FR2627286A1 - Procede et appareil pour l'examen d'un echantillon en immunologie - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne la mesure de réactions antigènes-anticorps au moyen d'un support, tel qu'un latex. Des supports sensibilisés avec un anticorps ou un antigène sont amenés à réagir avec un échantillon analytique et la condensation des supports provoquée par la réaction antigène-anticorps est détectée optiquement par cytométrie de flux, plusieurs types de supports différent par leurs caractéristiques optiques étant sensibilisés respectivement avec des types différents d'anticorps ou d'antigènes. Application : procédé et appareil perfectionnés permettant de mesurer en une seule fois plusieurs types d'antigènes ou d'anticorps dans l'échantillon analytique.
Description
La présente invention a pour objet le domaîne de la mesure d'une réaction antigene-anticorps au moyen d'un support, tel qu'un latex, qui est utilisé en immunologie.
Jusqu'à présent, on a utilisé comme méthode d'examen de l'immunité, une méthode dans laquelle on prépare une suspension comprenant un mélange d'un support tel qu'un latex sensibilisé avec un anticorps prédéterminé et d'un échantillon à analyser et lorsqu'un antigène à identifier est présent dans cet échantillon, une réaction antigene-anticorps se produit entre l'antigène et l'anticorps sensibilisé, des particules du support sont couplées ensemble et la présence de l'antigène dans l'échantillon ou bien la quantité d'antigène est déterminée d'aprés l'état condensé du support. Dans ce cas, une méthode pour différencier l'état condensé du support a été mise en oeuvre en mesurant l'absorbance de la suspension renfermant le support ou bien le degré de diffusion de la lumière par la suspension.Plus précisément, par l'utilisation de la cytométrie de flux, c'est-à-dire en entourant la suspension avec une gaine liquide, présentant une convergence hydrodynamique avec cette suspension, provoquant l'ecou- lement tour à tour de supports distincts vers une position d'examen, en envoyant un faisceau lumineux sur le support à l'endroit d'examen et en évaluant le diamètre du support d'après l'intensité de la lumière diffusée, il a été possible d'évaluer l'état condensé des supports distincts et de déterminer la présence de l'antigène, ou bien de calculer la quantité de l'antigène, et d'effectuer une mesure extrêmement précise. Un exemple particulier de cette méthode est décrit, par exemple, dans le brevet des
Etats-Unis d'Amérique N' 4 521 521.Cependant, dans l'exemple précité de l'art antérieur, seul un support sensibilisé avec un type d'anticorps peut être utilisé et seul l'examen d'un type d'antigène peut être effectué à la fois, et cela a constitué une entrave en ce qui concerne l'accroissement du rendement au cours d'examens médicaux en série.
Etats-Unis d'Amérique N' 4 521 521.Cependant, dans l'exemple précité de l'art antérieur, seul un support sensibilisé avec un type d'anticorps peut être utilisé et seul l'examen d'un type d'antigène peut être effectué à la fois, et cela a constitué une entrave en ce qui concerne l'accroissement du rendement au cours d'examens médicaux en série.
A titre d'exemple de méthode permettant de résoudre ce problème, une méthode dans laquelle plusieurs types de particules fines différant par le type de fluorescence ou par le diamètre des particules sont utilisés pour mesurer plusieurs types de réactions antigene-anticorps en une seule fois est décrite dans la demande de brevet japonais mise à l'inspection Publique N 62-81567. Suivant cette méthode, la différenciation entre les types de particules fines est effectuée au moyen de la longueur d'onde de fluorescence ou d'une association de la longueur d'onde de fluorescence ét du diamètre des particules.Si seul le diamètre de particules est déterminé pour différencier plusieurs types de particules, les types de particules ne peuvent être différenciés dans le cas d'un état condensé de particules de même diamètre et, en conséquence, il est nécessaire de différencier ces particules par la fluorescence. Cependant, l'intensité de la fluorescence qui est émise est faible et, en conséquence, il s'est révélé difficile de différencier de manière fiable les types de particules par la fluorescence. En outre, par un système optique de détection de la lumière diffusée, un système optique précis pour la détection de la fluorescence faible était nécessaire séparément.
Un objectif de la présente invention consiste à proposer une méthode d'examen d'un échantillon et un appareil d'examen d'un échantillon permettant de déterminer la présence ou de mesurer la quantité, de manière simple, de plusieurs types d'antigènes ou anticorps particuliers dans un échantillon en une seule fois par l'utilisation de plusieurs types de supports différant par leurs caractéristiques optiques.
Un autre objectif de. la présente invention consiste à proposer une méthode d'examen d'un échantillon et un appareil d'examen d'un échantillon qui permettent de déterminer la présence ou de mesurer la quantité, de manière fiable, de plusieurs types d'antigènes ou d'anticorps particuliers dans un échantillon en une seule fois par une réalisation simple ne faïsant pas intervenir la fluorescence.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre, faite en regard des dessins annexés, sur lesquels
- la figure 1(A) représente la structure d'une forme de réalisation de la présente invention,
- la figure 1(B) représente la structure d'un système optique de réception de la lumière, lorsqu'il reçoit une lumière transmise,
- la figure 1(C) représente une variante du système optique de réception de la lumière de la figure 1(B),
- la figure 2 représente une structure plus avantageuse de la forme de réalisation de la présente invention,
- les figures 3 à 5 illustrent, dans son principe, la méthode d'examen de la présente invention,
- les figures 6 à 8 représentent les résultats de la mesure de plusieurs types de latex présentant des absorbances différentes et des diamètres identiques,
- les figures 9 à Il représentent les résultats de la mesure de plusieurs type de latex présentant des absorbances différentes et des diamètres différents,
- la figure 12 représente un cytogramme sur lequel les figures 6 à 8 sont reunies ; et
- la figure 13 représente un cytogramme sur lequel les figures 9 à 11 sont réunies.
- la figure 1(A) représente la structure d'une forme de réalisation de la présente invention,
- la figure 1(B) représente la structure d'un système optique de réception de la lumière, lorsqu'il reçoit une lumière transmise,
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- la figure 2 représente une structure plus avantageuse de la forme de réalisation de la présente invention,
- les figures 3 à 5 illustrent, dans son principe, la méthode d'examen de la présente invention,
- les figures 6 à 8 représentent les résultats de la mesure de plusieurs types de latex présentant des absorbances différentes et des diamètres identiques,
- les figures 9 à Il représentent les résultats de la mesure de plusieurs type de latex présentant des absorbances différentes et des diamètres différents,
- la figure 12 représente un cytogramme sur lequel les figures 6 à 8 sont reunies ; et
- la figure 13 représente un cytogramme sur lequel les figures 9 à 11 sont réunies.
Dans la forme de réalisation de l'invention, plusieurs types de latex différant par leur absorbance sont utilisés pour former plusieurs types de supports.
Cependant, cela n'est pas restrictif, des oxydes inorganiques tels que la silice, un mélange silice-alumine et l'alumine, une poudre minérale, des métaux, des cellules sanguines, des staphylocoques, des fragments de parois cellulaires, des liposomes, etc., peuvent être par exemple utilisés également et ceux-ci peuvent être associés pour préparer plusieurs types de supports différant par leur absorbance. Pour sensibiliser les supports avec un anticorps, on connaît un procédé pour provoquer l'adsorption physique de l'anticorps et un procédé pour provoquer l'adsorption chimique de l'anticorps par l'utilisation des groupes fonctionnels présents sur les supports.
A titre d'exemple, un échantillon de liquide dans lequel un échantillon analytique tel que du sérum humain est ajouté à un mélange de plusieurs types de latex
A, B et C, sensibilisés respectivement avec trois types d'anticorps a, b et c, est ajusté à un temps de réaction et à une concentration appropriés et est introduit dans le récipient 16 de la figure 1(A) destiné à l'échantillon de liquide. Un exemple particulier d'ajustement de l'échantillon de liquide est décrit, par exemple, dans la demande de brevet japonais mise à l'inspection Publique N 62-81567 précitée
De même, un liquide de gaine, tel que de l'eau distillée ou du sérum physiologique, est introduit dans un récipient 14 destiné à ce liquide de gaine. Le récipient 16 destiné à l'échantillon de liquide et le récipient 14 destiné au liquide de gaine sont chacun mis sous pression au moyen d'un mécanisme de pressurisation, non représenté.
A, B et C, sensibilisés respectivement avec trois types d'anticorps a, b et c, est ajusté à un temps de réaction et à une concentration appropriés et est introduit dans le récipient 16 de la figure 1(A) destiné à l'échantillon de liquide. Un exemple particulier d'ajustement de l'échantillon de liquide est décrit, par exemple, dans la demande de brevet japonais mise à l'inspection Publique N 62-81567 précitée
De même, un liquide de gaine, tel que de l'eau distillée ou du sérum physiologique, est introduit dans un récipient 14 destiné à ce liquide de gaine. Le récipient 16 destiné à l'échantillon de liquide et le récipient 14 destiné au liquide de gaine sont chacun mis sous pression au moyen d'un mécanisme de pressurisation, non représenté.
Dans une cuve de circulation 4, l'échantillon de liquide est enveloppé dans le liquide de gaine et mis par convergence sous forme d'un courant fin par le processus d'écoulement laminaire de la gaine, et passe à travers la partie pratiquement centrale de la zone de circulation présente dans la cuve de circulation 4. A ce moment, les différents latex présents dans l'échantillon de liquide sont séparés et les particules ou les agglomérats s'écoulent un par un. Une lumière laser émise par une source laser 1 est mise par convergence sous une forme arbitraire par une série de lentilles cylindriques 2 et 3, dont les directions de l'axe sont la direction de la zone de circulation et la direction orthogonale à la direction de la zone de circulation, et est envoyée sur le courant des latex.La forme du faisceau lumineux appliqué aux latex doit être de préférence une forme elliptique, allongée par rapport à l'écoulement. Cela est destiné à provoquer l'application du faisceau lumineux aux latex avec une intensité uniforme, même si les positions des courants des différents latex varient.
Lorsque le faisceau lumineux est envoyé sur les latex, des lumières diffusées sont produites. Parmi les lumières diffusées, la lumière diffusée vers l'avant, engendrée dans la direction de flux du trajet optique est reçue par une lentille de condensation 5 et un photodétecteur 6. Afin d'empêcher le faisceau lumineux appliqué de pénétrer directement dans le photodétecteur 6, un dispositif d'arrêt 17 par absorption de lumière est placé dans le trajet optique en avant de la lentille de condensation 5, et la lumière directe provenant de la source lumineuse d'irradiation et la lumière transmise à travers les supports sont éliminées. Ainsi, seule la lumière diffusée provenant des supports peut être reçue.Lorsque la lumière transmise à travers les supports est nécessaire, de la manière décrite ultérieurement, le dispositif d'arrêt 17, sous forme d'un petit miroir réfléchissant, est placé obliquement dans le trajet optique, de la maniére représentée sur la figure 1(B), et la lumière transmise peut être obtenue par la lumière réfléchie par le petit miroir 17, cette lumière étant reçue par un photodétecteur 18. En variante, un mirdir 22 muni d'un orifice peut être placé obliquement, de la manière représentée sur la figure 1(C), et la lumière diffusée qui est ainsi réfléchie peut être reçue par la lentille de condensation 5 et le photodétecteur 6, et la lumière transmise à travers l'orifice peut être reçue par un photodêtecteur 18.
De même, parmi les lumières diffusées, la lumière diffusée latéralement produite dans la direction latérale, perpendiculaire au trajet optique, est condensée par une lentille de condensation 7, est réfléchie par un miroir dichroique 8 et est reçue par un-photodétecteur 11.
En général, la direction suivant laquelle la lumière diffusée latéralement est reçue est souvent la direction orthogonale, comme dans la forme de réalisation de l'invention, bien que cela ne soit pas restrictif, mais peut être, par exemple, une direction de 45" ou une direction de 60". De même, lorsque les latex sont marques par un colorant fluorescent, la fluorescence faible produite avec les lumières diffusées est reçue et, en conséquence, parmi la fluorescence condensée par la lentille de condensation 7 et envoyée à travers le miroir dichroïque 8, la fluorescence verte est détectée par un ensemble comprenant un miroir dichroïque 9 et un photodétecteur 12 et la fluorescence rouge est détectée par un ensemble comprenant un miroir à réflexion totale 10 et un photodétecteur 13.Bien que non représenté sur la figure 1(A), un filtre passe-bande destiné à faire passer seulement une lumière dans la plage des longueurs d'onde de détection est installé peu avant chaque photodétecteur.
Lorsque l?s signaux des photodétecteurs 6, 11, 12 et 13 et la lumière transmise décrite ci-dessus doivent être détectés, le signal du photodétecteur 18 est introduit dans un circuit de calcul 15, dans lequel le calcul concernant l'analyse des particules est effectué.
Dans le récipient 16 destiné à l'échantillon de liquide, de la manière décrite précédemment, plusieurs types de latex A, B et C ayant des absorbances différentes, sensibilisés respectivement par les anticorps particuliers a, b et c, sont présents simultanément, etun échantillon auquel un échantillon analytique (par exemple du sérum humain) est ajouté et dont le temps de réaction et la concentration sont ajustés de manière appropriée, est présent sous forme d'un échantillon de liquide. Parmi ces latex A, B et C, ceux de même type sont de même absorbance et de même diamètre. Les diamètres des latex de types différents peuvent être identiques ou différents les uns des autres.Lorsqu'un antigène couplé de manière particulière aux anticorps a, b et c sensibilisés par les latex respectifs est présent dans le sérum, une reaction antigene-anticorps se produit et les latex du même type sont couplés les uns aux autres par l'antigène, formant par condensation des agglomérats. Lorsque l'antigène désiré n'est pas présent, une condensation ne se produit pas et les latex restent sous forme de particules isolées.
La figure 2 représente la structure d'une forme de réalisation plus avantageuse de l'appareil d'examen d'échantillon de la presente invention. Sur la figure 2, les numéros de référence semblables à ceux de la figure 1(A). désignent des éléments similaires. Sur la figure 1, les différents types de latex A, B et C, différant par leur absorbance, sont introduits sous forme d'un mélange dans un récipient destiné à l'échantillon de liquide, mais, comme le montre la figure 2, les latex A, B et C de types différents sont introduits séparément dans des récipients différents 19, 20 et 21 destinés aux échantillons de liquide et, en mettant sous pression simultanément ces récipients 19, 20 et 21 destinés aux échantillons de liquide, les latex expulsés fusionnent au niveau de la zone de circulation et s'écoulent à travers la cuve de circulation 4, à raison d'une particule à la fois ou d'un agglo mérat à la fois. Ainsi, les latex ne se mélangent pas les uns aux autres tant qu'ils ne s'écoulent pas dans la zone de mesure et, en conséquence, la possibilité des réactions antigène-anticorps respectives s'influençant mutuellement peut être réduite au minimum.
L'idée fondamentale d'un procédé d'application d'un faisceau lumineux à l'échantillon de liquide s'écoulant dans l'appareil décrit ci-dessus et de la mesure de plusieurs types de réactions antigene-anticorps en une seule fois par l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant et l'intensité de la lumière diffusée latéralement est décrite à présent en se référant aux figures 3 à 5.
Les figures 3 à 5 montrent un exemple de représentation des résultats de mesure par un cytogramme, l'intensité de la lumière diffusée latéralement et l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant étant représentées graphiquement respectivement suivant 'axe vertical et l'axe horizontal, trois types de latex A, B et
C, différant par leur absorbance, étant utilisés, et les zones entourées par des traits interrompus indiquant les zones dans lesquelles les résultats de mesure, tels qu'ils sont représentés graphiquement, sont rassemblés.
C, différant par leur absorbance, étant utilisés, et les zones entourées par des traits interrompus indiquant les zones dans lesquelles les résultats de mesure, tels qu'ils sont représentés graphiquement, sont rassemblés.
On sait de manière générale que, lorsqu'uns lumière est envoyée sur des particules minuscules telles que des latex, l'information concernant la caractéristique optique, telle que l'absorbance des particules, figure essentiellement dans l'intensité de la lumière diffusée latéralement, et l'information concernant le diamètre des particules figure essentiellement dans l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant. En conséquence, la dif férence d'absorbance entre les latex apparaît dans l'intensité de la lumière diffusée latéralement et la distinction entre les types de latex est donc évaluée par la séparation des latex dans la direction de l'axe vertical du cytogramme.De même, plus le diamètre des particules à examiner est grand, plus forte est l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant et, en conséquence, lorsqu'une réaction antigène-anticorps se produit et des agglomérats des latex sont formés, le diamètre apparent du latex augmente et l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant devient donc forte et.la plage s'élargit dans la direction de l'axe horizontal du cytogramme. La figure 3 représente la distribution lorsque l'antigène désiré n'est pas présent dans le sérum et la réaction antigène-anticorps ne se produit pas du tout et, les types A, B et C de latex étant présents, une représentation graphique est obtenue avec les latex séparés en zones étroites indiquées par les traits interrompus des groupes I, II et III.La figure 4 représente le cytogramme lorsque les antigènes couplés de manière particulière à trois types d'anticorps a, b et c sont tous présents et, puisque les latex sont condensés et le nombre d'agglomérats de particules de grandes dimensions est accru, la représentation graphique obtenue montre un élargissement des zones dans la direction horizontale du graphique de distribution, comme l'indiquent les traits interrompus des groupes I, II et III. La figure 5 représente le cytogramme lorsque seul le latex C provoque une réaction antigene-anticorps et la formation d'agglo mérats, seul le groupe III s'élargissant dans la direction horizontale. Cela signifie qu'il est possible de déterminer l'absence des antigènes a et b dans l'échantillon analytique et la seule présence de l'antigène c.Ainsi, des réactions antigene-anticorps discrètes apparaissent séparément sur le graphique de distribution et, en conséquence, la présence de plusieurs antigènes peut être appréciée par une seule mesure. De même, par l'observation du diamètre des agglomérats de particules, il est possible d'évaluer une quantité approximative d'antigène.
Dans la forme de réalisation de l'invention, trois types de latex différant par leur absorbance sont utilisés, mais il est également possible de mesurer quatre ou plus de quatre types en une seule fois et, si le nombre de types est égal à deux, la distinction peut être faite plus nettement.
Dans la forme de réalisation de l'invention, les latex sont sensibilisés par l'anticorps mais, inversement, les latex peuvent être sensibilisés par un antigène et l'examen peut être effectué avec un échantillon à étudier auquel est ajouté un anticorps, ce qui permet également de différencier un anticorps particulier.
En outre, dans la forme de réalisation de l'invention, la différence d'absorbance entre les supports est mise en évidence d'après l'émission de lumière diffusée latéralement, mais la lumière diffusée latéralement renferme l'information concernant des caractéristiques optiques telles que le degré de transmission de lumière qui est en relation étroite avec l'absorbance, le degré de réfraction de la lumière et le degré de réflexion de la lumière par la surface du support. En conséquence, même si plusieurs types de supports différant par leurs caractéristiques optiques sont utilisés, une mesure similaire peut être effectuée au moyen d'un appareil présentant une structure similaire à celle décrite ci-dessus.
Dans ce qui précède, le principe fondamental de la méthode de détection de plusieurs types de réactions antigene-anticorps en une seule fois, par l'utilisation de supports différant par leur absorbance, a été décrit.
Cependant, à vrai dire, des valeurs de sortie nettes, comme le représentent les figurés 3 à 5, ne sont pas obtenues.
Cela est considéré comme étant dû au fait que l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant et l'intensité de la lumière diffusée latéralement ne renferment pas des types totalement distincts d'informations mais présentent une corrélation.
Les figures 6 à 8 et 12 représentent les résultats de la mesure effectuée sur les trois types de latex A, B et C ayant des diamètres de particules identiques et différant par leur absorbance, décrits dans la forme de réalisation précédente, sensibilisés par des anticorps distincts a, b et c. Lorsque seul le latex A, parmi les trois types de latex, est amené à s'écouler l'histogramme de la lumière diffusée vers l'avant par les particules condensées par la réaction antigène-anticorps est représenté de la manière indiquée sur la figure 6(A).
Sur la figure, l'axe horizontal représente l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant DA reçue par le photodétecteur 6, et l'axe vertical représente le nombre N de particules. Puisque l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant dépend du diamètre des particules, les diamètres apparents des latex sont modifiés par condensation et sont indiqués sur le graphique, tout en étant séparés sous forme de Il, I2 et 13. Les numéros des latex condensés sont considérés comme étant respectivement les numéros un, deux et trois. La figure 6(B) est un histogramme de la lumière diffusée latéralement, sur lequel l'axe horizontal représente l'intensité de la lumière diffusée latéralement reçue par le photodétecteur 11 et l'axe vertical représente le nombre N de particules.Puisque l'intensité de la lumière diffusée latéralement est modifiée par l'absorbance des particules, l'absorbance des agglomérats est modifiée par condensation et est indiquée sur le graphique, tout en étant séparée en J1, J2 et J3. La figure 6(C) est un cytogramme représentant globalement ces deux histogrammes.
Sur la figure, l'axe horizontal représente l'intensité de la lumière diffusée latéralement et ltaxe vertical représente la densité de la lumière diffusée vers l'avant.
I1 sur la figure 6(A) et J1 sur la figure 6(B) concernent la même particule et, de manière similaire, les ensembles de I2, J2 et I3, J3 concernent le même agglomérat de particules. En conséquence, il apparaît sur le cytogramme trois groupes, tels qu'un groupe de particules dans lequel la lumière diffusée latéralement correspond à J1 et la lumière diffusée vers l'avant correspond à I1, un groupe de particules dans lequel la lumière diffusée latéralement correspond à J2 et la lumière diffusée vers l'avant correspond à I2, et un groupe de particules dans lequel la lumière diffusée latéralement correspond à J3 et la lumière diffusée vers l'avant correspond à 13. Cela peut être évalué lorsque les particules sont, respectivement, dans les états condensés de une, deux et trois particules.
La description précédente concerne le cas ou la réaction antigène-anticorps s'est produite et des particules ont été condensées mais, lorsque l'antigène désiré n'est pas présent et que la condensation ne se produit pas, 12, J2, 13 et J3 formés par condensation n'apparaissent pas sur le cytogramme, seuls Il et J1 apparaissant. Lorsque quatre ou plus de quatre agglomérats volumineux sont présents, ils apparaissent sur une ligne interrompue reliant ensemble les groupes de la figure 6(C). Par l'observation des groupes apparaissant sur le cytogramme de la manière décrite cidessus, la présence de l'antigène à rechercher peut être.
détectée.
De manière similaire, la mesure est effectuée en utilisant d'autres types de latex B et C de même diamètre de particules que ledit latex A mais différant dudit latex A par leur absorbance et, lorsque les antigènes b et c sont présents, il est possible d'obtenir des histogrammes et des cytogrammes, tels qu'ils sont repré sentés respectivement sur les figures 7 et 8.
La figure 12 est un cytogramme sur lequel les cytogrammes des figures 6(C), 7(C) et 8(C) sont réunis, et correspond aux figures 3 à 5. Sur cette figure, les axes de l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant DA et de l'intensité de la lumière diffusée latéralement DL sont permutés. Sur le cytogramme de la figure 12, le groupe se trouvant sur chaque ligne en traits interrompus représente l'information concernant le même antigène (anticorps). La figure 12 présente le résultat obtenu lorsque les antigènes correspondant à trois types d'anticorps a, b et c sont tous présents. Sur la figure 12, le point d'intersection auquel
DA et DL prennent la même valeur n'existe pratiquement pas et, en conséquence, le type et la quantité de l'antigène peuvent être déterminés.
DA et DL prennent la même valeur n'existe pratiquement pas et, en conséquence, le type et la quantité de l'antigène peuvent être déterminés.
Dans ce cas, il existe un procédé couramment utilisé pour effectuer un traitement par fenêtre, indiqué en R, permettant ainsi d'examiner le nombre (comptage) de particules présentes dans la fenêtre. A présent, en ce qui concerne la figure 12, il existe des zones dans lesquelles des groupes sont proches les uns des autres sur le cytogramme, et cela est dû au fait que des latex de même diamètre mais différant par leur absorbance, c'est-à-dire des latex qui sont pratiquement identiques par l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant et qui diffèrent seulement par l'intensité de la lumière diffusée latéralement, sont choisis comme latex A, B et C. Cela engendre des difficultés dans la réalisation du traitement par fenêtre.
Ainsi, on considère que les latex A, B et'C diffèrent par leurs absorbances et leurs diamètres de particules. Plus précisément, par l'utilisation de trois types de latex A, B et C qui présentent une absorbance d'autant plus élevée que le diamètre de leurs particules est plus grand, la conception doit être effectuée de telle manière que chaque groupe apparaisse largement sur le cytogramme.
La figure 9 représente le cytogramme obtenu avec un latex qui présente un petit diamètre de particules et une faible absorbance, c'est-à-dire un latex dans lequel l'intensité de la lumière diffusée vers l'avant DA est faible et l'intensité de la lumière diffusée latéralement
DL est forte, la figure 10 représente les cytogrammes obtenus avec un latex pour lequel DA est forte et DL est également forte, et la figure îl représente les cytogrammes obtenus avec un latex pour lequel DA est forte et DL est faible. Par utilisation d'une association de ces trois types de latex A, B et C, le cytogramme résultant est un cytogramme, tel qu'il est représenté sur la figure 13, dans lequel les groupes respectifs sont largement séparés et le traitement par fenêtre est aisé à effectuer.
DL est forte, la figure 10 représente les cytogrammes obtenus avec un latex pour lequel DA est forte et DL est également forte, et la figure îl représente les cytogrammes obtenus avec un latex pour lequel DA est forte et DL est faible. Par utilisation d'une association de ces trois types de latex A, B et C, le cytogramme résultant est un cytogramme, tel qu'il est représenté sur la figure 13, dans lequel les groupes respectifs sont largement séparés et le traitement par fenêtre est aisé à effectuer.
Dans les formes de réalisation décrites jusqu'à présent, l'émission de la lumière diffusée latéralement est utilisée pour examiner l'absorbance des supports, mais l'information concernant les caractéristiques optiques telles que l'absorbance, etc., des supports est fournie également par la lumière transmise provenant de la lumière appliquée au support. En conséquence, si l'intensité de la lumière transmise est mesurée, les types de supports peuvent être différenciés également à partir de l'intensité mesurée de la lumière transmise. De la manière décrite précédemment, dans l'appareil de la figure 1(A) ou 2, le système de réception de la lumière diffusée vers l'avant est présenté sous la configuration représentée sur la figure 1(B) ou 1(C), ce qui permet de détecter la lumière transmise. En conséquence, en effectuant une analyse similaire à celle décrite ci-dessus en ce qui concerne le circuit de calcul 15 par l'utilisation de la lumière transmise plutôt que de la lumière diffusée latéralement, il est possible d'obtenir un résultat de mesure pratiquement similaire.
Claims (13)
1. Méthode d'examen d'un échantillon, caractérisée en ce qu'elle comprend les étapes consistant
à préparer un échantillon comprenant un premier groupe de supports de diamètre uniforme revêtus avec un premier anticorps ou antigène et présentant une première caractéristique optique pour une lumière d'irradiation et un second groupe de supports de diamètre uniforme revêtus avec un second anticorps ou antigène et présentant une seconde caractéristique optique différente de ladite première caractéristique optique pour la lumière d'irradiation, mélangé à un échantillon analytique
à envoyer une lumière sur les différents supports présents dans ledit échantillon
à détecter la lumière diffusée vers l'avant, diffusée pratiquement dans la direction dans laquelle la lumière est envoyée sur les supports
à détecter la lumière transmise à travers les supports sur lesquels la lumière est envoyée ou bien la lumière diffusée latéralement dans une direction différant notablement de la direction dans laquelle la lumière est envoyée sur les supports
à différencier l'état condensé desdits supports et les types de supports à partir de la puissance de sortie de détection ; et
à examiner le premier et le second antigènes ou anticorps couplés de manière particulière au premier et au second anticorps ou antigènes présents dans ledit échantillon analytique.
2. Méthode d'examen d'un échantillon suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la caractéristique optique est l'absorbance des supports.
3. Méthode d'examen d'un échantillon suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la caractéristique optique est le degré de transmission de lumière par les supports.
4. Méthode d'examen d'un échantillon suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la caractéristique optique est le degré de réfraction de la lumière par les supports.
5. Méthode d'examen d'un échantillon suivant la revendication 1, caractérisée en ce que la caractéristique optique est le degré de réflexion de la lumière par les supports.
6. Méthode d'examen d'un échantillon suivant la revendication 3, caractérisée en ce que le premier groupe de supports présente un grand diamètre ainsi qu'une forte absorbance, par rapport au second groupe de supports.
7. Appareil destiné à l'examen d'un échantillon, caractérisé en ce qu'il comprend
un système (14, -16) pour provoquer l'écoulement, jusqu'à une position d'examen (4) d'un échantillon produit en mélangeant un premier groupe de supports de diamètre uniforme revêtus avec un premier anticorps ou antigène et présentant une première caractéristique optique pour une lumière d'irradiation et un second groupe de supports de diamètre uniforme revêtus avec un second anticorps ou antigène et présentant une seconde caractéristique optique différant de ladite première caractéristique optique pour la lumière d'irradiation, avec un échantillon analytique
un système d'émission de lumière (1) destiné à envoyer une lumière sur les différents supports présents dans ledit échantillon qui a été amené à s'écouler jusqu'à ladite position d'examen (4)
un premier système de réception de lumière (6), destiné à recevoir la lumière diffusée vers l'avant pratiquement dans la direction de son envoi sur lesdits supports
un second système de réception de la lumière (11, 12, 13), destiné à recevoir la lumière transmise à travers lesdits supports ou bien la lumière diffusée latéralement dans une direction différant notablement de la direction d'envoi de la lumière sur lesdits supports ; et
un système de calcul (15) destiné à différencier l'état condensé desdits supports et les types de supports à partir des valeurs de sortie obtenues au moyen du premier et du second systèmes de réception de la lumière et permettant d'effectuer l'examen des premier et second antigènes ou anticorps couplés de manière particulière auxdits premier et second anticorps ou antigènes présents dans ledit échantillon analytique.
8. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 7, caractérisé en ce que la caractéristique optique est l'absorbance des supports.
9. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 7, caractérisé en ce que la caractéristique optique est le degré de transmission de la lumière par les supports.
10. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 7, caractérisé en ce que la caractéristique optique est le degré de réfraction de la lumière par les supports.
11. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 7, caractérisé en ce que la caractéristique optique est le degré de réflexion de la lumière par les supports.
12. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 7, caractérise en ce que les récipients d'échantillons destinés à recevoir respectivement les premier et second groupes de supports sont préparés de manière distincte.
13. Appareil d'examen d'un échantillon suivant la revendication 8, caractérisé en ce que le premier groupe de supports présente un grand diamètre ainsi qu'une forte absorbance par rapport au second groupe de supports.
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|---|---|---|---|
| JP63033482A JPH0718879B2 (ja) | 1988-02-15 | 1988-02-15 | 検体検査方法 |
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990005307A1 (fr) * | 1988-11-04 | 1990-05-17 | Chemunex | Methode d'agglutination pour l'analyse d'une substance |
| EP0482571A1 (fr) * | 1990-10-22 | 1992-04-29 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | Essai de substances utilisant cytometrie en flux |
| EP0536593A1 (fr) * | 1991-10-01 | 1993-04-14 | Canon Kabushiki Kaisha | Procédé et dispositif pour mesurer un spécimen et réactif à cet effet |
| US5290707A (en) * | 1991-11-25 | 1994-03-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for detection of microorganisms |
| US5567627A (en) * | 1991-07-16 | 1996-10-22 | Trans-Med Biotech, Incorporated | Method and composition for the simultaneous and discrete analysis of multiple analytes |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2319131A1 (fr) * | 1975-07-23 | 1977-02-18 | Coulter Electronics | Procede pour detecter et separer les antigenes et les anticorps dans le sang ou autres echantillons |
| EP0070527A1 (fr) * | 1981-07-17 | 1983-01-26 | Toray Industries, Inc. | Procédé pour l'essai de matériaux biologiques actifs et agents de marquage à cet effet |
| GB2123146A (en) * | 1982-06-28 | 1984-01-25 | Abbott Lab | Dual parameter flow immunoassays |
| JPS6281567A (ja) * | 1985-10-07 | 1987-04-15 | Showa Denko Kk | 粒子凝集反応を用いる定量方法 |
-
1989
- 1989-02-14 FR FR8901885A patent/FR2627286B1/fr not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2319131A1 (fr) * | 1975-07-23 | 1977-02-18 | Coulter Electronics | Procede pour detecter et separer les antigenes et les anticorps dans le sang ou autres echantillons |
| EP0070527A1 (fr) * | 1981-07-17 | 1983-01-26 | Toray Industries, Inc. | Procédé pour l'essai de matériaux biologiques actifs et agents de marquage à cet effet |
| GB2123146A (en) * | 1982-06-28 | 1984-01-25 | Abbott Lab | Dual parameter flow immunoassays |
| JPS6281567A (ja) * | 1985-10-07 | 1987-04-15 | Showa Denko Kk | 粒子凝集反応を用いる定量方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PATENT ABSTRACTS OF JAPAN, vol. 11, no. 285 (P-616)[2732], 16 septembre 1987; & JP-A-62 81 567 (SHOWA DENKO K.K.) 15-04-1987 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990005307A1 (fr) * | 1988-11-04 | 1990-05-17 | Chemunex | Methode d'agglutination pour l'analyse d'une substance |
| US5219763A (en) * | 1988-11-04 | 1993-06-15 | Chemunex | Agglutination method for the determination of multiple ligands |
| US5405784A (en) * | 1988-11-04 | 1995-04-11 | Chemunex | Agglutination method for the determination of multiple ligands |
| EP0482571A1 (fr) * | 1990-10-22 | 1992-04-29 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | Essai de substances utilisant cytometrie en flux |
| AU649725B2 (en) * | 1990-10-22 | 1994-06-02 | Sumitomo Electric Industries, Ltd. | Assay of substances using flow cytometry |
| US5567627A (en) * | 1991-07-16 | 1996-10-22 | Trans-Med Biotech, Incorporated | Method and composition for the simultaneous and discrete analysis of multiple analytes |
| EP0536593A1 (fr) * | 1991-10-01 | 1993-04-14 | Canon Kabushiki Kaisha | Procédé et dispositif pour mesurer un spécimen et réactif à cet effet |
| US5601983A (en) * | 1991-10-01 | 1997-02-11 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for specimen measurement |
| US5290707A (en) * | 1991-11-25 | 1994-03-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for detection of microorganisms |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2627286B1 (fr) | 1993-08-20 |
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