LV10160B

LV10160B - Hatching agent for the potato syst nematode

Info

Publication number: LV10160B
Application number: LVP-92-62A
Authority: LV
Inventors: Mulder Johan Gerard; Diepenhorst Pieter; Plieger Pieter; Bruggemann-Rotgans Ingri Maria
Original assignee: Chemische Pharmaceutische Ind
Priority date: 1991-07-18
Filing date: 1992-07-16
Publication date: 1995-10-20
Also published as: LV10160A; EP0596033A1; PL169984B1; WO1993002083A1; CA2113626C; IE922283A1; NL9101266A; LTIP113A; JPH07505118A; BR9206287A; EE03072B1; US5585505A; TR25995A; CA2113626A1

Description

Līdzeklis kartupeļu nematodu izperēšanai no to oistām

Šis izgudrojums attiecas uz līdzekli kartupeļu nematodu izperēšanai no to cistām,tā pagatavošanas procesu un metodi cīņai ar kartupeļu slimību.

Kartupeļu slimība,vai kartupeļu nematodu uzbrukums kartupeļa augam,ir smaga problēma,it īpaši,kartupeļus intensīvi audzējot rūpniecības vajadzībām,kur šī slimība noved pie ievērojamiem produkcijas zudumiem.Kartupeļu slimība novērojama,audzējot arī sēklas un patēriņa kartupeļus.

Kartupeļa augs kalpo par saimniekaugu organismiem,kuri izraisa kartupeļu slimību: nematodēm,kas tagad pazīstamas pēc nosaukumiem Globodera rostochlensis un Globodera paliIda,kurām zināmi dažādi patotipi.Periodā no rudens līdz pavasarim,vai ilgāk,kad uz lauka neaudzē kartupeļus vai citus saimniekaugus,šīs nematodes pavada laiku cistās,kas bieži sastopamas augenē.Cistas faktiski ir iepriekšējās paaudzes nematodu mātīšu sacietējušie vēderiņi,kas pildīti ar oliņām.Pavasarī, kartupeļu augšanas periodā,kartupeļa augs izdala vielas,kas izvilina nematodu kūniņas no oliņām caur cistas apvalku un piesaista pie auga.

Līdz šim kartupeļu aizsardzības un iespējamie nematodu apkarošanas paņēmieni bija intensīva augu seka,lauku higiēnas pasākumi, izturīgu kartupeļu Šķirņu audzēšana un augsnes dezinfekcija.

Tā kā no finansiālā viedokļa kartupeļu ražošana,rēķinot uz 1 ha,ir daudz izdevīgāka nekā oitu kultūru audzēšana,intensīva augu seka nav kļuvusi populāra,un,kur vien tas ir iespējams,tiek dota priekšroka citiem aizsardzības pasākumiem.

Taču no pārējiem pasākumiem plašu pielietojumu ir guvusi vienīgi augsnes dezinfekcija.šim nolūkam kā galvenos dezinfekcijas līdzekļus izmanto 1,3-dihloropropēnu un metama nātriju. Ņemot vērā dezinfekcijas līdzekļu plašo pielietojumu,kā arī to ķīmiskās,fizikālās un toksikoloģiskās īpašības,pastāv tendence šīs vielas ierobežot.Svarīgākais iemesls ir tas,ka dezinfekcijas līdzekļos saskata draudus apkārtējai videi.

Jau pagātnē veikti ievērojami pētījumi,lai atrastu vielas,kas mākslīgi ietekmētu nematodu izperēŠanu.P atiesi, ja būtu iespējams ievadīt nekultivētā augsnē tādas vielas,kas izraisa kartupeļu nematodu cistu izšķilšanos,tad tiktu iegūta efektīva bioloģiska metode šā mikroorganisma apkarošanai.Tā kā šādā situācijā nematodēm būtībā nav barības avota,tās iet bojā,un pēc tam var audzēt kartupeļus ar mazāku risku,ka tie varētu bojāties no kartupeļu slimībās.Kombinējot šādu vielu ar nelielu dozu ķīmiskā pesticīda,var panākt vēl lielāku efektu.

Tā kā līdz Šim efektīva bija ķīmiskā kontrole,bioloģiskās metodes pētījumi tika pārtraukti,negūstot nekādus rezultātus. Par Šiem pētījumiem tika ziņots tādās publikācijās kā Nematologica,31,Hr.2(1985),159rl7O»lPP«Tajā minēts kartupeļu sakņu difuzāta pielietojums cistu izperēšanai.

(II

Eiropas patenta.pieteikumā Nr.434 417 aprakstīts, paņēmiens.... vielas iegūšanai no Solanaceae dzimtas augu sakņu šūnām,kas ir spējīga stimulēt kartupeļu nematodu oliņu izperēšanu no cistām.

Šā izgudrojuma mērķis ir iegūt līdzekli kartupeļu nematodu izperēšanai no to cistām.Izgudrojums attiecas uz līdzekli ne matodu sugu un patotipu,kas izraisa kartupeļu slimību,ieskai tot Globodera rostoohiensls un G-lobod era pallida, izp erēšanai <

no to cistām,ar molekulsvaru 498,ķīmisko sastāvu.Cg^H^gOg un

Plašu un komplicētu pētījumu rezultātā augstāk minētais sa^vienojums tika identificēts kā komponents,kas stimulē kartupeļu nematodu cistu izperēšanu.Šā savienojuma ķīmiskais (sis tematiskais) nosaukums ir trans-2-(2,13-dihidroksi-9-metoksi -7,7,16-t r imet īl-5,10,20-t^iokso-19-oksaheksao iklo-f9.7 «0. l^3,6.0^3,8.l^12,15.0^12,16]-eikoza-l(ll),8-dien-15-il)-ciklopro p ānkarboksīlskāb e.

Tīrā savienojuma spektra dati doti piemērā.

Izperēšanas līdzekļi ir negaistoši savienojumi,kas labi šķīst ūdenī,metanolā,dietīlēterī,etīlacetātā un līdzīgos polāros šķīdinātājos,bet nešķīst heksānā,dihlorometānā,hloroformā un tamlīdzīgās vielās.

Izperēšanas līdzeklis nav stabils pie pH zem 2 un virs 7 un pie temperatūrām virs 35°C·

Izperēšanas līdzekli,saskaņā ar izgudrojumu,var izolēt no nak teņu dzimtas (Solanaceae) augu hidrokultūras vai arī no šo augu audu vai šūnu kultūras,it īpaši,no kartupeļu vai tomātu saknēm piemērota barības avota klātbūtne.

Piemērota metode minēto nematodu izperēšanas līdzekļa iegūša^nai ir tā pagatavošana,Izmantojot piemērotu Solanaceae šķirnes augu hidrokultūru vai arī šūnu suspenzijas kultūru no šādu augu audlem,

Izperēšanas līdzekli var iegūt arī,recirkulējot ūdeni,ko piegādā Solanaceae dzimtas augu,sevišķi tomātu,substrāta kultūrai .Pārsteidzošā kārtā tika atklāts,ka recirkulējošais ūdens, ko piegādā siltumnīcā audzējamo tomātu substrāta kultūrai,parasti uz minerālsilikātvilnas bāzes,satur ievērojamu daudzumu izperēšanas līdzekļa.

Izperēšanas līdzekli,saskaņā ar izgudrojumu,var iegūt,piemēram, izmanto jot šūnu suspenzijas kultūru no atbilstošas Solanaceae šķirnes augu audiem.Izmantojot piemērotu kultūras vidi,kā,piemēram,aprakstīts tālāk,no šādas šūnu suspenzijas ieLV 10160 gūst izperēšanas līdzekļa Šķīdumu.Kā izejas produkts var būt šūnu eksudāts,tašu var izmantot arī pašu šūnu ekstraktu vai to homogenātu.Šūnas 5iem,piemēram,no attiecīgā nakteņu dzimtas auga audiem,kurš ir spējīgs izperēt nematodes.īpaši svarīgas ir Solanum tuberosum L kultivētās šķirnes,piemēram,Mentora šķirne.Var izmantot šūnas kā tādas,vai ģenētiski modificētas šūnas,piemēram,šūnas,kurās ievadīta specifiska ģenētiskā informācija, izmantojot Agrobacterium tumefaciens«Sūnu suspenzijas kultūru vietā var izmantot atvašu vai sakņu kultūras.Attie čībā uz šķirņu izvēli šajās metodēs ir spēkā tie paši apsvērumi kā šūnu suspenzijas kultūrām.

Vide,kas var būt piemērota izperēšanas līdzekļa iegūšanai no šūnu suspenzijām, parasti satur:

- bāzes komponentus (sāļus,sporu elementus)

- ogļhidrāta avotu (parasti saharozi,tašu var izmantot vienu

Ivai vairākus citus ogļhidrātus)

- vitamīnus (pārdošanā ir vitamīnu standartpaketes,un tās var izmantot šādā veidā)

- hormonus (parastā kombinācija ir citokinīns/auksīni,vai nu atsevišķi,vai arī kombinācijā ar giberelskābi un abscizskābi;tomēr to sastāvs un kombinācija var mainīties atkarībā no šūnu tipa)·

Substrāta komponentu iespējamā kombinācija sastāv no:

- Bāzes komponentiem + vitamīniem

Saskaņā ar Murshige and Skoog (Physiol .Plant 1^,473-497 (1962)).

Ogļhidrāta avota saharozes šķīduma,piemēram,30 g/l - Hormoniem

a. Ģenētiski nemodificētu šūnu suspenzijas kultūru gadījumā var pievienot 5 mg/l naftiletiķskābes.

b. Ģenētiski nemodificētu sakņu kultūru gadījumā var pievienot 0,2 mg/l giberelskābes un 0,05 mg/l naftiletiķskābes .

c. Kultūru gadījumā uz ģenētiski transformētu šūnu bāzes (šūnu suspenzija,sakņu vai atvašu kultūras) ne vienmēr nepieciešams lietot hormonus.

Saprotams,ka iepriekšminētie substrāta komponenti ir tikai piemēri komponentiem,kurus var lietot,tašu nekādā ziņā nav būtiski,lai tiktu izmantoti tieši šie komponenti.Speciālists var radīt arī citas kombinācijas un sastāvus,kas .rezultātā dod labus izperēšanas līdzekļus,kuru iegūšana balstās uz vispārīgām zināšanām šajā nozarē.

Atkarībā no kultūras rakstura var pielietot dažādus paņēmienus, lai izolētu izperēšanas līdzekli no kultūras vides vai no šūnām .Piemērota procedūra izperēšanas līdzekļa izolēšanai no šūnām un ārpusšūnu vides var ietvert sekojošos etapus:

1. visas šūnu masas homogenizāciju;

2. ekstrakciju un nogulsnēšanu,lai atdalītu proteīnus un šūnu sārņus;

3. pēc vēlēšanās,šķidrās fāzes,kas satur izperēšanas līdzekli filtrēšanu un tās atšķaidīšanu vai koncentrēšanu,lai pārnāktu vēlamo koncentrāciju;

i

4. šķidrās fāzes attīrīšanu,izmantojot iepriekšējās hromaLV 10160 togrāfiskās attīrīšanas metodi.

Piemērotas hromatogrāfiskās attīrīšanas metodes izperēšanas līdzekļa uzlabošanai var pamatoties uz vienu vai vairākām šā līdzekļa īpašībām:

- šķīdināmību metanolā

- šķīrējkoeficientu atšķirībām starp ūdens/metanola un ūdens/ /hloroforma sistēmām

- lādiņu iepriekšēj^Zanalītiskajā hromatogrāfijā,izmantojot . sefarozi

- hidrofobiju pretējas fāzes hromatogrāfijā

- lādiņa/hidrofobijas attiecību jonu eksklūzijas hromatogrāfijā

Kā jau norādīts,izperēšanas līdzeklis,saskaņā ar izgudrojumu, ir negaistošs saviehojums .Pateicoties zemajai gaistamībaijŠķīdumus,kas satur šo līdzekli,var efektīvi koncentrēt,izmantojot tādu vakuumtehniku kā rotācijas plēves iztvaikotāju un/vai sublimācijas žāvētāju.

Izperēšanas līdzekli,saskaņā ar izgudrojumu,var iegūt un izI· mantot tīrā formā,ar tīrības pakāpi vismaz 99 # kopējā svara. Tomēr praksē tas parasti nav vajadzīgs,un tāpēc šo līdzekli var iegūt un izmantot daļēji attīrītā veidā,piemēram,izskalojot adsorbentu,uz kura adsorbēts izperēšanas līdzeklis.Tas ir sevišķi lietderīgi gadījumā,kad izperēšanas līdzeklis iegūts no pārdošanā esošajiem tomātiem,kas audzēti uz substrāta siltumnīcās .Tika konstatēts,ka siltumnīcās recirkulējošais ūdens, ko izmanto tomātu audzēšanai un ko vajadzības gadījumā papil8 dina ar svaigu ūdeni,satur ievērojamu daudzumu izperēšanas līdzekļa .Piemēram,ir iespējams izperēšanas līdzekli atjaunot nepārtraukti vai ar pārtraukumiem no reoirkulējošā ūdens adsorbcijas vai absorbcijas ceļā.Izperēšanas līdzekļa elūzijas rezultātā iegūst koncentrētu izperēšanas līdzekli uz ūdens šķīduma bāzes.

Izperēšanas līdzekli var lietot kā tādu,tas ir,skābes formā, kā sāli,piemēram,nātrija vai kālija sāli,kā esteri ar attiecīgu savienojumu vai arī kā atvasinājumu,aizvietotu savienojumu un tamlīdzīgi.

Izperēšanas līdzekli var ievadīt augsnē kā tādu vai kā preparātu ar piemērotu bāzi-ūdeni vai ūdens šķīdumu,var izmantot arī cieto bāzi.

Lai panāktu ilgstošu iedarbību,zināmas priekšrocības var būt vielām ar norādi par to ķīmisko sastāvu.Šādas vielas ir visai izplatītas,un tās var izmantot,piemēram,kā komponentus ievadīšanai augsnē.

Izperēšanas līdzekļi attīrītā vai daļēji attīrītā veidā ir aktīvi ūdens šķīdumā vai kā cietas vielas (vēlams,ar norādēm par to ķīmisko sastāvu) koncentrācijas,kas svārstās no 0,01 līdz 1000 mg/kg augsnes,tašu to optimālā koncentrācija ir no 1 līdz 100 mg/kg augsnes.

Lai iegūtu labākus rezultātus,šķīdumu vai cieto vielu,vēlams, ar norādi par tās ķīmisko sastāvu,ieteicams ievadīt vai injiLV 10160 cet augsnē ap 10-20 cm dziļumā .Purvainās augsnēs tiek izperēts vairāk kartupeļu nematodu kūniņu nekā pārējās augsnēs, un arī krietni vairāk nekā stihiskas izšķilšanās apstākļos.

Pārsteidzošā kārtā tika konstatēts,ka izperēšanas līdzekļa aktivitāti,saskaņā ar izgudrojumu,gan tīrā veidā,gan neattīrīta preparāta formā no hidrokultūras,šūnu vai audu kultūras, var ievērojami palielināt,lietojot to skābes kompozīcijā,piemēram,kombinācijā ar askorbīnskābi.

Izperēšana^ līdzekļu preparātu aktivitāti var pārbaudīt pēc kūniņu izšķilšanās intensitātes no oliņām.

Šai nolūkā cistas attīra no sakņu fragmentiem un/vai netīrumiem un izsijā caur 0,5 mm un 0,25 mm sietiem.32 mg no frakcijas 0,5 mm un 22,5 mg no frakcijas 0,25-0,5 mm nosver:Viss tas kopā satur līdz pat 1200 cistu.Pārbaudāmo cieto materiālu izšķīdina krāna ūdenī līdz koncentrācijai,kas ekvivalenta 125 mg/l izejmateriāla,No šā pamatšķīduma izdara 10 un 100 kārt īgus Sķīd umus.

Oliņu suspenziju ievada 70 ml krāna ūdenī un pārvieto uz menzūru ar iedaļām,pēc tam piesātina ar gaisu,izmantojot akvārija sūkni.

ml izperēšanas līdzekļa Šķīduma un 0,5 ml oliņu suspenzijas ar pipeti ievada polistirola meģenēs,tad hermetizē.Kontrolei 0,5 ml oliņu suspenzijas ar pipeti ievada 5 ml krāna ūdens.

Pēc tam mēģenes atstāj rotējošā stāvoklī pie 20°C temperatūras.

Oliņas un palikušos nematodu tārpus saskaita periodā t’O dienas,bet tārpus saskaita pēc t=4,5 un/vai 6 dienām.Šai nolūkā mēģeni vispirms enerģiski sakrata ar roku 4 sekundes un tad ar virpuļmaisītāju vēl 10 sekundes.Kad suspenzija beigusi kustēties, 0,5 ml ar pipeti paņem no mēģenes 1 cm dziļumā zem Šķīduma līmeņa.Šo paraugu novieto uz skaitīšanas galdiņa un atšķai da ar svaigu krāna ūdeni,līdz ūdens plēvīte ir pārklājusi visu laukumu.Oliņas un tārpus saskaita zem mikroskopa.

Aprēķinus izdara sekojošā veidā:

Absolūtā aktivitāte:

tārpi_t=t - tārpi_t=0 ^An ’ I --------------------- X 100 ?5 \ oliņas_Ī=Q /

A = pētījamā parauga aktivitāte.

Brīvo oliņu reakciju uz izperēšanas līdzekļa klātbūtni var aprakstīt , izmantojot Monoda kinētikas metodi,kas raksturo mikroorganismu attīstību nekonkurējošā substrātā.

Piemērs

Ap 700 Mentora šķirnes kartupeļu augu tika audzēti hidrokultūrās,izmantojot recirkulējošo barības šķīdumu,kas saturēja kālija nitrātu,kalcija nitrātu,primāro kālija skābo fosfātu,amonija sulfātu,magnija sulfātu,dzelzs(II) sulfātu,mangāna(Il) sulfātu,cinka sulfātu,vara(ll) sulfātu un nātrija borātu.Fosfātu un nitrātu daudzums barības šķīdumā tika izmērīts un,ja <

nepieciešams,regulēts.Vērtību pH saglabāja zem ,4,2,pievienojot vajadzības gadījumā 6 slāpekļskābes un 4,25 $ fosforskābes šķīduma

Izvadot recirkulējošo barības šķīdumu caur kolonu,kas saturēja Amberlite ΧΑΒ-2,izperēšanas līdzeklis absorbējās uz kolonas sienām.

Mainot barības šķīdumu,kolonu XAD aizvāca un izskaloja ar des-

Absorbēto materiālu desorbēja no ΧΑΏ-2,izskalojot to pēc kārtas ar 60 $ metanolūdeni un metanolu.Izskalotais materiāls tika koncentrēts un izžāvēts rotācijas vakuumiztvaicātājā un sublimācijas žāvētājā.

Izperēšanas līdzekļa preparātu daudzkārt attīrīja,pamatojot ies uz

- šķīdināmības atšķirībām metanolā un ūdenī

- šķīrējkoeficientu pretstraumes ekstrakcijā

- lādiņu sagatavošanās/analītiskajā hromatogrāfijā,izmantojot sefarozi

- hidrofobiju pretējas fāzes hromatogrāfijā

- lādiņa/hidrofobijas attiecību jonu eksklūzijas hromatogrāfijā.

Šajā nolūkā preparātu izšķīdināja metanolā un sakratīja,līdz izveidojās homogēns maisījums.Pēc centrifugēšanas virspusē peldošo tīro materiālu noņēma ar pipeti,koncentrēja un izžāvēja rotācijas vakuumiztvaicētājā un sublimācijas žāvētājā.

Pilienu pretstraumes hromatogrāfa caurulīšu sistēmu piepildīja ar hloroforma,metanola un ūdens (35:65:40) maisījuma augšējo slānīti.Izperēšanas līdzekļa preparātu izšķīdināja maisījuma augšējā slānītī un ievadīja kolonā.Izperēšanas līdzekļus atdali ja, izskalo jot ar minētā maisījuma apakšējo slāni,un savāca frakcijās.Stacionāro fāzi izsūknēja ārā no kolonas un tāpat savāca frakcijās.Mobīlās un stacionārās frakcijas aktivitāti pārbaudīja atsevišķi.

Pēc tam frakcijas sadalīja tālāk anjonu apmainītājā,piemēram,

Q Sepharose HP.Šai nolūkā izperēšanas līdzekli izšķīdināja un ievadīja kolonas buferī (piemēram,5 mM piperazīna/^etiķskābes pie pH 6,0) un atdalīja,izskalojot ar cita bufera gradientu (piemēram,5 mM piperazīna + 1 M nātrija acetāta pie pH 6,0) pēc tam,kad nesaistītais materiāls bija atstājis kolonu.Izskaloto materiālu savāca frakcijās un pārbaudīja.

Anjonu apmainītāja apvienotās aktīvās frakcijas sadalīja tālākās frakcijās Rsil 018 kolonā (250x25 mm) gradientu izskalošanas c eļā .Aktīvās frakcijas tika apvienotas,koncentrētas un sublimācijas ceļā izžāvētas.Šo materiālu izšķīdināja 1 mM H01 un sadalīja frakcijās ΗΡΧ-87Η kolonā.Aktīvās frakcijas apvienoja un atdalīja elūzijas ceļā divās sērijās savienotās Bakerbond 018 kolonās.Šādā veidā ieguva 245y/g tīra izperēšanas līdzekļa, kas izkristalizējās no pārsātinātā šķīduma.Tādējādi iegūtais izperēšanas līdzeklis tika pakļauts dažādām analīzēm,lai noteiktu tā ķīmisko struktūru.Rezultātā tika noskaidrota sekojošā izperēšanas līdzekļa struktūra:

Šā līdzekļa vērtība K »to nosakot ar Monoda kinētikas metodi, bija apmēram 10⁸ g/l.Balstoties uz šo vērtību,var noskaidrot izperēšanas līdzekļa daudzumu neattīrītos šķīdumos,izmantojot vienādojumu:

10“⁸

Izperēšanas līdzekļa daudzums = ------ x 100 $

Km m

kur K_m ir koncentrācija,pie kuras noteikta puse no neattīrītās vielas maksimālās izperēšanas spējas.

Izperēšanas līdzekļa spektrālās analīzes

Masas spektrometrija

Attīrīta izperēšanas līdzekļa analīzes veica ar Pinnigan MAT-95Q,Pinnigan MAT TSQ 700 MS/MS un Pinnigan MAT Laser TOP masas spektrometriem.

Materiāla skābes formā masas spektrs uzrādīja molekulas jonu « ar molekulsvaru 498 un lielu skaitu fragmentu ar masu/lādiņu t t i

480,470 un 450 daltoni.Nātrija sāļa elektriskas izkliedes un lāzera desorbcijas masas spektrs uzrādīja masu/lādiņu ar vērtību 521 daltons.

Protonu kodolmagnētiskā rezonanse

Izperēšanas līdzekli izšķīdināja 0,5 ml D₂° ¹¹¹¹ ievietoja Varian-400 spektrometrā.Analīzes laiks turpinājās apmēram 15 stundas (4720 pārejas stāvokļi).Spektru noteica arī no kontrolmateriāla.

Protonu kodolmagnētiskās rezonanses spektrā,izmantojot spektrometru Varian-Unity 400 Mhz,pie temperatūras 5°C tika konstatētas sekojošās nobīdes un 3aites DgO,ārējās atskaites nātrija sālī no 3-(metīl-silīl)-propionskābes-d^,0.0 ppm.Analizējamais paraugs tika izmantots kā nātrija salis.

Oglekļa stāvoklis	Nobīde (ppm)	Saites (Hz)
2	i 4,09	i
4	2,61	17,90 (4«)
4’	2,61 i i
β	4,04	-
7 iMe)	1,20	-
	1,21
9 (OME)	3,26 i	i 1 i
¹³	4,32	7,68 C.4) 2,74 (14*) ' ι 4 4
14	2,18	7,54 (13) 12,47 (14·)
14’	2,04 i	12,60 (?.4) 3,02 (13)
16 (Me)	1,34	4 1 4 4
17	1,95	4,94 (18·) 14,47 (17*
17’	1,43	5,21 (18) 13,57(17*)+
		(16*) 4
18	2,48	5,21 (17») 20,43(18»)
10’	2,58	aina neskaidra

Ciklopropāna frakcija

1	1,78	multip Ietas
2	1,50	multip Ietas
3	0,85	dupletas
3’	0,84	divkārši dupletas

Analīze Infrasarkanajos staros

Tīro izperēšanas līdzekli izšķīdināja metanolā un pārvietoja uz trauciņu,kas piepildīts ar KBr.Pēc rūpīgas iztvaicēšanas noteica spektru.Tādā pašā veidā sagatavoja tīru metanolu aklajam eksperimentam.Spektrus noteica,izmantojot Bruker IPS-85 PTIR i

spektrometru,DTGS detektoru,ar optiskās izšķiršanas spēju 4 cm līniju skaitu 128/256.Spektru pārveidoja,izmantojot Kubella-Munk transformāciju.Absorbcijas joslas varētu izteikt sekojošā veida:

Viļņa skaitlis (cm’³')

3379 t t

2949/1470

2838

1765

1660

Kompleksas saites 1200-100

Funkcionāla grupa

-0H,tai skaitā'HgO

-GH^ un/vai GH₂ 5 gredzenos

-och_3i >0=^0 4 gredzenos

C=G

Dažādi alifātiski ētera-skābekļa atomi

UV

Izperēšanas līdzekļa UV spektram raksturīgs tā absorbcijas maksimums pie 267 nm un pie apmēram 200 nm.Dzišanas ātrums pie 225 nm un pie 267 nm ir ap 1,5 tīram izperēšanas līdzeklim.Dzišarnas koeficients pie 267 nm ir 455O± 1250 l.mol*’^L.om“¹.Šī absorb· cija liek domāt par G=C un/vai 0=0 saišu sajūgtas sistēmas klātbūtni,kas atbilst izperēšanas līdzekļa struktūrai,saskaņā ar izLV 10160 gudrojumu.

Rentgena difrakcijas analīze

Kristālu izmērīja Enraf-Nonius CAD-4 difraktometrā ar grafīta monohromētā CuKo radiāciju un<0-28 izvērsumu.Visas 10551 refleki <

sijas izmērīja diapazonā -13<h<13, -25<k<0, -14<1<14,viena pati sērija sastāvēja no 5257 refleksijām.No tām 3621 bija virs statistiski nozīmīgā līmeņa 2,5 6 (I).Maksimāla (sin θ)/λ vērtība bija 0,61 .Divas atskaites refleksijas (021,200) izmērīja katru stundu,un tās uzrādīja 9 $ samazinājumu 116 stundu ilgajā kopīgajā laikā,tāpēc tas tika koriģēts.Standartšūnu parametrus precizēja ar vismazāko kvadrātu pielāgošanas proce• i dūru,izmantojot 23 refleksijas ar 74^z 28Z84°.Tika izdarītas Lorenča un polarizācijas efektu korekcijas.Struktūru noskaidroja ar programmu CRUNGH,kas izmanto Karies-Hauptmana matricas fāzu noteikšanai.Ūdens molekulas tika identificētas nākošajā aP sintēzē .Anizotropiskā bloka-diagonāles vismazāko kvadrātu korekcija attiecībā uz P tuvojās vērtībām R=0,126,R_w=*0,171, (AļŠ )_max = = 0,85.Vislabākās atbilstības lielums bija S=0,548.Tika pieΊ lietota svara noteikšanas formula (3,0 ₊P_0b3+ 0,011 *F_ota2)-t

Tika izdarīta empīriska absorbcijas korekcija (DXPĀBS,Walker / and Stuart 1983) ar koeficientiem 0,23-1,43 robežās.Izkliedes faktorus aizguva no Cromer and Mann(1968):“International Tables t

for X-ray Crystallography(1974).Visus aprēķinus veica ar XTAL (Hall and Stewart 1990),ja vien nav norādes uz citu metodi,Atomu numerācijas shēma parādīta Pig.l,

LV ιυιου

Claims

Izgudrojuma formula:

1. Līdzeklis nematodu sugu un patotipu,kas izraisa kartupeļu slimību,ieskaitot Globodera rostochiensis un Globodera pallida, izperēšanai no to cistām,ar molekulsvaru 498,ķīmisko sastāvu un ta atvasinājumiem,esteriem un sāļiem.
2. Izperēšanas līdzeklis,pēc 1.punkta,ko iegūst no nakteņu dzimtas (Solanaceae) sugu hidrokultūras,audu vai šūnu kultūras, it īpaši,no kartupeļu saknēm,piemērota barības avota klātbūtnē.
3„ Izperēšanas līdzeklis,pēc 2₀punkta,ko iegūst,kultivējot šūnu suspenzijas kultūru barības vide.
4. Izperēšanas līdzeklis,pēc 2.vai 3.punkta,kura neattīrīto šķīdumu,kas iegūts kultivēšanas rezultātā,attīra.

i
5. Metode izperēšanas līdzekļa pagatavošanai,pēc 1.-4.punktam, kas atšķiras ar to,ka kultivē nakteņu dzimtas (Solanaceae) sugu hidrokultūru vai kultūru h₀ nakteņu dzimtas (Solanaceae) augu audiem vai sūnām piemērotā barības vidē un ka šo izperēšanas līdzekli izolē no iegūtā šķidruma.

LV ΙΟΊ 60
6. Metode,pēc 5.punkta,kas atšķiras ar to,ka iegūto izperēšanas līdzekli attīra.
7. Metode līdzekļa pagatavošanai nematodu sugu un patotipu, kas izraisa kartupeļu slimību,ieskaitot Globodera rootochļensis un Globodera pallida,izperēšanai no to cistām,kur šo izperēš£>nas līdzekli izolē no recirkulējošā ūdens,ko piegādā tomātu substrāta kultūrām,piemēram,siltumnīcās.

0. Izperēšanas līdzeklis,ko iegūst ar paņēmienu,pēc 5.-7. punkt ierii.
9. Preparāts līdzeklim nematodu sugu un patotipu,kas izraisa kartupeļu slimību,ieskaitot Globodera rostochiensis un Globodera pallida,izperēšanai no to cistām,kas satur izperēšanas līdzekli, pēc 1.-4.vai 6.punkta,un atbilstošu bāzi.
10. Preparāts izperēšanas līdzeklim,pēc 9.punkta,kura bāze ir ūdens vai ūdens šķīdums.
11. Metode cīņai ar nematodu sugām un patotipiem,kas izraisa kartupeļu slimību,ieskaitot Globodera rostochiensis un Globodera ( pallida,kas ietver izperēšanas līdzekļa,pēc 1.-4.vai G.punkta, vai izperēšanas līdzekļa preparāta,pēc 9.vai 10.punkta,ievadīšanu augsnē,kas paredzēta kartupeļu audzēšanai,vēlams,kombinācijā ar tādiem augsnes dezinfekcijas līdzekļiem kā 1,3-dihloropropīls un metama nātrijs.