FI72611B - Blandning som laempar sig foer testning av biologiska vaevnader och/eller vaetskor och foerfarande foer anvaendning av denna blandning. - Google Patents
Blandning som laempar sig foer testning av biologiska vaevnader och/eller vaetskor och foerfarande foer anvaendning av denna blandning. Download PDFInfo
- Publication number
- FI72611B FI72611B FI802211A FI802211A FI72611B FI 72611 B FI72611 B FI 72611B FI 802211 A FI802211 A FI 802211A FI 802211 A FI802211 A FI 802211A FI 72611 B FI72611 B FI 72611B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- chloride
- blandning
- diethylamino
- concentration
- mixture
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 31
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 20
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001664 diethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- -1 NaCl Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 4
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims 3
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 claims 3
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims 1
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 claims 1
- 125000001639 phenylmethylene group Chemical group [H]C(=*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 11
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-5-iminobenzo[a]phenoxazin-9-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000979 synthetic dye Substances 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 11-cis-retinal Chemical compound O=C/C=C(\C)/C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 0.000 description 1
- 108010003320 Carboxyhemoglobin Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004330 Rhodopsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000820 Rhodopsin Proteins 0.000 description 1
- SXHPFYVQFLHMGY-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)([O-])[O-].[NH4+].C(C)C(C)N.[NH4+] Chemical compound S(=O)(=O)([O-])[O-].[NH4+].C(C)C(C)N.[NH4+] SXHPFYVQFLHMGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000253911 Saccharomyces fragilis Species 0.000 description 1
- 235000018368 Saccharomyces fragilis Nutrition 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003373 anti-fouling effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000003473 flash photolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000978 natural dye Substances 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000006303 photolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000015843 photosynthesis, light reaction Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000001454 recorded image Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical class C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2304/00—Chemical means of detecting microorganisms
- C12Q2304/10—DNA staining
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/37—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi
- G01N2333/39—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi from yeasts
- G01N2333/395—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi from yeasts from Saccharomyces
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
1 72611
Seos, joka soveltuu biologisten kudosten ja/tai nesteiden testaamiseen,., ja tämän seoksen käyttö-menetelmä
Blandning som lämpar sig för testning av biologiska vävnader och/eller vätskor och förfarande för an-vändning av denna blandning
Keksinnön kohteena on erikoisseos, joka soveltuu biologisten kudosten ja/tai nesteiden testaamiseksi, esim. niissä olevien määrättyjen komponenttien läsnäolon tutkimiseksi. Keksinnön kohteena on myös tämän seoksen käyttöön 5 perustuva testausmenetelmä. Keksinnön tavoitteiden ja kohteiden täydelliseksi ymmärtämiseksi on syytä perehtyä eräisiin yleisiin seikkoihin, jotka ovat tutkimuksen kohteen teoreettisena pohjana.
Jonkin aineen absorboidessa näkyvää tai uitravio le11i-10 valoa, on tunnettua, että täss aineessa oleva elektroni siirtyy perustilastaan virittyneeseen Vsingletti"- tilaan.
Tällöin voi tapahtua systeemien välistä siirtymää, minkä seurauksena syntyy metastabiileja "tripletti"-tiloja, joihin elektroni jää sulkeutuneeksi, kunnes viritys poistuu 15 sammutusreaktion tuloksena (toisen molekyylin kohdatessa) tai valoemission seurauksena (fosforenssi) tai muiden prosessien seurauksena, jotka kaikki tapahtuvat suhteellisen hitaasti.
Nämä ilmiöt voidaan helposti määrittää erityyppisissä 20 luonnollisissa ja synteettisissä väriaineissa.
Eräs menetelmä, jota laajalti käytetään näiden ilmiöiden tutkimiseksi ja kvantitatiiviseksi määrittämiseksi, on ns. välähdys fotolyysimenetelmä, jossa tutkittavaa ainetta sisältävään näytteeseen kohdistetaan pulssivalolähteen (vä-25 lähdyslähteen) säteilyä, mikä saattaa määrätyn lukumäärän värjättyjä molekyylejä virittyneeseen elektronitilaan.
Edellä mainittujen tapahtumien kehittymistä tutkitaan ilmaisemalla esim. jatkuvan monokromaattisen valonsäteen absorptiota näytteessä ja merkitsemällä tämä absorptio ajan funktiona 30 sopivan elektronisen kojeen, esim. oskilloskoopin jne. avulla.
2 72611 Tämä menetelmätyyppi on viime vuosina kvalitatiivisesti edistynyt huomattavasti suurempaan herkkyyteen, mikä on saavutettu käyttämällä häiriölähteenä pulssilaasereita.
Ei kuitenkaan ole ennestään tunnettua käyttää edellä seli-5 tetyn tyyppisiä menetelmiä biologisten kudosten ja/tai nesteiden tutkimiseksi ja niiden ominaisuuksien määrittämiseksi, lukuunpttamatta sitä merkityksellistä tapausta, jossa tutkittava kudos sisältää suuren määrän valolle herkkää luonnollista ainetta, esim. tutkittaessa klorofyllin 10 fotosynteesin, rodopsiinin ja karboksihemoglobinin pigmenttejä.
Tutkittaessa kudosta, joka on vain heikosti värjätty, tapahtuu tämän tutkimuksen yhteydessä pikemminkin välähdys-valon diffuusiota kuin absorptiota. Kudos voidaan kuitenkin 15 värjätä synteettisillä väreillä kuten yleisesti menetellään optisen mikroskoopin käyttöön perustuvissa tutkimusmenetelmissä. Tässä yhteydessä todettakoon, että väriaineen kyky värjätä kudosta osoittaa tämän väriaineen jonkinlaista sitoutumista tähän kudokseen.
20 On kuitenkin olemassa ainakin kaksi perusvaikeutta sovellettaessa välähdysfotolyysimenetelmiä näytteisiin, joissa esiintyy voimakkaita diffuusioilmiöitä.
Koska sitoutuneen väriaineen konsentraatiot ovat suhteellisen pienet, on ensinnäkin ollut kyseenalaista, voi-25 daanko merkitseviä signaaleja saavuttaa tätä menetelmää soveltamalla. Toisaalta ei ennalta ole ollut odotettavissa, että signaalit, jotka ovat kotoisin väriaineen metastabiilien tilojen absorptioilmiöstä, eroaisivat siinä tapauksessa, että on kysymys määrättyyn kudokseen sitoutuneesta väriai-30 neesta, niistä signaaleista, jotka ovat kotoisin liuoksessa olevista molekyyleistä tai toisella tavalla sitoutuneista molekyyleistä .
Nyt onyllätyksellisesti todettu mahdolliseksi voittaa molemmat nämä vaikeudet valmistamalla kysymykseen tulevan 35 biologisen kudoksen ja/tai nesteen komonentin ja sellaisen väriaineen adduktiotuotteita, mikä väriaine on synteettinen tai ainakin puuttuu tutkittavista fysiologisista nesteistä tai liuoksista, saattamalla tutkittava näyte kosketukseen 3 72611 keksinnön ensimmäisenä kohteena olevan seoksen kanssa, mikä seos on muodostettu väriaineesta, biologiseen kudokseen ja/tai nesteeseen sopeutuvasta väliaineesta, ja aineesta, joka kohdatessaan väriaineen molekyylit poistaa 5 niiden virittyneen tilan eli sammuttaa ne. Seos, joka muodostaa adduktiotuotteen fysiologisen komponentin kanssa muodostetaan a) väriaineesta, joka valitaan atsiinien, oksat-siinien, akridiinien tai ksanteenien joukosta tai diatso-sarjaan kuuluvien vesiliukoisten väriaineiden tai trifenyy-10 limetaanin joukosta ( 3,3'- £(3,31-dimetyyli j^L,1'-bifenyyli-4,4'-diyylij bis-|j>-amino- ' -hy dr ok s i - 2,7-naftaleenidisulfonihappo^ tetranatriumsuola="Trypan Blue", 3,6-bisdimetyyliamino-akridiini = " Acridine Orange", N - £4 - (dietyyliamino)fenyy- lii -fenyylimetyleen^ -2,5-sykloheksadieeni-l-yylideeniJ - N -15 etyylietaaniaminiumsulfaatti ="Brilliant Green", 1,3-dia- mino-7-dietyyliamino-8-metyylifenoksiatsoniumkloridi= "Brilliant Gresyl Blue", 5-bensyyliamino-9-dietyyliamino--benso£aJfenoksiatsoniumikloridi="Nile Blue"), b)edelleen väliaineesta, joka sopeutuu fysiologiseen komponenttiin, ja 20 jona on vesiliuos, joka sisältää erilaisia suoloja, esim.
NaCl, CaC^, jne., sellaisena konsentraationa, että tämä vesiliuos on likimain isotooninen fysiologiseen komponenttiin nähden (0,1...1 paino-%) ja edelleen pienemmin määrin muita komponentteja, esim. glukoosia, puskuriseoksia, jne., joita 25 lisätään läsnäolevien solujen vitaliteetin kohentamiseksi, jolloin väliaineen pH-arvo voi vaihdella määrätyissä rajoissa neutralisuuden molemmin puolin (rajoissa pH = 4,5...9,5) ja edelleen orgaanisia liuottimia voidaan lisätä pienin määrin väriaineen liukoisuuden parantamiseksi, ja c) sam-30 mutusaineesta (joka toisin sanoen kykenee nopeasti poistamaan molekyylien virittyneen tilan, kun molemmat molekyylit kohtaavat toisensa), jolloin sammutusaineena voi olla kali- _ 2 umjodidi tai natriumjodidi (10 ...0,2 M) tai paramagneetti- _ 2 sen siirtymämetallin suola (10 ...0,2 M metallia Co, Fo, 35 Ni, joita käytetään muotona CoC^, jne.) jolloin mahdollisesti on läsnä kelatoivaa ainetta, esim. ety1eenidiamiini-tetraetikkahappoa (EDTA), tai sammutusaineessa voi lopuksi olla tietty määrä veteen liuotettua molekyylistä happea 4 72611 (□2)ϊ jolloin esim. näyteliuos kyllästetään hapella määrätyssä lämpötilassa).
Edellä selitettyä seosta käytetään biologisten kudosten ja/tai nesteiden testausmenetelmän soveltamiseksi, mikä 5 puolestaan on tämän keksinnön toisena kohteena.
Tämän menetelmän mukaan käsitellään tutkittavan aineen näytettä aluksi keksinnön mukaisella seoksella, ja kohdistetaan muodostuneeseen seokseen ensimmäisen pulssivalonsäteen säteilyä ja saatetaan toinen monokromaattinen valonsäde menemään 10 täten käsitellyn näytteen läpi, ja analysoidaan tämän viimeksi mainitun valon optinen lähtövoimakkuus ajan funktiona.
Tällä tavoin on todettu, että signaalit, jotka aiheutuvat tutkittaviin soluihin sitoutuneiden väriainemolekyylien metastabiilien tilojen absorptiosta, selvästi eroavat amplitu-15 diltaan ja/tai ajalliselta vaihtelultaan niistä signaaleista, jotka ovat kotoisin liuoksesta olevista molekyyleistä tai muista soluista.
Tämän menetelmän mukaan voidaan näin ollen selvittää kudoksissa olevien eri solujen ominaisuudet.
20 Tämän menetelmän on todettu erikoisen hyvin soveltu van käymissoluviljelmien testaamiseksi, jolloin kuolleet solut voidaan erottaa elävistä soluista ja hiivasolut erottaa bakteerisoluista, minkä lisäksi menetelmää voidaan soveltaa värileukosyyttien kvantitatiiviseen analyysiin. Menetelmää 25 soveltaen voidaan toisaalta suorittaa ajtomaatt.isiä mittauksia, jotka kestävät vain muutamia sekunteja ja jotka voivat korvata niitä pitkiä ja hankalia rutiin imenete lmiä, jotka ovat tarpeen optista mikroskooppia käytettäessä. Keksinnön mukaisen menetelmän avulla voidaan myös osoittaa ominaisuuksia, jotka 50 eivät ole silmin erotettavissa ja jotka koskevat väriaineen ja solujen eräiden komponenttien määrättyä molekyylistä keskinäistä vaikutusta.
Keksinnön mukaista menetelmää voidaan tämän ansiosta käyttää kokeissa, joita ei tähän asti ole voitu suorittaa, tai 55 jotka ovat mahdollisia ainoastaan paljon monimutkaisempia menetelmiä soveltaen. Erikoisesti on helposti ennustettavissa menetelmän käyttömahdollisuus tuumordiagnoosissa, koska on mahdollista kvantitatiivisesti määrittää DNA:n ja väriaineen 5 72611 keskinäinen vaikutus.
Kuvio 1 havainnollistaa kaaviollisena esimerkkinä näissä kokeissa käytettyä laitetta.
on elohopealamppu ja S^on lasersäde. L ^ L^, L^, 5 L^ ovat kvartsi1inssejä . M^, M^ ovat peilejä ja D^, ovat puolijohdeilmaisimia, jotka ilmaisevat laserpulssin. MC on suuren valovoimakkuuden omaava monokromaattori. 5 osoittaa näytteen paikkaa ja PM on valomonistin. - Suodattimet ja him-mentimet on selvyyden vuoksi jätetty pois.
10 Pulssivalosäde saatiin Nd-laserista, jona käytettiin kaupan saatavaa laseria YAG (Chromatix mod. 1000), joka lähettää valopulsseja, joiden teho on 0,1...0,5 mJ ja joiden pituus on noin 150 ns ja toistumistaajuus on noin 50 Hz.
Laserin väri voidaan vaihdella sinisestä (^,= 473 nm) lähelle 15 infrapunaista. Havaintosäde kehitettiin sopivasti suodatetun suurpaineisen elohopealampun avulla. Molemmat säteet tarkennettiin näytteen vyöhykkeeseen, jonka halkaisija oli noin 0,2 mm siten, että säteiden välinen kulma oli noin 15°. Näyte-kennon paksuus oli 2 mm. Lampusta tuleva valo läpäisi suuren 20 aukon oomaavan monokromaattorin ja syötettiin valomonistimeen (Philips XP 1113). Vä1omonistimen sähköinen ulostulo tallen-nettin jatkuvasti keskiarvona ja syötettiin myös esivahvisti-meen, jonka läpäisykaista oli rajoissa 0,5kHz...30 MHz, minkä jälkeen signaali vahvistettiin, tallennettiin digitaa 1 imuistei-25 hin ja varastoitiin pieneen tietokoneeseen (Labem 70).
Yhdestä ainoasta pulssista saatu signaali tallennettiin ja lisättiin signaaleihin, jotka oli saatu sadoista samankaltaisista pulsseista. Täten saatiin signaalin keskiarvo, jossa kohinataso oli vähentynyt kertoimella, joka oli suu-30 rempi kuin 10 suhteessa yhdestä ainoasta pulssista kotoisin olevan signaalin kohinaan. Koska pulssien toistumistaajuus oli suhteellisen suuri, saatiin mittaustulokset muutamissa sekunneissa. Tietokoneen avulla voitiin signaali tallentaa ja käsitellä käyttämällä magneettinauhoja, kirjoittimia, piirtu-35 reita jne.
Tallenettu signaali sisältää huomattavan datamäärän esim. absorptioamplitudin tutkituilla eri aaltopituuksilla, ja amplitudin vaihtelun ajan funktiona.
6 72611
Jos tämä amplitudi on V (A , t), voidaan A ja t yleensä määrätä siten, että V (A0» tQ) = + l<2nc’ j°ssa nc on tutkittavien solujen lukumäärä ja k^ ja k2 ovat vakioita, jotka saadaan kalibroin-5 timenetelmän avulla esim. sijoittamalla laitteeseen tunnetun koostumuksen omaava näyte.
Esimerkki 1
Soluviljelyjen testaus. Elinkelpoisuuden testaus.
Sitä sovelletaan Saccharomyces-tyyppisiin hiivavil-10 jelyihin, esim. Saccharomyces lactis-, Sacchharomyces fragilis-tai muihin sen kaltaisiin hiivaviljelyihin.
Testi antaa kvantitatiivisen mitan käymisessä läsnä olevien kuolleiden solujen lukumäärästä.
Testausmenetelmä. Testattava solunäyte sekoitetaan seokseen, — 4 15 jossa on 10 M väriainetta "Trypan Blue", ja seoksen jokaista litraa kohti 0,1 g NaN^, 6,8 g KH^PO^, pH säädetty K0H:n avulla arvoon 7,2 ja 8,76 g NaCl. CoCl_ lisätään siten, että - 2 ^ lopullinen konsentraation on 10 M, kun EDTA on läsnä yhtä suurena konsentraationa . Seosta sekoitetaan muutamia minuutteja, 20 minkä jälkeen mittaus suoritetaan edellä selitetyn laitteen avulla .
Näytettä säteilytetään 2 mm kennossa käyttämällä puls-silasersädettä aallonpituudella A = 659 nm, ja absorption vaihtelut tutkitaan aallonpituuksilla = 405 ja 435 nm 1 ^us 25 suuruisen viiveen jälkeen laserpulssista. Kalibrointi on välttämätön havaitun amplitudin vertaamiseksi laserpulssin amplitudiin, optista suuntausta varten, jne. Tähän tarkoitukseen käytetään suspensiota, jonka hiivasolut lasketaan ja tämän jälkeen kaikki tapetaan keittämällä muutamia minuutteja.
30 Tulokset:
Kuvassa 2 ordinaatta esittää väliaikaista absorptiota (Mv:na) tutkittu aallonpituudella A = 435nm, kun suspensioon, joka sisältää osittain tapettuja Saccharomyces lactis -soluja ja väriainetta "Trypan Blue" kohdistetaan pulssisäteilyä aal-35 lonpoituudella = 659 nm kuten edellä selitettiin. Abskis- sa kuvaa aikaa mikrosekunteina (^us).
Kuvassa 3 ordinaatta esittää väliaikaista amplitudia ( m V : n a ) havaittu 1 ^ u s kuluttua laserpulssin alusta. Abskissa 7 72611 kuvaa suspensiossa olevien kuolleiden solujen prosenttimäärää, joka on laskettu tavanomaisin keinoin esim. soveltamalla optista mikroskooppilaskentaa.
Korrelaatio on erittäin hyvä, joten kuolleiden solu-5 jen lukumäärä voidaan automaattisesti mitata muutamissa sekunneissa. Saavutettavissa oleva herkkyys voi vaihdella rajoissa noin 100...1000 solua /mm^, mikä toisin sanoen on vähemmän kuin 15¾ viljelyliemessä olevasta koko solumäärästä. Esimerkki 2 10 Soluviljelyjen testaus. Eri kantojen aiheuttama saastuminen.
Käytetään samaa reaktioseosta kuin esimerkissä 1.
Tässä reaktioseoksessa on väriainetta "Trypan Blue", minkä ansiosta voidaan erottaa käymisessä läsnä olevat eri solutyy-15 pit. Kahdelle eri Saccharomyces-tyyppiselle hiivalle todettiin siirtymän aallonpituudella Λ = 435 nm vaihtelevan eri tavoin ajan funktiona niin, että esim. puoliintumisaika (toisin sanoen aika, jonka kuluessa transientin amplitudi on pienentynyt kertoimella 2) on Saccharomyces lactis -soluille 2,3 ^us ja 20 Saccharomyces fragilis -soluille 1,7 ^us.
Mitään siirtymää ei havaittu Arthrobacter-tyyppisissä kuolleissa bakteerisoluissa. Menetelmää voidaan tämän ansiosta käyttää hiivasaastumisen testaamiseksi bakteeriviljelyissä tai eri hiivojen erottamiseksi. Tätä varten otetaan analy-25 soitava näyte, kaikki läsnä olevat solut tapetaan keittämällä muutamia minuutteja, minkä jälkeen näytettä käsitellään väriainetta sisältävällä seoksella ja mitataan aallonpituudella = 435 nm havaittu siirtymäamplitudi ja häviämisaika , kun näytettä säteilytetään pulsseilla, joiden aallonpituus 30 = 650 nm.
Esimerkki 3
Kudoksissa läsnä olevan DNA-määrän mittaus.
Menetelmä soveltuu ihmissoluissa läsnä olevien nukleiinihappojen kvantitatiiviseen mittaukseen. Tässä testauk-35 sessa käytetään vaikoverisoluja eri seoksina.
Näytteitä, jotka sisältävät erilaisia soluja, joissa on helposti mitattavat määrät DNA:ta saadaan hepariinilla käsitellystä ihmisverestä soveltamalla tunnettuja menetelmiä, β 72611 joiden mukaan sentr i f ugoidaan Γ i co 1 l>grad i en t i s sa . Käytetään lineaarista Ficoll-gradienttiarajoissa 18 % ... 15 %, gradien-tilla kerrostuneet solut sentrifugoidaan viisi minuuttia kiihtyvyydellä 50 x g ja seitsemän minuuttia kiihtyvyydellä 5 250 x g. Saadaan erilaisia vöitä, jotka puhdistettuina sisäl tävät lymfosyyttejä, monosyyttejä ja granulosyyttejä ja pienet määrät punaisia verihiukkasia. Täten saadut valkoiset verisolut lasketaan ja analysoidaan juovina mikroskoopin avulla tavanomaisia menetelmiä soveltaen. Täten voidaan kvantitatiivisesti mää-10 rittää näytteen sisältämä DNA, koska jokaisen solutyypin keskimäärin sisältämä kromatiini tunnetaan.
Saadut eri fraktiot värjätään erikseen ja sekoitetaan tunnetuin osamäärin.
Solujen värjäämiseksi solut sentrifugoidaan ja sus-15 pensoidaan liuokseen, jossa on 5 x 10 ^ H väriainetta "Acridine Orange" fysiologisessa liuoksessa, jossa on 0,05 M fosfaattipuskuria, jonka pH-arvo = 7,2 ja jossa myös on 10-2 M CoCl2 ja 10-2 M EDTA.
Saatuun suspensioon kohdistetaan pulssisäteilyä 20 edellä selitettyä laitetta käyttäen aallonpituudella, joka on rajoissa Λ = 473 ja Λ = 532 nm. Havainnot tehdään jatkuvalla valolla, jonka aallonpituus on = 435 nm.
Samaa menetelmää sovelletaan näytteellä ,joka sisältää samoja reagensseja, mutta ei mitään väriä. Tämä viimeksi 25 mainittu käsittely on välttämätön, koska pienet läsnä olevat määrät karboksihemaglobiinia voisivat myötävaikuttaa siirtymäabsorptioon.
Siirtymäabsorptio, joka saavutetaan käyttämällä näytettä jossa ei ole väriainetta, vähennetään arvosta, joka 30 saadaan täydellisistä seoksista, jolloin saadaan kuvion 4 näyttämä tulos.
Ordinaatta kuvaa siirtymän amplitudia (mV) ja abs-kissa kuvaa aikaa, ^us.
Väliaikaisen absorption vaihtelu tutkitaan aallonpi-35 tuudella = 435 nm, kun dsäteily kohdistetaan suspensioon, jossa on ihmisen granylosyyttejä ja väriainetta "Acridine Orange", aallonpituudella = 532 nm kuten edellä selitet tiin.
9 72611
Pulssin amplitudi 1 ^us lasesäteellä suoritetun säteilyttämisen jälkeen on verrannollinen näytteen DNA-pi-toisuuteen kuten kuviossa 5 on näytetty. Tässä kuviossa on siirtymän amplitudi (m V ) näytetty DNA-pitoisuuden funktiona 5 (lausuttu suureena mg/1) eri tyyppisiä soluja varten, nimittäin lymfosyyttejä ja monosyyttejä eri osamäärinä tai mono-syyttejä yksistään, tai granulosyyttejä yksistään, tai kaikkia leukosyyttejä varten. Näytteet sisältävät vaihtelevin määrin erytrosyyttejä ja ovat peräisin eri luovuttajilta.
10 Se tosiseikka, että tämä suhteellisuus saavutetaan eri henkilöistä otettujen eri solujen vaihtelevilla pitoisuuksilla osoittaa todennäköiseksi, että menetelmää voidaan myös luotettavasti soveltaa muuta alkuperää oleviin biologisiin kudoksiin, esim. epiteelikudoksiin, jne.
15 DNA-pitoisuuden mittaus yhdessä kudoksessa läsnä olevien solujen lukumäärän mittauksen kanssa voi olla tärke-ääf^öpätilojen varhaisdiagnoosissa.
Esimerkki 4
Ihmisveressä olevien leukosyyttien luokitus.
20 Keksinnön mukaista menetelmää sovelletaan verinäyt teisiin, joiden hyytyminen on estetty. Menetelmän ansiosta saadaan kvantitatiivisesti mitatuksi sekä leukosyyttien kokonaislukumäärä että granulosyyttien, monosyyttien ja lymfosyyttien lukumäärä.
25 Koemenetelmä: Ihmisen laskimoveren näytteeseen jonka hyytymi nen on estetty hepariinin avulla, jonka konsentraatio on 0,1...0,2 mg/ml verta, tai käyttämällä natrium-EDTA 1 mg/ml konsnetraationa , lisätään dekstraanin (molekyy1ipaino 250.000) 35% liuosta, kunnes lopullinen konsentraatio on 1,5 % , minkä 30 jälkeen seosta pidetään termostaatissa 37 °C:ssa 20 min. Poistetaan pinnalle nouseva neste, joka sisältää valkoverisoluja noin 1 % punasoluista, ja lisätään tislattua vettä suolakonsen-traation alentamiseksi arvoon 0,25 o/oo. Tarkasti 30 sekunnin kuluttua isotoonisuus palautetaan lisäämällä natriumklori-35 din 3,5 o/oo vesiliuosta. Solut kootaan linkoamalla kiihtyvyydellä 400 x g ( g=painovoiman kiihtyvyys) 5 minuuttia, minkä jälkeen solut lietetään nat. riumkloridin 0,9 % vesiliuokseen tai fosfaattipuskuriin, pH=7,l, 0,1 M sellaiseen tilavuutesi, että lymfosyyttien lukumäärä on noin 8.000/mm^. Leuko- 10 7261 1 syytit saadaan taiteenotetuksi noin 95-prosenttisesti ja prosenttimääräinen koostumus on sama kuin veren; jäljellä olevat punasolut ovat suhteessa noin 1:1 valkosoluihin. Mittaukset tehdään 200 mikrolitralla solususpensiota ken-5 nossa, jonka optisen radan pituus on 2 mm, jolloin suspensioon on lisätty väriainetta ja sammutusainetta. Solut voidaan kiinnittää ennalta.
Lähemmin selitettynä sovelletaan seuraavia värjäys-menetelmiä: Sblususpensioon voidaan lisätäCoCl^-EDTA-sam- 10 mutinta, sekä väriainetta "Brilliant Green" siten, että lo- _ 2 pulliset konsentraatiot ovat vastaavasti 10 M ja 9 x 10 ^ M. Erään toisen värjäysmenetelmän mukaan solut kiinnitetään etanoolilla siten, että lopullinen konsentraa- tio on 12 o/oo. Minuutin kuluttua lisätään CoCl^-EDTA ja 15 väriainetta "Brilliant Gresyl Blue" siten, että lopulliset -2 -5 konsentraatiot ovat vastaavasti 10 ja 5 x 10 M. Kolmas käyttökelpoiseksi osoittautunut värjäysmenetelmä os samanlainen kuin edellä selitetty toinen menetelmä, mutta väri- _5 aineena käytetään "Nile Blue" konsentraationa 8 x 10 M.
20 Täten saadut näytteet säteilytetään tämän jälkeen tämän hakemuksen alussa selitetyn pulssilaserjärjestelmän avulla aallonpituudella = 659 nm ja tutkitaan tämän jälkeen monokromaattisella valolla aallonpituuksilla = 435 nm ja = 547 nm.
25 Kahden eri värjäysmentelmän avulla voidaan täten saada neljä eri siirtymää, joiden tunnusmerkit korreloivat mitattavien suureiden kanssa.
Tulokset: Tällä tavoin käsitellyistä verinäytteistä saa dut havainnot vastaavat tuloksia, jotka saavutetaan sovelta-30 maila ennestään tunnettuja menetelmiä, toisin sanoen mikroskoopissa tarkastamalla kokoverijuovia. Kuviot 6 ja 7 esittävät esimerkkeinä eräitä tällaisia siirtymiä. Lähemmin selite ttynä kuvio 6 esittää amplitudia mV:na aallonpituudella -.> p*. ~ 547 nm näytteellä, joka oli värjätty väriai- 35 neella "Brilliant Gresyl Blue" ja kiinnitetty etanolilla. Abskissa esittää aikaa mikrosekunteina. Amplitudi &\1 mitattuna kuviossa huipun ja pitkän ajan kuluttua saadun ar- 11 7261 1 von välillä, on verrannollinen monosyyttien kokonaislukumäärään. On huomattava, että tässä esimerkissä on Co-EDTA:n läsnäolo oleellinen niiden signaalien häviämisen määräämiseksi, jotka ovat kotoisin muista soluista tai vapais-5 ta väriaineista. Kuvio 7 esittää siirtymää tutkittaessa aallonpituudella = 435 nm näytettä, joka on värjätty väriaineella "Brilliant Green" (koordinaatat ovat mV:na ja abskissat mikrosekunteina kuten edellisessä tapauksessa). Väriaineen triplettitilan virittymistä vastaavan vaiheen le-10 veys voi hyvin korreloida leukosyyttien kokonaislukumäärän kanssa. Tämä väriaine on mikroskooppihavai tojen mukaan todennäköisesti sitoutunut solun ytimeen.
Hajoamisen trendi on lisäksi piirustuksen näyttämällä tavalla kaksivaiheinen. Nopea vaihe, joka sopivasti mitataan 15 sekä aallonpituuksilla pV = 435 nm että = 547 nm, on lopuksi verrannollinen lymfosyyttien lukumäärään. Täten on saatu määritetyksi kaikki kolme toisistaan riippumatonta parametriä (^lymfosyyttien lukumäärä (1), monosyyttien lukumäärä (m), ja granulosyyttien lukumäärä (g), leukosyyttien 20 kokonaislukumäärä (n), joka on sama kuin näiden kolmen suureen summa, toisin sanoen n = 1 + m + ς0 . On huomattava, että vain pieni osa siitä informaatiosta, joka sisältyy havaittujen siirtymien tallennettuun kuvaan, on käytetty näitä määrityksiä varten, ja että on käytettävissä arilli-25 sinä suureina havainnot, jotka koskevat triplettivaiheiden hajoamisaikoja ja eri aallonpituuksilla saatujen amplitudien suhteet. Näitä suureita voidaan käyttää muunlaisiin tarkistuksiin, esim. patologisten solujen läsnäolon osoittamiseen.
30
Claims (3)
1. Seos, joka soveltuu biologisten kudosten ja/tai nesteiden komponenttien testaamiseen, t u n n e t t u siitä, että seos sisältää a) jonkin seuraavista väriaineista: 3,3’- 3,3 ' -di- 5 metyyli £l,l’-bifenyyli-4,4'-diyyli^|bis-£5-amino-'-hydraksi- 2,7-naftaleenidisulfonihappoJ tetranatriumsuola , 3,6-bisdi-metyyliaminoakridiini, N - £4|Jj4- (dietyyliamino)fenyylij -fenyylimetyleen:Q-2,5-sykloheksadieeni-l-yylideeni]-N-etyy-lietaaniaminiumsulfaatti, l,3-diamino-7-dietyyliamino-8-10 metyy1ifenoksiatsoniumikloridi , 5-bensyyliamino-9-dietyyli-amino-benso£aj fenoksiatsoniumikloridi, b) väliainetta, joka on vesiliuos ja sisältää useita suoloja kuten NaCl, CaCl^ sellaisina konsentraatioina , että liuos on isotooninen (sama osmoottinen paine) fysiologiseen 15 komponenttiin nähden (o , 1 . . . 1 paino-?») sekä lisäksi sellaisia komponentteja kuten glukoosia ja puskuriaineita, jotka mahdollistavat läsnäolevien solujen hengissäpysymisen, c) sammutusainetta, joka pystyy nopeasti poistamaan värimolekyylien virityksen, kun tämä aine kohtaa molekyy- 20 lit, jona sammuttimena voi olla KJ tai NaJ (pitoisuus 10 ...0,2 M) tai paramagneettinen siirtymämetalli Co, Fe tai Ni kloridina tai vastaavassa muodossa (pitoisuus 10 ...0,2 M) tai se voi olla veteen liuennut molekyylinen happi.
2. Blandning enligt patentkravet 1, kanne- t e c k n a d därav, att färgämnets koncenration är inom gränserna : 10 ^ . 25 ochlOM.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen seos, tun nettu siitä, että väriaineen konsentraation on rajoissa 10 ^...10~^M.
3. Menetelmä biologisten kudosten ja/tai nesteiden testaamiseksi, tunnettu siitä, että tutkittavaa 30 ainettä käsitellään seoksella, jossa on a) jokin seuraavista värineista: 3,3'-^( 3,3-dimetyyli Q,l'-bifenyyli-4,4'-diyyl^bis-|^5-amino-,-hydroksi-2,7-nafta-leenidisulfonihapp oitetranatriumsuola, 3,6-bisdimetyyliami-noakridiini, N - £4 - (dietyyliamino)fenyylQ-fenyylimety- 35 leen^-2,5-sykloheksadieeni-l-yylideen^-N-etyylietaaniamini-umsulfaatti, l,3-diamino-7-dietyyliamino-8-metyyl.i fenoksiatsoniumikloridi, 5-bensyy linmino-9-dietyyliamino-bonso 13 7261 1 03 fenoksiatsoniumikloridi, b) väliainetta, joka on vesiliuos ja sisältää useita suoloja kuten NaCl, CoCl^ sellaisina konsentraatioina, että liuos on isotooninen (sama osmoottinen paine) fysiolo- 5 giseen komponenttiin nähden (0,1...1 paino-%) sekä lisäksi sellaisia komponentteja kuten glukoosia ja puskuriaineita, jotka mahdollistavat läsnäolevien solujen hengissäpysymisen, c) sammutusainetta, joka pystyy nopeasti poistamaan värimolekyy1 ien virityksen, kun tämä aine kohtaa molekyylit, 10 ja sammuttimena voi olla KJ tai NaJ (pitoisuus 10 ...0,2 M) tai paramagneettinen siirtymämetalli Co, Fe tai Ni kloridina tai vastaavassa muodossa (pitoisuus 10 ...0,2 M) tai se voi olla veteen liuennut molekyylinen happi, minkä jälkeen seosta säteilytetään ensimmäisellä 15 pulssivalosätee11ä, saatetaan toinen monokromaattista valoa oleva säde kulkemaan täten käsitellyn näytteen läpi, ja analysoidaan tämän toisen säteen optinen lähtövoimakkuus ajan funktiona. 20 14 7261 1 Blandning som lämpar sig för testning av komponenter i biologiska vävnader och/eller vätskor, kanne-t e c k n a d därav, att den bestar av: a) ett av följande färgämnen: 3,3'-Jj(3,3'-dimetyl ^1,l'-bifenyl-4,4'-diy 1^ bis-^5-amino-'-hydroxy-2,7-naftalen- 5 disulfonsyraltetranatriumsalt, 3,6-bisdimetylaminoakridin , N- [4 \ ( die tyl amino )fenyll -fenylmetylenj -2,5-cyklohexadin- 1- ylden]-N-etyletanaminiumsulfat, l,3-diamino-7-dietyl-amino-8-metylfenoxazoniumklorid, 5-bensylamino-9-dietylamino- benso CsJ fenoxazoniumklorid, 10 b) ett medium som är en vattenlösning och innehaller flere saltar sasom NaCl, CaCl^ i sadana koncentrationer att lösningen är isotonisk (samma osmotisk tryck) i förhallande till fysiologiska komponenten (0,1...1 vikt-%) samt sadana komponenter som glukos och buffertämnen som möjliggör 15 det att de naruarande cellerna behaller livet, c) släckningsmedel som kan snabbt deenergisera färg-molekylerna dä det möter dem, vilket medel kan vara KJ eller NaJ (halten 10 ...0,2 M) eller paramagnetisk transition metal Co, Fe eller Ni i form av klorid eller motsvarande 20 (halten 10 ...0,2 M) eller det kan vara i vatten upplöst molekylar oxygen.
3. Förfarande för testning av biologiska vävnader och/eller vätskor, kännetecknat därav, att man behandlar provet som skall undersökas med en blandning som bestar av: 30 a) ett av följande färgämnen: 3,3'-£( 3 , 3'-dimety1 ^l,l'-bifenyl-4,4'-diyl^bis-^5-amino-'-hydroxy-2,7-naftalen-disulfonsyrajtetranatriumsalt, 3,6-bisdimetylaminoakridin, Nj>[& -(dietylamino)fenyl^ - fenylmetyler^ - 2,^cyklohexadien -1-ylden^-N-etyletanaminiumsulfat, l,3-diamino-7-dietyl-33 amino-8-mety 1 fenoxa z;oniumklor id , 5-benr’v 1 -9-diety lamino- ajfenoxa zoniumklorid, b) ett medium som är en vattenlösning och innehaller
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT25568/79A IT1123573B (it) | 1979-09-10 | 1979-09-10 | Composizione adatta al controllo di tessuti e/o liquidi biiologici e metodo impiegante la stessa |
| IT2556879 | 1979-09-10 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI802211A FI802211A (fi) | 1981-03-11 |
| FI72611B true FI72611B (fi) | 1987-02-27 |
| FI72611C FI72611C (fi) | 1987-06-08 |
Family
ID=11217121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI802211A FI72611C (fi) | 1979-09-10 | 1980-07-10 | Blandning som laempar sig foer testning av biologiska vaevnader och/eller vaetskor och foerfarande foer anvaendning av denna blandning. |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4331759A (fi) |
| JP (1) | JPS5640740A (fi) |
| AT (1) | AT371837B (fi) |
| AU (1) | AU536677B2 (fi) |
| BE (1) | BE884217A (fi) |
| BR (1) | BR8004357A (fi) |
| CA (1) | CA1150603A (fi) |
| CH (1) | CH648125A5 (fi) |
| DE (1) | DE3026185C2 (fi) |
| DK (1) | DK157264C (fi) |
| ES (1) | ES8106057A1 (fi) |
| FI (1) | FI72611C (fi) |
| FR (1) | FR2466019A1 (fi) |
| GB (1) | GB2059582B (fi) |
| IE (1) | IE50002B1 (fi) |
| IT (1) | IT1123573B (fi) |
| LU (1) | LU82587A1 (fi) |
| NL (1) | NL8003987A (fi) |
| NO (1) | NO153869C (fi) |
| SE (1) | SE442347B (fi) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4707454A (en) * | 1981-08-10 | 1987-11-17 | Bio-Diagnostics, Inc. | Fluorescent chlorophyll labeled assay reagents |
| US4906561A (en) * | 1981-09-14 | 1990-03-06 | Thornthwaite Jerry T | Nuclear isolation medium and procedure for separating cell nuclei |
| US4622291A (en) * | 1984-06-11 | 1986-11-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method and device for quantitative end point determination in immunofluorescence using microfluorophotometry |
| US4707451A (en) * | 1985-09-18 | 1987-11-17 | Becton, Dickinson And Company | Detection of reticulocytes |
| EP0226272B1 (en) * | 1985-11-01 | 1991-03-06 | Becton, Dickinson and Company | Detection of reticulocytes |
| US5319079A (en) * | 1986-05-15 | 1994-06-07 | Beckman Instruments, Inc. | Process for terminal substituting of a polynucleotide |
| US5171669A (en) * | 1987-05-04 | 1992-12-15 | Eastman Kodak Company | Cobalt(III) reagents in combination with water soluble polymers |
| US5141855A (en) * | 1986-07-28 | 1992-08-25 | Eastman Kodak Company | Signal amplifying cobalt (III) redox reagents and methods for the determination of analytes in aqueous fluids |
| US4963478A (en) * | 1988-07-05 | 1990-10-16 | Immucor, Inc. | Article for preforming immunological assays utilizing organic dyes and method for producing and utilizing same |
| US5413915A (en) * | 1988-07-12 | 1995-05-09 | Resource Technologies Group, Inc. | Method and sensor for detecting toxic chemical exposure effects and metabolic activation of carcinogenic chemical agents |
| FR2636646B1 (fr) * | 1988-09-19 | 1990-12-21 | Tepral Sa | Procede de detection specifique et de denombrement des micro-organismes dans des produits filtrables |
| JP2595423B2 (ja) * | 1992-08-05 | 1997-04-02 | 大和ハウス工業株式会社 | 無溶接トラス |
| US5407794A (en) * | 1992-09-08 | 1995-04-18 | Cytocolor Inc. | Oxazine stained lymphocytes and method |
| WO1995030767A1 (en) * | 1992-10-22 | 1995-11-16 | The Center For The Improvement Of Human Functioning International, Inc. | METHOD FOR DETECTING INTESTINAL PATHOGEN $i(DIENTAMOEBA FRAGILIS) |
| US5610027A (en) * | 1992-10-30 | 1997-03-11 | Micro-Med, Inc. | Microphoto lysis-anlaysis process to measure cell characteristics |
| DE69535413T2 (de) * | 1994-10-20 | 2007-11-29 | Sysmex Corp. | Reagenz und Verfahren zur Analyse fester Bestandteile im Harn |
| JP4509607B2 (ja) * | 2004-03-17 | 2010-07-21 | シスメックス株式会社 | 細胞分析装置および方法 |
| US20090042241A1 (en) | 2007-04-06 | 2009-02-12 | California Institute Of Technology | Microfluidic device |
| EP2932268A4 (en) | 2012-12-17 | 2016-10-19 | Leukodx Ltd | SYSTEMS AND METHOD FOR RECOGNIZING A BIOLOGICAL CONDITION |
| US10610861B2 (en) | 2012-12-17 | 2020-04-07 | Accellix Ltd. | Systems, compositions and methods for detecting a biological condition |
| US20140170678A1 (en) | 2012-12-17 | 2014-06-19 | Leukodx Ltd. | Kits, compositions and methods for detecting a biological condition |
| CN116990101B (zh) * | 2023-09-27 | 2023-12-15 | 四川大学华西医院 | 一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT630626A (fi) * | 1959-05-15 | |||
| US3298789A (en) * | 1964-12-14 | 1967-01-17 | Miles Lab | Test article for the detection of glucose |
| US3682783A (en) * | 1971-03-15 | 1972-08-08 | Photovolt Corp | Method for coulometric karl fischer titration |
| US4146604A (en) * | 1973-05-31 | 1979-03-27 | Block Engineering, Inc. | Differential counting of leukocytes and other cells |
| US4094745A (en) * | 1973-06-22 | 1978-06-13 | John Scholefield | Method of staining microscopic organisms |
| US3899297A (en) * | 1973-12-19 | 1975-08-12 | Block Engineering | Biological staining technique and mixture thereof |
| US4174384A (en) * | 1975-06-30 | 1979-11-13 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4207469A (en) * | 1975-08-02 | 1980-06-10 | Sir Howard Grubb Parsons and Company Ltd. | Analysis of emulsions and suspensions |
| US4233402A (en) * | 1978-04-05 | 1980-11-11 | Syva Company | Reagents and method employing channeling |
| US4219337A (en) * | 1978-04-27 | 1980-08-26 | The Medical College Of Wisconsin | Assay for proteins and polypeptides |
| US4225783A (en) * | 1978-07-24 | 1980-09-30 | Abbott Laboratories | Determination of microbial cells in aqueous samples |
| US4225669A (en) * | 1979-04-27 | 1980-09-30 | Melnick Joseph L | Staining and analysis of bacteria |
| JPS55116259A (en) * | 1979-03-01 | 1980-09-06 | Fuji Photo Film Co Ltd | Microimmunoassay method |
| US4252783A (en) * | 1979-06-18 | 1981-02-24 | Syva Company | Reducing fluorescent background in fluorescent immunoassays |
| US4336029A (en) * | 1980-08-15 | 1982-06-22 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Method and reagents for quantitative determination of reticulocytes and platelets in whole blood |
-
1979
- 1979-09-10 IT IT25568/79A patent/IT1123573B/it active
-
1980
- 1980-06-25 AU AU59615/80A patent/AU536677B2/en not_active Ceased
- 1980-06-30 DK DK282480A patent/DK157264C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-07-03 US US06/165,787 patent/US4331759A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-07-04 LU LU82587A patent/LU82587A1/fr unknown
- 1980-07-08 BE BE0/201327A patent/BE884217A/fr not_active IP Right Cessation
- 1980-07-08 FR FR8015195A patent/FR2466019A1/fr active Granted
- 1980-07-08 NO NO802050A patent/NO153869C/no unknown
- 1980-07-08 IE IE1417/80A patent/IE50002B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-07-08 GB GB8022264A patent/GB2059582B/en not_active Expired
- 1980-07-08 ES ES493614A patent/ES8106057A1/es not_active Expired
- 1980-07-09 AT AT0357580A patent/AT371837B/de not_active IP Right Cessation
- 1980-07-09 SE SE8005060A patent/SE442347B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 NL NL8003987A patent/NL8003987A/nl not_active Application Discontinuation
- 1980-07-10 CH CH5304/80A patent/CH648125A5/it not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 BR BR8004357A patent/BR8004357A/pt not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 DE DE3026185A patent/DE3026185C2/de not_active Expired
- 1980-07-10 FI FI802211A patent/FI72611C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-07-10 JP JP9337680A patent/JPS5640740A/ja active Granted
- 1980-07-14 CA CA000356137A patent/CA1150603A/en not_active Expired
-
1982
- 1982-02-23 US US06/351,582 patent/US4376820A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI72611B (fi) | Blandning som laempar sig foer testning av biologiska vaevnader och/eller vaetskor och foerfarande foer anvaendning av denna blandning. | |
| US4336029A (en) | Method and reagents for quantitative determination of reticulocytes and platelets in whole blood | |
| Müller et al. | [4] Fluorescence correlation spectroscopy | |
| Böck et al. | Photometric analysis of antifading reagents for immunofluorescence with laser and conventional illumination sources. | |
| CA1205365A (en) | Metachromatic dye sorption and fluorescent light emissive means for determination of developmental stages of neutrophilic granulocytic cells and other leukocytes | |
| CA1155041A (en) | Fluorescent nucleic acid stains | |
| US4835103A (en) | Differential binding of membrane potential sensitive materials to lymphocytes | |
| Perevoshchikova et al. | Fluorescence correlation spectroscopy in biology, chemistry, and medicine | |
| US6306661B1 (en) | Water soluble luminescence oxygen sensor and method | |
| AU2007259061A1 (en) | Lipoprotein assay | |
| JPS6234058A (ja) | フロ−サイトメ−タによる網状赤血球の測定方法 | |
| JP3421111B2 (ja) | マラリア感染細胞の検出方法及び試薬 | |
| JPH0577028B2 (fi) | ||
| Raudsepp et al. | Spatiotemporal studies of lipid oxidation by optical microscopy | |
| Horvath et al. | Screening of urinary coproporphyrin using cloud point extraction and chemiluminescence detection | |
| JPS5977357A (ja) | 生物学的試料中のヘモグロビンの定量法 | |
| Rüttinger | Confocal microscopy and quantitative single molecule techniques for metrology in molecular medicine | |
| Krull et al. | Fluorescence wavelength, intensity and lifetime for multidimensional transduction of selective interactions of acetylcholine receptor by lipid membranes | |
| Docchio et al. | Time-resolved fluorescence microscopy: Examples of applications to biology | |
| Chen | Fluorescene Difference Decay Curves: Resolution Of Complex Decays | |
| SU1571479A1 (ru) | Способ определени эффективности магнитной обработки воды | |
| Yu et al. | Spermicidal activity of nonoxynol-9 and analogs: quantitative assessments by flow cytometry | |
| JPH0222331B2 (fi) | ||
| Lore | DEVELOPMENT OF OPTICAL METHODS FOR QUANTITATIVE CYTOCHEMISTRY | |
| JPS5938540B2 (ja) | けい光物質の観測方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ENI - ENTE NAZIONALE IDROCARBURI |