LU82514A1

LU82514A1 - Derives n-(vinblastinoyl-23)d'acides amines,leur preparation et leur application therapeutique

Info

Publication number: LU82514A1
Application number: LU82514A
Authority: LU
Inventors: Andre B Trouet; Jean A Hannart; Sivaprasada Bushana Kandukuri
Original assignee: Omnium Chimique Sa
Priority date: 1980-06-10
Filing date: 1980-06-10
Publication date: 1982-01-20
Also published as: JPS5728094A; ZA813781B; JPH0210836B2; BE889136A

Description

-1- 1 * r ' 5c.

- i

BREVET D‘ INVENTION

I .* : ! : ) .

. j ~ *

\ La société dite : OMNIUM CHIMIQUE SOCIETE ANONYME

| t à Louvain-la-Neuve (Belgique) i ---- ' '--— — — — — — —— — _ — — — . — --— “--- “ "j f 1 1 DERIVES N-(VINBLASTINOYL-23) D'ACIDES AMINES ,

LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION THERAPEUTIQUE

La présente invention se rapporte à de nouveaux alca-5 loïdes bis-indoliques. Plus particulièrement, 1'inven- j tion est relative à de nouveaux dérivés de couplage ; '1 i d'acides aminés avec la Vinblastine, à leur procédé de !« préparation, à leur application en tant qu'agents ) anti-tumoraux et aux compositions pharmaceutiques les | 10 contenant.

Ü Ces nouveaux dérivés de la Vinblastine peuvent être :: ’ j. utilisés pour le traitement des leucémies et des | tumeurs malignes chez l'homme.

;î[ ; i i s

Les alcaloïdes bisindoliques du type de la Vinblastine sont des composés bien connus possédant le squelette j| carboné de la formule générale suivante : \t — % i il

. -I

- 2 - • CH302C (I) 5 !

: LiXX

,6 CH3ik%^EHjyf\.R2 JH0# \ 23 ^*0 R, 15

Citons à titre d’exemple la vincaleukoblastine (brevet américain 3.097. 137), la 1 eurocristine ou vincristine et la leurosidine (brevet américain 3.205.220), le vinglycinate (brevet belge 659.1 l2)et la vindésine (brevet belge 813.IoSj.

20 Ce dernier composé a été obtenu p»ar transformation chimique de la Vinblastine naturelle (I, R^=0CHj, R?=COCH_j, qui elle-même est obtenue par extraction à partir de feuilles de Cutharunthus roseus.

-i La Vinblastine, la vincristine et la vindésine sont ccmnercialisées pour leur utilisation en thérapeutique humaine, plus particulièrement pour le traitement de leucémies ; et de certaines tumeurs solides.

30 Ces médicaments possèdent néanmoins des effets secondaires défavorables. La vincristine est neurotoxique et la Vinblastine est fortement toxique au niveau des tissus hématopoetiques.

P - 3 - ! i; i-j il j f h t i ί j! : i \ s 1 Leur mécanisme d'action est analogue à celui qui a été ji postulé pour l'action antimitotique de la colchicine.

1 / _ Ces médicaments agiraient par inhibition de la polymérisation * * * I de la tubuline en microtubules et arrêt subséquent de la u |5 division cellulaire en métaphase.

i i; ; L'utilisation de complexes 1:1 d'alcaloïdes bisindoliques / antitumoraux avec la tubuline a été décrite dans le brevet b e 1 g e 8 5 4.0 5 3 .

10 Dans certains cas, il peut en résulter une toxicité moindre ; et une activité chimiothérapeutique plus importante que celles ! des alcaloïdes libres correspondants.

h ·! D'autres dérivés obtenus par modification chimique de la !. 15 Vinblastine ont été testés. Ainsi le sulfate de vinglycinate j (I, sulfate, R^-üCH,, R7-CÛCH7N(Cli^)^ (Cancer Research 1yo7, 27 , 221 -227) a été étudié en expérimentation clinique mais ne s'est généralement pas révélé supérieur â la Vinblastine i et à la vincristine.

2ü

Le brevet belge 813.108 décrit la v indes me (1, R.^NH-,, R0 = Hj « ! i- et d'autres dérivés carboxamide en C-3 de la Vinblastine.

_ Des publications postérieures ont confirmé l'intérêt thérapeutique de la vindésine ou carboxamide-3 Jéacétyl-G-4 j 25 Vinblastine, mais ce composé s'est cependant révélé inactif pour le traitement de tumeurs L 1210 transplantées chez la ij souris (C.J. Barnett et al., J. Med. Chem-, 2JL» 88, J978).

! w ‘i ^-- i ! f , - 4 - a j I 1 Les dérivés de couplage d'acides aminés avec la Vinblastine et d'autres alcaloïdes bisindoliques analogues ont été proposés d'une manière générale dans le brevet belge 813.168 susmentionné.

* 5 Néanmoins, aucun exemple de dérivé d'acide aminé spécifique j n'a été divulgué et conséquemment, aucune donnée physico chimique n'a été fournie. Aucune méthode de préparation spécifique et aucun résultat pharmacologique particulier n'a été mentionné.

. lü

Il peut donc en être déduit que ces dérivés n'ont pas été réellement synthétisés et/ou n'ont pas été testés pour leur activité antitumora le.

Page 3, ligne' lü et suivantes, il est en outre mentionné 1S que "l'activité anti-néoplasique semble être limitée à des structures très spécifiques et les chances d'obtenir des | médicaments plus actifs en modifiant ces structures semblent également faibles".

2ü lia maintenant été constaté que les nouveaux composés décrits dans l‘a présente invention sont capables de retarder efficaccment la mort de souris auxquelles on a transplanté par voie intraveineuse des tumeurs P 388 et L 1210.

Alors que les alcaloïdes Vinca administrés par voie i.v.

; 2¾ ne présentent généralenient aucune activité sur la leucémie i L 1210, les résultats obtenus montrent pour les nouveaux ί dérivés une activité très significative et inattendue.

Ils possèdent, en outre, d'autres avantages importants et inattendus comparativement à la Vinblastine et à ses analogues 30 connus, en particulier la vindésine.

’S

- 5 - i : ί 1 Les nouveaux composés de l’invention répondent plus • 1

particulièrement à la formule générale II

I ' /~~\ !5 ) C02ch3î (II) i 1 i io ; I i rn 15 ch3o or2 p CH3 üH '·£—-OK4 20 dans laquelle ;; R T représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle, de •i préférence un groupe acétyle; if Rj est un atome d’hydrogène, une chaîne alkyle, hydrexy- y carboxy-, amido-, ami no-, guanadino-, thio-alkyîe en C 1-C S, 25 cystéinyl méthyle, methyl-thio éthyl , benzyle, hydroxy benzyle; . ^ 1 ï f ]| [j “ N--f 2

\ 30 kAjJ ou 1J

H

Λ.

£: - 6 - 1 ou représente avec l'atome de carbone auquel il est attaché et l'azote du groupe amide, un cycle azole; et R4 représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié § possédant de 1 à 8 atomes de carbone ou un groupe benzyle.

4 Plus particulièrement, le fragment structural de la formule II

R3 5 - NH - CH - COR4 10 représente un ester de n'importe lequel des acides aminés naturels et leurs isomères optiques de configuration D, notamment la glycine acide aspartique cystine 15 alanine acide glutamique méthionine va line asparagine phenylalanine leucinc glutamine tyrosine isoleucine arginine tryptophane serine lysine proline ou 20 thréonine cystéine histidine

Les composés préférés de l'invention répondent à la formule II dans laquelle K-, représente un atome d'hydrogène et la partie acide aminé est dérive d'un des acides aminés suivants : • 25 alanine, val inc, leueine, isoleucine ou phenylalanine -

' J

;j 3 -Τ Ι ί Λ ( 4 ; Ί ΐ| 1 En ce qui concerne les propriétés pharmacologiques, il | est prévisible que de légères modifications de la

Il structure de l'acide aminé fourniront des composés il d'activité comparable.

\i | 5 En particulier, la présence d'un acide α-amïné non !| naturel (par exemple un acide α-aminé N-monosubstitué | ou un acide aminéa,a -dialkyle) ou un acide β-aminé || fournirait des composés d'activité similaire contre un ; * » I certain nombre de tumeurs. Pareils composés entrent Ί 4- 10 donc dans le cadre de la présente invention.

Les composés de formule II peuvent être obtenus en 1 utilisant diverses méthodes de synthèse.

;! Selon une de ces méthodes, ces dérivés sont obtenus à • *i * | 15 partir de la Vinblastine par hydrazinolyse, nitrosation ;| puis couplage avec l'ester d'acide aminé approprié.

‘ il w i Ces composés peuvent également être avantageusement obtenus par saponification de la vinblastine, suivie j 20 d'un couplage de l'acide vinblastinoîque, éventuelle- j ment préalablement protégé par acétylation, avec y l'ester d'acide aminé.

i i j* Lorsque l'acide aminé choisi contient des groupes h 25 fonctionnels dans la chaîne latérale R-, il peut être ! ·" * comme la lysine ou la cystéine, nécessaire de protéger * ces groupes fonctionnels en utilisant les méthodes ! , bien connues de l'homme de l'art.

•3 v - 8 - » 1 Cette protection peut être effectuée, selon la nature du groupe à protéger, par le greffage d*un groupe benzyle, t-butyle, benzyloxycarbonyle, t-butoxycarbonyle ou trityl. D'autres agents bien connus en chimie peptidique peuvent 5* être avantageusement utilisés.

5 Selon le premier procédé mentionné, les composés suivant l'invention peuvent être obtenus à partir de la Vinblastine, de manière classique, par hydrazinolyse suivie de nitrosation 10 puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de polypeptide selon le schéma réactionnel I.

..T1! HsNO. h-T^| ester d'acide S a! · 1 U , J j _L·, V"-1 I aminé ” Τ’”* Sc* HO COOCU HO C-HH-NH- Hü C-N, J U L »3

O O

20 ^ L>H

c - HO ÇVN-Ç-CO O R ^ Schema I.

' . G H

25 La première étape consiste à additionner 1 'iivdï az ine annvdrc a une solution Je Vinblastine base dans le méthane! anhydre. Le mélange réactionnel est alors chautfé sous atmosphère inerte pendant 12 ä 30 heures à une température comprise entre 30 et 70°C. De préférence, la température sera maintenue vers 6Ü°C, le temps de réaction étant alors de 24 heures.

j - 9 - » j . 1 L'hydrazide de la désacêtyl-4-vinblastine est alors • isolée par addition d'eau, extraction au dichloro- mêthane et concentration. Le composé peut être ultérieurement purifié par chromatrographie préparative 5 (silice neutre).

Lors de la deuxième étape, la fonction hydrazide de la Vinblastine modifiée est transformée en azoture d'acide.

; 1 Cette transformation est effectuée, de manière connue, ; 10 par addition de nitrite de sodium à l'hydrazide en * solution dans un mélange eau-méthanol-acide. L'acide utilisé peut être l'acide chlorhydrique. La température de réaction est maintenue entre 0 et 5°C. Après extraction par un solvant aprotique non soluble dans « 15 l'eau, de préférence le chlorure de méthylène, la phase organique est partiellement concentrée.

L'azoture d'acide lui-même n'est de préférence pas isolé mais directement mis en présence de l'ester | d'acide aminé approprié ou, le cas échéant, le dérivé 20 correspondant protégé, en solution dans le chlorure de méthylène.

| Le milieu réactionnel est maintenu entre -3 et +5°C

j pendant environ 15 heures. La réaction est facilement suivie par chromatographie sur couche mince. Après 25 concentration, on isole le composé de l'invention II qui peut être transformé en sulfate ou autre sel d'acide minéral ou organique par cristallisation à ; partir d'une solution méthanolique de l'acide j j = correspondant.

30

Les composés de l'invention sont purifiés en utilisant 1 les techniques bien connues de chromatographie et de t recristallisation.

! -ΙΟ Ι j 1 Le cas échéant, le dérivé de déacëtyl 0-4 Vinblastine j ainsi obtenu peut être réacétylé soit directement pour donner le dérivé de la Vinblastine II dans lequel R^COCHj (J. Med. Chem. 2_2, 391 , 1979) ou par formation 5 préliminaire du dérivé diacétoxy-3,4 suivie d'une ! hydrolyse sélective du groupe acétoxy en position 3.

La présente invention s'étend également aux applica- k tions industrielles et notamment pharmaceutiques des 10 composés bisindoliques nouveaux.

Les composés de l'invention présentent en particulier des propriétés antitumorales particulièrement intéressantes et susceptibles d'être utilisés en thérapeutique , humaine.

15

Ces dérivés d'acide aminé peuvent être, en particulier, utilisés pour le traitement de leucémies du type L 1210, P 388, de gliomes, lymphosarcomes et d'autres leucémies ou tumeurs malignes.

20 En thérapeutique humaine, ils sont utilisés pour le traitement de la maladie de Hodgkin et pour d'autres tumeurs pouvant bénéficier d'un traitement avec la Vinblastine, la vincristine et la vindésine.

25 Ces composés peuvent également être utilisés en médecine vétérinaire pour le traitement des tumeurs • chez les animaux.

Divers résultats obtenus lors de l'expérimentation 30 pharmacologique effectuée avec le dérivé du leucinate d’éthyle (I, R1 =NHCH[CH?CH, r<2=H; VLEj , du leucinate de méthyle (VLM), du D-leucinate d'éthyle (VDLE) de la L-phênylalaninate d'éthyle (VPE) et du L-glutamate d'éthyle fVGE) sont rassembles dans les 35· tableaux I et II, respectivement vis-à-vis des tumeurs ; P 388 et L 1210.

i t i : j -11- j ! 1 Pour le traitement des tumeurs malignes chez les j animaux, les activités chimiothérapeutiques ont été testées en utilisant les sels de sulfate des composés de l'invention. Ils ont été comparés avec les sulfates 5 correspondants de la vindésine.

La supériorité des composés suivant l'invention est i ainsi démontrée.

* ! Des souris DBA2 ont été inoculées par voie intra- ! 10 veineuse avec 10^ cellules leucémiques provenant d'une | ascite leucémique P 388 ou L 1210 de 7 jours, suivant le schéma en une injection (jour 1) ou le schéma en f i trois injections (jours 1,2 et 3). Le jour 0 est le t jour d'inoculation des cellules tumorales.

15

En général, les composés de l'invention se sont révélés , être beaucoup moins toxiques que les alcaloïdes Vinca actuellement utilisés en thérapeutique anticancéreuse. La dose létale 50 (DL^q) de la VLE a été déterminée 20 en utilisant des souris femelles de souche Charles River CD^ et pesant au moins 24 g. La méthode de ’ calcul de Litchfield et Willcoxon fournit une valeur de DL,-q de 32 mg/kg.

; 5 Les doses correspondantes pour la Vinblastine et la ! o r » I vinuesine sont respectivement de 24 mg/kg et environ | 11 mg/kg. On a noté en particulier contrairement aux ! cas de la Vinblastine et de la déacétyl Vinblastine, l'absence de toxicité hépatique à des doses de 20 à 4ü i j mg/kg.

i.

! i j i s ! f ( i I TABLEAU I P 388 Nbre d'animaux : 10 I ----- | Produit Dose MST ILS Schéma VLE 20 16 52,4 1 VLE 22 20 90,5 1 VLE 24 16 52,4 1 VLE 24 20 75,4 1 VLE 26 '1 7,5 53,5 1 VLE 28 19,6 71,9 1 VLE 30 21 84,2 1 f VLM 10 16,5 35 1 VLM 10 16,3 40,5 1 VLM 12,5 37 203,3 1 VLM 12,5 16,3 40,5 1 VLM 15 18 55,2 1 i VDLE | 6 14,7 26,7 1 VDLE | 8 I 17 46,5 1 VDLE j 10 ! 33 170,5 1 VDLE I 12,5 ! 32 162 1 : I I ! VPE j 10 s 13 12,1 I 1 VPE j 20 j 14,4 24,1 j 1 : VPE ; 40 ! i >505 ! 1 ! VPE ! 50 ; | > 223,8 j 1 VPE | 60 ; I7132,7 S 1 f ! i l

! ! : I

VGE 10 ! 11,5 j -0,9 j 1 ' ! VGE 20 ! 12,8 ! 10 | 1 ! i : VGE 40 ! 15,6 34,5 1 î i

, I

: VDS 6 j 16 1 39,1 1 : VDS | 2 | 13,7 | 19,1 ! 1,2,5 ! i I ! i i

\ V

! f }* t : * » -13- ! VLE 5 14,5 25 1,2,3 ; / VLE 6 15 29,3 1 ,2,3 | VLE 7 14,2 24,6 1,2,3 VDS : Vindésine ou déacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3.

4 | * 10 cellules sont injectées par voie i.v. à des souris femelles DBA2· MST : "Medium Survival Time", jour où la moitié des animaux sont morts.

j %ILS: "Percentage of Increased Life Span", pourcentage d'augmentation de survie.

i TABLEAU II L 1210 Nbre d’animaux : 10 r

Produit Dose MST ILS Schéma| i l -----------------------1----------p------------------- VLE 20 10,6 26,2 1 r ’ VLE 22 11 30,9 1 VLE 24 11,6 38,1 1 j VPE 60 14 66,7 1 j VDS 6 9,0 14 1 ! i VLE 6 9,2 9,5 1,2,3 } __λ____ î 4 i l * 10 cellules L 1210 sont injectées par voie i.v. à i

des souris femelles DBA0. I

ù { ï MST : "Medium Survival Time", jour où la moitié des [ animaux sont morts . ! %I LS : "Percentage of Increase Life Span", pourcentage d'augmentation de survie.

j ^ i ! >14- « 1 Pour leur application thérapeutique, les composés de l'invention, éventuellement sous forme lyophilisée, ! sont de préférence administrés par voie parentérale, dissous dans un solvant pharmaceutiquement acceptable, | 5 sous la forme d’une base ou d’un sel d’addition d’un acide pharmaceutiquement acceptable.

| L’eau physiologique ou d’autres solutions salines tamponnées, par exemple avec un phosphate, sont des solvants appropriés. D'une manière générale, ces ; , 10 composés peuvent être utilisés en s'inspirant des techniques et des limitations qui sont connues pour les traitements thérapeutiques avec les autres alcaloïdes de la classe des Vinca.

! 15 La substance active est généralement administrée à une posologie pouvant varier de 0,01 mg à environ 5 mg/kg, | en fonction du dérivé utilisé et du schéma thérapeutî- ί que adopté. Les doses hebdomadaires totales varieront généralement de Q,0S mg à environ 5 mg/kg.

20

Les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec un ou plusieurs agents carcino-statiques incluant par exemple les agents alkylants, les antimétabolites tels que le méthotrexate, le 25 fluoro-5-uracile, la mercapto-6 purine, la thio-6 ; - guanine, les arabinosides de la cytosine et les anti- biotiques tels que 11actinomycine b, la daunorubieine et l'adriamycine.

| En particulier, ces nouveaux dérivés de 1 a Vinblastine j 30 peuvent être utilisés en association entre eux.

Les exemples suivants illustrent de manière non | limitative le procédé conduisant aux composés de | 1'invention.

I ‘ -

'S

-15- % 1 Exemgle_l : j Obtention de la 0-4 désacétyl Vinblastine hydrazide : (I, R.j =NHNH2, R2=H) i i : 1 . ‘ ] 5 A une solution de 14 ml d'hydrazine anhydre et de ü 14 ml d’éthanol anhydre, on ajoute 1,12 g de sulfate

* . _ X

i; de Vinblastine (1,23.10 M) . Le mélange réactionnel ainsi formé est maintenu 18 heures à 60°C.

On ajoute alors 28 ml d'eau saturée en chlorure de „ 10 sodium et on extrait au chlorue de méthylène.

Après séchage (MgSO^) et évaporation sous vide du i solvant, on récupère 930 mg (98¾) de l'hydrazide ! unitache en chromatographie sur couche mince.

15 Exemple_2 :

Synthèse de la 0-4 désacétyl N(L-leucinate d'éthylej

Vinblastine (VLE, =leucinate d'éthyle, R->=H) -4 A une solution de 275 mg (3,58 10 M) de 0-4 désacétyl 20 Vinblastine hydrazide dans 7 ml de méthanol anhydre et 20,5 ml d'HCl 1N, refroidie préalablement à ûcC, on ajoute 58 mg de nitrite de sodium.

; , On laisse agiter pendant 25 minutes avant de revenir I à un pH de 8,5 par addition d'une solution de ' 25 bicarbonate de sodium à 5 %.

L'azoture formé est extrait au chlorure de méthylène.

La phase organique est séchée sur MgSO^ et filtrée.

On y ajoute alors 68,4 mg de leucinate d'éthyle -4 (4,29.10 M) et concentre sous vide, jusqu'à l'obten-' 30 tion d'une solution de 4 ml environ.

i ' i -16- 1 Cette solution est alors laissée pendant 24 heures au réfrigérateur.

La réaction étant alors terminée, on ajoute 50 ml de chlorure de méthylène et on lave plusieurs fois 5 avec le même volume d'eau déminéralisée puis une fois avec une solution saturée en NaCl.

Les phases organiques sont séchées sur MgSO^, filtrées puis évaporées sous vide.

On recueille ainsi 300 mg de produit brut auxquels 10 on ajoute 0,035 g de en solution dans 1 ml de inéthanol anhydre.

Le sel formé est précipité à l'éther.

Le précipité est lavé dix fois avec 50 cc d'éther diéthylique anhydre.

15 Le résidu, 183 mg (57 %) ne contient que du sulfate de VLE pratiquement pur et exempt de leucinate d'éthyle.

Après libération des bases, ces dernières peuvent être chromatrographiées sur gel de silice (10g 20 de Si07) et éluées avec 50 cc d'éther/MeOB-NH^ sat. f92%/8%) puis 250 ml d ' éther/MeOH-NH., (851/15¾).

La VLE est obtenue pure en tête du second éluat.

On recueille ainsi 49 % de VLE purifiée soit 152 mg de base.

i.

j 1 'V1~ I «

1 1 Propriétés physico-chimiques de la VLE

il

;| Point de fusion ' : 169,4°C

| Γ f -i CHC1 i S D « J n · 60?7° i! L c=0,348 ‘ ou»-/ !i ; * i-ï î Spectre ultraviolet (MeOH,Amax, nm, log ε) : Ί l » 221 (4,62); 267 (4,15); 287 (4,02); 295 (3,99).

ij 10 ., S Spectre infra-rouge (KBr, cm ) :

J

1 3470, 2960, 2880, 1735, 1665, 1610.

: ®i rl

Spectre de masse (m/e, %) : ,j 1 15 924 (6) M+ + 2 8 ; 910 (56) M+ + 14; 897 (62); 896 (1Ü Ü); 8ô5 f 2 5 ; ; 938 (68); 772 (19); 709 (25); 651 (43); 571 (69).

;j j Spectre de résonance magnétique nucléaire (h\cDC1^,ppm,SoiΊΕζ ) : I 9,66 (,H,.rg,C16-0H); 8,20 (1H,s,N,uH); 7,52 (1H,d); ",15 3: .mj ; 20 6,56 (1H,s,C~-H) ; 6,05 (ΊΗ , s ,01 2-H j ; 5,86 (1H,s,Cl4-H, J 1 - - *= || 9,4; J 14-5 = 2); 5,78 (1H,d ,C15-H) ; 4,69 ( 1H ,m ,CH (NHR) CO-) ; jl 4,2 (2H,q,OCH2 CH5) ; 4,18 ( 1 H, t ,C1 ‘-H) ; 3,77 (3H,s,0CH,j; j| 3,66 ( 3H, s ,OCH,) ; 3,4 7 ( 1H , s , N-CH- j ; 2,7 7 { ^li,s J-CH7 ) ; 0,92 (12H,m,-C H-, + isopropyl J .

u J) i ! * = I ! ; î ’ f! -18- 1 Exemple_3 : 0-4 dêsacétyl N(L-leucinate de méthyle) Vinblastine (VLM)

En appliquant un mode opératoire identique à celui de 5 l'exemple 2, on obtient la VLM avec un rendement de 46¾.

Proprietés_physico3chimiques de_la_VLM

Point de fusion : 172,3°C

10 r T CHC1, ,<η 01} 3 : 67,2 υ c=0,275

Spectre ultraviolet (CH^QH, λ max, nm, log e ) : 220 (4,61); 267 (4,15); 287 (4,03); 294 (3,98).

15 _ 1

Spectre infra-rouge (KBr, cm ) : 3475; 2960; 2880; 1740; 1680; 1615.

Spectre de masse (m/e, %) : 20 910(25) M+ + 2 8 ; 896(78 j M++14; 883(26j M%1 ; 8 8 2{3 61 M+; 850(29); 836(41); 822(1 00); 708 (15); OS 1(56j; 650(78); 570(70).

Spectre de résonance magnétique nucléairefCDC1^,ppm, 60 MHzi: 25 9,21 (1Η,5,01Ο-0Η) ; 8,1 ( 111,s ,N -H ! ; 7,53 ΠΗ,πΐ); 7,23 (5H,m); Q i ° U i ς 6,63 (1H,s,C -H) ; 6,13 (1H,s,C -!)); 5,8t. i2H,m,C -H + C -H); 3,83 (3H,s, -OCH-); 3,80 (3H,s, -COÛCH-j; 3,tô i5H,s,-OCH-j ; . 3 ίο ^ ·| ς t 2, S ( 3H, s ,-CH-j ; 0,9t> 11 2H ,n:, C H_ + C ‘ “ + i scpropvl } «, f I: -19- . ι i i i i ** i

J

i 1 Exemgle_4 : i N(L-leucinate de butyle) 0-4 désacétyl Vinblastine | (VL but.E) 5 En appliquant un mode opératoire identique à celui de i ^ l'exemple 2, on obtient la VL but.E avec un rendement de ] 58¾.

!

; Propriétés_physico-chimiques de_l a_VL_but JB

| .,10

j Point de fusion : 158°C

! CHC1 r.

[“P c=0,2622 : 74>46° 15 Spectre ultraviolet (QL OH, > max, nm, log a j : 220 (4,66j ; 266 (4,21); 289 (4,08j; 296 (4,05J .

Spectre infra-rouge (KBr, cm : 20 3470, 2960, 2880, 1740, 1670, 1615.

; Spectre de masse (m/e, ΐ, ) : 952(5) M++28; 958(31) M++14; 924(12) M+; 925(15) M+-1 ; 1 891(13); 863(36); 835(5); 821(11); 708(35); 650(81); 570(100).

25

Spectre de résonance magnétique nue!éaireiCDC1^,ppm,60MHzj : 1 16 1 9,6 (1H,s,C -OH); 8,06 (1H,s,N “-H); 7,5 (1H,m); 7,2 (5H,m,; 9 1 -> ' 14 15 6,63 ( 1H,s,C -H) ; 6,1 ( 1H , s , C ^-H l ; 5,86 (2H,ir.,C -H+ C -H 1 ; i 4,2 ( 211, t, -CÛO-CH-, j ; 5,85 ( 5H, s ,-QCH~ j ; 5,63 ί 5H, s ,-OCH-j ; 30 2,8 ( 3H, s , -N-CIL) ; 1 ( 1 5H ,m,-C1 5 'il- + C18 H ^ ; CH- du butyle; s CHj isopropyl).

i -20- 1 §îë5}EÎ§_§ N(L-leucinate d'éthyle) û-4 dêsacétyl vinblastine- carboxamide-3 (VL Oct.E) 5 En appliquant un mode opératoire identique à celui de l'exemple 2, on obtient la VL Oct-E avec un rendement de 39 l.

Propriétés_physico-chimi ques_de_la_VL_Oct.E 1 c »

Point de fusion : 145°C

Γα J n 3 : 5 4,2 0 U c=0,3319 15 Spectre ultraviolet (CH-OH, à max, nm, log ε) : 8,62 mg/1 217 (4,69) ; 265 (4 , 1 4); 289 (4,01 ); 295 (5,95).

Spectre infra-rouge (KBr, cm ~* ) : 20 3460; 2940; 2920; 2870; 1755; 1665; 1610; 1500; 1455.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDC1 -, ppm, 60MIiz j : 9,6 ( 1H, s,C16-OH); 8,1 (1H,s,N'-H); 7,55 (1H,mj; 7,25 (5H,mj; 6,5 (1H,S,C9-Hj; 6,12 (1 H,s,C^2-Hl; 5,90 (2H,m,C14-H + C1:>-Hj; 25 4,2 (2H,t,-0-CH2-0ct; 11l, d , C1''-Hj ; 3,83 ( 3H, s ,-COOCH3 j ; 3,67 * (3H,s,-OCH-J ; 3,56 (1 H,s,C"1-Hj ; 2,83 (3H,s,N-CH_j; 1,35 (10H, m, massif octy] + Cii~ + CH-, ); 1 (15H,m, massif ccty] + CH- + -CH-,).

ί . -21- ι i t j h : ! k ] j · i, il ^ : ! i \\ N(D-leucinate d'éthyle) 0-4 désacêtyl Vinblastine ; ( il carboxamide-3 (VDLE) i» ___. _______ :j 5 En appliquant un mode opératoire identique à celui de ! l'exemple 2, on obtient la VDLE avec un rendement de 42¾.

' i

' i ; I

Propriétes_physico-chimlques_de_la_VDLE :

10 Point de fusion : 181,4°C

' r* *1 CHL1, rr° ;. fotJ _ ύ : 70,55 U c=0,2835

Spectre ultraviolet fmethanol, > max, nm, log t j : 15 220 (4,67); 226 (4,20); 288 (4,11 ); 295 (4,02).

_ i

Spectre inlrarouge (KEr, cm j : ; 3460; 2960; 2880; 1755; 1665; 1605.

20 Spectre de masse (m/e i j : ;! 924 (1 4) M+ + 28; 910(32); M++14; 897(38) M+*1; h9b(66) IÎ ; L; 863(28); 835(43); 709(45i ; 651(81); 570(1 00).

i; ! ! i.; l· Spectre de résonance magnétique nucléaire(CDCl τ ,ρριη,ϋΟΜΗι J : !’ - 25 9,6 ( 1 H, s,C16-OH); 8,16 ( 1 H,s ,N ’ Ü-H j ; 7,bt (lH,mj; 7,26 i3H, m); 6,7 (1H,s,C9-H); 6,16 MH,s,C12-H); 5,90 ; 211 ,m ,(214-H + 15 C -H) ; 4,26 ( 2H, q ,-COOCII -, i ; 3,8 3 ! 3H, s ,-uCH ~ ; 3,66 i 3H,s , : -OCH-) ; 2,90 (3H, s ,! ; 1,3 (3H, t,- i COOCH-,.-CH-; 0,9o

! -3 ι ό i 18 -O

I (12H,m,C + C + isopropyl).

I , | . 1 i » 1 âïÊÎEiÊ-Z : N(L-sérinate d'éthyle)-0-4-désacétyl Vinblastine - carboxamide-3 (VSE) -22- 5 En appliquant un mode opératoire identique à celui de l’exemple 2, on obtient la VSE avec un rendement de 35 %.

* Propriétés_physico-chimiques_de_la_VSE : 10 laln CHCl3 : 65>6° c = 0,70 7

Spectre ultraviolet (MeOH, Àmax, nm, loge) : 215 (4,76) ; 266 (4,31 ); 288 (4,20); 297 (4 , 1 5).

1 5 - 1

Spectre infrarouge (CHCl^, cm ) : 3460; 5400; 2965; 2955; 2880; 1750; 1665; 1oü5.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDC 1 -,ppm,büMHcj: 20 8,13 (1 H,s,Na —HJ ; 7,9 (1H,d,-0H); 7,52 (1H,m,; 7,20 6,63 (1H,s,C9-H) ; 6,1 (1H,s,C12-H); 5,9 (2H,m,C14-H + C^-H.s; 4,3 (2H, q,-C00-CH 7-); 3,S3 (5H,s,-OCH-); 5,66 (5H,s,-OCH-J ; 2,67 (5H,s,-NU-CH-); 1,34 (3H,t,(-COO-CH,jCH„j; 0,95 (6H,m, c'8'h. ♦ c18h.). ' Ο .5 " i! -23- - j i > ' | * | 1 Bxemgle_8 : il N-(L-glutamate d'éthyle) 0-4-désacétyl Vinblastine -

Icarboxamide-3 (VGE) 5 En appliquant un mode opératoire identique à celui de | ’ l'exemple 2, on obtient la VGE avec un rendement de 55 %.

J * Propriétés physico-chimiques de la VGE : -j ~ — — — — ~~ ~~ ‘ 10

i Point de fusion : 149,7°C

fifln CHC13 : 59,12° c=1 ,99 15 Spectre ultraviolet (MeOH, 10mg/l, A max, nm, logt. ) : 219 (4,4 6) ; 269 (3,94); 288 (3,80); 296 (5,76).

j| -1 ; J Spectre infra-rouge (KBr, cm ) : ' d 20 3460; 5395; 2960; 2920; 2870 ; 1 730 ; 1öö5; lt1ü; 1 500 .

*> I Spectre de résonance magnétique nucléaire i CDC1- ,ppm,bi)MHc . : if 9,63 ( 1H , s,C16-0H); 8,10 MH , s ,KU ' -H) ; 7,o MH,m); 7,1o il (3H,m); 6,64 (1H,s,CH-H); b,07 (1 H,s,C1"-H); 5,83 (2H,m, U 14 15 ii _ 25 CI4H + Cl H); 4,23 ( 2H, q ,-COOCIi, - ) ; 4,16 ( 2H, q ,-CÜOCH,-) ; i; · 3,8 f3H,s,-OCH3) ; 3,64 (3H,s,-OCH-); 3,5 (1H,s,C21-Hj; * « 2,8 (3H,s ,-NaCHM î 1,55 (3H,t,-CH_j; 1,26 î 3i!, t ,-CH-J ; io J Ifi* ^ -5 1 |6H,m,C H. + Cic H-j.

_·> i ! i :* ; Ü î, 1 ëiêiBEiË.? : N-(L-phénylalanynate d'éthyle) 0-4 dêsacétyl Vinblastine (VPE) -24-

En appliquant un mode opératoire identique à celui de l'exemple 2, on obtient la VPE avec un rendement de 60 %.

5 . _de 1 a_VPE : s Point de fusion : 154°C.

» 10 Γα3η CHCl3 : 75,206° U c=1,2106

Spectre ultraviolet (MeOH, 9,8 mg/l,Amax, nm, loge) : 217,5 (4,'67); 265 (4,1 3); 286,5 (3,99); 295,5 (3,95).

15 -1

Spectre infra-rouge (KBr, cm ) : 3560; 3460; 3400; 2860; 2850; 1730; 1o50; 1610; 1500; 1455. Spectre de masse (m/e, l) : 20 958(1 7); 944 (41); 930(35.1; 871 (64); 651 (41 j; 588(41 j; 571 (53); 401(100).

Spectre de résonance magnétique nucléaire ( CDCl, ,ρρπι, 60MHc i : 8,1 (1H, s, Na -H); 7,6 (1H,m); 7,3 (5H,s); 7,2 (3H,m.i; 25 6,6 (1H,s,C9-H); 6,1 (1 H,s ,012-Hj; 5,87 (2H,m,C14-H + C15-H); 4,9 (1H,m, CH-) ; 4,16 (2H,q,-C00-CH,J ; 3,8 (5H,s,-OŒL); 5,56 ! 5H, s , -OCH, j ; 3,56 Γ1 H, s ,C^ 1 -!I j ; 3,74 » 5H,>* ,.\’j-CH3J ; 1,20 ί 5H,t,-CH,(ester)); 1 (6H,m,-Cl&H_ + C1h ' H _;.

«j «, f \

Claims

3. Composé suivant la revendication 1 caractérisé en ce qu'il i j. s'agit de la N-(L-leucinate d'éthyle) déacétyl-0-4 i j Vinblastine carboxamide-3. t. j. j * ; -27- ; l i } 14. Composé suivant la revendication 1 caractérisé en ce J que R, représente un groupe méthyl-2-propyl et est i *-* | attaché à un carbone ayant la configuration absolue L, R£ est un atome d'hydrogène et est un groupe 5 éthyle; | *· ainsi que ses sels d’addition pharmaceutiquement I acceptables. Λ \ \ f 5. Composé suivant la revendication 1 caractérisé en 1*10 ce qu’il est choisi dans le groupe constitué par 1 les dérivés de la Vinblastine suivants : i ] - N-(L-isoleucinate d’éthyle) désacétyl-0-4 Ί j Vinblastine carboxamide-3
15. N-(L-valinate d'éthyle) désacêtyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3 - K-(L-phenylalaninate d'éthyle) désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3 - N-(L-phenylalaninate de méthyle) désacétyl-0-4 ί 20 Vinblastine carboxamide-5 ! - N-(L-alaninate d'éthyle) désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3 -i - N-(L-leucinate d’éthyle) désacétyl-0-4 Vinblastine i carboxamide-3
25. N-(L-leucinate d'éthyle) Vinblastine carboxamide-3 - N-(L-sérinate d’éthyle) désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3
0. Composés suivant la revendication 1 caractérisés en 30 ce qu'il s'agit de la L-(L-phénylalany ate d'éthylej I désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-5 et de son sel d'addition avec l'acide sulfurique.
7. Un sel d'addition d'un acide pharmaceutiquement 35 acceptable d'un composé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5. -28- ι
8. Un sel suivant la revendication 7 caractérisé en ce qu’il s’agit d'un sel d'addition avec l’acide sulfurique.
9. Composition pharmaceutique utilisée en médecine humaine et vétérinaire pour le traitement de maladies néoplasiques contenant un ou plusieurs dérivés définis dans l’une quelconque des revendications 1 * à 8. * 10
10. Utilisation d’une composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce qu'elle est administrée à un patient à une dose comprise entre 0,05 mg/hg/semaine et environ 5 mg/kg/semaine. 15
11. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce que le principe actif est la N-(L-leucinate d'éthylej dêsacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-5. 20
12. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce que le principe actif est la N-(L-phénylalaninate d'éthyle) désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-5. 25 „ 15. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 ' caractérisée en ce que le principe actif se trouve dans un diluant pharmaceutiquement acceptable.
14. Composition pharmaceutique selon la revend i cat ior; 12 caractérisée en ce que le diluant est une solution aqueuse stérile tamponnée. ! : F I. -29- ί\ !y ft { , ι y If 115. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon | la revendication 9 ou 14 pour le traitement de Î8 leucémies, de tumeurs solides et de la maladie de Hodgkin. 5 ;j j, 16. Procédé d'obtention des composés selon les revendi cations 1 à 8 caractérisé en ce qu'il comprend les j; étapes suivantes : » 1 Λ i s 10 1) Réaction de la Vinblastine avec l'hydrazine !’l anhydre pour obtenir la désacétyl-0-4 carbox- i *,j ;; hydrazide-3 Vinblastine i ’
2. Traitement de l'hydrazide obtenue avec un agent 15 de nitrosation en milieu acide pour obtenir l'azoture d'acide correspondant. fl ; 3) Réaction de l'azoture d'acide avec un à cinq équivalents de l'ester d'acide aminé approprié. 2 0
17. Procédé selon la revendication 1c» caractérisé en ; ce que l'hydrazide est traitée avec NaNO? dans une solution d'acide chlorhydrique dilué à basse il température et que l'azoture d'acide obtenu est 25 ajouté à au moins un équivalent de leucinate d'éthyle. - IB. Procédé de transformation de la Vinblastine en un dérivé d'ester d'acide aminé selon les revendications 30 1 à 6 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
1. Saponification de la Vinblastine pour fournir après acidification, l'acide désacéty1-0-4 j 35 vinblastinoique-23 ί -30- ι i \ ί 1 2) Traitement de l'acide ainsi obtenu avec la j Ν,Ν'-dicarbonyliimidazole dans le tetrahydro- ! furanne ou la diméthylformamide. | 5 3) Addition de 1 à 5 équivalents d'ester d'acide j aminé ou de peptide approprié.
10. Procédé selon la revendication 18 caractérisé en I 3 ce qu'il comprend en outre les étapes suivantes : i J? 10 - préalablement à l'addition de N,N'-carbonyldi- ; imidazole acétylation de l'acide vinblastinoïque I obtenu avec l'anhydride acétique en présence de pyridine utilisant les conditions classiques pour la protection de groupes hydroxyles 15 - hydrolyse sélective par traitement acide du produit obtenu dans la troisième étape pour ί ! fournir soit le dérivé de la Vinblastine | carboxarnide-3 monoacétylé en position 4 ou I complètement désacétylé. ! 2 0 ί ; 2U. Procédé selon la revendication 18 caractérisé en ce que le dérivé de couplage de la Vinblastine avec un ester d'acide aminé est la N-(L-leucinate d'éthyle) dêsacétyl-0-4 carboxamide-3 ou la 25 N-(L-phénylalanïnate d'éthyle) désacétyl-0-4 carboxamide-3.