LU86572A1 - Procede pour preparer un isolat de proteine de soya pauvre en phytate - Google Patents
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Description
*
Domaine de l'invention.
La présente invention concerne l'isolement de protéines de graines à des fins alimentaires.
Etat connu de la technique.
L'isolement, la purification et l'amélioration CD.YD.F — 1 - MJ 613 i * » * de la qualité nutritive et de la saveur de la protéine de soya ont déjà fait l'objet d'importants travaux. Dans son état natif, la protéine de soya est désagréable au goût et est de médiocre qualité nutritive à cause de la présence des complexes de l'acide phytique qui entravent l'absorption des minéraux par l'organisme des mammifères et de la présence de facteurs antinutritifs, notamment les inhibiteurs de la trypsine qui entravent la digestion de la protéine par les mammifères. La destruction des inhibiteurs de la trypsine par un traitement thermique et l'élimination de l'acide phytique appartiennent à l'état connu de la technique. Il est connu aussi d'arriver à des titres en protéine plus élevés que dans les graines de soya d'origine en préparant un isolat de protéine purifié.
McKinney et al. indiquent dans J. Biol. Chem., Vol. 178, pages 117-132 (1949) que la phytine se dissocie lentement de la protéine de soya dans des dispersions alcalines d'un pH de 11,0 à 11,5 et peut être séparée par centrifugation.
Iacobucci et al. décrivent dans le brevet E.U.A. n° 3.736.147 un procédé d'ultrafiltration pour préparer un isolat de protéine de soya ayant une teneur réduite en acide phytique, qui comprend divers traitements chimiques en combinaison avec une ultrafiltration soignée. Le traitement chimique se fait par hydrolyse enzymatique de l'acide phytique au moyen de phytase au pH de la neutralité avant l'ultrafiltration, celle-ci étant exécutée ensuite en présence d'ions calcium à pH bas, ou bien au moyen d'acide éthylènediamine-tétraacétique à pH élevé.
Bolley et al. décrivent dans le brevet E.U.A. n° 2.732.395 un procédé pour séparer la phytine de différentes graines oléagineuses. Le procédé comprend l'extraction en milieu acide d'une farine de graines CD.YD.F - 2 - MJ 613 *
exempte d'huile au moyen d'un acide aqueux à un pH
situé à peu près dans le domaine isoélectrique de la protéine particulière, en général environ pH 4,5. La phytine est séparée de la fraction soluble et la protéine est isolée du caillé en étant extraite à un pH supérieur à 8 avec séparation des insolubles, puis en étant coagulée dans l'extrait alcalin ainsi clarifié par acidification, à nouveau dans le domaine isoélectrique de la protéine. Le procédé est appliqué à différentes graines oléagineuses, notamment à la farine de soya dégraissée, pour donner de la protéine purifiée dont il est affirmé qu'elle est sensiblement exempte de composés organiques du phosphore.
Sair procède suivant le brevet E.ü.A. ne 3.001.875 par extraction aqueuse de flocons de soya dégraissés à un pH de 6-10,5 pour obtenir une solution de la protéine de soya, par élimination des insolubles, par précipitation à pH 4,5 de la protéine extraite, par redissolution du caillé à pH 6 et par séchage.
Conformément au brevet E.ü.A. ne 3.397.991, Johnson forme un isolat de protéine à partir d'un mélange de farines végétales extraites en solvant comprenant de la farine de soya pour arriver à la composition en aminoacides souhaitée dans l'isolat de protéine résultant en solubilisant sous forme colloïdale la protéine dans l'eau à 66-93°C et à un pH de 9-12, en séparant les insolubles et en isolant la protéine solubilisée hors de la solution aqueuse, soit par séchage, soit par précipitation au moyen d'un acide dans le domaine isoélectrique.
Robbins et al. illustrent dans le brevet E.ü.A. n° 3.261.822 la préparation d'un isolat de protéine de soya en soumettant de la farine de soya dégraissée à une extraction par l'eau à un pH acide de 3,5-5,5, en rejetant la fraction soluble et en redis CD.YD.F - 3 - MJ 613 ) solvant le caillé de protéine dans de l'eau à pH 6-11.
Goodnight, Jr et al. mentionnent dans le brevet E.U.A. ne 4.072.670 un inconvénient fondamental des procédés déjà connus pour préparer un isolat de protéine de soya précipité par un acide, par exemple dans les brevets précités de Bolley et al., et Robbins et al. Dans l'état connu de la technique, la protéine de soya est précipitée en flocons par un acide en présence d'acide phytique. Goodnight et al. ont observé qu'un complexe stable en milieu alcalin est formé entre la protéine et 1'acide phytique dans ces circonstances, ce qui empêche la phytine de se dissocier de la protéine de soya a un pH du domaine alcalin comme indiqué dans l'article précité de McKinney et al. Goodnight et al. évitent certains des inconvénients de l'état connu de la technique en rendant le phytate insoluble à un pH de 10,6 à 14 et en le séparant des protéines avant de précipiter les protéines à leur point isoélectrique, c'est-à-dire à pH 4,5.
Les inconvénients du procédé décrit par Goodnight et al. sont que l'exposition des protéines à un pH du domaine très alcalin influence défavorablement leur valeur nutritive et que les centrifugeuses continues industrielles sont impropres à séparer le précipité de phytate en suspension très fine qui se forme à un pH du domaine très alcalin.
Les procédés de l'état connu de la technique sont efficaces jusqu'à un certain point pour abaisser la teneur en phytate des isolats de protéine de soya à l'échelle de laboratoire. Toutefois, aucun des procédés précités ne permet de produire de la protéine de soya pauvre en phytate à l'échelle économique industrielle. Aperçu de l'invention.
La présente invention a pour objet un procédé pour préparer une protéine de soya purifiée améliorée CD.YD.P - 4 - MJ 613 ayant une teneur exceptionnellement faible en acide phytique, une sapidité sensiblement améliorée, une fonctionnalité améliorée, une haute qualité alimentaire et une faible teneur en cendres. De plus, le procédé de 11 invention fait baisser sensiblement la teneur en aluminium de l'extrait de soya obtenu. La teneur en aluminium des aliments à base de soya pour le premier âge est sensiblement plus élevée que celle du lait maternel. Par conséquent, les aliments pour le premier âge préparés à partir de l'isolat de protéine de soya de l'invention sont plus acceptables du point de vue de la nutrition parce que la réduction de la teneur en aluminium rend ces aliments à base de soya plus semblables au lait maternel.
Par "isolat de protéine de soya ayant une faible teneur en phytate", il convient d'entendre aux fins de 1 ' invention une fraction de protéine de soya contenant environ 88% en poids ou davantage de protéine de soya et moins d'environ 0,3% en poids de phytates (exprimés en acide phytique équivalent) et de préférence moins d'environ 0,2 g de phytates par 100 g de protéine. L'acide phytique, qui est l'ester hexaortho-monophosphorique du myo-inositol, existe en concentrations relativement élevées dans les semences et graines oléagineuses sous la forme de phytine, qui est le sel calcium et magnésium. Dans la farine de soya, la phytine contient environ 70% du phosphore total. Dans l'hypothèse où la farine de soya dégraissée contient » 0,6% de phosphore, le calcul indique qu'il y a environ 2% en poids de phytine dans la farine de soya dégraissée. L'acide phytique forme un complexe phytate-minéraux-protéine pendant le traitement de la farine et s'est révélé abaisser la biodisponibilité de nombreux minéraux tels que le zinc, le magnésium, le calcium, le fer, etc. Pendant la préparation d'un isolat de pro- CD.YD.F - 5 - MJ 613 I , téine, une fraction importante de l'acide phytique et des phytates reste associée à la protéine sous forme de complexes. Par phytates (ou phytate), il convient d'entendre aux fins de l'invention les sels de l'acide phytique ou les complexes moléculaires de l'acide phytique avec d'autres constituants des graines de soya. Dans les isolats de protéine de soya actuellement disponibles sur le marché, comme l'Edi-Pro A (Société Ralston Purina) et 1’Ardex F (Société Archer Daniel Midland), le phytate forme jusqu'à 2-2,5% en poids de l'isolat de protéine. Il est souhaitable d'extraire le phytate de la protéine de soya parce que le phosphore du phytate reste inassimilable comme élément nutritif pour 11 être humain et nuit à 1 ' absorption des cations multivalents essentiels pour l'alimentation tels que le calcium, le fer et le zinc. Les nourrissons ne sont pas à même d'utiliser le phosphore du phytate et la présence d'une quantité relativement importante de ce phosphore inassimilable peut conduire à une minéralisation inadéquate du système osseux. Il est donc souhaitable d'annuler ou de réduire la teneur en phytates des aliments à base de soya pour le premier âge.
Sous son aspect le plus général, l'invention comprend la formation d'une solution aqueuse de protéine de soya à un pH de 8,0-10,0 et à une température supérieure à 65°C par extraction en milieu aqueux d'une matière première de soya qui contient la protéine de soya. Une source préférée pour la protéine de soya consiste en graines de soya sous forme de particules dégraissées, par exemple de la farine, de la semoule ou des flocons de soya dégraissés. Le contact préalable du soya natif avec l'acide crée une liaison entre le phytate et la protéine et rend la protéine de soya de départ traitée au point isoélectrique ou en milieu CD.YD.F - 6 - MJ 613 r, acide impropre aux fins de l'invention.
Les conditions d'extraction précitées réduisent jusqu'au minimum l'extraction des phytates et la formation des complexes protéine-phytate. Elles sensibilisent aussi les protéines à la précipitation à un pH un peu supérieur à leur point isoélectrique.
L'extrait de protéine de soya ci-dessus est clarifié par centrifugation, par filtration ou autrement et la protéine de soya est ensuite précipitée par acidification à pH 5,0-5,5, après quoi le précipité est collecté. A ce pH, le phytate s'élimine avec la phase surnageante.
Description détaillée de l'invention.
Dans un procédé industriel typique, la protéine de soya est extraite des paillettes ou de la farine de soya à un pH du domaine faiblement alcalin. La fraction protéinique principale est ensuite précipitée de l’extrait clarifié par ajustement du pH au point isoélectrique de la protéine (pH 4,5). Comme la protéine est insoluble à ce pH, elle peut être séparée par centrifugation des sucres, sels et autres composés solubles. Pour achever la purification, le caillé de protéine est lavé à l'eau au moins une fois à son pH isoélectrique, après quoi la protéine est séchée par pulvérisation, soit telle quelle, soit après solubilisation au pH de la neutralité. Dans de telles conditions, une fraction majeure du phytate contenu dans les flocons de soya forme un complexe avec la protéine et se retrouve dans l'isolat de protéine de soya. Normalement, les isolats de protéine de soya commercialisés ont une teneur en phytate de 2,0-2,5% et parfois même s'élevant jusqu'à 3% en poids.
Le traitement de la protéine de soya en milieu très alcalin (pH 11,6) peut avoir un effet défavorable sur la valeur nutritive ou l’innocuité de cette pro- CD.YD.P - 7 - MJ 613
If téine. Dans beaucoup des procédés industriels pour préparer les isolats de protéine de soya, la protéine est précipitée à un pH d'environ 4,5. Toutefois, à ce pH, il y forte interaction phytate-protéine et la majeure partie du phytate précipite avec la protéine, conduisant ainsi à un isolat de protéine de soya contenant plus de 2% de phytate.
La présente invention apporte des perfectionnements au procédé industriel déjà connu en supprimant l'exposition à une alcalinité extrême et, chose très importante, procure pour la première fois un procédé économique pour produire avec un bon rendement des isolats de protéine de soya ayant des concentrations en phytate de 0,3% en poids sinon moins.
La matière première de soya pour le procédé de l'invention est du soya particulaire dégraissé, de préférence de la farine de soya dégraissée ou des flocons de soya dégraissés. Le procédé met en jeu la formation d'une solution aqueuse de protéine de soya à un pH du domaine alcalin à partir de la matière première contenant la protéine de soya. L'invention n'est pas limitée a un type particulier de matière première ni à un mode particulier de préparation de 1 ' extrait initial de soya parce que de nombreuses modifications peuvent y être apportées suivant les fins auxquelles le procédé s'applique.
La dispersion d'extraction initiale est formée par addition, sous agitation, de 1 partie en poids de matière première contenant de la protéine de soya à 10 à 20 parties en poids d'un milieu aqueux de mise en dispersion ayant un pH de 8 à 10 et une température de plus de 65 °C. Bien qu'un pH plus élevé puisse être entretenu, il a été observé qu'à un tel pH plus élevé, la formation non souhaitable de la lysinoalanine tend à augmenter. De préférence, le pH est maintenu de 8,5 à CD.YD.F - 8 - MJ 613 t ! ; 9,5 à une température de 70eC à 80 *C et plus avantageusement de 75 eC à 80eC. Des températures supérieures à 85eC peuvent être entretenues pendant l'extraction et donner satisfaction, mais il a été observé qu'à ces températures plus élevées, la formation non soühiatable de la lysinoalanine tend à augmenter. La dispersion est maintenue au pH et à température souhaités pendant environ 1 à 15 minutes et de préférence 2 à 5 minutes.
Ensuite, la température est abaissée rapidement jusqu'à 25°C à 65eC, de préférence jusqu'à 50°C à 60°C et le plus avantageusement jusqu'à 55eC à 60°C et la dispersion est maintenue à cette température pendant encore 10 à 60 minutes et de préférence 10 à 30 minutes pour que l'extraction de la protéine de soya à partir de la matière première se poursuive.
La fraction insoluble contenant une partie sensible du phytate et des hydrates de carbone est séparée de la fraction protéinique solubilisée suivant les procédés habituels pour séparer les solides, comme la filtration ou la centrifugation.
Les intervalles de température indiqués ci-dessus comprennent les valeurs optimales pour dissocier la protéine de soya soluble du complexe avec l'acide phytique et pour maintenir les phytates et les dérivés de l'acide phytique sensiblement insolubles. Toutefois, dans certaines conditions de fabrication, d'autres intervalles de température peuvent se révéler plus appropriés, parce que la température à laquelle le phytate est insolubilisé influence sa nature physique qui influence, à son tour, ses propriétés de filtration et de centrifugation. Il est évidemment souhaitable de sélectionner empiriquement la température optimale d'insolubilisation du phytate pour un système de fabrication déterminé quelconque.
La fraction de protéine solubilisée est CD.YD.F - 9 - MJ 613 r ! ajustée à un pH de 5,0 à 5,5, de préférence à un pH de 5,2 à 5,4 et plus avantageusement à un pH de 5,3 au moyen d'un acide hydrosoluble non toxique, comme l'acide chlorhydrique, en vue de la précipitation de la protéine de soya solubilisée. Un pH supérieur à 5,5 peut être utilisé, mais tend à faire baisser le rendement en protéine de soya. La protéine est précipitée à partir de la fraction de protéine solubilisée à une température de 25 à 65eC et de préférence de 50 à 60°C.
La protéine précipitée est séparée des sucres, du phytate soluble et analogues par centrifugation ou par d'autres moyens classiques. Le pH choisi fait précipiter les protéines sensibilisées par la chaleur, mais permet au phytate soluble de s'éliminer par lavage dans la phase surnageante. Le complexe protéine-phytate ne se forme pas parce qu'à ce pH, tant la protéine que le phytate ont des charges négatives. Un tel complexe se formerait à pH 4,5 ou au-dessous.
La protéine précipitée et séparée peut être lavée à l'eau, puis elle peut être remise en suspension dans de l'eau, après quoi la suspension peut être soumise à un broyage humide avant d'être séchée par pulvérisation ou lyophilisée. En variante, le caillé de protéine peut être dissous dans une solution aqueuse diluée à un pH supérieur au domaine isoélectrique et la solution résultante peut être séchée par pulvérisation ainsi qu'il est connu de le faire pour préparer les produits appelés protéinates de soya.
Enfin, au lieu d'être séchée par pulvérisation, la protéine précipitée et séparée peut être redissoute à un pH supérieur au domaine isoélectrique et la solution de protéinate de soya résultante peut être mise en composition ensuite sans séchage pour donner des produits diététiques par combinaison avec les hydrates de carbone et lipides désirés et, si la CD.YD.F - 10 - MJ 613 i j h chose est souhaitée, des vitamines, des minéraux, des aromatisants, etc. Ceci non seulement constitue un mode opératoire commode du point de vue de la combinaison des différents ingrédients, mais de plus, donne un produit diététique liquide ayant de meilleures caractéristiques fonctionnelles, par exemple dans le domaine de la solubilité, de l'aptitude à la mise en suspension, de la viscosité, de la sensation en bouche et de la stabilité de l'émulsion.
La Demanderesse a découvert que pour l'exécution du procédé de l'invention, la température d'extraction, le pH d'extraction, le pH de précipitation, la température de précipitation et l'abondance du lavage sont importants pour arriver aux résultats souhaités. Le rendement est influencé aussi par la durée d'extraction et par le nombre de fois que la farine de soya passe par l'extraction.
EXEMPLE 1,-
On disperse 1 kg de farine de soya dégraissée dans 16 kg d'eau chaude à pH 9 et on maintient la dispersion à 75eC pendant 2 minutes. On refroidit la dispersion ensuite rapidement jusqu'à 50-60°C et on poursuit l'extraction pendant 10 à 30 minutes. On sépare la fraction insoluble par centrifugation. On ajuste le liquide surnageant à pH 5,3 avec de l’acide chlorhydrique et on sépare par centrifugation le caillé de protéine insolubilisée qui précipite. On peut laver le caillé ensuite une fois en le redispersant dans ΙΟΙ 6 kg d'eau à un pH de 5,3-5,4 et à une température de 50-60°c, puis le recentrifuger. On recueille le caillé lavé et on peut le sécher par pulvérisation tel quel ou bien le neutraliser d'abord avec un alcali approprié et le sécher par pulvérisation.
EXEMPLE 2,-
On répète le mode opératoire de l'exemple 1 à CD.YD.F - 11 - MJ 613 i six reprises, les résultats étant les suivants.
Pourcentages de phytate et rendements en isolat de protéine de soya atteints par le procédé de 11 invention
Phytate % a Rendement % b 0,02 31,3 0,03 28,9 0,05 30,5 0,05 30,9 0,11 29,9 0,07 30,4 a Les isolats de protéine de soya commercialisés ont une teneur en phytate de 2-2,5% et ces valeurs montrent que l'isolat de protéine de soya de l'invention ne contient qu*environ 1 à 5% de la quantité de phytate qu'on trouve dans les isolats de protéine de soya commer cialisés.
b Rendement en % (g d'isolat de protéine de soya pour 100 g de farine de soya).
Comparaison des teneurs en aluminium d'isolats de proteine de soya obtenus par le procédé de l'invention et d'un isolat de proteine de soya commercialisé
Echantillon Echantillon EdiPro A
1 2
Aluminium (ytg/g) 7,5 6,2 24-40
Phytate % 0,11 0,13 >2
Les résultats ci-dessus prouvent de façon évidente que le procédé de l'invention permet de CD.YD.F - 12 - MJ 613 i- t produire avec des rendements relativement bons un isolat de protéine de soya ne contenant sensiblement pas de phytates et ayant une teneur sensiblement réduite en aluminium.
EXEMPLE 3,-
On prépare des échantillons d'isolat de protéine de soya suivant le mode opératoire de l'exemple 1 en modifiant la température et le pH d'extraction de même que le pH de précipitation, comme indiqué au tableau ci-après. Celui-ci précise aussi le pourcentage de phytate dans l'isolat de protéine de soya et le rendement.
Echan- Extraction Prêcipi- Phytate Rende- tillon " tation % ment ne Temp. pH pH %
eC
1 75 9,0 5,3 0,02 31,3 2 65 9,0 5,3 0,46 32,7 3 88 9,0 5,3 0,04 29,9 4 75 8,0 5,3 0,20 28,6 5 75 10,0 5,3 0,08 32,5 6 75 9,0 5,2 0,06 31,4 7 75 9,0 5,5 0,02 29,4 8 40 8,0 5,3 0,41 28,0 9 75 9,0 4,5 0,54 31,3 10 40 8,0 4,5 1,96 32,9
Comme exposé ci-dessus, une teneur très faible en phytate peut être atteinte lorsque l'isolat de protéine de soya est préparé dans les conditions expérimentales décrites dans le présent mémoire. Une teneur moyenne en phytate peut être atteinte si certaines des particularités de l'invention sont appliquées, par exemple lorsque les conditions d'extraction CD.YD.F - 13 - MJ 613 !·* „
V
} \ industrielles sont combinées avec les conditions de précipitation en milieu acide de l'invention (échantillon 8) ou bien lorsque les conditions d'extraction de la protéine conformes à 1'invention sont combinées avec le pH typique de précipitation (échantillon 9). L’échantillon 10 est représentatif d'un isolat de protéine de soya à haute teneur en phytate préparé dans les conditions industrielles typiques.
CD.YD.P - 14 - MJ 613
Claims (7)
- 5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le milieu aqueux est l'eau et on disperse dans celle-ci la matière première contenant de la protéine de soya dans un rapport de 1 partie en poids de matière première pour 10-20 parties en poids d'eau.
- 6. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé en ce qu'on disperse 1 partie en poids de la matière première contenant de la protéine de soya dans 16 parties en poids d'eau.
- 7. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on maintient la matière première contenant de la protéine de soya dans la dispersion à 70 à 80eC pendant 1 à 15 minutes et pendant encore 10 à 60 minutes après avoir ajusté la dispersion à une température de 50 à 60°C.
- 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce qu'on ajuste la fraction soluble à un pH de 5,2 à 5,4 après avoir séparé des solides épuisés à une température d'environ 50 à 60eC.
- 9. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce qu'on ajuste la protéine de soya solide solubilisée à pH 5,3.
- 10. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la matière première de soya dégraissée consiste en flocons de soya dégraissés.
- 11. Procédé suivant la revendication 10, caractérisé en ce qu'on disperse pendant 2 minutes 1 partie en poids de la matière première dans 16 parties en poids d'eau ajustée à pH 9 et à une température de 75°C, on refroidit ensuite la dispersion jusqu'à 60°C et on l'agite pendant encore 10 minutes, on sépare ensuite la dispersion en une fraction insoluble et en une fraction soluble, on rejette la fraction insoluble et on ajuste la fraction soluble à pH 5,3 de façon à CD.YD.F - 16 - MJ 613 H Μ » « ! faire précipiter un caillé de protéine à partir de la dispersion, on sépare le caillé de protéine, on lave le caillé de protéine avec 10 parties en poids d'eau d'un pH de 5,3 et on sépare le caillé de protéine lavé de l'eau de lavage. 12, - Procédé suivant la revendication 11, caractérisé en ce qu'on sèche le caillé de protéine lavé. 13, - Procédé suivant la revendication 11, caractérisé en ce qu'on convertit le caillé de protéine lavé en une solution aqueuse d'un pH supérieur au domaine isoêlectrique de la protéine de soya. 14, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 1. 15, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 2. 16, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 4. 17, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 6. 18, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 9. 19, - Produit obtenu par le procédé suivant la revendication 11. 20, - Procédé pour préparer un isolat de protéine de soya sensiblement exempt de phytate et ayant une teneur sensiblement réduite en aluminium, caractérisé en ce qu'il comprend les stades successifs : a) de former une dispersion aqueuse d'une matière première de soya dégraissée à un pH de l'intervalle de 8-10 à une température supérieure à 65 eC pendant une durée de 1-15 minutes pour solubiliser la protéine de soya; b) d'abaisser la température jusqu'à 25-65*0 CD.YD.F - 17 - MJ 613 K i * Ψ pour une durée de 10-60 minutes? c) de séparer la dispersion en une fraction insoluble et en une fraction soluble qui comprend la protéine de soya solubilisée? d) d'ajuster la fraction soluble à un pH de 5,0 à 5,5 au moyen d'un acide hydrosoluble non toxique à une température de 25-65*C afin de faire précipiter et séparer l'isolat de protéine de soya sensiblement exempt de phytate et à teneur sensiblement réduite en aluminium. 21, - Procédé suivant la revendication 20, caractérisé en ce qu'on exécute le stade a) à un pH de 8.5 à 9,5 à 70-85°C pendant 1-15 minutes, on exécute le stade b) à 50-60eC pendant 10-60 minutes et on exécute le stade d) à un pH de 5,2 à 5,4 à 50-60°C. 22, - Procédé suivant la revendication 20, caractérisé en ce qu'on exécute le stade a) à un pH de 8.5 à 9,5 à 75-80eC pendant 2-5 minutes, on exécute le stade b) à 55-60°C pendant 10-30 minutes et on exécute le stade d) à pH 5,3 à 50-60°C. CD.YD.F - 18 - MJ 613
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