FORMULACIÓN FARMACÉUTICA PARA INCREMENTAR LA SOLUBILIDAD DE COMPUESTOS DE 10-HIDROXICAMPTOTECINA EN SOLVENTES POLARES NO ACUOSOS CAMPO TÉCNICO I,a presente invención se relaciona a una formulación farma eul i ea que comprende un compuesto de 10-h idrox Lcamptotec i na y un compuesto de amina cuyo valor pK, es 7.4 o mayor para incrementar la sol ubi 1 idad del compuesto de 10-h?d rox i campt otee i na cn un solvente polar no acuoso. TÉCNICA ANTECEDENTE Camp totee i na; ( S ) - -1 t i ! -4-h i d r o?? -1 II-p?rano[3' ,4' : 6,7] i ndo 1 i 7 i no | 1 , 2-b] qu i no 1 i n-3, 14 ( 411, 1 ?11) -diona) es un inhibidor prototipo de DN? topoi somerasa I, y es conocido como medicina auLi -cáncer fuerte. l,a campt oteeina tiene tal estructura estándar que el hidroxXo y et i lo son sustituidos en una posición de C?0 en la estructura cent ral que contiene cin o ani l los conectados ? a T , como se muest ra en la siguiente fot mu la 1 : [ 1 ormu la 1 |
LL compuesto de camptotecina tiene muy ba a solubi l idad en aqua asi como en solventes orgánicos, tales como etanol, d i c 1 o t ometano, acetona, aceton i r i 1 o, acetato de
etilo, etc. que son generalmente utilizados pera la formulación. También, La camptotecina es activada en condiciones ac'idicas puesto que el anillo E dei mismo existe en la forma ele una lactona, mientras que es i.nact iva en solución acuosa alcal ina puesto que el anillo E existe en la forma inactiva de un anión carboxi. ta solubilidad de la forma inactiva del anión carboxi en agua es 4 mg/ml o mayor, pero aquella de la forma activa de la forma lactona no es mayor que 10 µq/ml. Particularmente, La 10-hi clrox i campt otee i na (compuesto de La fórrnuLa la) que tiene un grupo hidroxi Lo fenólico en la posición 10 del anillo A es ionizada en solución básica cuyo pll es 8 a 12, y asi la solubi 1 idad del compuesfo de campfofecP na en un solvente polar puede ser incrementada. Sin embargo, si la solución básica anterior es una solución acuosa, un ion hidroxi Lo ataca el arillo de lactona del compuesto de camptotecina, para de osla manera formar el compuesto de camptotecina de la fórmula 2 en la forma de anión carboxi, y que es convertido a la forma inac iva (ver la Ecuación de reacción 1) [ cuación de reacción 11 R3N I 11.0 > R3N'll I- "OH
ormu la la Fórmula 2
Como se mostró en lo anterior, el compuesto de camptotecina tiene actividad anti-cáncer altamente potente, pero su uso para la terapia anti-cáncer es limitado puesto que la forma activa deL compuesto de camptotecina tiene muy poca solubilidad en agua. Así, a fin de utilizar el compuesto de camptotecina como una medicina pa a tratar enfermedades, es necesario incrementar la sol ubi! Ldad dei compuesto de camptotecina en un solvente con la estructura de lactona mantenida, es decir, la forma activa. Por ejemplo, 7-et.i 1-10-hi d roxi carnpt otee i na (compuesto de la fórmula Ib) es conocido como SN-38, y es un metabolito activo de Irinotecan (CPT-ll) el cual es un agente anti-cáncer en el mercado [ Fó mu la Ib]
SN-38 es conocido que mata células al combinarse con i a topoisomerasa i, una enzima participante en el proceso de la división celular, y al inhibir la síntesis de DN? durante la división celular. Sin embargo, la solubilidad de SN-38 en agua es no mayor que 10 µg/mL, y como tal es difícil de desarrol lar el. SN-38 como un producto clínico. Así, so ha desarrollado y comercial izado el CPT-ll el cual incrementa La
solubilidad de SN-38 cn agua a i elaborarse como un profármaco. Después do la ad inistración en ei cuerpo humano, el CPT-ll se metaboLlza mediante a carboxi es terasa en el higado o célula de cáncer, y se convierte en el SN-38 que tiene actividad fisiológica ai mostrar efectos ant i -canco r . Sin embargo, la relación de conversión de CPT-ll en el SN-38 tiene tal. actividad en col cuerpo humano solamente es de aproximadamente 2 a 8 . Por otra parto, se ha encontrado que la actividad de SN-38 para inhibir la topo i some rasa I es más alta que aquella de CPT-ll por aproximadamente 1,000 veces, y La ci totox Lc iclad i n v i t. ro de SN-38 cs más alta que aquella de CPT-ll por 2,000 veces. También, es conocido que el efecto de SN-38 para inhibir i a acetilcoiina que causa diarrea es mucho más baja que aquella de CPT-ll, y asi la posibilidad para causar diarrea que es uno de Los efectos secund rios principales de CPT-ll es muy baja. SN-38 existe cn la forma activa de una lacfona en condiciones acídicas, y existe en la forma inactiva de un anión carboxi en la condición alcalina, dependiendo del pll en una solución acuosa. Se conoce que i a solubilidad en agua del SN-38 en la forma del anión carboxi es 4 mg/mi o mayor, pero aquella de SN-38 en la forma activa de lactona no c.s mayor que 10 µg/ml. ?s í , si los compuestos de camptotecina se pueden solubilizar en una concentración más que clínicamente
significante, mientras que mantenga la forma activa de una lactona, ellos se pueden desarrollar como un agento anti-cáncer muy superior. Por ío tanto, han existido estudios extensivos para solubil i ar los compuestos de camptotecina. Por ejemplo, ías Patentes Norteamericanas Nos. 5,447,936, 5,859,023, 5,674,874, 5,958,937 y 5,900,419 divulgan composiciones para sol ubi! i zar los compuestos de campfotecina que comprenden SN-38 en solventes orgánicos polares tales como el i meti 1 aeeteam i da , N-me t i 1 -2-pi r rc 1 i dona , dimet i Lsosorb i cío, efe. Sin embargo, la inyección de tal solvente orgánico polar en ios vasos sanguíneos es extremadamente 1 imitada debido a algunas desventajas que la cantidad de solvente uti 1 Lzablc para o 1 cuerpo humano es limitada y el fármaco es extraído en el tiempo de mezclado con agua. También, ia patente publicada norteamericana No. 2003-215492 divulga una composición formulada de liposoma al formar en complejo SN-38 con lipido. El método utilizado en la misma es formar SN-38 en la forma ele una lactona bajo el pl-1 de condiciones acídicas, después formar SN-38 en la forma de un anión carboxi cu una solución acuosa en pH 8 ~ 10 y formularlo en c 1 1 i posoma . También, Zhang y colaboradores, [Inte national Journal of Pha macGuti.es, 270 (2004), páginas 93-107] divulgó una formulación de 1 i posoma de I.E-SM-38 que contiene SN-38, y ill iams y colaboradores, [Journal of Controlied Reléase, 91 (2003), páginas 167-172] divulgó una
formulación de nanopa rt í cu Las que contiene SN-38. Sin embargo, la necesidad permanece para desarrollar un método para solubilizar la 10-hidrox Lcamptotecina en una concentración más que clínicamente significante mientras que se mantiene La forma activa. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
SUJETO TÉCNICO Los presentes inventores han conducido estudios continuos para desarrollar un método para solubilizar un compuesto de 10-hidrox i camptotec i na en una concent ación más clínicamente significante mientras que se mantiene la forma activa. Como resultado, ellos confirman que si un compuesto de amina que tiene un valor pK de 7.4 o mayor se adiciona a una 10-hi droxicamptotec i na , el ataque nucleof llico de la base al grupo lactona del compuesto de camptotecina no ocurro, y asi el grupo lactona se conserva, manteniendo La actividad del fármaco, y también el grupo hidroxi lo en La posición 10 es ionizado a un anión fenólico, y así la solubilidad en un solvente orgánico polar se puede incrementar. Por lo tanto, los presentes inventores completaron la presente invención. El objetivo de la presente invención es proporcionar una formulación para incrementar la solubilidad de un compuesto de 10-h i cl roxi camptoteci na que comprende el compuesto de 10-h i cl rox i camptotec i na y un compuesto de amina cuyo valor pKa es 7.4 y mayor, para un solvente polar no
acuoso . MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Primero, la presente invención se relaciona a una formulación para incrementar ia solubilidad de un compuesto de 10-hicl rox i camptofec i na en un solvente polar no acuoso que comprende el compuesto de 10-h i el roxicampfotecina y un compuesto de amina cuyo valor pKa es 7.4 o mayor, para un solvente polar no acuoso. En la presente invención, un compuesto de 10-hidroxicamptotecina significa todos los compuesfos de camptotec Lna que tienen un grupo hidroxi fenóLico en la posición 10 del anil lo ? de la camptotecina como se muestra en la si uiente fórmula la I Eó rmu.1 a la]
Un compuesfo de 10-h.i.d rox i camptotecina de acuerdo con la presente invención se puede ael i clona 1 men te sistifuir con un grupo alqui lo inferior, a.lcoxi, aci loxi, tiidroxi, acilo, halo, amido, ciano, etc. en la posición 9 u 11 del anillo A, o posición 7 del anillo 13. El compuesto de 10-hidrox Lcamptofec i na de la presente invención comprende, pero no está limitado a, 10-h i clrox.i camptotec i na y 7-ptil-lO-hidroxi camptotecina (SN-38) . En la presente invención, 10-
hidroxicamptotec i. na cs de preferencia SN-38. De acuerdo con Ja presente invención, si un compuesto de 10-hidroxi camptotec i na , por ejemplo SN-38, se adiciona a un solvente polar no acuoso junto con un compuesto de amina que tiene una propiedad nuc 1 eo f i 1. Lea particula mente baja y básica alta, esto es, el valor pKa del compuesto es 7.4 o mayor, entre los compuestos básicos, el ataque nucleofí 1 ico de i a base para el grupo lactona del compuesto de camptotec Lna no ocurre, como se muestra en la siguiente Ecuación do reacción 1, y así el grupo lactona se conserva. Luego, mientras que la actividad ele un fármaco se mantiene, el grupo hidroxi lo en la posición 10 se ioniza para un anión fenóJ ico, para Incrementar la sol ubi 1 Ldad de un solvente polar no acuoso (ver Ja Ecuación de reacción 2) [Ecuación de reacción 2]
Eó rmul a 1 b Un compuesto de amina de Ja presente invención puede ani.oni.zar el grupo hidroxi en La posición 10, y puede ser cualquier compuesto de amina primario, secundario o terciario cuyo valor pKa es 7.4 o mayor, de preferencia 9 o mayor. De preferencia, el compuesto de amina se selecciona del grupo que consiste ele hidroxi alquilaminas de C¡ a C2o,
alqui l.am i ñas de C; a C.o y mezclas de Las mismas. Tales compuestos de amina incluyen hi drox La 1 qui laminas talos como mono-, di- o t ietanolamina, mono-, di- o tri i sopropano.Lamina, t rometam i. na ( t ri s (hi drox imef i 1 ) aminoetano) , etc, a 1 qu i 1 ami ñas terciarias tales como t rieti Lam i na , t r i prop i 1 amina , tributilamina, efe, alquilaminas secundarias tales como dietP lamina, dipropi lamina, d Lbut i 1 amina , etc, o mezclas de las mismas, de preferencia, hidrox i a 1 qu i Laminas tales como d tétano 1 ami na , t ietanolamina, trometamina, etc. Los compuestos de amina se pueden utilizar en una cantidad de mayor que 1 equivalente a 1 equivalente del compuesto de campt.ot.eci na , de preferencia 1 a 100 equivalentes, más de preferencia 1 a 50 equivalentes, mucho más ele preferencia 5 a 20 equivalentes. EJ so.1 vente polar no acuoso de la presente invención incluye solventes orgánicos aprobados para el uso en el cuerpo humano, de preferencia etanol, propil erigí i col, poliet i Leng 1 i coJ líquido que tiene un peso molecular ele 200 a 1,000 da 1 ton s , g 1 i ce r i na , N, N-d i met i 1 ace tam i da , N-metilp i r ro 1. i dona , di met i.1 i soso bi da , o mezclas de los mismos. El solvente polar no acuoso anterior se utiliza cn una cantidad suficiente para elaborar la concentración de 10-hid rox i.campfotee i na , ele prefe encia 0.1 a 5 mg/ml, y más de preferencia 0.5 a 2 mg/ml.
La composición de formulación de la presente invención puede contener surfactante a fin de prevenir la precipitación del. fármaco cuando La composición se diluye o se reconstituye con una solución acuosa ta.l como aqua para inyección, so luc; ion salina fisiológica, o solución de dextrosa al 5 r, , y para retardar la conversión dei grupo lactona a i. anión carboxi al pos-poner la exposición del grupo .Lactona del compuesfo ele camptotecina a una solución acuosa. Como un s rf ctante de la presente invención, cualquier surfactante se puede utilizar sin considerar la propiedad y apariencia del mismo, cuando la presente composición ele formulación se .solubiliza en un solvente orgánico. Los ejemplos de tal surfactante incluyen surfactantes de copo Limero de bioque tal como éster ele ácido graso de po 1 io i ef i 1 ensorbi tan simi lar a tween 20, tween 40, tween 80, etc,; derivados de aceite de ricino de poliox le t i .1 eno tales como cremophore EL, cremophoro RIMO, cremophore Rl-lßO, etc, esteres alquíl icos de poJ i ox i et i 1 eno tales como éster cefoester i 1 i co ele polioxil 20, éter eetílico de poliox i L 20, éter oleteo de pol. Loxil 20, éter cet. ílico de polioxil 2, éter eleí 1 i co de poJ i ox i 1 2, éter estearí Lico de polioxil 2, éter laurílico de polioxil 4, éter estea rí 1 ico de poiiox.il. JOO, efe,; succinato d-a- toco fe r i 1 do poiieti .1 eng 1. icol 1000 (vitamina E TPGS), sol uto 1 US 15 (12-hidroxiestea ato ele po 1 i et i. ienglico 1. 660), poloxámeros taJes
como poJoxamer 124, polo?amer 188, poloxamer 407, etc., de preferencia éster ele ácido graso de pol íoxicti lenscrbí tan, derivado de aceite de ricino de po 1 i oxi etileno, succinato d-a-tocoferil de poliel i lcnglicol 1000, solutol I1S 15, etc. Por otra parle, cuando la presente composición de formulación se prepara en forma liofil izada, la presente invención puede utilizar surfactant,es de poli me ro los cuales son sólidos a temperatura ambiente, copolímeros de bloque de poloxámeros tales como poloxamer 124, poloxamc 188, poloxamer 407, etc, o copolímeros de bloque afi fil íeos preparados al conectar bloques de polímero hidrofí lieos (A) y bloques de polímero h i el ro f ób eos (B) en la forma ele A-B, ?-B-A, B-A-B, ote. En los copol imeros ele bloque anf ifí lieos, bloque de polímero hidrofílico (A) es un polímero soluble acuoso, por ejemplo, po 1 i a 1 qu i 1 eng 1 i col o derivados del i smo , alcohol pol ivinílico, pol i vini lpi rrol idona o po 1 i acr i 1 am i da , etc, ele preferencia, uno de po 1 J eti 1 eng 1 i col , polivmi Jpi rrol idona y pol i et i 1 en-co-propilengl i col . El bloque de polímero hidrofóbico (B) cs un pol ímero insoluble, superiormente biocompat íble y b i o-dcg radab 1 c , y sus ejemplos incluyen pol éster, po lianhídrido, ácido poliarnino, po 1 lortoéste r o po 1 i fos f a ? eno, etc., de preferencia polilactida, poliglieolida, pol i cap ro 1 actona , pol ?a?oxan-2-ona, pol i lactic-co-gl icol ida, po 1 i lact?c-co-d?oxan-2-ona, pol L 1 act i e-co-capro 1 aetona , po 1 i g 1 i col íc-co-capro 1 actona ,
etc. Como el polímero anterior, s; prefiere utilizar un compuesto que tiene el peso molecular promedio en número de 200 a 60, 000. Los surfactantes se pueden utilizar cn 000 o menos relación en peso para una 10-h i d rox i camptot.ee i na , de preferencia 1 a 500 en relación en peso, y más de preferencia 10 a 250 en relación en peso. Cuando la presente composición de fo mulación se prepara como una formulación liofil izada, un agente lormador de torta para la 1 i o f i .1 i zaci ón, tal como manitol, sorbitol. o lactosa, se pueden adicionar ai mismo. La presente composición ele formulación además puede contener un excipiente; farmacéuticamente aceptable, y aceite hidrofóblco tal como tocoferol, bencllbenzoa to, aceite de semilla de ajonjolí, aceite ele ricino, aceite de soya, aceite de semilla de algodón, f r i g 1 i cér i do, etc. se puede adicionar al mismo a fin de retardar la exposición de la presente; composición a una solución acuosa cuando la composición se diluye con agua para la inyección. Una modal i ciad del méfodo para preparar la presente composición de formulación como una solución o formulación 1 lo fl 1 izada es co o si ue. 1 a 10 rng de una 10-h i d rox i camptotee; i na y un compuesto de amina son adicionados al solvente no acuoso por 1 a 100 equ.iva.1 entes para un compuesto de camptot.ec.ina, y
solubilizar, y luego el surfactante se adiciona al mismo para preparar una solución. Esta solución se filtra con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm para remover La sustancia insoluto le, y luego se sella. Como un ejemplo específico, 1 mg de SN-38 y 10 mg de Lrometamina se pueden adicionar a 1 ml ele ctanol anhidro para preparar una solución pura de coLor anaranjado. Luego, 500 mg de cremophore El, se adiciona a i mismo para preparar un solución pura. Esta solución se diluye con ace ton i t r i 1 o , y luego se analiza mediante la HPLC pa a confirmar que 100% de SN-38 existe en la forma de una Lactona, y la solubilidad de SN-38 es 98% en peso o mayor. También, la solución preparada se conserva en un refrigerador durante; 1 semana, y luego se diluye con 0.9% de solución salina fisiológica para preparar 5 ml de solución. Después, SN-38 se determina mediante i a I1PLC para confirmar que la concentración de SM-38 fue 220 µg/m], 95% o más de SN-38 existe en la forma de la lactona, y el pll de La solución se diluyó con solución salina 8.7. Alternativamente, un compuesto de 10-hidroxicamptotec i na y un compuesto de amina son solub; 1 i ados en un solvente polar no acuoso, y el surfactante de polimero se adiciona a los mismos para preparar una solución. Enseguida, un agenfe formador de torta para la lio ilización se adiciona al mismo para preparar una formulación lio fi üzada . Como un ejemplo específico, 250 mg de copolímero
(mPEG-PL?) de po 1 i ef i 1 engl i co 1 (peso molecular: 2,000 daltons) y ácido poJ i láctico (peso molecular: 1,800 daltons) se puede adicionar a una solución en el cual SN-38 y trometamina se sol ubi i i zan en etanol anhidro come; en lo anterior, para preparar una solución pura, y luego 4 ml de solución de manitol acuoso (100 mg/ml) como un agente formador de torta para La 1 i o f i 1 i zac i ón se adiciono al mismo, el cual se filtra con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y se .1 i o f i..1 Iza. Esta formulación .1 i o f i 1 i z.ada se reconstituye con 4 ml de agua para la inyección, y luego se analiza mediante la HPLC para confirmar que Ja concentración de SN-38 fue 205 µq/ml, 92% o más ele SN-38 existe en la forma de una .lactona, y el pll de la solución acuosa fue 8.4. En la presente composJ c ion de formulación, ios compuestos ele campt.oteci na pueden mantener la forma de lactona activa y la solubilidad de los compuestos es incrementada en un solvente pola no acuoso. Como un ejemplo especifico, la solubilidad de; SN-38 determinado después de suspender SN-38 en ctanol anhidro sin adicionar un compuesto de amina fue dentro del intervalo de; un casi µg/mL. Sin embargo, cuando se determina después de adicionar 10 equivalentes de t r tétano Lamí na a etanol anhidro, La sol ubi 1 i dad ele SN-38 fue de aprox i maclamen fe 1 mg/ml, lo cual se incrementa por aproximadamente 500 o más veces. También, a partir del análisis ele HPLC, SN-38 fue en la forma de una
lactona, y la forma ele anión no c rbo i se observó. La formulación farmacéutica de acuerdo con la presente invención se puede utilizar como un agente; anticáncer, y puede comprender ele 1 a 40 mg de compuesto camptotecina cn 1 ml do solución. Las formulaciones de solución o l iofilizadas tienen tal concentración que pueden ser oralmente administ adas o i inyectadas para tratar pacientes con cáncer. Al tiempo de oralmente aclminist rar la presente formulación como una cápsula o una tableta, es preferible para el uso una solución concentrada, y que la formulación puede ser utilizada en una solución original no diluida o forma 1 iofi 1 izada. En el caso de la inyección, es preferible que la concentración del compuesto ele camptotecina en una solución d i 1 u i da es apro i adamente 0.001 a aproximadamente 1.0 mq/ml, más ele preferencia 0.1 a 0.5 q/ml a i diluir o reconstitui la presente composición de formulación con solución acuosa tal como agua para inyección, solución salina fisiológica, o solución de dextrosa a i 5%, efc . , y ol pll es 3 a 1 . Enseguida, la presente invención es especí ficamente descrita por los ejemplos, pero el alcance de la presente invención no se l imita por estos de ninguna manera. Ejemplo 1: Mejoramiento de la solubilidad de SN-38 en un solvente orgánico polar en la presencia de un compuesto de amina
1 mg de SN-38 (manufactu ante: Abatra Co . , China) se colocó en cada uno de los seis contenedores, y se suspendió en 1 mi de etanol anhidro. Se adicionó dietano La i na a cada uno de los contenedores por 0, 1, 5, 10, 20 y 100 equivalentes a 1 equ.ival.ente de SN-38, y se calentó a 60°C, y luego se conservó a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de 12 horas, esta solución se fi Ltró con un filtro que tiene un tamaño de poro ele 200 nm. La adición de 1 o más equivalentes de d i.etano.1 amina proporcionó una solución que fue anaranjada en color. El filtrado se analizó mediante ia HPLC para determinar la sol ubi 1 idad de SN-38, bajo la siguiente condición: [Tabla 1 ] Art.í cuto Descripción Co 1 uinna VYDAC eí 8 Muí 11 -ani ] 1 o (e/e
Temperatura de columna 25 ° C ? (solución requ 1 adora ] Solí acuosa de a:n ma al 3 v/v ( TF,A? ¡ 13 (sol vence orgAni o) r .i lo A/B 80/20, v/v Ajuste de pt 5, 5 (ácido acético) Transferencia de se ¡nóv.i 1 ! oc r ¿i t i camen te .ocidaci de fluí o 1 mq/ml Lonaicud de onda E:: 31P nm, Em 515 nm
SN-38 se disolvió en concentraciones de 100 a 4,000 ng/ml. en solvente de su 1 fox i do de di motil o (DMSO), a partir de .Lo cual, la curva estándar se obtuvo, y fuego SN-38 se cuantificó. Los resultados de solubilidad para SN-38 en la presencia de d i etano 1 am i na se muesfran en la Tabla 2. [Tabla 2] So l ub i 1 i ciad de SN - 38 pa ra e ta nol. en l a p resenc ia do die taño l a mi na
Como se mostró en la Tabla 2, la sol ubi 1 i.ciad de SN-38 en etanol fue 0.008 mg/ml, pero la solubilidad se incrementó ai adicionar dietanolamina, y la solubilidad fue 1 mg/mi o mayor en la presencia de; 5 o más equivalentes de dietano Lamina. Ejemplo 2 : Solubilidad de SN-38 en etanol de acuerdo a la clase del compuesto de amina
Como es descrito cn el Ejemplo 1, 1 mg de SN-38 se suspendió en 1 mi de etanol anhidro. Varias clases de compuestos de amina como se muestran en la siguiente Tabla 3 se adicionaron a SN-38 por 10 equivalentes, los cueles se calentaron a 60°C y luego se; conservaron a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de 12 horas, la solución se filtró con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y luego la solub i 1 idad de SN-38 se determinó mediante la HPLC. Los resultados se muestran en la Tabla 3. ]Tabia 3J Solubil idad de SN-38 para etanol de acuerdo a la clase del compuesto de amina C gri ten i cio le l ac t ona
. 00 1 00 100 100 100 100
Como se mostró en la Tabla 3, cuando el compuesto de amina se adicionó a SN-38 por 10 equivalentes, 1 mg/ml o más de SN-38 se disolvió, y 100% de SN-38 existió en la forma
de una lactona, i r respeef i va de la clase de amina adicionada. Ejemplo 3: Solubilidad de SN-38 en un solvente orgánico polar Como se describió en el Ejemplo 1, 1 mq de SN-38 se suspendió en 1 ml de varias clases de solventes orgánicos como se muestran en la Tabla 4. Tromefamina se adicionó al mismo por 10 equivalentes para SM-38, se calentó a G0°C, y luego se; conservó a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de 12 horas, la solución se filtró con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y luego la solubi 1 idad de SN-38 se determinó mechante la HPLC. Los resultados se muestran en la Tabla 4. [Tabla 4] Solubil idad ele SN-38 para el solvente orgánico
Cl i i i cae i on ;M r : ?:r."' a : • a Sol v. i 11 riaci on! "i? Í rio ; >?) (•' i . : '.'a lent e) (mu /m 1 ' ( . ) 1 ac toi
Componente 3 r.t anoi annidic 11 10 ,
Componente 11 P i o p i 1 e n g 1 i c o 1 ; 1 100
Componente 12 Cl icen na 10 >1 100
Componente Pi.i. 3C(> : 1 }t ¡
Componente 1 <1 P VM" : 1 pi L : o 1 no '.1 l i ' . o Componente '. b M , l-l ci i ac ° t a:n? cia 1 .0
Como se mostró en la Tabla 4, cuando trometa ina se adicionó a SN-38 por 10 equivalentes, 1 mg/mi o más de; SN-38 se disolvió en todas las clases de solventes orgánicos, y 100% de SN-38 existió en la forma de lactona. Ejemplo 4 : Preparación de la composición de formulación SN-38 que comprende surfactante Varias c; lases de surfacfant.es como se muestran en la Tabla 5 se adicionaron al Componente; 7 del Ejemplo 2, por 200 veces de peso ele SN-38 para preparar una solución, y el componente se mostró en la Tabla 5. [Tabla 5] Compo ición de SN-38 que comprende surfaefanfe
Clasil icací ón N- 3H o ae amina Sur f a ;tan; » ( mj ) val entes) (20 . mq)
Comoe¡!.->n; >: amina Component" ', > cimina Component 1 H tamina Sol u t .1 HíJl '
Comoonei - ,?ra? :?a Vi: ,?m: :. i T!'Í".
Component" , o >• am: n
'ce . ?:pct 1 '' » Ejemplo 5: Solubilidad de la composición de formulación SN-38 en agua de acuerdo al contenido de surfactante Cremophore EL se adicionó al Componente 7 del
Ejemplo 2, en 10 a 500 veces por peso de SN-38, y luego se diluyó con agua inyectable, para o labe; rar e.l volumen total de
5 ml . Esta solución se filtre; con un fi tro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y el contenido de SN-38, la relación de lactona al anión carboxi, y el cambio en el contenido de ion de hidrógeno se determinaron con tiempo, mientras que se conserva la solución a temperatura ambiente. Los componentes de la composición de formulación anterior se muestran en la labia 6, y los resultados determinados de los mismos se muestran en la Tabla 7. [Tabla 6] Composición para determinar el cambio de contenido de SN-38 por t i empo en solución acuosa Ti ometamina Ciemophore EL
10 10 10 50 10 00 10 50 10 ' 00
[Tabla 7] Efecto del surfactante sobre la relación de lactona a las formas de anión carboxi de SN-38 por tiempo en solución acuosa
11
Como se mostró en fa Tabla 7, la forma de lactona se convirtió a la forma de amon carboxi con el tiempo. Ademas, el tiempo para cambiar de la forma de lactona a la forma de anión carboxi se retardo conforme el contenido de surfactante se incremento. Ejemplo 6: Preparación de la composición soluble de SN-38 De acuerdo a los componentes mostrados en la Tabla 8, SN-38 se suspendió en solvente orgánico, y luego un compuesto de amina se adiciono al mismo para prepatar una solución pura de color anaranjado. Subsecuentemente, el surfactante se adiciono al mismo, y la solución se filtro con un filtro de 200 nm, y se almaceno en un frasquito de vidrio. [labia 8] Composición soluble de SN-38 SN-38 Compuesto de amina Sur Lac LantP Solvente orgánico
1 mo tome tam na 0 mg CiomoDioie LL 200 mg Etanol 1 mi
1 mg 1 ro t?e t mina 10 p g Ctoi op oi II 100 mg Propí len 11 ico 1 1
1 mg Tiometamina 5 mg Cromophoie EL 100 mg PEG 30 1 ml
1 mg Ti orne tamina 1 ma C romophore EL 250 mg N,N-d?met ilapuda 0.25 ml
1 mg Dietanol amina 10 mg Cromophore EL 500 mg Etanol .5 ml
1 mg Dietanol amina 15 mg Tween SO 200 ma Etanol 1 mi
1 mg Di etanol ami na 20 mg Vitamina E TPGS 100 mg Etanol 1 ml
1 mg Trometapuna 10 mg Solutol 15 50 mg Etanol 1 ml
1 mg Di et i 1 a i na Poloxamer 188 10 mg Etanol 1 ml Ejemplo 7 : Escalación de la composición soluble de SN-38 500 mg de trometamina se disolvió con 50 ml. de etanol anhidro, y 50 de cremophore EL se adicionó a la misma para preparar una solución mezclada pura. A esta scXución, 100 mg de SN-38 se adicionó y se calentó a 60°C para obtener una solución pura de color anaranjado. La solución se conservó a temperatura ambiente durante 1 hora, y se filtró con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y se llenó en un frasquito de vidrio por 2 ml de solución para preparar una formulación que contiene 2 mg de SN-38 en la concent ación de 1 mq/ml por frasqui to. Ejemplo 8 : Preparación de la composición soluble de SN-38 liofilizada 1.2 mg de trometamlna se disolvió en 1 mi de; etanoi anhidro, y 1 mg de SN-38 se adicionó ai mismo y se calentó a 60°C para preparar una solución pura de color anaranjado. Subsecuentemente, el. copolímero de bloque de
metoxipol i etil eng 1 i co 1 y acido poli láctico, y 200 mg de mPEG-PLA (peso molecular de mPLG: 2,000 daLtons, peso molecular de PLA: 1,800 daltons) se adicionaron a la misma para preparar una solución pura. Luego, 5 ml de solución de mam toi acuoso (50 mg/ml) se adicionó a la misma, se mezclo, se filtró con un filtro que tiene un tamaño de poro de 200 nm, y se liofil izo para preparar una formulación liofalizada. Se adiciono agua inyectable de 4 ml al frasqutto liofilizado para reconstituir la formulación l ofilizada. Aqui, el pll de La solución acuosa fue 8.4, el contenido de fármaco fue 242 µg/ml mediante el análisis de I1PLC , y la forma de lactona de SN-38 fue 9 1 % . CAMPO DE APLICACIÓN INDUSTRIAL La formulación de la presente invención se puede utilizar para incrementar la solubilidad de una 10-hidroxicamptotec i na en un solvente polar no acuoso, con la mayoría de 10-h?dro??camptotec?na que existe en la forma de lactona activa. También, al utilizar la presente formulación que contiene ad i c i ona 1 mente surfactante, la conversión en la forma inactiva se retardo cuando se d Luyó o reconstituyó con solución acuosa tal como agua para inyección o solución salina fisiológica.