MD3823664T2 - Anticorpi anti-BCMA x anti-CD3 bispecifici și utilizările acestora - Google Patents

Anticorpi anti-BCMA x anti-CD3 bispecifici și utilizările acestora

Info

Publication number
MD3823664T2
MD3823664T2 MDE20210483T MDE20210483T MD3823664T2 MD 3823664 T2 MD3823664 T2 MD 3823664T2 MD E20210483 T MDE20210483 T MD E20210483T MD E20210483 T MDE20210483 T MD E20210483T MD 3823664 T2 MD3823664 T2 MD 3823664T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
bcmaxcd3
bcma
antibody
regn5458
binding
Prior art date
Application number
MDE20210483T
Other languages
English (en)
Inventor
Eric Smith
Kara Olson
Frank Delfino
David Dilillo
Jessica Kirshner
Olga Sineshchekova
Qian Zhang
Original Assignee
Regeneron Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=67515169&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=MD3823664(T2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Regeneron Pharma filed Critical Regeneron Pharma
Publication of MD3823664T2 publication Critical patent/MD3823664T2/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001129—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4214—Receptors for cytokines
    • A61K40/4215—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/4224—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Antigenul de maturare a celulelor B (BCMA) este exprimat pe celulele plasmatice maligne. Prezenta invenţie se referă la noi anticorpi bispecifici (bsAbs), care se leagă atât de BCMA, cât şi de CD3 şi activează celulele T prin complexul CD3 în prezenţa celulelor tumorale, care exprimă BCMA. În anumite variante de realizare, moleculele bispecifice de legare de antigen, conform prezentei invenţii, sunt capabile să inhibe creşterea tumorilor, care exprimă BCMA. Moleculele bispecifice de legare la antigen, conform prezentei invenţii, sunt utile pentru tratamentul bolilor şi tulburărilor, în care este dezirabil şi/sau este benefic din punct de vedere terapeutic un răspuns imun crescut sau indus, care vizează BCMA. De exemplu, anticorpii bispecifici, conform prezentei invenţii, sunt utili pentru tratamentul diferitelor tipuri de cancer, inclusiv al mielomului multiplu.

Description

DOMENIUL INVENŢIEI
Prezenta invenţie se referă la molecule bispecifice de legare a antigenului (de exemplu, anticorpi bispecifici) care leagă antigenul de maturare a celulelor B (BCMA) şi CD3, şi metode de utilizare a acestora.
STADIUL TEHNICII
Antigenul de maturare a celulelor B (BCMA), cunoscut şi sub numele de TNFRSF17 sau CD269, este o proteină transmembranară de tip III, lipsită de o peptidă semnal şi care conţine un domeniu extracelular bogat în cisteină. BCMA, împreună cu proteinele strâns legate, promovează supravieţuirea celulelor B în stadii distincte de dezvoltare. BCMA este exprimat exclusiv în celulele din linia celulelor B, în special în regiunea interfoliculară a centrului germinal, precum şi pe plasmoblaste şi celule plasmatice diferenţiate. BCMA este indus selectiv în timpul diferenţierii celulelor plasmatice şi este necesar pentru supravieţuirea optimă a celulelor plasmatice cu viaţă lungă din măduva osoasă. În mielomul multiplu, BCMA este exprimat pe scară largă pe celulele plasmatice maligne la niveluri ridicate, iar expresia BCMA este crescută odată cu progresia de la celule normale la mielom multiplu activ. BCMA este, de asemenea, exprimat în alte afecţiuni maligne ale celulelor B, inclusiv macroglobulinemia Waldenström, limfomul Burkitt şi limfomul difuz cu celule B mari. Tai şi colab., Immunotherapy, 7(11):1187-1199, 2015.
CD3 este un antigen homodimeric sau heterodimeric exprimat pe celulele T în asociere cu complexul receptor al celulelor T (TCR) şi este necesar pentru activarea celulelor T. CD3 funcţional este format din asocierea dimerică a două din cele patru lanţuri diferite: epsilon, zeta, delta şi gamma. Aranjamentele dimerice CD3 includ gama/epsilon, delta/epsilon şi zeta/zeta. S-a demonstrat că anticorpii împotriva CD3 grupează CD3 pe celulele T, provocând astfel activarea celulelor T într-un mod similar cu angajarea TCR de către moleculele MHC încărcate cu peptide. Astfel, anticorpii anti-CD3 au fost propuşi în scopuri terapeutice care implică activarea celulelor T. În plus, anticorpii bispecifici care sunt capabili să lege CD3 şi un antigen ţintă au fost propuşi pentru utilizări terapeutice care implică ţintirea răspunsurilor imune ale celulelor T la ţesuturi şi celule care exprimă antigenul ţintă.
WO 2017/031104 dezvăluie anticorpi anti-BCMA, molecule bispecifice de legare a antigenului care leagă BCMA şi CD3 şi utilizările acestora. WO 2014/047231 dezvăluie anticorpi anti-CD3, molecule bispecifice de legare la antigen care leagă CD3 şi CD20 şi utilizările acestora. WO 2018/067331 dezvăluie anticorpi bispecifici anti-MUC16-CD3 şi conjugaţi de medicamente NTI-MUC16.
Moleculele de legare a antigenului care vizează BCMA, inclusiv moleculele bispecifice de legare a antigenului care leagă atât BCMA, cât şi CD3 ar fi utile în setările terapeutice în care se doreşte ţintirea specifică şi uciderea mediată de celulele T a celulelor care exprimă BCMA.
SCURT REZUMAT AL INVENŢIEI
Prezenta invenţie furnizează o moleculă izolată de legare a antigenului bispecific, care cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care leagă în mod specific un antigen de maturare a celulelor B umane (BCMA) cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi. de SECV ID NR: 68, 70, 72 şi domeniile LCDR1,LCDR2,LCDR3, respectiv, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare a antigenului care leagă în mod specific CD3 uman care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 92, 94, 96 şi, respectiv, domeniile LCDR1,LCDR2,LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88. În unele cazuri, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 90 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o moleculă izolată de legare a antigenului bispecific, care cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care leagă în mod specific un antigen de maturare a celulelor B umane (BCMA) care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 68, 70, 72 şi LCDR1,LCDR2,LCDR3 domenii, respectiv, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care leagă în mod specific CD3 uman care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 100, 102, 104 şi, respectiv, domeniile LCDR1,LCDR2,LCDR3 , cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88. În unele cazuri, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 98 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
Oricare dintre moleculele bispecifice de legare la antigen discutate mai sus sau aici poate fi un anticorp bispecific. În unele cazuri, anticorpul bispecific cuprinde o regiune constantă a lanţului greu de IgG uman. În unele cazuri, regiunea constantă a lanţului greu al IgG umană este izotipul IgG1. În unele cazuri, regiunea constantă a lanţului greu al IgG umană este izotipul IgG4. în diferite variante de realizare, anticorpul bispecific cuprinde o balama himerica care reduce legarea receptorului Fcy în raport cu o balama de tip sălbatic a aceluiaşi izotip.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde molecula bispecifică de legare a antigenului (de exemplu, anticorp bispecific) a invenţiei şi un purtător sau diluant acceptabil farmaceutic.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o moleculă de acid nucleic care cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică o moleculă bispecifică de legare a antigenului (de exemplu, anticorp bispecific) conform invenţiei.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează un vector de expresie care cuprinde molecula de acid nucleic conform invenţiei.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o celulă gazdă care cuprinde vectorul de expresie conform invenţiei.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform invenţiei, sau o compoziţie farmaceutică a invenţiei, pentru utilizare într-o metodă de inhibare a creşterii unei tumori plasmatice la un subiect, cuprinzând administrarea antigenului bispecific izolat. - moleculă de legare sau compoziţia farmaceutică care cuprinde molecula bispecifică de legare a antigenului la subiect. În unele cazuri, tumora celulelor plasmatice este mielom multiplu. În unele cazuri, metoda mai cuprinde administrarea unui al doilea agent terapeutic sau regim terapeutic. În unele exemple de realizare, al doilea agent terapeutic cuprinde un agent anti-tumoral (de exemplu, agenţi chimioterapeutici incluzând melfalan, vincristină (Oncovin), ciclofosfamidă (Cytoxan), etoposidă (VP-16), doxorubicină (Adriamycin), doxorubicină lipozomală (Doxil), obendamustine. (Treanda), sau orice altele cunoscute a fi eficiente în tratarea unei plasme tumoră celulară la un subiect.). În unele realizări, al doilea agent terapeutic cuprinde steroizi. În unele realizări, cel de-al doilea agent terapeutic cuprinde terapii ţintite incluzând talidomidă, lenalidomidă şi bortezomib, care sunt terapii aprobate pentru tratarea pacienţilor nou diagnosticaţi. Lenalidomida, pomalidomida, bortezomib, carfilzomib, panobinostat, ixazomib, elotuzumab şi daratumumab sunt exemple de al doilea agent terapeutic eficient pentru tratarea mielomului recurent. în anumite exemple de realizare, al doilea agent terapeutic este un regim care cuprinde radioterapie sau un transplant de celule stem. în anumite exemple de realizare, al doilea agent terapeutic poate fi un agent imunomodulator. în anumite realizări, al doilea agent terapeutic poate fi un inhibitor de proteazom, incluzând bortezomib (Velcade), carfilzomib (Kyprolis), ixazomib (Ninlaro). în anumite realizări, al doilea agent terapeutic poate fi un inhibitor al histonei deacetilazei, cum ar fi panobinostat (Farydak). În anumite variante de realizare, al doilea agent terapeutic poate fi un anticorp monoclonal, un conjugat de medicament cu anticorpi, un anticorp bispecific conjugat la un agent anti-tumoral, un inhibitor al punctului de control sau combinaţii ale acestora.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform invenţiei, sau o compoziţie farmaceutică a invenţiei, pentru utilizare într-o metodă de tratare a unui pacient care suferă de mielom multiplu sau de altă malignitate a celulelor B care exprimă BCMA , în care metoda cuprinde administrarea moleculei de legare a antigenului bispecific izolată sau a compoziţiei farmaceutice care cuprinde molecula de legare a antigenului bispecific la subiect. În unele cazuri, malignitatea celulelor B care exprimă BCMA este selectată din grupul format din macroglobulinemie Waldenström, limfom Burkitt şi limfom difuz cu celule B mari, limfom non-Hodgkin, leucemie limfocitară cronică, limfom folicular, limfom cu celule de manta, limfom cu celule marginale. , limfom limfoplasmocitar şi limfomul Hodgkin. în unele cazuri, metoda mai cuprinde administrarea unui al doilea agent terapeutic. În unele realizări, al doilea agent terapeutic cuprinde un agent antitumoral (un agent chimioterapeutic), alchilatori ADN, imunomodulatori, inhibitori de proteazom, radioterapie cu inhibitori ai histon deacetilazei, un transplant de celule stem, un imunomodulator, un anticorp monoclonal care interacţionează cu un antigen exprimat. pe suprafaţa celulei tumorale, un anticorp monoclonal altul decât cei descrişi aici, care poate interacţiona cu un alt anticorp antigen de pe suprafaţa celulei plasmatice, un anticorp bispecific, care are un braţ care se leagă de un antigen de pe suprafaţa celulei tumorale şi celălalt braţ se leagă de un antigen de pe o celulă T, un conjugat de medicament cu anticorpi, un anticorp bispecific conjugat cu un antigen -agent tumoral, un inhibitor al punctului de control, de exemplu, unul care vizează, PD-1 sau CTLA-4, sau combinaţii ale acestora. În anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii PD-1, cum ar fi pembrolizumab (Keytruda), nivolumab (Opdivo) sau cemiplimab (REGN2810). în anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii PD-L1, cum ar fi atezolizumab (Tecentriq), avelumab (Bavencio) sau Durvalumab (Imfinzi)). În anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii CTLA-4, cum ar fi ipilimumab (Yervoy). Alte combinaţii care pot fi utilizate împreună cu un anticorp conform invenţiei sunt descrise mai sus.
Într-un alt aspect, prezenta invenţie furnizează o moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform invenţiei, sau o compoziţie farmaceutică a invenţiei, pentru utilizare într-o metodă de tratare a unui pacient care suferă de o tumoare care exprimă BCMA, în care metoda cuprinde administrarea moleculă bispecifică de legare a antigenului izolată, sau compoziţia farmaceutică, la subiect în combinaţie cu un anticorp anti-PD-1 sau cu un fragment al acestuia de legare la antigen. În unele cazuri, anticorpul anti-PD-1 sau fragmentul de legare la antigen este un anticorp anti-PD-1. În unele realizări, anticorpul anti-PD-1 este cemiplimab (REGN2810). În diferite exemple de realizare, combinaţia de moleculă de legare a antigenului bispecific anti-BCMA x anti-CD3 (de exemplu, un anticorp bispecific) şi un anticorp anti-PD-1 sau fragment de legare a antigenului (de exemplu, un anticorp anti-PD-1) produce un efect terapeutic sinergic în tratamentul tumorilor care exprimă BCMA.
Alte aspecte vor deveni evidente din revizuirea descrierii detaliate care urmează.
SCURTĂ DESCRIERE A DESENELOR
Figurile 1 şi 2 ilustrează inhibarea profilactică a tumorii dependentă de doză a celulelor tumorale umane de mielom multiplu NCI-H929 care exprimă BCMA in vivo de către anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 REGN5458 şi respectiv REGN5459. Celulele NCI-H929 exprimă niveluri ridicate de BCMA.
Figurile 3 şi 4 ilustrează in vivo inhibarea tumorală dependentă de doză terapeutică a celulelor tumorale de mielom multiplu uman NCI-H929 care exprimă BCMA stabilite in vivo de către anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 REGN5458 şi respectiv REGN5459. Celulele NCI-H929 exprimă niveluri ridicate de BCMA.
Figurile 5 şi 6 ilustrează in vivo inhibarea tumorală dependentă de doză profilactică a celulelor tumorale de mielom multiplu uman MOLP-8 care exprimă BCMA de către anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 REGN5458 şi respectiv REGN5459. Celulele MOLP-8 exprimă niveluri moderate de BCMA.
Figura 7 ilustrează o reducere terapeutică a sarcinii tumorale stabilite a celulelor tumorale de mielom multiplu uman OPM-2 care exprimă BCMA in vivo de către anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 REGN5458 şi REGN5459, în raport cu martorii. Celulele OPM-2 exprimă niveluri scăzute de BCMA.
DESCRIERE DETALIATĂ
Dezvăluirea tehnică prezentată mai jos poate, în anumite privinţe, să depăşească domeniul de aplicare al revendicărilor. Elementele dezvăluirii care nu intră în domeniul de aplicare al revendicărilor sunt furnizate pentru informare. Dacă nu este definit altfel, toţi termenii tehnici şi ştiinţifici utilizaţi aici au aceeaşi semnificaţie pe care o înţeleg în mod obişnuit de către o persoană cu calificare obişnuită în domeniul căruia îi aparţine această invenţie. Aşa cum este utilizat aici, termenul "aproximativ", atunci când este utilizat cu referire la o anumită valoare numerică citată, înseamnă că valoarea poate varia de la valoarea indicată cu cel mult 1%. De exemplu, aşa cum este utilizată aici, expresia „aproximativ 100» include 99 şi 101 şi toate valorile dintre acestea (de exemplu, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 etc.).
Definiţii
Expresia "CD3", aşa cum este utilizată aici, se referă la un antigen care este exprimat pe celulele T ca parte a receptorului de celule T multimolecular (TCR) şi care constă dintr-un homodimer sau heterodimer format din asocierea a două dintre cele patru lanţuri de receptor: CD3-epsilon, CD3-delta, CD3-zeta şi CD3-gamma. CD3-epsilon uman cuprinde secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în SECV ID NR:116; CD3-delta umană cuprinde secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în SECV ID NR:117; CD3-zeta umană cuprinde secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în SECV ID NR: 118; şi CD3-gamma cuprinde secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în SECV ID NR 119. Toate referinţele la proteine, polipeptide şi fragmente de proteine de aici sunt destinate să se refere la versiunea umană a respectivei proteine, polipeptide sau fragmente proteice, dacă nu se specifică în mod explicit ca fiind dintr-o specie non-umană. Astfel, expresia "CD3" înseamnă CD3 uman, dacă nu este specificat ca fiind dintr-o specie non-umană, de exemplu, "CD3 de şoarece", "CD3 de maimuţă" etc.
Aşa cum este utilizat aici, „un anticorp care leagă CD3» sau un „anticorp anti-CD3» include anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care recunosc în mod specific o singură subunitate CD3 (de exemplu, epsilon, delta, gamma sau zeta), precum şi anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care recunosc în mod specific un complex dimeric din două subunităţi CD3 (de exemplu, gamma/epsilon, delta/epsilon şi dimeri CD3 zeta/zeta). Anticorpii şi fragmentele de legare la antigen ale prezentei invenţii pot lega CD3 solubil şi/sau CD3 exprimat la suprafaţa celulară. CD3 solubil include proteine CD3 naturale, precum şi variante de proteine CD3 recombinante, cum ar fi, de exemplu, construcţii CD3 monomerice şi dimerice, cărora le lipseşte un domeniu transmembranar sau sunt altfel neasociate cu o membrană celulară.
Aşa cum este utilizată aici, expresia „CD3 exprimat la suprafaţa celulei» înseamnă una sau mai multe proteine CD3 care este/sunt exprimate pe suprafaţa unei celule in vitro sau in vivo, astfel încât cel puţin o parte a unei proteine CD3 este expus la partea extracelulară a membranei celulare şi este accesibil unei porţiuni de legare a antigenului a unui anticorp. „CD3 exprimat pe suprafaţa celulei» include proteine CD3 conţinute în contextul unui receptor funcţional al celulei T în membrana unei celule. Expresia „CD3 exprimat la suprafaţa celulei» include proteina CD3 exprimată ca parte a unui homodimer sau heterodimer pe suprafaţa unei celule (de exemplu, dimeri CD3 gamma/epsilon, delta/epsilon şi zeta/zeta). Expresia „CD3 exprimat la suprafaţa celulei» include, de asemenea, un lanţ CD3 (de exemplu, CD3-epsilon, CD3-delta sau CD3-gamma) care este exprimat singur, fără alte tipuri de lanţ CD3, pe suprafaţa unei celule. Un „CD3 exprimat la suprafaţa celulei» poate cuprinde sau consta dintr-o proteină CD3 exprimată pe suprafaţa unei celule care exprimă în mod normal proteina CD3.Alternativ, "CD3 exprimat la suprafaţa celulei" poate cuprinde sau consta din proteina CD3 exprimată pe suprafaţa unei celule care în mod normal nu exprimă CD3 uman pe suprafaţa sa, dar a fost concepută artificial pentru a exprima CD3 pe suprafaţa sa.
Expresia "BCMA", aşa cum este utilizată aici, se referă la antigenul de maturare a celulelor B. BCMA (cunoscut şi ca TNFRSF17 şi CD269) este o proteină de suprafaţă celulară exprimată pe celulele plasmatice maligne şi joacă un rol central în reglarea maturării şi diferenţierii celulelor B în celule plasmatice producătoare de imunoglobuline. Secvenţa de aminoacizi a BCMA umană este prezentată în SECV ID NR: 115 şi poate fi găsită şi în numărul de acces GenBank NP_001183.2.
Aşa cum este utilizat aici, „un anticorp care leagă BCMA» sau un „anticorp anti-BCMA» include anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care recunosc în mod specific BCMA.
Termenul "moleculă de legare la antigen" include anticorpi şi fragmente de anticorpi de legare la antigen, incluzând, de exemplu, anticorpi bispecifici.
Termenul "anticorp", aşa cum este utilizat aici, înseamnă orice moleculă de legare la antigen sau complex molecular care cuprinde cel puţin o regiune de determinare a complementarităţii (CDR) care se leagă în mod specific la sau interacţionează cu un anumit antigen (de exemplu, BCMA sau CD3). Termenul "anticorp" include molecule de imunoglobulină cuprinzând patru lanţuri polipeptidice, două lanţuri grele (H) şi două lanţuri uşoare (L) interconectate prin legături disulfurice, precum şi multimeri ai acestora (de exemplu, IgM). Termenul "anticorp" include, de asemenea, molecule de imunoglobulină constând din patru lanţuri polipeptidice, două lanţuri grele (H) şi două lanţuri uşoare (L) interconectate prin legături disulfură. Fiecare lanţ greu cuprinde o regiune variabilă a lanţului greu (abreviată aici ca HCVR sau VH) şi o regiune constantă a lanţului greu. Regiunea constantă a lanţului greu cuprinde trei domenii, CH1, CH2 şi CH3. Fiecare lanţ uşor cuprinde o regiune variabilă a lanţului uşor (abreviată aici ca LCVR sau VL) şi o regiune constantă a lanţului uşor. Regiunea constantă a lanţului uşor cuprinde un domeniu (CL1). Regiunile VH şi VL pot fi subdivizate în continuare în regiuni de hipervariabilitate, numite regiuni de determinare a complementarităţii (CDR), intercalate cu regiuni care sunt mai conservate, numite regiuni cadru (FR). Fiecare VH şi VL este compus din trei CDR-uri şi patru FR-uri, aranjate de la amino-terminal la carboxi-terminal în următoarea ordine: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. În diferite realizări ale invenţiei, FR-urile anticorpului anti-BCMA sau anticorpului anti-CD3 (sau porţiunea de legare a antigenului a acestuia) pot fi identice cu secvenţele liniei germinale umane sau pot fi modificate în mod natural sau artificial. O secvenţă consens de aminoacizi poate fi definită pe baza unei analize alăturate a două sau mai multe CDR-uri.
[0026] Termenul "anticorp", aşa cum este utilizat aici, include de asemenea fragmente de legare la antigen ale moleculelor de anticorp complet. Termenii „porţiune de legare la antigen» a unui anticorp, „fragment de legare la antigen» a unui anticorp şi altele asemenea, aşa cum sunt utilizate aici, includ orice polipeptidă sau glicoproteină care se leagă în mod specific la o polipeptidă naturală, obţinută enzimatic, sintetică sau modificată genetic antigenul pentru a forma un complex. Fragmentele de legare la antigen ale unui anticorp pot fi derivate, de exemplu, din molecule de anticorp complet folosind orice tehnici standard adecvate, cum ar fi digestia proteolitică sau tehnici de inginerie genetică recombinantă care implică manipularea şi exprimarea ADN-ului care codifică domenii variabile şi opţional constante ale anticorpului. Un astfel de ADN este cunoscut şi/sau este uşor disponibil din, de exemplu, surse comerciale, biblioteci de ADN (inclusiv, de exemplu, biblioteci de anticorpi fagi) sau poate fi sintetizat. ADN-ul poate fi secvenţiat şi manipulat chimic sau prin utilizarea tehnicilor de biologie moleculară, de exemplu, pentru a aranja unul sau mai multe domenii variabile şi/sau constante într-o configuraţie adecvată sau pentru a introduce codoni, a crea resturi de cisteină, a modifica, adăuga sau şterge aminoacizi, etc.
Exemple nelimitative de fragmente de legare la antigen includ: (i) fragmente Fab; (ii) fragmente F(ab')2; (iii) fragmente Fd; (iv) fragmente Fv; (v) molecule Fv (scFv) cu catenă unică; (vi) fragmente dAb; şi (vii) unităţi minime de recunoaştere constând din resturile de aminoacizi care imită regiunea hipervariabilă a unui anticorp (de exemplu, o regiune izolată de determinare a complementarităţii (CDR) cum ar fi o peptidă CDR3) sau o peptidă FR3-CDR3-FR4 constrânsă. Alte molecule modificate, cum ar fi anticorpi specifici unui domeniu, anticorpi cu un singur domeniu, anticorpi cu deleţie de domeniu, anticorpi himerici, anticorpi grefaţi cu CDR, diacorpi, triacorpi, tetracorpi, minicorpi, nanocorpi (de exemplu, nanocorpi monovalenţi, nanocorpi bivalenţi etc.), mici imunofarmaceutice modulare (SMIP) şi variabile de rechin Domeniile IgNAR sunt, de asemenea, cuprinse în expresia „fragment de legare la antigen», aşa cum este utilizat aici.
Un fragment de legare la antigen al unui anticorp va cuprinde de obicei cel puţin un domeniu variabil. Domeniul variabil poate fi de orice dimensiune sau compoziţie de aminoacizi şi va cuprinde în general cel puţin un CDR care este adiacent sau în cadru cu una sau mai multe secvenţe cadru. În fragmentele de legare la antigen având un domeniu VH asociat cu un domeniu VL, domeniile VH şi VL pot fi situate unul faţă de celălalt în orice aranjament adecvat. De exemplu, regiunea variabilă poate fi dimerică şi conţine dimeri VH-VH, VH-VL sau VL-VL. Alternativ, fragmentul de legare la antigen al unui anticorp poate conţine un domeniu VH sau VL monomer.
În anumite aspecte, un fragment de legare la antigen al unui anticorp poate conţine cel puţin un domeniu variabil legat covalent la cel puţin un domeniu constant. Configuraţiile exemplificative, nelimitative ale domeniilor variabile şi constante care pot fi găsite într-un fragment de legare la antigen al unui anticorp includ: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; şi (xiv) VL-CL. În orice configuraţie de domenii variabile şi constante, incluzând oricare dintre configuraţiile exemplificative enumerate mai sus, domeniile variabile şi constante pot fi fie legate direct unul la altul, fie pot fi legate printr-o balama sau o regiune de legătură completă sau parţială. O regiune balama poate consta din cel puţin 2 (de exemplu, 5, 10, 15, 20, 40, 60 sau mai mulţi) aminoacizi care au ca rezultat o legătură flexibilă sau semiflexibilă între domenii variabile şi/sau constante adiacente într-o singură polipeptidă moleculă. Mai mult, un fragment de legare la antigen al unui anticorp poate cuprinde un homo-dimer sau hetero-dimer (sau alt multimer) al oricăreia dintre configuraţiile de domenii variabile şi constante enumerate mai sus în asociere necovalentă unul cu celălalt şi/sau cu unul sau domeniul mai monomeric VH sau VL (de exemplu, prin legătura(le) disulfură).
Ca şi în cazul moleculelor de anticorp complet, fragmentele de legare la antigen pot fi monospecifice sau multispecifice (de exemplu, bispecifice). Un fragment de legare la antigen multispecific al unui anticorp va cuprinde în mod tipic cel puţin două domenii variabile diferite, în care fiecare domeniu variabil este capabil să se lege în mod specific la un antigen separat sau la un epitop diferit de pe acelaşi antigen. Orice format de anticorp multispecific, inclusiv formatele de anticorp bispecific exemplificative dezvăluite aici, poate fi adaptat pentru utilizare în contextul unui fragment de legare la antigen al unui anticorp al prezentei invenţii utilizând tehnici de rutină disponibile în domeniu.
Anticorpii prezentei invenţii pot funcţiona prin citotoxicitate dependentă de complement (CDC) sau citotoxicitate mediată celular dependentă de anticorpi (ADCC). „Citotoxicitatea dependentă de complement» (CDC) se referă la liza celulelor care exprimă antigenul de către un anticorp conform invenţiei în prezenţa complementului. „Citotoxicitatea mediată de celule dependentă de anticorpi» (ADCC) se referă la o reacţie mediată de celule în care celulele citotoxice nespecifice care exprimă receptori Fc (FcRs) (de exemplu, celulele Natural Killer (NK), neutrofilele şi macrofagele) recunosc anticorpul legat pe o celulă ţintă şi astfel conduc la liza celulei ţintă. CDC şi ADCC pot fi măsurate utilizând teste care sunt bine cunoscute şi disponibile în domeniu. (A se vedea, de exemplu, brevetele SUA nr. 5.500.362 şi 5.821.337 şi Clynes şi colab. (1998) Proc.Natl.Acad.Sci.(SUA) 95:652-656). Regiunea constantă a unui anticorp este importantă în capacitatea unui anticorp de a fixa complementul şi de a media citotoxicitatea dependentă de celule. Astfel, izotipul unui anticorp poate fi selectat pe baza faptului dacă este de dorit ca anticorpul să medieze citotoxicitatea.
În anumite realizări ale invenţiei, anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 ai invenţiei sunt anticorpi umani. Termenul "anticorp uman", aşa cum este utilizat aici, este destinat să includă anticorpi având regiuni variabile şi constante derivate din secvenţele de imunoglobuline ale liniei germinale umane. Anticorpii umani pot include resturi de aminoacizi necodificate de secvenţele de imunoglobuline ale liniei germinale umane (de exemplu, mutaţii introduse prin mutageneză aleatorie sau specifică locului in vitro sau prin mutaţie somatică in vivo), de exemplu în CDR-uri şi în special CDR3. Cu toate acestea, termenul "anticorp uman", aşa cum este utilizat aici, nu este destinat să includă anticorpi în care secvenţele CDR derivate din linia germinativă a unei alte specii de mamifere, cum ar fi un şoarece, au fost grefate pe secvenţe cadru umane.
Anticorpii conform invenţiei pot fi, în unele exemple de realizare, anticorpi umani recombinanţi. Termenul „anticorp uman recombinant», aşa cum este utilizat aici, este destinat să includă toţi anticorpii umani care sunt preparaţi, exprimaţi, creaţi sau izolaţi prin mijloace recombinante, cum ar fi anticorpii exprimaţi folosind un vector de expresie recombinant transfectat într-o celulă gazdă (descris mai jos), anticorpi izolaţi dintr-o bibliotecă de anticorpi umani recombinanţi, combinatori (descrişi mai jos), anticorpi izolaţi de la un animal (de exemplu, un şoarece) care este transgenic pentru genele imunoglobulinei umane (vezi, de exemplu, Taylor et al. (1992) Nucl.Acizi Res. 20:6287-6295) sau anticorpi preparaţi, exprimaţi, creaţi sau izolaţi prin orice alte mijloace care implică despicarea secvenţelor genei de imunoglobuline umane la alte secvenţe ADN. Astfel de anticorpi umani recombinanţi au regiuni variabile şi constante derivate din secvenţele de imunoglobulină germinativă umană. În anumite exemple de realizare, totuşi, astfel de anticorpi umani recombinanţi sunt supuşi mutagenezei in vitro (sau, atunci când se utilizează un animal transgenic pentru secvenţe de Ig umane, mutagenezei somatice in vivo) şi astfel secvenţele de aminoacizi ale regiunilor VH şi VL ale recombinantului. anticorpii sunt secvenţe care, deşi derivate din şi legate de linia germinativă umană VH şi secvenţele VL pot să nu existe în mod natural în repertoriul liniei germinale de anticorpi umani in vivo.
Anticorpii umani pot exista în două forme care sunt asociate cu eterogenitatea balamalei. Într-o formă, o moleculă de imunoglobulină cuprinde o construcţie stabilă cu patru lanţuri de aproximativ 150-160 kDa în care dimerii sunt ţinuţi împreună printr-o legătură disulfurică a lanţului greu intercatenar. Într-o a doua formă, dimerii nu sunt legaţi prin legături disulfurice inter-lanţ şi se formează o moleculă de aproximativ 75-80 kDa compusă dintr-un lanţ uşor şi greu cuplat covalent (jumătate de anticorp). Aceste forme au fost extrem de greu de separat, chiar şi după purificarea prin afinitate.
Frecvenţa de apariţie a celei de-a doua forme în diferite izotipuri IgG intacte se datorează, dar nu se limitează la, diferenţelor structurale asociate cu izotipul regiunii balama a anticorpului. O singură substituţie de aminoacid în regiunea balama a balamalei IgG4 umane poate reduce semnificativ aspectul celei de-a doua forme (Angal şi colab. 1993) Molecular Immunology 30:105) la niveluri observate în mod tipic utilizând o balama IgG1 umană. Prezenta invenţie cuprinde anticorpi având una sau mai multe mutaţii în balama, regiunea CH2 sau CH3 care pot fi de dorit, de exemplu, în producţie, pentru a îmbunătăţi randamentul formei de anticorp dorit.
Anticorpii conform invenţiei sunt anticorpi izolaţi. Un "anticorp izolat", aşa cum este utilizat aici, înseamnă un anticorp care a fost identificat şi separat şi/sau recuperat din cel puţin o componentă a mediului său natural. De exemplu, un anticorp care a fost separat sau îndepărtat din cel puţin o componentă a unui organism, sau dintr-un ţesut sau celulă în care anticorpul există în mod natural sau este produs în mod natural, este un "anticorp izolat" pentru scopurile prezentei invenţii. Un anticorp izolat include, de asemenea, un anticorp in situ într-o celulă recombinată. Anticorpii izolaţi sunt anticorpi care au fost supuşi la cel puţin o etapă de purificare sau izolare. Conform anumitor variante de realizare, un anticorp izolat poate fi în mod substanţial lipsit de alte materiale celulare şi/sau substanţe chimice.
Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi cu un singur braţ care leagă BCMA. Aşa cum este utilizat aici, un "anticorp cu un singur braţ" înseamnă o moleculă de legare la antigen care cuprinde un singur lanţ greu de anticorp şi un singur lanţ uşor de anticorp. Anticorpii cu un singur braţ pot cuprinde oricare dintre secvenţele de aminoacizi HCVR/LCVR sau CDR aşa cum este prezentat în Tabelul 1.
Anticorpii anti-BCMA sau anti-BCMA x anti-CD3 dezvăluiţi aici pot cuprinde una sau mai multe substituţii de aminoacizi, inserţii şi/sau deleţii în cadrul şi/sau regiunile CDR ale domeniilor variabile ale lanţului greu şi uşor în comparaţie cu cele corespunzătoare. secvenţe germinale din care au fost derivaţi anticorpii. Astfel de mutaţii pot fi constatate cu uşurinţă prin compararea secvenţelor de aminoacizi dezvăluite aici cu secvenţele liniei germinale disponibile, de exemplu, din bazele de date publice de secvenţe de anticorpi. Prezenta dezvăluire include anticorpi şi fragmente ale acestora care leagă antigenul, care sunt derivate din oricare dintre secvenţele de aminoacizi dezvăluite aici, în care unul sau mai mulţi aminoacizi din unul sau mai multe regiuni cadru şi/sau CDR sunt mutaţi la restul (reziduurile) corespunzătoare. ) din secvenţa de linie germinală din care a fost derivat anticorpul sau la reziduurile corespunzătoare ale unei alte secvenţe de linie germinală umană sau la un conservator substituirea cu aminoacizi a restului(ilor) corespunzătoare(lor) de linie germinală (asemenea modificări de secvenţă sunt denumite aici în mod colectiv „mutaţii ale liniei germinale»). O persoană cu calificare obişnuită în domeniu, începând cu secvenţele de regiune variabilă a lanţului greu şi uşor descrise aici, poate produce cu uşurinţă numeroşi anticorpi şi fragmente de legare la antigen care cuprind una sau mai multe mutaţii individuale ale liniei germinale sau combinaţii ale acestora. În anumite aspecte, toate resturile cadru şi/sau CDR din domeniile VH şi/sau VL sunt mutate înapoi la resturile găsite în secvenţa originală a liniei germinale din care a fost derivat anticorpul. În alte aspecte, numai anumite reziduuri sunt mutate înapoi la secvenţa originală a liniei germinale, de exemplu, numai resturile mutante găsite în primii 8 aminoacizi ai FR1 sau în ultimii 8 aminoacizi ai FR4, sau numai resturile mutante găsite în CDR1, CDR2 sau CDR3. În alte aspecte, unul sau mai multe dintre resturile cadru şi/sau CDR sunt mutate la restul (reziduurile) corespunzătoare ale unei secvenţe de linie germinală diferită (adică, o secvenţă de linie germinală care este diferită de secvenţa de linie germinală din care a fost anticorpul). derivate iniţial). Mai mult, anticorpii din prezenta dezvăluire pot conţine orice combinaţie de două sau mai multe mutaţii ale liniei germinale în cadrul şi/sau regiunilor CDR, de exemplu, în care anumite resturi individuale sunt mutate la restul corespunzător al unei anumite secvenţe de linie germinală, în timp ce anumite alte resturi care diferă. din secvenţa originală a liniei germinale sunt menţinute sau sunt mutate la reziduul corespunzător al unei secvenţe de linie germinală diferită. Odată obţinute, anticorpii şi fragmentele de legare la antigen care conţin una sau mai multe mutaţii ale liniei germinale pot fi testate cu uşurinţă pentru una sau mai multe proprietăţi dorite, cum ar fi specificitatea de legare îmbunătăţită, afinitatea de legare crescută, proprietăţile biologice antagoniste sau agoniste îmbunătăţite sau îmbunătăţite (după caz). fi), imunogenitate redusă etc. Anticorpii şi fragmentele de legare la antigen obţinute în acest mod general sunt cuprinse în prezenta dezvăluire.
Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi anti-BCMA sau anti-BCMA x anti-CD3 cuprinzând variante ale oricăreia dintre secvenţele de aminoacizi HCVR, LCVR şi/sau CDR dezvăluite aici având una sau mai multe substituţii conservatoare. De exemplu, prezenta dezvăluire include anticorpi anti-BCMA sau anti-BCMA x anti-CD3 având secvenţe de aminoacizi HCVR, LCVR şi/sau CDR cu, de exemplu, 10 sau mai puţine, 8 sau mai puţine, 6 sau mai puţine, 4 sau mai puţine , etc. substituţii conservatoare de aminoacizi în raport cu oricare dintre secvenţele de aminoacizi HCVR, LCVR şi/sau CDR prezentate în Tabelele 1 şi 3 de aici, sau anticorpii anti-CD3 dezvăluiţi în WO 2014/047231 sau WO 2017/053856.
Termenul "epitop" se referă la un determinant antigenic care interacţionează cu un situs specific de legare a antigenului în regiunea variabilă a unei molecule de anticorp cunoscută ca paratop. Un singur antigen poate avea mai mult de un epitop. Astfel, anticorpi diferiţi se pot lega la diferite zone ale unui antigen şi pot avea efecte biologice diferite. Epitopii pot fi fie conformaţionali, fie liniari. Un epitop conformaţional este produs de aminoacizi juxtapuşi spaţial din diferite segmente ale lanţului polipeptidic linear. Un epitop liniar este unul produs de resturile de aminoacizi adiacente dintr-un lanţ polipeptidic. în anumite circumstanţe, un epitop poate include fragmente de zaharide, grupări fosforil sau grupări sulfonil de pe antigen.
Termenul „identitate substanţială» sau „substanţial identic», atunci când se referă la un acid nucleic sau fragment al acestuia, indică faptul că, atunci când este aliniat optim cu inserţii sau deleţii de nucleotide adecvate cu un alt acid nucleic (sau catena sa complementară), există identitate de secvenţă de nucleotide. în cel puţin aproximativ 95%, şi mai preferabil cel puţin aproximativ 96%, 97%, 98% sau 99% din bazele nucleotidice, măsurate prin orice algoritm bine-cunoscut de identitate a secvenţei, cum ar fi FASTA, BLAST sau Gap, aşa cum se discută mai jos. O moleculă de acid nucleic având identitate substanţială cu o moleculă de acid nucleic de referinţă poate, în anumite cazuri, să codifice o polipeptidă având aceeaşi secvenţă de aminoacizi sau substanţial similară cu polipeptida codificată de molecula de acid nucleic de referinţă.
Aşa cum se aplică polipeptidelor, termenul „asemănare substanţială» sau „substanţial asemănător» înseamnă că două secvenţe de peptide, atunci când sunt aliniate optim, cum ar fi prin programele GAP sau BESTFIT, folosind ponderi implicite ale intervalului, împărtăşesc cel puţin 95% identitate de secvenţă, chiar mai preferabil. cel puţin 98% sau 99% identitate de secvenţă. De preferinţă, poziţiile resturilor care nu sunt identice diferă prin substituţii conservatoare de aminoacizi. O „substituţie conservatoare de aminoacid» este una în care un rest de aminoacid este substituit cu un alt rest de aminoacid având o catenă laterală (grupare R) cu proprietăţi chimice similare (de exemplu, sarcină sau hidrofobicitate). În general, o substituţie conservatoare a aminoacizilor nu va schimba substanţial proprietăţile funcţionale ale unei proteine. În cazurile în care două sau mai multe secvenţe de aminoacizi diferă una de cealaltă prin substituţii conservatoare, identitatea secvenţei procentuale sau gradul de similaritate poate fi ajustat în sus pentru a corecta natura conservatoare a substituţiei. Mijloacele pentru realizarea acestei ajustări sunt binecunoscute specialiştilor în domeniu. Vezi, de exemplu, Pearson (1994) Methods Mol.Biol.24: 307-331. Exemple de grupuri de aminoacizi care au catene laterale cu proprietăţi chimice similare includ (1) catene laterale alifatice: glicină, alanină, valină, leucină şi izoleucină; (2) catene laterale alifatic-hidroxil: serină şi treonină; (3) lanţuri laterale care conţin amidă: asparagină şi glutamina; (4) lanţuri laterale aromatice: fenilalanină, tirozină şi triptofan; (5) lanţuri laterale de bază: lizină, arginină şi histidină; (6) lanţuri laterale acide: aspartat şi glutamat şi (7) lanţuri laterale care conţin sulf sunt cisteină şi metionină. Grupările de substituţie a aminoacizilor conservatoare preferate sunt: valină-leucină-izoleucină, fenilalanină-tirozină, lizină-arginină, alanină-valină, glutamat-aspartat şi asparaginglutamina. Alternativ, o înlocuire conservatoare este orice modificare care are o valoare pozitivă în matricea log-probabilităţii PAM250 dezvăluită în Gonnet şi colab. (1992) Science 256: 1443-1445. O înlocuire „moderat conservatoare» este orice modificare care are o valoare nenegativă în matricea log-probabilităţii PAM250.
Asemănarea secvenţei pentru polipeptide, la care se face referire şi ca identitate de secvenţă, este măsurată în mod obişnuit folosind software-ul de analiză a secvenţei. Software-ul de analiză a proteinelor potriveşte secvenţe similare folosind măsuri de similitudine atribuite diferitelor substituţii, deleţii şi alte modificări, inclusiv substituţii conservatoare de aminoacizi. De exemplu, software-ul GCG conţine programe precum Gap şi Bestfit care pot fi utilizate cu parametrii impliciti pentru a determina omologia secvenţei sau identitatea secvenţei între polipeptide strâns legate, cum ar fi polipeptide omoloage din diferite specii de organisme sau între o proteină de tip sălbatic şi o muteină a acesteia. Vezi, de exemplu, GCG Versiunea 6.1. Secvenţele de polipeptide pot fi, de asemenea, comparate folosind FASTA utilizând parametrii impliciti sau recomandaţi, un program din GCG Versiunea 6.1. FASTA (de exemplu, FASTA2 şi FASTA3) furnizează aliniamente şi identitate de secvenţă procentuală a regiunilor cu cea mai bună suprapunere între secvenţele de interogare şi de căutare (Pearson (2000) supra). Un alt algoritm preferat atunci când se compară o secvenţă a invenţiei cu o bază de date care conţine un număr mare de secvenţe din diferite organisme este programul de calculator BLAST, în special BLASTP sau TBLASTN, folosind parametrii impliciti. A se vedea, de exemplu, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 şi Altschul şi colab. (1997) Acizi nucleici Res. 25:3389-402 .
Mutaţii ale liniei germinale
Anticorpii anti-CD3 dezvăluiţi aici cuprind una sau mai multe substituţii de aminoacizi, inserţii şi/sau deleţii în regiunile cadru ale domeniilor variabile ale lanţului greu în comparaţie cu secvenţele germinale corespunzătoare din care au fost derivaţi anticorpii.
Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi şi fragmente ale acestora care leagă antigenul, care sunt derivate din oricare dintre secvenţele de aminoacizi descrise aici, în care unul sau mai mulţi aminoacizi din una sau mai multe regiuni cadru sunt mutaţi la restul (reziduurile) corespunzătoare ale secvenţa de linie germinală din care a fost derivat anticorpul sau la reziduurile corespunzătoare ale unei alte secvenţe de linie germinativă umană sau la un aminoacid conservator substituirea restului(lor) corespunzătoare de linie germinativă (astfel de modificări de secvenţă sunt denumite aici în mod colectiv „mutaţii ale liniei germinale») şi care au legare slabă sau deloc detectabilă la un antigen CD3.
Mai mult, anticorpii din prezenta dezvăluire pot conţine orice combinaţie de două sau mai multe mutaţii ale liniei germinale în regiunile cadru, de exemplu, în care anumite reziduuri individuale sunt mutate la reziduul corespunzător al unei anumite secvenţe de linie germinală, în timp ce anumite alte resturi care diferă de linia germinativă iniţială. secvenţa sunt menţinute sau sunt mutate la restul corespunzător al unei secvenţe de linie germinală diferită. Odată obţinute, anticorpii şi fragmentele de legare la antigen care conţin una sau mai multe mutaţii ale liniei germinale pot fi testate pentru una sau mai multe proprietăţi dorite, cum ar fi specificitate de legare îmbunătăţită, afinitate de legare slabă sau redusă, proprietăţi farmacocinetice îmbunătăţite sau îmbunătăţite, imunogenitate redusă etc. Anticorpii şi fragmentele de legare la antigen obţinute în acest mod general, având în vedere ghidul prezentei dezvăluiri, sunt cuprinse în prezenta dezvăluire.
Prezenta include, de asemenea, molecule de legare a antigenului care cuprind un domeniu de legare a antigenului cu o secvenţă de aminoacizi HCVR care este substanţial identică cu oricare dintre secvenţele de aminoacizi HCVR descrise aici, menţinând sau îmbunătăţind în acelaşi timp afinitatea slabă dorită pentru antigenul CD3. Termenul „identitate substanţială» sau „substanţial identic», atunci când se referă la o secvenţă de aminoacizi, înseamnă că două secvenţe de aminoacizi, atunci când sunt aliniate optim, cum ar fi prin programele GAP sau BESTFIT, folosind ponderi implicite ale intervalului, împărtăşesc o identitate de secvenţă de cel puţin 95% , chiar mai preferabil cel puţin 98% sau 99% identitate de secvenţă. De preferinţă, poziţiile resturilor care nu sunt identice diferă prin substituţii conservatoare de aminoacizi. În cazurile în care două sau mai multe secvenţe de aminoacizi diferă una de cealaltă prin substituţii conservatoare, identitatea secvenţei procentuale sau gradul de similaritate poate fi ajustat în sus pentru a corecta natura conservatoare a substituţiei. Mijloacele pentru realizarea acestei ajustări sunt binecunoscute specialiştilor în domeniu. Vezi, de exemplu, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331 .
Asemănarea secvenţei pentru polipeptide, la care se face referire şi ca identitate de secvenţă, este măsurată în mod obişnuit folosind software-ul de analiză a secvenţei. Software-ul de analiză a proteinelor potriveşte secvenţe similare folosind măsuri de similitudine atribuite diferitelor substituţii, deleţii şi alte modificări, inclusiv substituţii conservatoare de aminoacizi. De exemplu, software-ul GCG conţine programe precum Gap şi Bestfit care pot fi utilizate cu parametrii impliciti pentru a determina omologia secvenţei sau identitatea secvenţei între polipeptide strâns legate, cum ar fi polipeptide omoloage din diferite specii de organisme sau între o proteină de tip sălbatic şi o muteină a acesteia. Vezi, de exemplu, GCG Versiunea 6.1.
Secvenţele de polipeptide pot fi, de asemenea, comparate folosind FASTA utilizând parametrii impliciti sau recomandaţi, un program din GCG Versiunea 6.1. FASTA (de exemplu, FASTA2 şi FASTA3) furnizează aliniamente şi identitate de secvenţă procentuală a regiunilor cu cea mai bună suprapunere între secvenţele de interogare şi de căutare (Pearson (2000) supra). Un alt algoritm preferat atunci când se compară o secvenţă a invenţiei cu o bază de date care conţine un număr mare de secvenţe din diferite organisme este programul de calculator BLAST, în special BLASTP sau TBLASTN, folosind parametrii impliciti. A se vedea, de exemplu, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 şi Altschul şi colab. (1997) Acizi nucleici Res. 25:3389-402 .
Proprietăţile de legare ale anticorpilor
Aşa cum este utilizat aici, termenul „legare» în contextul legării unui anticorp, imunoglobuline, fragment de legare a anticorpului sau proteină care conţine Fc la oricare, de exemplu, un antigen predeterminat, cum ar fi o proteină de suprafaţă celulară sau un fragment al acesteia, de obicei se referă la o interacţiune sau asociere între cel puţin două entităţi sau structuri moleculare, cum ar fi o interacţiune anticorp-antigen.
De exemplu, afinitatea de legare corespunde în mod obişnuit unei valori KD de aproximativ 10-7 M sau mai puţin, cum ar fi aproximativ 10-8 M sau mai puţin, cum ar fi aproximativ 10-9 M sau mai puţin atunci când este determinată, de exemplu, de tehnologia rezonanţei plasmonului de suprafaţă (SPR) într-un BIAcore 3000 instrument care utilizează antigenul ca ligand şi anticorpul, Ig, fragment de legare a anticorpului sau proteină care conţine Fc ca analit (sau antiligand). Strategiile de legare pe bază de celule, cum ar fi testele de legare a sortării celulelor activate cu fluorescent (FACS), sunt de asemenea utilizate în mod obişnuit, iar datele FACS se corelează bine cu alte metode, cum ar fi legarea competiţiei radioligandului şi SPR (Metode Benedict, CA, J Immunol). 1997, 201(2):223-31; Geuijen, CA, et al. J Immunol Methods. 2005, 302(1-2):68-77 ).
În consecinţă, anticorpul sau proteina de legare a antigenului din invenţie se leagă la antigenul predeterminat sau la molecula de suprafaţă celulară (receptor) având o afinitate corespunzătoare unei valori KD care este de cel puţin zece ori mai mică decât afinitatea sa pentru legarea la o substanţă nespecifică. antigen (de exemplu, BSA, cazeină). Conform prezentei invenţii, afinitatea unui anticorp corespunzătoare unei valori KD care este egală cu sau mai mică de zece ori mai mică decât un antigen nespecific poate fi considerată legare nedetectabilă, totuşi un astfel de anticorp poate fi asociat cu un al doilea antigen. braţ de legare pentru producerea unui anticorp bispecific conform invenţiei.
Termenul "KD" (M) se referă la constanta de echilibru de disociere a unei anumite interacţiuni anticorp-antigen sau constanta de echilibru de disociere a unui anticorp sau fragment de legare a anticorpului care se leagă la un antigen. Există o relaţie inversă între KD şi afinitatea de legare, prin urmare, cu cât valoarea KD este mai mică, cu atât este mai mare, adică mai puternică, afinitatea. Astfel, termenii „afinitate mai mare» sau „afinitate mai puternică» se referă la o capacitate mai mare de a forma o interacţiune şi, prin urmare, o valoare KD mai mică şi, invers, termenii „afinitate mai scăzută» sau „afinitate mai slabă» se referă la o capacitate mai mică de a forma o interacţiune şi, prin urmare, o valoare KD mai mare. În unele circumstanţe, o afinitate de legare mai mare (sau KD) a unei anumite molecule (de exemplu, anticorp) la molecula sa parteneră interactivă (de exemplu, antigenul X) în comparaţie cu afinitatea de legare a moleculei (de exemplu, anticorpul) la o altă moleculă parteneră interactivă (de exemplu, antigenul). Y) poate fi exprimat ca un raport de legare determinat prin împărţirea valorii KD mai mare (afinitate mai mică sau mai slabă) prin KD mai mică (afinitate mai mare sau mai puternică), de exemplu exprimată ca afinitate de legare de 5 ori sau de 10 ori mai mare, după caz.
Termenul "kd" (sec -1 sau 1/s) se referă la constanta vitezei de disociere a unei anumite interacţiuni anticorp-antigen sau la constanta vitezei de disociere a unui anticorp sau fragment de legare a anticorpului. Valoarea menţionată mai este denumită şi valoarea koff.
Termenul "ka" (M-1 x sec-1 sau 1/M) se referă la constanta vitezei de asociere a unei anumite interacţiuni anticorp-antigen sau la constanta vitezei de asociere a unui anticorp sau fragment de legare a anticorpului.
Termenul "Ka" (M-1 sau 1/M) se referă la constanta de echilibru de asociere a unei anumite interacţiuni anticorp-antigen sau constanta de echilibru de asociere a unui anticorp sau fragment de legare a anticorpului. Constanta de echilibru de asociere se obţine prin împărţirea ka la kd.
Termenul „EC50» sau „EC50» se referă la jumătatea concentraţiei efective maxime, care include concentraţia unui anticorp care induce un răspuns la jumătatea distanţei dintre linia de bază şi maxim după un timp de expunere specificat. EC50 reprezintă în esenţă concentraţia unui anticorp în care se observă 50% din efectul său maxim. În anumite variante de realizare, valoarea EC50 este egală cu concentraţia unui anticorp conform invenţiei care dă legarea semimaximală la celulele care exprimă CD3 sau antigenul asociat tumorii (de exemplu, BCMA), aşa cum este determinat de, de ex. un test de legare FACS. Astfel, se observă o legare redusă sau mai slabă cu o EC50 crescută sau jumătate din valoarea concentraţiei efective maxime.
Într-o variantă de realizare, legare scăzută poate fi definită ca o concentraţie crescută de anticorp EC50 care permite legarea la jumătatea cantităţii maxime de celule ţintă.
Într-o altă variantă de realizare, valoarea EC50 reprezintă concentraţia unui anticorp conform invenţiei care determină epuizarea semimaximală a celulelor ţintă prin activitatea citotoxică a celulelor T. Astfel, activitatea citotoxică crescută (de ex. uciderea celulelor tumorale mediată de celulele T) este observată cu o EC50 scăzută sau la jumătate din valoarea concentraţiei efective maxime.
Molecule bispecifice de legare a antigenului
Anticorpii din prezenta dezvăluire pot fi monospecifici, bispecifici sau multispecifici. Anticorpii multispecifici pot fi specifici pentru diferiţi epitopi ai unei polipeptide ţintă sau pot conţine domenii de legare la antigen specifice pentru mai mult de o polipeptidă ţintă. Vezi, de exemplu, Tutt şi colab., 1991, J. Immunol. 147:60-69 ; Kufer şi colab., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244. Anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 din prezenta invenţie pot fi legaţi sau co-exprimaţi cu o altă moleculă funcţională, de exemplu, o altă peptidă sau proteină. De exemplu, un anticorp sau un fragment al acestuia poate fi legat funcţional (de exemplu, prin cuplare chimică, fuziune genetică, asociere necovalentă sau în alt mod) la una sau mai multe alte entităţi moleculare, cum ar fi un alt anticorp sau fragment de anticorp pentru a produce un bispecific sau un fragment de anticorp. anticorp multispecific cu o a doua specificitate de legare sau suplimentară.
Utilizarea expresiei "anticorp anti-CD3" sau "anticorp anti-BCMA" aici se intenţionează să includă atât anticorpi monospecifici anti-CD3 sau anti-BCMA, cât şi anticorpi bispecifici cuprinzând un braţ de legare CD3 şi un braţ de legare BCMA. Prezenta invenţie furnizează anticorpi bispecifici aşa cum sunt definiţi în revendicările în care un braţ al unei imunoglobuline leagă CD3 uman, iar celălalt braţ al imunoglobulinei este specific pentru BCMA uman.
În anumite cazuri, braţul care leagă CD3 se leagă de CD3 uman şi induce activarea celulelor T umane. În anumite cazuri, braţul care leagă CD3 se leagă slab de CD3 uman şi induce activarea celulelor T umane. în alte cazuri, braţul care leagă CD3 se leagă slab la CD3 uman şi induce uciderea celulelor care exprimă antigenul asociat tumorii în contextul unui anticorp bispecific sau multispecific. în alte cazuri, braţul care leagă CD3 se leagă sau se asociază slab cu CD3 uman şi cynomolgus (maimuţă), totuşi interacţiunea de legare nu este detectabilă prin testele in vitro cunoscute în domeniu. Braţul de legare a BCMA poate cuprinde oricare dintre secvenţele de aminoacizi HCVR/LCVR sau CDR aşa cum este prezentat în Tabelul 1 de aici.
Prezenta invenţie furnizează molecule bispecifice de legare a antigenului aşa cum sunt definite în revendicările care leagă în mod specific CD3 şi BCMA. Astfel de molecule pot fi denumite aici, de exemplu, "anti-BCMA x anti-CD3" sau "anti-CD3/anti-BCMA", sau "anti-CD3xBCMA" sau "CD3xBCMA" molecule bispecifice, sau altă terminologie similară (de ex. , anti-BCMA/anti-CD3).
Termenul "BCMA", aşa cum este utilizat aici, se referă la proteina BCMA umană, dacă nu este specificat ca fiind dintr-o specie non-umană (de exemplu, "BCMA de şoarece", "BCMA de maimuţă" etc.). Proteina BCMA umană are secvenţa de aminoacizi prezentată în SECV ID NR: 115.
Moleculele bispecifice de legare a antigenului menţionate mai sus care leagă în mod specific CD3 şi BCMA pot cuprinde o moleculă de legare a antigenului anti-CD3 care se leagă la CD3 cu o afinitate de legare slabă, cum ar fi prezentând un KD mai mare de aproximativ 40 nM, măsurat printr-un test in vitro. testul de legare a afinităţii.
Aşa cum este utilizată aici, expresia „moleculă de legare la antigen» înseamnă o proteină, polipeptidă sau complex molecular care cuprinde sau constă din cel puţin o regiune determinantă a complementarităţii (CDR) care singură sau în combinaţie cu unul sau mai multe CDR şi/sau regiuni cadru suplimentare. (FRs), se leagă în mod specific la un anumit antigen. În anumite aspecte, o moleculă de legare a antigenului este un anticorp sau un fragment de anticorp, aşa cum aceşti termeni sunt definiţi în altă parte aici.
Aşa cum este utilizată aici, expresia "moleculă bispecifică de legare a antigenului" înseamnă o proteină, polipeptidă sau complex molecular care cuprinde cel puţin un prim domeniu de legare a antigenului şi un al doilea domeniu de legare a antigenului. Fiecare domeniu de legare a antigenului din molecula bispecifică de legare a antigenului cuprinde cel puţin un CDR care singur, sau în combinaţie cu unul sau mai multe CDR-uri şi/sau FR-uri suplimentare, se leagă în mod specific la un anumit antigen. În contextul prezentei invenţii, primul domeniu de legare la antigen se leagă în mod specific la un prim antigen (BCMA), iar al doilea domeniu de legare la antigen se leagă în mod specific la un al doilea antigen distinct (CD3).
În anumite exemple de realizare ale prezentei invenţii, molecula bispecifică de legare a antigenului este un anticorp bispecific. Fiecare domeniu de legare la antigen al unui anticorp bispecific cuprinde un domeniu variabil al lanţului greu (HCVR) şi un domeniu variabil al lanţului uşor (LCVR). În contextul unei molecule bispecifice de legare la antigen care cuprinde un prim şi un al doilea domeniu de legare la antigen (de exemplu, un anticorp bispecific), CDR-urile primului domeniu de legare la antigen pot fi desemnate cu prefixul „D1» şi CDR-urile de al doilea domeniu de legare a antigenului poate fi desemnat cu prefixul "D2". Astfel, CDR-urile primului domeniu de legare la antigen pot fi denumite aici D1-HCDR1, D1-HCDR2 şi D1-HCDR3; şi CDR-urile celui de-al doilea domeniu de legare la antigen pot fi denumite aici D2-HCDR1, D2-HCDR2 şi D2-HCDR3.
În anumite aspecte exemplificative ale dezvăluirii, molecula de legare a antigenului bispecific izolată cuprinde un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde: (a) trei regiuni care determină complementaritatea lanţului greu (HCDR1, HCDR2 şi HCDR3) conţinute într-o regiune variabilă a lanţului greu (HCVR) cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66; şi (b) trei regiuni care determină complementaritatea lanţului uşor (LCDR1, LCDR2 şi LCDR3) conţinute într-o regiune variabilă a lanţului uşor (LCVR) care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:82. În invenţie, molecula de legare a antigenului bispecific izolată cuprinde un HCDR1 care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:68, un HCDR2 cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:70 şi un HCDR3 care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID. NR:72. În invenţie, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde un LCDR1 care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:84, un LCDR2 cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:86 şi un LCDR3 cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV. ID NR:88. În unele cazuri, primul domeniu de legare la antigen cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
În anumite aspecte exemplificative ale dezvăluirii, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde un al doilea domeniu de legare a antigenului care cuprinde: (a) trei regiuni care determină complementaritatea lanţului greu (HCDR1, HCDR2 şi HCDR3) conţinute într-o regiune variabilă a lanţului greu (HCVR). ) cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 90 sau SECV ID NR: 98; şi (b) trei regiuni care determină complementaritatea lanţului uşor (LCDR1, LCDR2 şi LCDR3) conţinute într-o regiune variabilă a lanţului uşor (LCVR) care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:82. În invenţie, cel de-al doilea domeniu de legare a antigenului cuprinde un LCDR1 care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:84, un LCDR2 cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR:86 şi un LCDR3 cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID. NR:88. În invenţie, al doilea domeniu de legare a antigenului cuprinde: (a) domenii HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 92, 94, 96; şi, respectiv, domeniile LCDR1,LCDR2,LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88; sau (b) domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 100, 102, 104; şi, respectiv, domeniile LCDR1, LCDR2, LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88. În unele cazuri, al doilea domeniu de legare la antigen cuprinde: (a) un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 90 şi un LCVR cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; sau (b) un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 98 şi un LCVR cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
Într-o variantă de realizare, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 68, 70, 72 şi Domeniile LCDR1, LCDR2, respectiv LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 92, 94, 96 şi, respectiv, domeniile LCDR1, LCDR2, LCDR3, cuprinzând aminoacidul secvenţe ale SECV ID NR: 84, 86, 88. În unele cazuri, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 90 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
Într-o altă variantă de realizare, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 68, 70, 72 şi Domeniile LCDR1, LCDR2, respectiv LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, HCDR3, respectiv, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 100, 102, 104 şi, respectiv, domeniile LCDR1, LCDR2, LCDR3, cuprinzând aminoacidul secvenţe ale SECV ID NR: 84, 86, 88. În unele cazuri, molecula bispecifică izolată de legare a antigenului cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 98 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
Moleculele bispecifice de legare la antigen discutate mai sus sau aici pot fi anticorpi bispecifici. În unele cazuri, anticorpul bispecific cuprinde o regiune constantă a lanţului greu de IgG umană. În unele cazuri, regiunea constantă a lanţului greu al IgG umană este izotipul IgG1. În unele cazuri, regiunea constantă a lanţului greu al IgG umană este izotipul IgG4. în diferite variante de realizare, anticorpul bispecific cuprinde o balama himerica care reduce legarea receptorului Fcy în raport cu o balama de tip sălbatic a aceluiaşi izotip.
Primul domeniu de legare a antigenului şi al doilea domeniu de legare a antigenului pot fi conectate direct sau indirect unul la altul pentru a forma o moleculă bispecifică de legare a antigenului din prezenta invenţie. Alternativ, primul domeniu de legare a antigenului şi al doilea domeniu de legare a antigenului pot fi fiecare conectat la un domeniu de multimerizare separat. Asocierea unui domeniu de multimerizare cu un alt domeniu de multimerizare facilitează asocierea dintre cele două domenii de legare la antigen, formând astfel o moleculă bispecifică de legare a antigenului. Aşa cum este utilizat aici, un "domeniu de multimerizare" este orice macromoleculă, proteină, polipeptidă, peptidă sau aminoacid care are capacitatea de a se asocia cu un al doilea domeniu de multimerizare de aceeaşi structură sau constituţie sau similară. De exemplu, un domeniu de multimerizare poate fi o polipeptidă care cuprinde un domeniu de imunoglobulină CH3. Un exemplu nelimitator de componentă de multimerizare este o porţiune Fc a unei imunoglobuline (cuprinzând un domeniu CH2-CH3), de exemplu, un domeniu Fc al unei IgG selectate dintre izotipurile IgG1, IgG2, IgG3 şi IgG4, precum şi oricare alotip în cadrul fiecărui grup de izotip.
Moleculele bispecifice de legare a antigenului din prezenta invenţie vor cuprinde în mod tipic două domenii de multimerizare, de exemplu, două domenii Fc care sunt fiecare parte individual a unui lanţ greu de anticorp separat. Primul şi al doilea domeniu de multimerizare pot fi de acelaşi izotip IgG, cum ar fi, de exemplu, IgG1/IgG1, IgG2/IgG2, IgG4/IgG4. Alternativ, primul şi al doilea domeniu de multimerizare pot fi de izotipuri IgG diferite, cum ar fi, de exemplu, IgG1/lgG2, IgG1/lgG4, IgG2/IgG4, etc.
În anumite variante de realizare, domeniul de multimerizare este un fragment Fc sau o secvenţă de aminoacizi cu lungime de la 1 până la aproximativ 200 de aminoacizi care conţine cel puţin un rest de cisteină. în alte variante de realizare, domeniul de multimerizare este un rest de cisteină sau o peptidă scurtă care conţine cisteină. Alte domenii de multimerizare includ peptide sau polipeptide care cuprind sau constau dintr-un fermoar de leucină, un motiv cu buclă helix sau un motiv cu bobină încolăcită.
Orice format sau tehnologie de anticorp bispecific poate fi utilizat pentru a produce moleculele bispecifice de legare a antigenului din prezenta invenţie. De exemplu, un anticorp sau fragment al acestuia având o primă specificitate de legare la antigen poate fi legat funcţional (de exemplu, prin cuplare chimică, fuziune genetică, asociere necovalentă sau altfel) la una sau mai multe alte entităţi moleculare, cum ar fi un alt anticorp sau fragment de anticorp având o a doua specificitate de legare a antigenului pentru a produce o moleculă bispecifică de legare a antigenului. Formatele bispecifice exemplificative specifice care pot fi utilizate în contextul prezentei invenţii includ, fără limitare, de exemplu, formate bispecifice pe bază de scFv sau diabody, fuziuni IgGscFv, domeniu variabil dublu (DVD)-lg, Quadroma, butoane în găuri, lanţ uşor comun (de exemplu, lanţ uşor comun cu butoane în găuri etc.), CrossMab, CrossFab, corp (SEED), fermoar cu leucină, Duobody, IgG1/lgG2, formate bispecifice Fab (DAF)-IgG şi Mab2 (vezi, de exemplu, Klein şi colab. 2012, mAbs 4:6, 1-11 şi referinţe citate aici, pentru o revizuire a formatelor de mai sus).
În contextul moleculelor bispecifice de legare a antigenului din prezenta invenţie, domeniile de multimerizare, de exemplu, domeniile Fc, pot cuprinde una sau mai multe modificări de aminoacizi (de exemplu, inserţii, deleţii sau substituţii) în comparaţie cu cele de tip sălbatic, care apar în mod natural. versiunea domeniului Fc. De exemplu, invenţia include molecule bispecifice de legare a antigenului cuprinzând una sau mai multe modificări în domeniul Fc care are ca rezultat un domeniu Fc modificat având o interacţiune de legare modificată (de exemplu, îmbunătăţită sau diminuată) între Fc şi FcRn. Într-o variantă de realizare, molecula bispecifică de legare a antigenului cuprinde o modificare într-o regiune CH2 sau CH3, în care modificarea creşte afinitatea domeniului Fc pentru FcRn într-un mediu acid (de exemplu, într-un endozom în care pH-ul variază de la aproximativ 5,5 la aproximativ 6,0). Exemple nelimitative de astfel de modificări Fc includ, de exemplu, o modificare la poziţia 250 (de exemplu, E sau Q); 250 şi 428 (de exemplu, L sau F); 252 (de exemplu, L/Y/F/W sau T), 254 (de exemplu, S sau T) şi 256 (de exemplu, S/R/Q/E/D sau T); sau o modificare la poziţia 428 şi/sau 433 (de exemplu, L/R/S/P/Q sau K) şi/sau 434 (de exemplu, H/F sau Y); sau o modificare la poziţia 250 şi/sau 428; sau o modificare la poziţia 307 sau 308 (de exemplu, 308F, V308F) şi 434. Într-o variantă de realizare, modificarea cuprinde o modificare 428L (de exemplu, M428L) şi 434S (de exemplu, N434S); o modificare 428L, 259I (de exemplu, V259I) şi 308F (de exemplu, V308F); o modificare 433K (de exemplu, H433K) şi o modificare 434 (de exemplu, 434Y); o modificare 252, 254 şi 256 (de exemplu, 252Y, 254T şi 256E); o modificare 250Q şi 428L (de exemplu, T250Q şi M428L); şi o modificare 307 şi/sau 308 (de exemplu, 308F sau 308P).
Prezenta invenţie include, de asemenea, molecule bispecifice de legare a antigenului cuprinzând un prim domeniu CH3 şi un al doilea domeniu Ig CH3, în care primul şi al doilea domeniu Ig CH3 diferă unul de celălalt prin cel puţin un aminoacid şi în care cel puţin o diferenţă de aminoacid reduce legarea anticorpului bispecific la proteina A în comparaţie cu un anticorp bispecific lipsit de diferenta de aminoacizi.
Într-o variantă de realizare, primul domeniu Ig CH3 leagă proteina A şi al doilea domeniu Ig CH3 conţine o mutaţie care reduce sau elimină legarea proteinei A, cum ar fi o modificare H95R (prin numerotarea exonului IMGT; H435R prin numerotarea UE). Al doilea CH3 poate cuprinde în plus o modificare Y96F (de către IMGT; Y436F de către EU). Vezi, de exemplu, brevetul US nr. 8,586,713. Alte modificări care pot fi găsite în al doilea CH3 includ: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M şi V82I (de IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M şi V422I de către EU)1 în cazul anticorpilor Ig; N44S, K52N şi V82I (IMGT; N384S, K392N şi V422I de către EU) în cazul anticorpilor IgG2; şi Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q şi V82I (de către IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q şi V422I de către UE) în cazul anticorpilor IgG4.
În anumite realizări, domeniul Fc poate fi himeric, combinând secvenţe Fc derivate din mai mult de un izotip de imunoglobulină. De exemplu, un domeniu Fc himeric poate cuprinde parţial sau integral o secvenţă CH2 derivată dintr-o regiune IgG1 umană, IgG2 umană sau IgG4 umană CH2 şi o parte sau toată secvenţa CH3 derivată dintr-o IgG1 umană, IgG2 umană sau IgG4 umană. Un domeniu Fc himeric poate conţine, de asemenea, o regiune balama himeric. De exemplu, o balama himerică poate cuprinde o secvenţă „balama superioară», derivată dintr-o IgG1 umană, o IgG2 umană sau o regiune balama IgG4 umană, combinată cu o secvenţă „balama inferioară», derivată dintr-o IgG1 umană, o IgG2 umană sau o regiune balama IgG4 umană. Un exemplu particular de domeniu Fc himeric care poate fi inclus în oricare dintre moleculele de legare a antigenului prezentate aici cuprinde, de la N- la C-terminal: [IgG4 CH1] - [IgG4 balama superioară] - [IgG2 balama inferioară] - [IgG4 CH2] - [IgG4 CH3]. Un alt exemplu de domeniu Fc himeric care poate fi inclus în oricare dintre moleculele de legare la antigen prezentate aici cuprinde, de la N- la C-terminal: [IgG1 CH1] - [IgG1 balama superioară] - [IgG2 balama inferioară] - [ IgG4 CH2] - [IgG1 CH3]. Acestea şi alte exemple de domenii Fc himerice care pot fi incluse în oricare dintre moleculele de legare a antigenului din prezenta invenţie sunt descrise în Publicaţia SUA 2014/0243504, publicată pe 28 august 2014. Domeniile Fc himerice având aceste aranjamente structurale generale şi variante ale acestora pot avea legarea modificată la receptorul Fc, care la rândul său afectează funcţia efector Fc.
Variante de secvenţă
Anticorpii şi moleculele bispecifice de legare a antigenului din prezenta dezvăluire pot cuprinde una sau mai multe substituţii, inserţii şi/sau deleţii de aminoacizi în regiunile cadru ale domeniilor variabile ale lanţului greu şi uşor în comparaţie cu secvenţele corespunzătoare ale liniei germinale din care antigenul individual. -s-au derivat domeniile de legare. Astfel de mutaţii pot fi constatate cu uşurinţă prin compararea secvenţelor de aminoacizi dezvăluite aici cu secvenţele liniei germinale disponibile, de exemplu, din bazele de date publice de secvenţe de anticorpi. Moleculele de legare la antigen din prezenta dezvăluire pot cuprinde domenii de legare la antigen care sunt derivate din oricare dintre secvenţele de aminoacizi exemplificative descrise aici, în care unul sau mai mulţi aminoacizi din una sau mai multe regiuni cadru sunt mutaţi la restul (reziduurile) corespunzătoare. a secvenţei de linie germinală din care a derivat anticorpul, sau la reziduurile corespunzătoare ale unei alte secvenţe de linie germinativă umană sau la o substituirea conservatoare a aminoacizilor a resturilor de linie germinala corespunzatoare (astfel de modificări de secvenţă sunt denumite aici în mod colectiv „mutaţii ale liniei germinale»). O persoană cu calificare obişnuită în domeniu, începând cu secvenţele de regiune variabilă a lanţului greu şi uşor descrise aici, poate produce cu uşurinţă numeroşi anticorpi şi fragmente de legare la antigen care cuprind una sau mai multe mutaţii individuale ale liniei germinale sau combinaţii ale acestora. În anumite aspecte, toate resturile cadru din domeniile VH şi/sau VL sunt mutate înapoi la resturile găsite în secvenţa originală a liniei germinale din care a fost derivat iniţial domeniul de legare a antigenului. În alte aspecte, numai anumite reziduuri sunt mutate înapoi la secvenţa originală a liniei germinale, de exemplu, numai resturile mutante găsite în primii 8 aminoacizi ai FR1 sau în ultimii 8 aminoacizi ai FR4. În alte aspecte, unul sau mai multe dintre resturile cadru sunt mutate la restul (reziduurile) corespunzătoare ale unei secvenţe de linie germinală diferită (adică, o secvenţă de linie germinală care este diferită de secvenţa de linie germinală din care domeniul de legare a antigenului a fost iniţial derivat). În plus, domeniile de legare a antigenului pot conţine orice combinaţie de două sau mai multe mutaţii ale liniei germinale în regiunile cadru, de exemplu, în care anumite resturi individuale sunt mutate în restul corespunzător al unei anumite secvenţe de linie germinală, în timp ce anumite alte resturi care diferă de secvenţa originală a liniei germinale. sunt menţinute sau sunt mutate la reziduul corespunzător al unei secvenţe de linii germinale diferite. Odată obţinute, domeniile de legare la antigen care conţin una sau mai multe mutaţii ale liniei germinale pot fi testate cu uşurinţă pentru una sau mai multe proprietăţi dorite, cum ar fi specificitatea de legare îmbunătăţită, afinitatea de legare crescută, proprietăţi biologice antagoniste sau agoniste îmbunătăţite sau îmbunătăţite (după caz) , imunogenitate redusă etc. Moleculele bispecifice de legare a antigenului cuprinzând unul sau mai multe domenii de legare a antigenului obţinute în acest mod general sunt cuprinse în prezenta dezvăluire.
Anticorpi cuprinzând variante Fc
Conform anumitor variante de realizare ale prezentei invenţii, sunt furnizate molecule bispecifice de legare la antigen anti-BCMA x anti-CD3 care cuprind un domeniu Fc care cuprinde una sau mai multe mutaţii care sporesc sau diminuează legarea anticorpului la receptorul FcRn, de exemplu, la pH acid în comparaţie cu pH neutru. De exemplu, prezenta invenţie include anticorpi care cuprind o mutaţie în regiunea CH2 sau o regiune CH3 a domeniului Fc, în care mutaţia (mutaţia) creşte afinitatea domeniului Fc pentru FcRn într-un mediu acid (de exemplu, într-un endozom în care pH-ul) variază de la aproximativ 5,5 până la aproximativ 6,0). Astfel de mutaţii pot duce la o creştere a timpului de înjumătăţire plasmatică a anticorpului atunci când este administrat unui animal. Exemple nelimitative de astfel de modificări Fc includ, de exemplu, o modificare la poziţia 250 (de exemplu, E sau Q); 250 şi 428 (de exemplu, L sau F); 252 (de exemplu, L/Y/F/W sau T), 254 (de exemplu, S sau T) şi 256 (de exemplu, S/R/Q/E/D sau T); sau o modificare la poziţia 428 şi/sau 433 (de exemplu, H/L/R/S/P/Q sau K) şi/sau 434 (de exemplu, H/F sau Y); sau o modificare la poziţia 250 şi/sau 428; sau o modificare la poziţia 307 sau 308 (de exemplu, 308F, V308F) şi 434. Într-o variantă de realizare, modificarea cuprinde o modificare 428L (de exemplu, M428L) şi 434S (de exemplu, N434S); o modificare 428L, 259I (de exemplu, V259I) şi 308F (de exemplu, V308F); o modificare 433K (de exemplu, H433K) şi o modificare 434 (de exemplu, 434Y); o modificare 252, 254 şi 256 (de exemplu, 252Y, 254T şi 256E); o modificare 250Q şi 428L (de exemplu, T250Q şi M428L); şi o modificare 307 şi/sau 308 (de exemplu, 308F sau 308P).
De exemplu, prezenta invenţie include molecule bispecifice de legare a antigenului anti-BCMA x anti-CD3, cuprinzând un domeniu Fc care cuprinde una sau mai multe perechi sau grupuri de mutaţii selectate din grupul constând din: 250Q şi 248L (de exemplu, T250Q şi M248L); 252Y, 254T şi 256E (de exemplu, M252Y, S254T şi T256E); 428L şi 434S (de exemplu, M428L şi N434S); şi 433K şi 434F (de exemplu, H433K şi N434F). Sunt avute în vedere toate combinaţiile posibile ale mutaţiilor domeniului Fc de mai sus, şi alte mutaţii din domeniile variabile ale anticorpului dezvăluite aici.
Caracteristicile biologice ale anticorpilor şi moleculelor bispecifice de legare la antigen
Prezenta dezvăluire include anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care leagă BCMA uman cu afinitate mare (de exemplu, valori KD nanomolare sau subnanomolare).
Conform anumitor aspecte, prezenta dezvăluire include anticorpi şi fragmente de anticorpi care leagă antigenul care leagă BCMA uman (de exemplu, la 25°C) cu un KD mai mic de aproximativ 5 nM măsurat prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă, de exemplu, folosind un test. format aşa cum este definit în Exemplul 4 de aici. În anumite aspecte, anticorpii sau fragmentele de legare la antigen leagă BCMA cu un KD de mai puţin de aproximativ 20 nM, mai puţin de aproximativ 10 nM, mai puţin de aproximativ 8 nM, mai puţin de aproximativ 7 nM, mai puţin de aproximativ 6 nM, mai puţin de aproximativ 6 nM. 5 nM, mai puţin de aproximativ 4 nM, mai puţin de aproximativ 3 nM, mai puţin de aproximativ 2 nM, mai puţin de aproximativ 1 nM, mai puţin de aproximativ 800 pM, mai puţin de aproximativ 700 pM, mai puţin de aproximativ 500 pM, mai puţin de aproximativ 400 pM, mai puţin de aproximativ 300 pM, mai puţin de aproximativ 200 pM, mai puţin de aproximativ 100 pM, mai puţin de aproximativ 50 pM, sau mai puţin de aproximativ 25 pM măsurat prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă, de exemplu, folosind un format de analiză aşa cum este definit în Exemplul 4 de aici, sau un test substanţial similar. Prezenta invenţie include molecule bispecifice de legare a antigenului (de exemplu, anticorpi bispecifici care leagă BCMA uman cu un KD mai mic de aproximativ 25 pM şi care leagă BCMA de maimuţă cu un KD mai mic de aproximativ 170 pM, măsurat prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă, de exemplu, folosind un format de analiză aşa cum este definit în Exemplul 4 de aici, sau un test substanţial similar.
Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care leagă BCMA cu un timp de înjumătăţire disociativ (t1⁄2) mai mare de aproximativ 10 minute sau mai mare de aproximativ 125 de minute, măsurat prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă la 25°C, de exemplu, folosind un format de analiză aşa cum este definit în Exemplul 4 de aici, sau un test substanţial similar. În anumite aspecte, anticorpii sau fragmentele de legare la antigen din prezenta invenţie leagă BCMA cu un t1⁄2 mai mare de aproximativ 3 minute, mai mare de aproximativ 4 minute, mai mare de aproximativ 10 minute, mai mare de aproximativ 20 de minute, mai mare de aproximativ 30 de minute. , mai mare de aproximativ 40 de minute, mai mare de aproximativ 50 de minute, mai mare de aproximativ 60 de minute, mai mare de aproximativ 70 de minute, mai mare de aproximativ 80 de minute, mai mare de aproximativ 90 minute, mai mare de aproximativ 100 de minute, mai mare de aproximativ 110 de minute sau mai mare de aproximativ 120 de minute, măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă la 25°C, de exemplu, utilizând un format de analiză aşa cum este definit în exemplul 4 de aici, sau un test substanţial similar. Prezenta invenţie include molecule bispecifice de legare a antigenului (de exemplu, anticorpi bispecifici care leagă BCMA cu o durată mai mare de aproximativ 10 minute, măsurată prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă la 25°C, de exemplu, folosind un format de analiză aşa cum este definit în exemplul 4 de aici, sau un test substanţial similar.
Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care se leagă în mod specific la liniile celulare umane care exprimă BCMA endogen (de exemplu, NCI-H929, MOLP-8 sau OMP-2), aşa cum este determinat printr-un test de legare FACS, aşa cum este prezentat în Exemplul 6 sau un test substanţial similar.
Prezenta invenţie include, de asemenea, molecule de legare antigen bispecific anti-BCMA x anti-CD3 care prezintă una sau mai multe caracteristici selectate din grupul constând din: (a) inhibarea creşterii tumorii la şoarecii imunodeprimaţi purtători de xenogrefe de mielom multiplu uman; (b) suprimarea creşterii tumorale a tumorilor stabilite la şoarecii imunocompromişi care poartă xenogrefe de mielom multiplu uman (vezi, de exemplu, Exemplele 10-15) şi (c) suprimarea creşterii tumorii a celulelor de melanom singenic şi carcinom de colon concepute pentru a exprima BCMA uman la şoarecii imunocompetenţi exprimând CD3 uman.
Prezenta dezvăluire include anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care leagă CD3 uman cu afinitate ridicată. Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care leagă CD3 uman cu afinitate medie sau scăzută, în funcţie de contextul terapeutic şi de proprietăţile particulare de ţintire care sunt dorite. În unele cazuri, afinitatea scăzută include anticorpi care leagă CD3 cu un KD sau EC50 (de exemplu, măsurat într-un test de rezonanţă plasmonică de suprafaţă) mai mare de 300 nM, mai mare de 500 nM sau mai mare de 1 uM. Prezenta dezvăluire include, de asemenea, anticorpi şi fragmente ale acestora de legare la antigen care leagă CD3 uman fără afinitate măsurabilă. De exemplu, în contextul unei molecule bispecifice de legare a antigenului, în care un braţ leagă CD3 şi un alt braţ leagă un antigen ţintă (de exemplu, BCMA), poate fi de dorit ca braţul de legare a antigenului ţintă să lege antigenul ţintă cu afinitate în timp ce braţul anti-CD3 leagă CD3 doar cu afinitate moderată sau scăzută sau fără afinitate. În acest mod, ţintirea preferenţială a moleculei de legare a antigenului către celulele care exprimă antigenul ţintă poate fi realizată în acelaşi timp evitând legarea CD3 generală/neţintită şi efectele secundare adverse consecvente asociate cu aceasta.
Prezenta dezvăluire include molecule bispecifice de legare a antigenului (de exemplu, anticorpi bispecifici) care sunt capabile să se lege simultan la CD3 uman şi la un BCMA uman. Braţul de legare care interacţionează cu celulele care exprimă CD3 poate avea o legare slabă până la deloc detectabilă, aşa cum este măsurată într-un test adecvat de legare in vitro. Măsura în care o moleculă bispecifică de legare a antigenului leagă celulele care exprimă CD3 şi/sau BCMA poate fi evaluată prin sortarea celulelor activate prin fluorescenţă (FACS), aşa cum este ilustrat în exemplele 5 şi 6 de aici.
Prezenta dezvăluire include anticorpi, fragmente de legare la antigen şi anticorpi bispecifici ai acestora care leagă CD3 uman şi induc activarea celulelor T. [0091] Prezenta dezvăluire include molecule bispecifice de legare a antigenului anti-BCMA x anti-CD3 care sunt capabile să epuizeze sau să reducă celulele care exprimă antigenul tumoral la un subiect (vezi, de exemplu, Exemplele 8-16, sau un test substanţial similar). De exemplu, în conformitate cu anumite aspecte, sunt furnizate molecule bispecifice de legare a antigenului anti-BCMA x anti-CD3, în care o singură administrare, sau administrări multiple, de 0,04 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 4 mg/kg de bispecific molecula de legare a antigenului la un subiect determină o reducere a numărului de celule care exprimă BCMA la subiect (de exemplu, creşterea tumorii la subiect este suprimat sau inhibat).
Prepararea domeniilor de legare a antigenului şi construcţia moleculelor bispecifice
Domeniile de legare a antigenului specifice pentru antigeni particulari pot fi preparate prin orice tehnologie de generare a anticorpilor cunoscută în domeniu. Odată obţinute, două domenii diferite de legare a antigenului, specifice pentru doi antigeni diferiţi (de exemplu, CD3 şi BCMA), pot fi aranjate în mod corespunzător unul faţă de celălalt pentru a produce o moleculă bispecifică de legare a antigenului din prezenta invenţie utilizând metode de rutină. (O discuţie despre formatele de anticorpi bispecifice exemplificative care pot fi utilizate pentru a construi moleculele bispecifice de legare a antigenului din prezenta invenţie este furnizată în altă parte aici). În anumite variante de realizare, una sau mai multe dintre componentele individuale (de exemplu, lanţuri grele şi uşoare) ale moleculelor de legare la antigen multispecifice ale invenţiei sunt derivate din anticorpi himeric, umanizaţi sau complet umani. Metodele pentru producerea unor astfel de anticorpi sunt bine cunoscute în domeniu. De exemplu, unul sau mai multe dintre lanţurile grele şi/sau uşoare ale moleculelor bispecifice de legare a antigenului pot fi preparate utilizând tehnologia VELOCIMUNE™. Folosind tehnologia VELOCIMUNE™ (sau orice altă tehnologie de generare a anticorpilor umani), anticorpii himeric de mare afinitate la un anumit antigen (de exemplu, CD3 sau BCMA) sunt izolaţi iniţial având o regiune variabilă umană şi o regiune constantă de şoarece. Anticorpii sunt caracterizaţi şi selectaţi pentru caracteristicile dorite, inclusiv afinitatea, selectivitatea, epitopul etc. Regiunile constante de şoarece sunt înlocuite cu o regiune constantă umană dorită pentru a genera lanţuri grele şi/sau uşoare complet umane care pot fi încorporate în moleculele bispecifice de legare a antigenului.
Animalele modificate genetic pot fi utilizate pentru a face molecule umane bispecifice de legare a antigenului. De exemplu, poate fi utilizat un şoarece modificat genetic care este incapabil să rearanjeze şi să exprime o secvenţă variabilă de lanţ uşor de imunoglobuline de şoarece endogene, în care şoarecele exprimă doar unul sau două domenii variabile ale lanţului uşor uman codificate de secvenţe de imunoglobuline umane legate operabil la kappa de şoarece. genă constantă la locusul kappa endogen al şoarecelui. Astfel de şoareci modificaţi genetic pot fi utilizaţi pentru a produce molecule de legare a antigenului bispecific complet uman, cuprinzând două lanţuri grele diferite care se asociază cu un lanţ uşor identic care cuprinde un domeniu variabil derivat dintr-unul dintre cele două segmente de gene diferite ale regiunii variabile ale lanţului uşor uman. (A se vedea, de exemplu, US 2011/0195454). Complet uman se referă la un anticorp, sau fragment de legare la antigen sau domeniu de imunoglobulină al acestuia, cuprinzând o secvenţă de aminoacizi codificată de un ADN derivat dintr-o secvenţă umană pe toată lungimea fiecărei polipeptide a anticorpului sau fragment de legare la antigen sau domeniul de imunoglobulină al acestuia. În unele cazuri, secvenţa complet umană este derivată dintr-o proteină endogenă unui om. În alte cazuri, proteina sau secvenţa proteică complet umană cuprinde o secvenţă himerică în care fiecare secvenţă componentă este derivată din secvenţa umană. Deşi nu sunt legate de nicio teorie, proteinele himerice sau secvenţele himerice sunt în general concepute pentru a minimiza crearea de epitopi imunogeni în joncţiunile secvenţelor componente, de ex. în comparaţie cu orice regiuni sau domenii ale imunoglobulinei umane de tip sălbatic.
Formulare şi administrare terapeutică
Prezenta invenţie furnizează compoziţii farmaceutice care cuprind moleculele de legare la antigen ale prezentei invenţii. Compoziţiile farmaceutice ale invenţiei sunt formulate cu purtători adecvaţi, excipienţi şi alţi agenţi care asigură transfer, livrare, toleranţă şi altele asemenea îmbunătăţite. O multitudine de formulări adecvate pot fi găsite în formularul cunoscut de toţi chimiştii farmaceutici: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Aceste formulări includ, de exemplu, pulberi, paste, unguente, jeleuri, ceară, uleiuri, lipide, vezicule care conţin lipide (cationice sau anionice) (cum ar fi LIPOFECTIN™, Life Technologies, Carlsbad, CA), conjugate ADN, paste de absorbţie anhidră, ulei -emulsii in apa si apa in ulei, emulsii carbowax (polietilen glicoli de diferite greutăţi moleculare), geluri semi-solide şi amestecuri semi-solide care conţin carbowax. Vezi, de asemenea, Powell et al. "Compendiu de excipienţi pentru formulări parenterale» PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
Doza de moleculă de legare a antigenului administrată unui pacient poate varia în funcţie de vârsta şi mărimea pacientului, boala ţintă, condiţiile, calea de administrare şi altele asemenea. Doza preferată este de obicei calculată în funcţie de greutatea corporală sau suprafaţa corpului. Când o moleculă bispecifică de legare a antigenului din prezenta invenţie este utilizată în scopuri terapeutice la un pacient adult, poate fi avantajos administrarea intravenoasă a moleculei bispecifice de legare a antigenului din prezenta invenţie, în mod normal, la o singură doză de aproximativ 0,01 până la aproximativ 20 mg. /kg greutate corporală, mai preferabil aproximativ 0,02 până la aproximativ 7, aproximativ 0,03 până la aproximativ 5 sau aproximativ 0,05 până la aproximativ 3 mg/kg greutate corporală. În funcţie de severitatea afecţiunii, frecvenţa şi durata tratamentului pot fi ajustate. Dozele şi programele eficiente pentru administrarea unei molecule bispecifice de legare a antigenului pot fi determinate empiric; de exemplu, progresul pacientului poate fi monitorizat prin evaluare periodică, iar doza ajustată în consecinţă. Mai mult, scalarea interspecie a dozelor poate fi realizată folosind metode binecunoscute în domeniu (de exemplu, Mordenti şi colab., 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351 ).
Sunt cunoscute diferite sisteme de livrare şi pot fi utilizate pentru a administra compoziţia farmaceutică a invenţiei, de exemplu, încapsularea în lipozomi, microparticule, microcapsule, celule recombinante capabile să exprime virusurile mutante, endocitoza mediată de receptor (vezi, de exemplu, Wu şi colab., 1987, J. Biol. Chim. 262:4429-4432 ). Metodele de introducere includ, dar nu se limitează la, căile intradermice, intramusculare, intraperitoneale, intravenoase, subcutanate, intranazale, epidurale şi orale. Compoziţia poate fi administrată pe orice cale convenabilă, de exemplu prin perfuzie sau injectare în bolus, prin absorbţie prin căptuşeli epiteliale sau mucocutanate (de exemplu, mucoasa bucală, mucoasa rectală şi intestinală, etc.) şi poate fi administrată împreună cu alţi agenţi biologic activi. Administrarea poate fi sistemică sau locală.
O compoziţie farmaceutică a prezentei invenţii poate fi administrată subcutanat sau intravenos cu un ac standard şi o seringă. în plus, în ceea ce priveşte administrarea subcutanată, un dispozitiv de livrare a stiloului injector (pen) are aplicaţii în eliberarea unei compoziţii farmaceutice conform prezentei invenţii. Un astfel de dispozitiv de livrare a stiloului injector (pen) poate fi reutilizabil sau de unică folosinţă. Un dispozitiv de livrare a stiloului injector (pen) reutilizabil utilizează în general un cartuş înlocuibil care conţine o compoziţie farmaceutică. Odată ce toată compoziţia farmaceutică din cartuş a fost administrată şi cartuşul este gol, cartuşul gol poate fi aruncat cu uşurinţă şi înlocuit cu un cartuş nou care conţine compoziţia farmaceutică. Dispozitivul de livrare a pixului poate fi apoi reutilizat. Într-un dispozitiv de livrare a stiloului injector (pen) de unică folosinţă, nu există un cartuş înlocuibil. Mai degrabă, dispozitivul de livrare a stiloului injector (pen) de unică folosinţă vine pre-umplut cu compoziţia farmaceutică menţinută într-un rezervor în interiorul dispozitivului. Odată ce rezervorul este golit de compoziţia farmaceutică, întregul dispozitiv este aruncat.
Numeroase dispozitive de eliberare a stiloului injector (pen) şi autoinjector reutilizabile au aplicaţii în administrarea subcutanată a unei compoziţii farmaceutice conform prezentei invenţii. Exemplele includ, dar nu se limitează la, AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, Marea Britanie), stiloul DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Elveţia), stiloul HUMALOG MIX 75/25™, stiloul HUMALOG™, stiloul HUMALIN 70/30TM (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II şi III (Novo Nordisk, Copenhaga, Danemarca), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhaga, Danemarca), BD™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PROTM, OPTIPEN STARLET™ şi OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germania), pentru a numi doar câteva. Exemplele de dispozitive de livrare a stiloului injector (pen) de unică folosinţă care au aplicaţii în administrarea subcutanată a unei compoziţii farmaceutice a prezentei invenţii includ, dar nu se limitează la stiloul stilou SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) şi KWIKPEN™ (Eli Lilly), autoinjectorul SURECLICK™ (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germania), EPIPEN (Dey, L.P.) şi HUMIRA™ Pen (Abbott Labs, Abbott Park IL), pentru a numi doar câteva.
În anumite situaţii, compoziţia farmaceutică poate fi eliberată într-un sistem de eliberare controlată. Într-o variantă de realizare, poate fi utilizată o pompă (vezi Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. ing. 14:201). Într-un alt exemplu de realizare, pot fi utilizate materiale polimerice; vezi, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Rat on, Florida. Într-un alt exemplu de realizare, un sistem de eliberare controlată poate fi plasat în apropierea ţintei compoziţiei, necesitând astfel doar o fracţiune din doza sistemică (vezi, de exemplu, Goodson, 1984, în Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 ). Alte sisteme de eliberare controlată sunt discutate în recenzia lui Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
Preparatele injectabile pot include forme de dozare pentru injecţii intravenoase, subcutanate, intracutanate şi intramusculare, perfuzii prin picurare etc. Aceste preparate injectabile pot fi preparate prin metode cunoscute public. De exemplu, preparatele injectabile pot fi preparate, de exemplu, prin dizolvarea, suspendarea sau emulsionarea anticorpului sau a sării sale descrise mai sus într-un mediu apos steril sau într-un mediu uleios utilizat în mod convenţional pentru injecţii. Ca mediu apos pentru injecţii, există, de exemplu, soluţie salină fiziologică, o soluţie izotonă care conţine glucoză şi alţi agenţi auxiliari, etc., care pot fi utilizate în combinaţie cu un agent de solubilizare adecvat, cum ar fi un alcool (de exemplu, etanol), un polialcool (de exemplu, propilen glicol, polietilen glicol), un agent activ de suprafaţă neionic [de exemplu, polisorbat 80, HCO-50 (aduct polioxietilen (50 mol) de ulei de ricin hidrogenat)] etc. Ca mediu uleios, se folosesc, de exemplu, ulei de susan, ulei de soia, etc., care pot fi utilizate în combinaţie cu un agent de solubilizare cum ar fi benzoat de benzii, alcool benzilic etc. Injecţia astfel preparată este de preferinţă umplută într-o fiolă adecvată.
În mod avantajos, compoziţiile farmaceutice pentru utilizare orală sau parenterală descrise mai sus sunt preparate în forme de dozare într-o doză unitară potrivită pentru a se potrivi unei doze de ingrediente active. Astfel de forme de dozare într-o doză unitară includ, de exemplu, tablete, pastile, capsule, injecţii (fiole), supozitoare etc. Cantitatea de anticorp menţionat mai sus conţinută este în general de aproximativ 5 până la aproximativ 500 mg per formă de dozare într-o doză unitară; în special sub formă de injecţie, este de preferat ca anticorpul menţionat mai sus să fie conţinut în aproximativ 5 până la aproximativ 100 mg şi în aproximativ 10 până la aproximativ 250 mg pentru celelalte forme de dozare.
Utilizări terapeutice ale moleculelor de legare a antigenului
În prezenta invenţie, o compoziţie terapeutică care cuprinde o moleculă bispecifică de legare la antigen a invenţiei care leagă în mod specific CD3 şi BCMA este furnizată pentru utilizare într-o metodă de tratare a mielomului multiplu, a unei alte malignităţi a celulelor B care exprimă BCMA sau a unei tumori care exprimă BCMA. Compoziţia terapeutică cuprinde un purtător sau diluant acceptabil farmaceutic. Aşa cum este utilizată aici, expresia „un subiect care are nevoie de aceasta» înseamnă un animal uman sau non-uman care prezintă unul sau mai multe simptome sau indicii de cancer (de exemplu, un subiect care exprimă o tumoare sau care suferă de oricare dintre tipurile de cancer menţionate mai jos) , sau care altfel ar beneficia de o inhibare sau reducere a activităţii BCMA sau o epuizare a celulelor BCMA+ (de exemplu, celule de mielom multiplu).
Moleculele bispecifice de legare la antigen ale invenţiei (şi compoziţiile terapeutice care le cuprind) sunt utile, inter alia, pentru tratarea oricărei boli sau tulburări în care stimularea, activarea şi/sau ţintirea unui răspuns imun ar fi benefică. În special, moleculele bispecifice de legare a antigenului anti-BCMA x anti-CD3 din prezenta invenţie pot fi utilizate pentru tratamentul, prevenirea şi/sau ameliorarea oricărei boli sau tulburări asociate sau mediate de expresia sau activitatea BCMA sau proliferarea celule BCMA+. Mecanismul de acţiune prin care sunt realizate metodele terapeutice include uciderea celulelor care exprimă BCMA în prezenţa celulelor efectoare, de exemplu, prin CDC, apoptoză, ADCC, fagocitoză sau printr-o combinaţie a două sau mai multe dintre aceste mecanisme. Celulele care exprimă BCMA care pot fi inhibate sau distruse folosind moleculele bispecifice de legare a antigenului din invenţie includ, de exemplu, celule de mielom multiplu.
Moleculele de legare a antigenului din prezenta invenţie pot fi utilizate pentru a trata o boală sau o tulburare asociată cu expresia BCMA, inclusiv, de exemplu, un cancer care include mielom multiplu sau alte cancere cu celule B sau celule plasmatice, cum ar fi macroglobulinemia Waldenström, limfomul Burkitt şi limfom difuz cu celule B mari, limfom non-Hodgkin, leucemie limfocitară cronică, folicular limfom, limfom cu celule de manta, limfom din zonă marginală, limfom limfoplasmocitar şi limfom Hodgkin. Conform anumitor variante de realizare ale prezentei invenţii, anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 sunt utili pentru tratarea unui pacient afectat de mielom multiplu. Conform altor exemple de realizare înrudite ale invenţiei, o moleculă de legare bispecifică a antigenului anti-BCMA x anti-CD3 conform invenţiei este administrată unui pacient care este afectat de mielom multiplu. Metodele analitice/diagnostic cunoscute în domeniu, cum ar fi scanarea tumorii, etc., pot fi utilizate pentru a stabili dacă un pacient prezintă mielom multiplu sau alt cancer de linie de celule B.
Prezenta invenţie include, de asemenea, moleculele bispecifice de legare a antigenului pentru tratarea cancerului rezidual la un subiect. Aşa cum este utilizat aici, termenul "cancer rezidual" înseamnă existenţa sau persistenţa uneia sau mai multor celule canceroase la un subiect în urma tratamentului cu o terapie anticancer.
Conform anumitor aspecte, prezenta invenţie furnizează molecule bispecifice de legare a antigenului conform invenţiei pentru utilizare într-o metodă de tratare a mielomului multiplu care cuprinde administrarea uneia sau mai multor molecule bispecifice de legare a antigenului la subiect după ce subiectul a fost determinat că are mielom multiplu. De exemplu, prezenta invenţie include o moleculă de legare antigenă bispecifică anti-BCMA x anti-CD3 conform invenţiei pentru utilizare în tratarea mielomului multiplu, în care molecula de legare a antigenului este administrată 1 zi, 2 zile, 3 zile, 4 zile, 5 zile, 6 zile, 1 săptămână, 2 săptămâni, 3 săptămâni sau 4 săptămâni, 2 luni, 4 luni, 6 luni, 8 luni, 1 an sau mai mult după ce subiectul a primit altă imunoterapie sau chimioterapie.
Terapii şi formulări combinate
O compoziţie farmaceutică a invenţiei poate fi administrată unui subiect în combinaţie cu unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari. Exemple de agenţi terapeutici suplimentari care pot fi combinaţi cu sau administraţi în combinaţie cu o moleculă de legare a antigenului din prezenta invenţie includ, de exemplu, un agent anti-tumoral (de exemplu, agenţi chimioterapeutici incluzând melfalan, vincristină (Oncovin), ciclofosfamidă (Cytoxan), etoposidă. (VP-16), doxorubicină (Adriamycin), lipozomală doxorubicină (Doxil), obendamustina (Treanda) sau orice altele cunoscute a fi eficiente în tratarea unei tumori cu celule plasmatice la un subiect.). În unele realizări, al doilea agent terapeutic cuprinde steroizi. În unele realizări, cel de-al doilea agent terapeutic cuprinde terapii ţintite incluzând talidomidă, lenalidomidă şi bortezomib, care sunt terapii aprobate pentru tratarea pacienţilor nou diagnosticaţi. Lenalidomida, pomalidomida, bortezomib, carfilzomib, panobinostat, ixazomib, elotuzumab şi daratumumab sunt exemple de al doilea agent terapeutic eficient pentru tratarea mielomului recurent. În anumite exemple de realizare, al doilea agent terapeutic este un regim care cuprinde radioterapie sau un transplant de celule stem. În anumite exemple de realizare, al doilea agent terapeutic poate fi un agent imunomodulator. În anumite realizări, al doilea agent terapeutic poate fi un inhibitor de proteazom, incluzând bortezomib (Velcade), carfilzomib (Kyprolis), ixazomib (Ninlaro). În anumite realizări, al doilea agent terapeutic poate fi un inhibitor al histonei deacetilazei, cum ar fi panobinostat (Farydak). În anumite variante de realizare, al doilea agent terapeutic poate fi un anticorp monoclonal, un conjugat de medicament cu anticorpi, un anticorp bispecific conjugat la un agent anti-tumoral, un inhibitor al punctului de control sau combinaţii ale acestora. Alţi agenţi care pot fi administraţi în mod benefic în combinaţie cu moleculele de legare a antigenului din invenţie includ inhibitori de citokine, inclusiv inhibitori de citokine cu molecule mici şi anticorpi care se leagă la citokine cum ar fi IL-1, IL-2, IL-3, IL- 4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18 sau la receptorii lor respectivi. Compoziţiile farmaceutice ale prezentei invenţii (de exemplu, compoziţiile farmaceutice care cuprind o moleculă de legare antigenă bispecifică anti-BCMA x anti-CD3) pot fi, de asemenea, administrate ca parte a unui regim terapeutic care cuprinde una sau mai multe combinaţii terapeutice selectate dintr-un anticorp monoclonal altul decât cele descrise aici, care pot interacţiona cu un antigen diferit de pe suprafaţa celulelor plasmatice, un anticorp bispecific, care are un braţ care se leagă de un antigen de pe suprafaţa celulei tumorale, iar celălalt braţ se leagă de un antigen de pe o celulă T, un conjugat de medicament cu anticorpi, un anticorp bispecific conjugat cu un agent antitumoral, un inhibitor al punctului de control, de exemplu, unul care vizează PD -1 sau CTLA-4, sau combinaţii ale acestora. În anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii PD-1, cum ar fi pembrolizumab (Keytruda), nivolumab (Opdivo) sau cemiplimab (REGN2810). În anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii PD-L1, cum ar fi atezolizumab (Tecentriq), avelumab (Bavencio) sau Durvalumab (Imfinzi)). În anumite realizări, inhibitorii punctului de control pot fi selectaţi dintre inhibitorii CTLA-4, cum ar fi ipilimumab (Yervoy). Alte combinaţii care pot fi utilizate împreună cu un anticorp conform invenţiei sunt descrise mai sus.
Prezenta invenţie include, de asemenea, combinaţii terapeutice care cuprind oricare dintre moleculele de legare la antigen ale invenţiei şi un inhibitor al unuia sau mai multor dintre VEGF, Ang2, DLL4, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, EGFRvIII, cMet, IGF1R, B-raf, PDGFR-α, PDGFR-β, FOLH1 (PSMA), PRLR, STEAP1, STEAP2, TMPRSS2, MSLN, CA9, uroplakină sau oricare dintre citokinele menţionate mai sus, în care inhibitorul este un aptamer, o moleculă antisens, o ribozimă, un ARNsi, un pepticorp, un nanocorp sau un fragment de anticorp (de exemplu, fragment Fab; F; fragment (ab')2 fragment Fv; fragment sau alte molecule modificate, cum ar fi diacorpi, triacorpi, tetracorpi, minicorpi şi unităţi minime de recunoaştere). Moleculele de legare la antigen ale invenţiei pot fi, de asemenea, administrate şi/sau co-formulate în combinaţie cu antivirale, antibiotice, analgezice, corticosteroizi şi/sau AINS. Moleculele de legare la antigen ale invenţiei pot fi, de asemenea, administrate ca parte a unui regim de tratament care include, de asemenea, tratament cu radiaţii şi/sau chimioterapie convenţională.
Componentele active terapeutic suplimentare pot fi administrate chiar înainte de, concomitent cu sau la scurt timp după administrarea unei molecule de legare a antigenului din prezenta invenţie; (în scopul prezentei dezvăluiri, astfel de regimuri de administrare sunt considerate administrarea unei molecule de legare la antigen „în combinaţie cu» o componentă suplimentară activă terapeutic).
Prezenta invenţie include compoziţii farmaceutice în care o moleculă de legare a antigenului a prezentei invenţii este co-formulată cu una sau mai multe dintre componentele suplimentare activ(e) terapeutic aşa cum este descris în altă parte aici.
Regimuri de administrare
Conform anumitor realizări ale prezentei invenţii, doze multiple dintr-o moleculă de legare a antigenului (o moleculă bispecifică de legare a antigenului care leagă în mod specific BCMA şi CD3 aşa cum sunt definite în revendicări) pot fi administrate unui subiect pe o perioadă de timp definită. Metodele conform acestui aspect al invenţiei cuprind administrarea secvenţială la un subiect de doze multiple dintr-o moleculă de legare a antigenului conform invenţiei. Aşa cum este utilizat aici, „administrarea secvenţială» înseamnă că fiecare doză dintr-o moleculă de legare a antigenului este administrată subiectului la un moment diferit de timp, de exemplu, în zile diferite separate printr-un interval predeterminat (de exemplu, ore, zile, săptămâni sau luni). Prezenta invenţie include metode care cuprind administrarea secvenţială la pacient a unei singure doze iniţiale dintr-o moleculă de legare a antigenului, urmată de una sau mai multe doze secundare ale moleculei de legare a antigenului şi, opţional, urmată de una sau mai multe doze terţiare de antigen. moleculă de legare.
Termenii "doză iniţială", "doze secundare" şi "doze terţiare" se referă la secvenţa temporală de administrare a moleculei de legare a antigenului conform invenţiei. Astfel, "doza iniţială" este doza care este administrată la începutul regimului de tratament (denumită şi "doză de bază"); "dozele secundare" sunt dozele care sunt administrate după doza iniţială; iar "dozele terţiare" sunt dozele care sunt administrate după dozele secundare. Dozele iniţiale, secundare şi terţiare pot conţine toate aceeaşi cantitate de moleculă de legare a antigenului, dar în general pot diferi una de cealaltă în ceea ce priveşte frecvenţa administrării. În anumite exemple de realizare, totuşi, cantitatea de moleculă de legare a antigenului conţinută în dozele iniţiale, secundare şi/sau terţiare variază una de la alta (de exemplu, ajustată în sus sau în jos după caz) în timpul tratamentului. În anumite realizări, două sau mai multe (de exemplu, 2, 3, 4 sau 5) doze sunt administrate la începutul regimului de tratament ca „doze de încărcare» urmate de doze ulterioare care sunt administrate mai puţin frecvent (de exemplu, „ doze de întreţinere»).
Într-un exemplu de realizare a prezentei invenţii, fiecare doză secundară şi/sau terţiară este administrată de la 1 la 26 (de exemplu, 1, 11⁄2, 2, 21⁄2, 3, 31⁄2, 4, 41⁄2, 5, 51⁄2, 6, 61⁄2, 7, 71⁄2, 8, 81⁄2, 9, 91⁄2, 10, 101⁄2, 11, 111⁄2, 12, 121⁄2, 13, 131⁄2, 14, 141⁄2, 15, 151⁄2, 16, 161⁄2, 17, 171⁄2, 18, 181⁄2, 19, 191⁄2, 20, 201⁄2, 211⁄2, 221⁄2, 211⁄2, 211⁄2, 211⁄2, 211⁄2, 211⁄2 231⁄2, 24, 241⁄2, 25, 251⁄2, 26, 261⁄2 sau mai mult) săptămâni după doza imediat anterioară. Expresia "doza imediat anterioară", aşa cum este utilizată aici, înseamnă, într-o secvenţă de administrări multiple, doza de moleculă de legare a antigenului care este administrată unui pacient înainte de administrarea dozei următoare în secvenţa fără intervenţie. doze.
Metodele conform acestui aspect al invenţiei pot cuprinde administrarea unui pacient a oricărui număr de doze secundare şi/sau terţiare ale unei molecule de legare la antigen (de exemplu, un anticorp anti-BCMA sau o moleculă bispecifică de legare a antigenului care leagă în mod specific BCMA şi CD3). De exemplu, în anumite variante de realizare, pacientului i se administrează doar o singură doză secundară. În alte variante de realizare, două sau mai multe (de exemplu, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 sau mai multe) doze secundare sunt administrate pacientului. De asemenea, în anumite exemple de realizare, pacientului i se administrează doar o singură doză terţiară. În alte variante de realizare, două sau mai multe (de exemplu, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 sau mai multe) doze terţiare sunt administrate pacientului.
În exemplele de realizare care implică doze secundare multiple, fiecare doză secundară poate fi administrată la aceeaşi frecvenţă ca şi celelalte doze secundare. De exemplu, fiecare doză secundară poate fi administrată pacientului la 1 până la 2 săptămâni după doza imediat anterioară. În mod similar, în exemplele de realizare care implică mai multe doze terţiare, fiecare doză terţiară poate fi administrată la aceeaşi frecvenţă ca şi celelalte doze terţiare. De exemplu, fiecare doză terţiară poate fi administrată pacientului la 2 până la 4 săptămâni după doza imediat anterioară. Alternativ, frecvenţa la care dozele secundare şi/sau terţiare sunt administrate unui pacient poate varia pe parcursul regimului de tratament. Frecvenţa de administrare poate fi, de asemenea, ajustată în timpul tratamentului de către un medic, în funcţie de nevoile pacientului în parte după examenul clinic.
Utilizări pentru diagnosticare ale anticorpilor
Anticorpii anti-BCMA din prezenta dezvăluire pot fi, de asemenea, utilizaţi pentru a detecta şi/sau măsura BCMA, sau celule care exprimă BCMA într-o probă, de exemplu, în scopuri de diagnosticare. De exemplu, un anticorp anti-BCMA, sau un fragment al acestuia, poate fi utilizat pentru a diagnostica o afecţiune sau o boală caracterizată prin exprimare aberantă (de exemplu, supraexpresie, subexpresie, lipsă de expresie etc.) a BCMA. Testele de diagnostic exemplificative pentru BCMA pot cuprinde, de exemplu, punerea în contact a unei probe, obţinută de la un pacient, cu un anticorp anti-BCMA conform dezvăluirii, în care anticorpul anti-BCMA este marcat cu o etichetă detectabilă sau cu o moleculă raportor. Alternativ, un anticorp anti-BCMA nemarcat poate fi utilizat în aplicaţii de diagnostic în combinaţie cu un anticorp secundar care este el însuşi marcat detectabil. Eticheta detectabilă sau molecula raportor poate fi un radioizotop, cum ar fi NER148H, NER149C, NER150P, NER151S sau NER152I; un fragment fluorescent sau chemiluminiscent, cum ar fi izotiocianat de fluoresceină sau rodamină; sau o enzimă cum ar fi fosfatază alcalină, betagalactozidază, peroxidază de hrean sau luciferază. O altă utilizare exemplificativă a anticorpilor anti-BCMA conform invenţiei include anticorpi marcaţi cu NER153Zr, cum ar fi anticorpi marcaţi cu NER154Zr-desferioxamină, în scopul identificării şi urmăririi neinvazive a celulelor tumorale la un subiect (de exemplu, tomografia cu emisie de pozitroni (PET)). (A se vedea, de exemplu, Tavare, R. et al. Cancer Res. 2016 1 ianuarie;76(1):73-82; şi Azad, BB. et al. Oncotarget. 2016 Mar 15;7(11):12344-58.) Testele exemplificative specifice care pot fi utilizate pentru a detecta sau măsura BCMA într-o probă includ testul imunosorbent legat de enzime (ELISA), radioimunotestul (RIA) şi sortarea celulelor activate de fluorescenţă (FACS).
Probele care pot fi utilizate în testele de diagnostic BCMA includ orice probă de ţesut sau fluid care poate fi obţinută de la un pacient care conţine cantităţi detectabile de proteină BCMA, sau fragmente ale acesteia, în condiţii normale sau patologice. În general, nivelurile de BCMA dintr-o probă particulară obţinută de la un pacient sănătos (de exemplu, un pacient care nu suferă de o boală sau afecţiune asociată cu niveluri sau activitate anormală de BCMA) vor fi măsurate pentru a stabili iniţial un nivel de referinţă, sau standard, de BCMA. Acest nivel de bază al BCMA poate fi apoi comparat cu nivelurile de BCMA măsurate în probe obţinute de la indivizi suspectaţi de a avea o boală legată de BCMA (de exemplu, o tumoare care conţine celule care exprimă BCMA) sau o afecţiune.
EXEMPLE
Următoarele exemple ilustrează, dar nu limitează domeniul de aplicare al revendicărilor. Poate cuprinde detalii despre constructe care nu intră în domeniul de aplicare al revendicărilor; astfel de detalii sunt furnizate doar cu titlu informativ. S-au făcut eforturi pentru a asigura acurateţea cu privire la numerele utilizate (de exemplu, cantităţi, temperatură etc.), dar ar trebui luate în considerare unele erori şi abateri experimentale. Dacă nu se indică altfel, părţile sunt părţi în greutate, greutatea moleculară este greutatea moleculară medie, temperatura este în grade Centigrade şi presiunea este la sau aproape de atmosferă.
Exemplul 1: Generarea de anticorpi anti-BCMA
Anticorpii anti-BCMA au fost obţinuţi prin imunizarea unui şoarece modificat genetic cu un antigen BCMA uman (de exemplu, hBCMA, SEQ ID NO: 115) sau prin imunizarea unui şoarece modificat cuprinzând ADN care codifică regiuni variabile ale lanţului greu de imunoglobuline umane şi ale lanţului uşor kappa cu un BCMA uman. antigen.
După imunizare, splenocitele au fost recoltate de la fiecare şoarece şi fie (1) fuzionate cu celule de mielom de şoarece pentru a-şi păstra viabilitatea şi forma celule de hibridom şi analizate pentru specificitatea BCMA, fie (2) celule B sortate (aşa cum este descris în US 2007/0280945A1) folosind un fragment BCMA uman ca reactiv de sortare care se leagă şi identifică anticorpii reactivi (celule B antigen pozitive).
Anticorpii himerici la BCMA au fost iniţial izolaţi având o regiune variabilă umană şi o regiune constantă de şoarece. Anticorpii au fost caracterizaţi şi selectaţi pentru caracteristicile dorite, inclusiv afinitatea, selectivitatea etc. Dacă este necesar, regiunile constante de şoarece au fost înlocuite cu o regiune constantă umană dorită, de exemplu regiunea constantă IgG1 sau IgG4 de tip sălbatic sau modificată, pentru a genera un anticorp anti-BCMA complet uman. În timp ce regiunea constantă selectată poate varia în funcţie de utilizarea specifică, caracteristicile de legare a antigenului cu afinitate mare şi specificitate ţintă rezidă în regiunea variabilă.
Secvenţele de aminoacizi şi acid nucleic ale regiunii variabile ale lanţului greu şi uşor ale anticorpilor anti-BCMA: Tabelul 1 prezintă identificatorii secvenţei de aminoacizi ai regiunilor variabile ale lanţului greu şi uşor şi CDR-urile anticorpilor anti-BCMA selectaţi conform invenţiei. Identificatorii de secvenţă de acid nucleic corespunzători sunt prezentaţi în Tabelul 2.
Tabelul 1: Identificatori de secvenţă de aminoacizi
SEQ ID NOs: Denumirea anticorpilor HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 mAb16711 2 4 6 8 10 12 14 16 mAb16716 18 20 22 24 26 28 30 32 mAb16732 34 36 38 40 42 44 46 48 mAb16747 50 52 54 56 58 60 62 64 mAb21581 66 68 70 72 74 76 78 80 mAb21587 122 123 mAb21589 124 125
Tabelul 2: Identificatori de secvenţă de acid nucleic
SEQ ID NOs: Denumirea anticorpilor HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 mAb16711 1 3 5 7 9 11 13 15 mAb16716 17 19 21 23 25 27 29 31 mAb16732 33 35 37 39 41 43 45 47 mAb16747 49 51 53 55 57 59 61 63 mAb21581 65 67 69 71 73 75 77 79
Exemplul 2: Generarea de anticorpi anti-CD3
Anticorpii anti-CD3 au fost generaţi aşa cum este descris în WO 2017/053856. Doi astfel de anticorpi anti-CD3 au fost selectaţi din producerea de anticorpi bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 în conformitate cu prezenta invenţie. Tabelul 3 prezintă identificatorii secvenţei de aminoacizi ai regiunilor variabile ale lanţului greu şi uşor şi CDR-urile anticorpilor anti-CD3 selectaţi. Identificatorii de secvenţă de acid nucleic corespunzători sunt prezentaţi în Tabelul 4. Alţi anticorpi anti-CD3 pentru utilizare în prepararea anticorpilor bispecifici în conformitate cu prezenta invenţie pot fi găsiţi în, de exemplu, WO 2014/047231.
Tabelul 3: Identificatori de secvenţă de aminoacizi
SEQ ID NOs: Denumirea anticorpilor HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 mAb7221G 90 92 94 96 82 84 86 88 mAb7221G20 98 100 102 104 82 84 86 88
Tabelul 4: Identificatori de secvenţă de acid nucleic
SEQ ID NOs: Denumirea anticorpilor HCVR HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCVR LCDR1 LCDR2 LCDR3 mAb7221G 89 91 93 95 81 83 85 87 mAb7221G20 97 99 101 103 81 83 85 87
Exemplul 3: Generarea de anticorpi bispecifici care leagă BCMA şi CD3
Prezenta invenţie furnizează molecule bispecifice de legare a antigenului care leagă CD3 şi BCMA; astfel de molecule bispecifice de legare a antigenului sunt, de asemenea, denumite aici "molecule bispecifice anti-BCMA x anti-CD3 sau anti-CD3xBCMA sau anti-BCMA x anti-CD3. „Porţiunea anti-BCMA a moleculei bispecifice anti-BCMA x anti-CD3 este utilă pentru ţintirea celulelor tumorale care exprimă BCMA (cunoscută şi ca CD269), iar porţiunea anti-CD3 a moleculei bispecifice este utilă pentru activarea celulelor T.
Legarea simultană a BCMA pe o celulă tumorală şi a CD3 pe o celulă T facilitează uciderea direcţionată (liza celulară) a celulei tumorale vizate de către celula T activată.
Anticorpii bispecifici cuprinzând un domeniu de legare specific anti-BCMA şi un domeniu de legare specific anti-CD3 au fost construiţi folosind metodologii standard, în care domeniul de legare a antigenului anti-BCMA şi domeniul de legare a antigenului anti-CD3 cuprind fiecare HCVR-uri diferite, distincte, asociate cu un LCVR comun. În anticorpii bispecifici exemplificaţi, moleculele au fost construite utilizând un lanţ greu de la un anticorp anti-CD3, un lanţ greu de la un anticorp anti-BCMA şi un lanţ uşor comun de la anticorpul anti-CD3 (10082). }n alte cazuri, anticorpii bispecifici pot fi construiţi utilizând un lanţ greu de la un anticorp anti-CD3, un lanţ greu de la un anticorp anti-BCMA şi un lanţ uşor de anticorp cunoscut a fi promiscuu sau se pot asocia eficient cu o varietate de braţe ale lanţului greu.
Tabelul 5: Rezumatul părţilor componente ale anticorpilor bispecifici Anti-BCMA x Anti-CD3
Anti-BCMA Anti-CD3 Identificator de anticorp bispecific Domeniul de legare a antigenului Domeniul de legare a antigenului Regiunea variabilă a lanţului uşor comun Regiunea variabilă a lanţului greu Regiunea variabilă a lanţului greu bsAb25441D9 (also referred to as REGN5458) mAb21581 mAb7221G mAb7221G bsAb25442D (also referred to as REGN5459) mAb21581 mAb7221G20 mAb7221G20
Tabelul 6 prezintă identificatorii secvenţei de aminoacizi pentru anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 exemplificaţi aici.
Tabelul 6: Secvenţe de aminoacizi ale anticorpilor bispecifici Anti-BCMA x Anti-CD3
Identificator de anticorp bispecific Primul domeniu de legare a antigenului anti-BCMA Al doilea domeniu de legare a antigenului anti-CD3 Regiunea variabilă a lanţului uşor comun HC VR HCDR 1 HCDR 2 HCDR 3 HC VR HCDR 1 HCDR 2 HCDR 3 LC VR LCDR 1 LCDR 2 LCDR 3 bsAb25441D (REGN5458) 66 68 70 72 90 92 94 96 82 84 86 88 bsAb25442D (REGN5459) 66 68 70 72 98 100 102 104 82 84 86 88
Exemplul 4: Afinităţile de legare derivate prin rezonanţa plasmonului de suprafaţă şi constantele cinetice ale anticorpilor anti-BCMA şi anticorpilor bispecifici anti-BCMA x anti-CD3
Constantele de disociere de echilibru (valori KD) pentru legarea hBCMA.mmh (SEQ ID NR: 106) la mAb-uri anti-BCMA purificate şi mAb-uri bispecifice anti-BCMA x anti-CD3 au fost determinate utilizând un biosenzor de rezonanţă plasmonică de suprafaţă în timp real folosind un Biacore 4000 instrument. Suprafaţa senzorului CM5 Biacore a fost derivatizată prin cuplarea amină cu un anticorp monoclonal de şoarece anti-Fc uman (GE, # BR-1008-39) pentru a captura mAb-uri anti-BCMA purificate şi mAb-uri bispecifice anti-BCMA x anti-CD3. Toate studiile de legare Biacore au fost efectuate într-un tampon compus din 0,01 M HEPES pH 7,4, 0,15 M NaCI, 3 mM EDTA, 0,05% v/v Surfactant P20 (tampon de rulare HBS-ET). Pentru afinităţi monomerice, diferite concentraţii ale domeniului extracelular al BCMA uman exprimate cu eticheta myc-myc-hexahistidină C-terminală (BCMA-MMH uman; SEQ ID NR: 106) sau BCMA de maimuţă exprimată cu eticheta myc-myc-hexahistidină C-terminală (maimuţă BCMA-MMH; SECV ID NR: 110) au fost preparate în tampon de rulare HBS-ET (variind de la 90 la 1,11 nM, diluţii de 3 ori). Pentru afinităţile dimerice, diferite concentraţii ale domeniului extracelular al BCMA uman exprimate cu eticheta mFc C-terminal (BCMA-MFC uman; SEQ ID NR: 108) BCMA de maimuţă exprimată cu eticheta mFc C-terminal (BCMA-MFC de maimuţă; SEQ ID NR. : 112) preparat în tampon de rulare HBS-ET (între 30 şi 0,37 nM, S-au preparat diluţii de 3 ori) sau BCMA 30 nM exprimat cu eticheta mFc C-terminală (BCMA-MFC de şoarece; SEQ ID NR: 114). Probele de antigen au fost apoi injectate peste suprafeţele captate de mAb bispecific anti-BCMA şi anti-BCMA x anti-CD3 la un debit de 30 uL/minut. Asocierea anticorp-reactiv a fost monitorizată timp de 5 minute, în timp ce disocierea în tamponul de rulare HBS-ET a fost monitorizată timp de 10 minute. Toate experimentele de cinetică de legare au fost efectuate la 25°C. Constantele vitezei de asociere cinetică (ka) şi disociere (kd) au fost determinate prin ajustarea senzorgramelor în timp real la un model de legare 1:1 utilizând software-ul de ajustare a curbei Scrubber 2.0c. Constantele de echilibru de disociere de legare (KD) şi timpii de înjumătăţire disociativ (t1⁄2) au fost calculate din constantele vitezei cinetice ca:
După cum se arată în Tabelul 7, la 25°C, toţi anticorpii anti-BCMA ai invenţiei s-au legat la BCMA-MMH uman cu valori KD variind de la 1,06 nM la 3,56 nM. După cum se arată în Tabelul 8, la 25°C, toţi anticorpii anti-BCMA ai invenţiei s-au legat la BCMA-MFC uman cu valori KD variind de la 22,3 pM la 103 pM. După cum se arată în Tabelul 9, la 25°C, doi dintre anticorpii anti-BCMA ai invenţiei s-au legat de BCMA-MMH de maimuţă cu valori KD variind de la 38,8 nM la 49,92 nM. După cum se arată în Tabelul 10, la 25°C, patru dintre anticorpii anti-BCMA conform invenţiei s-au legat de BCMA-MFC de maimuţă cu valori KD variind de la 148 pM la 14,7 nM. După cum se arată în Tabelul 11, la 25°C, patru dintre anticorpii anti-BCMA ai invenţiei s-au legat de BCMA-MFC de şoarece cu valori KD variind de la 677 pM la 18,8 nM.
Tabelul 7: Parametrii cineticii de legare ai anticorpilor monoclonali anti-BCMA care se leagă de BCMA-MMH uman la 25°C
REGN # Ab PID # Captură mAb (RU) 90nM hBCMA.mmh Bind (RU) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1/2 (min) REGN5458 bsAb25441D 437.5 ± 1.1 19.9 8.27E+05 8.74E‑04 1.06E‑09 13.2 REGN5459 bsAb25442D 384.8 ± 1.4 17.0 7.30E+05 1.01E‑03 1.38E‑09 11.5 mAb16711 275.0 ± 2.8 22.2 2.01E+06 3.47E‑03 1.73E‑09 3.3 mAb16716 310.3 ± 2.2 26.4 8.41E+05 2.99E‑03 3.56E‑09 3.9 REGN4514 mAb16732 284.1 ± 0.9 25.3 1.06E+06 2.85E‑03 2.69E‑09 4.1 REGN4515 mAb16747 332.5 ± 0.9 31.4 8.69E+05 2.47E‑03 2.84E‑09 4.7
Tabelul 8: Parametrii cineticii de legare ai anticorpilor monoclonali anti-BCMA care se leagă de BCMA-MFC uman la 25°C
REGN # Ab PID # Captură mAb (RU) 30nM hBCMA.mFc Bind (RU) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1/2 (min) REGN5458 bsAb25441D 437.9 ± 0.1 106.8 4.48E+05 ≤ 1E‑5 2.23E‑11 ≤1155 REGN5459 bsAb25442D 385.2 ± 0.1 96.8 4.49E+05 ≤ 1E‑5 2.23E‑11 ≤1155 mAb16711 268.9 ± 1.4 113.5 1.85E+06 1.90E‑04 1.03E‑10 60.8 mAb16716 303.4 ± 1.2 120.3 8.62E+05 8.35E‑05 9.68E‑11 138.4 REGN4514 mAb16732 282.3 ± 1.0 124.1 1.07E+06 4.53E‑05 4.22E‑11 255.2 REGN4515 mAb16747 327.3 ± 1.5 146.0 1.41E+06 8.95E‑05 6.33E‑11 129.0
Tabelul 9: Parametrii cineticii de legare ai anticorpilor monoclonali anti-BCMA care se leagă de BCMA-MMH de maimuţă la 25°C
REGN # Ab PID # Captură mAb (RU) 90 nM mfBCMA.mmh Bind (RU) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1/2 (min) REGN5458 bsAb25441D 438.2 ± 0.9 14.8 1.82E+05 9.09E‑03 4.99E‑08 1.3 REGN5459 bsAb25442D 384.6 ± 1.4 12.7 2.23E+05 8.64E‑03 3.88E‑08 1.3 mAb16711 263.5 ± 1.7 ‑0.5 NB NB NB NB mAb16716 301.8 ± 0.5 0.8 NB NB NB NB REGN4514 mAb16732 279.1 ± 0.8 1.1 NB NB NB NB REGN4515 mAb16747 326.2 ± 0.5 1.9 NB NB NB NB
Tabelul 10: Parametrii cineticii de legare ai anticorpilor monoclonali anti-BCMA care se leagă de BCMA-MFC de maimuţă la 25°C
REGN # Ab PID # Captură mAb (RU) 30 nM mfBCMA.mFc Bind (RU) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1/2 (min) REGN5458 bsAb25441D 437.9 ± 1.1 107.7 5.28E+05 8.80E‑05 1.67E‑10 131.2 REGN5459 bsAb25442D 386.2 ± 0.22 97.0 4.82E+05 7.15E‑05 1.48E‑10 161.6 mAb16711 259.4 ± 1.4 0.9 NB NB NB NB mAb16716 300.8 ± 0.6 3.2 IC IC IC IC REGN4514 mAb16732 276.9 ± 1.1 40.3 4.92E+05 7.24E‑03 1.47E‑08 1.6 REGN4515 mAb16747 324.4 ± 0.7 101.3 2.13E+06 7.16E‑03 3.37E‑09 1.6
Tabelul 11: Parametrii cineticii de legare ai anticorpilor monoclonali anti-BCMA care se leagă de BCMA-MFC de şoarece la 25°C
REGN # Ab PID # Captură mAb (RU) 30 nM mBCMA.mFc Bind (RU) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M) t1/2 (min) REGN5458 bsAb25441D 438.8 2.7 NB NB NB NB REGN5459 bsAb25442D 383.9 2.4 NB NB NB NB mAb16711 257.0 90.0 1.07E+06 1.10E‑03 1.02E‑09 10.5 mAb16716 300.0 33.4 2.05E+05 3.85E‑03 1.88E‑08 3.0 REGN4514 mAb16732 276.1 109.6 3.97E+05 2.69E‑04 6.77E‑10 43.0 REGN4515 mAb16747 323.1 107.6 9.47E+05 4.18E‑03 4.42E‑09 2.8
Exemplul 5: Legarea FACS a anticorpilor bispecifici Anti-BCMA x Anti-CD3 la celulele care exprimă CD3 umane şi cynomolgus
Analiza citometrică în flux a fost utilizată pentru a determina legarea anticorpilor bispecifici BCMAxCD3 la CD3 uman şi cynomolgus (celule Jurkat, celule Jurkat prelucrate prin inginerie mfCD3, celule T CD8+ umane primare şi cynomolgus CD8+). Pe scurt, 1e05 celule/godeu au fost incubate în prezenţa de spălare FACS cu bloc (PBS + 1% FBS filtrat + 5% ser de şoarece) cu o diluţie în serie de BCMAxCD3 şi anticorpi de control timp de 30 de minute pe gheaţă. După incubare, celulele au fost spălate de două ori cu spălare FACS la rece (PBS + 1% FBS filtrat) şi anticorpul legat a fost detectat prin incubarea cu anticorp secundar anti-uman conjugat cu Alexa647 pe gheaţă timp de încă 30 de minute. Godeurile care nu conţin anticorp sau numai secundar au fost utilizate ca martor. Pentru detectarea celulelor T de maimuţă şi umană, la secundarul anti-uman a fost adăugat un cocktail de anticorpi reactivi încrucişaţi umani şi cynomolgus la CD4, CD8 şi CD16. După incubare, celulele au fost spălate, resuspendate în 200 µ PBS rece conţinând 1% FBS filtrat şi analizate prin citometrie în flux pe un BD FACS Canto II. Celulele au fost blocate de FSC-H de FSC-A pentru a selecta evenimente singlet, urmate de dispersări laterale şi directe pentru a selecta evenimentele live. Pentru celulele T de maimuţă, a fost efectuată o porţiune suplimentară pe celulele CD8+/CD16-.
Valorile EC50 pentru legarea FACS au fost calculate utilizând analiza de regresie neliniară cu 4 parametri în software-ul Prism.
Celulele Jurkat sunt o linie de celule limfoblastice de celule T umană care exprimă CD3. REGN5458 s-a legat la CD3 uman pe celulele Jurkat şi pe celulele T CD8+ umane primare cu EC50 mediane 1,50 × 10-8 M şi, respectiv, 3,20 × 10-8 M. Legarea REGN5459 la CD3 uman a fost mai slabă, cu EC50 mediană de 5,58 × 10-7 M la celulele Jurkat şi 4,71 × 10-6 la celulele T CD8+ umane primare. Folosind tehnologia CRISPR/Cas9, o linie celulară Jurkat a fost proiectată pentru a exprima lanţurile CD3ε şi CD3δ cynomolgus în locul versiunilor umane. EC50 mediană a legării REGN5458 la linia celulară Jurkat creată de mfCD3 a fost 1,51 x 10-8 M şi la celulele T CD8+ cynomolgus primare a fost 4,66 x 10-8 M. REGN5459 nu s-a legat de celulele care exprimă mfCD3.
Nu a fost observată nicio legare pe nicio linie celulară pentru anticorpul de control al izotipului negativ, denumit mAb15260.
Tabelul 12: Legarea la celulele care exprimă CD3: EC50 mediană
Jurkat-hCD3 Jurkat-mfCD3 Human CD8+ T cells Mf (Cyno) CD8+ T cells REGN EC50 [M] n EC50 [M] n EC50 [M] n EC50 [M] n REGN5458 1.50E‑08 5 1.51E‑08 2 3.20E‑08 1 4.66E‑08 1 REGN5459 5.58E‑07 5 Fără legare 2 4.71E‑06 1 Fără legare 1
Exemplul 6: Testul de legare FACS pentru a evalua capacitatea de legare a antigenului de suprafaţă celulară
Capacitatea anticorpului anti-BCMA x CD3, mAb25442D, de a lega suprafaţa mielomului multiplu BCMA pozitiv (NCI-H929, MM.1S, OPM-2 şi RPMI-8226), limfomului BCMA pozitiv (Raji şi Daudi), şi celulele BCMA negative (HEK293) au fost determinate prin citometrie în flux. Celulele au fost recoltate din baloane folosind tampon de disociere celulară (Millipore, Cat # S-004-C) şi placate în tampon de colorare (PBS, fără calciu şi magneziu (Irving 9240) + 2% FBS (ATCC 30-2020) la o densitate de 500.000 de celule per godeu într-o placă cu fund V cu 96 de godeuri. Celulele au fost colorate timp de 30 de minute la 4°C cu diluţii în serie de două ori ale unui anticorp anti-BCMA x CD3 conjugat Alexa647 (mAb25442D-A647) sau un control izotip conjugat Alexa 647 cu acelaşi braţ de legare CD3 asociat cu o ţintire irelevantă a tumorii braţul (izotip-A647). Celulele au fost spălate de două ori cu tampon de colorare şi etichetate cu kit-ul LIVE/DEAD™ Fixable Green Dead Cell Stain Kit (Invitrogen, L34970) conform instrucţiunilor de fabricaţie pentru a discrimina între celulele vii şi cele moarte. Celulele au fost apoi spălate şi fixate timp de 25 de minute la 4°C folosind o soluţie 50% de BD Cytofix (BD, Cat # 554655) diluată în PBS. Probele au fost rulate pe citometrul de flux Accuri C6 (BD Biosciences) şi analizate în Flowjo 10.2 (Tree Star). După trecerea pentru celulele vii şi celulele individuale, a fost determinată intensitatea fluorescentă medie (MFI), iar valorile MFI au fost reprezentate grafic în Graphpad Prism folosind o ecuaţie logistică cu patru parametri pe o curbă de răspuns în 10 puncte pentru a calcula EC50s. Condiţia zero pentru fiecare curbă doză-răspuns este de asemenea inclusă în analiză ca o continuare a diluţiei în serie de două ori şi este reprezentată ca doza cea mai mică. Semnalul la zgomot (S/N) este determinat luând raportul dintre mAb25442D-A647 MFI şi izotip-A647 MFI. (Tabelul 13). S/N mAb25442D-A647 a variat de la 2 la 470, iar valorile EC50 au variat de la 27 la 83 nM. Nu a fost observată nicio legare detectabilă pe celulele HEK293.
Tabelul 13: Legarea la celule
Linia celulară mAb25442D-A647 S/N mAb25442D-A647 EC50 (nM) NCI-H929 470 79 MM.1S 43 83 OPM‑2 19 57 RPMI‑8226 9 27 Daudi 3 ND Raji 2 ND HEK293 1 ND ND = nedeterminat din cauza curbelor non-sigmoidale
Exemplul 7: Activarea celulelor T prin anticorpi bispecifici Anti-BCMA x Anti-CD3 în prezenţa celulelor care exprimă BCMA
Activitatea anticorpilor bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 a fost evaluată într-un biotest Jurkat/NFATLuc, utilizând mai multe linii celulare cu niveluri diferite de expresie a suprafeţei BCMA. Celulele Jurkat au fost proiectate pentru a exprima un reporter NFAT-luciferaza (Jurkat/NFATLuc.3C7), iar 50.000 de celule reporter Jurkat au fost combinate cu 50.000 BCMA pozitive (Daudi, MM1-S, NCI-H929, OPM-2, RPMI-8226, MOLP-8 sau Raji) sau BCMA negativ (HEK293) în plăci cu microgodeuri albe Thermo Nunclon delta cu 96 de godeuri (Thermo Scientific, Cat # 136102) în 50 ul de mediu de testare (medii RPMI cu 10% FBS şi 1% P/S/G). S-au adăugat imediat diluţii în serie de trei ori ale anticorpilor bispecifici BCMA x CD3 (mAb25441D sau mAb25442D) sau un anticorp bivalent anti-BCMA (mAb21581) în 50 uL de tampon de analiză. Plăcile au fost agitate uşor şi incubate într-un incubator la 37°C, 5% CO2 timp de 4-6 ore. Activitatea NFAT-Luciferazei a fost determinată utilizând Promega One-Glo (Cat # E6130) şi un cititor de plăci Perkin Elmer Envision. RLU au fost reprezentate grafic în GraphPad Prism folosind o ecuaţie logistică cu patru parametri pe o curbă de răspuns în 12 puncte pentru a calcula valorile EC50. Condiţia de tratament fără anticorpi pentru fiecare curbă doză-răspuns este de asemenea inclusă în analiză ca o continuare a diluţiei în serie de trei ori şi este reprezentată ca doza cea mai mică. Semnalul la zgomot (S:N) este determinat luând raportul dintre cel mai mare RLU de pe curbă şi cel mai scăzut.
mAb25441D a activat celulele Jurkat/NFATLuc în prezenţa celulelor care exprimă BCMA cu EC50 variind de la 0,61 nM la 2,1 nM şi S:N variind de la 8 la 123. mAb25442D a activat celulele Jurkat/NFATLuc în prezenţa celulelor care exprimă BCMAEC20 cu variaţii de la BCMAEC20. nM la 11 nM şi S:N variind de la 7 la 120. BCMA x CD3 bispec mAb25441D cu braţul de legare CD3 cu afinitate mai mare a fost în mod constant mai puternic decât mAb25442D cu un braţ de legare CD3 cu afinitate mai mică; în timp ce, S:N a fost similar pentru cei doi bispecifici. Nici anticorpii nu au activat celulele Jurkat/NFATLuc în prezenţa celulelor HEK293 şi anticorpii bispecifici de control nu au crescut semnificativ activitatea reporterului Jurkat cu niciuna dintre liniile celulare testate. Rezultatele sunt prezentate în Tabelele 14A şi 14B de mai jos.
Tabelul 14A: Activarea celulelor T
Daudi MM1-S NCI-H929 OPM‑2 Anticorpi EC50 S:N EC50 S:N EC50 S:N EC50 S:N bsAb25441D 2.1E‑9 43 1.2E‑9 165 6.8E‑10 39 6.6E‑10 8 bsAb25442D 7.9E‑9 25 4.4E‑9 120 2.7E‑9 32 2.6E‑9 7 mAb21581 ND 1 ND 1 ND 1 ND 1
Tabelul 14B: Activarea celulelor T
RPMI‑8226 MOLP‑8 Raji HEK293 Anticorpi EC50 S:N EC50 S:N EC50 S:N EC50 S:N bsAb25441D 6.1E‑10 55 1.4E‑9 32 1.6E‑9 123 ND 1 bsAb25442D 2.6E‑9 42 1.1E‑8 31 7.4E‑9 78 ND 1 mAb21581 ND 1 ND 1 ND 1 ND 1
Exemplul 8: Test de citotoxicitate bazat pe FACS pentru a evalua distrugerea mediată de celule T a celulelor de mielom multiplu care exprimă BCMA în prezenţa anticorpilor bispecifici anti-BCMA x anti-CD3
Capacitatea de legare a anticorpilor (ABC) a unui anticorp BCMA anti-uman disponibil comercial (clona 19F2) a fost determinată pe un panou de linii celulare de mielom multiplu utilizând un kit Quantum Simply Cellular anti-IgG uman şi urmând instrucţiunile producătorului (Bangs Laboratories).
Pe scurt, liniile celulare de mielom multiplu (MM) (H929, MM1S, U266, MOLP8 şi RPMI8226) şi perle Quantum Simply Cellular au fost incubate timp de 30 de minute la 4°C cu o titrare a anticorpului anti-hBCMA-19F2 conjugat APC. După incubare, celulele şi bilele au fost spălate de trei ori, resuspendate în 200 µL PBS rece care conţine 1% FBS filtrat şi analizate prin citometrie în flux. Folosind şablonul QuickCal® (Bangs Labs), ABC-ul unui nivel de saturare de anti-BCMA 19F2 pentru fiecare linie celulară a fost interpolat din curba standard generată de intensitatea canalului populaţiilor de granule la saturaţie.
Uciderea celulelor ţintă care exprimă BCMA prin celule T umane în repaus sau de maimuţă cynomolgus a fost determinată prin citometrie în flux. Pe scurt, celulele mononucleare din sângele periferic de maimuţă umană sau cynomolgus (PBMC) au fost placate în mediu suplimentat RPMI (uman) sau X-Vivo (cyno) la 1 x 106 celule/mL şi incubate peste noapte la 37°C pentru a se îmbogăţi limfocite prin epuizarea macrofagelor aderente, a celulelor dendritice şi a unor monocite. A doua zi, celulele ţintă care exprimă BCMA au fost etichetate cu 1 uM de Violet CellTrace şi co-incubate cu PBMC epuizat de celule aderente (raport 4:1 efector/celulă ţintă) şi o diluţie în serie de bispecifici BCMAxCD3 sau anticorpi de control la 37°C . După 48-72 de ore, celulele au fost îndepărtate din plăci de cultură celulară, colorate cu anticorpi de fenotipizare cocktail şi colorant pentru viabilitatea celulelor vii/moarte şi analizate prin FACS. Pentru a cuantifica numărul de celule ţintă vii prezente în godeuri, s-au adăugat în godeuri 20 ui bile de numărare absolută CountBright chiar înainte de achiziţie. Pentru evaluarea specificităţii uciderii, celulele au fost încadrate pe populaţii marcate cu urmăritor de celule violet. Supravieţuirea procentuală a celulelor ţintă a fost calculată după cum urmează: Supravieţuirea ţintă=(R1/R2)*100, unde R1= numărul absolut de celule ţintă vii în prezenţa celulelor efectoare şi a anticorpului şi R2 = numărul de celule ţintă vii numai (cultivate) fără celule efectoare sau anticorpi de testare). ;Celulele T CD8+ umane au fost încadrate ca CD45+/CD14-/CD4-/CD8+. Celulele T CD8+ Cynomolgus au fost încadrate ca activarea celulelor T CD45+/CD20-/CD14-/CD4-/CD8+ a fost raportată ca procent de celule T CD25+ sau CD69+ din totalul celulelor T CD8+. ;Valorile EC50 pentru supravieţuirea celulelor ţintă şi activarea celulelor T au fost calculate utilizând analiza de regresie neliniară cu 4 parametri în software-ul Prism. ;Anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 au fost testaţi pentru capacitatea lor de a activa celulele T umane şi cynomolgus în repaus pentru a ucide un panou de celule care exprimă BCMA cu niveluri diferite de BCMA de suprafaţă. Cu celule T umane în repaus ca celule efectoare, REGN5458 a mediat uciderea a 5 linii celulare BCMA diferite cu valori EC50 variind de la 7,07 × 10-10 M la 3,45 × 10-11 M. REGN5459 a arătat uciderea aceloraşi 5 linii celulare cu valori cuprinse între 5 linii celulare. 1,66 × 10-9 M până la 1,06 × 10-10 M. EC50s pentru activarea celulelor T, măsurată prin suprareglarea CD25 pe celulele T CD8+, au fost similare cu uciderea EC50s. Activarea modestă a celulelor T a fost observată în prezenţa mAb17664D de control izotip CD3 cu 1 braţ, dar numai pentru linia celulară U266. Nu s-a observat nicio citotoxicitate pentru controalele de izotip testate. ;Uciderea mediată de BCMAxCD3 de către celulele T cynomolgus a fost testată numai pe linia celulară MM H929. EC50 pentru citotoxicitatea mediată de REGN5458 şi REGN5459 a fost 2,34×10-11 şi, respectiv, 6,92×10-11. Nu s-a observat nicio citotoxicitate sau activare a celulelor T pentru anticorpul de control izotip mAb15260 cu celule efectoare umane sau cynomolgus. Rezultatele sunt prezentate în Tabelele 15A, 15B şi 16 de mai jos. ;Tabelul 15A: EC50 mediană, celule efectoare umane ; H929 (40000 ABC) MM1S (18000 ABC) U266 (13000 ABC) REGN# n % Supravieţuire % T activare n % Supravieţuire % T activare n % Supravieţuire % T activare REGN5458 3 1.03E‑10 2.11E‑10 2 6.46E‑11 7.06E‑11 1 3.28E‑10 1.07E‑10 REGN5459 4 3.01E‑10 3.00E‑10 2 2.88E‑10 4.58E‑10 1 1.66E‑09 4.69E‑10;Tabelul 15B: EC50 mediană, celule efectoare umane ; RPMI8226 (10000 ABC) Molp8 (2000 ABC) REGN# n % Supravieţuire % T activare n % Supravieţuire % T activare REGN5458 1 3.45E‑11 6.49E‑11 2 7.07E‑10 1.10E‑9 REGN5459 1 1.06E‑10 7.50E‑10 3 1.36E‑09 6.47E‑9;Tabelul 16: EC50 mediană, celule efectoare Cynomolgus ; H929 REGN# n % Supravieţuire % T activare REGN5458 4 2.34E‑11 6.83E‑11 REGN5459 4 6.92E‑11 1.58E‑10;Exemplul 9: Testul de citotoxicitate FACS la distrugerea mediată de celule T autologe a celulelor blast de mielom multiplu primar în prezenţa anticorpilor bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 ;Pentru a monitoriza uciderea specifică a celulelor de mielom multiplu prin citometrie în flux, celulele mononucleare de măduvă osoasă (BMMC) de la pacienţi cu mielom multiplu au fost placate pe celule stromale umane (HS5) şi s-au odihnit peste noapte la 37C. Separat, celulele mononucleare din sângele periferic al pacientului (PBMC) potrivite au fost dezgheţate şi cultivate în mediu RPMI suplimentat la 1 x 106 celule/mL peste noapte la 37°C pentru a se îmbogăţi pentru limfocite prin epuizarea celulelor aderente. A doua zi, BMMC au fost co-incubate cu PBMC naive epuizate de celule aderente pe celule stromale (HS5) şi o diluţie în serie de 10x de control izotip CD3 bispecific sau cu 1 braţ BCMAxCD3 (concentraţie iniţială 66,7 nM) la 37°C. Celulele au fost îndepărtate din plăcile de cultură celulară în ziua 3, 4 sau 7 şi analizate prin FACS. Pentru evaluarea specificităţii uciderii, celulele de mielom multiplu au fost clasificate ca fiind unice, vii, CD90 negative (pentru a exclude celulele stromale), CD2 negative, CD56 pozitive. CD45 a fost scăzut în celulele de mielom multiplu în majoritatea probelor, cu excepţia MM455. Procentul de celule ţintă vii a fost raportat pentru calcularea supravieţuirii ajustate după cum urmează: Supravieţuire ajustată=(R1/R2)*100, unde R1=% celule ţintă vii în prezenţa anticorpului şi R2=% celule ţintă vii în absenţă de anticorpi de testare.
Celulele T au fost încadrate ca CD2 pozitive, CD56 negative şi fie CD4, fie CD8 pozitive. Activarea celulelor T a fost raportată ca procent de celule T CD25+ CD4 sau CD8 din totalul celulelor T CD4 sau CD8.
Anticorpii bispecifici BCMAxCD3 au fost testaţi pentru capacitatea lor de a redirecţiona uciderea celulelor blastice primare de mielom multiplu de către donatorul autolog PBMC. Citotoxicitatea maximă mediată de BCMAxCD3 a blastului MM primar a variat de la 52-96%, cu EC50s variind de la 9,89×10-11 M la 3,67×10-9 M pentru REGN5458 şi 4,96×10-10 M la 7,94×10-8 M pentru REGN5459. Activarea celulelor T a fost măsurată prin evaluarea suprareglarii CD25 pe celulele T CD8+. EC50 de activare a celulelor T a variat de la 3,23×10-9 la 1,69×10-10. Citotoxicitatea modestă şi activarea celulelor T au fost observate pentru controlul izotip CD3 cu 1 braţ (fără legare la ţintă). Rezultatele sunt prezentate în Tabelele 17A şi 17B de mai jos.
Tabelul 17A: MM % liză
ID-ul eşantionului Stadiul bolii E:T raport Durata tratamentului % MM liză la 66nM REGN5458 % MM liză la 66nM REGN5459 % MM liză la izotip 66nM MM2 nou diagnosticat 1.4 7 zile 88 85 27.5 MM369 nou diagnosticat 0.3 3 zile 96 94 0 MM453 nou diagnosticat 2.4 3 zile 82 80 40 MM455 progresie, tratată 0.4 3 zile 63 52 24
Tabelul 17B: liza MM EC50 şi activarea celulelor T
ID-ul eşantionu-lui Stadiul bolii E:T raport Durata tratamentului MM Liză EC50 REGN5458 MM liză EC50 REGN5459 CD25 upreg EC50 REGN5456 CD25 upreg EC50 REGN5456 MM2 nou diagnosticat 1.4 7 zile 7.47E‑10 7.24E‑09 Nu s-a termninat Nu s-a terminat MM369 nou diagnosticat 0.3 3 zile 1.07E‑10 4.96E‑10 1.69E‑10 2.03E‑10 MM453 nou diagnosticat 2.4 3 zile 9.89E‑11 1.19E‑09 1.71E‑10 3.23E‑9 MM455 progresie, tratată 0.4 3 zile 3.67E‑09 7.94E‑08 2.06E‑10 1.16E‑9
Exemplul 10: Anticorpii bispecifici anti-BCMA x anti-CD3 previn creşterea tumorilor care exprimă BCMA (NCI-H929) in vivo într-un model de tumoră xenogenă
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) BCMAxCD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. Şoarecii imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtm1wjl/SzJ (NSG) au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 10 × 106 celule de mielom multiplu NCI-H929 care exprimă BCMA şi 0,5 × 106 celule mononucleare din sânge periferic uman (PBMB) izolate de la un donator normal. Şoarecilor (n = 7 per grup) li s-a administrat imediat un control vehicul PBS, un Ab de control izotip bivalent anti-FelD1 irelevant (REGN2759), un Ab bispecific de controlul legării CD3 (mAb17664D), un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (Ab17664D) bispecific BCMAxCD3 (Ab17664D) mg/kg. Şoarecilor li s-a administrat Abs de două ori pe săptămână timp de un total de trei săptămâni, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 40 de zile. În timp ce tumorile BCMA+ au crescut în mod similar la şoarecii trataţi cu vehicul, control izotip şi control CD3, ambii BCMAxCD3 Abs care au fost testaţi au prevenit creşterea tumorilor in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor singeneice: şoarecii NSG au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 10 x 106 BCMA care exprimă celule de mielom multiplu NCI-H929 şi 0,5 x 106 PBMC derivate de la un donator normal. Şoarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat imediat un martor vehicul PBS, un Ab de control izotip bivalent anti-FelD1 irelevant (REGN2759), un Ab bispecific de controlul legării CD3 (mAb17664D), un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G20; REGN5459) la o doză de 4 mg/kg. Şoarecilor li s-a administrat Abs de doua ori pe săptămână pentru un total de trei săptămâni. Creşterea tumorii a fost măsurată cu şublere de două ori pe săptămână pe durata experimentului. Şoarecii au fost sacrificaţi la 40 de zile după implantarea tumorii.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii singenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime x lăţime2)/2.
Abs bispecific BCMAxCD3 a prevenit creşterea tumorilor BCMA+NCI-H929 in vivo într-un model de tumoră xenogenă. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 18 de mai jos.
Tabelul 18: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în Ziua 4 PBS (Control Vehicul) 67.1 ± 5.9 REGN2759 (Control Izotip) 62.6 ± 3.7
Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 4 mAb17664D (CD3 Controlul legării) 76.1 ± 7.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 39.5 ± 9.1 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 26.5 ± 6.2 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 7 PBS (Control Vehicul) 123.0 ± 25.2 REGN2759 (Control izotip) 109.7 ± 20.3 mAb17664D (CD3 Controlul legării) 182.0 ± 19.4 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 11 PBS (Control Vehicul) 361.5 ± 35.7 REGN2759 (Control Izotip) 415.3 ± 11.4 mAb17664D (CD3 Controlul legării) 449.6 ±46.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 14 PBS (Control Vehicul) 581.4 ± 57.9 REGN2759 (Control Izotip) 734.3 ± 41.8 mAb17664D (CD3Controlul legării) 741.2 ± 56.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 18 PBS (Control Vehicul) 1033.4 ± 143.7 REGN2759 (Control Izotip) 1586.1 ± 101.4 mAb17664D (CD3 Controlul legării) 1511.4 ± 80.7 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM on Day 21 PBS (Control Vehicul) 1730.9 ± 244.8 REGN2759 (Control Izotip) 2554.7 ± 148.8 mAb17664D (CD3 Controlul legării) 2474.0 ± 132.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0 Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM on Day 28 PBS (Control Vehicul) Eutanasiat - Nu este măsurat REGN2759 (Control Izotip) Eutanasiat - Nu este măsurat mAb17664D (CD3 Controlul legării) Eutanasiat - Nu este măsurat REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0
Anticorp (4 mg/kg) Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 40 PBS (Control Vehicul) Eutanasiat - Nu este măsurat REGN2759 (Control Izotip) Eutanasiat - Nu este măsurat mAb17664D (CD3 Controlul legării) Eutanasiat - Nu este măsurat REGN5458 (BCMAxCD3-G) 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) 0 ± 0
Exemplul 11: Anticorpii bispecifici Anti-BCMA x Anti-CD3 previn creşterea tumorilor care exprimă BCMA (NCI-H929) într-o manieră dependentă de doză într-un model de tumoră xenogenică in vivo
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA x anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. Şoarecii imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtm1wjl/SzJ (NSG) au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 10×106 BCMA-exprimând NCI-H929 celule tumorale umane de mielom multiplu şi 0,5×106 celule sanguine mononucleare periferice umane (PBMC) izolat de la un donator normal, sănătos. Soarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat apoi imediat un martor vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 4 mg/kg, un control bispecific de legare la CD3 (G20; REGN4460). ) la o doză de 4 mg/kg, un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg sau un BCMAxCD3 (G20; REGN5459) Ab bispecific la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de două ori pe săptămână pentru un total de şapte doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 60 de zile. În timp ce tumorile BCMA+ NCI-H929 au crescut în mod similar la şoarecii trataţi cu vehicul şi controlul legării CD3, ambii anti-BCMA x anti-CD3 Abs care au fost testaţi au prevenit creşterea tumorilor într-o manieră dependentă de doză in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor xenogene: şoarecii NSG au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de celule de mielom multiplu NCI-H929 care exprimă BCMA 10 × 106 şi 0,5 × 106 PBMC derivate de la un donator normal, sănătos. Şoarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat imediat un control vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D), un control bispecific de legare la CD3 (G20; REGN4460), un BCMAxCD3 (G; REGN5458) Ab bispecific sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G20; REGN5459). mAb17664D şi REGN4460 au fost administrate la 4 mg/kg, în timp ce REGN5458 şi REGN5459 au fost administrate fie la 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Soarecilor li s-a administrat Abs de doua ori pe saptamana pentru un total de sapte doze. Creşterea tumorii a fost măsurată cu şublere de două ori pe săptămână pe durata experimentului.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii xenogenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime x lăţime2)/2.
Abs bispecific BCMAxCD3 a prevenit creşterea tumorilor BCMA+ NCI-H929 într-o manieră dependentă de doză în acest model de tumoră xenogen in vivo. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 19 de mai jos şi ilustrate în Figurile 1 şi 2.
Tabelul 19: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 4 PBS (Control Vehicul) 60.1 ± 7.9 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 42.5 ± 4.7 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 52.0 ± 5.9 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 18.0 ± 1.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 31.9 ± 2.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 32.0 ± 2.9 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 21.8 ± 3.4 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 19.6 ± 4.4 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 33.0 ± 4.4 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 7 PBS (Control Vehicul) 138.2 ± 25.1 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 108.6 ± 17.8 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 132.4 ± 21.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1.3 ± 1.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 11.3 ± 3.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 30.8 ± 5.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 8.0 ± 4.3 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 7.3 ± 3.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 8.4 ± 4.0 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 12 PBS (Control Vehicul) 545.4 ± 88.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 493.4 ± 67.5 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 616.2 ± 84.4 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.6 ± 1.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 71.5 ± 22.4 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 1.7 ± 1.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 0 ± 0 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 15 PBS (Control Vehicul) 921.4 ± 147.5 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 874.8 ± 86.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 1190.7 ± 91.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 133.4 ± 50.9 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 7.9 ± 7.9 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 19 PBS (Control Vehicul) 1785.3 ± 282.2 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 1833.4 ± 186.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 2336.5 ± 188.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 413.7 ± 162.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 23.1 ± 23.1 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 22 PBS (Control Vehicul) 2601.5 ± 414.5 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 2878.5 ± 257.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 3374.3 ± 267.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 669.4 ± 248.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 69.5 ± 69.5 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 26 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1167.0 ± 431.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 156.7 ± 156.7 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 29 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1781.8 ± 620.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 226.6 ± 226.6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 34 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 39 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 42 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 46 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 55 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 60 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate
Exemplul 12: Anticorpii bispecifici anti-BCMA × Anti-CD3 reduc dimensiunea şi previn creşterea tumorilor care exprimă BCMA stabilite (NCI-H929) într-o manieră dependentă de doză într-un model de tumoră xenogenă in vivo
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA × anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. Şoarecii imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 10 × 106 BCMA care exprimă NCI-H929 celule tumorale umane de mielom multiplu şi 0,5 × 106 celule sanguine mononucleare umane (PBMC) izolat de la un donator normal, sănătos. Tumorile au fost lăsate să crească şi să se stabilească timp de 5 zile până când au avut o dimensiune de aproximativ 70 mm3. În ziua 5, şoarecilor (n=7-8 per grup) li s-a administrat apoi un control vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 4 mg/kg, un control bispecific de legare la CD3 Ab (G20; REGN4460) la o doză de 4 mg/kg, un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg sau un BCMAxCD3 (G20; REGN5459) Ab bispecific la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de două ori pe săptămână pentru un total de şapte doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 55 de zile. În timp ce tumorile BCMA+ NCI-H929 au crescut în mod similar la şoarecii trataţi cu vehicul şi CD3-control, ambii BCMAxCD3 Abs care au fost testaţi au micşorat tumorile stabilite şi au prevenit creşterea tumorilor într-un mod dependent de doză in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor xenogene: şoarecii NSG au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de celule de mielom multiplu NCI-H929 care exprimă BCMA 10 × 106 şi 0,5 × 106 PBMC derivate de la un donator normal, sănătos. Tumorile au fost lăsate să crească şi să se stabilească timp de 5 zile până când au avut o dimensiune de aproximativ 70 mm3. În ziua 5, şoarecilor (n=7-8 per grup) li s-a administrat apoi un control vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D), un control bispecific de legare la CD3 (G20; REGN4460), un BCMAxCD3 (G; REGN5458) Ab bispecific sau un BCMAxCD3 (G20; REGN5459) bispecific Ab. mAb17664D şi REGN4460 au fost administrate la 4 mg/kg, în timp ce REGN5458 şi REGN5459 au fost administrate fie la 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Soarecilor li s-a administrat Abs de doua ori pe saptamana pentru un total de sapte doze. Creşterea tumorii a fost măsurată cu şublere de două ori pe săptămână pe durata experimentului.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii xenogenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime × lăţime2)/2.
Anticorpii bispecifici anti-BCMA × anti-CD3 au redus dimensiunea şi au prevenit creşterea tumorilor BCMA+ NCI-H929 stabilite într-o manieră dependentă de doză în acest model de tumoră xenogenă in vivo. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 20 de mai jos şi ilustrate în Figurile 3 şi 4.
Tabelul 20: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 5 PBS (Control Vehicul) 61.5 ± 6.4 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 63.7 ± 5.4 REGN4460 (CD3 Controlul legării l-G20) - 4mg/kg 62.6 ± 3.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 71.9 ± 10.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 69.3 ± 7.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 58.1 ± 5.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 61.8 ± 5.2 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 69.5 ± 4.1 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 74.9 ± 6.4 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 8 PBS (Control Vehicul) 124.3 ± 17.3 mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg 145.3 ± 22.0 REGN4460 (CD3 Controlul legării l-G20) - 4mg/kg 170.7 ± 15.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 64.7 ± 16.4 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 120.3 ± 16.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 130.3 ± 16.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 45.8 ± 9.8 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 171.9 ± 23.2 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 152.3 ± 20.0 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 12 PBS (Control Vehicul) 565.7 ± 64.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg 585.0 ± 64.4 REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg 706.8 ± 46.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 19.5 ± 10.9 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 262.7 ± 61.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 525.9 ± 71.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 11.5 ± 8.9 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 233.8 ± 63.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 462.5 ± 57.7 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 15 PBS (Control Vehicul) 1150.4 ± 105.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg 1041.4 ± 101.3 REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg 1298.4 ± 71.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 25.6 ± 19.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 476.2 ± 133.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1031.2 ± 164.3 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 327.2 ± 135.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 1094.2 ± 78.9 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 19 PBS (Control Vehicul) 2621.3 ± 190.9 mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg 2557.5 ± 241.1 REGN4460 (CD3 Controlul legării l-G20) - 4mg/kg 3383.3 ± 183.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 40.6 ± 32.8 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1347.5 ± 334.7 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 2467.5 ± 370.0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 606.2 ± 288.8 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 2412.5 ± 184.6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 22 PBS (Control Vehicul) 3717.9 ± 214.5 mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg 3688.9 ± 272.0 REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg 4492.2 ± 344.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 78.3 ± 60.8 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 2068.5 ± 465.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 3745.7 ± 541.2 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 815.4 ± 387.1 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 3285.9 ± 227.3 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 27 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 252.3 ± 185.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 3463.9 ± 1025.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1589.1 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 1849.9 ± 903.1 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 30 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 411.3 ± 307.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 2144.2 ± 2144.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 2886.5 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 661.8 ± 490.1 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 35 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 633.5 ± 473.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 996.8 ± 771.0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 40 PBS (Vehicle Control) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 369.5 ± 369.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 375.6 ± 375.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 55 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării -G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării -G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate
Exemplul 13: Anticorpii bispecifici Anti-BCMA × Anti-CD3 previn creşterea tumorilor care exprimă BCMA (MOLP-8) într-o manieră dependentă de doză într-un model de tumoră xenogenică in vivo
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA × anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. Şoarecii imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 5 × 106 BCMA care exprimă MOLP-8 celule tumorale umane de mielom multiplu şi 1 × 106 celule mononucleare umane periferice izolate din sânge uman normal (PBMC) donator sănătos. Soarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat apoi imediat un martor vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 4 mg/kg, un control bispecific de legare la CD3 (G20; REGN4460). ) la o doză de 4 mg/kg, un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg sau un BCMAxCD3 (G20; REGN5459) Ab bispecific la doze de 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de două ori pe săptămână pentru un total de şapte doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 56 de zile. În timp ce tumorile BCMA+ MOLP-8 au crescut în mod similar la şoarecii trataţi cu vehicul şi CD3-control, ambii BCMAxCD3 Abs care au fost testaţi au prevenit creşterea tumorilor într-o manieră dependentă de doză in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor xenogene: şoarecii NSG au fost implantaţi subcutanat cu un amestec de 5 x 106 BCMA-exprimând celule de mielom multiplu MOLP-8 şi 1 x 106 PBMC derivate de la un donator normal, sănătos. Şoarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat imediat un control vehicul PBS, un control bispecific de legare la CD3 (G; mAb17664D), un control bispecific de legare la CD3 (G20; REGN4460), un BCMAxCD3 (G; REGN5458) Ab bispecific sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G20; REGN5459). mAb17664D şi REGN4460 au fost administrate la 4 mg/kg, în timp ce REGN5458 şi REGN5459 au fost administrate fie la 4 mg/kg, 0,4 mg/kg sau 0,04 mg/kg. Soarecilor li s-a administrat Abs de doua ori pe saptamana pentru un total de sapte doze. Creşterea tumorii a fost măsurată cu şubler de două ori pe săptămână pe durata experimentului.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii xenogenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime × lăţime2)/2.
Anticorpii bispecifici anti-BCMA × anti-CD3 au prevenit creşterea tumorilor BCMA+ MOLP-8 într-o manieră dependentă de doză în acest model de tumoră xenogen in vivo. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 21 de mai jos şi ilustrate în Figurile 5 şi 6.
Tabelul 21: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 3 PBS (Control Vehicul) 10.3 ± 3.0 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 11.6 ± 2.0 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 14.1 ± 3.9 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 12.5 ± 1.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 13.5 ± 1.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 9.3 ± 2.4 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 12.9 ± 1.3 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 14.0 ± 1.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 11.7 ± 2.1 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 7 PBS (Control Vehicul) 73.4 ± 13.5 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 50.0 ± 6.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 45.7 ± 6.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.0 1.0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 18.3 ± 5.0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0.6 ± 0.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 37.0 ± 5.7 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 10 PBS (Control Vehicul) 249.9 ± 47.6 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 125.0 ± 6.8 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 173.9 ± 99 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 73.9 ± 25.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 104 ± 23.0 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 14 PBS (Control Vehicul) 677.0 ± 62.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 530.0 ± 44.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 549.1 ± 59.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 255.4 ± 79.7 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 356.7 ± 84.6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 17 PBS (Control Vehicul) 1349.5 ± 149.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 935.3 ± 71.3 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 1027.1 ± 86.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 14.5 ± 7.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.7 ± 1.7 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 494.3 ± 144.3 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 645.6 ± 140.9 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 21 PBS (Control Vehicul) 2990.9 ± 291.7 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 2249.6 ± 113.5 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 2473.4 ± 170.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 102.7 ± 66.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.3 ± 5.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1373.0 ± 366.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 1442.4 ± 310.7 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 23 PBS (Control Vehicul) 4155.1 ± 401.8 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 3288.4 ± 204.6 REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg 3592.7 ± 224.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 193.3 ± 117.7 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 9.7 ± 9.7 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 1882.3 ± 551.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 2124.4 ± 444.1 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 28 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 627.4 ± 318.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 47.4 ± 47.4 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 2542.5 ± 613.3 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 1.9 ± 1.9 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 1939.3 ± 840.6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 31 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1018.5 ± 498.3 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 104.7 ± 92.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 2906.1 ± 532.6 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 3.8 ± 3.0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 2688.7 ± 1176.6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 35 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1342.9 ± 629.6 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 375.1 ± 307.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 3538.0 ± 0.0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 9.3 ± 7.5 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg 612.1 ± 0 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 42 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 2363.0 ± 890.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 968.8 ± 689.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 12.8 ± 12.8 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 49 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1683.5 ± 1683.5 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg No Recording REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg No Recording REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg No Recording REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 56 PBS (Control Vehicul) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN4460 (CD3 Controlul legării-G20) - 4mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 3108.1 ± 3108.1 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1742.4 ± 635.2 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 4mg/kg 17.2 ± 17.2 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 0 ± 0 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.04mg/kg Animale eutanasiate
Exemplul 14: Anticorpii bispecifici anti-BCMA × Anti-CD3 întârzie creşterea tumorilor care exprimă BCMA (MOLP-8) într-un model de tumoră xenografică in vivo
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA × anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. În ziua -11, şoarecii imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) au fost injectaţi intraperitoneal cu 4 x 106 celule mononucleare din sângele periferic uman (PBMC) de la un donator normal, sănătos. În ziua 0, şoarecilor li s-au administrat intravenos 2 x106 BCMA+ MOLP-8 celule tumorale umane de mielom multiplu care au fost concepute pentru a exprima, de asemenea, luciferaza de licurici (celule MOLP-8-luciferaza). Şoarecilor (n=5 per grup) li s-a administrat apoi imediat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la o doză de 4 mg/ kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 3 şi 7, pentru un total de trei doze. Creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 48 de zile prin măsurarea bioluminiscenţei tumorii (BLI) la animalele anesteziate. Ca martor pozitiv, unui grup de şoareci (n=5) i s-a administrat numai celule MOLP-8-luciferazei, dar nu PBMC sau anticorpi. Pentru a măsura nivelurile de fond BLI, un grup de şoareci (n=5) au fost netratate şi nu au primit tumori, PBMC sau anticorpi. În timp ce tumorile BCMA+ MOLP-8-luciferazei au crescut progresiv la şoarecii trataţi cu controlul legării CD3, tratamentul cu BCMAxCD3 Ab cu REGN5458 a întârziat creşterea tumorilor in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor xenogene: în ziua -11, şoareci imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) au fost injectaţi intraperitoneal cu 5 x 106 PBMC uman de la un donator normal, sănătos. În ziua 0, şoarecilor li s-au administrat intravenos 2x106BCMA+ MOLP-8-luciferaze celule. Şoarecilor (n=5 per grup) li s-a administrat apoi imediat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la o doză de 4 mg/ kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 3 şi 7, pentru un total de trei doze. Creşterea tumorii a fost evaluată pe parcursul a 48 de zile prin măsurarea BLI tumorii la animalele anesteziate. Ca martor pozitiv, unui grup de şoareci (n=5) i s-a administrat numai celule MOLP-8-luciferazei, dar nu PBMC sau anticorpi. Pentru a măsura nivelurile de fond BLI, un grup de şoareci (n=5) au fost netratate şi nu au primit tumori, PBMC sau anticorpi.
Măsurarea creşterii tumorii xenogenice: imagistica BLI a fost utilizată pentru a măsura sarcina tumorală. Şoarecilor li s-a injectat IP cu 150 mg/kg de substrat de luciferază D-luciferină suspendată în PBS. La cinci minute după această injecţie, imagistica BLI a şoarecilor a fost efectuată sub anestezie cu izofluran folosind sistemul Xenogen IVIS. Achiziţia imaginii a fost efectuată cu câmpul vizual la D, înălţimea subiectului de 1,5 cm şi nivel mediu de binning cu timpul de expunere automat determinat de Living Image Software. Semnalele BLI au fost extrase folosind software-ul Living Image: regiunile de interes au fost desenate în jurul fiecărei mase tumorale şi intensităţile fotonilor au fost înregistrate ca p/s/cm2/sr.
Anticorpul bispecific anti-BCMA × anti-CD3 REGN5458 a întârziat creşterea tumorilor BCMA+ MOLP-8-luciferazei în acest model de tumoră xenogen in vivo. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 22 de mai jos.
Tabelul 22: Dimensiunea medie a tumorii (după strălucire) la diferite momente de timp
Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 8 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 4.93E+05 ± 1.66E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 5.73E+05 ± 5.27E+04 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 6.08E+05 ± 5.16E+04 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 5.66E+05 ± 1.97E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 15 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 5.37E+05 ± 1.46E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 1.24E+06 ± 9.67E+04 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 1.61E+06 ± 9.64E+04 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 5.28E+05 ± 4.13E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 22 zile post-implant (medie ± SEM)) Fără tumoare (fond BLI) 7.00E+05 ± 1.03E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 1.23E+07 ± 1.02E+06 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 1.98E+07 ± 8.86E+06 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1.08E+06 ± 1.71E+05 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 24 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 5.24E+05 ± 1.86E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 1.56E+07 ± 1.29E+06 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 5.26E+07 ± 1.91E+07 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1.02E+06 ± 1.99E+05 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 28 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.09E+05 ± 2.28E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 3.01E+07 ± 4.78E+06 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg 5.69E+07 ± 2.77E+07 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 3.56E+06 ± 6.34E+05 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 30 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.44E+05 ± 4.56E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 6.92E+06 ± 1.40E+06 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 34 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.78E+05 ± 3.02E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg. Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 2.65E+07 ± 1.36E+07 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 37 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.59E+05 ± 2.96E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 4.52E+07 ± 1.40E+07 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 43 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.26E+05 ± 4.18E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mq/kq Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 1.06E+08 ± 3.43E+07 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 48 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 8.24E+05 ± 1.73E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 4mg/kg 3.22E+08 ± 1.27E+08
Exemplul 15: Anticorpii bispecifici anti-BCMA × Anti-CD3 reduc sarcinile tumorale (OPM-2) la nivelurile de fond in vivo
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA × anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral xenogen. În ziua 0, şoarecilor imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) li s-au administrat intravenos 2 × 106 BCMA+ OPM-2 celule tumorale umane de mielom multiplu care au fost modificate pentru a exprima, de asemenea, celulele fireluciferaze (OPM-2-luciferaza). În ziua 10, şoarecii au fost injectaţi intraperitoneal cu 4x106 celule mononucleare din sângele periferic uman (PBMC) de la un donator normal, sănătos. În ziua 21, şoarecilor (n=5 per grup) li s-a administrat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 0,4 mg/kg, un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la 0,4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G20; REGN5459) la 0,4 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 25 şi 28, pentru un total de trei doze. Creşterea tumorii a fost evaluată până în ziua 61 prin măsurarea bioluminiscenţei tumorii (BLI) la animalele anesteziate. Ca martor pozitiv, unui grup de şoareci (n=5) i s-a administrat numai celule OPM-2-luciferaze, dar nu PBMC sau anticorp. Pentru a măsura nivelurile de fond BLI, un grup de şoareci (n=5) au fost netratate şi nu au primit tumori, PBMC sau anticorpi. În timp ce tumorile BCMA+ OPM-2-luciferazei au crescut progresiv la şoarecii trataţi cu control care leagă CD3, tratamentul cu BCMAxCD3 Ab cu REGN5458 şi REGN5459 a redus sarcinile tumorale la nivelurile de bază la majoritatea animalelor.
Implantarea şi măsurarea tumorilor xenogene: în ziua 0, şoarecilor imunodeficienţi NOD.Cg-PrkdCscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) li s-au administrat intravenos 2×106 BCMA+ OPM-2 celule tumorale umane care exprimă, de asemenea, celulele umane lucioase cu mielofere multiple, care exprimă mieloferare multiple. (celule OPM-2-luciferaza). În ziua 10, şoarecii au fost injectaţi intraperitoneal cu 4x106 celule mononucleare din sângele periferic uman (PBMC) de la un donator normal, sănătos. În ziua 21, şoarecilor (n=5 per grup) li s-a administrat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 0,4 mg/kg, un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la 0,4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G20; REGN5459) la 0,4 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 25 şi 28, pentru un total de trei doze. Creşterea tumorii a fost evaluată până în ziua 61 prin măsurarea bioluminiscenţei tumorii (BLI) la animalele anesteziate. Ca martor pozitiv, unui grup de şoareci (n=5) i s-a administrat numai celule OPM-2-luciferaze, dar nu PBMC sau anticorp. Pentru a măsura nivelurile de fond BLI, un grup de şoareci (n=5) au fost netratate şi nu au primit tumori, PBMC sau anticorpi.
Măsurarea creşterii tumorii xenogenice: imagistica BLI a fost utilizată pentru a măsura sarcina tumorală. Şoarecilor li s-a injectat IP cu 150 mg/kg de substrat de luciferază D-luciferină suspendată în PBS. La cinci minute după această injecţie, imagistica BLI a şoarecilor a fost efectuată sub anestezie cu izofluran folosind sistemul Xenogen IVIS. Achiziţia imaginii a fost efectuată cu câmpul vizual la D, înălţimea subiectului de 1,5 cm şi nivel mediu de binning cu timpul de expunere automat determinat de Living Image Software. Semnalele BLI au fost extrase folosind software-ul Living Image: regiunile de interes au fost desenate în jurul fiecărei mase tumorale şi intensităţile fotonilor au fost înregistrate ca p/s/cm2/sr.
În timp ce tumorile BCMA+ OPM-2-luciferazei au crescut progresiv la şoarecii trataţi cu controlul legării CD3, tratamentul cu BCMAxCD3 Ab cu REGN5458 şi REGN5459 a redus sarcinile tumorale la nivelurile de bază la majoritatea animalelor. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 23 de mai jos şi ilustrate în Figura 7.
Tabelul 23: Dimensiunea medie a tumorii (după strălucire) la diferite momente de timp
Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 5 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.22E+05 ± 2.77E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 5.62E+05 ± 2.75E+04 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 5.73E+05 ± 3.02E+04 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.87E+05 ± 2.40E+04 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 5.09E+05 ± 3.56E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 11 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.90E+05 ± 3.64E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 6.22E+05 ± 3.34E+04 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 6.25E+05 ± 3.80E+04 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 6.19E+05 ± 4.39E+04 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 6.45E+05 ± 2.39E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 20 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.59E+05 ± 5.82E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 2.32E+06 ± 2.94E+05 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 2.36E+06 ± 5.46E+05 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.81E+06 ± 2.37E+05 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 2.13E+06 ± 1.69E+05 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 26 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 5.51E+05 ± 2.51E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 5.96E+06 ± 8.74E+05 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 6.05E+06 ± 1.32E+06 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.73E+06 ± 8.69E+05 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 1.28E+06 ± 7.36E+05 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 31 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.62E+05 ± 3.35E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 1.58E+07 ± 4.84E+06 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 1.35E+07 ± 2.35E+06 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mq/kg 3.50E+06 ± 2.42E+06 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 1.98E+06 ± 1.36E+06 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 34 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 4.57E+05 ± 1.04E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 3.36E+07 ± 1.27E+07 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg. 2.35E+07 ± 5.72E+06 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 4.85E+06 ± 3.24E+06 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 4.24E+06 ± 3.69E+06 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 38 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.60E+05 ± 3.13E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) 3.91E+07 ± 6.87E+06 mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 4.84E+07 ± 1.65E+07 REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.30E+06 ± 3.44E+06 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 3.21E+06 ± 2.52E+06 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 40 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 5.39E+05 ± 9.67E+03 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.06E+06 ± 3.36E+06 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 3.84E+06 ± 3.34E+06 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 47 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.73E+05 ± 1.91E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 7.76E+05 ± 7.85E+04 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 7.34E+05 ± 2.62E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 54 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 7.49E+05 ± 1.95E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.78E+05 ± 1.15E+05 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 6.41E+05 ± 5.96E+04 Tratament cu anticorpi Radianţa [p/s/cm22/sr] 61 zile post-implant (medie ± SEM) Fără tumoare (fond BLI) 6.18E+05 ± 2.77E+04 Fără PBMC/anticorp (control pozitiv) Animale eutanasiate mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg Animale eutanasiate REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 5.23E+05 ± 4.10E+04 REGN5459 (BCMAxCD3-G20) - 0.4mg/kg 6.03E+05 ± 5.29E+04
Exemplul 16: Anticorpii bispecifici BCMA×CD3 suprimă creşterea tumorilor singenice in vivo într-o manieră dependentă de doză
Pentru a determina eficacitatea in vivo a anticorpilor bispecifici (Abs) anti-BCMA × anti-CD3, a fost efectuat un studiu tumoral singenic la şoareci care exprimă CD3 uman. Şoarecii C57BL/6 care exprimă CD3deg uman în loc de CD3deg murin (şoareci umanizaţi CD3) au fost implantaţi subcutanat fie cu celule de melanom 0,5 × 106 B16 care au fost proiectate pentru a exprima BCMA uman de lungime completă (celule B16/BCMA) sau 1 × 106 Celule de carcinom de colon MC38 care au fost proiectat pentru a exprima BCMA uman de lungime completă (MC38/BCMA). Soarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat apoi imediat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 0,4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la doze fie de 0,4 mg/ kg sau 0,04 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 4 şi 7 pentru un total de trei doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe tot parcursul experimentului. În timp ce tumorile B16/BCMA şi tumorile MC38/BCMA au crescut la şoarecii trataţi cu controlul legării CD3, BCMAxCD3 REGN5458 a fost capabil să suprime creşterea ambelor linii tumorale într-o manieră dependentă de doză in vivo.
Implantarea şi măsurarea tumorilor singenice: şoarecii C57BL/6 care exprimă CD3deg uman în loc de CD3deg murin (şoareci umanizaţi CD3) au fost implantaţi subcutanat fie cu celule de melanom 0,5×106 B16F10 care au fost proiectate pentru a exprima BCMA uman de lungime completă (B16). /celule BCMA) sau 1 × 106 Celule de carcinom de colon MC38 care au fost proiectate pentru a exprima BCMA uman de lungime completă (MC38/BCMA). Soarecilor (n=7 per grup) li s-a administrat apoi imediat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; mAb17664D) la o doză de 0,4 mg/kg sau un Ab bispecific BCMAxCD3 (G; REGN5458) la doze fie de 0,4 mg/ kg sau 0,04 mg/kg. Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 4 şi 7 pentru un total de trei doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe tot parcursul experimentului.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii singenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime × lăţime2)/2.
În timp ce tumorile B16/BCMA şi tumorile MC38/BCMA au crescut la şoarecii trataţi cu controlul legării CD3, BCMAxCD3 REGN5458 a fost capabil să suprime creşterea ambelor linii tumorale într-o manieră dependentă de doză in vivo. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 24 de mai jos.
Tabelul 24: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în Ziua5 B16/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 25.6 ± 2.7 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 0.0 ± 0.0 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 3.3 ± 2.2 MC38/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mq/kq 29.3 ± 4.4 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 1.4 ± 1.4 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mq/kg 11.9 ± 2.9 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în Ziua10 B16/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mq/kq 179.2 ± 30.6 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mq/kq. 0.0 ± 0.0 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mq/kg 15.4 ± 12.5 MC38/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mq/kq 123.1 ± 14.6 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mq/kq. 0.0 ± 0.0 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mq/kg 66.7 ± 22.5 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în Ziua14 B16/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mq/kq 763.1 ± 156.2 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 8.1 ± 4.4 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mq/kg 81.4 ± 49.2 MC38/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 477.1 ± 77.1 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mq/kq. 2.9 ± 2.9 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 273.3 ± 115.3 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în Ziua18 B16/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 2068.9 ± 357.7 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg 47.1 ± 17.0 B16/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 127.2 ± 63.9 MC38/BCMA Tumoare mAb17664D (CD3 Controlul legării-G) - 0.4 mg/kg 1432.5 ± 231.6 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.4mg/kg. 7.5 ± 7.5 MC38/BCMA Tumoare REGN5458 (BCMAxCD3-G) - 0.04mg/kg 641.5 ± 309.8
Exemplul 17: Maparea epitopului a legării REGN5458 la BCMA prin schimbul de deuteriu cu hidrogen
Maparea epitopului de schimb H/D cu spectrometrie de masă (HDX-MS) a fost efectuată pentru a determina resturile de aminoacizi ale BCMA (BCMA uman recombinant, secvenţa de aminoacizi a SEQ ID NR: 115) care interacţionează cu REGN5458 (anticorp bispecific BCMA × CD3). O descriere generală a metodei de schimb H/D este prezentată, de exemplu, în Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; şi Engen şi Smith (2001) Anal. Chim. 73:256A-265A.
Experimentele HDX-MS au fost efectuate pe o platformă HDX/MS integrată, constând dintr-un sistem Leaptec HDX PAL pentru etichetarea şi stingerea deuteiului, un Waters Acquity M-Class (Manager de solvent auxiliar) pentru digestia şi încărcarea probei, un Waters Acquity. M-Class (gestor de solvent µBinary) pentru gradientul analitic şi spectrometrul de masă Thermo Q Exactive HF pentru peptidă măsurarea masei.
Soluţia de marcare a fost preparată ca tampon PBS în D2O la pD 7,0 (tampon fosfat 10 mM, NaCI 140 mM şi KCI 3 mM, echivalent cu pH 7,4 la 25°C). Pentru marcarea cu deuteriu, 10 µL de hBCMA.hFc (REGN2746, 54,5 µM; SECV ID NR: 120 sau hBCMA.hFc preamestecat cu REGN5458 în raport molar 1:2 (complex Ag-Ab) au fost incubaţi la 20°C cu 90 µL D2O soluţie de etichetare pentru diferite momente în duplicate (de exemplu, control nedeuterat = 0 secundă; etichetat cu deuteriu timp de 5 minute şi 10 minute). Reacţia de deuteration a fost stinsă prin adăugarea a 100 uL de tampon de stingere pre-răcit (0,5 M TCEP-HCl, 8 M uree şi 1% acid formic) la fiecare probă pentru o incubare de 5 minute la 20 °C. Proba stinsă a fost apoi injectată într-un Waters HDX Manager pentru digestia online pepsină/protează XIII. Peptidele digerate au fost separate printr-o coloană C8 (1,0 mm × 50 mm, NovaBioassays) cu un gradient de 13 minute de la 10%-32% B (faza mobilă A: 0,5% acid formic în apă, faza mobilă B: 0,1% formic acid în acetonitril). Peptidele eluate au fost analizate prin spectrometrie de masă Q Exactive HF în modul LC-MS/MS sau LC-MS.
Datele LC-MS/MS ale eşantionului BCMA nedeuterat au fost căutate într-o bază de date care include BCMA şi secvenţa sa randomizată folosind motorul de căutare Byonic (Protein Metrics). Parametrii de căutare (în ELN) au fost setaţi ca implicite utilizând digestia enzimatică nespecifică şi glicozilarea umană ca modificare variabilă comună. Lista de peptide identificate a fost apoi importată în software-ul HDX Workbench (versiunea 3.3) pentru a calcula absorbţia de deuteriu a fiecărei peptide detectate prin LC-MS din toate probele deuterate. Pentru o anumită peptidă, masa centroidă (masa medie ponderată în funcţie de intensitate) la fiecare moment de timp a fost utilizată pentru a calcula absorbţia de deuteriu (D) şi procentul de absorbţie de deuteriu (%D):
Absorbţie de deuteriu D-absorbţie = Masa medie (deuterată) − Masa medie ( nedeuterată)
Un total de 8 peptide din hBCMA.hFc au fost identificate atât din hBCMA.hFc singur, cât şi din hBCMA.hFc în complex cu probe REGN5458, reprezentând o acoperire de secvenţă de 100% a hBCMA. Deviaţia standard medie (SD) a tuturor peptidelor a fost evaluată ca fiind de 1,4% (calculele detaliate au fost definite în ELN şi Pascal, BD şi colab. (2012) Journal of the American Society for Mass Spectrometry 23(9):1512-1521). Prin urmare, orice peptidă care a prezentat valori procentuale de absorbţie de D peste 4,2% (de 3 ori din valoarea medie a SD) a fost definită ca fiind protejată semnificativ. Pentru hBCMA.hFc, peptidele corespunzătoare aminoacizilor 1-43 din SECV ID NR: 106 (MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSN-TPPLTCQRYCNA; SECV ID NR: 121) au fost protejate semnificativ de REGN5458. Protecţia acestor reziduuri prin REGN5458 a fost confirmată utilizând hBCMA.mmH (REGN2744, secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 106).
Tabelul 25: Peptide BCMA.hFc selectate cu protecţie semnificativă la legarea la REGN5458
BCMA Reziduuri 5 min 10 min -hFc REGN2746 REGN2746 + REGN5458 REGN2746 REGN2746 + REGN5458 Centroid MH+ Centroid MH+ ΔD Centroid MH+ Centroid MH+ ΔD Δ%D 1‑28 4‑26 3217.16 2582.03 3212.39 2577.26 ‑4.77 ‑4.77 3218.05 2582.71 3212.62 2577.45 ‑5.43 ‑5.26 ‑25.2 ‑31 27‑43 1921.75 1920.69 ‑1.06 1922.1 1920.83 ‑1.27 ‑11.1
Exemplul 18: Testul de legare FACS a anticorpilor bispecifici BCMAxCD3 şi a anticorpilor BCMA suplimentari pe linii celulare de mielom multiplu după incubarea peste noapte cu anticorpi anti-BCMA
Analiza citometrică în flux a fost utilizată pentru a determina impactul incubării peste noapte a liniilor celulare de mielom multiplu cu anticorpi anti-BCMA asupra nivelului BCMA de suprafaţă. Liniile celulare MM (H929, Molp8, U266 şi MM1. S) au fost spălate de două ori şi cultivate la 37°C în mediu R10 (RPMI+10% FBS+pen/strep/glut) care conţine 66,7 sau 667 nM anticorpi anti-BCMA, DAPT (un inhibitor de gamma-secretază) sau numai medii. După 18 ore, godeurile au fost spălate cu spălare FACS rece (PBS+1% FBS filtrat) şi resuspendate în 667 nM din acelaşi anticorp anti-BCMA în tampon de colorare rece (Miltenyi 130-091-221) timp de 30 de minute pe gheaţă. După incubare, celulele au fost spălate de două ori cu spălare FACS la rece (PBS + 1% FBS filtrat) şi anticorpul legat a fost detectat prin incubarea cu anticorpul secundar adecvat anti-uman (anti-hlgG sau anti-HIS) pe gheaţă pentru încă 30-45 de minute. După incubare, celulele au fost spălate, resuspendate în 200 µL PBS rece conţinând 1% FBS filtrat şi analizate prin citometrie în flux pe un BD FACS Canto II. Creşterea de ori a colorării a fost calculată prin împărţirea MFI a celulelor colorate incubate anterior peste noapte în BCMA abs sau DAPT de MFI a celulelor colorate care au fost incubate peste noapte numai în mediu.
BCMA este scindată rapid de la suprafaţa celulelor de către enzima gamma-secretaza. Incubarea peste noapte cu inhibitori ai gamma-secretazei, cum ar fi DAPT, previne scindarea BCMA, rezultând niveluri crescute de BCMA pe suprafaţa celulei. Tabelele 26-29 raportează creşterea de ori a intensităţii mediane a fluorescenţei (MFI) a BCMA pe celulele incubate peste noapte în anticorpi anti-BCMA sau DAPT în comparaţie cu celulele incubate numai în mediu. Am observat că incubarea peste noapte cu DAPT a crescut nivelurile de BCMA detectate de anticorpii anti-BCMA (BCMAxCD3 bispecific R5458, anticorpul parental BCMA mAb15281 şi alţi anticorpi BCMA interni) pe H929, Molp8, U266 şi MM.1S, de 2,3-4 ori. 2,4-8,6 ori, 5,3-9,0 ori, respectiv 11,9 ori.
De remarcat, am observat, de asemenea, că incubarea peste noapte a liniilor celulare MM cu 66,7 sau 667 nM REGN5458 sau anticorpul bivalent parental anti-BCMA mAb21581 a dus, în mod similar, la niveluri crescute de BCMA de suprafaţă detectate de FACS, sugerând că legarea anticorpilor anti-BCMA previne scindarea. a BCMA de către gama-secretază. Creşterile induse de anticorpi ale BCMA de suprafaţă au diferit în funcţie de linia celulară, cu creşteri mai mari de ori pe celulele Molp8 şi MM1S în comparaţie cu H929 sau U266. Fenomenul nu s-a limitat la REGN5458, deoarece a fost observat şi cu alţi anticorpi BCMA din casă.
Tabelul 26: schimbarea orificiului MFI asupra celulelor incubate numai în mediu (NCI-H929)
NCI-H929 67 nM 667 nM DAPT Medie n Medie n Medie n mAb21581 aBCMA (parent to R5458) 1.2 5 1.4 3 3.5 6 REGN5458 BCMAxCD3 2.0 3 3.0 1 4.0 3 mAb16749 aBCMA 1.0 2 0.8 1 2.3 3 mAb21581 aBCMA (parent to R5458) 1.2 5 1.4 3 3.5 6 mAb16711 aBCMA 2.8 2 2.1 1 3.8 3 mAb16747 aBCMA 1.8 2 2.1 1 3.9 3 REGN960 scFv IsoC 1.0 2 1.1 1 1.1 3 mAb11810 IgG1 IsoC 1.0 2 1.0 1 1.1 3 mAb11810 IgG4s IsoC 1.3 2 1.0 1 1.1 3
Tabelul 27: Schimbarea orificiului MFI asupra celulelor incubate numai în mediu (Molp8)
Molp8 67 nM 667 nM DAPT Medie n Medie n Medie n mAb21581 aBCMA (parent to R5458) 2.3 5 3.7 3 6.3 6 REGN5458 BCMAxCD3 2.3 3 4.5 1 8.6 3 mAb16749 aBCMA 1.1 2 3.4 1 4.0 3 mAb16711 aBCMA 3.5 2 3.0 1 5.1 3 mAb16747 aBCMA 2.2 2 0.6 1 6.2 3 REGN960 scFv IsoC 1.1 2 1.0 1 1.0 3 mAb11810 IgG1 IsoC 1.0 2 1.3 1 1.1 3 mAb11810 IgG4s IsoC 0.9 2 1.2 1 1.0 3
Tabelul 28: Schimbarea orificiului MFI asupra celulelor incubate numai în mediu (U266)
U266 67 nM 667 nM DAPT Medie n Medie n Medie n mAb21581 aBCMA (parent to R5458) 1.8 2 2.3 1 6.7 6 REGN5458 BCMAxCD3 1.4 2 2.3 1 9.0 3 mAb16749 aBCMA 1.3 2 1.2 1 5.3 3 mAb16711 aBCMA 2.2 2 2.2 1 7.2 3 mAb16747 aBCMA 1.5 2 1.7 1 8.3 3 REGN960 scFv IsoC 1.0 2 1.0 1 1.0 3 mAb11810 IgG1 IsoC 1.0 2 1.1 1 1.1 3 mAb11810 IgG4s IsoC 1.1 2 1.1 1 1.4 3
Tabelul 29: schimbarea orificiului MFI asupra celulelor incubate numai în mediu (MM1S)
MM1S 67 nM 667 nM DAPT Medie n Medie n Medie n mAb21581 aBCMA (parent to R5458) 7.3 2 7.0 2 11.9 2
Exemplul 19: Uciderea mediată de celule T autologe a celulelor plasmatice umane şi de maimuţă Cynomolgus în prezenţa anticorpilor bispecifici BCMAxCD3
Uciderea specifică a celulelor plasmatice umane CD138+ îmbogăţite sau de maimuţă cynomolgus de către celulele T autologe nestimulate a fost evaluată prin citometrie în flux. Aspirate de măduvă osoasă umană sau cynomolgus şi sânge au fost furnizate în 24 de ore de la recoltare. Celulele plasmatice CD138+ au fost îmbogăţite din măduva osoasă prin selecţie pozitivă folosind kitul EasySep Human CD138+ Positive Selection conform instrucţiunilor producătorului. PBMC din sângele integral au fost izolate prin separare prin densitate. PBMC au fost marcate cu 1 pM de colorant de urmărire fluorescent Vybrant CFDA-SE. După etichetare, celulele plasmatice CD138+ îmbogăţite cu 1 × 104 au fost placate în plăci cu 96 de godeuri cu fund rotund, la un raport E:T de 10:1 cu PBMC marcat cu Vybrant CFDA-SE şi diluţii în serie de REGN5458, CD3-binding sau control BSBCMAb -mAb de controlul legării timp de 72 ore la 37°C în mediu complet. La sfârşitul culturii, celulele plasmatice CD138+ supravieţuitoare au fost analizate prin citometrie în flux, utilizând colorant LIVE/DEAD fixabil şi markeri de suprafaţă celular specifici celulelor plasmatice. Viabilitatea procentuală a fost normalizată la starea de control (celule plasmatice numai în prezenţa PBMC). Activarea celulelor T a fost evaluată prin citometrie în flux. Activarea este raportată ca procent de celule T CD2+/CD4+ sau CD2+/CD8+/CD16- care exprimă CD25. Procentul de activare a celulelor T a fost normalizat pentru a controla starea (celule plasmatice numai în prezenţa PBMC).
Studiile in vitro au evaluat efectul REGN5458 sau al martorilor negativi (mAb de controlul legării la BCMA sau bsAb de controlul legării CD3) asupra activării celulelor T primare umane şi de maimuţă cynomolgus şi citotoxicităţii celulelor plasmatice autologe. Valorile EC50 pentru citotoxicitate şi procentul de activare a celulelor T pentru fiecare donor sunt rezumate în Tabelul 30.
REGN5458 a mediat citotoxicitatea celulelor plasmatice umane primare de la donatorii 1 şi 2 în prezenţa celulelor T autologe într-o manieră dependentă de concentraţie cu valori EC50 de 42,8 pM şi, respectiv, 191 pM şi a dus la un procent maxim de citotoxicitate de 91% şi 89%, respectiv. În paralel, REGN5458 a mediat activarea celulelor T în prezenţa celulelor plasmatice umane de la donatorii 1 şi 2 într-o manieră dependentă de concentraţie, cu valori EC50 de 214pM şi 860pM pentru activarea celulelor T CD8+, respectiv, şi procentul maxim de activare a celulelor T CD8+ % şi, respectiv, 36%. Citotoxicitatea celulelor plasmatice la ambii donatori şi creşterea activării celulelor T CD8+ la donatorul 2 a fost observată numai la concentraţii nanomolare ale controlului de legare a CD3. Nu s-a observat niciun efect asupra citotoxicităţii sau activării celulelor T cu controlul de legare a BCMA la oricare dintre concentraţiile testate la oricare donator.
Citotoxicitatea mediată de REGN5458 a celulelor plasmatice primare cynomolgus la ambii donatori într-o manieră dependentă de concentraţie; a fost calculat un EC50 de 1,31 nM pentru donatorul 1, cu toate acestea un EC50 nu a putut fi determinat pentru donatorul 2. La ambii donatori, tratamentul cu REGN5458 a dus la o citotoxicitate crescută a celulelor plasmatice (procentul maxim de citotoxicitate de 94% şi 91% pentru donatorii 1 şi, respectiv, 2). În paralel, REGN5458 a mediat activarea celulelor T în prezenţa celulelor plasmatice de maimuţă cynomolgus de la donatorii 1 şi 2, într-o manieră dependentă de concentraţie, cu valori EC50 de 28,1 nM şi 18,1 nM pentru activarea celulelor T CD4+ şi 22,4 nM şi 22,4nM pentru CD4+76. activare celulară, respectiv. Procentul maxim rezultat de activare a celulelor T a fost de 9% şi 16% pentru celulele T CD4+ şi de 12% şi 17% celulele T CD8+ pentru donatorii 1 şi, respectiv, 2.
Nu a fost observată distrugerea celulelor ţintă cu controlul de legare a BCMA la orice concentraţie testată în oricare dintre liniile celulare evaluate. O anumită ucidere a celulelor ţintă şi activare a celulelor T în prezenţa celulelor plasmatice de la donatorul 2 a fost observată cu controlul legării CD3 la concentraţii nanomolare.
Tabelul 30: Valorile EC50 pentru citotoxicitate şi procentul de activare a celulelor T pentru fiecare donator
Linii celulare Uciderea citotoxică Activarea celulelor T (% CD25 Upregulation) CD4+ T celule CD8+ T celule Celule efectoare Celule ţintă EC50 (M) Citotoxicitate Max % EC50 (M) % Activare EC50 (M) % Activare Celule T umane primarea Celule plasmatice ale donatorului uman 1 4.28×10‑11 91 NR NR 214×10‑10 2 Celule plasmatice ale donatorului uman 2 1.91×10‑10 89 NR NR 8.60×10‑10 36 Celule T primare de maimuţă Cynomolgusa Celule plamatice ale donatorului maimuţă Cynomologus 1 1.31×109 94 2.81×10‑8 9 224×10‑8 12 Celule plamatice ale donatorului maimuţă Cynomologus 2 ND 91 ~1.81×10‑8 16 7.67×10‑8 17 a Celule plasmatice autologe au fost testate pentru fiecare donator.
Exemplul 20: Anticorpii bispecifici anti-BCMA × Anti-CD3 acţionează sinergic cu anticorpii anti-PD-1 pentru a spori eficacitatea anti-tumorală In Vivo
Pentru a determina dacă anticorpii bispecifici (Abs) BCMAxCD3 se sinergizează cu blocarea PD-1 pentru a oferi o eficacitate anti-tumorală superioară in vivo, a fost efectuat un studiu tumoral singenic la şoareci care exprimă CD3 uman. Rezultatele demonstrează că combinarea REGN5458 plus blocarea PD-1 oferă o eficacitate antitumorală superioară decât blocarea REGN5458 sau PD-1 în monoterapie.
Implantarea şi măsurarea tumorilor singenice: şoarecii C57BL/6 care exprimă CD3deg uman în loc de CD3deg murin (şoareci umanizaţi CD3) au fost implantaţi subcutanat cu 1 × 106 MC38 celule de carcinom de colon care au fost proiectaţi pentru a exprima BCMA uman de lungime completă (MC38/BCMA). Tumorile au fost lăsate să se stabilească timp de 3 zile, moment în care şoarecilor (n=6 sau 7 per grup) li s-a administrat un Ab bispecific de control care leagă CD3 (G; H4sH17664D) la o doză de 0,4 mg/kg sau un BCMAxCD3 (G; REGN5458) Ab bispecific la doze de 0,04 mg/kg sau 0,24 mg/kg, împreună cu fie un anticorp surogat anti-şoarece PD-1 (Clone RPM1-14) la 4 mg/kg sau un izotip de control Ab (Clone 2A3) la 4 mg/kg. Grupele de tratament specifice sunt prezentate în Tabelul 31 de mai jos.
Tabelul 31: Grupuri de tratament
Grup Treatment Bispecific Anticorp n 1 H4SH17664D (0.24 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 7 2 H4SH17664D (0.24 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 7 3 REGN5458 (0.04 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 7 4 REGN5458 (0.04 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 7 5 REGN5458 (0.24 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 6 6 REGN5458 (0.24 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 6
Şoarecilor li s-au administrat aceste Abs de încă două ori în zilele 7 şi 11 pentru un total de trei doze, iar creşterea tumorii a fost evaluată pe tot parcursul experimentului.
Calculul creşterii şi inhibării tumorii singenice: Pentru a determina volumul tumorii prin şubler extern, s-au determinat cel mai mare diametru longitudinal (lungime în mm) şi cel mai mare diametru transversal (lăţime în mm). Volumele tumorii bazate pe măsurătorile şubler au fost calculate prin formula: Volumul (mm3) = (lungime × lăţime2)/2.
Rezultatele demonstrează că combinarea REGN5458 plus blocarea PD-1 oferă o eficacitate antitumorală superioară decât blocarea REGN5458 sau PD-1 în monoterapie. În special, rezultatele demonstrează că în ziua 24 (ultima zi pentru care au fost colectate date pentru toate grupurile de tratament) combinaţia de anticorp bispecific BCMAxCD3 şi anticorp anti-PD-1 a produs un efect terapeutic sinergic semnificativ statistic în inhibarea creşterii tumorii. (Tabelul 32, BCMAxCD3 la 0,04 mg/kg şi anti-PD-1 la 4 mg/kg). Folosind un test ANOVA cu două căi în ziua 24, p<0,0001 între (i) REGN5458 (0,04 mg/kg) + izotip şi combinaţia de REGN5458 (0,04 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupul 3 vs. Grupa 4), (ii) REGN5458 (0,24 mg/kg) + Izotip şi combinaţia de REGN5458 (0,24 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupa 5 vs. Grupa 6), (iii) anti-PD-1 şi combinaţia de REGN5458 (0,04 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupa 2 vs. Grupa 6). Folosind un test ANOVA cu două căi în ziua 24, p=0,0005 între anti-PD-1 şi combinaţia de REGN5458 (0,04 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupul 2 vs. Grupa 4). Creşterea dozei de anticorp bispecific BCMAxCD3 (0,24 mg/kg) în combinaţie cu blocarea PD-1 a dus la inhibarea tumorii comparabilă cu doza mai mică de anticorp bispecific plus blocarea PD-1 în acest experiment. Sinergia demonstrată cu anticorpul bispecific cu doză mai mică este avantajoasă deoarece utilizarea unei doze mai mici reduce riscul oricăror efecte secundare adverse. În mod similar, combinaţia de anticorp bispecific BCMAxCD3 şi anticorp anti-PD-1 a arătat un efect terapeutic sinergic la ambele doze de anticorp bispecific (0,04 mg/kg şi 0,24 mg/kg) în numărul de şoareci fără tumori la sfârşitul experiment (ziua 28), aşa cum se arată în Tabelul 33.
Tabelul 32: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 3 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 16.30 ± 1.50 n=7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 14.34 ± 1.17 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 15.62 ± 1.61 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 19.20 ± 2.94 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 13.13 ± 3.12 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 20.41 ± 3.15 n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 55.78 ± 6.61 n=7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 43.59 ± 8.32 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 37.98 ± 3.93 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 30.30 ± 6.47 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 29.27 ± 5.00 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) 29.18 ± 3.65 + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 11 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 145.74 ± 21.37 n=7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 45.33 ± 11.46 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 112.53 ± 17.39 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 8.81 ± 0.88 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 36.63 ± 14.89 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 12.99 ± 4.35 n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 14 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 414.28 ± 46.72 n=7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 49.50 ± 17.02 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 438.16 ± 59.56 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 6.86 ± 3.90 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 224.33 ± 47.04 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 22.75 ± 17.62 n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 18 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1035.43 ± 123.41 n=6 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 100.83 ± 41.62 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1040.12 ± 61.95 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 7.81 ± 7.81 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 515.15 ± 115.38 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 57.79 ± 43.62 n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 21 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) 1834.87 ± 639.56 + Izotip (4 mg/kg) n=2 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 208.29 ± 91.80 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 2133.12 ± 129.26 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 21.13 ± 21.13 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1225.47 ± 289.39 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 113.69 ± 85.39 n=6 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 24 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 2358.81 ± 0.00 n=1 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 534.03 ± 205.49 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 3648.37 ± 536.71 n=3 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 53.52 ± 53.52 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1493.26 ± 973.01 n=2 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 54.29 ± 54.29 n=5 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii (mm3) ± SEM în ziua 28 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) Toate animalele eutanasiate n=0 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + PD‑1- blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 1196.57 ± 467.34 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) Toate animalele eutanasiate n=0 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 141.68 ± 141.68 n=7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1371.17 ± 0.00 n=1 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 104.44 ± 104.44 n=5 Tratament cu anticorpi Numărul de şoareci fără tumori la sfârşitul experimentului (ziua 28) CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 0 of 7 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.24 mg/kg) 2 of 7 + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 0 of 7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 6 of 7 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 0 of 6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.24 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 4 of 6
Exemplul 21: Anticorpii bispecifici anti-BCMA × Anti-CD3 acţionează sinergic cu anticorpii anti-PD-1 pentru a spori eficacitatea anti-tumorală In Vivo
Rezultate similare au fost obţinute într-un al doilea experiment, identic cu cel discutat mai sus în Exemplul 20, cu excepţia faptului că numărul de şoareci per grup = 10, iar doza mai mare de BCMAxCD3 REGN5458 a fost de 0,4 mg/kg. Grupele de tratament specifice pentru al doilea experiment sunt prezentate în Tabelul 34 de mai jos.
Tabelul 34: Grupuri de tratament
Grup Treatment Bispecific Anticorp n 1 H4SH17664D (0.4 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 10 2 H4SH17664D (0.4 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 10 3 REGN5458 (0.04 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 10 4 REGN5458 (0.04 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 10 5 REGN5458 (0.4 mg/kg) Izotip (4 mg/kg) 10 6 REGN5458 (0.4 mg/kg) RPM1‑14 (4 mg/kg) 10
Rezultatele demonstrează că combinarea REGN5458 plus blocarea PD-1 oferă o eficacitate antitumorală superioară decât blocarea REGN5458 sau PD-1 în monoterapie. În special, rezultatele demonstrează că în ziua 21 (ultima zi pentru care au fost colectate date pentru toate grupurile de tratament) combinaţia de anticorp bispecific BCMAxCD3 şi anticorp anti-PD-1 a produs un efect terapeutic sinergic în inhibarea creşterii tumorii (Tabelul 35, BCMAxCD3 la 0,04 mg/kg şi anti-PD-1 la 4 mg/kg). Folosind un test ANOVA cu două căi în ziua 21, p<0,0001 între (i) REGN5458 (0,04 mg/kg) + izotip şi combinaţia de REGN5458 (0,04 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupul 3 vs. Grupa 4), (ii) anti-PD-1 şi combinaţia de REGN5458 (0,04 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupa 2 vs. Grupa 4), (iii) anti-PD-1 şi combinaţia de REGN5458 (0,4 mg/kg) + anticorp anti-PD-1 (Grupa 2 vs. Grupa 6). Aşa cum sa discutat mai sus în Exemplul 20, creşterea dozei de anticorp bispecific BCMAxCD3 (0,4 mg/kg) în combinaţie cu blocarea PD-1 a dus la inhibarea tumorii comparabilă cu doza mai mică de anticorp bispecific combinată cu blocarea PD-1 în acest experiment. Sinergia demonstrată cu anticorpul bispecific cu doză mai mică este avantajoasă deoarece utilizarea unei doze mai mici reduce riscul oricăror efecte secundare adverse. În mod similar, combinaţia de anticorp bispecific BCMAxCD3 şi anticorp anti-PD-1 a arătat un efect terapeutic sinergic la ambele doze de anticorp bispecific (0,04 mg/kg şi 0,4 mg/kg) în numărul de şoareci fără tumori la sfârşitul experiment (ziua 25), aşa cum se arată în Tabelul 36.
Tabelul 35: Dimensiunea medie a tumorii la diferite momente
Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua3 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 9.85 ± 0.61 n=10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 13.44 ± 1.44 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 12.41 ± 2.56 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 9.73 ± 1.25 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 11.22 ± 0.68 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 9.59 ± 1.78 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua6 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 40.43 ± 4.07 n=10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 44.52 ± 2.80 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 38.79 ± 3.52 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 36.42 ± 3.51 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 16.11 ± 1.27 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 24.34 ± 1.86 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 149.41 ± 17.08 n=10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 107.34 ± 13.73 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 116.32 ± 19.99 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 23.48 ± 3.24 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) 24.27 ± 6.74 + Izotip (4 mg/kg) n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 3.60 ± 1.92 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua13 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 386.55 ± 48.49 n=10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 186.87 ± 41.06 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 319.91 ± 53.05 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 10.60 ± 2.34 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 50.93 ± 20.00 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 0.74 ± 0.74 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua18 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1809.29 ± 242.64 n=9 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 688.52 ± 152.20 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 1314.27 ± 211.22 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 6.28 ± 4.55 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 248.51 ± 107.21 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 3.93 ± 2.67 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua21 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 3094.87 ± 482.38 n=8 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 1425.22 ± 338.49 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 2446.35 ± 395.48 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 15.03 ± 10.35 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 453.43 ± 174.75 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 9.34 ± 7.59 n=10 Tratament cu anticorpi Dimensiunea medie a tumorii ± SEM în ziua25 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) Animale eutanasiate n=0 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 1918.27 ± 571.19 n=6 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 2411.64 ± 451.96 n=3 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 38.96 ± 21.47 n=10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 661.70 ± 331.60 n=8 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocking RPM1‑14 (4 mg/kg) 32.02 ± 24.67 n=10
Tabelul 36: Şoareci fără tumori la sfârşitul experimentului
Tratament cu anticorpi Numărul de şoareci fără tumori la sfârşitul experimentului (ziua 25) CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 0 of 10 CD3-controlul legării H4SH17664D (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 1 of 10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 0 of 10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.04 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 7 of 10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + Izotip (4 mg/kg) 2 of 10 BCMAxCD3 REGN5458 (0.4 mg/kg) + PD‑1-blocare RPM1‑14 (4 mg/kg) 8 of 10

Claims (18)

1. O moleculă bispecifică izolată de legare a antigenului, care cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care leagă în mod specific un antigen de maturare a celulelor B umane (BCMA) care cuprinde domenii HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 68, 70, 72 şi LCDR1 Domeniile ,LCDR2, respectiv LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care leagă în mod specific CD3 uman care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 92, 94, 96 şi, respectiv, domeniile LCDR1, LCDR2, LCDR3 , cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88.
2. O moleculă bispecifică izolată de legare a antigenului, care cuprinde: (a) un prim domeniu de legare a antigenului care leagă în mod specific un antigen de maturare a celulelor B umane (BCMA) care cuprinde domenii HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SEQ ID NR: 68, 70, 72 şi LCDR1 Domeniile ,LCDR2, respectiv LCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88; şi (b) un al doilea domeniu de legare la antigen care leagă în mod specific CD3 uman care cuprinde domeniile HCDR1, HCDR2, respectiv HCDR3, cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 100, 102, 104 şi, respectiv, domeniile LCDR1, LCDR2, LCDR3 , cuprinzând secvenţele de aminoacizi ale SECV ID NR: 84, 86, 88.
3. Moleculă bispecifică izolată de legare a antigenului conform revendicării 1, în care: (a) primul domeniu de legare la antigen cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) al doilea domeniu de legare la antigen cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 90 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
4. Moleculă bispecifică izolată de legare a antigenului conform revendicării 2, în care: (a) primul domeniu de legare la antigen cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 66 şi un LCVR cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82; şi (b) al doilea domeniu de legare la antigen cuprinde un HCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 98 şi un LCVR care cuprinde secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 82.
5. Moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform oricăreia dintre revendicările 1-4, care este un anticorp bispecific.
6. Moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform revendicării 5 în care: (a) anticorpul bispecific cuprinde o regiune constantă a lanţului greu IgG uman de izotip IgG1 sau IgG4; şi/sau (b) anticorpul bispecific cuprinde o balama himerica care reduce legarea receptorului Fcy în raport cu o balama de tip sălbatic de acelaşi izotip.
7. O compoziţie farmaceutică care cuprinde molecula bispecifică de legare a antigenului conform oricăreia dintre revendicările 1-6, şi un purtător sau diluant acceptabil farmaceutic.
8. O Moleculă de acid nucleic care cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică o moleculă bispecifică de legare a antigenului conform oricăreia dintre revendicările 1-6.
9. Un vector de expresie care cuprinde molecula de acid nucleic conform revendicării 8.
10. O celulă gazdă care cuprinde vectorul de expresie conform revendicării 9.
11. O moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform oricăreia dintre revendicările 1-6, sau o compoziţie farmaceutică conform revendicării 7 pentru utilizare într-o metodă de inhibare a creşterii unei tumori cu celule plasmatice la un subiect.
12. O moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform oricăreia dintre revendicările 1-6 sau o compoziţie farmaceutică conform revendicării 7 pentru utilizare într-o metodă de tratare a mielomului multiplu sau a unei alte malignităţi ale celulelor B care exprimă BCMA.
13. Moleculă izolată de legare a antigenului bispecific sau compoziţia farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 12, în care malignitatea celulelor B care exprimă BCMA este selectată din grupul constând din macroglobulinemie Waldenström, limfom Burkitt, limfom difuz cu celule B mari, limfom non-Hodgkin, leucemie limfocitară cronică, limfom folicular, celule de manta limfom, limfom din zonă marginală, limfom limfoplasmocitar şi limfom Hodgkin.
14. Molecula bispecifică de legare a antigenului sau compoziţia farmaceutică izolată pentru utilizare conform revendicării 11, 12 sau revendicarea 13, în care molecula sau compoziţia farmaceutică bispecifică izolată de legare a antigenului trebuie să fie administrată în combinaţie cu un al doilea agent terapeutic sau terapie.
15. Moleculă bispecifică izolată de legare a antigenului sau compoziţie farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 14, în care al doilea agent terapeutic sau terapie cuprinde un medicament chimioterapeutic, alchilatori ADN, imunomodulatori, inhibitori de proteazom, inhibitori de histon deacetilază, radioterapie, un transplant de celule stem, un alt anticorp bispecific care interacţionează cu un alt antigen de suprafaţă a celulei tumorale şi o celulă T sau o celulă imună antigen, un conjugat de medicament cu anticorpi, un anticorp bispecific conjugat la un agent anti-tumoral, un inhibitor al punctului de control PD-1, PD-L1 sau CTLA-4 sau combinaţii ale acestora.
16. O moleculă izolată de legare a antigenului bispecific conform oricăreia dintre revendicările 1-6, sau o compoziţie farmaceutică conform revendicării 7 pentru utilizare într-o metodă de tratare a unei tumori care exprimă BCMA, în care molecula bispecifică izolată de legare a antigenului sau compoziţia farmaceutică, trebuie să fie administrat subiectului în combinaţie cu un anticorp anti-PD-1 sau cu un fragment de legare la antigen al acestuia.
17. Moleculă de legare la antigen bispecifică izolată sau compoziţie farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 16, în care anticorpul anti-PD-1 sau fragmentul de legare la antigen este un anticorp anti-PD-1.
18. Moleculă izolată de legare a antigenului bispecific sau compoziţia farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 17, în care anticorpul anti-PD-1 este cemiplimab (REGN2810).
MDE20210483T 2018-07-19 2019-07-18 Anticorpi anti-BCMA x anti-CD3 bispecifici și utilizările acestora MD3823664T2 (ro)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862700596P 2018-07-19 2018-07-19
US201862750968P 2018-10-26 2018-10-26
US201962793645P 2019-01-17 2019-01-17
PCT/US2019/042447 WO2020018820A1 (en) 2018-07-19 2019-07-18 BISPECIFIC ANTI-BCMA x ANTI-CD3 ANTIBODIES AND USES THEREOF

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD3823664T2 true MD3823664T2 (ro) 2025-06-30

Family

ID=67515169

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20210483T MD3823664T2 (ro) 2018-07-19 2019-07-18 Anticorpi anti-BCMA x anti-CD3 bispecifici și utilizările acestora

Country Status (33)

Country Link
US (3) US11384153B2 (ro)
EP (2) EP4516810A3 (ro)
JP (2) JP7319348B2 (ro)
KR (1) KR20210034032A (ro)
CN (1) CN112423785B (ro)
AU (1) AU2019307928B2 (ro)
BR (1) BR112021000186A2 (ro)
CL (1) CL2021000131A1 (ro)
CO (1) CO2021000188A2 (ro)
DK (1) DK3823664T3 (ro)
ES (1) ES3010285T3 (ro)
FI (2) FI3823664T3 (ro)
FR (1) FR25C1029I1 (ro)
HR (1) HRP20250199T1 (ro)
HU (2) HUE070224T2 (ro)
IL (1) IL279974B2 (ro)
LT (2) LT3823664T (ro)
MA (1) MA53168B1 (ro)
MD (1) MD3823664T2 (ro)
MX (2) MX2021000488A (ro)
MY (1) MY201816A (ro)
NL (1) NL301335I2 (ro)
NO (1) NO2025036I1 (ro)
PH (1) PH12021550031A1 (ro)
PL (1) PL3823664T3 (ro)
PT (1) PT3823664T (ro)
RS (1) RS66535B1 (ro)
SG (1) SG11202100252SA (ro)
SI (1) SI3823664T1 (ro)
SM (1) SMT202500044T1 (ro)
TW (1) TWI838389B (ro)
WO (1) WO2020018820A1 (ro)
ZA (1) ZA202100087B (ro)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018102546A1 (en) 2016-11-30 2018-06-07 The Jackson Laboratory Humanized mouse model with improved human innate immune cell development
KR20250016462A (ko) 2016-12-21 2025-02-03 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
US10793624B2 (en) 2017-06-01 2020-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to Bet v 1 and methods of use thereof
MA69412B1 (fr) 2018-07-19 2025-12-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Récepteurs antigéniques chimériques présentant une spécificité pour bcma et leurs utilisations
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途
CA3132587A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of il-4/il-13 pathway inhibitors and plasma cell ablation for treating allergy
HRP20241281T1 (hr) 2019-11-11 2024-12-06 Amgen Research (Munich) Gmbh Režim doziranja anti-bcma sredstava
EP4069373A1 (en) 2019-12-06 2022-10-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies
TW202144425A (zh) * 2020-04-17 2021-12-01 大陸商上海翰森生物醫藥科技有限公司 特異性抗原結合分子，其製備方法及醫藥用途
US20230322953A1 (en) * 2020-06-30 2023-10-12 Harbour Biomed (Shanghai) Co., Ltd Binding protein having h2l2 and hcab structures
JP2023531968A (ja) 2020-07-01 2023-07-26 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｂｅｔ ｖ １抗体を使用してアレルギーを治療する方法
US20230340137A1 (en) * 2020-09-14 2023-10-26 Pfizer Inc. Methods, therapies and uses for treating cancer
JP7828349B2 (ja) 2020-09-16 2026-03-11 アムジェン インコーポレイテッド 癌の治療のために二重特異性ｔ細胞誘導分子の治療用量を投与する方法
IL301037A (en) 2020-09-18 2023-05-01 Regeneron Pharma Antigen binding molecules that bind CD38 and/or CD28 and uses thereof
CN118878693A (zh) * 2020-11-23 2024-11-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
CN114573703A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种t细胞衔接器治疗剂的开发和应用
PH12023500013A1 (en) 2020-12-04 2024-03-11 Tidal Therapeutics Inc Ionizable cationic lipids and lipi nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
CN116917333A (zh) * 2021-01-20 2023-10-20 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合bcma和cd3的抗原结合分子及其医药用途
DK4284512T3 (da) 2021-01-28 2025-05-26 Regeneron Pharma Sammensætninger og fremgangsmåder til behandling af cytokinfrigivelsessyndrom
CN120424235A (zh) * 2021-08-30 2025-08-05 上海君赛生物科技有限公司 含有膜表面结构域的多肽及其用途
CN118696058A (zh) 2021-12-03 2024-09-24 山东先声生物制药有限公司 抗bcma纳米抗体及其应用
EP4453222A4 (en) * 2021-12-22 2025-12-17 Jackson Lab HUMANIZED MOUSE MODELS
AU2023254191A1 (en) 2022-04-11 2024-10-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for universal tumor cell killing
CN117003871A (zh) 2022-04-28 2023-11-07 北京天广实生物技术股份有限公司 结合bcma和cd3的抗体及其用途
CA3252182A1 (en) 2022-05-18 2023-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. MULTISPECIFIC ANTIGEN-BINDING MOLECULES THAT BIND TO CD38 AND 4-1BB AND ASSOCIATED USES
TW202411253A (zh) 2022-06-06 2024-03-16 大陸商山東先聲生物製藥有限公司 靶向bcma、gprc5d和t細胞的多特異性抗體及其應用
WO2023240156A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
CN115368466A (zh) * 2022-07-19 2022-11-22 合肥天港免疫药物有限公司 双特异性抗体及其应用
WO2024081180A1 (en) 2022-10-10 2024-04-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing alloantibody levels in subjects in need of solid organ transplantation
CN117126280B (zh) * 2022-12-06 2024-03-29 成都赛恩吉诺生物科技有限公司 具有亲水性氨基酸残基的抗人bcma纳米抗体及car-t和应用
KR20250151441A (ko) 2023-02-17 2025-10-21 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Cd3/taa 이중특이적 항체에 대해 반응성인 유도된 nk 세포
CN121666232A (zh) 2023-05-31 2026-03-13 开普斯坦治疗公司 脂质纳米颗粒制剂和组合物
TW202502826A (zh) 2023-06-06 2025-01-16 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 抗ｇｐｒｃ５ｄ／ｂｃｍａ／ｃｄ３三特異性抗體的製備及其用途
TW202517293A (zh) 2023-07-07 2025-05-01 美商再生元醫藥公司 含有抗bcmax抗cd3雙特異性抗體之穩定化配製物
WO2025059362A1 (en) 2023-09-13 2025-03-20 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapies with a cell therapy expressing a gprc5d-targeting car and related methods and uses
WO2025076113A1 (en) 2023-10-05 2025-04-10 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids with conserved spacing and lipid nanoparticles
US20250127728A1 (en) 2023-10-05 2025-04-24 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained Ionizable Cationic Lipids and Lipid Nanoparticles
WO2025131075A1 (zh) * 2023-12-21 2025-06-26 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗cd3和抗cd3多特异性抗体及用途
TW202540428A (zh) 2024-01-26 2025-10-16 美商雷傑納榮製藥公司 使用漿細胞耗乏劑及／或ｂ細胞耗乏劑遏制宿主抗ａａｖ抗體反應且實現ａａｖ轉導及重複給藥的方法及組成物
WO2025160340A2 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination immunosuppression for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration
WO2025174825A2 (en) 2024-02-12 2025-08-21 Aera Therapeutics, Inc. Delivery compositions
US20250276092A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for re-dosing aav using anti-cd40 antagonistic antibody to suppress host anti-aav antibody response
WO2025189064A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Genzyme Corporation Lipid nanoparticles
WO2025217452A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
WO2025217454A2 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
WO2025240287A1 (en) 2024-05-13 2025-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating light chain amyloidosis with bispecific bcma x cd3 antibodies
WO2025244973A1 (en) 2024-05-20 2025-11-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bispecific bcma x cd3 antibodies
WO2026006495A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Alloy Therapeutics, Inc. Anti-wt1/hla-a2 antibody and uses thereof
WO2026006492A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Ypsilon Therapeutics, Inc. Anti-prame/hla-a2 antibodies and uses thereof
US20260014252A1 (en) 2024-07-11 2026-01-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. GPRC5D x CD28 Bispecific Antibodies and Methods of Use Thereof
US20260070998A1 (en) 2024-09-10 2026-03-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bcma inhibitors in combination with cd38 inhibitors
WO2026059920A1 (en) 2024-09-10 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bcma inhibitors in combination with pd1/pd-l1 inhibitors
WO2026059923A1 (en) 2024-09-10 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bcma inhibitors in combination with an immunomodulator
WO2026059917A1 (en) 2024-09-10 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bcma inhibitors in combination with proteasome inhibitors
WO2026059921A1 (en) 2024-09-10 2026-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bcma inhibitors in combination with lag3 inhibitors

Family Cites Families (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1806143B1 (en) 1999-08-17 2016-06-15 Biogen MA Inc. Baff receptor (BCMA), an immunoregulatory agent
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
AU2002248184C1 (en) 2000-12-12 2018-01-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
DE10206325A1 (de) 2002-02-14 2003-09-04 Medinnova Ges Med Innovationen Ummantelter Mikroorganismus
US7261893B2 (en) 2002-10-22 2007-08-28 Wyeth Neutralizing antibodies against GDF-8 and uses therefor
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
TW200732350A (en) 2005-10-21 2007-09-01 Amgen Inc Methods for generating monovalent IgG
DK2374818T3 (da) 2006-06-02 2013-01-21 Regeneron Pharma Højaffinitetsantistoffer mod human IL-6-receptor
HRP20161194T1 (hr) 2009-03-10 2016-11-04 Biogen Ma Inc. Anti-bcma protutijela
RU2522002C2 (ru) 2009-06-26 2014-07-10 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Легковыделяемые биспецифические антитела с природным иммуноглобулиновым форматом
MX2012009168A (es) 2010-02-08 2012-08-31 Regeneron Pharma Raton de cadena ligera comun.
TWI667346B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的FcRn親和力之抗體
US20130273055A1 (en) 2010-11-16 2013-10-17 Eric Borges Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
MX349057B (es) 2010-11-30 2017-07-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico que induce citotoxicidad.
FI3415531T3 (fi) 2011-05-27 2023-09-07 Glaxo Group Ltd Bcma:aa (cd269/tnfrsf17) sitovia proteiineja
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
KR20240136359A (ko) 2012-04-11 2024-09-13 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 B-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체
JOP20200236A1 (ar) * 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
ES2937015T3 (es) 2012-11-01 2023-03-23 Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft Anticuerpo contra CD269 (BCMA)
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
US9243058B2 (en) 2012-12-07 2016-01-26 Amgen, Inc. BCMA antigen binding proteins
TWI682941B (zh) 2013-02-01 2020-01-21 美商再生元醫藥公司 含嵌合恆定區之抗體
EP2953972B1 (en) 2013-02-05 2020-07-08 EngMab Sàrl Method for the selection of antibodies against bcma
EP2762497A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
EP2762496A1 (en) 2013-02-05 2014-08-06 EngMab AG Method for the selection of antibodies against BCMA
AR095374A1 (es) 2013-03-15 2015-10-14 Amgen Res Munich Gmbh Moléculas de unión para bcma y cd3
GB201317929D0 (en) 2013-10-10 2013-11-27 Ucl Business Plc Chimeric antigen receptor
US20180112384A1 (en) 2013-12-30 2018-04-26 Craig Rothleitner Drainage treatment system
KR102405492B1 (ko) 2014-04-30 2022-06-03 막스-델부뤽-센트럼 퓌어 몰레쿨라레 메디친 인 데어 헬 름홀츠-게마인샤프트 Ｃｄ269에 대한 인간화 항체
RU2747457C2 (ru) 2014-07-24 2021-05-05 Блубёрд Био, Инк. Химерные антигенные рецепторы к bcma
EP2982692A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
CN107207609B (zh) 2014-11-20 2022-07-19 豪夫迈·罗氏有限公司 共同轻链和使用方法
EP3029068A1 (en) 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
SMT202100221T1 (it) 2014-12-05 2021-07-12 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticorpi bersaglianti l'antigene di maturazione delle cellule e metodi d'uso
MY191537A (en) 2014-12-05 2022-06-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof
PL3230321T3 (pl) 2014-12-12 2020-03-31 Bluebird Bio, Inc. Chimeryczne receptory antygenowe bcma
KR102208443B1 (ko) 2015-04-13 2021-01-27 화이자 인코포레이티드 B-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체
PT3283106T (pt) 2015-04-13 2022-02-02 Pfizer Anticorpos terapêuticos e as suas utilizações
US10906982B2 (en) 2015-05-15 2021-02-02 The General Hospital Corporation Antagonistic anti-tumor necrosis factor receptor 2 antibodies
JOP20160154B1 (ar) 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
PE20180795A1 (es) * 2015-08-17 2018-05-09 Janssen Pharmaceutica Nv Anticuerpos anti-bcma, moleculas de union a antigenos biespecificas que se unen a bcma y cd3, y uso de estos
LT3353212T (lt) * 2015-09-23 2021-12-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimizuoti anti-cd3 bispecifiniai antikūnai ir jų naudojimas
JP6901493B2 (ja) 2015-11-13 2021-07-14 アメリカ合衆国 抗ｂｃｍａポリペプチド及びタンパク質
BR112018011228A2 (pt) 2015-12-01 2019-01-15 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited tratamentos de combinação e seus usos e métodos
JOP20170017B1 (ar) 2016-01-25 2021-08-17 Amgen Res Munich Gmbh تركيب صيدلي يتضمن تركيبات جسم مضاد ثنائي الاختصاص
PT3411402T (pt) 2016-02-03 2022-02-01 Amgen Inc Construtos de anticorpos biespecíficos engajadores de células t contra bcma e cd3
JP7152309B2 (ja) 2016-02-17 2022-10-12 シージェン インコーポレイテッド 癌及び免疫学的障害を治療するためのｂｃｍａ抗生物質及びその使用
EP3436036A4 (en) 2016-04-01 2020-03-18 Kite Pharma, Inc. BCMA BINDING MOLECULES AND METHODS OF USE THEREOF
WO2017211900A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma
WO2018009904A2 (en) 2016-07-08 2018-01-11 Tumeh Paul C Compositions and treatment methods for cancer immunotherapy
MX2019002967A (es) 2016-09-14 2019-07-04 Teneobio Inc Anticuerpos de union a cd3.
CN110036032B (zh) * 2016-09-23 2023-09-05 瑞泽恩制药公司 抗muc16(粘蛋白16)抗体
WO2018075359A1 (en) 2016-10-18 2018-04-26 Boger Henry William Wireless power transfer for process control
KR102687833B1 (ko) * 2016-11-02 2024-07-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 다발성 골수종 치료를 위한 bcma 및 cd3에 대응하는 이중 특이적 항체 및 면역학적 약물의 복합용도
WO2018099539A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Horst Lindhofer Combination of t-cell redirecting multifunctional antibodies with immune checkpoint modulators and uses thereof
KR20250016462A (ko) 2016-12-21 2025-02-03 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
EP3572427B1 (en) 2017-01-23 2025-06-25 CRAGE medical Co., Limited Bcma-targeting antibody and use thereof
WO2018145075A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for augmenting antibody mediated receptor signaling
IL268349B2 (en) 2017-02-17 2024-08-01 Hutchinson Fred Cancer Res Combination therapies for treatment of bcma-related cancers and autoimmune disorders
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
AR111773A1 (es) 2017-05-05 2019-08-21 Amgen Inc Composición farmacéutica que comprende constructos de anticuerpos biespecíficos para almacenamiento y administración
US11970540B2 (en) 2017-06-20 2024-04-30 Teneobio, Inc. Anti-BCMA heavy chain-only antibodies
CA3070539A1 (en) 2017-08-01 2019-02-07 Medimmune, Llc Bcma monoclonal antibody-drug conjugate
EP3689908A4 (en) 2017-09-29 2021-09-29 Mogam Institute for Biomedical Research HIGH AFFINITY ANTI-BCMA ANTIBODIES FOR BCMA AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATMENT OF CANCER THEREOF
PE20201183A1 (es) 2017-10-13 2020-11-03 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas trispecificas y metodos de uso
CN107827989A (zh) 2017-10-18 2018-03-23 银丰生物工程集团有限公司 靶向骨髓瘤bcma抗原的转基因t细胞及其制备方法与应用
PL3674328T3 (pl) 2018-02-01 2024-09-16 Nanjing IASO Biotechnology Co., Ltd. Chimeryczny receptor antygenu (car) wiążący się z bcma i jego zastosowania
WO2019224717A2 (en) * 2018-05-24 2019-11-28 Janssen Biotech, Inc. Anti-cd3 antibodies and uses thereof
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途
CA3132587A1 (en) * 2019-03-21 2020-09-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of il-4/il-13 pathway inhibitors and plasma cell ablation for treating allergy

Also Published As

Publication number Publication date
NL301335I2 (nl) 2025-09-10
MX2025005515A (es) 2025-06-02
PT3823664T (pt) 2025-01-24
MA53168A (fr) 2021-05-26
SG11202100252SA (en) 2021-02-25
HUS2500032I1 (hu) 2025-09-28
ES3010285T3 (en) 2025-04-02
JP7586974B2 (ja) 2024-11-19
JP2021531005A (ja) 2021-11-18
EP4516810A2 (en) 2025-03-05
KR20210034032A (ko) 2021-03-29
AU2019307928A1 (en) 2021-02-11
US12258412B2 (en) 2025-03-25
IL279974B1 (en) 2025-03-01
EP3823664B1 (en) 2025-01-08
BR112021000186A2 (pt) 2021-08-10
LTPA2025526I1 (ro) 2025-07-25
EP4516810A3 (en) 2025-07-16
PH12021550031A1 (en) 2021-09-20
EP3823664A1 (en) 2021-05-26
CL2021000131A1 (es) 2021-07-02
TWI838389B (zh) 2024-04-11
MX2021000488A (es) 2021-04-12
WO2020018820A1 (en) 2020-01-23
LT3823664T (lt) 2025-02-25
CA3107126A1 (en) 2020-01-23
AU2019307928B2 (en) 2025-09-25
US20200024356A1 (en) 2020-01-23
IL279974A (en) 2021-03-01
JP7319348B2 (ja) 2023-08-01
HUE070224T2 (hu) 2025-05-28
PL3823664T3 (pl) 2025-03-17
TW202019966A (zh) 2020-06-01
MY201816A (en) 2024-03-19
IL279974B2 (en) 2025-07-01
ZA202100087B (en) 2025-07-30
FR25C1029I1 (fr) 2025-09-26
NO2025036I1 (no) 2025-08-07
HRP20250199T1 (hr) 2025-04-11
DK3823664T3 (da) 2025-02-17
JP2023134728A (ja) 2023-09-27
RS66535B1 (sr) 2025-03-31
SI3823664T1 (sl) 2025-03-31
US20260008862A1 (en) 2026-01-08
US11384153B2 (en) 2022-07-12
US20220306758A1 (en) 2022-09-29
CO2021000188A2 (es) 2021-01-18
MA53168B1 (fr) 2025-03-28
CN112423785A (zh) 2021-02-26
FIC20253006I1 (fi) 2025-08-14
CN112423785B (zh) 2025-03-04
FI3823664T3 (fi) 2025-03-04
SMT202500044T1 (it) 2025-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12258412B2 (en) Nucleic acid molecules encoding bispecific anti-BCMA x anti-CD3 antibodies
US11155633B2 (en) Anti-PSMA antibodies, bispecific antigen-binding molecules that bind PSMA and CD3, and uses thereof
US11905332B2 (en) Antigen-binding molecules that bind CD38 and/or CD28, and uses thereof
CA3107126C (en) Bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies and uses thereof
US12590168B2 (en) Antigen-binding molecules that bind CD38 and/or CD28, and uses thereof
HK40122455A (en) Bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies and uses thereof
HK40052527A (en) Bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies and uses thereof
HK40052527B (en) Bispecific anti-bcma x anti-cd3 antibodies and uses thereof
KR20250011926A (ko) Cd38 및 4-1bb에 결합하는 다중특이적 항원 결합 분자, 및 이의 용도
HK1255971B (en) Anti-psma antibodies, bispecific antigen-binding molecules that bind psma and cd3, and uses thereof