LU82587A1 - Composition appropriee pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques et son procede d'utilisation - Google Patents
Composition appropriee pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques et son procede d'utilisation Download PDFInfo
- Publication number
- LU82587A1 LU82587A1 LU82587A LU82587A LU82587A1 LU 82587 A1 LU82587 A1 LU 82587A1 LU 82587 A LU82587 A LU 82587A LU 82587 A LU82587 A LU 82587A LU 82587 A1 LU82587 A1 LU 82587A1
- Authority
- LU
- Luxembourg
- Prior art keywords
- dye
- sample
- cells
- tissues
- examining
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 10
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 5
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 claims description 3
- QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N lichenxanthone Natural products COC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(C)C=C(OC)C=C3OC2=C1 QDLAGTHXVHQKRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 claims description 3
- AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N triphenylmethane Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 6
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 5
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010003320 Carboxyhemoglobin Proteins 0.000 description 2
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 2
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 125000000853 cresyl group Chemical group C1(=CC=C(C=C1)C)* 0.000 description 2
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000001046 green dye Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006303 photolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000015843 photosynthesis, light reaction Effects 0.000 description 2
- 239000000979 synthetic dye Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 11-cis-retinal Chemical compound O=C/C=C(\C)/C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229910052779 Neodymium Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004330 Rhodopsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000820 Rhodopsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-5-iminobenzo[a]phenoxazin-9-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000978 natural dye Substances 0.000 description 1
- QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N neodymium atom Chemical compound [Nd] QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
- C12Q2304/10—DNA staining
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/37—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi
- G01N2333/39—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi from yeasts
- G01N2333/395—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi from yeasts from Saccharomyces
Description
V
V _ ,
Compositions appropriées pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques et son procédé d'utilisation."
La présente invention coneerne une composition spéciale appropriée pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques, c'est-à-dire pour y contrôler la présence de constituants particuliers. Elle concerne également le mode opératoire utilisant ladite composition.
Pour mieux comprendre le sujet et les objets de la présente invention, il est avantageux de considérer certains concepts généraux qui constituent le support théorique pour le sujet en question.
Quand une substance absorbe la lumière visible ou la lumière ultraviolette, on sait qu'un électron qu'elle con-15 tient passe de son stade de base à un stade activé "singulet".
Un croisement intersystème peut avoir lieu avec la création de stades métastables "triplets" dans lesquels l'électron reste emprisonné jusqu'à ce qu'il se produise une désactivation par une réaction de rupture de chaîne (par rencontre avec une autre molécule) ou par émission de lumière (phosphorescente) ou par d'autres procédés, tous étant relativement lents.
Ces phénomènes sont facilement remarqués dans diverses catégories de colorants naturels et synthétiques.
25
Un procédé largement utilisé pour étudier et déterminer 1 quantitativement ce phénomène est le procédé dit "photolyse instantanée", procédé dans lequel l'échantillon contenant la substance à étudier est soumis à la radiation d'une source de lumière pulsée (éclair) qui fait passer un certain nombre de molécules colorées à l'état d'électrons activés.
- Le développement du procédé mentionné ci-dessus est ob servé en décelant l'absorption d'un faisceau de lumière monochromatique continu par l'échantillon, cette absorption étant enregistrée en fonction du temps avec un dispositif électronique approprié (oscilloscope, etc.).
Ce type de procédé s'est considérablement et qualitati-
__ __ — _J_ J 4 Xv.»» -__^ Λ -ί ____Λ A
2 pulsés comme la source de perturbation.
Il est connu d'utiliser des procédés du type ci-dessus pour étudier et caractériser les tissus et/ou les liquides biologiques, à l'exception notable du cas dans lequel le tissu 5 à examiner contient une grande quantité de substances naturelles photosensibles, comme dans le cas des pigments de la photosynthèse chlorophyllienne, la rhodopsine et la carboxy-hémoglobine.
Sous ce rapport, dans le cas d'un tissu qui est seulement 10 légèrement coloré, l'éclair subira de préférence un processus de diffusion plutôt qu'une absorption. Cependant, le tissu peut être coloré avec des colorants synthétiques comme cela est fait couramment dans les procédés optiques d'observation au microscope. Sous ce rapport, le fait que le colorant teint un 15 tissu signifie qu'il se lie à ce tissu d'une certaine façon.
Toutefois, on se heurte au moins à deux difficultés principales en utilisant les techniques de photolyse instantanée dans ce contexte pour les échantillons possédant un fort pouvoir de diffusion.
20 Premièrement, étant donné que les concentrations du colorant lié sont plutôt faibles, il n'est pas certain que l'on puisse obtenir des signaux significatifs en utilisant ce procédé. Deuxièmement, on ne peut pas prévoir à l'avance si les signaux dus aux absorptions caractérisant des états 25 métastables du colorant seront différents, dans le cas d'un colorant lié à un tissu particulier, de ceux dus aux molécules en solution ou liées différemment.
Les auteurs de la présente invention ont découvert d'une façon tout à fait surprenante qu'il était possible de surmonter - - 30 ces deux difficultés en préparant des produits d'addition du constituant du tissu et/ou du liquide biologiques concernés avec un colorant qui est synthétique ou tout au moins n'existe pas dans les fluides ou solutions physiologiques, en mettant en contact un échantillon à examiner avec une composition qui 35 constitue le premier objet de la présente invention, et qui J est constituée par le colorant, un milieu compatible avec le ] tissu et/ou le liquide biologiques et une substance capable ( ν' “I n _ I _· -i n -t 1 . 1 1 ^ -I _ 3 rencontre (extincteur).
Comme on vient de la dire, la composition gui forme le produit d’addition avec le constituant physiologique est formée par (a) un colorant choisi parmi la famille des 5 azines, oxazines, acridines ou du xanthène, ou bien parmi certains colorants solubles dans 1'eau de la famille des diazoïques ou du triphénylméthane; (b) un milieu compatible avec le constituant physiologique et constitué par une solution aqueuse contenant divers sels tels que NaCl, CaCl2 10 et sels analogues, en une concentration telle, qu'elle soit sensiblement isotonique avec le composant physioloqique (de 0,1 à 1% en poids) et d'autres composants en proportions plus petites, tels que glucose, mélanges tampons, etc. sont ajoutés afin de conditionner la vitalité des cellules présentes, le 15 pH du milieu pouvant varier jusqu'à un certain point autour de la neutralité (pH de 4,5 à 9,5) et de petites quantités de solvant organique pouvant être ajoutées afin d'augmenter la solubilité du colorant? et (c) un extincteur (c'est-à-dire une substance provoquant rapidement la désactivation des 20 molécules du colorant quand les deux molécules se rencontrent) qui peut être du iodure de potassium (ou de sodium) (environ de -2 10 a 0,2 M) , ou bien le sel. d'un métal de transition para- _2 magnétique (de 10 à 0,2 M de Co, Fe, Ni, choisi sous la forme de CoCl2 ou produits analogues), éventuellement en-25 présence d'une substance déchélation telle que l'acide éthylênediaminotétracétique (EDTA); ou enfin l'extincteur utilisé peut être une quantité définie d'oxygène moléculaire (02) dissous dans l'eau (par exemple en saturant la solution de l'échantillon avec de l'oxygène à une température déterminée). 30 La composition établie précédemment est utilisée pour réaliser un procédé d'examen pour des tissus et/ou des liquides biologiques, procédé qui a son tour constitue le second objet de la présente invention.
Ce procédé consiste à traiter d'abord l'échantillon de 35 substance à examiner avec la composition, à irradier la substance obtenue avec un premier rayonnement de lumière • pulsée, .à faire traverser l'échantillon ainsi traité par un ’ ' 4 ί * l'intensité optique de sortie de ce dernier en fonction du ! temps.
Les auteurs de la présente invention ont découvert de cette façon que les signaux dus à l'absorption des états 5 xnêtastables des molécules de colorant liées dans les cellules à examiner sont nettement différents en ce qui concerne la variation d'amplitude et/ou du temps, des signaux dus aux molécules en solution ou provenant d'autres cellules.
Le procédé réussit ainsi ä caractériser chacune des 10 cellules présentes dans le tissu.
Ce procédé a été trouvé particulièrement approprié pour l'examen des cultures de cellules de fermentation, dans la distinction des cellules mortes,des cellules vivantes, et des cellules de levure^des cellules bactériennes; et dans 15 l'analyse quantitative des leucocytes du sang.
Le procédé peut d'une part fournir des mesures automatiques (demandant juste quelques secondes) en remplaçant les procédés classiques longs et ennuyeux nécessaires dans le cas du microscope optique. Il peut également réussir à révéler 20 des caractéristiques non visibles a l'oeil nu, concernant 1'intëraction spécifique moléculaire du colorant avec certains constituants des cellules.
Par conséquent, le procédé peut être utilisé pour des examens qui ne pouvaient pas être réalisés jusqu'à présent 25 ou qui n'étaient possibles qu'en utilisant des procédés bien plus compliqués. En particulier, il est facile de prévoir son utilisation dans la diagnose des tumeurs à cause de la possibilité d'une détermination quantitative de 11intéraction ADN-colorant.
30 La figure 1 est une représentation schématique, à titre d'exemple non limitatif, de l’appareil utilisé par les auteurs ’ de la présente invention dans ces examens.
est la lampe à vapeur de mercure et $2 est le faisceau laser. L^, , L^, L^ sont des lentilles de quartz. , M^ sont 35 des miroirs et , D2 sont des détecteurs de l'état solide qui j détectent l'impulsion du laser. MC est le monochromateur à Jk. grande luminosité. S indique la position de l'échantillon et 4 _ ΏΜ ûcf 1 Û ΤΛ Τλ »Λ 4* m ί ί 1 ΐ τλ T η ο n 4- ûn v* T λ c· 4* τ 1 4* v e· /·-» 4- Ί η η Λ -î -5 r\ rtm λ r* 5 ne sont pas montrés pour plus de clarté.
Le faisceau de lumière puls'ée est obtenu à partir d'un laser ä Néodyme, notamment d'un laser du commerce "YAG" (Chromatix mod. 1000) qui émet des impulsions de lumière de 5 0,1 à 0,5 mJ d'environ 150 ns en longueur et avec une fréquence de répétition d'environ 50 Hz.
La couleur du laser varie du bleu [\= 473 nnf) au proche infra-rouge. Le faisceau d'observation est produit par une lampe à vapeur de mercure à haute pression, équipée de filtres 10 appropriés. Les deux faisceaux sont focalisés dans une zone de l'échantillon d'environ 0,2 mm de diamètre d'une façon telle, qu'ils forment un angle d'environ 15° entre eux. La cellule à échantillon a une épaisseur de 2 mm. La lumière provenant de la lampe traverse un monochromateur à grande ouverture et 15 est envoyée à un photomultiplicateur ("Philips XP 1113"). Le signal de sortie électrique du photomultiplicateur est enregistré continuellement sous forme de la valeur moyenne et est également envoyé à un pré-amplificateur avec une bande passante comprise entre 0,5 KHz et 30 MHz puis amplifié, 20 enregistré dans des mémoires numériques et stocké dans un petit calculateur ("LABEN 70").
Le signal obtenu à partir d'une simple impulsion est enregistré et ajouté à ceux de centaines d'impulsions analogues. Donc, une moyenne des signaux est obtenue dans 25 laquelle le bruit est réduit d'un facteur supérieur à 10 par rapport au signal provenant d'une seule impulsion. Etant ' donné que la fréquence de répétition des impulsions est relativement élevée, le résultat des mesures est obtenu en exactement quelques secondes. Le stockage dans le calculateur ' 30 permet de reproduire et de traiter le signal en utilisant un ruban magnétique, des tracteurs de courbe, etc.
Le signal stocké contient une quantité considérable de données telles que l'amplitude de l'absorption à diverses longueurs d'onde d'observation et sa variation avec le temps.
35 Si cette amplitude est V ( /\, t) , il est généralement possible de fixer A et t de façon telle que : •v V( A , t ) = k, + k. n , oü n est le nombre de cellules cor-ο o 1 2 c c 6 * et k2 sont des constantes pouvant être obtenues par un processus d'étalonnage, c'est-à-dire en introduisant un échantillon de composition connue dans l'appareil.
La présente invention est illustrée par les exemples 5 descriptifs et non limitatifs ci-après.
EXEMPLE 1
Examen de culture de cellules. Essai de vitalité.
Cet examen est appliqué à des cultures de levure du type Saccharomyces, telles que le Saccharomyces lactis, Saccharomyces fragilis ou levures analogues.
L'essai donne une mesure quantitative du nombre de cellules mortes présentes dans la fermentation.
Procédé expérimental. On mélange l'échantillon de cellules a . -4 examiner avec un mélangé contenant 30 M de colorant bleu 15 "Trypan Blue", simultanément avec;par litre, 0,1 g de NaN^, 6,8 g de KK^ PO^ réglé à pH 7,2 avec KOH, et 8,76 g de NaCl.
On ajoute du CoCl^ à une concentration finale de 10-^ M en présence d'une concentration égale de EDTA. Le mélange est agité pendant quelques minutes, puis mesuré avec l’appareil décrit ci-dessus.
j L'échantillon est irradié dans une cellule de 2 mm en utilisant le laser pulsé à Λ = 659 nm, et les variations de l'absorption à A = 405 et 435 nm sont observées après 1 jis de retard provenant de l'impulsion laser. L'étalonnage est néces-25 saire afin de mesurer l'amplitude observée par rapport à l'amplitude de l'impulsion laser, l'alignement optique, etc. Dans ce but, on utilise une suspension dans laquelle les cellules de levure sont comptées puis toutes tuées par ébullition pendant quelques minutes.
30 Résultats :
Sur la figure 2, les ordonnées représentent l'absorption temporaire (en millivolts) observée à A = 435 nm quand une suspension contenant des cellules de Saccharomyces lactis 25 partiellement tuées et du "Trypan Blue" est soumise à un | rayonnement pulsé à 659 nm comme décrit précédemment. Les i S- abscisses représentent la durée en microsecondes (ps) .
7 Γ.
\
Sur la figure 3, les ordonnées représentent l'amplitude temporaire (en mV) observée après une ^is depuis le début de l'impulsion laser. Les abscisses représentent le pourcentage de cellules mortes dans la suspension lu par des moyens clas-5 siques, c'est-à-dire par comptage au microscope optique.
La corrélation est très bonne et permet de mesurer automatiquement le nombre de cellules mortes en exactement quelques secondes. La sensibilité pouvant être obtenue peut varier 3 autour de 100 à 1 000 cellules/mm , c'est-à-dire moins de 1% 10 de la population totale présente dans le bouillon.
EXEMPLE 2
Examen des cultures de cellules. Contamination par diverses souches.
La même composition utilisée pour le mélange réactionnel 15 de l'exemple 1, contenant le colorant bleu "Trypan Blue", permet de distinguer divers types de cellules dans une fermentation. Pour deux levures différentes du type Saccharomyces, l'amplitude temporaire observée à Λ = 435 nm varie différemment avec le temps, par exemple la demi-vie (c'est-à-dire le temps 20 durant lequel l'amplitude temporaire est réduite d'un facteur de 2) est de 2,3 jjls pour le Saccharomyces lactis et de 1,7 με pour le Saccharomyces fragilis.
On n'observe pas d'amplitude temporaire dans les cellules bactériennes mortes du type Arthrobacter. Le procédé est par 25 conséquent approprie pour examiner la contamination de levures dans des cultures bactériennes, ou pour différencier diverses levures. Dans ce but, l'échantillon à analyser est prélevé, toutes les cellules présentes sont tuées par ébullition pendant quelques minutes, l'échantillon est ensuite traité avec le 30 mélangé contenant le colorant et on mesure l'amplitude et le temps d'affaiblissement de l'amplitude temporaire enregistrée à λ = 435 nm quand l'échantillon est irradié avec des impulsions de A = 650 nm.
35 EXEMPLE 3 J Mesure de la quantité d'ADN présente dans les tissus.
Le procédé est applicable pour la mesure quantitative des Ώ Π i Λ <=* <=; nnnl P i nnpQ nrpccmf c Hanc Toc rrl ûc humiric • · 8 ι· t * globules blancs du sang de diverses compositions sont utilisés pour cet essai.
Des échantillons contenant divers globules renfermant des quantités facilement mesurables d'ADN sont obtenus à partir 5 de sang humain traité à l'héparine par des procédés connus, comprenant la centrifugation dans un gradient de Ficoll. Un gradient de Ficoll linéaire de 18 % à 15 % est utilisé, les globules ' stratifiés sur le gradient sont centrifugés pendant 5 minutes â 50 x g et pendant 7 minutes à 250 x g. Diverses 10 fractions sont obtenues qui, une fois purifiées, contiennent des lymphocytes, des monocytes et des granulocytes avec de petites quantités de corpuscules rouges. Les globules blancs ainsi obtenus sont comptés et analysés sur des lamelles au microscope en utilisant les procédés classiques. Ceci permet 15 d'évaluer l'ADN contenu dans l'échantillon quand le taux moyen de chromatine dans chaque type de globule est connu.
Les diverses fractions obtenues sont colorées les unes et les autres séparément puis mélangées entre elles dans des proportions connues.
20 Afin de les colorer, les globules sont centrifugés et mis -5 en suspension dans une solution contenant 5 x 10 M d'Orangé
d'acridine dans une solution physiologique contenant 0,05 M
_2 d'un tampon phosphate a pH 7,2 et contenant également 10 M de CoCl2 et ΙΟ-2 M de EDTA.
25 La suspension obtenue est irradiée par impulsions en utilisant l'appareil décrit plus haut â une longueur d'onde comprise entre A = 473 etA = 532 nm.
| , La suspension est observée avec une lumière continue a λ = 435 nm.
i 30 Le même procédé est suivi pour un échantillon contenant les mêmes réactifs mais sans le colorant. Cette dernière opération est nécessaire parce que de petites quantités de carboxy-hémoglobine présentes pourraient contribuer à l'absorption temporaire.
35 L'absorption temporaire obtenue en utilisant l'échantillon I sans colorant est soustrait de celle obtenue avec les mélanges *1 complets, pour obtenir les résultats montrés sur la figure 4.
* 9
Les ordonnées représentent l'amplitude de l'absorption temporaire (en millivolts), et les abscisses représentent le temps en ^us.
La variation de l'absorption temporaire est observée à 5 A= 435 nm quand on irradie une suspension contenant des granulocytes humains et de l'orangé d'acridine à λ = 532 nm comme décrit précédemment.
L'amplitude de l'impulsion de 1 yus après irradiation avec le laser est proportionnelle au taux d'ADN de l'échantillon 10 comme le montre la figure 5. Sur cette figure, l'amplitude de l'absorption temporaire (en mV) est montrée en fonction du taux d'ADN (exprimé en mg/1) pour divers types de globules, notamment les lymphocytes et les monocytes en diverses proportions, ou les monocytes seuls, ou les granulocytes 15 seuls, ou tous les leucocytes.
Les échantillons contiennent diverses quantités d'érythrocytes, et proviennent de divers donneurs.
Le fait que cette proportionnalité soit obtenue pour divers taux de différents globules prélevés sur divers 20 individus permet de supposer que le procédé peut également être appliqué d'une façon fiable aux tissus biologiques d'autre origine, tels que les tissus épitheliaux, etc.
La mesure du taux d'ADN en même temps que la mesure du nombre de globules présents dans le tissu pourrait être ' 25 importante dans la diagnose initiale des états cancéreux.
EXEMPLE 4
Caractérisation des leucocytes dans le sang humain.
Cette caractérisation est appliquée à des échantillons de sang qui a été rendu non-coagulant.
Elle fournit une évaluation quantitative du nombre total de leucocytes et du nombre de granulocytes, de monocytes et de lymphocytes.
Mode opératoire. A un échantillon de sang veineux humain, qui a été rendu non coagulant avec de l'héparine en une concen- | tration de 0,1 à 0,2 mg/ml de sang, ou avec le sel de sodium ;l de l'EDTA en une concentration de 1 mg/ml, on ajoute une
? nnl 11+· i r\r» λλυι+- 4- *3 C. <2- Λ ( r^n ι Λ r τλ η 1 Οηη 1 α ί V iO
10 250 000) jusqu'à ce qu'on ait une concentration finale de 1,5 %# le mélange étant ensuite maintenu dans un thermostat à 37°C pendant 20 minutes. Le liquide surnageant est éliminé et contient les familles de globules blancs et environ 1 % 5 de globules rouges, puis on ajoute de l'eau distillée afin de ramener la concentration en sel à 0,25 /oo. Après exactement 30 secondes, le caractère isotonique est rétabli en ajoutant une solution aqueuse contenant 3,5 %0 de NaCl. Les globules sont recueillis par centrifugation à 400*g pendant 5 minutes 10 et sont ensuite délayés dans une solution de NaCl à 0,9 % ou dans un tampon phosphate 0,1 M de pH 7,1 en un volume tel, 3 qu'il y ait 8000 lymphocytes environ par mm . La récupération des leucocytes est d'environ 95 % avec une composition en % qui ne peut pas être distinguée de celle du sang; les globules 15 rouges qui restent sont.dans un rapport d'environ 1/1 avec les globules blancs. Les mesures sont effectuées sur 200 microlites d'une suspension de globules, dans une cellule ayant un trajet optique de 2 mm,où ont été ajoutés un colorant et un extincteur. Les globules peuvent être fixés au préalable.
20 Plus particulièrement, on utilise les techniques de coloration suivantes: A la suspension de globules, on ajoute l'extincteur
CoCl -EDTA plus le colorant vert "Brillant Green" en les con- 1 -2 -4 centrations finales de 10 et 9.10 M, respectivement.. Une 25 autre technique de coloration consiste à fixer les globules avec de l'éthanol à une concentration finale de 12 °/ζο . Après 1 minute, on ajoute le CoCl^-EDTA et le colorant bleu "Brillant Cresyl Blue" en les concentrations finales de -2 -5 10 et 5. 10 M, respectivement. Un troisième procédé de 30 coloration qui s'est révélé utile est identique au second décrit, dans la présente demande, mais le colorant bleu est le "Nile Blue" à 8 . 10_5M.
Les échantillons ainsi obtenus sont ensuite irradiés avec le système laser à impulsions, décrit au début de la présente 35 demande, à /λ = 659 nm, et sont observés ensuite avec une I lumière monochromatique à A = 435 nm et A = 547 nm.
Avec deux techniques de coloration différentes, on peut : .· ^ ί n r· i /-vVv4- λ*-» A v en i -I r- 4- ΛτηΎΛΛν* -î vûct rï 1 f fûrûn f OC ΛλΠ 4" * ‘ * 11 avec les amplitudes à mesurer.
Résultat : L'observation des échantillons sanguins ainsi traités correspond à celle obtenue par les procédés classiques, 5 c'est-à-dire par l'observation au microscope des raies du sang complet. Sur les figures 6 et 7, on a reporté à titre d'exemple quelques-unes de ces absorptions temporaires. Plus particulièrement, la figure 6 montre l'amplitude (en milli- volts) observée à Λ = 547 nm dans l'échantillon coloré avec ^ le colorant bleu "Brillant Cresyl Blue" et fixé avec de l'éthanol : en abscisses, est porté le temps en microsecondes.
L'amplitude Δ V ainsi mesurée sur la figure entre le maximum et la valeur après de longues durées est proportionnelle au nombre total de monocytes. Il faut remarquer que dans cet 15 exemple, la présence de Co-EDTA est essentielle afin de déterminer la disparition des signaux provenant des autres globules ou des colorants libres. Sur la figure 7, sont reportées les absorptions temporaires observées à Λ - 435 nm dans l'échantillon coloré avec le colorant vert "Brillant Green" (les ordon- 20 nees sont en millivolts et les abscisses en microsecondes, comme dans le cas précédent). La largeur du palier correspondant à l'activation de l'état triplet du colorant, qu'on suppose lié au noyau cellulaire, comme on peut le voir au microscope, peut être en bonne corrélation avec le nombre total de léuco-^ cytes.
La tendance à l'affaiblissement est, de plus, à deux phases, comme on peut le.voir sur le dessin. Le stade rapide qui est communément mesuré aussi bien àΛ. = 435 nm qu'à X = 547 nm, est finalement proportionnel au nombre de • 30 lymphocytes. Ainsi, on a déterminé les trois paramètres indépendants (nombre de lymphocytes (1), nombre de monocytes (m) et nombre de granulocytes (g), le nombre total de leucocytes (n) étant égal à la somme des trois, c'est-à-dire η = 1 + m + g.
35
Il faut remarquer que une seule petite fraction de l'in-J formation contenue dans le tracé enregistré pour les absorp-tions temporaires observées a été utilisée pour ces déter- 1 k · i I j j 1 * 12 i; • d'affaiblissement des stades triplet et les rapports entre les amplitudes à différentes valeurs de Λ , pour effectuer des contrôles d'autre nature tels que par exemple pour indiquer la présence de cellules pathologiques.
* 1 .
* j i ! j 1 i
Claims (2)
1. Composition appropriée pour l'examen des constituants des tissus et/ou liquides biologiques, caractérisé par le v 5 fait qu'elle est constituée par : a) un colorant choisi parmi les familles du xanthène, des azines, des oxazines ou des acridines, ou bien parmi des colorants solubles dans l'eau de la famille des diazoïques ou du triphénylméthane; • * b) un milieu compatible avec le tissu et/ou le liquide biologiques; c) une substance pouvant désactiver rapidement les molécules de colorant quand elle les rencontre (c'est-à-dire un extincteur). 15
2. Composition selon Ja revendication 1, caractérisée par le fait que le colorant est présent à une concentration -5 -4 comprise entre 10 et 10 moles. 1 Procédé pour l'examen des tissus et/ou des liquides 20 biologiques, caractérisé par le fait qu'il consiste à traiter l'échantillon concerné avec une composition comprenant : a) un colorant choisi parmi les familles du xanthène, des azines, des oxazines ou des acridines, ou bien des colorants solubles dans l'eau de la famille des diazoïques 25 ou du triphénylméthane; b) un milieu compatible avec le tissu et/ou le liquide * biologiques; c) une substance capable de désactiver rapidement les molécules de colorant quand elle les rencontre, (c'est-à-dire - 30 un extincteur), puis à irradier le mélange résultant avec un premier faisceau de lumière pulsée, et à faire passer un second faisceau de lumière monochromatique à travers l'échantillon ainsi traité, et à analyser l'intensutô optique de sortie de ce second 35 faisceau en fonction du temps. ^ ?
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT25568/79A IT1123573B (it) | 1979-09-10 | 1979-09-10 | Composizione adatta al controllo di tessuti e/o liquidi biiologici e metodo impiegante la stessa |
| IT2556879 | 1979-09-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LU82587A1 true LU82587A1 (fr) | 1981-02-02 |
Family
ID=11217121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LU82587A LU82587A1 (fr) | 1979-09-10 | 1980-07-04 | Composition appropriee pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques et son procede d'utilisation |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4331759A (fr) |
| JP (1) | JPS5640740A (fr) |
| AT (1) | AT371837B (fr) |
| AU (1) | AU536677B2 (fr) |
| BE (1) | BE884217A (fr) |
| BR (1) | BR8004357A (fr) |
| CA (1) | CA1150603A (fr) |
| CH (1) | CH648125A5 (fr) |
| DE (1) | DE3026185C2 (fr) |
| DK (1) | DK157264C (fr) |
| ES (1) | ES8106057A1 (fr) |
| FI (1) | FI72611C (fr) |
| FR (1) | FR2466019A1 (fr) |
| GB (1) | GB2059582B (fr) |
| IE (1) | IE50002B1 (fr) |
| IT (1) | IT1123573B (fr) |
| LU (1) | LU82587A1 (fr) |
| NL (1) | NL8003987A (fr) |
| NO (1) | NO153869C (fr) |
| SE (1) | SE442347B (fr) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4707454A (en) * | 1981-08-10 | 1987-11-17 | Bio-Diagnostics, Inc. | Fluorescent chlorophyll labeled assay reagents |
| US4906561A (en) * | 1981-09-14 | 1990-03-06 | Thornthwaite Jerry T | Nuclear isolation medium and procedure for separating cell nuclei |
| US4622291A (en) * | 1984-06-11 | 1986-11-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method and device for quantitative end point determination in immunofluorescence using microfluorophotometry |
| US4707451A (en) * | 1985-09-18 | 1987-11-17 | Becton, Dickinson And Company | Detection of reticulocytes |
| EP0226272B1 (fr) * | 1985-11-01 | 1991-03-06 | Becton, Dickinson and Company | Détection de réticulocytes |
| US5319079A (en) * | 1986-05-15 | 1994-06-07 | Beckman Instruments, Inc. | Process for terminal substituting of a polynucleotide |
| US5171669A (en) * | 1987-05-04 | 1992-12-15 | Eastman Kodak Company | Cobalt(III) reagents in combination with water soluble polymers |
| US5141855A (en) * | 1986-07-28 | 1992-08-25 | Eastman Kodak Company | Signal amplifying cobalt (III) redox reagents and methods for the determination of analytes in aqueous fluids |
| US4963478A (en) * | 1988-07-05 | 1990-10-16 | Immucor, Inc. | Article for preforming immunological assays utilizing organic dyes and method for producing and utilizing same |
| US5413915A (en) * | 1988-07-12 | 1995-05-09 | Resource Technologies Group, Inc. | Method and sensor for detecting toxic chemical exposure effects and metabolic activation of carcinogenic chemical agents |
| FR2636646B1 (fr) * | 1988-09-19 | 1990-12-21 | Tepral Sa | Procede de detection specifique et de denombrement des micro-organismes dans des produits filtrables |
| JP2595423B2 (ja) * | 1992-08-05 | 1997-04-02 | 大和ハウス工業株式会社 | 無溶接トラス |
| US5407794A (en) * | 1992-09-08 | 1995-04-18 | Cytocolor Inc. | Oxazine stained lymphocytes and method |
| WO1995030767A1 (fr) * | 1992-10-22 | 1995-11-16 | The Center For The Improvement Of Human Functioning International, Inc. | PROCEDE DE DETECTION DU PATHOGENE INTESTINAL $i(DIENTAMOEBA FRAGILIS) |
| US5610027A (en) * | 1992-10-30 | 1997-03-11 | Micro-Med, Inc. | Microphoto lysis-anlaysis process to measure cell characteristics |
| DE69535413T2 (de) * | 1994-10-20 | 2007-11-29 | Sysmex Corp. | Reagenz und Verfahren zur Analyse fester Bestandteile im Harn |
| JP4509607B2 (ja) * | 2004-03-17 | 2010-07-21 | シスメックス株式会社 | 細胞分析装置および方法 |
| US20090042241A1 (en) | 2007-04-06 | 2009-02-12 | California Institute Of Technology | Microfluidic device |
| EP2932268A4 (fr) | 2012-12-17 | 2016-10-19 | Leukodx Ltd | Systèmes et méthodes de détection d'un état biologique |
| US10610861B2 (en) | 2012-12-17 | 2020-04-07 | Accellix Ltd. | Systems, compositions and methods for detecting a biological condition |
| US20140170678A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-19 | Leukodx Ltd. | Kits, compositions and methods for detecting a biological condition |
| CN116990101B (zh) * | 2023-09-27 | 2023-12-15 | 四川大学华西医院 | 一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT630626A (fr) * | 1959-05-15 | |||
| US3298789A (en) * | 1964-12-14 | 1967-01-17 | Miles Lab | Test article for the detection of glucose |
| US3682783A (en) * | 1971-03-15 | 1972-08-08 | Photovolt Corp | Method for coulometric karl fischer titration |
| US4146604A (en) * | 1973-05-31 | 1979-03-27 | Block Engineering, Inc. | Differential counting of leukocytes and other cells |
| US4094745A (en) * | 1973-06-22 | 1978-06-13 | John Scholefield | Method of staining microscopic organisms |
| US3899297A (en) * | 1973-12-19 | 1975-08-12 | Block Engineering | Biological staining technique and mixture thereof |
| US4174384A (en) * | 1975-06-30 | 1979-11-13 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4207469A (en) * | 1975-08-02 | 1980-06-10 | Sir Howard Grubb Parsons and Company Ltd. | Analysis of emulsions and suspensions |
| US4233402A (en) * | 1978-04-05 | 1980-11-11 | Syva Company | Reagents and method employing channeling |
| US4219337A (en) * | 1978-04-27 | 1980-08-26 | The Medical College Of Wisconsin | Assay for proteins and polypeptides |
| US4225783A (en) * | 1978-07-24 | 1980-09-30 | Abbott Laboratories | Determination of microbial cells in aqueous samples |
| US4225669A (en) * | 1979-04-27 | 1980-09-30 | Melnick Joseph L | Staining and analysis of bacteria |
| JPS55116259A (en) * | 1979-03-01 | 1980-09-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | Microimmunoassay method |
| US4252783A (en) * | 1979-06-18 | 1981-02-24 | Syva Company | Reducing fluorescent background in fluorescent immunoassays |
| US4336029A (en) * | 1980-08-15 | 1982-06-22 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Method and reagents for quantitative determination of reticulocytes and platelets in whole blood |
-
1979
- 1979-09-10 IT IT25568/79A patent/IT1123573B/it active
-
1980
- 1980-06-25 AU AU59615/80A patent/AU536677B2/en not_active Ceased
- 1980-06-30 DK DK282480A patent/DK157264C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-07-03 US US06/165,787 patent/US4331759A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-07-04 LU LU82587A patent/LU82587A1/fr unknown
- 1980-07-08 BE BE0/201327A patent/BE884217A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-07-08 FR FR8015195A patent/FR2466019A1/fr active Granted
- 1980-07-08 NO NO802050A patent/NO153869C/no unknown
- 1980-07-08 IE IE1417/80A patent/IE50002B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-07-08 GB GB8022264A patent/GB2059582B/en not_active Expired
- 1980-07-08 ES ES493614A patent/ES8106057A1/es not_active Expired
- 1980-07-09 AT AT0357580A patent/AT371837B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-07-09 SE SE8005060A patent/SE442347B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 NL NL8003987A patent/NL8003987A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-07-10 CH CH5304/80A patent/CH648125A5/it not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 BR BR8004357A patent/BR8004357A/pt not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 DE DE3026185A patent/DE3026185C2/de not_active Expired
- 1980-07-10 FI FI802211A patent/FI72611C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 JP JP9337680A patent/JPS5640740A/ja active Granted
- 1980-07-14 CA CA000356137A patent/CA1150603A/fr not_active Expired
-
1982
- 1982-02-23 US US06/351,582 patent/US4376820A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LU82587A1 (fr) | Composition appropriee pour l'examen de tissus et/ou de liquides biologiques et son procede d'utilisation | |
| Lakowicz et al. | Fluorescence lifetime-based sensing of pH, Ca2+, K+ and glucose | |
| FR2467402A1 (fr) | Methode d'essai biologique | |
| Oldham et al. | Molecular fluorescence, phosphorescence, and chemiluminescence spectrometry | |
| Khan et al. | Easily prepared ruthenium-complex nanomicelle probes for two-photon quantitative imaging of oxygen in aqueous media | |
| JPH01500928A (ja) | 全血液の試料中の分析物のレベルを決定する方法および装置 | |
| Eid et al. | Fluorescent sensors | |
| EP0054001A1 (fr) | Méthode pour observer le développement de micro-organismes | |
| Gryczynski et al. | Two-photon excitation by the evanescent wave from total internal reflection | |
| Flora et al. | Comparison of formats for the development of fiber-optic biosensors utilizing sol–gel derived materials entrapping fluorescently-labelled protein | |
| Seyedi et al. | Fluorescence emission quenching of RdB fluorophores in attendance of various blood type RBCs based on Stern-Volmer formalism | |
| JPH02501975A (ja) | リンパ球による膜電位鋭敏物質の分差結合 | |
| EP0099309A2 (fr) | Néphélomètre à laser perfectionné pour la détection des antigènes et des anticorps | |
| Warner et al. | Molecular fluorescence, phosphorescence, and chemiluminescence spectrometry | |
| Garzella et al. | A red-green photochromic bacterial protein as a new contrast agent for improved photoacoustic imaging | |
| RU2787689C1 (ru) | Оптический сенсор для тушения флуоресценции оптически активных аминокислот тромбоцитов и способ его получения | |
| Hashimoto et al. | Measurement of cytoplasmic viscosity by fluorescence polarization in phytohemagglutinin-stimulated and unstimulated human peripheral lymphocytes. | |
| DE19950262C2 (de) | Verfahren zur Durchführung eines durchflusszytometrischen Phagozytosetests | |
| FR2627286A1 (fr) | Procede et appareil pour l'examen d'un echantillon en immunologie | |
| US20100028853A1 (en) | Optical determination of living vs. non living cells | |
| Lakowicz et al. | Intensity measurements in scattering media | |
| Raudsepp et al. | Spatiotemporal studies of lipid oxidation by optical microscopy | |
| Carbone et al. | Physico-chemical properties of 2, 6-TNS binding sites in squid giant axons: Involvement of water molecules in the excitation process | |
| US20070141597A1 (en) | Biomimetic Biodetector of Toxins, Viruses, Bacteria, and Biological Factors | |
| de Grauw et al. | Two-photon lifetime imaging of blood and blood vessels |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DT | Application date | ||
| TA | Annual fee |