，为简单起见，术语“肽”将在本文中使用，尽管在一些情况下，本领域可以指与“多肽”相同的聚合物。除非另有说明，否则肽序列以从氨基末端到羧基末端的次序给出。

如本文使用的，“含硫醇基团”或“含硫醇部分”意指这样的官能团，其包含硫-氢键(-SH)，并且能够在生理条件下与另一个硫醇反应以形成二硫键。能够与另一个硫醇形成二硫键的硫醇在本文中被称为“反应性硫醇”。在一个优选实施方案中，含硫醇基团远离化合物的主链小于6个原子。在一个更优选的实施方案中，含硫醇基团具有结构(-SH-CH2-CH2-C(O)-O-)-。

如本文使用的，“小分子”指除大分子外的分子，例如有机分子，并且通常具有小于1000道尔顿的分子量。

除非另有说明，否则本文提及的所有文件均整体引入作为参考。

II.拟钙剂的治疗用途的方法

在一个方面，将如本文描述的拟钙剂施用于有此需要的对象以治疗和/或改善与高钙血症相关的症状。原发性甲状旁腺功能亢进和恶性肿瘤占约90％的高钙血症病例。与高钙血症相关的其他疾病包括但不限于异常甲状旁腺腺体功能、原发性甲状旁腺功能亢进、散发性甲状旁腺腺瘤、原发性甲状旁腺增生、甲状旁腺癌、多发性内分泌性腺瘤(MEN)、家族性孤立性甲状旁腺功能亢进、家族性低尿钙高钙血症/家族性良性高钙血症、恶性肿瘤、具有转移的实体瘤(例如乳腺癌或经典鳞状细胞癌，其可以是PTHrP介导的)、具有高钙血症的体液介导的实体瘤(例如肺癌(最通常是非小细胞肺癌)或肾癌、嗜铬细胞瘤)、血液系统恶性肿瘤(多发性骨髓瘤、淋巴瘤、白血病)、肉瘤样病及其他肉芽肿病、维生素D代谢病症、维生素D过多(维生素D中毒)、升高的1，25(OH)2D水平、婴儿特发性高钙血症、在横纹肌溶解后反弹的高钙血症、与高骨周转率相关的病症、甲状旁腺功能亢进、佩吉特骨病、肾功能衰竭、重度继发性甲状旁腺功能亢进、乳碱综合征。高钙血症还可以起因于锂使用、噻嗪使用、维生素A中毒和铝中毒、以及长期不活动。在一个实施方案中，拟钙剂是肽。在另一个实施方案中，拟钙剂是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

在另一个方面，如本文描述的拟钙剂用于抑制、降低或减少有此需要的对象中的肾损害、血管钙化或甲状旁腺增生进展。在一个实施方案中，拟钙剂是肽。在另一个实施方案中，拟钙剂是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

在一个实施方案中，拟钙剂作为待每周三次施用的静脉内(IV)产品施用，用于治疗接受血液透析的晚期肾病(ESRD)患者中的CKD-MBD。在另一个实施方案中，拟钙剂经由每天经皮贴剂施用(例如用于分类为具有3期或4期CKD的对象)。

在一个方面，将如本文描述的拟钙剂施用于处于下述危险中或诊断有下述的对象：早期慢性肾病(CKD)和/或慢性肾病矿物质骨症(CKD-MBD)。对象可以经历透析，或对象可以是透析前的。在一些实施方案中，对象可以分类为具有1期、2期、3期、4期或5期CKD。

在另一个方面，本文描述的组合物用于治疗显示出下述或处于发展下述的危险中的对象：软组织钙化、充分识别和常见的慢性肾病并发症。此类个体可以具有例如与下述状况相关的血管钙化或处于发展例如与下述状况相关的血管钙化的危险中：例如动脉粥样硬化、狭窄、再狭窄、肾功能衰竭、糖尿病、假体植入、组织损伤或老年性血管疾病。在另一个方面，本文描述的组合物用于治疗显示出升高的血清肌酸酐水平或处于发展升高的血清肌酸酐水平的危险中的对象。在另一个方面，本文描述的组合物用于治疗显示出甲状旁腺腺体增生或处于发展甲状旁腺腺体增生的危险中的对象。在另一个方面，本文描述的组合物用于治疗显示出升高的磷水平或处于发展升高的磷水平的危险中的对象。在另一个方面，本文描述的组合物用于治疗显示出减少的PTH受体表达或处于发展减少的PTH受体表达的危险中的对象。这些状况的预后和临床适应症是本领域已知的。通过本发明的方法治疗的个体可以具有与例如下述相关的全身矿物质失衡：糖尿病、慢性肾病、肾功能衰竭、肾移植或肾透析。

III.如本文描述的拟钙剂的疗效

使用CKD的大鼠模型，5/6肾切除术(5/6 Nx；Charles River Laboratories，Wilmingham，MA)，评价拟钙剂减少PTH的用途。动物用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)，(1mg/kg，IV)或西那卡塞(10mg/kg，PO)进行处理。动物每天给药共28天。血清PTH水平在最后一次给药后6小时、16小时和48小时进行测量。用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物在长期每天给药后具有延长的PTH减少(参见实施例1A，图1)。用西那卡塞处理的动物显示在给药后16小时和48小时在血清PTH中的增加，而用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)处理的动物显示在最后一次给药后6小时和16小时低于基线大于50％的降低，并且显示在给药48小时后低于基线PTH的25％-50％降低。这些结果支持拟钙剂可以有效用作治疗试剂用于与增加的PTH相关的疾病和状况的结论，所述疾病和状况包括但不限于CKD、继发性甲状旁腺功能亢进和原发性甲状旁腺功能亢进。

5/6 Nx大鼠模型用于另一个研究中，以测定拟钙剂对甲状旁腺腺体增殖的作用。用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)(3mg/kg，SC)处理的动物具有在甲状旁腺腺体增生中的急剧减少(实施例1B，图2A-D)。这些结果支持用拟钙剂处理有效减少甲状旁腺腺体增殖的结论。

使用5/6 Nx大鼠模型完成的另一个研究检查Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)对异位钙化(即，在软组织中出现的不适当的生物矿化)的作用。CKD患者具有肾钙化的高发生率。另外，处于透析的具有CKD的患者具有比年龄匹配的具有血管造影术证明的冠状动脉疾病的个体多2至5倍的冠状动脉钙化。钙化与粥样硬化斑块负荷和增加的心肌梗塞危险、周围血管疾病中增加的缺血性发作和在血管成形术后增加的剥离危险关联。

通过给5/6 Nx大鼠施用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)研究拟钙剂施用对异位钙化的作用(实施例1C)。与未经处理的5/6 Nx大鼠相比较，发现用3mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理6周的动物具有减少的肾钙化(图3A-B)。用3mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理6周的5/6 Nx大鼠具有比未经处理的配对物更少钙化的主动脉和肾组织(图3C)。结果导致拟钙剂施用有效减少软组织钙化的结论。

血清肌酸酐(sCr)的测量提供用于评价肾衰竭进展，并且药物试剂是否能够减慢其进展的方法。更高水平的肌酸酐指示下降的肾小球滤过率和所得的肾排泄废弃产物的能力降低。在5/6 Nx大鼠中监控血清肌酸酐水平，所述5/6 Nx大鼠已用0.3mg/kg、1mg/kg、3mg/kg和媒介物对照经过六周时期进行处理，每周3次给药(实施例1C)。用3mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物经历血清中的肌酸酐水平中的降低，而用0.3mg/kg和1mg/kg处理的动物在第2周中具有降低水平的血清肌酸酐，和小于在媒介物处理的动物中观察到的肌酸酐水平中的增加。数据显示血清肌酸酐的升高经过几周以剂量依赖性方式被抑制，并且支持拟钙剂的施用有效减慢肾衰竭进展的结论。

拟钙剂减少PTH的用途也使用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)在腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠模型中进行评价。结果与上文描述的那些一致(参见实施例2)。

设计临床试验以研究Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)在接受每周三次血液透析的对象中的作用。该试验是双盲、随机化安慰剂对照的多中心研究。实施例3中所述的结果显示如本文描述的拟钙剂可以降低PTH分泌和合成，同时降低血清PTH、磷和钙，从而改善CKD-MBD的所有三种主要生物化学异常。

Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的药物代谢动力学概况的研究显示拟钙剂具有相对慢的大约2L/小时的清除率，并且对肽的总血浆暴露与施用的剂量成比例(实施例3A)。这些数据显示拟钙剂的延长效应，支持血液透析患者以2-3次/周或可能2-4次/周的频率的给药。在一个优选实施方案中，拟钙剂是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

拟钙剂减少血清iPTH和钙水平的功效也在这个试验中进行观察。对象在血液透析完成后2-4小时施用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的单次IV推注，并且就血清iPTH和校正的钙水平中的改变分析来自对象的血液(实施例2B)。施用的剂量为5mg、10mg、20mg、40mg或60mg。如图5中所示，存在在给药30分钟内发生的iPTH中的剂量依赖性降低。数据支持如本文描述的拟钙剂对血液透析患者的施用，因为以大于或等于20mg的剂量或范围为约20mg至约100mg的剂量的肽实现的iPTH抑制持续经过透析间期。此类剂量可以提供在例如使用IV推注或腹膜内注射给药后约5分钟-45分钟内、或在给药后约10分钟-30分钟内、或在给药后约1小时内的血清iPTH中的降低。

如实施例2B中所述，施用的拟钙剂也有效减少血清校正的钙水平。范围为约5mg-约60mg的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)剂量导致血清校正的钙中的约10％-14％减少。没有对象在研究过程中的任何时间具有低于7.5mg/dL的校正的钙水平。

相应地，在一个实施方案中，调节CaSR活性的拟钙剂有效治疗患有在血液中过量水平的PTH或钙的对象或者逆转此类患者中的钙稳态丧失的效应，例如诊断有高钙血症的患者。在另一个实施方案中，拟钙剂是肽。

临床研究进一步提供了显示拟钙剂的施用是非常良好耐受的安全数据，没有腹泻、恶性或呕吐的报道(实施例2C)。因此，相比较与治疗有效量的口服拟钙剂相关的那些的数目和频率，治疗有效量的如本文描述的拟钙剂的施用可以引起更少的副作用或更不频繁的不利事件。

在另一个方面，如本文描述的拟钙剂具有疾病修饰效应，从而使得拟钙剂的疗效在药物治疗停止后持续几周。在一个实施方案中，拟钙剂是肽。

在一个实施方案中，拟钙剂有效预防甲状旁腺腺体中的关键受体的丧失，所述关键受体包括CaSR、维生素D受体和FGF-23共受体(实施例1E)。在以3mg/kg的剂量给5/6 Nx大鼠施用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)共6周后，将甲状旁腺腺体切片且染色，以观察CaSR、维生素D受体和FGF-23共受体的表达水平。在每种情况下，相对于在来自用媒介物对照处理的大鼠的腺体中可见的表达，Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的施用导致增加的受体表达。这些数据支持下述结论：通过维持和/或增加甲状旁腺腺体的一种或多种受体的表达，如本文描述的用拟钙剂处理可以改善甲状旁腺腺体应答性，并且从而潜在修饰疾病的过程。

在进一步的研究中，5/6 Nx大鼠用3mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的4个剂量经过一周时期进行处理，随后为1周洗脱期(药物假期)(实施例3B)。如在一周洗脱期后测量的和与Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的第一个剂量施用前的基线PTH相比较的，经处理的大鼠经历基线PTH中的50％减少。在一些实施方案中，与拟钙剂的第一个剂量前的血清PTH相比较，治疗有效量的拟钙剂的施用导致经历血液透析的对象中的血清PTH中的25％-75％减少或40％-50％减少，并且其中所述减少在拟钙剂的最后一个剂量施用后1-7天、3-8天或5-10天进行测量。

上文描述的疾病修饰效应也在临床试验中观察到，其中血液透析患者用10mg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)进行治疗，每周3次，共4周。血清PTH水平在药谷时进行测量，所述药谷在患者接受其下一个剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)前立即发生。如实施例4中讨论的，如在第27天时测量的，与Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的第一个剂量前测量的基线PTH相比较，用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)治疗的患者经历基线PTH中的约50％减少。数据进一步支持Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)在血液透析患者中具有疾病修饰效应。

在一个优选实施方案中，使用所述拟钙剂治疗患有肾损害、血管钙化、甲状旁腺增生、高钙血症和/或甲状旁腺功能亢进的对象。

未经治疗的具有适度重度甲状旁腺功能亢进的SHPT患者通常具有基线循环完整PTH水平＞300pg/ml，并且水平可以超过600pg/mL。在一个优选实施方案中，PTH水平中的降低作为低于治疗前基线水平的完整PTH中的降低进行测量。在另一个实施方案中，所需PTH中的降低使血浆PTH水平达到由国家肾脏基金会或其他专家在肾病症和肾功能不全的治疗中建立的通常认可的指南。

在另一个方面，提供了用于治疗甲状旁腺功能亢进、高钙血症和/或骨疾病的方法，其包括施用治疗有效量的所需化合物。在另一个实施方案中，对象可以用与一种或多种其他治疗有效试剂组合的所述化合物进行治疗。

在另一个方面，所述化合物以有效减少PTH或PTH效应的量施用。在一些实施方案中，对于所述化合物施用后至少10小时，血浆PTH中的减少低于治疗前基线水平至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％或30％。在具体实施方案中，血浆PTH中的减少是在施用后10小时至少20％。在优选实施方案中，对于所述化合物施用后至少48小时，血浆PTH中的减少低于治疗前基线水平至少15-40％、优选20-50％、更优选30-70％。

在另一个方面，所述化合物以有效降低血清钙或钙效应的量施用。在一些实施方案中，对于所述化合物施用后至少10小时，血清钙中的减少低于治疗前水平至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％或25％。在一些优选实施方案中，血清钙中的减少在施用后10小时是至少5％。在一些优选实施方案中，对于所述化合物施用后至少48小时，血清钙的减少低于治疗前水平5-10％、优选5-20％。

在另一个方面，提供了用于减少有此需要的对象中的肾损害的方法，其包括：施用治疗有效量的所述化合物，由此当在施用后约2、4或6周测量时，血清肌酸酐的水平降低低于治疗前水平至少约1％、5％或10％。在一个实施方案中，当在施用后约2、4或6周测量时，血清肌酸酐的水平增加大于治疗前水平小于约5％、10％、20％、30％或40％。

基于血清钙、骨代谢和PTH之间的关系，认为所述化合物对于多种形式的骨疾病和/或高钙血症加上甲状旁腺功能亢进的治疗是有利的。所述化合物可以具有与目前治疗试剂相比较的优点，因为它们可以肠胃外施用并且可能与胃肠道不良反应不相关，不由细胞色素P450代谢，并且可以导致血浆PTH和钙中的更有效减少。

如上文讨论的，所述方法可以与单独或与一种或多种其他治疗有效试剂组合的化合物一起使用。此类其他治疗有效试剂包括但不限于使用下述的治疗：抗吸收二磷酸盐试剂，例如阿屈膦酸盐和利塞膦酸盐；整联蛋白阻滞剂例如α_vβ₃拮抗剂；在激素替代疗法中使用的共轭雌激素，例如Prempro^TM、Premarin^TM和Endometrion^TM；选择性雌激素受体调节剂(SERM)例如雷洛昔芬、屈洛昔芬、CP-336，156(Pfizer)和拉索昔芬；组织蛋白酶(cathespin)K抑制剂；维生素D治疗；维生素D类似物，例如Zemplar^TM(帕立骨化醇)；(骨化三醇)、(度骨化醇)、(阿法骨化醇)和来自Cytochroma被称为CTA-018、CTAP201和CTAP101的开发中的类似物；其他拟钙剂例如(西那卡塞)；II型钠依赖性磷酸盐转运蛋白家族的抑制剂，SLC34(包括两种肾同种型NaPi-IIa和NaPi-IIc，和肠NaPi-IIb转运蛋白)；磷调素(包括FGF-23、sFRP4、MEPE或FGF-7)；低剂量PTH治疗(含或不含雌激素)；降钙素；RANK配体的抑制剂；针对RANK配体的抗体，骨保护素；腺苷拮抗剂；和ATP质子泵抑制剂。

在一个实施方案中，所述化合物以足以降低PTH和血清钙水平的剂量施用。在另一个实施方案中，所述化合物以足以降低PTH而不显著影响血清钙水平的剂量施用。在一个进一步的实施方案中，所述化合物以足以增加PTH而不显著影响血清钙水平的剂量施用。

IV.钙敏感受体激动剂

本文描述的方法包括给对象施用拟钙剂。此类激动剂在美国专利号6,011,068和6,031,003以及美国专利公开号2011/0028394和2009/0023652(整体引入本文作为参考)中描述。

在一个实施方案中，该方法包括给患者施用拟钙剂。在另一个实施方案中，拟钙剂是盐酸西那卡塞。在另外一个实施方案中，拟钙剂是肽。

在一个实施方案中，该方法包括给患者施用拟钙剂。在另一个实施方案中，拟钙剂是肽。在另外一个实施方案中，拟钙剂包括包含下式的肽：X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇，其中X₁是包含含硫醇基团的亚单位；X₅是阳离子亚单位；X₆是非阳离子亚单位；X₇是阳离子亚单位；并且X₂、X₃和X₄中的至少一个、优选两个独立地是阳离子亚单位。

在一个实施方案中，拟钙剂是包含序列carrrar(SEQ ID NO：2)的化合物。在另一个实施方案中，拟钙剂是由肽carrrar(SEQ ID NO：2)构成的缀合物，其中肽在其N末端残基处与Cys残基缀合。在一个优选实施方案中，缀合物是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。尽管本发明可以根据某些优选实施方案例如SEQ ID NO：3进行描述，但本领域技术人员应当理解公开内容还应用于其他拟钙剂，包括在美国专利号6,011,068和6,031,003以及美国专利公开号2011/0028394和2009/0023652(整体引入本文作为参考)中所述的化合物和缀合物。同样地，尽管本发明可以根据某些优选实施方案例如血液透析进行描述，但本领域技术人员应当理解公开内容还应用于其他形式的透析例如腹膜透析和其他方法例如每日血液透析。

在一个优选实施方案中，含硫醇缀合物基团具有N末端帽和C末端帽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团自身是包含SEQ ID NO：161的氨基酸序列的肽。在一些实施方案中，含硫醇缀合基团和肽相同(即，缀合物是二聚体)。

在另一个实施方案中，化合物以缀合物的形式，其中在位置X₁中的含硫醇亚单位通过二硫键与L-Cys残基连接。这些化合物具有例如下述结构：

在本文使用的符号中，附带鉴定与X₁亚单位中的含硫醇部分连接的化合物，其中在这些示例性缀合物中，指示为(C)的化合物L-Cys与X₁亚单位中的含硫醇部分连接：Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)和Ac-c(Ac-C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：141)。

当所述激动剂作为药剂施用于人和动物时，它们可以单独或作为药物组合物给予，所述药物组合物含有与药学可接受的载体组合的例如0.1-99％(更优选地，10-30％)的活性成分。在其他实施方案中，药物组合物可以含有0.2-25％、优选0.5-5％或0.5-2％的活性成分。这些化合物可以施用于人及其他动物。代理人案号63200-8022 17764070 18用于通过任何合适的施用途径的治疗，包括例如经口、皮下注射、皮下沉积、静脉内注射、静脉内或皮下输注。

这些激动剂可以通过任何合适的施用途径施用于人及其他动物用于治疗。

肽拟钙剂先前已得到描述(美国专利公开号2011/0028394和2009/0023652(两者均整体引入本文作为参考))。一种示例性肽拟钙剂在本文中被称为Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)，并且具有下述结构：

另外的结构在下表1中提供。

表1

GS＝氧化谷胱甘肽；dHcy＝D-高半胱氨酸；Mpa＝巯基丙酸；PEG＝聚乙二醇。

V.制剂

提供了包含所述化合物和至少一种药学可接受的赋形剂或载体的药物组合物。制备此类药物组合物的方法通常包括使所述化合物与载体和任选的一种或多种辅助成分达到结合的步骤。通过本领域技术人员已知的常规方法，所述化合物和/或包含其的药物组合物可以配制成药学可接受的剂型。通常，制剂通过下述进行制备：使所述化合物与液体载体或精细分开的固体载体或两者均匀地且密切地达到结合，并且随后需要时，使产品成型。

适合于肠胃外施用的本发明的药物组合物包含与一种或多种药学可接受的无菌等渗含水或非含水溶液、分散体、悬浮液或乳状液、或无菌粉末组合的一种或多种所述化合物，所述无菌粉末可以仅在使用前重构成无菌可注射溶液或分散体，其可以含有糖、醇、氨基酸、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使得制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或者悬浮剂或增稠剂。

可以用于本发明的药物组合物中的合适含水和非含水载体的例子包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等等)及其合适的混合物、植物油例如橄榄油、和可注射有机酯例如油酸乙酯。适当的流动性可以通过下述得到维持：例如使用涂层材料例如卵磷脂，在分散体的情况下维持所需粒径和使用表面活性剂。

这些药物组合物还可以含有佐剂例如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。微生物对所述化合物的作用的预防可以通过包括多种抗菌剂和抗真菌剂得到确保，所述抗菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等等。还可能希望在组合物内包括控制张力的试剂，例如糖、氯化钠等等。另外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。

在一些情况下，为了延长药物的效应，希望减慢来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用具有弱水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来完成。药物的吸收率随后取决于其溶解率，其依次又可以取决于晶体大小和结晶形式。可替代地，肠胃外施用的药物形式的延长吸收通过将药物溶解或悬浮于油媒介物中来完成。

例如，所述化合物可以以溶液的形式递送至人，所述溶液通过用液体重构固体形式的药物进行制备。这种溶液可以进一步用输注流体进行稀释，所述输注流体例如注射用水、0.9％氯化钠注射液、5％右旋糖注射液和乳酸林格氏注射液。优选重构且稀释的溶液在4-6小时内使用以递送最大限度效力。可替代地，所述化合物可以以片剂或胶囊的形式递送至人。

可注射沉积形式通过在生物可降解的聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯中形成所述化合物的微胶囊基质进行制备。取决于药物与聚合物的比和采用的特定聚合物的性质，药物释放率可以得到控制。其他生物可降解的聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酐)。沉积可注射制剂还通过在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中截留药物进行制备。

当所述化合物作为药剂施用于人和动物时，它们可以单独或作为药物组合物给予，所述药物组合物含有与药学可接受的载体组合的例如0.1-99％(更优选地，10-30％)的活性成分。在其他实施方案中，药物组合物可以含有0.2-25％、优选0.5-5％或0.5-2％的活性成分。这些化合物可以施用于人及其他动物用于通过任何合适的施用途径的治疗，包括例如皮下注射、皮下沉积、静脉内注射、静脉内或皮下输注。这些化合物可以作为推注快速施用(在＜1分钟内)或经过延长时间段更缓慢地施用(经过几分钟、小时或天)。这些化合物可以每天或经过多天连续或间歇地递送。在一个实施方案中，化合物可以经皮施用(例如使用贴剂、微针、微孔、软膏、微喷流或纳米喷流)。

与选择的施用途径无关，可以以合适的水合形式使用的所述化合物和/或药物组合物通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学可接受的剂型。

药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，以便获得有效实现对于特定患者、组合物和施用方式所需的治疗应答的活性成分量，而对患者无毒。

所选剂量水平将取决于多种因素，包括采用的具体所述化合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，采用的具体化合物的排泄率或代谢率，吸收率和吸收程度，治疗持续时间，与采用的具体化合物结合使用的其他药物、化合物和/或材料，待治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和先前医疗史，和医学领域众所周知的相似因素。

具有本领域普通技术的医生或兽医可以容易地决定且开出所需药物组合物的有效量。例如，医生或兽医可以以低于为了实现所需疗效需要的那种的水平开始在药物组合物中采用的所述化合物剂量，且逐渐增加剂量直至实现所需效应。

一般而言，所述化合物的合适日剂量将是有效产生疗效的最低剂量的化合物量。此类有效量一般取决于上文描述的因素。一般地，当用于所示效应时，所述化合物用于患者的静脉内、肌内、经皮、脑室内和皮下剂量范围为约1μg-约5mg/千克体重/小时。在其他实施方案中，剂量范围为约5μg-约2.5mg/千克体重/小时。在进一步的实施方案中，剂量范围为约5μg-约1mg/千克体重/小时。

需要时，所述化合物的有效日剂量任选以单位剂型，作为全天以适当间隔分开施用的两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量施用。在一个实施方案中，所述化合物作为一个剂量/天施用。在进一步的实施方案中，化合物如通过静脉内或其他途径连续施用。在其他实施方案中，化合物比每天更不频繁地施用，例如每2-3天。在另外其他实施方案中，化合物与每周或更不频繁的透析治疗结合施用。

接受这种治疗的对象是有需要的任何动物，包括灵长类动物特别是人及其他动物例如马、牛、猪和绵羊；以及一般而言的家禽和宠物。

所述化合物可以像这样或与药学可接受的载体混合施用，并且还可以与抗微生物剂例如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷和糖肽结合施用。结合疗法因此包括活性化合物的序贯、同时和分开施用，其方式使得第一种施用的药物的疗效在施用后续药物时未完全消失。

公开化合物的施用途径

这些化合物可以通过任何合适的施用途径施用于人及其他动物用于治疗。如本文使用的，术语施用“途径”预期包括但不限于皮下注射、皮下沉积、静脉内注射、静脉内或皮下输注、眼内注射、皮内注射、肌内注射、腹膜内注射、气管内施用、沉积内施用、关节内施用、鞘内施用、硬膜外施用、吸入、鼻内施用、舌下施用、经颊施用、直肠施用、阴道施用、脑池内施用和局部施用、经皮施用或经由局部递送(例如通过导管或支架)施用。

对机体的经皮药物递送是用于将生物学活性物质全身递送至对象，且特别是用于递送具有弱经口生物利用度的物质例如蛋白质和肽的希望和方便的方法。经皮递送途径已对于小(例如小于约1,000道尔顿)亲脂化合物例如东莨菪碱和尼古丁特别成功，所述亲脂化合物可以穿透充当物质进入体内的有效屏障的皮肤的角质层外层。角质层下方是有活力的表皮，其不含血管，但具有一些神经。再深层的是真皮，其含有血管、淋巴管和神经。跨越角质层屏障的药物一般可以扩散至真皮中的毛细血管用于吸收和全身分布。

经皮递送中的技术进展已集中于解决本领域跨越皮肤递送亲水、高分子量化合物例如蛋白质和肽的需要。一种方法涉及使用化学或物理方法破坏角质层，以减少由角质层造成的障碍。涉及使用最低限度侵入性技术在皮肤(特别是角质层中的微孔)中制备微米尺度转运途径(微孔)的皮肤微穿孔技术是更近期的方法。在皮肤(角质层)中产生微孔的技术包括热微穿孔或消融、微针阵列、声透疗法、激光消融和射频消融(Prausnitz和Langer(2008)Nat.Biotechnology 11：1261-68；Arora等人，Int.J.Pharmaceutics，364：227(2008)；Nanda等人，Current Drug Delivery，3：233(2006)；Meidan等人AmericanJ.Therapeutics，11：312(2004))。

如上所述，PTH分泌通过在甲状旁腺细胞的细胞表面上表达的CaSR调节。因此，为了活化CaSR，试剂或化合物必须递送至甲状旁腺细胞。拟钙剂试剂的经皮递送必须实现跨越角质层的递送，并且提供全身暴露以到达甲状旁腺细胞。迄今为止，本领域仍未证实拟钙剂化合物是否可以以对于治疗利益足够的量，且特别是足以降低PTH和/或治疗、减弱、减轻和/或缓解高钙血症的量经皮递送。

除拟钙剂之外，1，25-(OH)₂维生素D₃类似物是最常用的用于患者的治疗，所述患者具有与慢性肾病和晚期肾病相关的甲状旁腺功能亢进。维生素D类似物通过促进饮食钙的肠吸收起作用，并且通过抑制PTH合成和分泌减少PTH水平。虽然维生素D的静脉内和经口递送已在治疗上使用，但迄今为止，本领域仍未证实维生素D类似物例如ZEMPLAR^TM(帕立骨化醇)、(骨化三醇)、(阿法骨化醇)和(度骨化醇)是否可以以对于治疗利益足够的量且特别是足以降低甲状旁腺激素(PTH)的量经皮递送。另外，本领域仍未证实拟钙剂试剂与以对于治疗利益足够的量且特别是足以降低PTH的量的维生素D类似物(例如分开制剂或作为共同制剂)组合是否可以通过经皮递送共同施用，并且提供用于患有甲状旁腺功能亢进的患者的有效治疗。

拟钙剂试剂可以跨越角质层和/或其他表皮层施用，用于局部或全身递送，用于降低甲状旁腺激素(PTH)和/或治疗高钙血症。在一个实施方案中，拟钙剂试剂经由微穿孔递送。考虑了用于微穿孔的多种技术中的任何一种，并且简要描述几种。

微穿孔可以通过机械方法和/或外部驱动力来实现，以突破角质层将本文描述的拟钙剂试剂递送穿过皮肤的表面且进入下层皮肤层和/或血流内。

在第一个实施方案中，微穿孔技术是使用足以消融角质层角质层而不显著损害下层表皮的波长、脉冲宽度、脉冲能量、脉冲数目和脉冲重复率的脉冲激光，在特定皮肤区域中的角质层消融。随后将拟钙剂试剂应用于消融区域。另一种激光消融微穿孔技术被称为激光诱导的压力波(LISW)，涉及通过大功率脉冲激光器生成的宽带、单极和可压缩波。LISW与组织相互作用以破坏角质层中的脂质，在角质层内瞬时产生细胞内通道。角质层中的这些通道或微孔允许拟钙剂试剂的进入。

超声促渗或声透疗法是使用超声能的另一种微穿孔技术。超声是具有超过20KHz的频率的声音。超声可以连续或脉冲应用，并且以多种频率和强度范围应用(Nanda等人，Current Drug Delivery，3：233(2006))。

另一种微穿孔技术涉及微针阵列的使用。当应用于在对象上的皮肤区域时，微针阵列刺穿角质层并且不穿透至显著刺激神经或刺穿毛细血管的深度。因此，在应用微针阵列用于生成通过其递送拟钙剂试剂的微孔后，患者未感觉到不适或疼痛，或感觉到最低限度的不适或疼痛。

考虑了包含空心或实心微针的微针阵列，其中拟钙剂试剂可以涂布在针的外表面上或从空心针内部分配。微针阵列的例子例如在Nanda等人，Current Drug Delivery，3：233(2006)和Meidan等人American J.Therapeutics，11：312(2004)中描述。第一代微针阵列包含实心硅微针，其外部涂布有治疗试剂。当针的微阵列针对皮肤按压并且在约10秒后去除时，容易实现在针上的试剂穿透到体内。第二代微针阵列包含实心或空心硅、聚碳酸酯、钛或其他合适的聚合物的且涂布有或充满治疗化合物的溶液的微针。更新代的微针阵列由生物可降解的聚合物制备，其中涂布有治疗试剂的针尖保留在角质层中并且缓慢溶解。

微针可以由多种材料进行构建，包括金属、陶瓷、半导体、有机物、聚合物和复合物。示例性构建材料包括药物级别不锈钢、金、钛、镍、铁、锡、铬、铜、钯、铂、这些或其他金属的合金、硅、二氧化硅和聚合物。代表性生物可降解的聚合物包括羟酸聚合物例如乳酸和羟乙酸聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯共乙交酯，以及与聚(乙二醇)、聚酐、聚(原酸)酯、聚氨基甲酸酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)和聚(丙交酯共己内酯)的共聚物。代表性生物不可降解的聚合物包括聚碳酸酯、聚酯和聚丙烯酰胺。

微针可以具有笔直轴或锥形轴。在一个实施方案中，微针的直径在微针的基底末端处是最大的，并且逐步变细至在基底远侧的末端处的尖。微针还可以构造为具有包括笔直(未逐渐变细的)部分和逐渐变细的部分的轴。针还可以完全不具有逐渐变细的末端，即它们仅是具有钝尖端或平坦尖端的圆柱体。具有基本上均匀的直径但不逐渐变细至尖的空心微针在本文中被称为“微管”。如本文使用的，除非另有说明，否则术语“微针”包括微管和逐渐变细的针。

电穿孔是用于在皮肤中产生微孔的另一种技术。这种方法使用长微秒或毫秒的高压电脉冲的应用，以产生在角质层内的瞬时、可渗透孔。

其他微穿孔技术包括无线电波的使用以在皮肤中产生微通道。热消融是实现更大分子量化合物的经皮递送的另外一种方法。

申请人已发现低剂量的拟钙剂试剂可以经过延长时间段治疗性地施用，以治疗SHPT。这显著不同于其他拟钙剂(例如盐酸西那卡塞)的目前剂量需求。

VI.组合疗法

如上所述，使用方法可以单独或与其他方法组合使用，用于治疗高钙血症和/或骨疾病。此类其他方法包括但不限于使用下述试剂的治疗：例如二磷酸盐试剂，整联蛋白阻滞剂，激素替代疗法，选择性雌激素受体调节剂，组织蛋白酶K抑制剂，维生素D治疗，维生素D类似物，例如ZEMPLAR^TM(帕立骨化醇)、(骨化三醇)、(阿法骨化醇)和(度骨化醇)，抗炎剂，低剂量PTH治疗(含或不含雌激素)，拟钙剂，磷酸盐结合剂，降钙素，RANK配体的抑制剂，针对RANK配体的抗体，骨保护素，腺苷拮抗剂和ATP质子泵抑制剂。

在一个实施方案中，组合疗法使用与拟钙剂试剂组合的维生素D或维生素D类似物。维生素D帮助钙的吸收且作用于维持钙和磷的正常血液水平。PTH通过增加1，25-(OH)₂维生素D(活性形式的维生素D)的产生而作用于增强肠中的钙吸收。PTH还刺激来自肾的磷排泄，并且增加来自骨的释放。

如上文讨论的，继发性甲状旁腺功能亢进的特征在于与不足够水平的活性维生素D激素相关的甲状旁腺激素(PTH)中的升高。维生素D或维生素D类似物可以用于减少继发性甲状旁腺功能亢进治疗中升高的PTH水平。在一个实施方案中，本发明包括包含拟钙剂试剂和维生素D类似物的药物组合物。

在一个实施方案中，本发明包括包含拟钙剂试剂和ZEMPLAR^TM(帕立骨化醇)的药物组合物。帕立骨化醇是骨化三醇(代谢活性形式的维生素D)的合成类似物。推荐的Zemplar初始剂量基于基线完整甲状旁腺激素(iPTH)水平。如果基线iPTH水平小于或等于500pg/mL，则日剂量是1μg，并且“每周三次”剂量(不超过每隔一天施用)是2μg。如果基线iPTH水平大于500pg/mL，则日剂量是2μg，并且“每周三次”剂量(不超过每隔一天施用)是4μg。其后，给药必须个体化并且基于血清血浆iPTH水平，伴随血清钙和血清磷的监控。帕立骨化醇在美国专利号5,246,925和美国专利号5,587,497中描述。

在另一个实施方案中，本发明包括包含拟钙剂试剂和(骨化三醇)的药物组合物。骨化三醇是代谢活性形式的维生素D。推荐的(口服)初始剂量是0.25μ/天。这个量可以以4至8周间隔增加0.25μg/天。正常或仅轻微减少的钙水平可以响应每隔一天0.25μg的剂量。对于处于透析的患者，推荐的(IV)初始剂量是0.02μg/kg(1-2μg)，3次/周，每隔一天。这个量可以每2至4周增加0.5-1μg。骨化三醇在美国专利号6,051,567和美国专利号6,265,392和美国专利号6,274,169中描述。

在一个实施方案中，提供了包含拟钙剂试剂和(度骨化醇)的药物组合物。度骨化醇是维生素D的合成类似物，其经历在体内的代谢活化，以形成1α，25-二羟维生素D₂，天然存在的、生物学活性形式的维生素D。推荐的初始剂量是在透析时每周三次施用的10μg(大约每隔一天)。初始剂量应根据需要进行调整，以便使血液iPTH降低到150-300pg/mL的范围。如果iPTH未降低50％并且未能到达靶范围，则剂量可以以8周间隔增加2.5μg。推荐的HECTOROL最大剂量是在透析时每周三次施用的20μg，总共60μg/周。度骨化醇在美国专利号5,602,116和美国专利号5,861,386和美国专利号5,869,473和美国专利号6,903,083中描述。

在组合方案中采用的特定治疗组合(治疗剂或操作)将考虑到所需治疗剂和/或操作的相容性和待实现的所需疗效。还应当理解采用的治疗可以对于相同病症实现所需效应(例如，本发明化合物可以与用于治疗相同病症的另一种试剂同时施用)，或它们可以实现不同效应(例如任何不良反应的控制)。如本文使用的，通常施用于治疗或预防特定疾病或状况的另外治疗试剂被称为“适合于待治疗的疾病或状况的”。

如本文定义的本发明的组合治疗可以通过所述治疗的个别组分的同时、序贯或分开施用来实现。

化合物或其药学可接受的组合物还可以掺入组合物内，用于涂布可植入的医疗装置、生物可蚀解的聚合物、可植入的泵和栓剂。相应地，在另一个方面，考虑了用于涂布可植入装置的组合物，所述组合物包含如上文一般描述的所需化合物和适合于涂布可植入装置的载体。在另外一个方面，包括的是涂布有组合物的可植入装置，所述组合物包含如上文一般描述的所需化合物和适合于涂布可植入装置的载体。

涂布的可植入装置的合适涂层和一般制备在美国专利号6,099,562；5,886,026；和5,304,121中描述。涂层通常是生物相容性聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己酸内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯乙酸乙烯酯及其混合物。涂层可以任选进一步由氟硅酮、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的合适外涂层覆盖，以赋予组合物中的控制释放特征。

VII.用于测定治疗功效的潜在临床标记

所述治疗方法的有效性的测定可以通过多种方法进行测定。

血清钙的正常水平在8.8mg/dL-10.4mg/dL(2.2mmol/L-2.6mmol/L)的范围中。在某些情况下，治疗功效可以通过测量与钙相关的血清和尿标记进行测定，包括但不限于总的和离子的血清钙、白蛋白、血浆PTH、PTHrP、磷酸盐、维生素D和镁。

在其他情况下，功效可以通过测量骨矿物质密度(BMD)，或通过测量在血清或尿中关于骨形成和/或骨再吸收的生化标记进行测定。潜在骨形成标记包括但不限于总碱性磷酸酶、骨碱性磷酸酶、骨钙素、羧化不全骨钙素、C末端原胶原I型多肽和N末端原胶原I型多肽。潜在骨再吸收标记包括但不限于羟脯氨酸、羟赖氨酸、糖基-半乳糖基羟赖氨酸、半乳糖基羟赖氨酸、吡啶啉、脱氧吡啶啉、N末端交联的I型胶原的端肽、C末端交联的I型胶原的端肽、通过MMP产生的C末端交联的I型胶原的端肽、骨唾液蛋白、酸性磷酸酶和耐酒石酸盐酸性磷酸酶。

在其他情况下，功效可以通过相对于给药前(基线)水平在PTH中的减少百分比，和/或通过实现如一般公认为对患者有利(例如通过国家肾脏基金会建立的指南)的希望PTH水平进行测定。再在其他情况下，功效可以通过测量与甲状旁腺功能亢进疾病相关的甲状旁腺腺体增生中的减少进行测定。

预期当所需治疗方法施用于有此需要的对象时，治疗方法将产生如通过例如下述中的一种或多种测量的效应：总血清钙、离子血清钙、总血液钙、离子血液钙、白蛋白、血浆PTH、血液PTH、PTHrP、磷酸盐、维生素D、镁、骨矿物质密度(BMD)、总碱性磷酸酶、骨碱性磷酸酶、骨钙素、羧化不全骨钙素、C末端原胶原I型多肽、N末端原胶原I型多肽、羟脯氨酸、羟赖氨酸、糖基-半乳糖基羟赖氨酸、半乳糖基羟赖氨酸、吡啶啉、脱氧吡啶啉、N末端交联的I型胶原的端肽、C末端交联的I型胶原的端肽、通过MMP产生的C末端交联的I型胶原的端肽、骨唾液蛋白、酸性磷酸酶和耐酒石酸盐酸性磷酸酶。效应包括预防治疗以及现有疾病的治疗。

生物学有效分子可以以共价键或非共价相互作用可操作地连接至所需肽。在具体实施方案中，通过对作为连接分子的部分的化合物赋予性质，可操作地连接的生物学有效分子可以改变所需化合物的药物代谢动力学。生物学有效分子可以对所述化合物赋予的一些性质包括但不限于：递送化合物至体内的不连续位置；在体内所需位置处浓缩化合物的活性且减少其在其他地方的效应；减少用化合物治疗的副作用；改变化合物的渗透性；改变化合物生物利用度或对体内的递送率；改变用化合物治疗的效应长度；改变化合物的体外化学稳定性；改变化合物的体内稳定性、半衰期、清除率、吸收、分布和/或排泄；改变化合物的开始率和效应衰变；通过允许化合物具有效应提供允许作用。

在进一步方面，所述化合物可以缀合至聚乙二醇(PEG)。所选PEG可以具有任何方便的分子量，并且可以是线性或分支的，并且可以任选通过接头缀合。PEG的平均分子量优选范围为约2千道尔顿(kDa)至约100kDa，更优选约5kDa至约40kDa。可替代地，使用的PEG部分可以是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20kDa。

所述化合物可以通过位于化合物上的任何位置处的合适氨基酸残基缀合至PEG。所述化合物可以任选含有PEG与之缀合的另外氨基酸残基，包括例如另外的含胺残基例如赖氨酸。

聚乙二醇化的肽在本领域中已知增加缀合肽的血清半衰期。用于形成聚乙二醇化的肽的多种方法是本领域已知的。例如，PEG部分可以连接至通过请求保护的肽的氨基末端、羧基末端或者通过请求保护的肽的侧链连接，任选通过连接基团的存在。在其他实施方案中，PEG部分可以连接至含硫醇氨基酸例如半胱氨酸的硫，或可以与含胺氨基酸例如赖氨酸的侧链偶联。

PEG基团一般通过经由在PEG部分上的反应基团(例如醛、胺、肟、肼硫醇、酯或羧酸基团)与所述化合物上的反应基团(例如醛、胺、肟、肼、酯、酸或硫醇基团)的酰化或烷基化而附着至所述化合物，所述反应基团可以位于所述化合物的氨基末端、羧基末端或侧链位置处。用于制备聚乙二醇化的合成肽的一种方法由通过溶液中的缀合物连接组合肽和PEG部分组成，所述肽和PEG部分各自具有朝向彼此相互反应的官能团。肽可以使用常规溶液或固相合成技术容易地制备。肽和PEG的缀合通常在水相中完成，并且可以通过反相HPLC监控。聚乙二醇化的肽可以使用本领域技术人员已知的标准技术容易地纯化且表征。

所述化合物的一种或多种个别亚单位还可以用多种衍生试剂进行修饰，所述衍生试剂已知与特异性侧链或末端残基反应。例如，赖氨酰残基和氨基末端残基可以与琥珀酐或其他相似羧酸酐反应，其逆转赖氨酰或氨基残基上的电荷。其他合适的试剂包括例如酰亚胺酯例如甲基吡啶亚胺甲酯；吡哆醛；磷酸吡哆醛；氯硼氢化物；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2，4，-戊二酮；和转氨酶催化的与乙醛酸的反应。精氨酰残基可以通过与常规试剂反应进行修饰，所述常规试剂例如苯甲酰甲醛、2，3-丁二酮、1，2-环己二酮和茚三酮。

另外，所述化合物可以进行修饰以包括非阳离子残基，其提供用于开发抗体用于生物分析ELISA测量、以及评估免疫原性的免疫原性残基。例如，所述化合物可以通过掺入酪氨酸和/或甘氨酸残基进行修饰。备受关注的酪氨酰残基的特定修饰是将光谱标记引入酪氨酰残基内。非限制性例子包括与芳香族重氮化合物或四硝基甲烷反应。最通常地，N乙酰咪唑和四硝基甲烷分别用于形成O-乙酰基酪氨酰和3-硝基衍生物。

VII.包含公开的化合物的试剂盒

本发明还提供了用于执行本发明的治疗方案的试剂盒。此类试剂盒包含单独或与以药学可接受形式的其他试剂组合的，以药学可接受形式的、治疗有效量的具有作为CaSR调节剂活性的所述化合物。优选的药物形式包括与无菌盐水、右旋糖溶液、缓冲溶液、无菌水或其他药学可接受的无菌流体组合的所述化合物。可替代地，组合物可以包括抗微生物剂或抑菌剂。可替代地，化合物可以是冻干或脱水的。在这种情况下，试剂盒可以进一步包含优选无菌的药学可接受的溶液，以形成用于注射目的的溶液。在另一个实施方案中，试剂盒可以进一步包括优选以无菌形式包装的针或注射器，用于注射组合物。在其他实施方案中，试剂盒进一步包含用于将组合物施用于对象的指导工具。指导工具可以是书面插页、录音磁带、视听磁带、或任何其他指导组合物对对象的施用的工具。

在一个实施方案中，试剂盒包含(i)含有具有作为CaSR调节剂活性的所述化合物的第一容器；和(ii)使用指导工具。在另一个实施方案中，试剂盒包含(i)含有如本文所述化合物的第一容器；和(ii)含有用于稀释或重构的药学可接受的媒介物的第二容器。

在另一个实施方案中，试剂盒包含(i)含有具有作为CaSR调节剂活性的所述化合物的第一容器；和(ii)含有抗升钙(anticalcemic)试剂的第二容器；和(iii)使用指导工具。

在一个实施方案中，抗升钙试剂是选自下述的试剂：二磷酸盐试剂，激素替代疗法治疗试剂，维生素D治疗，维生素D类似物，例如ZEMPLAR^TM(帕立骨化醇)； (骨化三醇)、(阿法骨化醇)和(度骨化醇)，低剂量PTH(含或不含雌激素)和降钙素。

在相关方面，本发明提供了包含上文描述的试剂盒内容物的制造物品。例如，本发明提供了包含单独或与其他试剂组合的有效量的所述肽，和指示本文描述的用于治疗疾病的用途的指导工具。

实施例

提供下述实施例以举例说明而不是限制本文描述的化合物和方法。多种修饰可以由技术人员作出，而不背离本文描述的主题的真实精神和范围。

实施例1

在Ac-c(C)arrrar-NH₂处理的动物中的疾病进展

使用肾功能不全的5/6肾切除术(Nx)大鼠模型评价Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的疗效。5/6 Nx雄性大鼠得自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。这些大鼠已经历一个肾和另一个肾的2/3的手术切除，并且喂养高磷酸盐饮食。所有使用动物的实验操作均根据IACUC指南进行。使用单向ANOVA与Bonferroni事后检验执行统计分析。所有p值均为额定的。

A.PTH抑制

雄性5/6 Nx大鼠用以1mg/kg(IV)剂量通过IV注射的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)、盐水(IV)或以10mg/kg(PO)剂量的西那卡塞每天给药，共28天。定期获得尾静脉血样用于测量PTH。使用Immutopics BioActive Intact ELISA(Cat#60-2700；Immutopics，SanClemente，CA)测量PTH。

在4周后，平均基线PTH水平范围为413-498pg/mL(图1)。在最后一次给药后6小时获得的测量显示PTH水平在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物和用西那卡塞处理的动物中减少。在最后一次给药后16小时和48小时获得的测量显示PTH水平在用西那卡塞处理的动物中已增加，但PTH水平在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物仍被抑制。

B.甲状旁腺腺体增生

雄性5/6 Nx大鼠用以3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)每周三次给药，共6周。对照动物未经处理。在处死时，取出组织样品用于免疫组织化学(IHC)分析，以测量甲状旁腺腺体增生的程度。

使用溴脱氧尿苷(5-溴-2′-脱氧尿苷，BrdU)分析来自动物的甲状旁腺腺体。

相对于未经处理的对照，来自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物的甲状旁腺腺体具有更少的BrdU阳性细胞(图2A-C)，指示在经处理的动物中减少的甲状旁腺腺体增生。

另外，相对于未经处理的对照，甲状旁腺腺体重量在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQID NO：3)处理的动物中减少(图2D)。

C.异位钙化

雄性5/6 Nx大鼠用以0.3、1或3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或者媒介物对照(SC)每周三次给药，共6周。在处死时，使用von Kossa方法通过IHC就钙染色分析剩余肾的切片。如图3A-B中所示，来自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)(3mg/kg)处理的动物的肾切片具有比来自对照动物的肾切片更少的钙化。

雄性5/6 Nx大鼠用以3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)每周三次给药，共6周。对照动物未经处理。在处死时，取出主动脉和肾组织样品，并且使用原子发射光谱法进行分析。如图3C中所示，来自用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)(3mg/kg)处理的动物的主动脉和肾具有比未经处理的动物基本上更少的钙含量。

D.肾功能

雄性5/6 Nx大鼠用以0.3、1或3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或者媒介物对照(SC)每周三次给药，共6周。定期获得尾静脉血样，以使用QuantiChrom^TM试剂盒(DICT-500；BioAssay Systems，Hayward，CA)测量血清肌酸酐，肾功能的标记。

平均基线肌酸酐水平(处理前)范围为约1.06mg/dL-约1.09mg/dL。经过6周研究，接受媒介物的动物显示血清肌酸酐中的大增加(图4)。相比之下，在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)(3mg/kg)处理的动物中，血清肌酸酐中的升高经过六周研究以剂量依赖性方式被抑制。

E.PTH受体表达

雄性Nx大鼠用以3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)每周三次给药，共6周。年龄匹配的正常大鼠用作对照。在处死时，取出来自5/6 Nx大鼠和对照的甲状旁腺腺体，并且使用抗体染色组织切片，以检测CaSR、维生素D受体和FGFR1蛋白质。

与正常对照的甲状旁腺腺体中相比较，在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理的动物的甲状旁腺腺体中可见更高水平的CaSR(图5A)、FGFR1(图5B)和维生素D受体(图5C)。

F.在洗脱后的基线PTH

雄性Nx大鼠在第1、3、6和8天时用以1或3mg/kg(SC)剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)处理1周(图6A)。在第8天时的剂量随后为1周冲洗。

如图6B中所示，如在1周洗脱后测量的，接受3mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)的大鼠具有基线PTH中的50％减少。

实施例2

Ac-c(C)rrarar-NH₂处理的动物中的疾病进展

使用大鼠中的腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭模型评价Ac-c(C)rrarar-NH₂，(SEQ IDNO：28)的治疗功效。大鼠得自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)。大鼠喂养含有0.75％腺嘌呤的低蛋白质(2.5％)、高磷(0.92％)饮食(Teklad Custom Diet)。动物随机指定为接受媒介物(10mM琥珀酸、0.85％NaCl、0.9％苯甲醇，pH 4.5)或者约0.3或1mg/kg(SC)的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)的每日皮下剂量，共4周。对照组喂养不含腺嘌呤的相同高磷饮食和组织。处理在饮食开始时起始。所有使用动物的实验操作均根据IACUC指南进行。使用单向ANOVA与Bonferroni事后检验执行统计分析。所有p值均为额定的。

A.PTH抑制

Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理对尿毒症大鼠中的PTH水平的作用显示于图7中。使用Immunotopics BioActive Intact ELISA(Immutopics，San Clemente，CA)测量血浆PTH。在用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)给药前，所有处理组均具有相似的血浆PTH水平。无腺嘌呤对照动物经过4周研究维持一致的血浆PTH水平。对于媒介物处理的尿毒症动物，PTH水平经过研究过程显著升高。用以0.3或1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQID NO：28)处理2和4周的尿毒症动物具有显著低于媒介物处理的动物的血浆PTH。

B.肌酸酐抑制

Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理对血清肌酸酐水平的作用显示于图8中。使用QuantiChrom^TM试剂盒(BioAssay Systems，Hayward，CA)测量血清肌酸酐水平。在4周结束时与非尿毒症动物的对照组相比较，来自媒介物处理的尿毒症动物的血清肌酸酐水平高大约8-10倍。与媒介物处理的尿毒症大鼠相比较，用以0.3和1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理的尿毒症动物具有显著更低的血清肌酸酐水平。与媒介物处理的对照相比较，用以1mg/kg Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQID NO：28)处理的尿毒症动物具有低大约50％的血清肌酸酐水平。

C.磷抑制

Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理对血清磷水平的作用显示于图9中。虽然相对于非尿毒症对照，血清磷水平在尿毒症动物中增加，但用以0.3和1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理4周的尿毒症动物显示血清磷水平中的显著减少。

D.血清钙抑制

Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理对血清磷水平的作用显示于图10中。虽然尿毒症大鼠中的血清钙水平类似于对照大鼠中的钙水平，但与媒介物处理的大鼠相比较，用以0.3和1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理4周的尿毒症动物显示血清钙中的显著剂量依赖性减少。

E.血清钙-磷抑制

Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理对血清磷水平的作用显示于图11中。使用Cobas c-501分析仪测定磷和钙。与非尿毒症动物相比较，用媒介物处理4周的尿毒症动物具有钙-磷乘积中的大约2.5倍增加。用以0.3或1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ IDNO：28)处理4周的尿毒症动物分别显示血清钙-磷乘积中的大约20％和40％减少。

F.甲状旁腺腺体增生

还使用腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠模型测定Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ IDNO：28)处理对甲状旁腺腺体扩大的作用。在用以0.3或1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理4周后，处死尿毒症大鼠，并且取出甲状旁腺腺体，修剪并称重。与来自用媒介物处理的组的甲状旁腺腺体相比较，用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理的组中的甲状旁腺腺体在重量中显著减少。与来自非尿毒症动物的甲状旁腺腺体相比较，在用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理的组中的甲状旁腺腺体在重量中并无显著不同。

G.血管钙化

还使用腺嘌呤诱导的慢性肾功能衰竭的大鼠模型测定Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ IDNO：28)处理对血管钙化的作用。在用以0.3或1mg/kg剂量的Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ IDNO：28)处理4周后，处死尿毒症大鼠，并分析主动脉组织。通过茜素红和von Kossa方法加工并染色主动脉组织，以显现血管矿化。使用0-5的评分系统，以设盲方式评分来自所有动物的von Kossa染色的主动脉的相同切片。茜素红和von Kossa染色结果显示来自用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理的尿毒症大鼠的主动脉具有很少矿化或无矿化。如图13中举例说明的，67％(10/15)的用媒介物处理的尿毒症动物证实阳性von Kossa染色，指示主动脉矿化。用Ac-c(C)rrarar-NH₂(SEQ ID NO：28)处理的尿毒症大鼠证实没有明显的vonKossa染色。仅0.3mg/kg处理组中的一个动物显示一些最低限度的矿化。

实施例3

Ac-c(C)arrrar-NH2的单次给药和对iPTH和钙的作用

执行临床研究，以评价对诊断有CKD-BMD和SHPT并接受血液透析的患者，升高通过IV推注施用的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的单次剂量的安全和耐受性。生成数据以测量患者血清完整PTH(iPTH)和血清钙中的改变，以及单个剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)的生物利用度。

设计并执行在接受每周三次血液透析(HD)的对象中的双盲、随机化、安慰剂对照的多中心研究。主要入选标准包括在研究开始前至少3个月的血液透析、血清iPTH水平大于300pg/mL、血清cCa(校正的钙)水平大于或等于9.0mg/dL，并接受稳定剂量的活性维生素D或类似物、磷酸盐结合剂和钙补充剂。

群组1、2和3用2时期交叉设计进行。每个群组加入4个对象，1∶1随机化为Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)随后为安慰剂，或安慰剂随后为Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。对于群组1-3的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)剂量水平为5、10和20mg。群组4加入8个对象，其1∶1随机化为平行组中的40mg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂。群组5加入8个对象，其1∶1随机化为平行组中的60mg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂。

对象在一周的最后一次HD期间后进入临床研究单位，并且在因血液透析出去前观察3天透析间期。Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂在HD完成后2-4小时通过IV推注注射进行施用。

使用在Roche分析仪上的电化学发光免疫测定(ECLIA)来测定血清iPTH水平。用下述等式将钙水平对于白蛋白＜4g/dL进行调整：cCa＝[以mg/dL测量的Ca]+[4-(以g/dL的白蛋白)]x 0.8。

在研究药物施用后7天期间捕获不利事件。

A.使用非区室分析的几何平均PK参数

对得自经治疗的对象的样品执行药物代谢动力学(PK)分析，以测定施用的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的生物利用度。下表2和图14中呈现的结果显示全身暴露在剂量范围评估上以剂量相关方式增加。如C_max和AUC_all值中可见的，在Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQID NO：3)总血浆暴露中观察到的增加合理地与施用的剂量成比例。几何平均终末消除半衰期(81.7小时-175小时)看起来跨越剂量范围评估是合理地可比较的。作为稳态(Vss)值的清除率(CL)和分布体积看起来在范围评估上是剂量不依赖性的。Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQID NO：3)的总清除率为大约2L/小时。Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)通过血液透析从中央区室中容易地清除。血液透析清除率估计为约33L/小时。

表2

B.Ac-c(C)arrrar-NH₂对血清iPTH和校正的钙水平的作用

还在这个研究中测定Ac-c(C)arrrar-NH₂施用对血清iPTH和校正的钙水平的作用。对象在血液透析完成后2-4小时施用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)的单个IV推注。随后分析来自每个对象的血液，以测定iPTH和校正的钙水平。在Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ IDNO：3)施用后，在iPTH水平中的改变百分比显示于图15中。用以所有剂量的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理导致iPTH中的剂量依赖性降低。改变在给药后30分钟内发生。iPTH抑制的持续时间也是剂量依赖性的，具有与Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)剂量相关的经过3天透析间期的持续减少，所述剂量大于或等于20mg、Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)单个剂量施用对校正的钙水平的作用显示于图16中。用10mg、20mg、40mg或60mg给药的Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)组中的平均校正的钙在观察期过程中减少高达约10-14％，其中最大平均降低在40mg组中出现。在安慰剂和Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)5mg组中，在平均校正的钙中随着时间过去不存在明显改变。

C.Ac-c(C)arrrar-NH₂施用的安全概况

在Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)或安慰剂施用后7天，记录由每个对象经历的不利事件。数据呈现于下表3中。在10mg剂量群组中已用安慰剂治疗的一个对象中出现单个严重不利事件。该对象在接受Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)前从研究中中断。不存在恶心、呕吐或腹泻的报道。

表3

实施例4

药物临床试验的重复剂量

血液透析患者用10mg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)进行治疗，每周3次，共4周。血清iPTH水平在药谷时进行测量，所述药谷之后紧接着是对象接受其下一次Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)处理。图17中呈现的数据显示在接受用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQID NO：3)治疗的对象中的iPTH水平经过4周时期稳定降低。

数据还就从基线的血清PTH水平中的改变百分比而言进行分析。如图18中所示，在Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)给药的最后一天时，血清iPTH的基线水平比给药第一天时的水平小约50％。

来自对象的血清样品进一步在用Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)最后给药后的4周随访期过程中进行分析。图19中呈现的数据显示在4周治疗期过程中以及在4周随访期过程中在对象中的血清iPTH水平，在所述4周治疗期中施用10mg/kg Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

Claims

1.一种用于治疗对象中的慢性肾病矿物质骨症(CKD-MBD)的方法，其包括施用治疗有效量的包含下述通式的拟钙剂：

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇

其中

X₁是包含含硫醇基团的亚单位；

X₅是阳离子亚单位；

X₆是非阳离子亚单位；

X₇是阳离子亚单位；和

X₂、X₃和X₄中的至少两个独立地是阳离子亚单位。

2.权利要求1的方法，其中所述拟钙剂是肽。

3.权利要求1的方法，其中所述拟钙剂是Ac-c(C)arrrar-NH₂(SEQ ID NO：3)。

4.权利要求1的方法，其中所述对象是透析前的。

5.权利要求1的方法，其中所述对象已诊断有3期或4期慢性肾病。

6.权利要求1的方法，其中所述病症的特征在于尿毒症。

7.权利要求1的方法，其中所述病症的特征在于甲状旁腺腺体增生。

8.权利要求1的方法，其中所述病症的特征在于软组织钙化。

9.权利要求1的方法，其中所述病症的特征在于肾功能不全。