MX2007009405A - Compuestos inhibidores de raf y metodos. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos de pirazolilo de las Formulas Ia y Ib que son utiles para inhibir la cinasa Raf y para tratar trastornos mediados por la misma. Se describen metodos para utilizar los compuestos de pirazolilo para el diagnostivo, prevencion o tratamiento in vitro, in situ e in vivo de estos trastornos en celulas de mamifero o condiciones patologicas asociadas.

Description

COMPUESTOS INHIBIDORES DE RAF Y MÉTODOS CAMPO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la invención se refiere a compuestos novedosos de pirazolilo los cuales son inhibidores de la cinasa Raf, asi como también a composiciones que contienen estos compuestos y a métodos de uso. Los compuestos de pirazolilo son útiles para inhibir la cinasa Raf y para tratar trastornos mediados por la cual. La invención también se refiere a métodos para utilizar compuestos de pirazolilo para la diagnosis o el tratamiento in vitro, in situ e in vivo de células de mamífero, o condiciones patológicas asociadas ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La cascada de: cinasas Raf/MEK/ERK (cinasas reguladas por señales extracelulares) es esencial en la transmisión de señales de receptores de membrana para factores de transcripción que controlan la expresión de genes culminando la regulación del progreso del ciclo celular (Robinson, MJ y Cobb, MH ( 1997) Curr . Opin. Cell Biol. 9:180-186) . Esta cascada puede impedir la muerte de células a través de la activación de ERK2 y p90(Rsk) y la fosforilación de proteínas apoptóticas | y reguladoras del ciclo celular (Shelton JG y colaboradorejs (2003) Oncogene. 22 (16) : 2478-92 ) . REF: 185112 La cascada de cinasas PI3K/Akt también controla la apoptósis y puede fosforilar muchas proteínas apoptóticas y reguladoras del ciclo celular. Estas vías se entrecruzan ya que Akt puede fosforilar a Raf (Fibrosa rcoma que Crece Rápidamente) y da por resultado su inactivac:ión y Raf puede requerirse para los efectos anti-apoptóticos (ie Akt. Raf es una serina-treonina proteína cinasa clave la cual participa en la transmisión de mensajes de crecimiento, anti-apoptóticos y de diferenciación. Estas seña les pueden iniciarse después de la ligadura de receptores y se trans iten a miembros de la cascada de cinasas MAP que activan subsecuentemente los factores de transcripción que controlan la expresión de genes. Raf es una familia de múltiples genes la cual expresa las oncoproteína cinasas: Raf-1, A-Ra?f y B-Raf (McCubrey JA. y colaboradores (1998) Leukemia. 1 12) :1903-1929; Ika a y colaboradores (1988) Mol, and Cell Biol. 8 (6) :2651-2654; Sithanandam y colaboradores (1990) Oncogene 5:1775-1780; Konishi y colaboradores (i1995 ) Biochem. and Biophys. Res Comm. 216(2) :526-534) . Las tres cinásas Raf están presentes ? funcionalmente en ciertas células hematopoyéticas humanas y su expresión aberrante puede dar por resultado la anulación de la dependencia a citocinas. Sus mecanismos reguladores difieren debido a que C-Raf A-Raf requieren la fosforilación adicional de! serina y tirosina dentro de la ¡ región N del dominio de sinasa para la actividad completa (Masón y colaboradores (1999) EMBO J. 18:2137-2148) y B-Raf tiene una actividad de c:.nasa básica mucho más alta que ya sea A-Raf o C-Raf. Las tres oncopro:eínas Raf juegan papeles críticos en la transmisión de señales mitógenas y anti apoptóticas. Se ha mostrado recientemente que B-Raf es mutado frecuentemente en vari os cánceres humanos (Wan y colaboradores (2004) Cell 116:855- 67) . El desarrollo de inhibidores específicos paira Raf puede resultar eficaz en el tratamiento del cáncer. La serina/treonina cinasa ! citoplásmica B-Raf y las tirosina cinasas receptoras de la familia de receptores de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR, por sus siglas en inglés) son activadas frecuentemente en el caneer por muta,ciones de un aminoácido equivalente. Los estudios estructu ales han proporcionado entendimientos importantes en la r izón por la cual estas cinasas muy diferentes comparten puntos de gran actividad | oncogénicos, similares y lá razón pe r la cual la región de I juxtamembrana del PDGFR también es un objetivo oncogénico i | frecuente. (Dibb NJ (2004) Nature Reyiews. Cáncer. 4(9):718- I 27) La transformación de melanocitos normales en células de melanoma se realiza por medio de la activación de las vías estimuladoras de erecimiento, conduciendo típicamente a la proliferacpLón célular y la inactivación de 'vías apoptóticas y supresoras de tumores. Los inhibidores de de la cinasa MAP que es común en los carcinomas pulmonares no microcíticos (NSCLCs, por sus siglas en inglés) , inclusive V600E y otras mutaciónes identificadas como novedosas, residuos alteradores que son importantes en la fosforilación de B-Raf mediada por AKT 1o cual sugiere que la alteración de la inhibición de B-Raf índucída por AKT puede jugar un papel importante en la transformación maligna. Aunque >90% de mutaciones de B-Raf en me?lanoma invoclucran al codón 600 (57 de 60), 8 de 9 mutaciones de B-Raf reportadas hasta la fecha 10 en NSCLC son diferentes de V600 (89%; P < 10 (-7)), lo que sugiere enfáticamente que las mutac iones de B-Raf en NSCLC son cuantitativamente diferentes de aquellas en el melanoma; de esta manera, pueden haber diferencias terapéuticas entre el cáncer pulmonar y e 1 melanom en respuesta a los 15. inhibidores de Raf (Karásarides y colaboradores (2004) Oncogene 23 (37 ): 6292-6298 ; Bollag y colaboradores (2003¡ Current Opinión in Invest. Drugs 4 ( 12) : 1436-1441) . Aunque no son comunes, las mutaciones de B-Raf en cánceres pulmonares de humanos pueden identificar un subconjunto de tumores 20 sensibles a la terapia fijada como objetivo (Brose MS y colaboradores (2002) Cáncer Researc i 62(23) :6997-7000; US 2005/267060) Las proteína cinaias Raf son componentes claves de las vías de transducción de señales por medio de las cuales 25 los estímulos extracelulares específicos producen respuestas i -P(=Y) (0Ra) (0RC -P(=Y) (FR)NRaRc -SRa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -S(0)2NR ,a"0Rb", -S(0) (OR") S(0)2(ORa -SC(=Y)Ra, -SC(=Y)0Ra y -SC(=Y)NRaRE o y R 2?1 junto con los atomos a los cuales están unidos forman un anillo heterocíclico, en donde el anillo heterocíclico es sustituido opciónalmente por uno mas grupos seleccionados independientemente de F, Cl, Br, I, alquilo, alquenilo y alquinilo; R 23 es H, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, ilquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a átomos de carbono, arilo de 20 átomos de carbono, heterociclilo de 2 a 20¡ átomos de carbono o un grupo protector; Ra y R son independíentemente H, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 8 átomos de carbono; arilo de 6 a 20 átomos de carbono o heterociclilo de 2 a 20 átomos de carbono; Y es independientemente 0, S, NR20, +N(0)R20, N(OR 20, N(0) (OR ,2'0u) o N-NR 20 R , y el grupo Jotector se selecciona de trialquilsililo, dialquil: enilsililo, benzoato, bencilo, benciloximetilo, metilo, metoximetilo, triarilmetilo, ftalimido, t-butoxicarbonilo (BOC) , benciloxicarbonilo (CBz) , 9-fluorenilmetilenoxicarbónilo (Fmoc¡ y tetrahidropiranilo. Un aspecto de la invención es proporcionar métodos para inhibir la actividad de cinasas Raf por medio del contacto de estas enzimas con una cantidad inhibitoria efectiva de los inhibí dores novedosos de la presente invención o una composición que cont Lene estos compuestos, Otro aspecto de la invención son los métodos para tratar trastornos tales como, pero no limitados a, un trastorno hiperproliferativo (por ejemplo, cáncer) , enfermedad cardiovascular, enfermedad neurodegenerativa o enfermedad inflamatoria, por medio de la administración a un mamífero en necesidad de este tratamiento de una cantidad efectiva de uno o más compuestos de la invención o una composición que contiene el compuesto y un ortador o excipiente. Otro aspecto de la invención son los métodos para tratar el cáncer al administrar a un mamífero en necesidad de este tratamiento una cantidad efectiva de uno o más compuestos de la invención en combinación con uno o más compuestos adicionales que tienen propiedades carcinoestáticas . i Esta invención también proporciona un compuesto de esta invención para el uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno ta,l como, etro no limitado a, un trastorno hiperproliferativo (pori ejemplo, cáncer) , enfermedad cardiovascular,] enfermedad neurodegenerativa o enfermedad inflamatoria Un aspecto adicio inal de la invención es el uso de este documento tengan los ¡siguientes significados : El término "alqulilo" utilizado en este documento se refiere a un radical de hidrocarburo monovalente saturado de cadena lineal o ramificada de a dieciocho átomos de carbono, en donde el radical alqui lo puede ser sustituido opcionalmente de manera independiente por uno o más sustituyentes descritos posteriormente. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen radicales de hidrocarburo de 1 a átomos de carbono tal como metilo (Me, -CH3) , etilo (Et, -CH2CH3) , 1-propilo (n-Pr, I n-propilo, -CH2CH2CH3) , 2-propilo (i-Pr, i-propilo, -CH(CH3?)2), 1-but ilo (n-Bu, n-butilo, CH2CH2CH2CH3) , 2-metil-l-propilo (i Bu, i-butilo, CH2CH(CH3)2) , 2-butilo (s-Bu, s-butilo, -CH(CH3)CH2CH3) , 2-metil- 2-propilo (t-Bu, t-butilo, -C(CH3)3) , 1-pentilo (n-pentilo, -' CH CH2CH2CH2CH3) , 2-pentilo -CH(CH3)CH2CH2CH3) , 3-pentilo (- CH (CH2CH3) 2) , 2-metil-2-bu tile (-C CH3)2CH2CH3) , 3-metil-2- butilo (-CH(CH3)CH(CH3)2) , 3-metil-l- butilo (- CH2CH2CH(CH3)2) , 2-metil-l-b utilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3) , 1-hexilo (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3) , 2-hexilo (-CH (CH3) CH2CH2CH2CH3) , 3-hexilo 1 (-CH(CH2CH3) (CH2CH2CH3) ) , 24metil-2-pe ntilo (- C(CH3)2CH2CH2CH3) , 3-metil-24pentilo (• CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3) , 4- metil-2-pentilo (-CH (CH3) CHeCH (CH3) 2) , 3-metil-3-pentilo (- C(CH3) (CH2CH3)2) , 2-metil-3-bentilo (-CH (CH2CH3) CH (CH3) 2) , 2,3- dimetil-2-butilo (-C (CH3) 2C¡H (CH3) 2) ¡3, 3-dimetil-2-butilo (- i CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptil 1-octilo, ciclopropilo, independiente por uno o más sustituyentes descritos en este documento . Los términos "heterociclo", "heterociclilo", "anillo heterocíclico" y "heteroarÜlo" se refieren a un radical saturado, parcialmente insaturado (es decir, que tiene uno o más enlaces dobles y/o triples dentro del anillo) o carbocíclico aromático ds 3 a 20 á omos en el anillo en los cuales al menos un átomc en el a:nillo es un heteroátomo seleccionado independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre, los átomos en el anillo rest antes son carbono, donde I I uno o más átomos en el anillo son s,ustituidos opcionalmente de manera independiente po:: uno o má i sustituyentes descritos posteriormente. Un heterociclo puede ser un monociclo que tiene de 3 a 7 miembros en el ani lo (de 2 a 6 átomos de carbono y de 1 a 3 heteroátomos sele cionados de N, O, P y S) o un biciclo que tiene de 7 a 10 miembros en el anillo (de 4 a 9 átomos de carbono y de 1 a 3 he1teroátomos seleccionados de N, O, P y S) , por ejemplo: un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5, 6], o [6,6]. Los heterociclos se describen en 1 Paquette, Leo A.; "Principies qf Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamín, Nueva York, 1968), particularmente los Capítulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, Nueva York, 1950 hasta la actualidad), en particular los Volúmenes 13, 14, 16, 19 y 28; y J. Am . Chem . Soc . (1960] 82:5566. El heterociclilo [puede ser jn radical unido a átomos de carbono o un radical unido a heteroátomos . El término "heterociclo" incluye tjeterociclcalcoxi. "Heterociclilo" también incluye radicales donde los radicales de heterociclo se fusionan con un anillo carbocíclico, heterocíclico, aromático o heteroaromátJico. Los ejemplos de radicales heterocíclicos incluyen, pero no están limitados a, pirrolidinilo, tetrah idrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetr ahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, piperazinilo, homopiperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homopiperidini o, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1, 3-dioxolanilo, pirazol ¡inilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilimidazolinilo; imidazolidinilo, 3-azabicico [3.1.0] hexanilo, ¡ 3-azabiciclo [ .1.0] heptanilo, azabiciclo [2.2.2] hexanilo, 3H-indoíilquinolizinilo y N-piridil-ureas . Los radicales espiro también están incluidos dentro del alcance de esta definid ón. Los ejemplos de un grupo heterocíclico en donde dos átomos de carbono en el anillo son sustituidos por radicales oxo (=0) son pirimidinonilo y 1, 1-dioxo-tiomor folinilo. Los grupos heterociclo en este documento son s jstituidos opcionalmente de manera independiente poir uno o más sustituyentes descritos en este documento. El término "heteroarilo" incluye 1) anillos de 5, 6 y 7 miembros aromáticos monocíclicos que contienen uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre y 2) sistemas de anillos fusionados de 8 a 20 átomos en donde al menos un anillo aromático contiene uno o más heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, oxígeno y azufre . Los ejemplos de grupos heteroarilo son piridiniilo incldsive, por ejemplo, 2-hidroxipiridinilo) imidazoliloj imidazopiridinilo, pirimidinilo (inclusive, por ejemplo] 4-hidroxipirimidinilo) , pirazolilo, triazolilo, pirazinilo tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, ©xazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo isoqúinolinilo, indolilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, cfLnnolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, isoindolilo, pteridinilo, purinilo, fxadiazolilo, triazolilo, I tiadiazolilo, tiadiazolilo, furaz nilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo y furopiridinilo. Los grupos heteroarilo son sustituidos opcionalmente de manera i i independiente por uno o más sustituyentes descritos en este documento. El heterociclo puede estar unido a C o unido a N donde esto sea posible, A manera de ejemplo y no como limitación, los heterocic >s enlazados a carbono se enlazan en la posición 2, 3, 4, 5 b 6 de una piridina, posición 3, 4, o 6 de una piridazina, posición 2, 4, 5 o 6 de una piridimidina, posición 2, 3, 5 o 6 de una pirazina, posición 2, 3, 5 de un furano, tetrahidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol o tetrahidropirrol, posición 2, 4 o 5 de un oxazol, imidazol o tiazol, posición 3, 4 o 5 de un isoxazol, pirazol o isotiazol, posición 2 o 3 de una aziridina, posición 2, 3 o 4 de una aizetidina, posición 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 de una quinolina o posición 1, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 de una isoquinolina. (2-piridil?, 3-piridilo, 4-piridilo, 5-piridilo, 6-piridilo) . A manera de ejemplo y no como limitación, los heterociclos enlazados al átomo de ni trógeno son enlazados en la posición 1 de una aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2-pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazol, pirazolina, 2-pirazoliná, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolinia, lH-indazol, posición 2 de una isoindol o isoindolina, posición 4 de una morfolina y posición 9 de un carbazol o ß-carbolina . "Carbociclo", "carbocicli ' L.o" y "cicloalquilo" significan un anillo saturado o insaturado, no aromático que tiene de 3 a 12 átomos de carbono como un monociclo o de 7 a 12 átomos de carbono como un biciclo. Los carbociclos monocíclicos tiene de 3 a 6 átomos en el anillo, aún más típicamente 5 o 6 átomo )S en el anillo. Los carbociclos bicíclicos tienen de 7 a 1 2 átomos en el anillo, por ejemplo ordenados como un sistema biciclo [ 4,5], [5,5], [5,6] o [6, 6] o 9 o 10 átomos en el anillo ordenados como un sistema biciclo [5,6] o [6,6] o c mo sistemas conectados tales como biciclo [2.2.1]heptan , biciclo[2.2.2] octano biciclo[3.2.2] nonano, Lbi ejemplos de carbociclos monocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, l-ciclopentLl-enilo, l-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciciohexilo, 1-ciclohex-l-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, l-ciclohex-3-enílo, ciclohexadienilo, cicioheptilo, ciclooctilo, cic ononilo, ciclodecilo, cicloundecilo y ciclododecilo . "Alquilo sustituido", "arilo sustituido", "heterociclilo sustituido" y "carbociclilo sustituido" significan alquilo, aril , heterociclilo y carbociclilo respectivamente, en los cuales uno o más átomos de hidrógeno son reemplazados cada uno independientemente por un sustituyente. Los sustituyentes típicos incluyen, pero no están limitados a X, R, O"] -OR, -SR, -NR2, -NR3, =NR, =N-OR, =0, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, N=C=0, -NCS, -NO, -N02, =N2, -N3, NC(=0)R, -C(=0)R, -C(=f)NR2, -S 3-; -S03H, -S(=0)2R, -OS(=0)2OR, -S(=0)2NR, (=0)R, -0P(=0) (OR)2, -P(=0) (OR)2, -PC-3, -P03H2, -C(=0)R, -C(=0)X, -C(=S)R, -C02R, -C02" -C(=S)OR, -C(=0)SR, -C =S)SR, 4C(=0)NR2, -C(=S)NR2 y -C(=NR)NR2, donde cada X ¡es indeper dientemente un átomo de halógeno (F, Cl, Br o I) y cada R es independientemente H, 5 alquilo de 1 a 18 átomos de carbono] arilo de 6 a 20 átomos de carbono, un heterociclo de 3 a ] 4 átomos de carbono, un grupo protector o un radical de profármaco. Los grupos alquileno, alquenileno y alquinileno como se describieran anteriormente también pueden sustituirse de manera similar. 0 Los términos "tratar" o "tratamiento" se refieren tanto a un tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas o preventivas, en donde el objetivo es prevenir o disminuir la velocidad de (reduci: ) un cambio o trastorno fisiológico indeseado, tal como el desarrollo o la 5 diseminación del cáncer. Para propósitos de esta invención, | los resultados clínicos benéficos o deseados incluyen, pero ¡ no están limitados a, el alivio de síntomas, disminución del I grado de enfermedad, esta'do de enfermedad estabilizado (es I ! decir, sin empeoramiento) , retardo o disminución de la C¡ velocidad del progreso de la enfermedad, mejoramiento o mitigación del estado de enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya s ?ea detectable o no detectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación con la supervivencia esperada si 5: no se recibe un tratamiento. Aquellas personas que necesitan el tratamiento incluyen aquellas que ya tienen la condición o enfermedad así como también aquellas propensas a tener la condición o trastorno o aquellas en as cuales la condición o trastorno debe ser prevenido. La frase "cantidad terapéuticamente efectiva' significa una cantidad ¿le un compuesto de la presente invención que (i) trata o previene la enfermedad, condición o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, condición o trastorno particular o (iii) previene o retarda el comienzo de uno o más síntomas de la enfermedad, condición o trastorno particular descritos en este documento. En el caso del cáncer, la cantidad terapéuticamente efectiva del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir es decir, disminuir la velocidad en algún grado y preferiblemente detener) I la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, disminuir la velocidad e n algún grado y preferiblemente detener) la metástasis de tumores; i nhibir, en algún grado, el crecimiento de tumores; y/o aliviar en algún grado uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. De acuerdo con el grado en el cual el fármaco puede prevenir el crecimiento y/o eliminar las células ¡cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico Para la terapia del cáncer, la eficacia puede medirse, por ejemplc , al valorar el tiempo para el progreso de la enfermedad (TTP, por sus siglas en inglés) y/o determinar la velocidad de respuesta (RR, por sus siglas en inglés) El término "biodisponibilidad" se refiere a la disponibilidad sistémica (es decir, niveles en la sangre/plasma) de una cantidad dada de fármaco administrada a un paciente. La biodisponibilidad es un término absoluto que indica la medición de tanto el tiempo (velocidad) como la cantidad total (grado) de fármaco que alcanza la circulación general de una forma de dosificación administrada, Los términos "cáncer" y "c nceroso" ser refieren a o describen la condición fisiológica en mamíferos que se caracteriza típicamente por un ere cimiento desregulado de células. Un "tumor" compre ¡nde una o más células cancerosas. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero no están limitados a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma leucemia malignidades linfoides. Lbs ejemplos más particulares de estos cánceres incluyen cáncer de células escamosas (por ejemplo, cáncer de células escamosas epiteliales) , cáncer pulmonar que incluye cáncer pulmonar microcítico, cáncer pulmonar no microcítico ("NSCLC"), adenocarcinoma del pulmón y carcinoma escamoso del pulmón, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástr ¡Leo o estomacal que incluye cáncer | gastrointestinal, cáncer pancreático , glioblastoma, cáncer cervical, cáncer ovárico, cáncer hepático, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer mamario, cáncer colónico, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas sauvales, cáncer de riñon o renal, cáncer prostético, cáncer vulval cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinorna anal, carcinoma penil, así como también cáncer de cabeza y cuello. El término "profármaco" utilizado en esta solicitud se refiere a un precursor o forma derivada de una sustancia farmacéuticamente activa que es menos citotóxica para las células tumorales en comparación con el fármaco precursor y es capaz de activarse de manera enzimática o hidrolítica convertirse en la forma precursora más activa. Véase, por ej emplo Wilman, "Prodrugs in Cáncer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, páginas 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) y Stella y colaboradores, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery", Directed Drug Delivery, Borchardt y colaboradores ed.), páginas 247-267, Humana Press (1985). Loi profármacos de esta invención incluyen, pero no están limittaaddooís a, profármacos que contienen fosfato, profármacos que contienen tiofosfato, profármacos que contienen sulfato, pr ofármacos que contienen péptidos, profármacos que tienen D- aminoácidos, profármacos glicosilados, profármaco que contienen ß-lactama, profármacos que contienen feno iacetamida sustituida opcionalmente o profármacos que contienen fenilacetamida I sustituida opcionalmentfe, 5-fluorocitosina otros profármacos de 5-fluorouridina los cuales pueden convertirse en el fármaco libre, cito óxico, más activo. Los ejemplos de fármacos citotóxicos que pueden de rivarse en una forma de profármaco para el uso er. esta invsnción incluyen, pero no están limitados a, aquellos agentes quimioterapéuticos descritos anteriormente. Un "liposoma" es¡ ina vesícula pequeña compuesta de varios tipos de lípidos, fosfolípidos y/o surfactante que es útil para el suministro de un fármaco (tales como los inhibidores de Raf descritos en este documento y, opcionalmente, un agente quimioterapéutico) a un mamífero.

Los componentes del liposoma se ordenan comúnmente en una formación de dos capas, similar al ordenamiento de lípidos de las membranas biológicas, El término "ins rto del paquete" se utiliza para referirse a las instrucciones incL ¡iuidas comúnmente en los paquetes comerciales de pr ductos terapéuticos, que contienen información acerca de indicaciónss, uso, dosificación, administración, contraijndicacione ; y/o advertencias referentes al uso de estos productos terapéuticos . El término "quiral' se refiere a moléculas las cuales tienen la propiedad de falta de capacidad para sobreponerse del compañero de reflejio especular mientras que el término "aquiral" se refiere a moléculas las cuales pueden sobreponerse sobre su compañero de reflejo especular. El término "estereoisómeros' se rreeifiieerree a compuestos los cuales tienen una constitución química idéntica, pero difieren con respecto al ordenamiento en el espacio de los átomos o grupos. "Diastereómero" se refiere a un estereoisómero con dos o más centros de quiralidad y cuyas moléculas no son reflejos especulares entre sí. Los diastereómeros tienen diferentes propiedades físicas, por ejemplo puntos de fusión, puntos de ebullición,! propiedades espectrales reactividades. Las mezclas de diastereómeros pueden separarse bajo procedimientos analíticos de alta resolución tales como la electroforesis y la cromatografía. Los "enantiómeros" se refieren a dos estereoisómeros de un compuesto los cuales no pueden sobreponer reflejos especulares entre sí Las definiciones y convenciones estereoquímicas que se utilizan en este documento emulan generalmente a S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Ddctionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, ¡Nueva York; y Eliel, E. y Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, L994. Muchos compuestos orgánicos existen en formas ópticamente activas, es decir que tienen la capacidad de girar el plano de la luz polarizada linealmente. En la descripción de un pompuesto ópticamente activo, los proteger una funcionalidad partículaIr mientras que reaccionan otros grupos funcionales en el compuesto. Por ejemplo, un vgrupo protector de amino" es un sustituyente unido a un grupo amino que bloquea o protege lla funcionalidad de amino en el compuesto. Los grupos protectores de amino adecuados incluyen acetilo, tr ifluoroacetilo, ftalimido, t-butoxicarbonilo (BOC) , benciloxic Iarbonilo (CBz) y 9-fluorenilmetilenoxicarboni Lo (Fmoc) De manera similar, un "grupo protector de hidroxi" se refi]e<re a un sustituyente de un grupo hidroxi que bloquea o protege la funcionalidad de hidroxi. Los grupos protectores de hidroxi adecuados incluyen acetilo, trialquilsililo,1 dialqui '. Lfenilsililo, benzoilo, bencilo, benciloximetilo, metilo, mettoximetilo, triarilmetilo y tetrahidropiranilo. Un grupo protector de carboxi" se refiere a un sustituyente del grupo carboxi que bloquea o protege la funcionalidad de carboxi Los grupos protectores de carboxi comunes incluyen -CH2CH2S02Ph, cianoetilo, 2- (trimetilsilil) etilo, 2- trimetilsilil) etoximetilo, 2- (p-toluensulfonil) etilo, (p-nitrofeinilsulfenil) etilo, 2- (difenilfosfino) -etilo, niJtroetilo y similares. Para una descripción general de los grupos protectores y su uso véase W. Greene y P. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Third Ed., John Wiley & Sóns, Nueva York, 1999; y P. Kocienski, Protecting Gr]oups, Third Ed. , Verlag, 2003. El término "anima¡1" se refiere a humanos (hombres o R20 y R,2'1 se seleccionan independientemente de H, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 8 átomos de carbono, arilo de 6 a 20 átomos de carbono, heterociclilo de 2 a 20 átomos de carbono y un grupo protector, en donde los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo y heterociclilo son sustituidos opcional e independientemente po c uno o mas grupos seleccionados independientemente de F, Cl, Br, I, -C(=Y)Ra, -C(=Y)ORa -C(=Y)NR aaDRbD, -ORa, -OC(=Y)Ra, -OC(=Y)ORa, -OC(=Y)NRaRD, -OS(0)2(ORa) , OP(=Y) (ORa) (ORD) , -OP(ORa) (0RD) , -P(=Y) (0Ra) (ORD) -P(=Y) (OR)NR ,aanRbc SRa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -S(0)2NR ,adnRb", -S(0) (ORa) , -S (0)2(0R7, -SC(=Y)Ra, -SC(=Y)0Ra y -SC NRaR 7 o R ? y R ,2¿11 juntó con los átomos de carbono a los cuales están unidos forman un anillo heterocíclico saturado o parcialmente insaturado, en donde el anillo heterocíclico es sustituido opcionalmente p¡br uno o más grupos seleccionados independientemente de F, Cl, Br, I, alquilo, alquenilo y alquinilo; R ,23 es H, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 8 átomos de carbono, arilo de 6 a 20 átomos de carbono, heterociclilo de 2 a 20) átomos de carbono o un grupo protector; Ra y R son independíentemente H, alquilo de 1 a I átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 8 átomos de carbono, arilo de 6 a 20 átomos de carbono o heterociclilo de 2 a 20 átomos de carbono; Y es independíentemente O, S, NR20, +N(0)R20, N(OR20), +N(0) (OR20) o N-NR2( R 21 el grupo protector se selecciona de trialquilsililo, dialquil fenilsililo, benzoato, bencilo, benciloximetilo, metilo, metoximetilo, triarilmetilo, ftalimido, t-butoxicarboni 1 (BOC) , oenciloxicarbonil (CBz) , 9-fluorenilmetilenoxicarborjiilo (Fmoc) y tetrahidropiranilo. En otra modalidad, los compuestos de las Fórmulas la y Ib incluyen donde: A forma: (i) un anillo heterocíclico fusionado de 5 6 miembros que tiene uno o dos heteroátomos seleccionados independientemente de O, N y S, (ii) un anillo carbocíclico de 5 o 6 miembros o (iii) ún anillo di fenilo; X se selecciona de un heterociclo de 2 a 20 átomos de carbono, un carbociclo de 3 a 12 átomos de carbono y arilo de 6 a 20 átomos de carbonc R1 se selecciona de H, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 1 a 8 átomos de carbono, un heterocic]lo de 2 a 20 átomos de carbono, un carbociclo de 3 a 12 áto bs de carbono y arilo de 6 a 20 átomos de carbono; R se selecciona de H, F' , Cl, Br, I, -C(=Y)R, arbono, 2 a 20 uenilo, ituidos ionados -SR 20 uinilo, de las de las Los compuestos de la invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por lo tanto, pueden existir en diferentes formas estereoisoméricas. Se propone que todas las formas este::eoisoméricas de los compuestos de la invención, inclusive pero no limitadas a: diastereómeros, enantiómeros y atropisómerps así como también mezclas de los mismos tales como mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Ademas, la presenté invención incluye todos los isómeros geométricos y po sicionales. Por ejemplo, si un compuesto de la presente invención incorpora un enlace doble o un anillo fusiónado, las formas tanto cis- como trans-, así como también 1as mezclas , están incluidas dentro del alcance de la invención. Tanto 1os isómeros posicionales e individuales como una mezcla de isomeros posicionales, por ejemplo, resultante de la N-oxidac ion de los anillos de pirimidina y pirazina o la formas E y Z de los radicales de oxima, también están dentro del alcance de la presente invención . En las estructuras mostradas en este documento, donde no se especifica la estereocuímica de ningún átomo quiral particular, entonces todos los estereoisómeros están contemplados e incluidos como los compuestos de la invención.

Donde la estereoquímica es especificada por un borde sólido o línea punteada que representa una configuración particular, entonces ese estereoisómero es especificado y definido de esa i manera, Los compuestos de la pr sente invención pueden existir en formas no solvatadas así como también solvatadas con solventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol y similares y se p?opone que la invención incluya las formas tanto solvatadas como no solvatadas. También es pos Lble que los compuestos de la presente invención pueda existir en diferentes formas tautoméricas y todas estas formas estan incluidas dentro del alcance de la invención, El término "tautómero" o "forma tautomérica" se refiere a isómeros estructurales de diferentes energías los cuales son i nterconvertibles por vía de una barrera de baja energía. Por ejemplo, los tautómeros de protones (también conocidos como autómeros prototrópicos) incluyen interconversiones por vía de la migración de un protón, tales como las isomerizacion es de ceto-enol e imina-enamina. Los tautómeros de valencia incluyen interconversiones mediante la reorg anización de algunos de los electrones de enlace. Los radicales de hidroxiimilno o alcoxiimino (oxima) de los compuestos de la invención, por ejemplo los compuestos de las Fórmulas I-XIX, pueblen coloca rse en cualquiera de los átomos de carbono del ani|llo A. El radical de oxima puede I existir como el isómero ya sea E o Z o como una mezcla de ambos .

La presente invención también incluye los compuestos etiquetados isotópicamente de la presente invención los cuales son ioénticos a aquellos citados en este documento, excepto por el hecho de que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número atómico diferente de la masa atómica o número atómico encontrado usualmente en la naturaleza. Todos los isótopos de cualquier átomo o elemento particular especificado están contemplados dentro del alcance de los compuestos de la invención y sus usos . Los isótopos ejemplares que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, cloro y yodo, tales como 2H, 3H, nC, 13C, 14 C, 13N, 15N, 150, 170, 180, 32P, 33P, 35S, 18F, 36C1, 123I y 125t, respectivamente. Ciertos compuestos etiquetados isotópicamente de la presen e invención (por ejemplo, ! aquellos etiquetados con H y H ;C) son útiles en ensayos de distribución en el tejido de compuestos y/f sustratos Los isótopos tritiados (es decir, H) y de carbono 14 (es decir, 1 U4,- ) son útiles por su facilidad de preparación y det ect abiladad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (es decir, H) puede ' proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una estabilidad metabólica mayor (por ejemplo, una vida media in vivo incrementada o requerimientos de dosificación reducidos) y por lo tanto puede preferirse en algunas circunstancias, Los isótopos emisores de positrones tales como 150, 13N, 11C y ! 18F son útiles para los estudios de tomografía de emisión de de las Fórmulas la y Ib o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Para propósitos ilustrativos, los esquemas de reacción delineados posteriormente proporcionan rutas potenciales para 5 sintetizar los compuestos de la presente invención así como también los productos intermediarios clave. Para una descripción más detallada de los pasos de reacción individuales, véase la sección de Ejemplos posterior. Aquellas personas expertas en el campo apreciarán que se pueden utilizar otras rutas sintéticas para sintetizar los compuestos l(j) inventivos. Aunque los materiales de partida y reactivos específicos se delinean en los Esquemas de Reacción y se describen posteriormente, otros materiales de partida y reactivos pueden sustituirse fácilmente para proporcionar una variedad de derivados y/o condiciones de reacción. Además, muchos de les compuestos preparados por medio de los 15 métodos descritos posteriormente pueden modificarse adicionalmente en vista de esta descripción utilizando una química convencional bien conocida para aquellas personas expertas en el campo. En la preparación de los compuestos de la presente invención, puede ser necesaria la protección de una funcionalidad 20 remota (por ejemplo, amina primaria o secundaria) de los productos intermediarios. La necesidad para esta protección variará dependiendo del carácter de la funcionalidad remota y las condiciones de los métodos de preparación. Los grupos protectores de amino adecuado (N-I-Pg) incluyen acetilo, 25 trifluoroacetilo, butoxicarbonilo (BOC) , benciloxicarbonilo calentamiento con un exceso de monohidrato de hidrazina en etanol. En presencia de una base y un electrófilo, el pirazol 9 puede ser sustituido ppr R1. Los electrófilos adecuados incluyen, pero no están limitados a, haluros de alquilo, haluros de cicloalquilo, haluros de heterociclilo, tosilatos y mesilatos de alquil tosilatos y mesilatos de cicloalquilo, tosilatos y mesilatos de heterociclilo, cloruros ácidos, cloruros de sulfonilo, esteres alquílicos activados, éteres arílicos activados epóxidos, cetonas a, ß-insaturadas y haluros de arilo activados. La bromación de los pirazoles 10 11 proporción los bromopirazoles intermediarios 1 y 5, donde R es H. Las reacciones de bromación pueden llevarse a cabo utilizando bromo en un solvente adecuado tal domo cloróformo, una mezcla de cloroformo y metanol o una mezcla de ácido acético y acetato de sodio. Típicamente, la bromación puede conducirse entre -40 °C y la temperatura ambiente, pre feriblemente a 0°C. Como una alternativa para el bromo, se puede utilizar N-bromosuccinimida para realizar la bromación de los pirazoles 10 y 11 ¡ intermediario de éster de boronato 28 puede acoplarse por medio de una reacción Suzuki con los productos intermediarios 1 o 5 como en los Esquemas de Reacción I y II MÉTODOS DE PREPARACIÓN En cada uno de 1 s Esquemas de Reacción ejemplares puede ser ventajoso separar los productos de reacción entre sí y/o de los materiales tie partida . Los productos deseados de cada paso o serie de pasos se s paran y/o purifican (se separan posteriormente en este documento) al grado deseado de homogeneidad por medio de las técnicas comunes en el campo.

Típicamente, estas separaciones implican una extracción de múltiples fases, ciclizacion de un solvente o mezcla de solventes, destilación, sublimación o cromatografía. La cromatografía puede implicar cualquier número de métodos que incluyen, por ejemplo: métodos y aparatos para la cromatografía de fase inversa y fase normal; exclusión de tamaño; intercambio iónico; cromatografía líquida de alta, intermedia y baja presión; cromatografía analítica de escala pequeña; de lecho móvil ¡simulado ( SMB, por sus siglas en inglés) y de capa gruesa o delgada preparativa, así como también técnicas de cromat.ografía dé capa delgada de escala pequeña y de evaporación instantánea. Otra clase de métodos de separación implica el tratamiento de una mezcla con un reactivo seleccionado para enlazarse a o volver de otra mane; a separable un producto deseado, material de partida sin •eaccionar, reacción por medio del producto o similares. I stos reactivos incluyen adsorbentes o absorbentes tales como carbón activado, tamices moleculares, medios de intercambio iónico o similares.

Alternativamente, los reactivos pueden ser ácidos en el caso de un material básico, bases en el caso de un material ácido, reactivos de enlace tales como anticuerpos, proteínas de enlace, quelatadores selectivos tales como éteres de corona, reactivos de extracción iónica de 1íquido/líquido (LIX, por sus siglas en inglés) o similares. La selección de métodos , propiados de separación depende del carácter de los mat ríales implicados. Por ejemplo, el punto de ebullición y el peso molecular en la destilación y sublimación, presencia o ausencia de grupos funcionales polares en la cromatografía, estabilidad de materiales en medios ácidos y básicos en la extracción de múltiples fases y similares. Una persona experta en el campo aplicará técnicas más probablemente para lograr la separación deseada . Las mezclas diaátereoméricas pueden separarse en sus diastereoisómeros indi iduales e? base a sus diferencias químicas, físicas por medío de métodos bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo, tal como por medio de la cromatografía y/o cristalización fraccional. Los enantiómeros pueden separarse al convertir la mezcla enantiomérica en una mezc a diastereomérica por medio de la reacción con un compuesto ópticamente activo, apropiado (por ejemplo, un auxiliar quire 1 tal como un alcohol quiral o un cloruro ácido de Mosher) , la separaaión de diastereoisómeros y la conversión (por ejemplo, hidrolización) de los diastereoisómeros individuales los enantiómeros puros orrespondientes . También, algunos tie los compuestos de la presente invención pueden ser atropisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se considetan como parte de esta invención. Los enantiómeros también pueden separarse por medio del uso de una columma de CLAR quiral . Un estereoisóme o individual, por ejemplo un enantiómero, sustancialmenie libre de su estereoisómero puede obtenerse por medio de la resolución de la mezcla racémica utilizando un método tal como la formación de diastereómeros utilizando agentes de reso )lución ópti"camente activos (Eliel, E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113 (3) : 283-302; ) . Las mezclas racémicas de compuestos quirales de la invención pueden separarse y aislarse por medio de cualquier método adecuado, inclusive (1) formación de sales diastereoméricas, iónicas con compuestos quirales y separación por medio de la cristalización fraccional u otros métodos, (2) formación de compuestos diastereoméricos con reactivos derivatizantes, quirales, separación de los diastereómeros y conversión a los estereoisómeros puros y ( 3 [ separación de los estereoisómeros sustancialmente puros o enriquecidos directamente bajo condiciones quirales. Véase : Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology, Irving W. Wainer, Ed. , Marcel Dekker, Inc., Nueva York (1993) . Conforme al método (1), las sales diastereoméricas pueden formarse por medio de la reacción de bases quirales enantioméricamente puras tales como brucina, quinina, efedrina, estricnina, a-metil-ß-metiletilamina (anfetamina) y similares con compuesto s asimétricos que llevan una funcionalidad acida, tal como acido carboxílico y ácido sulfónico. Las sales dias ereoméricas pueden inducirse a la separación por medio de la cristalización fraccional la cromatografía iónica. Para la separación de los isómeros ópticos de compuestos ¡ amino, la adición de ácidos carboxílicos o sulfónicos quira es, tales como ácido canforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico o ácido láctico pueden dar por resultado la formación de las sales diastereoméricas . Alternativamente?l, por medio del método (2), el substrato que será resuelto se hace reaccionar con un enantiómero de un compu esto quiral para formar un par diastereomérico (E. y Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc.,, 1994, página 322) . Los compuestos diastereomérico1s pueden formarse por medio de la reacción de compuestos asimétricos con reactivos de derivatización quirales en'antioméricamente puros, tales como derivados de mentilo, se guido por la separación de los diastereómeros y la hidró isis para producir el enantiómero puro o enriquecido. Un método para determinar la pureza óptica implica hacer esteres quirales, tal como un éster de mentilo, por ejemplo cloroíormiato de (-)mentilo en presencia de una base o un éster de Mosher, acetato de a-metoxi-a- (trifluorometil) fenilo (Jacob III. (1982) J. Org. Chem. 47:4165), de la mezcla racémica y el análisis del espectro de RMN por la presencia de los dos enantiómeros o diastereómeros atropisoméricos . Los diastereómeios estables de los compuestos atropisomepcos pueden s apararse y aislarse por medio de la cromatografía normal y de fase inversa siguiendo los métodos para la separación de naftil-isoquinolinas atropisoméricas (WO 96/15111). Por medio del método (3) , una mezcla racémica de dos enantiómeros puede separarse por medio de la cromatografía utilizando una tase estacionaria quiral ("Chiral Liquid ChromatogJ aphy' 1989: W. J. Lough, Ed, Chapman y Hall, Nueva York; Okamoto, 11990) J. of Chromatogr. 513:375-378). Los enantiójmeros enriquecidos o purificados pueden distinguirse por medio de métodos utilizados para distinguir otras moléculas quirales con átomos de carbono V600E de longitud completa se estimó al medir la incorporación de fosfato radioetiquetado de [?-33P,]ATP en la MEK silvestre modificada cfn FSBA (Ej emplo 8 ) . Métodos adecuados de actividad de Raf dependiente del carácter de la muestr; En las células, la actividad de Raf es determinada por un parte por la cantidad de la Raf expresada en la célula y por otra parte por la cantidad de la Raf activada. La activacióh de la transcripción de los genes que codifican la proteín!a de Raf , en particular en la proteína de B-Raf, puede hacerse por ejemplo al determinar la cantidad del ARNm de Raf. Los métodos estándar de la técnica anterior comprenden por ejemplo la hi bridación de matrices de ADN, RT-PCR, extensión de: cebadore 3 y protección de ARN. Además, la determinación de la activ Ldad de Raf basada en la inducción o represión de lá transcripción del (los) gen (es) de Raf respectivo (s) , también; puede tomar lugar por medio del acoplamiento del promotor de Raf a las construcciones de genes reporteros adecuadas. Los ejemplos para genes reporteros adecuados son el gen de eleoranfenicol transferasa, la proteína fluorescente I verde (GTP, por sus siglas en inglés) y variantes de los mismos, el gen de luciferasa y el gen de Renilla. Sin embar?jo, la detección del incremento de expresión de las proteínas de Raf tarrbién puede hacerse sobre el nivel de proteínas, en este caso la cantidad de proteína que es detectada por ejemplo por medio de anticuerpos dirigidos contra la proteína de Raf, Sin embargo, el cambio de la actividad de la protpína de Raf también puede asentarse para la fosforilación o desfosforilación incrementada o reducida de la proteína. Por ejemplo, la cinasa B-Raf es regulada por la fosforilación de los restos 599Thr y 602Ser ; Zhang B. H. y Guan K. L. (2000) EMBO J. 19:5429). El cambio de la fosforilación de las proteínas de B-Raf puede detectarse por ejemplo pa>r medio de anticuerpos dirigidos contra la treonina o serin fosforilada . Puesto que las p oteínas de Raf son treonina/serina cinasa, la actividad de 1as proteínas de Raf también puede determinarse por medio de su actividad enzimática. La proteína MEK es por ejempllo un substrato de B-Raf y el grado de la fosforilación de M?K permite la determinación de la actividad de B-Raf en la muestra De la misma manera, la fosforilación de otras sustancias, como por ejemplo MBP y péptidos los cuales son fosforilados específicamente por Raf (Salh y colaboradores (1999) Anticáncer Res. 19:731-740; Bondzi y colaboradores (2000) Oncogene 19:5030-5033), de las proteínas de Raf puede utilizarse para determinar la actividad respectiva. Puesto que Raf es parte de una cascada de señales donde una serie de cinasas son fosforiladas y activadas respectivamente por una cinasa de un rango más alto, la actividad de Raf también puede determinarse al evaluar el grado de fosforilación de cada cinasa subordinada con el protocolo del Ejemplo 12. Las propiedades de inhibición de ERK de los compuestos de la invención también pueden determinarse por medio del ensayo de proliferación celular in vi tro como se describe en el Ejemplo 12 y de acuerdo con el documento uá 2003/0139452 Las células viabi.es después de una incubación de 3 días con un compuesto se cuantificafon utilizando el ensayo colorimétrico de MTS/PMS como se desc ribe en el Ejemplo 13. Los compuestos ejemplares 101-160 listados en la Tabla 1 se prepararon, se caracteri zaron y se sometieron a ensayo por su actividad de enlace a B-Raf y la actividad in vitro contra células de tiumor. El rango de actividades de enlace a B-Raf fue menor que 1 nM a aproximadamente 10 µM Ciertos compuestos ejemplares de la invención tuvieron valores IC50 de actividad de enlace a B-Raf menores que 10 nM. Ciertos compuestos de la invención tuvieron actividad basada en células, es decir células que expresaban mutantes activados de la cinasa objetivo B-Raf, valores IC50 menores que 100 nM.

ADMINISTRACIÓN DE COMPUESTO S DE PIRAZOLILO Los compuestos de pirazolilo de la invención pueden administrarse por medio de cualquier ruta apropiada para la condición que es tratada. Las rutas adecuadas incluyen la ruta oral, parenteral (inc lusive subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intradérmica, intratecal epidural) , transdérmica, rectal, nasal, tópica (inclusive bucal y sublingual) , vaginal, intrapieritoneal, intrapulmonar e intranasal. Para el tratamiento inimunosupresivo local, los compuestos pueden administrarse por medio de la administración intralesional, inclusive la perfusión o de otra manera el contacto del injerto con el inhibidor antes del transplante. Se apreciará que La ruta preferida puede variar con por ejemplo la condición del receptor. Donde el 101 compuesto de pirazolilo se administra por la ruta oral, puede formularse como una píldora, cápsula, tableta, etcétera con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Donde el compuesto de pirazol Lio se administra por la ruta parenteral, puede formularse con un vehículo parenteral 15 farmacéuticamente aceptable en una forma inyectable de dosificación unitaria, como se detalla posteriormente, Una dosis para tratar a pacientes humanos puede variar de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1000 mg del compuesto de pirazolilo, Una dosi típica puede ser de 20 aproximadamente 100 mg a aproximadamente 300 mg del compuesto de pirazolilo. Una dosis puede admir istrarse una vez al día (QID) , dos veces al día (BID o más frecuentemente, dependiendo de las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas, inclusive la absorción, distribución, 25 metabolismo y excreción del! compuesto particular. Además, los factores de toxicidad pueden infLuir en el régimen de dosificación y administración. Cuando se administran por la ruta oral, la pildora, cápsula o tableta puede ingerirse diariamente o menos frecuentemente durante un periodo de tiempo especificado. El regimen pue de repetirse durante un número de ciclos de terapia. Otro aspecto da esta invención proporciona un compuesto de esta invención para el uso como un medicamento en el tratamiento de las enfermedades o condiciones descritas en este documento en un mamífero, por ejemplo, un humano que sufre de esta condición o enfermedad También se proporciona el uso de un compuesto de ésta invención en la preparación de un medicamento para el t ratamiento de las enfermedades y condiciones descritas en este documento en un animal de sangre caliente, tal como un mamífero, por ejemplo un humano, que sufre de este trastorno.

FORMULACIONES FARMACÉUTICAS DE COMPUESTOS DE PIRAZOLILO Los compuestos dk la presente invención son útiles para tratar enfermedades, condiciones y/o trastornos caracterizados por la sobreexpresión de cinasas Raf, por ejemplo la cinasa B-Raf; por lo tanto, otra modalidad de la presente invención es una composición farmacéutica, es decir una formulación, que compr! antidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención y un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. Una formulación | típica se prepara al mezclar un compuesto de la presente invención y un portador, diluyente o excipiente. Los portadores, diljuyentes y excipientes adecuados son bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo e incluyen materiales tales como carbohidratos, ceras, polímeros solubles en aqua y/ esponjables, materiales hidrófilos o hidrófobos, gelatina, a eites, solventes, agua y Cj similares. El portador, dii.uyente o xcipiente particular que se utilice dependerá del medio y el ropósito para el cual se está aplicando el compuesto de la presente invención. Los solventes se seleccionan generalmente basándose en los solventes que las personas expertas: en el campo reconocen 5 como seguros (GRAS) para administr arse a un mamífero. En general, los solventes seguros so: solventes acuosos no tóxicos tal como el agua y otros solventes no tóxicos que son solubles o miscibles en agua. Los solventes acuosos adecuados incluyen agua, etanol, propilenglicol, polietilenglicoles 0 (por ejemplo, PEG400, PEG300), etciétera y mezclas de los mismos. Las formulaciones también pueden incluir uno o más amortiguadores, agentes pe estabi lización, surfactantes, agentes humidificantes, agentes de lubricación, emulsionantes, agentes de suspensión, conservadores, 5¡ antioxidantes, agentes de opacidad, agentes deslizantes, auxiliares de procesamiento, colorantes, edulcorantes, agentes perfumantes, agentes sabori zantes y otros aditivos conocidos para proporcionar una presentación elegante del fármaco (es decir, un compuesto de la presente invención o I 1 una composición farmacéutica del mismo) o para ayudar en la manufactura del producto farmacéutico (es decir, un medicamento) . Las formulaciones pueden prepararse utilizando procedimientos convencionales de disolución y mezclado. Por ejemplo, la sustancia de fármaco a granel (es decir, un compuesto de la presente invención o forma estabilizada del compuesto, tal como un complejo con un derivado de ciclodextrina u otro agente de acornólej amiento conocido) se disuelve en un solvente adecuado en p resencia de uno o más de ¡ los excipientes descritos anteriormente. El compuesto de la presente invención se formula típicamente en formas de dosificación farmacéuticas para proporcionar una dosificación fácilmente controlable del fármaco y para hacer posible el acatamiento del régimen prescrito por parte del paciente, La composición f rmacéutica (o formulación) para la aplicación puede empacarse en una variedad de formas dependiendo del método utilizado para administrar el fármaco, Generalmente, un artículo para distribución incluye un recipiente que tiene depositada en el mismo la formulación farmacéutica en una forma apropiada. Los recipientes amortiguador de acetato a pH 5 es una modalidad adecuada El compuesto i .nhibidor para el uso en este documento es preferiblemente estéril. El compuesto será almacenado ordinariamente como una composición sólida, aunque son aceptables las formulaciones liofilizadas o las soluciones acuosas. Las composiciones farmacé¡uticas de la invención serán formuladas, dosificadas y administradas en una forma, es decir cantidades, concentraciones, programas, curso, vehículos y ruta de administración, consistente con una buena práctica médica. Los fac :tores para consideración en este contexto incluyen el trast :orno particular que es tratado, el mamífero particular que es tratado, la condición clínica del paciente individual, la causa del trastorno, el sitio de suministro del agente, l 1 método de administración, el programa de administración y otros factores conocidos para los practicantes médicos. La "cantidad terapéuticamente efectiva" del compuesto a ser administrado será gobernada por estas consideraciones y es la canticad mínima necesaria para prevenir, mejorar o tratar el trastorno mediado por factores de coagulación. Esta cantidad es preferiblemente inferior a la cantidad que es tóxica para el hospedante y vuelve al hospedante significativamente más susceptible al sangrado Como una propuesta general, la cantidad inicial farmacéuticamente efectiva del inhibidor administrado ' ' Zn-proteína) ; y/o surfactantes no iónicos tales como TWEEN PLURONICSMR o polietilenglicol (PEG). Los ingredientes farmacéuticos activos también pueden atraparse en microcápsulas preparadas, por ejempl o , por medio de técnicas de coacervación o por medio de la polimerización interfacial, por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacriilato) , respectivamente, en sistemas de suminist)ro de fálrmacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, , microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Estas tédnicas se ¿describen en Remington's Pharmaceutical Sciences 16' edición, Dsol, A. Ed. (1980) . Se pueden hacer preparaciones de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sóli Tdos que contienen el compuesto de pirazolilo, matrices que están en la forma de artículos configurados, por ejemplo películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices dé liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2-hidroxietil- metacrilato) o alcohol poli (vinínilico) , poliláctidas (Patente Norteamericana No 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-?L-glutamato, acetato de etilen- vinilo no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido ! glicólico degradables tales como LUP&ON DEPOTMR (microesferas inyectables que están compuestas de copolímero ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprol ida) y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. Las formulaciones utilizarse para la administración in vivo deben ser estériles, lo cual se realiza fácilmente por medio de la filtración a través de membranas de filtración estériles Las formulacior es incluyen aquellas que son adecuadas para las rutas de administración detalladas en este documento. Las formulaciones pueden presentarse convenientemente en una forma de dosificación unitaria y pueden prepararse por medio de cualquiera de los métodos bien conocidos en el campo de la farmacia. Las técnicas y formulaciones se encuent ran generalmente en Remington 's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co . , Easton, PA) .

Estos métodos incluyen e L paso que consiste en poner en asociación el ingrediente activo con el portador el cual constituye uno o más ingredientes secundarios. En general, las formulaciones se preparan al poner en asociación de manera uniforme e íntima e ¡L ingrediente activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos y luego, si es necesario, configurar e producto. Las formulaciones del compuesto de pirazolilo que son adecuadas para la admlinistración oral pueden prepararse como unidades discretas tales como pildoras, cápsulas, sobrecitos o tabletas cada una que contienen una cantidad predeterminada del compuesto de pirazolilo. Las tabletas comprimidas pueden prepararse al comprimir en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal comp un polvo o granulos, mezclado opcionalmente con una sustancia aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conser ador, agente tensoactivo de dispersión. Las tabletas moldeadas pueden hacerse al moldear en una máquina aaecuada una mezcla de ingrediente activo en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte, Las tabletas pueden revestirse o marcarse opcionalmente y se formulan opcionalmente par proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo de las mismas Las tabletas, trociscos, pastillas rombóticas, suspensiones acuosas u oleosasj polvos o granulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o suaves, por ejemplo cápsulas de gelatina, jarabes o elixires pueden prepararse para el uso oral Ld formulaciones de un compuesto de pirazolilo ppropuestas para el uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido en el campo para la manufactura de composiciones farmacéuticas y estas composiciones pueden contener uno o más agentes que incluyen agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservadores, á fin de proporcionar una preparación apetitosa, ,as tabletas que contienen el emulsionante la cual forma la fase dispersada oleosa de las formulaciones de crema. Los emulgentes y los estabilizadores de emulsión adecuados para el uso en la formulación de la invención incluyen T een 60 MR Span 80MR, alcohol cetoesterarílico, alcohol bencílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y lauril-sulfato de sodio. Las suspensiones acuosas de la invención contienen los materiales activos en una mezcla con excipientes adecuados para la manufactura de suspensiones acuosas. Estos excipientes incluyen un agente d 5 suspensión, tal como carboximetilcelulosa de sodio, ( roscarmelosa, povidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcel losa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma acacia y agentes de dispersión o humedecimiehto tales como fosfatida de origen natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido grado (por ejemplo, estearato de polioxietifLeno) , un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemp! o, heptadecaetilenoxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, monooleat o de poíioxietilensorbitan) . La suspensión acuosa tambijén puede contener uno mas conservadores tales como p-hidroxi-benzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno mas agentes edulcorantes, tales como sacarosa o sacarina, La composición farmacéutica de un compuesto de pirazolilo puede estar en la forma de una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa, inyectable, estéril Esta suspensión puede formularse de acuerdo on técnica conocida utilizando aquellos agentes de dispersión o humedecimiento adecuados y agentes de suspensión los cuales han sido mencionados anteriormente. La preparación inyectable, estéril también puede ser una solución o s spensión inyectable, estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, tal como una solución en 1,3- utano-diol o puede prepararse como un polvo liofilizado. E.ntre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse se encuentra el agua, solución de Rinqer y sol 7ución isotónica de cloruro de sodio.

Además, los aceites finos, estériles pueden emplearse convencionalmente como un medio so;lvente o de suspensión.

Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo, blando que incluye los mono- o diglicéridos sintéticos, Además, los ácidos grasos tal como el ácido oleico pueden utilizarse del mismo modo en la preparación de materiales inyectables . La cantidad dé ingrediente activo que puede combinarse con el material portador para proporcionar una forma de dosificación individual variará dependiendo del hospedante tratado y el modo de administración particular Por ejemplo, una formulacion de iberación a través del tiempo que está propuesta para lá administración oral a humanos puede contener d aproxima damente 1 a 1000 mg de material activo combinado con una cantidad apropiada y conveniente de material ¡bortador 1a cual puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 95% de las composiciones totales (peso:peso). La composic Lón farmacéutica puede prepararse para proporcionar cantidades fácilmente mesurables para la administración. Por ejemplo, una solución acuosa propuesta para la infusión intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a 500 µg del ingrediente activo por mililitro de solución a fin de que pueda ocurrir la infusión ' de un volumen adecuado a una velocidad de aproximadamente 30 mL/hora. í Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones par a inyección estériles, acuosas y no acuosas ¡ las cu ales pueden contener : antioxidantes, amortiguadores, bacteriostatos y solutos los cuales hacen que la formuljación sea isotónica con la sangre del receptor propuesto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas las cuales pueden incluir agentes de suspensión y agentes de espesamiento. Las formulaciones adecuadas para la administración tópica a los ojos también incluyen colirio en donde el ingrediente activo se disuelve o se suspende en un portador adecuado, especialmente un solvente acuoso para el ingrediente activo. El ingrediente activo está presente preferiblemente en estas formulaciones en una concentración de 0.5 a 20%, ventajosamente de 0.5 a 10%, particularmente aproximadamente 1.5% p/p. Las formulacione s adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas rombóticas que 0 comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, usualmente sacarosa y goma acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa o goma acacia; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente activo en un portador 5 líquido adecuado. Las formulacion s para 1a administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende por ejemplo anteca de cacao o un salicilato. Las formulacione 3 adecuadas para la administración Q intrapulmonar o nasal tienen un tamaño de partícula por ejemplo en el rango de 0 1 a 500 micrómetros (inclusive el tamaño de partícula en un rango entre 0.1 y 500 micrómetros en incrementos de micr?metros tales como 0.5, 1, 30 i micrómetros, 35 micrómet{.ros, etcétera), las cuales se 5 administran por medio de la inhaladión rápida a través del citara anteriormente en este docümento, o una fracción apropiada de la misma, del ingrediente activo. La invención proporciona además composiciones veterinarias que comprenden al menos un ingrediente activo como se definiera antertormente junto con un portador veterinario por ende. ios portadores veterinarios son materiales que son úti .es para el propósito de la administración de la composición y pueden ser materiales sólidos, líquidos o gaseosos los cuales son de otra manera inertes o aceptables en el crampo veterinario y son compatibles con el ingrediente acti vo. Estas composiciones veterinarias pueden administrarse p or la ruta parenteral, oral o por cualquier otra ruta deseada ' TERAPIA DE COMBIN ACIÓN Un compuesto de pirazolilo de la invención puede combinarse en una formulación de combinación farmacéutica o un régimen de dosificación' como una terapia de combinación, con un segundo compuestJo que tiene propiedades anti- hiperproliferativas o que es útil para tratar un trastorno hiperproliferativo (por ejemplo el cáncer). El segundo compuesto de la formulación de combinación farmacéutica o régimen de dosificación ¡tiene preferiblemente actividades complementarias para el compuesto de pirazolilo de la , combinación de tal manera que no se afectan adversamente entre sí. Estas moléculas están presentes de manera adecuada en combinación en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido. La terapia de combinación puede administrarse como un régimen simultáneo o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación puede administrarse en dos o más administraciones. La administración combinada incluye la coadministración, utilizando formulaciones separadas o una formulación farmacéutica individuad 1 y la administración consecutiva en cualquier orden, en donde existe preferiblemente un periodo de tiemp mientras que ambos (o todos) agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas. Las dosificacion s adecuadas para cualquiera de los agentes coadministrados anteriormenti son aquellas utilizadas actualmente y pueden disminuirse deb: do a la acción combinada (sinergia) del agente recientemente identificado y otros agentes o tratamientos quimioterapéuticos. La terapia de combinación puede proporcionar sinergia" y puede confirmar ser "sinérgica", es decir el efecto logrado cuando se utilizan juntos los ingredientes activos es mayor que la ¡suma de los efectos que resultan utilizando los compuestos por separado. Se puede lograr un efecto sinérgico cuando los ingredientes activos son: (1) co-formulados y administrados o suministrados simultáneamente en una formulación combinada de dosificación unitaria; (2) suministrados por medio de la alternación o en paralelo como formulaciones separadas; por medio de algún otro régimen. Cuando se suministran en una terapia de alternación, se puede lograr un efecto sinergico cuando los compuestos se administran o suministran secuencialmente, por ejemplo por medio de diferentes inyecciones en jeringas separadas. En general, durante la terapila de alternación, una dosificación efectiva de cada ingrediente activo se administra secuencialmente, es deci] en sene, mientras que en la terapia de combinación, las dosificaciones efectivas de dos o más ingredientes se administran juntas.

METABOLITOS DE LQS COMPUESTOS DE PIRAZOLILO También se encuentran dentro del alcance de esta invención los productos mettabólicos in vivo de los compuestos I I de pirazolilo descritos erji este docµmento, a tal grado que los productos son novedosos y no son obvios sobre la técnica anterior. Estos productos pueden resultar de por ejemplo la oxidación, reducción, hidrólisis, amidación, desamidación, esterificación, desesterificación, escisión enzimática y similares, del compuesto administrac o. Por consiguiente, la invención incluye compuestbs novedos!os y no obvios que son generados por medio de un proceso que comprende poner en contacto un compuesto de | esta invención con un mamífero durante un periodo de tiempo que es suficiente para producir un producto metabólico del mismo, Los productos de metabolitos se identifican típicamente por la preparación de un isótopo radioetiquetado (por ejemplo 14,C ?) de un compuesto de la invención, la administración de éste polr la ruta parenteral en una dosis detectable (por ejemplo máyor que aproximadamente 0.5 mg/kg) a un animal tal como una rata, ratón, cobayo, mono o al hombre, el permitir un tiempo suficiente para que ocurra el metabolismo (típicamente de aproximadamente 30 segundos a 30 horas) y el aislamiento de sus productos de conversión de la orina, sangre u otras mués tras biológicas. Estos productos se aislan fácilmente puesto que están etiquetados (otros se aislan por medio del uso de anticuerpos capaces de enlazar epítopos que sobreviven en el metabolito) . Las estructuras de los metabolitos se determinan en forma convencional, por ejemplo por medio del análisis de EM, CL/EM o RMN. En general, el análisis de líos metabolitos se realiza de la misma manera como los estudios convencionales de metabolismo de fármacos que son bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo. Los productos de conversión, mientras que no se encuentren de otra manera in vivo, son útiles en ensayos de diagnóstico paira la dosificación terapéutica de los compuestos de pirazoli o de la invención ARTÍCULOS DE MANUFACTURA En otra modalidad de la invención, se proporciona un artículo de manufactura!, o "kit", que contiene materiales que son útiles para el tratamiento de los trastornos descritos anteriormente. El artículo de manufactura comprende un recipiente y una etiqueta o inserto de paquete sobre o en asociación con el recip Lente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, frasquitos, jeringas, empaques tipo ampolla, etcétera Los recipientes pueden formarse a partir de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El re cipiente retiene un compuesto de pirazolilo o una formulación del mismo que es efectiva para tratar la condición y puede tener un orificio de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un frasquito que tiene un tapón perforable por una aguja hipodérmilca para inyección). Al menos un agente activo en la composición es un compuesto de pirazolilo de la invención! La etiqueta o inserto del paquete indica que la composición se utiliza para tratar la condición seleccionada, tal como el cáncer, En una modalidad, la etiqueta o inserto del paqµete indica que la composición que comprende el compuesto de pirazolilo puede utilizarse para tratar un trastorno tromboembólico. Además, la etiqueta o inserto del paquete puede indicar que el paciente que es tratado es uno que tiene un rastorno tromboembólico caracterizado por sangrado excesivo! La etiqueta o inserto del paquete también puede indicar que la composición puede utilizarse para tratar otrcs trastornos El artículo de manufactura puede comprender (a) un primer recipiente con un compuesto de pirazolilo contenido en el mismo; y (b) un segundo recipiente con una segunda formulación farmacéutica contenida ein el mismo, en donde la segunda formulación farmacéutica comprende un segundo compuesto con actividad a?ti-hiperprpliferativa . El artículo de manufactura en esta modalidad de la invención puede comprender además un inserto del paquete que indica que el primer compuesto y el se undo compuesto pueden utilizarse para tratar a pacientes en riesgo de apoplejía, trombos o trastorno de trombosis. Alternativamente, o adicionalmente, el artículo de manufactura puede comprender además un segundo tercer) recipiente que complrende un amortiguador farmacéuticamente aceptable, tal como agua bacteriostática para inyección (BWFI), solución salina amortiguada con fosfato, solución de Ringer y solución de dextrosa. Puede incluir además otros mater iales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, inclusive otros amortiguadores, diluyentes, filtros, agujas y jeringas DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN EJEMPLOS A fin de ilustrar la invención, se incluyen los Las reacciones establecidas posteriormente se realizaron generalmente bajo una presión positiva de nitrógeno o argón con un tub de secado (a menos que se establezca dé otra manera) en solventes anhidros y los matraces de eaccion se equiparon típicamente con septos de caucho para la introducción de substratos y reactivos por ía de una jeringa. La cristalería se secó eh horno y/o se secó en aire caliente . La cromatograf La en col umna se condujo en un sistema BiotageMR (Fabricante: Dyax Corporation) que tenía una columna de gel de sí ice o un cartucho de sílice SEP PAKMR (Water s ) . Los e spectros de RMN 1H se registraron en un inst rumento Varían MR que operaba a 400 MHz. Los espectros de RMN "H se obtuvieron como soluciones de CDC13, d ¡l-DMSO o d4-MeOH (reportadas en ppm) , utilizando cloroformo como el estándar de referencia (7.25 ppm) . Cuando se reportan multiplicidades de picos, se ut.ilizan las siguientes abreviaciones: s singulete d (doblete) , t (triplete), m (multiplete), br (amplio), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes) . Las constantes de acoplami ento, cuando se proporcionan, se reportan en Hertzios (Hz) Paso Preparación de 4- ( l-metil-lH-pirazol-5-il)piridina: A la ( E) -3- (üimetilamirlio) -1- (piridin-4-il) prop- 2-en-l-ona (1.00 g) en 50 mL de etanol se agregaron 0.32 mL de metilhidrazina y la mezcla resultarnte se calentó a reflujo durante 1 hora. El solvente se rcetiró por medio de la evaporación y se dividió entre acetfato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo con otra porción de acetato etilo. Los extractos combinados de cetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre! sulfato dee magnesio, se filtraron y se evaporaron para proporcionar 0.62 g de un producto crudo como un sólido color amarillo. El material se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla 10:1 de diclorometano-metanol para producir 0.30 g (rendimiento del 64%) de producto como un aceite co¬Lor amarillo. La RMN 1R (CDC13) fue consistente con una mezcla 3.8:1 del producto deseado y un isómero no deseado (4- ( l-metil-l-H-pirazol-3-iDpiridina) . La CL/EM de La mezcla mostró 2 picos, cada uno con un ion molecular M+l de m/z 160.2 por medio de la ESI positiva. Paso 3: Preparación de 4- (4-bromo-l-metil-lfí-pirazol-5-il) piridina : A una mezcla de isómeros 3.8:1 de la 4- (l-metil-líí-pirazol-5-il piridina y la 4-(l-metil-l-H pirazol-3-il) piridina (0.30 g) en 5 mL de cloroformo enfriado en hielo se agregó una solu ción de 10 4 µL de bromo en 3 mL de cloroformo. Después de 5 loras, la mezcla se trató con un exceso de bicarbonato de sodio acuoso saturado y se diluyó con diclorometano. El dic orometano se lavó con 3 porciones de bicarbonato de sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para generar 0.39 g de producto crudo como un aceite color café. El producto crudo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con acetato de etilo-metanol 15:1. Las fracciones que contenían el componente principal se combinaron para proporcionar 0.17 g (rendimiento del 73%) de un ace te incoloro. La RMN 1H (CDC13) fue consistente có,n la estr ictura deseada. La CL/EM indicó un producto mayor con un ion molecular M+l de m/z 240.3 por medio de la ESI ¡positiva. Paso 4 : Preparaición de O-metil-oxima de (£7) —5— bromo-2, 3-dihidroinden-l-o?a : A la 5-bromoindanona (6.03 g) en 40 mL de etanol se agregaron 3 58 g de clorhidrato de metoxilamina y 3.5 mL de piridina La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se calentó a 80°C durante 3 horas. Los componentes volátiles se retiraron bajo vacío y el residuo sólido se dividió entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio acuos Io saturado. El acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para producir 6.74 g (rendimiento del 98%) de un sólido color canela. La RMN 1ñ (CDC13) fue consistente con una mezcla isomérica de la estructura deseada, con el isómero de oxima E como el componente mayor. La CL/EM indicó 2 picos cerrados, ambos con un ion molecular M+l de m/z 242 D por medio de la ESI positiva . Paso 5: Preparasión de ácido ( E) -1- (metoxiimino) -2, 3-dihidro-lH-inden-5-ilborónico: A la O-metil-oxima de (E)-5-bromo-2, 3-dihidroinden-l ona (3.00 g) en 100 mL de tetrahidrofurano enfriado en hielo seco-acetona se agregaron gota a gota 5.5 mL de una solución ce n-butil-litio 2.5 M en hexano. Se formó un producto precipitado color canela Después de 30 minutos a -78 °C, se agregaron 3.1 L de trimetilborato y la mezcla se dejó oalentar a la temperatura ambiente y se dejó agitar durante toda la noche. La mezcla de reacción se evaporó bajo vacío y se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 6 M, se agitó durante 15 minutos, se basificó con hidróxido de sodio 2 M, se lavó con 3 porciones de éter dietílico, se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 6 M y se extrajo con tres porciones de acetato de etilo. Los extractos combinados de cetato dé etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron bajo vacío para producir 1.95 g de un sólido color amarillo pálido. El sólido crudo se trituró con una mezcla de hexano/éter diptílico para proporcionar 1.46 g prendimiento del 57%) dé producto como un sólido color canela. La RMN XH (d6 DMSO) fue consistente con el producto deseado. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 206.1 por medio de la ESI positiva. Paso 6: Preparaqión de 0-:netil-oxima de (£)-5-(l-metil-5- (piridin-4-il) -1li)irazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-l-ona: A una solución de 1 a 4- (4-bromo-l-metil-lH-pirazol-5-il)piridina (0.17 g) en 7 mL de dimettoxietano y 3 mL de agua se agregaron 0.146 g del ácido ( E) - 1- (metoxiimino) -2, 3-dihidro-lH-inden-5-ilborónico (producto del ejemplo 1, Paso 5) y 0.79 de K2C03 A esta mezcla se agregaron aproximadamente 20 mg de tetracis (trifenilfosfina) paladio ( 0) y la suspensión se calentó a reflujo Después de 4 horas, la mezcla de reacción enfriada se filtró a través de celite y la torta de filtro se lavó con acetat D de etilo. El producto filtrado se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para generar 0.63 g de producto crudo como un semií;ólido color canela. El material se suspendió en acetato de etilo y se filtró. El producto filtrado se evaboró bajo vacío y el residuo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con acetato de etilo para proporcionar 82.6 mg (rendimiento del 36%) de un producto como un vidrio incoloro. La RMN 1H (CDC13) fue consistente con el productb deseado La CL/EM indicó un pico con un ion molecular M±l de m/z 319.2 por medio de la ESI positiva . Paso 7: Preparación de 5- ( -metil-5- (piridin-4-il) -lH-pirazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-l-qna: A la O-metil-oxima de ( E) -5- (l-metil-5- (piridin-4-il) -ltf-pirazol-4-il) -2 , 3- dihidroinden-1-ona (82.6 ng) en 2 mL de dioxana y 5 mL de acetona se agregaron 0.5 mL de ácido clorhídrico 5M. La mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. La mezcla de reacción enfriada se evaporó bajo vacío y se dividió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. El acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para generar , 0.05 g de producto crudo como un aceite. El material se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla 15:1 de acetato de etilo-metanol para producir 50.9 mg (rendimiento del 68%) de un aceite incoloro. La RMN 1H (CDC13) fue consistente con el producto deseado. La CL/EM indicó un pico con un ion molécular M±l de m/z 290.4 por ' medio de la ESI positiva. Paso 8 : Preparación de oxima de 5- ( l-metil-5- piridin-4-il-lfí-pirazol-4-il) -indan-1 -ona 122: A la 5-(l- metil-5- (piridin-4-il) -lJí-pirazol-4-i1) -2, 3-dihidroinden-l- ona 0.051 g) en 3 mL de etanol se agregó 1 mL de agua y 1 clorhidrato de hidroxilamiha (37 mg) La mezcla se calentó a reflujo. Después de 2 horas, la mezcla se enfrió y se evaporó bajo vacío. El resido se tiividió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. El acetato de etilo se lavó con salmuera, se se ó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para proporcionar un producto proporcionar 0.69 g (rendimiento del 64%) de producto como un semisólido color blanco. lia RMN 1ti i CDC13) indicó una mezcla 3.4:1 de isómeros consistentes con él producto deseado como el componente mayor 2- (3- (piridin-4-il) -lH-pirazol-1-il) etanol como el componente menor, La CL/EM mostró 2 picos cerrados, ambos con un i>n molecular M+l de m/z 190.2 por medio de la ESI positiva. Paso 2: Preparación de 2- (4-bromo-5- (piridin-4-il) -lH-pirazol-1-il) etanol : A una mezcla de isómeros 3.4:1 de 2-(5-(piridin-4-il)-líí-piraz?l-l-il)etánol y 2- (3- (piridin-4-il) -lfí-pirazol-1-il) etanol (0.69 g) en 10 mL de cloroformo enfriado en hielo se agregó una solución de 200 µL de bromo en 5 mL de cloroformo. Después de 1 hora, la mezcla se trató con bicarbonato de sodio acuoso saturado y se diluyó con diclorometano. La capa de diclorometano se lavó con 3 porciones de bicarbonato ae sodio acuoso saturado, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para generar 0.96 g de productf crudo co o un aceite color café.

El material crudo se purifico por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla de acetato de etilo-metanol 8 : 1 para proporcionar 0.23 g (rendimiento del 23%) de producto como un aceite incoloro. La RMN H (CDC13) fue consistente con el producto deseado. La CL/EM indicó un pico con un ion molecular M+l de m/z 270.2 por medio de la ESI positiva, Paso 3: Preparación de O bencilo oxima de (£)-5- El acetato de etilo se lavó con carbonato de sodio acuoso saturado, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para producir 0.05 g de producto crudo como un vidrio incoloro. El material crudo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla de diclorometano-me :anol 8:1 para proporcionar 18.6 mg 'rendimiento del 23' de p )!roducto como un vidrio incoloro. La RMN •"? (CDCI3) fue consistente con el producto deseado. La CL/EM indicó un pico con un ion molecular M+l de m/z 425.2 por medio de la ESI positiya, Paso Preparación de oxima de 5-(l-(2-hidroxietil) -5-piridin-4-il-lH-pirazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-1-ona 123: A la O-benc:il-oxima de (£)-5-(l-(2-hidroxietil) -5- (piridin-4-jLl) -lH-pirazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-1-ona (15.8 mg; Ejemplo 2, Paso 5) en 5 mL de metanol se agregó una gota de ácido clorhídrico 6M y aproximadamente 5 mg de nidróxido ele paladio (20% en peso sobre carbón) . Un balón relleno de hidrógeno se unió al recipiente de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla! se filtró a través de celite y el celite se lavo con metariol. El producto filtrado se concentró bajo vacío y el re?siduo se dividió entre carbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. El acetato de etilo se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para producir 9.1 g producto como cristales cqlor blanqüecino. La RMN XH (CDC13) fue consistente con una mezcla tautomérica de la estructura deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 146.4 por medio de la ESI positiva Paso 2: > lentamente hasta la temperatura ambiente. Después de 1 ]hora, la mezcla de reacción se evaporó y el residuo collor café oscuro se dividió entre bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. El acetato de etilo se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para proporcionar 4.6 g de producto crudo como un sólido colocr amarillo pálido. El material crudo se tomó en una mezcla de éter dietílico y hexano, se filtró a través: de celite y se dejó cristalizar. ' Se obtuvo un total de .98 g (riendimiento del 55%) de cristales color amarillo pálido. La RMN XH (CDC13) fue consistente con un isómero individual de la estructura deseada. La CL/EM mostró ujn pico con un ion molecular M+l de m/z 160.5 por medio de la USI positi a . Paso 3: Preparación de 4- (4-bromo-l-metil-lH- pirazol-3-il ) piridina : A una solución de la 4- ( 1-metil-ltf- pirazol-3-il ) piridina (2.98 g; Ejemplo 3, Paso 2) en 50 mL de cloroformo enfriado en hielo se agregó gota a gota una solución de 1.15 mL de bromo en 3 0 mL de cloroformo. Se ¡ agregaron aproximadamente 15 mL de metanol para ayudar en la disolución del producto precipi tado color amarillo que se formó. Después de 4 horas, la mezcla de reacción se enfrió rápidamente con bicarbonato ae sodio acuoso saturado y se diluyó con diclorometaño. La capa de diclorometano se 5 lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado, salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó para generar el producto crudo como un semisólido color amarillo. El material crudo se mezcló espesamente en acetato de etilo y se filtró a través de celite. El 0 producto filtrado se evaporó para generar 4.18 g de producto como un sólido color amarillo. La RMN 1H (CDC13 fue consistente con la est1ructura deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecu!lar M+l de m/z 240.5 por medio de la ESI positiva Paso 4: Preparación de O-bencil-oxima de 5-(l- metil-3- (piridin-4-il) -lfí- >irazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-l- ona : Al ácido (E) -1- (benzjLloxiimino' -2, 3-dihidro-lH-inden-5- ilborónico (3.00 g; Ejemplo 2, Paso 4) en 32 mL de acetonitrilo y 8.0 mL de1 agua se agregó la 4- (4-bromo-l- J C¡ metil-líí-pirazol-3-il)piritiina (2.00 g; Ejemplo 3, Paso 3) . La solución se desoxigenó al burbujear nitrógeno a través de la solución durante 10 minutos. A la mezcla resultante se agregaron 5.62 g de carbonato de potasio, 10 mL de N,N- | dimetilfomamida y 290 mg de I 5' tetracis (trifenifosfina) paladio (0) . La mezcla entonces se calentó a reflujo durante 8 horas durante el curso de este tiempo se agregó dos veces una pequeña porción de catalizador) . La mezcla ae reacción enfriada se filtró través de celite y la tort :a de filtro se lavó con acetato de etilo. El producto filtrado se lavó con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se f ltró y se evaporó bajo vacío para producir 5.1 g de producto crudo como un aceite.

El material crudo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con acetato de etilo para proporcionar 2.50 g (rendimiento del 80%) de producto como una espuma color amarillo claro. La RMN xH (CDC13) fue consistente con la estructura deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 395.2 por medio de la ESI positiva, Paso 5: Preparación de oxima de 5- (l-Metil-3- piridin-4-il-lfí-pirazol-4-?l) -2, 3-dihidroinden-l-ona 113: A la O-bencil-oxima de 5- ( l-metil-3- (piridin-4-il) -lH-pirazol- 4-il) -2, 3-dihidroinden-l-ona (2.50 g, ; Ejemplo 3, Paso 4) en 60 mL de metanol se agregairon 0.89 g de hidróxido de paladio (20% en peso sobre carbón y 6.3 mL de ácido clorhídrico 6M. , Un balón relleno de hid ógeno se I unió al recipiente d reacción y la mezcla se ac itó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se fi tro a través de celite y el celite se lavó con metanol. E' 1 producto filtrado se concentró bajo vacío y el residuo se dividió entre ! bicarbonato de sodio acuoso saturado y acetato de etilo. El il)piridina: A la 4- ( Jfí-pirazol-3-il) piridina (36.1 g; Ejemplo 3, Paso 1) en 600 mL de cloroformo y 600 mL de ácido acético se agregaron 20.4 g de acetato de sodio y la mezcla se agitó durante 1 hora hasta que se volvió homogénea. La solución entonces se enfrió en un baño de hielo y se agregó una solución de 12 mL de bromo en 150 mL de ácido acético durante un periodo de 3]0 minutos Se formó un producto precipitado durante la adición de bromo. Después de 2 horas, la mezcla de reacción s diluyó con diclorometano y se basificó con hidróxido df sodio 4M a pH 4. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con diclorometano. Los extractos de diclorometano combinados se lavaron con agua, luego salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio y se aplicaron a un tapón de gel de sílice. El tapón se lavó con diclorometano y el producto se eluyó con acetato de etilo y luego una mezcla 19:1 tie acetato de etilo/metanol . El eluyente contenía 33.2 g rendimiento del 60%) de producto como un sólido color b 1 lanco. La RMN 1H (CDC13) fue consistente con una mezqla tautomerica de la estructura J deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de I m/z 226.2 por medio de la ESI positiva Paso 2: Preparación de acetato de 2- (4-bromo-3- (piridin-4-il) -lfí-pirazol-1-il) etilo: A la 4- (4-bromo-líí- pirazol-3-il) -piridina (0.50 g; Ejemplo 4, Paso 1) en 7 mL de N, N-dimetilformamida se agirreeqgóó 11.09 g de carbonato de cesio y 0.27 mL de acetato de 2-bromoetilo La suspensión resultante se agitó a 60°C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con 2 porciones de acetato de etilo. Los extractos corrbinados d acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron para producir 0.69 g (rendimiento del 100%) de producto como un aceite color amarillo. La RMN 1H (CDC3) fue consistente con una relación de isómeros 9:1 de la estructura deseada y el regioisómero 0 acetato de 2- (4-bromo-5- (pridin-4-i..) -lH-pirazol-1-il) etilo.

La CL/EM mostró dos picoj Js cerrados, cada uno con un ion molecular M+l de m/z 312.2 por medio de la ESI positiva. Paso 3: Preparación de 2- (4-bromo-3- (piridin-4-il) - lH-pirazol-1-il) etanol : A una mezcla de isómeros 9:1 del 5 acetato de 2- (4-bromo-3- (piirriiddiinn--44--iill)) --llHH--ppiirraazzooll--11--iill)) eettiilloc y el regioisómero acetato de 2- (4-bromo-5- (piridin-4-il) -1H- pirazol-1-il) etilo (0.69 d; Ejemplo 4, Paso 1) en 20 mL de metanol se agregaron 5 m de agua y 3 mL de hidróxido de sodio 2M. Después de 10 minutos la mezcla de reacción se Q concentró bajo vacío y el residuo ac?oso se extrajo dos veces con acetato de etilo. Los extractos combinados de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron bajo vacío para producir 0.54 g de producto crudo como un sólido color 5 blanco. El material crudo se recristalizó del acetato de Paso 1: Preparación de 4- (4-bromo-3- (piridin-4-il) lH-pirazol-1-il) piperidin-l-carboxilato de bencilo: A la 4- (4-bromo-lH-pirazol-3-il) -piridina 1.00 g; Ejemplo 4, Paso 1) en 13 mL de N,N-dimetilformamida! se agregaron 2.18 g de carbonato de cesio y luego se agregaron gota a gota 1.16 mL de 4-bromo-N-Z-piperidina La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, luego se calentó a 55°C durante toda la noche La mezcla de reacción enfriada se diluyó con agua y se extrajo con 2 porciones de acetato de etilo. El acetato de etilo se lavó con agua, salmuera se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo vacío para producir 2.48 g de producto crudo como un aceite incoloro. El material crudo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla 9:9:2 de diclorometano-acetato de etilo-metanol para proporcionar 0.86 g (rendimiento del 44%) de producto como un aceite incoloro, La RM? XH (CDC13) fue con istente con una mezcla 15:1 de la estructura deseada y el regioisómero 4- (4-bromo-5- (piridin-4- il ) -lH-pirazol-1-il ) piperiélin-1-carboxilato de bencilo . La CL/EM mostró dos picos, catia uno con un ion molecular M+l m/z 444.3 por medio de la ESI positiva. Paso Preparación de 4- (4- (1- (benciloxiimino) - 2, 3-dihidro-lH-inden-5-il) }5- (piridiri-4-il) -lH-pirazol-1- il) piperidin-1-carboxilato de (£) -bencilo: Al 4- (4-bromo-3-' (piridin-4-il) -lH-pirazol-! -il) piperidin-1-carboxilato de bencilo (0.32; Ejemplo 5, Paso 1) en 10 mL de acetonitrilo y 3 mL de agua se agre!garon 0.3 15 g de ácido (£)-l-(benciloxiimino) -2, 3-dihidro-lH-inde:?-5-ilborónico (preparado como se describe en el Ejemplo 2 , Paso 4) y 0.30 g de carbonato de potasio. La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno y se agrega ron 84 ng de catalizador de tetracis (trifenilfosfina) páladio(O) La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 2 horas, se filtró a través de celite y la torta de filtro se lavó con acetonitrilo. El producto filtrado se evaporó bajo vacío para generar un producto crudo. El residuo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con acetato de etilo para proporcionar 0.36 g (rendimiento del 83%) de pproducto co o un aceite incoloro. La RMN XH (CDC13) fue consistente con 1a estructura deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 598.3 por medio de la ESI positiva Paso 3: Preparadion de oxima de 5- (1- (piperidin-4-il) -3-piridin-4-il-l#-pira ol-4-iil) -2, 3-dihidroinden-l-on¿ 105: Al 4- (4- (l-(bencilox nmino -Udihidro-lH-inden-5-il) -5- (piridin-4-il) -lH-pirazol-1-il) pipéridin-1-carboxilato de (£) -bencilo (0.35 g; Ejemplo 5, Paso 2) en 10 mL de metanol se agregaron 390 µL de pcido clorhídrico 6M y 40 mg de hidróxido de paladio (20%| en peso sobre carbón) . Un balón relleno de hidrógeno se unió al recipiente de reacción y la mezcla se agitó a temperadura ambiente durante 1.5 horas. La ! agregaron 0.124 g de 6-aloronicotinonitrilo. La mezcla se calentó a 80°C durante toda la noch a . La mezcla de reacción enfriada se diluyó con agua y e1 sólido resultante se recolectó por medio de la filtración al vacío para proporcionar 0.26 g (rendimiento del 89%= de producto como un sólido de color canela. La RMN 1ti :3C13) fue consistente con la estructura deseada. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 328.5 por medio de la ESI positiva, Paso 2: Preparación de (£)-6-(4-l- (benciloxiimino) -2, 3-dihidro-lfí-inden-5-il) 3- (piridin-4-il) - lH-pirazol-1-il ) nicotinonitrilo: Al 6- (4-bromo-3- (piridin-4- il) -lH-pirazol-1-il) nicotihonitrilo (0.26 g; Ejemplo 6, Paso 1) en 16 mL de acetonitrilo y 4 mL de agua se agregó el ácido (£)-l- (benci loxiimino) -2, 3-dihidro-lJí-inden-5- ilborónico (0.34 g; Ejemplb 2, Paso 4) y 0.33 g de carbonato de potasio. La mezcla de reacción se purgó con nitrógeno y se agregaron 46 mg catalizador de tetracis (trifenilfosfina) paladío (0 La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 1.5 horas , se filtró a través de celite, la torta de filtro se layó con acetonitrilo. El producto filtrado se evapqró para generar un producto crudo el cual se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla 10:1 de diclorometano-metanol para proporcionar 0.15 g (rendimiento de1 36%) de producto como ' un sólido color amarillo pálido, La RMN XH (CDC13) fue consistente con la estructura deseada, La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 483.2 por metiio de la ESI positiva. Paso 3: Preparación de oxima de 5-(l-(5-(aminometil) piridin-2-il) 3-piridin-4-il-líí-pirazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-l-ona 117 Al (E) -6- (4- (1- (benciloxiimino) -2, 3-dihidro-lfí-inden-5-il 3- (piridin-4-il) -lH-pirazol-1-il ) nicotinonitrilo (0.15 cj; Ejemplo 6, Paso 2) en 10 mL de metanol se agregaron 205 µL de ácido clorhídrico 6M y 11 mg hidróxido de paladio (20% en peso sobre carbón! Un balón relleno de hidrógeno se unió al recipiente de reacción y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se filtró a través de celite y el celite se lavó on metanol. El producto filtrado se concentró bajo vacío y el residuo se disolvió en 10 mL de metanol, se trató con 1.00 g de resina de MP-carbonato (2.86 mmol/carga) durante 20 minutos, se filtró y se evaporó bajo vacío. El producto crudo se purificó por metiio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla de diclorometano-metanol-trietilamina 50:10:1 para producir 0.088 g (rendimiento del 71%) de un sólido color blanco. La RMN 1H ds DMSO) fue consistente con la estructura deseada 117. La CL/EM mostró un pico con un ion molecular M+l de m/z 397.3 por medio de la ESI positiva. pirazol-3-amino : Al -oxo-3- (piridin-4-il) propanonitrilo (3.40 g; Ejemplo 7, Paso 1 ) suspendído en 230 mL de etanol se agregaron 2.92 L de hidrazina La mezcla se calentó a reflujo durante 3 horas y se concentró a sequedad. El residuo se purificó por medio de la cromatografía, eluyendo con una mezcla de metanol al 10% en diclorometano para generar 0.80 g (rendimiento del 21%) d producto como un sólido color amarillo claro. La EM mostró un on molecular M+l de m/z 161.3 por medio de la APCI positiva . Paso 3 Preparación de 2- (piridin-4-il)pirazolo[1.5-a] pirimidina: A la 5- (piridin-4-il) -1-H-pirazol-3-amina (0.50 g; Ejemplo 1 , Paso 2) en 31 mL de etanol se agregaron 0.182 g tie cloruro de zinc, 0.54 mL de malonaldehído y 7.8 mL de ácido clorhídrico concentrado. La mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora, se enfrió y se concentró a sequedad. El residuo se tomó en hidróxido de amonio concentrado, se diluyó con agua y se extrajo con una mezcla de metanol al 10% en acetato! de etilo. Los extractos se secaron sobre sulfato1 de sodio y se evaporaron para proporcionar 0.50 g (rendijtiiento del 11%) de producto como un sólido color canela. La RMN 1H (d6 DMSO) fue consistente con la estructura deseada. La EM mostró un ion molecular M+l de m/z 197.4 por medio de la APCI positiva. Paso 4: Preparación de 3-bromo-2- (piridin-4-il) pirazolo [1.5-a] pirimidipa: A la 2- (piridin-4- il) pirazolo [1.5-a] pirimidipa (0.30 g en 15 L de cloroformo se agregó gota a gota una solución c e 86 µL de bromo en 1 mL cloroformo. Después de l.í horas a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con diclorometano, se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10%, se secó sobre sulfato de sodio se filtró y se evaporó para proporcionar 386 mg (rendimiento del 92%) de producto como un sólido color canela. La EM mostró un ion molecular M+l de m/z 277.4 por medio de la APCI positiva. Paso 5: Preparación de O-metil-oxima de 5-(2- (piridin-4-il) pirazolo [ 1.5-a] pirimid: n-3-il)-2,3-dihidroinden-1-ona : A la 3-bromo-2- (piridin-4-il)pirazolo[1.5-a] pirimidina (0.150 g; Ejemplo 7, Paso 4) y el ácido (£) -1- (metoxiimino -2, 3-dihidro-líí-inden-5-ilborónico (0.224 g; Ejemplo 1, Paso 5) en 5.5 mL de 1,2-dimetoxietano se agregaron 0.167 mL de trietilamina y 27 mg de 1, ' -bis (difenilfosfino ferrocenej-paladio (II). La mezcla se calentó a 60°C durante 16 horas, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con carboiiíato de potasio acuoso al 10% , se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó para generar 94 mg (rendimiento del 49!fe) de producto como un sólido color amarillo. La RMN H (CDC13) fue consistente con la estructura deseada. La EM mostró un ion molecular M+l de m/z 356.2 por medio de la RZ positiva Paso 6: Preparadion de 5- (2- (piridin-4-il) pirazolo [1.5-a] pirimidin-3-il) -2 , 3jdihidroinden-1-ona : A la O-metil- oxima de 5- (2- (piridin-41-il) pirazoilo [1.5-a] pirimidin-3-il) -2, 3-dihidroinden-l-ona (0 090 g; Ejemplo 7, Paso 5) en 1.3 mL de dioxano se agregaron 1.3 mL de ácido clorhídrico 4M y la mezcla se calentó a 100°C durante 5 horas. La mezcla de reacción enfriada se diluyó con acetato de etilo, se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10%, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó para generar 75 mg de producto como un sólido color ámpar. Este material se mantuvo sin purificación adicional. Paso 7 : Preparación de oxima de 5- (2- (piridin-4-il) pirazolo [1.5-a] pirimidin-3-il)-2, 3-dihidroinden-l-ona 124: A la 5-(2-(piridin-4-il) pirazolo [1 5-a] pirimidin-3-il) -2,3-dihidroinden-1-ona (0.050 g; Ejemplo 7, Paso 6) en 1.5 mL de etanol se agregaron 16 mg de clorhidrato de hidroxilamina y 19 µL de piridina. La mezcla resultante se calentó a 80°C durante 3 horas. La mezcla de reacci 5n enfriada se diluyó con acetato de etilo, se lavó con carbonato de potasio acuoso al 10% se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se evaporó I para generar un producto crudo. El material crudo se purificó por medio de la cromatografía preparativa de capa delgada, eluyendo con una mezcla de metanol al 10% en diclorometano para proporcionar 10 mg de producto como un sólido color canela. La RMN 1H (d6 DMSO) fue consistente con el compuesto deseado 124. La EM mostró un ion molecular de M+l de m/z 342.2 por medio de la APCI positiva, ?jemplo 8 Protocolo de ensayo de B-Raf IC5C La actividad de la proteína de B-Raf recombinante humana puede valorarse in vi tro por medio del ensayo de la incorporación de fosfato radioetiquetado al cinasa MAP recombinante, un substratc fisiológico conocido de B-Raf, de acuerdo con los documentos US 2004/127496 y WO 03/022840. La proteína de B-Raf recombinante, humana, catalíticamente activa se obtiene por medio de la purificación de células de insecto sf9 infectadas con un vector de expresión de baculovirus recombinante de B-Raf humana. Para asegurar que la fosforilación de todo e 1 substrato resultó de la actividad de B-Raf, se utilizó una forma catalíticamente inactiva de MEK. Esta proteína se purifica de la MEK inactiva, mutante de la expresión de células bacteriana,s como una proteína de fusión con glutationa-S-transferasa [GST-kdMEK) . La actividad/ir.hibición de B-Raf de longitud completa V600E se estimó al medir la incorporación de fosfato radioetiquetado de [?-33P] ATP en MEK silvestre modificada con FSBA. Las mezclas de ensayo de 30 µL contuvieron Na Pipes 25 mM, pH 7.2, KCl 100 mM, MgCl2 10 mM, ß-glicerofosfato 5 mM, Vanadato de Na 100 µM, ATP 4 µM, [?-33P]ATP 500 nCi, FSBA-MEK 1 µM y B-Raf de longitud completa V600E 20 nM. Las incubaciones se llevaron a cabo a 22°C en una placa Costar 3365 -MR (Corning) . Antes del ensayo, a B-Raf y la FSBA-MEK se incubaron previamente juntas en amortiguador de ensayo a 1.5X (20 µL de 30 nM y 1.5 µM, respectivanente) durante 15 minutos y el ensayo se inició por la adición de 10 µL de ATP 12 µM, después de la incubación de 60 minutos, las mezclas de ensayo se enfriaron rápidamente por la adidión de 200 µL de TCA al 25%, la placa se mezcló eh un agitador giratorio durante 10 minutos y el producto se capturó en una placa de filtro Perkin-Elmer GF/B utilizando un recolector Tomtec Mach III Harvester . Después de sellar el fondo de la placa, se agregaron 32 µL de cóctel de centelleo Bio-Safe II -MR (Research Products International] cada pocilio y la placa se selló en la parte superior y se contó en un dispositivo Topcount NXTMR (Packard) .

Ejemplo 9 Ensayo de B-Raf in vi tro La actividad de Los compue stos de prueba (Fórmulas la y Ib) como inhibidores de B-Raf puede determinarse por medio del siguiente ensayo de enlace de cinasa por anisotropía de fluorescencia in vitro, de acuerdo con los documentos U.S. 2004/127496 y WO 03/0 2;2840 como sigue. La enzima cinasai, un ligando fluorescente y una concentración variable de., compuesto de prueba se incuban juntos para alcanzar un equilibrio termodinámico bajo condiciones tales que en ausencia del compuesto de prueba el ligando fluorescente se enlaza a la enzima significativamente (>50%) en presencia de una concentración suficiente (>10 x Ki) de un inhibidor potente, la anisotropía del ligando fluorescente no enlazado es mesurablemente diferente del valor enlazado. La concentración de enzima cinasa es preferiblemente mayor que o igual a 1 x Kf. La concentración de ligando fluorescente requerida dependerá de la instrumentación utilizada y las propiedades fluorescentes y fisicoquímicas. La concent]ración uti lizada debe ser más baja que la concentración de L¿ enzima cinasa y preferiblemente menor que la mitad de la concentración de la enzima cinasa Un protocolo típico es: 1. Todos los compuestos disueltos en Amortiguador de comparación HEPES 50 m JM, producto farmacéutico 7.5, CHAPS 1 mM, MgCl2 10 mM. ¡ 2. Concentración de enzima B-Raf: 1 nM 3. Concentración de ligando fluorescente: 0.5 nM 4. Concentración de compuesto de prueba: 0.5 nM-100 µM 5. Componentes incubados en un volumen final de 10 µL en una placa de microtítulo negra tipo B LJL HE 384MR I hasta que se alcanza el equilibrio (aproximadamente de 3 a 30 horas) Anisotropía fluoresqente leída por LJL Acquest MR colaboradores, Brain Res., (1995) 687:167-174), bloqueadores de canales de Na (Tasker y colaboradores, J. Neurosci., (1992) 12:98-4308) y bloqueadores de canales de Ca (Pringle y colaboradores (1996) Stroké 7:2124-2130) Método: Los cultivos organotípicos de rebanadas hipocámpicas se prepararon utilizando el método de Stoppini y colaboradores, (1995) J. Neurosci . Methods 37:173-182. En resumen, las secciones c e 400 micrómetros preparadas de hipocampos de ratas Sprague Dawley postnatales de 7-8 días se cultivaron sobre membranas semiporosas durante 9-12 días. La OGD entonces se indujo por medio de .a incubación en un medio libre de suero y glucosa en una camara anaeróbica durante 45 minutos. Los cultivos entohces regresaron a la incubadora de aire/C02 durante 23 horas, antes del análisis. Se utilizó ' yoduro de propidio (Pl) como un indicador de la muerte celular. El Pl no es tóxico para las neuronas y se ha utilizado en muchos estudios para evaluar la viabilidad de células. En las neuronas fañadas el Pl entra y se enlaza a los ácidos nucleicos El Pl enlazado muestra una emisión 1 incrementada a 635 nm cuando se excita a 540 nm. Se toma una imagen de fluorescencia deiPI y una imagen de luz blanca y se analiza la proporción de muerte de células. El área de la región CAÍ se define a partir de la imagen de luz blanca y se superpone sobre la imagen de Pl . La señal de Pl se limita y el área de daño de Pl se expresa como un porcentaje de área ¡ ' Ejemplo 12 Ensayo de Fosforijlación de IERK 1/2 Celular Las propiedades de inhibición de ERK de los compuestos de la presente invención pueden determinarse por medio del siguiente ensayo de proliferación celular in vitro. La inhibición de fosforilación de ERKl/2 basal se determinó al incubar células con un compuesto durante 1 hora y cuantificar la señal de pERK flúorescente en células fijas y la normalización a la señal de ERK total . Materiales y Métodos: Las células Malme-3M se obtuvieron de ATCC y se desarrollaron en RPMI-1640 complementado con suero bovino fetal al 10% . Las células se colocaron en placas de 96 pocilios a 15,000 células/pocilio y se les permitió unirse durante 1-2 horas. Los compuestos diluidos entonces se agregaron a una concentración final de DMSO al 1%. Después de 1 hora, las células se lavaron con PBS y se fijaron en formaldehído al 3.7% en PBS durante 15 minutos. Esto fue seguido p 3or el lavado en PBS/Triton X-100 al 0.2% y la permeabilización en MeOH al 100% durante 15 | minutos. Las células se bloquearon en amortiguador de bloqueo Odyssey .MR (LI-COR Biosciendes) durante al menos 1 hora. Los anticuerpos para ERK fosforilada (Cell Signaling #9106, monoclonales) y la ERK totall (Santa Cruz Biotechnology #sc-94, policlonal) se agregaron a las célula!s y se incubaron durante 1 al menos 1 hora. Después ¡del lavado con PBS/TritonX-100 al los 12 pocilios vacíos re tantes, se agregan medios completos para formar un grupo de c?ntrol de vehículo a fin de medir el fondo. Las placas se in -uban a 3 7°C durante 3 días. Una solución de H-timidina 1 mCi/mL, New England Nuclear, Boston, Mass.) se diluye a 20 µCi/mL en medio de RPMI, luego se agregan 20 µL de esta solución a cada pocilio. Las placas se incuban adicionalmente a 37°C dürante 8 horas y luego se recolectan y se analizan por captación de 3H-timidina utilizando un contador de centelleo líquido .

Ejemplo 13 Ensayo de V iiabilidad de Células Las células viafles despu s de una incubación de 3 días con el compuesto se cuantificáron utilizando el ensayo colorimétrico MTS/PMSMR de Promega. Materiales y Métodos: Las células Malme-3M se colocaron en placas de 96 pocilios a una densidad de 20,000 células/pocilio. Las cél. las se dejaron unir durante 1-2 horas. Los compuestos diluidos entonces se agregaron a las células a una concentraci n final de DMSO al 0.5%. Después de 3 días, el número de céluilas viables se determinó utilizando el ensayo MTSMR (Promega, Ensayo de Proliferación de Células no Radioactivo Acuoso CellTiter 96MR) . En resumen, los reactivos de MTS ,MR se agregaron a las células y se incubaron durante 1 hora. La absorbancia a 490 nm entonces se leyó utilizando un lector de microplacas. Se substrajo el fondo del medio de únicamente los pocilios La descripción anterio se considera como ilustrativa únicamente de los principios de la invención. Además, puesto que numerosas modificaciones y cambios serán aparentes fácilmente para aquellas personas expertas en el campo, no se desea limitar la invención a la construcción y proceso exactos mostrados como se describiera anteriormente, Por consiguiente, se puede considerar que todas las modificaciones y equivalentes adecúa dos se encuentran dentro del alcance de la invención definida por las reivindicaciones que siguen. Las palabras comprende", "que comprende", "incluyen", "que incluye" y "incluye" cuando se utilizan en esta especificación y en las siguientes reivindicaciones se proponen para especificar la presencia de características, números enteros, componentes o pasos establecidos, pero no excluyen la presencia o adición de una o más características, números enteros, componentes, pasos diferentes o grupos de los mismos. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la I invención

Claims (1)

1. carbociclilo y arilo son sustituidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados i ndependientemente de F, Cl, Br, I, -C(=Y)R20, -C(=Y)OR 20 C(=Y)NR20R2 -NR20R21, OR 20 CN, C(=0 C(=0)OR20, alquilo, ¡alquil C?-C8)NR 2¿0UDR21 heterociclilo; R2 se seleccion de H, El, Cl, Br, I, -C(=Y)R ,20 -OR 20 -OC(=Y)R 20 -OC(=Y)OR 20 -OC(=Y)NR20R21, -OS(0)2(OR 20, -OP(=Y) ( R20) (OR21) -OP(OR 20, (OR21) ,21 ,20D21 -P(=Y) (OR ,2'0 (OR¿1) , -P(=Y) (<pR)NR¿?R , -SR20, -S(0)R20, -S(0)2R20 -S(0 -S(O) (OR 23 -S( 0)2(OR20), -SC(=Y)R ,20 -SC(=Y)OR*?, -SC(=Y)NR20R , lactama de anillo de 5 a 7 miembros, lactona de anillo de 5 a 7 miembros, sultama de anillo de 5 a 7 miembros, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a átomos de carbono, carbociclilo de 3 a 12 átomos de carbono, arilo de 6 a 20 átomos de carbono y heterociclilo de 2 a 20 átomos de carbono, en donde los gr jpos alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, arilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados independientemente de F, Cl, Br, I, OR20, NR20R21, -SR20, -S(0)R20, -S(0)2R20, a Lquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, arilo y heterociclilo, o R1 y R2 de la Fórmula la junto con los átomos a los cuales están unidos forman opc ionalmente un anillo de heterociclo fusionado de 5 o 6 miembros, saturado, 0 $ 0 5 la lo la o la lo la la lo la de la de reivindicación 22, caracterizado porque X es 2-piridilo, 3 piridilo, 4-piridilo, -imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazolilo, 4-pirazolilol 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5- tiazolilo, 3-piridazinilo,| 4-piridazLnilo, 5-piridazinilo, 2- pirimidinilo, 5-pirimidini Ilo, 6-pir Iimidinilo, 2-pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilp -oxazolilo sustituidos opcionalmente . 24. El compueisto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque X es 4-piridilo 10 sustituido opcionalmente. 25. El compue »sto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado poique el anillo A es un anillo sustituido opcior. almente seleccionado de fenilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, cicl ohexilo, ciciohexenilo, 1. tetrahidrofuranilo, tetra lidropiramio, tetrahidropiridilo, piperazinilo, pirrolidinilo, piridilo, pirimidinilo, dihidrotiofenilo, tiofenilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo y p :.razolilo 26. El compue ¿to de conformidad con la 20 reivindicación 1, carácterizado porque R1 y R2 de la fórmula la junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo de heterociclo fusionado de 5 o 6 miembros que tiene al menos dos heteroátomos seleccionados de O, N y S 27. El compuesto de conformidad con la 25 reivindicación 26, caracter Iizado porqIue R1 y R2 junto con los átomos de pirimi la reivin un anillo lo, ciclop lo, tetrah lo, pipera lo, dihidr lo, oxazol la reivin las fórmul miembros, lactona de anil lo de 5 7 miembros, sultama de anillo de 5 a 7 miembros, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alquenilo de 2 a 8 átomos de carbono, alquinilo de 2 a 8 átomos de carbono, carbociclilo de B a 12 átomos de carbono, 5 arilo de 6 a 20 átomos de carbono y heterociclo de 2 20 átomos de carbono, en donde los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilol, arilo y heterociclilo son sustituidos opcionalmente| por uno c más grupos seleccionados independientemente de F, Cl, Br, I, OR 20 NR20R21 -SR20, S (O)R 20 -S(0),R 20 alquilo, alquenilo, alquinilo, carbociclilo, arilo y heterociclo . 52. El compuesto de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque X se selecciona de fenilo, naftilo y bifenilo y formas sustituidas de los |15 mismos . 53. El compuesto de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque X se selecciona de 2- piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-imidazolilo, 4- imidazolilo, 3-pirazolilo, 4-pir?azolilo, 2-tiazolilo, 4- !20 tiazolilo y 5-tiazolilo y formas sustituidas de los mismos. 54. El compuesto de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque X es 4-piridilo sustituido opcionalmente. 55. El compuesto dé conformidad con la 25 reivindicación 51, caracterizado porque el anillo A es un de ilo, ilo, ilo, la las la las 5-(l-(2-hidroxiet1il) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il) -isoquinolin-1-ol ; 5- (l-metil-3-piri:din-4-il-lH-pirazol-4-il) -indolin- 2-ona; oxima de 5-(l-ácido ácético-3-piridin-4-il-lH- pirazol-4-il) -2, 3-dihidroinden-l-ona; 5- (1- (2-hidroxietil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il) -2, 3-dihidroftalazina-íl, 4-diona; I 5- (1- (2-hidroxietil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- LO il)-6-lH-indol; 5- (1- (2-hidroxi(etil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il) -2- (2-metoxietil) isoir dcolin-1, 3-diona; 5- (1- (2-hidroxiJe(til) -3-pi ridin-4-il-lH-pirazol-4- ¡ il) -benzo [d] [1, 3] dioxol; I ¡15 5-(l-(2-hidroxie«til) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- I l il) -quinazolin-4 (3H) -ona; I 5- (1- (2-hidroxiietil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il) -2, 3-dihidro-lH-inden -1-amina; 5- (1- (2-hidrox Letil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- 20 il ) -N-tert-butiloxicarbolnil-2 , 3-dihidro-lH-inden-l-amine ; 5- ( 1- ( 2-hidroxjietil ) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il ) -5-lH-indol ; 5- (1- (2-hidroxíietil) -3-piridin-4-il-lH-pirazol-4- il) -5-isoindoline-l, 3-dilona; 25 oxima de (Z) -5- ( l-metil-3- (piridin-4-il) -1H- en una cantidad para inhibir de manera detectable la actividad de cinasas Raf y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, 62. Un método para tratar o disminuir la gravedad de una enfermedad o condición seleccionada del grupo que consiste de cáncer, apoplejía, diabetes, hepatomegalia, enfermedad cardiovascular enfermedad de Alzheimer, fibrosis quística, enfermedad riral, enrfermedades autoinmunes, aterosclerosis, restenosils, psoriasis, trastornos alérgicos, inflamación, trastornos neurológicos, una enfermedad relacionada con hormonas, condiciones asociadas con el transplante de órganos, enfermedades de inmunodeficiencia, trastornos destructivos de huesos, trastornos proliferativos, enfermedades infecciosas] condiciones asociadas con la muerte de células, agregación de plaquetas inducida por trombina, leucemia mielógena crónica (CML) , enfermedad hepática, condiciones inmunes pato )Lógicas que implican la activación de células T y trastornos del CNS en un paciente, caracterizado porque comprende el paso que consiste en administrar al paciente un compuesto! terapéuticamente efectivo de un I I compuesto de conformidad con la reivindicación 1. 63. Un método para tratar el cáncer en un mamífero en necesidad de este tratamiento, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1. 64. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el cáncer se selecciona de mama, ovario, cerviz, próstata, testículos, tracto genitourinario, esófago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estómago, piel, queratoacantoma, pulmón, carcinoma epidermoide, carcinoma de células grandes, carcinoma pulmonar no microcítico (NSCLC) , carcinoma microcítico, adenocarcinoma pulmonar, hueso, colon, adenoma, páncreas, adenocarcinoma, 10 tiroides, carcinoma folicular, carcinoma no diferenciado, carcinoma papilar, semin?ma, melanoma, sarcoma, carcinoma de vejiga, carcinoma hepát.ico y pa;saje viliares, carcinoma renal, trastornos mieloides, trastornos linfoides, células pilosas, cavidad bucal y faringe (oral), labio, lengua, boca, 15 faringe, intestino delgado, color-•recto, intestino grueso, recto, cerebro y sistepa nervioso central, de Hodgkin y leucemia . 65. Un método para | tratar una enfermedad cardiovascular seleccionada de restenosis, cardiomegalia, 20 aterosclerosis, infarto de miocardio o insuficiencia cardíaca congestiva en un mamífe ;ro en neceísidad de este tratamiento, caracterizado porque comprenda administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación I 25 66. Un métc )do para | tratar una enfermedad neurodegenerativa seleccionada de la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntingtor , ísquemi?a cerebral o enfermedad neurodegenerativa causada por una lesión traumática, neurotoxicidad inducida por glutíamato o hipoxia en un mamífero en necesidad de este t ratamiento, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1. 10 67. Un métoido para tratar enfermedades inflamatorias seleccionas de artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis de contacto y reacciones de hipersensibilidad retardada en un mamífero en necesidad de este tratamiento, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una ?l5 cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación '.. 68. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en la panufactur de un medicamento para el tratamiento profiláctico o terapéutico del cáncer. 20 69. El uso dé un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en la manufactura, de un medicamento para el tratamiento profiláctiqo o terapéutico de la enfermedad cardiovascular. 70. El uso dé un compuesto de conformidad con la 25 reivindicación 1 en la manufactura de un medicamento para el 80. Un método para hacer el compuesto de la fórmula Ib de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comp ende el paso que consiste en hacer reaccionar un compuesto d halo-pirazol: donde Hal es I, Br o Cl; con un compuesto de ácido borónico de anillo A fusionado: donde R es H o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono,