LU83034A1 - Derives n-(vinblastinoyl-23) d'acides amines et de peptides, leur preparation et leur application therapeutique - Google Patents

Description

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- 1 -NU

J* 1 DERIVES N-CVINHLAST1NOYL-23) D'ACIDES AMINES ET DE PEPTIDES,

LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION THERAPEUTIQUE

5

La présente invention se rapporte à de nouveaux alcaloïdes bis-indoliques. Plus particulièrement, l'invention est relative à de nouveaux dérivés de couplage d'acides aminés avec la Vinblastine, y compris des dérivés polypeptidiques, 10 à leur procédé de préparation, à leur application en tant qu'agent antitumoraux et aux compositions pharmaceutiques les contenant.

Ces nouveaux dérivés de la Vinblastine peuvent être utilisés 1S pour le traitement des leucémies et des tumeurs malignes chez l'homme.

Les alcaloïdes b i s indoi i ques du type de la vir.rlastine sont « des composés bien connus possédant le squelette carboné de i 20 ^la ^°rmU^e ^n^rUjC SU*Vante : Γ i •·ν* ' ν’ . ftLJ'ji.ï - 2 - " ch3û2c 1/\ (I) 5 j l op I 1 4 1° H0# \ 2 3 f=0 R, 15

Citons à titre d'exemple la vincaleukoblastine (brevet américain 3.097.137), la leurocristine ou vincristine et la leurosidine (brevet américain 3.205.220), le vinglycinate (brevet belge 659. 1 12jet la vindêsine (brevet belge 813.168).

20 Ce dernier composé a été obtenu par transformation chimique do la Vinblastine naturelle (1, R^OCH^, R7=C0CHj) , qui elle-même est obtenue par extraction à partir de feuilles de Catharanthus roseus.

25 La vinblastme, la vincristine et la vindêsine sont commercialisées pour leur utilisation en thérapeutique humaine, plus particulièrement pour le traitement de leuuémies »1 et de certaines tumeurs solides.

ύ 30 Ces médicaments possèdent néanmoins des eflets secondaires défavorables. La vincristine est neurotoxique et la Vinblastine est fortement toxique au niveau des tissus hématopoétiques.

% *—....... '""'.'η - 3 - » 1 Leur mécanisme d'action est analogue à celui qui a été postulé pour l'action antimitotique de la colchicine.

Ces médicaments agiraient par inhibition de la polymérisation h de la tubuline en microtubules et arrêt subséquent de la 5 division cellulaire en métaphase.

3 L'utilisation de complexes 1:1 d'alcaloïdes bisindoliques antitumoraux avec la tubuline a été décrite dans le brevet belge 854.053.

10 Dans certains cas, il peut en résulter une toxicité moindre et une activité chimiothérapeutique plus importante que celles des alcaloïdes libres correspondants.

D'autres dérivés obtenus par modification chimique de la 15 Vinblastine ont été testés. Ainsi le sulfate de vinglycinate (i, sulfate, Rj^0CH3, R ^COCll^N (Cil^ ) 2 (Cancer Research 1 967 , 2 7 , 221-2271 a été étudié en expérimentation clinique mais ne s'est généralement pas révélé supérieur à la Vinblastine et à la vincristine.

20

Le brevet belge 813.108 décrit la vindésine (1, R^=NH7, R2=H) et d'autres dérivés carboxamide en C-3 de la Vinblastine.

Des publications postérieures ont confirmé l'intérêt * thérapeutique de la vindésine ou carboxamide-3 déacétyl-0-4 25 Vinblastine, mais ce composé s'est cependant révélé inactif pour le traitement de tumeurs L 1210 transplantées chez la souris (C.J. Barnett et al., J. Med. Chem., 2J[, 88, 1978).

La vindésine est actuellement introduite sur le marché européen (notamment en France et en Allemagne) et la pro-cédure I d’enregistrement aux Etats-Unis est en cours (NDA-18.348).

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V

- 4 - 1 Les dérivés de couplage d'acides aminés avec la Vinblastine t et d'autres alcaloïdes bisindoliques analogues ont été proposés d'une manière générale dans le brevet belge 813.168 * susmentionné.

5 Néanmoins, aucun exemple de dérivé d'acide aminé spécifique ’ n'a été divulgué et conséquemment, aucune donnée physico chimique n'a été fournie. Aucune méthode de préparation spécifique et aucun résultat pharmacologique particulier n'a été mentionné.

10 11 peut donc en être déduit que ces dérivés n'ont pas été réellement synthétisés et/ou n'ont pas été testés pour leur activité antitumorale.

Page 3, ligne 10 et suivantes, il est en outre mentionné 15 que "l'activité anti-néoplasique semble être limitée à des structures très spécifiques et les chances d'obtenir des médicaments plus actifs en modifiant ces structures semblent également faibles".

20 lia maintenant été constaté que les nouveaux composés décrits dans la présente invention sont capables de retarder efficacement la mort de souris auxquelles on a transplanté par voie intraveineuse des tumeurs P 388 et L 1210.

Alors que les alcaloïdes Vinca administrés par voie i.v.

M

25 ne présentent généralement aucune activité sur la leucémie L 1210, les résultats obtenus montrent pour les nouveaux dérivés une activité très significative et inattendue.

Ils possèdent, en outre, d'autres avantages importants et inattendus comparativement à la Vinblastine et à ses analogues 30 connus, en particulier la vindésine. De nombreuses rémissions î complètes ont été observées.

i - 5 -

V

\ « 1 Les nouveaux composés de J'invent ion répondent plus particulièrement à la formule générale 11

Or/ rL - ! N -A ^ C02ChJ (II) ,0 i ! oo

ririV

1 ς CH 0 v N R

15 i ' | JS. j 3 O

CH3 OH "-Sf-(-NH-CH-C-)n 0KA 0 20 dans lequel le R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle en C1-C9, de préférence un groupe acêtyle.

est un atome d'hydrogène, une chaîne alkyle, hydroxy-carboxy-, amido-, amino-, guanadino-, thio-alkyle en C 1-C 8, 25 cystéinyl méthyle, methyl-thio éthyle, benzyle, hydroxy benzyle; a — ph — 7j . a

H

-f" !

J

I « - 6 - 1 ou représente avec l'atome de carbone auquel il est attaché et l'azote du groupe amide, un cycle azole; n varie de 1 à 6; et représente un groupe alkyle, linéaire ou ramifié 5 possédant de 1 à 7 atomes de carbone, un groupe benzyle ou un radical OH . Le groupe -OR^ peut également être remplacé par un groupe -N^.

„ COOR^ représente de préférence un groupe carboethoxy ou carbométhoxy.

3 10 Plus particulièrement, le fragment structural de la

formule II R, O

i! -NH-CH-COR4 représente un ester de n'importe lequel des acides aminés naturels et de leurs isomèreo optiques de 15 configuration D, notamment : la glycine acide aspartique cystine alanine acide glutamique méthionine valine asparagine phenylalanine leucine glutamine tyrosine 20 isoleucine arginine tryptophane serine lysine proline ou thréonine cystéine histidine

On peut considérer ces composés comme étant des 25 dérivés de la descarbométhoxy-3 désacétyl-0-4 Vinblastine carboxamide-3. On préférera cependant les désigner comme étant des dérivés N-(vinblastinoyl-23) d'acides aminés.

Les composés préférés de l'invention répondent à la 30 formule II dans laquelle R£ représente un atome d’hydrogène et la partie acide aminé est dérivé d'un des acides aminés suivants : L ou D tryptophane, /leucine, isoleucine ou phenylalanine.

% * 4 - 7 -

V

3 j, 1 Parmi les dérivés d'esters polypeptidiques, les composés préférés répondent à la formule II dans laquelle n=2 et les acides aminés sont choisis dans la liste mentionnée ci-dessus, suivant n'importe quelle séquence.

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En ce qui concerne les propriétés pharmacologiques, il est prévisible que de légères modifications de la =3 structure du squelette polypeptide fourniront des composés d'activité comparable.

10 En particulier, la présence d'un acide α-aminê non naturel (par exemple un acide α-aminé N-monosubstituê ^ φ ou un acide aminé α,a -dialkyle) ou un acide fj-aminë fournirait des composés d'activité similaire contre un certain nombre de tumeurs.

15 Pareils composés entrent donc dans le cadre de la présente invention.

Les composés de formule II peuvent être obtenus en utilisant diverses méthodes de synthèse.

20 Selon une de ces méthodes, ces dérivés sont obtenus à partir de la Vinblastine par hydrazinolyse, nitrosation | puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de poly- ! peptide approprié.

25 Ces composés peuvent également être avantageusement * obtenus par saponification de la Vinblastine, suivie d'un couplage de l'acide vinblastinoïque, éventuellement préalablement protégé par acétylation, avec l'ester d'acide aminé ou de peptide. Dans ce cas, on utilisera 30 de préférence un agent de couplage tel que la dicyclo- | hexylcarbodiimide.

t / % Λ Λ % «- - 8 - 1 Lorsque l'acide aminé ou le peptide contient des groupes fonctionnels dans la chaîne latérale R3, il peut être comme la lysine ou la cystéine, nécessaire de protéger ces groupes fonctionnels en utilisant les 5 méthodes bien connues de l'homme de l'art.

, Cette protection peut être effectuée, selon la nature du groupe à protéger, par le greffage d'un groupe benzyle, t-butyle, benzyloxycarbonyle, t -butoxy- 10 carbonyle ou trityl. D'autres agents bien connus en chimie peptidique peuvent être avantageusement utilisés.

Selon le premier procédé mentionné, les composés suivant l'invention peuvent être obtenus à partir de la

15 Vinblastine, de manière classique, par hydrazinolyse suivie de nitrosation puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de polypeptide selon le schéma réactionnel I

20

r^l νΛ _ γ-Γ"! n.no2^ J4 I

C -a A CH-OH ^ 1 i HCl

v4x5coch, 3 \ ηβρ /T ÛH

4 3 ^ OH 0°C 4\ OH ' W \ HO ' or cooch„ ho c-nh-nh., c-n, 25 3 <3 2 b 3 «» ester d'acide

5 aminé ou de N

polypeptide _ ^ pvj j Schéma I

CH-C1 H

30 Z Z < A

\ - VÜH

\ ^ H ^3

nn ' “ |J

Æ- -,c-<k-9-CO)„or4

/ O H

/ η = 1 à 6 ! ' -^iffie^·*-ζψ*·--*. -- - -—*—;.. , '-· ^ι·'-ί^.ί> -+-.. _. · . H| T, ^ . _ . - ____ » t * « • * * .

- 9 - 1 La première étape consiste à additionner un excès d'hydrazine anhydre à une solution de Vinblastine base dans le mëthanol anhydre. Le mélange réactionnel est alors chauffé sous atmosphère inerte pendant 12 à 30 „ 5 heures à une température comprise entre 30 et 70°C.

De préférence, la température sera maintenue vers 60°C, * le temps de réaction étant alors de 24 heures.

IL'hydrazide de la désacëtyl-4-vinblastine est alors 10 isolée par addition d'eau, extraction au dichloro-méthane et concentration. Le composé peut être ultérieurement purifié par chromatographie préparative (silice neutre).

15 Lors de la deuxième étape, la fonction hydrazide de la Vinblastine modifiée est transformée en azoture d'acide Cette transformation est effectuée de manière connue, par addition de nitrite de sodium à l'hydrazide en solution dans un mélange eau-méthanol-acide.

20 L'acide utilisé peut être l'acide chlorhydrique.

La température de réaction est maintenue entre 0 et 5°C Après extraction par un solvant aprotique non soluble dans l'eau, de préférence le chlorure de méthylène, la phase organique est partiellement concentrée.

25 L'azoture d'acide lui-même n'est de préférence pas isolé, mais directement mis en présence de l'ester d'acide aminé ou de polypeptide ou, le cas échéant, le dérivé correspondant protégé, en solution dans le chlorure de méthylène.

-10-.

« 1 La quantité d’acide aminé mise en oeuvre est de un à quatre équivalents de Vinblastine carboxazide.

Le milieu réactionnel est maintenu entre - 3 et + 5°C λ pendant environ 15 heures.

5 La réaction est facilement suivie par chromatographie = sur couche mince. Après concentration, on isole le composé de l'invention II qui peut être transformé en sulfate ou autre sel d’acide minéral ou organique par cristallisation à partir d'une solution mêthano-10 lique de l'acide correspondant.

Les composés de l'invention sont purifiés en utilisant les techniques bien connues de chromatographie et de recristallisation.

15

Le cas échéant, le dérivé de désacéty1-0-4 Vinblastine ainsi obtenu peut être réacétylé soit directement pour „ donner le dérivé de la Vinblastine II dans lequel R2=COCH3 (J. Med. Chem. 22, 391, 1979) ou par 20 formation préliminaire du dérivé diacétoxy-3,4 suivie d'une hydrolyse sélective du groupe acétoxy en position 3.

Le groupe hydroxyle en peut être de manière connue en soi,estérifié par d'autres dérivés activés d'acides comportant de 1 à 9 atomes de carbone Il a par ailleurs été démontré que les dérivés de 25 l'invention peuvent être aussi obtenus avantageusement à partir de la Vinblastine, par saponification de cet alcaloïde, éventuellement protection partielle ou complète des groupes hydroxyle libres par traitement avec l'anhydride acétique suivant le mode classique 30 puis condensation de l'acide vinblastinoïque-23 , ainsi obtenu avec un ester d'acide aminé ou de J polypeptide.

Tt i * ' -11- 1 La saponification de la Vinblastine fournit, après acidification, l'acide désacétyl-0-4 vinblastinoïque-23. : Ce dérivé a été décrit pour la première fois par

Hargrove (Lloydia, 27, 340, 1964).

S

Le couplage est effectué par addition du dérivé acide

A

vinblastinoïque à un agent de couplage habituellement utilisé en chimie peptidique (voir par exemple : Methoden der Organischen Chemie, Houben-Weyl, vol.XV 10 parties 1 et 2, 1974.)

Un agent de couplage particulièrement préféré est la N,N’-carbonyldiimidazole (Staab H.A., Angew. Chemie, 82, 4596, 1960). Dans ce cas, la condensation est 15 effectuée par addition préalable à l'acide vinblastinoïque de un ou plusieurs équivalents de N,N’-carbonyl-diimidazole, suivi de l'addition de l'ester d'acide aminé ou de peptide.

La réaction a lieu dans le tetrahydrofuranne, la 20 diméthylformamide ou tout autre solvant inerte dans les conditions de réaction, à une température pouvant varier entre -15°C et + 40°C.

Le temps de réaction varie alors de une heure à vingt heures.

25

Le produit ainsi obtenu, isolé de manière classique, s peut être ensuite désacétylé en milieu acide pour fournir des composés de formule II dans laquelle R7=H. Eventuellement une désacétylation contrôlée peut 30 fournir les composés de formule II dans laquelle ji R,=C0CH,.

i - 3 *r r i t/ -12- * 1 La présente invention s'étend également aux applications industrielles et notamment pharmaceutiques des composés bisindoliques nouveaux.

Les composés de l'invention présentent en particulier 5 des propriétés antitumorales particulièrement intéres-" santés et susceptibles d'être utilisées en thérapeutique humaine.

Ces dérivés d'acide aminé peuvent être, en particulier, 10 utilisés pour le traitement des leucémies du type L 1210, P 388, de gliomes, lymphosarcomes et d'autres leucémies ou tumeurs malignes.

En thérapeutique humaine, ils sont utilisés pour le traitement de la maladie de Hodgkin et pour d’autres 15 tumeurs pouvant bénéficier d'un traitement avec la Vinblastine, la vincristine et la vindêsine.

Ces composés peuvent également être utilisés en médecine vétérinaire pour le traitement des tumeurs chez les 20 animaux.

D'autres applications thérapeutiques intéressantes peuvent être envisagées pour ces nouveaux dérivés d'alcaloïdes bisindoliques. I] a en effet été relevé 25 que la Vinblastine pourrait être utilisée dans le traitement de certaines arthrites (brevet des Etats-Unis n° 4.208.411) et la vincristine pour le traitement de psoriasis (brevet des Etats-Unis n° 3.749.784).

30 Pour le traitement des tumeurs malignes chez les animaux, les activités chimiothérapeutiques ont été I testées en utilisant les sels de sulfate des composés jL de l'invention.

l· f [ ji -13- 1 Des souris DBA? femelles de souche Charles River France ^ . 4 ont été inoculées par voie intraveineuse avec 10 cellules leucémiques provenant d'une ascite leucémique P 388 ou L 1210 de sept jours. Le jour 0 est le jour d'inocu-5 lation des cellules tumorales. Le composé de l'invention (sous forme sulfate) est alors injecté par voie intraveineuse en solution dans l'eau physiologique (NaCl 9/1000) suivant le schéma en une injection (jour 1) ou le schéma en trois injections (jours 1,2 et 3).

10 On calcule alors le MST (Medium Survival Time), jour où la moitié des animaux sont morts.

Ce calcul est effectué le trentième jour.

Le pourcentage d'ILS (Increased Life Span) ou·pourcentage d'augmentation de survie est calculé à l'aide de la 15 formule suivante : MST produit % ILS = (- x 100) - 100 MST contrôles

Le nombre de souris survivant au trentième et au 20 soixantième jour est également indiqué.

A des doses trop toxiques, le pourcentage d'ILS devient négatif, c'est-à-dire que les souris non traitées survivent plus longtemps que celles ayant été injectées par la substance anti-tumorale.

25 Dans certains cas, une importante variabilité des résultats est observée en fonction de l'origine des souris (DBA? France ou Etats-Unis) ou, plus rarement, du lot de produit utilisé.

30 Les résultats obtenus sont à comparer à ceux observés avec la Vinblastine (VLB), la dësacétyl-0-4 Vinblastine (DAVLB) et la vindésine (VDS) rassemblés dans le tableau I. La supériorité pharmacologique des composés , de l'invention est ainsi démontrée dans les tableaux * 35 i II à XII.

-14- '1 Le tableau II fournit les résultats obtenus avec quelques dérivés de la leucine naturelle.

Les dérivés suivant ont ainsi été testés : 5 VLE : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate d'éthyle VLM : N-(dêsacêtyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate i de méthyle VLn-But : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate 10 de n-butyle VL-octyl : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate d'octyle VL-amide : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucin-amide 15

Le tableau III rassemble les résultats obtenus avec un dérivé de la D-leucine, en l'occurence le N-(désacétyl- 0-4 vinblastinoyl-23) D-leucinate d'éthyle (VDLE).

20 Les résultats obtenus avec les dérivés suivants du L-tryptophane sont repris dans le tableau IV : V-Trypt E : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle, MST calculé à 30 et à bO jours.

25 V-Trypt M : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L- tryptophanate de méthyle.

V-Trypt Ac: N-(désacétyl-ü-4 vinblastinoy1-23)-L-tryptophane.

Le tableau V présente les activités observées avec 30 le dérivé du tryptophanate d'éthyle de configuration absolue D (VD Trypt E).

V

/V

/

P

t; .1 % i* Λ -15- 1 Les tableaux VI à XII reprennent les résultats obtenus avec les composés suivants : - VAE : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-alaninate 5 d'éthyle - VPE : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-phenyl- alaninate d'éthyle (tableau VII) - VILE : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-iso leucinate d'éthyle (tableau VIII) 10 - VILM : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-iso leucinate de méthyle (tableau VIII) - VVE : N-(dêsacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-valinate d'éthyle (tableau IX) - V-Tyr E : N-(désacêtyl-ü-4 vinblastinoyl-23)-L- 15 tyrosinate d'éthyle (tableau X)

- V-t-TPA lysine E: N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-C

J trifluoroacétyl-L-lysinate d'éthyle . - V-Val-Trypt-E : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)- f .................*............

TABLEAU I : -1b- • ...........

A. VINBLASTINE (VLB) - P388 : dü8e schéma nowbre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

„ mg/kg/j animaux max 30J. Z

----- I — --------1 _ I I

4 1 10 14,6 36,4' 0 0 6 1 10 15,6 45,8’ 0 0 8 1 9 18,5 72,9 0 0 - - — · — - # - L J2J0 : 6 1 10 10,6 24,7 0 0 B. DESACETYL-0-4-VINBLASTINK (DAVLB) - P_388 : dose , nombre d' MST ILS >30 J. > 60 J.

mg/kg/j SC ema animaux max 30J. % 2 1 10 13,5 26,2 0 0 3 1 10 lb 49,5 2 1 4 1 20 18 58 3 0 5 1 10 6,5 -44 1 1 6 1 10 5,6 -52 0 ü - L_I2I0 ; 3 1 10 11,8 38,8 0 0 -17- TAELEAIJ I (suite) : C. VINDESINE (VDS) - P_388 : dosa 8chéma nombre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. Z

2 1 10 13,6 27,1 0 0 .3 1 10 14 30,8^ 0 0 4 1 10 14,8 38,3 0 0 5 1 10 13,8 30,2 0 0 6 1 10 14 32 0 0 ! - L_!2J0 : i I" — 3 1 10 14,8 38,3 Q 0 i-18-

TABLEAU II : DERIVES DE LA LEUCINE NATURELLE

A. VLE

- P_388 : düße schéma nümbre d' MST ILS >30 J· > 60 J-

mg/kg/j animaux max 3ÜJ. Z

20 1 10 16 52,4 2 1 •22 1 10 20 90,5, 4 1 24 1 20 18 65 2 0 26 1 10 17,5 53,5 1 0 28 1 10 19,6 71,9 1 1 30 1 10 21 84,2 2 1 34 1 10 6 -48 2 1 36 1 10 5,4 -53 1 1 5 1,2,3 9 14,5 25 0 0 6 1,2,3 10 15 29,3 0 0 7 1,2,3 10 14,2 24,6 0 0 9 1,2,3 10 5-56 1 1 12_1 ,2,3_9_4,8 -59_0_0 - L_J.210 : 30 1 10 5,6 -26 0 0 32 1 10 6 -21 0 0 ; > _ * TABLEAU IX (suite) -19-

B. VLM

- P_388 : dose - nombre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

mg/kg/j 1 ma animaux max 30J. % λ - -----— I — ... 1 . I - 1 — — _ f_ _ — I . _ . _ — .

10 ] 20 16,7 Al 2 1 I. 0,5 1 10 16,4 53,3, 0 0 Π 1 19 17,7 51 2 1 II, 5 1 10 16,8 57 0 0 12 1 20 17,5 49 32^ 12.5 1 30 17,3 49 8 3 13 1 20 20,5 74 7 5 15 1 10 18 55,2 4 1 - L_]2J0 : 10.5 1 10 10,6 24,7 0 0 11.5 1 10 10,8 27 0 0 12.5 1 10 10 17,6 0 0 f ..............." i · Ί

U

;ι il -20- J TABLEAU II (suite) : C. VL-n butyl - P_388 : dose schéma nunlb,re d * MST ILS >30 J. >60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. % ' ____J___ 55 1 ]0 15 23 0 0 60 1 10 15,4 26 , 0 0 65 1 10 13,2 13,8 0 0 70 1 10 14,7 26,7 0 0 80 1 10 13,4 27,6 0 0 1 ---- - - ____ , —1 D. VL Octyl - P_388 :

Idose schéma nombre d' MST ILS > 30 J. >60 J. j mg/kg/j animaux max 3ÜJ. % 40 1 10 11,5-0,9 0 0 60 1 10 12,5 7,8 0 0 | 80 1 8 12,7 9,5 0 0 E. VL Ami de i i - P_388 : dose , ^ nombre d’ MST ILS > 30 J. > 60 J.

1 schéma mg/kg/j animaux max 30J. % ; 51 10 11,6 1,7 0 0 . ' 15 1 10 12,4 8,7 0 0 20 1 10 11,6 1,7 1 1 30 1 10 11,6 1,7 0 0 40 1 10 12,4 19 0 0 J 50 1 10 13,4 15,5 0 0

TABLEAU III

-21-

A. VDLE

- P_388 : düsô . schéma nombre d' MST ILS >30 J. >60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. % 6 1 10 14,7 26,7 0 0 '8 1 10 17 46,5* 2 1 10 1 20 28,5 146 9 2

11 1 10 16 49,5 1 O

12,5 1 10 30 145,9 6 3 - L_I2J0 ; 9 1 10 10,8 27 Û 0 10 1 10 11 29,4 0 0 -22-

TABLEAU IV

\ ''A ' j . ·

A, V Trypt E

- P_388 : düSÊ schéma noDlbre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. % 20 1 10 11,4 43,9 0 0 40 1 10 17 58,8 5 4 50 1 20 24,5 117 9 5 55 1 40 30 171 28 16 60 1 90 30 204 52 24 I 65 1 29 22,75 114 13 9 70 1 20 6,'5 -39 8 5 - - - -_____- -___ . .

- L_1_2J0 : 55 1 30 11,8 56 O 0 60 1 30 12,5 65 2 2 65 1 30 12 62 0 0 70 1 10 12,3 61,8 1 1 “ E_lbb_i®a:x_623j.). : dose schéma nombre d' MST ILS > 30 J· >60 J.

mg/kg/j animaux max 60J. Z

55 1 30 60 457 28 1b 60 1 60 36 224 52 24 i-- TABLEAU IV (suite) -23-

B. V ïrypt M

- P_388 : düSe schéma I1Uïnbre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

rog/kg/j animaux max 30J. Z

30 1 10 15 33,9 0 O

40 1 10 16 42,8, 0 0 50 I 10 23,5 199,8 1 0 60 1 20 26 140 7 2 70 1 10 26 145,3 5 C. V Trypt Acide - P_388 : dose nombre d' MST ILS > 30 J. ^ 60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. Z

20 1 10 11,4 1,8 0 0 25 1 9 11,8 6,3 0 0 30 1 8 12 8,1 0 0 40 1 10 1,6-85,7 0 0 60 1 10 1,4 -87,5 0 0 .80 1 10 1,4 -87,5 0 0 1............—- t

N

J

0 ... , - - - * - - «r. - » **«I* X 'Λ.*-*.- *<- * i · ' “ ' fc ** * I « 4 j -24-

TABLEAU V

VD Trypt E

- P_388 : dose 8chéma nombre d* MST ILS >30 J. >60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. Z

20 1 10 13,3 18,7 0 30 1 10 15,8 41,4^ 1 40 1 20 16,5 52 1 50 I 10 22 107,5 1 60 1 10 4,4 -60,7 1

TABLEAU VI VAE

- P_388 : dose nombre d1 MST ILS > 30 J. >60 J.

C Γ*ΠΡΤΤ1Λ r r mg/kg/j animaux max 30J. % 1 1 10 14,8 27,6 0 0 10 1 10 16,3 40,5 0 0 12,5 1 19 16,2 44 1 1 1 15 1 20 17 46 5 4 25 1 10 19 63,8 2 1 - L_]2]0 : μ 12,5 1 20 10,4 48 00 -¾ -25-

TABLEAU VIII A. VPE

- P_388 : d°Se schéma nombre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. Z

10 1 10 13 12,1 0 0 20 1 10 14,4 24,Γ’ 0 0 40 1 10 30 158,6 7 7 50 1 30 13,6 26 10 7 55 1 10 14,6 36,4 1 0 60 1 60 13,7 18 6 6 70 1 10 6 -48,3 2 0 75 1 59 14,5 27 0 0 80 1 20 15 38 0 0 - L__m0 : 55 1 10 8,5 0 0 0 60 1 10 9 13,9 0 0 65 1 10 8,8 3,5 0 0 70 1 20 8,7 13 0 0 75 1 10 9,5 25 0 0 Λ - > i iî * * ! -2b- TABLEAU VIII (suite)

B. VILE

- L·388 : düSe schéma noDlbre d' MST ILS > 30 J. >60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. 7.

» 8 1 30 30 172 20 2 •9 1 20 30 179_12_ - LJ. 21_0 : 8 1 20 11,57 58 0 0 | 9 1 10 12,8 68,4 0 0

IC. VILM

- P_388 : dose , _ nombre d' MST ILS >30 J. >60 J.

i, schéma . _ _ * mg/kg/j animaux max 30J. % 1 : 1- 1 10 16,4 ' 41,3 0 0 5 1 29 18,2 68 8 3 6 1 69 23,4 115 25 6 7 1 30 30 177 16 5 j 9 1 10 6 -48,3 4 4 15 1 10 5 -53,3 0 0 20 19 3 -72 0 0 25 1 10 2,5 -76,6 0 0 30 1 10 2,5 -76,6_0_0 - L_J_210 : i P 6 I 29 11,2 60 0 0 -27- «

TABLEAU IX VVE

- P_388 : düae schéma nOBlbre d' MST ILS > 30 J. > 60 J.

®g/kg/j animaux max 30J. Z

* — — - — — f - _ - _ _ 1 _ I

5 1 10 13,6 17,2 0 0 10 1 10 17,8 53,4 0 0 » 12.5 1 10 21 82,6 2 0 14 1 20 21 98 3 15 1 39 23,5 107 14 4 17.5 1 9 8,4 -22,2 0 0 25 1 10 6·,5 -44 0_0 - L_.[2K) : 15 1 19 11,4 61,9 0 0 — - — - ...

TABLEAU X

V Tyr E

- P_388 : dose nombre d' MST ILS ,> 30 J. > 60 J.

mg/kg/j SC ema animaux max 30J. Z

20 1 10 13,9 29,9 0 0 40 1 10 16,4 53,3 1 1 50 1 10 16 49,5 1 1 60 1 10 16 49,5 3 . 2 70 1 10 5,4 -49,5 0 0 f--------- / j · I * " -28-

TABLEAU XI

V- g, TFA-lysine E - P_388 : dose nombre d' MST ILS >30 J. > 60 J.

schéma . _

mg/kg/j animaux max 30J. Z

A____^- 20 1 10 12,8 19,6 0 0 30 1 10 12,5 13,8, 0 0 40 1 19 13,6 20 0 0 50 1 10 14,8 27,6 0 0 60 1 10 15,2 31 0 0

_ _ _________ I

TABLEAU XII

V-Val-Trypt E - P_388 : düSe nchéma nombre d' MST ILS >30 J. >60 J.

mg/kg/j animaux max 30J. % 15 1 10 26 132,1 3 25 1 10 27,5 145,5 3

S

35 1 19 27,5 154 8 45 1 10 30 183 8 50 1 9 27,5 145,5 4 i1--:--1 r -29- 1 Les activités anti-tumorales rassemblées dans les tableaux I à XII complètent, et dans certains cas modifient, les conclusions que l'on pouvait tirer des premiers résultats présentés dans le brevet de base 5 correspondant à la présente demande.

;'à

On notera en particulier l'activité exceptionnelle du * sulfate de N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23) tryptopha- nate d'éthyle qui a fourni un ILS calculé à 60 jours de 10 457 % avec la moitié des souris survivant plus longtemps.

La dose' optimale se situerait alors aux environs de 60 mg. Par contre, les dérivés d'acides aminés qui ont été testés sous la forme amide ou acide ne présentent que des activités faibles ou non significatives. Ces dérivés 15 peuvent cependant être utilisés comme intermédiaires utiles pour l'obtention d'autres alcaloïdes bis-indoliques très actifs.

En général, les composés de l'invention se sont révélés 20 être beaucoup moins toxiques que les alcaloïdes Vinca actuellement utilisés en thérapeutique anticancéreuse.

La dose létale 50 (DL5Q) de la VLE a été déterminée ' en utilisant des souris femelles de souche Charles River CD^ et pesant au moins 24 g. La méthode de calcul de 25 Litchfield et Willcoxon fournit une valeur de DL,-q de ; 32 mg/kg.

Les doses correspondantes pour la Vinblastine et la | , vindésine sont respectivement de 24 mg/kg et environ • 11 mg/kg. On a noté en particulier contrairement aux 30 cas de la Vinblastine et de la désacétyl Vinblastine, '/ l'absence de toxicité hépatique à des doses de 20 à 4" I mg/kg.

U * · · · - mal' l ..· * I / # 1 « -30- I Pour leur application thérapeutique, les composés de l'invention, éventuellement sous forme lyophilisée, sont de préférence administrés par voie parentérale, dissous dans un solvant pharmaceutiquement acceptable, 5 sous la forme d’une base ou d'un sel d'addition d'un acide pharmaceutiquement acceptable.

L’eau physiologique ou d'autres solutions salines » tamponnées, par exemple avec un phosphate, sont des solvants appropriés. D'une manière générale, ces 10 composés peuvent être utilisés en s'inspirant des techniques et des limitations qui sont connues pour les traitements thérapeutiques avec les autres alcaloïdes de la classe des Vinca.

* 15 La substance active est généralement administrée à une posologie pouvant varier de 0,01 mg à environ 5 mg/kg, en fonction du dérivé utilisé et du schéma thérapeutique adopté. Les doses hebdomadaires totales varieront généralement de ü,05 mg à environ 5 mg/kg.

20

Les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en combinaison avec un ou plusieurs agents carcino-statiques incluant par exemple les agents alkylants, les antimétabo1ites tels que le méthotrexate, le 25 fluoro-5-uraci1e , la inercapto-b purine, la thio-b guanine, les arabinosides de la cytosine et les antibiotiques tels que 1'actinomycine ü, la daunorubici ne, l'adriamycine et le cis-diamino-dichloro-platine. lin particulier, ces nouveaux dérivés de la Vinblastine 30 peuvent être utilisés en association entre eux.

Les exemples suivants illustrent de manière non limitative le procédé conduisant aux composés de I l'invention.

i t -31- A ' 1 Mode opératoire général pour l’obtention de dérivés N-(d.ésacétyl-ü-4-vinblastinoyl-23)acides aminés _3 1 g (1.3 10 M) de descarbométhoxy-3-desacétyl-0-4 5 Vinblastine carboxhydrazide-3 est solubilisé dans 23 ml de méthanol absolu et 74 ml d’acide chlorhydrique 1N.

. Cette solution est alors refroidie à -10°C et 207 mg de nitrite de sodium y sont ajoutés en une fois.

Le mélange réactionnel est abandonné £lors pendant dix 10 à trente minutes à 0°C. Après un contrôle par chromatographie sur couche mince, le milieu réactionnel est alcalinisé à pH 8,5 à -10°C, par une solution saturée de bicarbonate de sodium.

La solution alcaline est extraite à Û°C avec son propre 15 volume en chlorure de méthylène refroidi à 0°C jusqu'à obtention d'une réaction de Meyer négative sur la phase aqueuse. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur Na2SO^ et filtrées à 0°C.

On y ajoute alors 1.43.10 3M(1,1 équivalent) de l'acide 20 aminé retenu et on concentre sous vide jusqu'à un volume de 4 ml environ. Cette solution est alors conservée pendant 24 à 48 heures à 4°C. L'évolution de la réaction çst suivie par la chromatographie sur couche mince.

La solution est alors tirée à sec et fournit 1,05 g de 25 produit de couplage brut qui est quasi unitache à la chromatographie sur couche mince.

Puxifi cation

Le résidu sec obtenu ci-dessus est placé sur une colonne de gel de silice et élué avec un mélange éther-méthanol 30 saturé en ammoniac 96 % + 4 %.

On recueille des fractions de 10 ml et on les teste en chromatographie sur couche mince. La révélation se 4 fera à la ninhydrine (acides aminés) et au cérique (alcaloïdes).

i \ , -32- ! 1 Lorsque les acides aminés sont passés (ninhydrine - ), on élue encore avec 100 cc du solvant employé avant de le changer par un mélange 92 % - 8 i.

L'alcaloïde couplé à l'acide aminé sortira (cërique + ) 5 à partir des fractions 55 jusqu'à 160.

Les fractions identiques sont rassemblées, concentrées à sec au rotavapor, reprises au chlorure de méthylène, séchées sur sulfate de sodium, filtrées et évaporées à sec. La mousse obtenue est l'alcaloïde dimère couplé 10 avec l'acide aminé tout pur dont les données physicochimiques seront faites sur une partie aliquote.

Le restant sera directement transformé en sulfate.

Les rendements en base des différents dérivés sont donnés à titre indicatif et susceptibles d'amélioration.

15

Préparât ion dusulfate_:

La base amorphe (mousse) obtenue ci-dessus est reprise dans 20 fois son poids en éthanol.

A cette solution, on ajoute alors, très lentement et sous 20 vive agitation, deux équivalents d'acide sulfurique provenant d'une solution 2 % H2SO4/98 % éthanol anhydre. (0.484 équiva]ent/1itre). Après l'ajoute des deux équivalents, on laisse encore agiter pendant une demi heure avant de concentrer sous pression réduite.

25 Par ajoute d'éther sulfurique anhydre, sous vive agitation, le sulfate du dérivé engagé précipite.

Filtration et séchage sous vide à 10°C fournissent le sulfate du dérivé couplé prêt à l'emploi.

30 La numérotation adoptée pour la description des spectres de résonance maqnétiaue nucléaire des exemples oui suivent i I est inspirée de celle proposée par Le Men et Taylor pour les dérivés du type aspidospermidine (Experientia 21, 508, 1965).

* . A, . . ... .»· 4 4 -33-

Préparation de la Vinblastine (VLB) base A une solution de 1,5 g de sulfate de VLB (1.65.10~3M) 5 dissous dans 15 cc d'eau distillée, sont ajoutés successivement sous vive agitation, 15 cc de chlorure de méthylène ainsi que 1,5 cc d'ammoniaque concentrée.

Après cinq minutes, le mélange est décanté et la phase aqueuse extraite avec encore 3 x 15 cc de 10 chlorure de méthylène. Les phases organiques rassemblées sont lavées avec 2 x 40 cc d'eau dêsionisée, séchées sur sulfate de sodium anhydre puis évaporées à sec au rotavapor. On recueille ainsi 1,32 g de VLB base (99 9o).

15

Préparation de la descarbométhoxy-3-désacétyl -0-4 Vinblastine carboxhydrazide-3 (VLH) A une solution de 1 g de VLB base (1.23 10 ^M) dans 7 ml 20 d'éthanol anhydre, on ajoute 14 ml d'hydrazine anhydre et 7 ml d'éthanol anhydre. Le mélange réactionnel ainsi formé est maintenu vingt heures à 60°C.

Après refroidissement, on ajoute 28 ml d'eau saturée en sel et on extrait avec un même volume de chlorure 25 de méthylène jusqu'à obtention d'une réaction de Meyer négative sur la phase aqueuse acidifiée.

Les phases organiques sont séchées sur MgSO^ et évaporées à sec sous pression réduite.

L'hydrazide obtenu avec 88 % de rendement (0,760 g) est 30 unitache en chromatographie sur couche mince.

J

-34- JÏ I 4 1 iiËiDEÎ.ë-? :

Synthèse de la N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate d'éthyle (VLB) - -4 5 A une solution de 275 mg (3,58 10 M) de 0-4 désacétyl Vinblastine hydrazide dans 7 ml de méthanol anhydre et 20,5 ml d'HCl IN, refroidie préalablement à 0°C, on ajoute 58 mg de nitrite de sodium.

On laisse agiter pendant 25 minutes avant de revenir 10 à un pH de 8,5 par addition d'une solution de bicarbonate de sodium à 5 h L'azoture formé est extrait au chlorure de méthylène. La phase organique est séchée sur MgSO. et filtrée. On y ajoute alors 68,4 mg de 4 -4 leucinate d'éthyle (4,29.10 M) et on concentre sous 15 vide, jusqu'à l'obtention de 4 ml environ

Cette solution est alors laissée pendant 24 heures au réfrigérateur.

La réaction étant alors terminée, on ajoute 50 ml de chlorure de méthylène et on lave plusieurs fois 20 avec le même volume d'eau déminéralisée puis une fois avec une solution saturée en NaCl.

Les phases organiques sont séchées sur MgSü^, filtrées puis évaporées sous vide.

On recueille ainsi 300 mg de produit brut auxquels 25 on ajoute 0,035 g de I^SO^ en solution dans 1 ml de méthanol anhydre.

Le sel formé est précipité à l'éther.

- . Le précipité est lavé dix fois avec 50 cc d'éther diéthylique anhydre.

30 Le résidu, 183 mg (57 %) ne contient que du sulfate Ί de VLB pratiquement pur et exempt de leucinate \L d'éthyle.

-35- 1 Après libération des bases, ces dernières peuvent être chromatrographiées sur gel de silice (10 g de SiC^) et éluées avec 50 cc d1 éther/MeûH-NH^ sat.

(92*/8*) puis 250 ml d'éther/MeOH-NH3 (851/151).

5 La VLB est obtenue pure en tête du second éluat.

On recueille ainsi 49 î de VLB purifiée soit 152 mg de base.

Propriétés physico-chimiques de la VLB

10 ~ ; Point de fusion : 169 °C i

---— .... ^ I

r i CHC13 c = 0,35 : 00 15 Spectre ultraviolet (MeUll, A lliax, mn, lo^» l ) : 221 (4,62); 267 (4,15); 287 (4,02); 295 (3,99).

Spectre infra-rouge (KBr, cm"1) : 20 3470, 2960, 2880, 1735, 1665, 1610.

Spectre de masse (m/e, 1) : 924 (6) M+ + 2 8 ; 910 (56) M++14; 897 (62); 896 (100); 865 ( 25); 938 (68); 772 (19); 709 (25); DSI (43); 571 (69).

25 * Spectre de résonance magnétique nucléaire ( 111 , CDC J , , ppm , 3 ü OMI 1 z ) : 9,66 ( <111, .b s ,C10-011) ; 8,20 ( 111, s , N ' UH ) ; 7,52 (111,d); 7,15 (311, m) ; 6,56 (11I,S,C9-11) ; 6,05 ( 111, s , C 1 2-U) ; 5,86 ( 11l ,dd, C 1 4-11, J 14-15 = 12; J1 4 -3 = 3,6 ; 5,78 ( 111, d , C 1 5-H) ; 4,69 ( 1 H, m, CH (NUR ) CÜ-) ; 30 4 , 2 (21l,q,OÇH2 Cllj); 4,18 ( 1 11, t , C 1 7-11) ; 3,77 ( 311, s , UCHj ) ; i 3,66 (311,s ,0CH,) ; 3,47 (1I1,s,C5-H); 2,77 ( 311, s , -Cllj ) ; J> P>y2 (12H,m,-CT8H3 + C,8’ll3 + j sopropyl) .

b s .

* . -, • - ' « i - \ i - ' -36- 1 ËîëîîEIë-- : N-désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate de mêthylç (VLM)

En appliquant le mode opératoire général de la page 31 , 5 on obtient la VLM avec un rendement de 68 I.

Point de fusion : 172 °C

10 I (¾ CHC13 : (.7- υ c = 0,2 7

Spectre ultraviolet (CH^OH, Amax, nm, log l. j : 220 (4,01); 267 (4,15); 287 (4,03); 294 (3,98).

15

Spectre inlra-rouge (KBr, cm : 3475 ; 2960 ; 2880; 1 740 ; 1080; 11> 1S.

Spectre de masse ( in/e, o) : 20 910(25) M+ + 2 8 ; 890(78) M++14; 883 ( 20) M++l; 882(30) M+; 850(29); 830(41); 822(100); 708(15); 081(50); 050(78); 570(70).

Spectre de résonance magnétique nue J éa i ru ( C1H3 1 3 , p pm , OU MHz) : 25 9,21 (111,s ,Ο1 b-ÜH) ; 8,1 ( 111, s ,N ’u -11) ; 7,53 (111, m); 7,23 (311, m ) ; 0,63 ( 111, s , C9-U) ; 6,13 ( 11l, s ,C1 2-ll) ; 5,80 ( 2 II, m, C 1 4 - H + C15-H); 3,83 (311,s, -0C113) ; 3,80 (3H,s, -C00C113) ; 3,03 ( 311, s , -0C113 ) ; y 2,8 (3H,s,-if-Cll3J ; 0,90 (1211,m, C18H3 + C18 H + isopropyl).

l· » -37- 1 Exemple 4 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate de n-butyle (VLn-But) 5 13n appliquant le. mode opératoire général de la page 31, on obtient la VLn-But avec un rendement de 58 %·

Propriétés physico-chinuques_de_J_a_VLn * 10

Point de t us i on : 1 5 8 0(2

CIICK

H"c.ojo : 7' 18 Spectre ultraviolet (Lll^üll, A niax, um, log t ) : 220 (4,00); 200 (4,21); 289 (4,08); 290 (4,03).

Spectre in ira-rouge (KBr, cm ^) : 20 3470, 2900, 2880, 1740, 1070, 1015.

Spectre de masse (m/c, 'L ) : 952 (5 ) M++28 ; 938 (31) M++M; 924(12) M+; 923 (15 ) M "1 ; .11· 87(1 ( 1 (10 ) · 891(13); 803(30); 835(5); 821(11); 708(33); 050(bl), 3-25

Spectre de résonance magnétique nue 1éaire(CUC 13.ppm>büMll^l · 9,0 (lll,s,C16-ÜU) ; 8,00 ( 11l, s ,Ν ' α-1Ι ) ; 7,5 ( 111 ,m) ; 7,2 (3H,m); 0,03 (1H,s,c‘J-H) ; 0,1 · ( 1 11, s , C1 2-ll ) ; 5,8b ( 211 ,m ,C1 4-H + C -H); 4,2 (2U,t,-CÜÜ-Cll?) ; 3,83 (3H,s,-üCH,); 3,65 ( 3H, s , -OCIU) ; 30 | 2,8 (311, s ,-N-Cll3) ; 1 (1511, m,-C 1I3 + C1 ll3 ; Cll3 du butyle; I CHj isopropyl).

4 ij ! -Μ- 1 lixein£le_5 ; N-(désacêtyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate * d'octyle (VL-octyl) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31, on obtient la VL-octyl avec un rendement de 48 I.

^_ia l-'Octy 1 10

Point de fusion : 14 5 0 C

[u]uCtlCJ3 : 54“ u c-0,33 15 Spectre ultraviolet (CH 011, λ max, nm, Jog^ ) : 8,62 mg/1 217 (4,69J ; 265 (4,14); 289 (4,01 ); 295 (3,95).

Spectre infra-rouge (KPr , cm~ ^) : 20 3460; 2940; 2920; 2870; 1735; 1bb5; 1610; 1500; 1455.

Spectre de résonance magnétique nueJéaire(cl)CI3,ppm,60MHz) : 1 f\ 9,6 ( 1H, S ,C -OH); 8, ? ( 1H,s ,N '-11) ; 7,55 ;1Il,m); 7,23 (311, m ) ; 6,5 ( 1 H, s , C9-H) ; 6,12 U11, s ,C1 2-H) ; 5,90 i2H,m,CM-H + C15-H); 25 4,2 (2H,t,-0-CH2-0ct; 1 >1,d ,C1 7-ll) ; 3,83 (311,s,-COOCHj); 3,67 ( 3H , s , -OCH,) ; 3,56 (1 H,b,C5 -H); 2,83 (3H,s,N-CH ); 1,33 (1011, ^ 10' in ^ i o Γ in, massif octyl + CIi2 » Cll2 ) ; 1 (15H,in, massif octyl + CHj + 4> Ch!8').

r >/ -39- 1 Exemple_6 : φ ·“ *“ — N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-D-leucinate d'éthyle (VDLE)_________ 5 En appliquant ie mode opératoire général de la page 31 , on obtient la VDLE avec un rendement de 74 %.

φ

Propriétés ph^sico-chimiques_de la_VDLE :

1 ü Point de fusion : 181 °C

fa]n CI1C13 : 70° L U c = 0,28

Spectre ultraviolet (méthane), amax, nm, logt) : 15 220 (4,67) ; 226 (4,20); 288 (4 , 1 1 ); 295 (4,02).

Spectre in lia rouge (K8r, cm : r 3460; 2960; 2880; 1735; 1665; 1605.

20 Spectre de niasse (m/e l) : 924 ( 14) M+ + 2 8 ; 910(32); M++14; 897 (38 ) M++l; 896(b6) M+; 863(28); 835(43); 709(43); 651(81); 570(100).

Spectre Je résonance magnétique nucléa i re ( CDC1 ,ρρηι ,60MHz j : 25 9,6 ( 1 H, s,C16-0H); 8,1b ( 1H, s ,N ' U-H) ; 7,b6 ( 1H, m ) ; 7,2b (31i, ni); 6,7 ( 11I, s ,C9-Il) ; 6,16 ( 1 H, s ,C1 2-H) ; 5,90 (2H,m,C14-H + I C15-I1); 4,26 (2Il,q,-COOCH2) ; 3,83 (3H,s ,-OCH3) ; 3,66 (3H,s, vL -ÜCH,); 2,90 (3H,s,-Nu-CH,) ; 1,3 (3H,t,-(COOCH?)-CH.,; 0,96 A? (l2H,m,C H, + C IL + isopropyl).

» I -40- ! 1 (Exemple_7 : N->(dësacétyl-0-4 vinblastinoyl-23) -L-sërinate d’éthyle (VSE) I . 5 En appliquant ie mode opératoire général de la page 31, on obtient la VSE avec un rendement de'35 %.

.-1¾ VSIj : 10 ï„T CHC13 : 05° J t) . n v c = 0,7

Spectre ultraviolet (Meütl, » max, um, 1 og. j : 2 15 (4, 7b J ; 26b (4,31); 28B (4,20); 297 (4,15j.

15

Spectre in Ira rouge (CUC 1 ^ , l iu : ; 3 4 b Ü; 3400; 2965; 29 35; 2880; 1730; looh; U.U5.

S])ectre de l ésuiiinia· m.igué 1 1 qne iiik lé.ilic ( ClU 1 ^ , ppin , OUflIL· ) : 20 8,13 ( 1 II, s , N1 ' -H ) ; 7 , «J ( 111 ,d ,-011 ) ; 7,52 (111,ml; 7,20 (311, m ) ; b,03 ( 111,s ,C9-11) ; 0,1 ( 1 11, s ,C 11-H ) ; 5,9 ( 211 ,w , C N-il + C15-llj; 4,3 (211,q,-C00-CH?-J ; 3,83 ( 311, s ,-0CIU ) ; 3,00 ( 311, s ,-DC1L ) ; 2,67 (3H,sf-Nu-CH,J ; 1,34 ( 311, t , (-COü-Cll - ) i.U~ ) ; 0,95 {bll,m, CI8,1.3 + c18n3j. * ’’ Ί- * -41- N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-glutamate d'éthyle (VGE) 5 En appliquant ie mode opératoire général de la page 31, on obtient la VGE avec un rendement de 55 %.

Propriétés pbysjco-chimiques_de_Ja_VGE : U)

Pu i ni de fusion : 149 UC

QJ C,,t:i3 : 5 9 c- 2 1 S Spectre ultraviolet (MetHl, J Οιιιμ/ 1 , \ max , ma , 1 ou, t. : 219 (4,40); 2o9 (3,94); 288 (3,80); 29b (3 ,7 0 ) .

Spectre i h 1~ i a - ronge (Kbr, cm ; 2 U 3 4 0 0 ; 3395; 2900; 2920; 2870; 1 730; 1005; 1010; 1500.

Spectre de résonance magnétique nucléaire ( GDG 1 3, p pm, OOMlli ) : 9,03 (lll, s,C1(3-0il); 8,10 ( 111,s,Nu'-11) ; 7,0 (111, m ) ; 7,10 (3II,ia); 0,04 ( 1II, s , C 9 - ί I ) ; 0,07 ( 1 H , s ,C1 “-11) ; 5,83 (211, m, 25 C 1 411 + C15li); 4,23 ( 211, q ,-CÜüGil , - ) ; 4,10 ( 211, q ,-COOC11 ,-) ; 3,8 (311,5 ,-()CII3) ; 3,04 ( 311, s ,-ÜCllj ) ; 3,5 (111,s,C5 -11); , 2,8 (311,.s ,-NuClU) ; 1,33 ( 311, t ,-Cil-, ) ; 1,20 ( 3!i, t ,-Cli-.) ; ' 1 (ùll,in,C,0ll < c10 Il3) .

% » * l . Λ * -42- 1 Exemple_9 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-phenyl-alaninate d'éthyle (VPE)

En appliquant le mode opératoire général de la page 31, on obtient la VPE avec un rendement de 66 5 -Physico-chimiques de la VPE : j i φ

Point de fusion : 154°C.

! 1° fu]n CilC13 : 78° U c = 1 ,2

Spectre ultraviolet (Meüll, 9,8 mg/1, λ max, jim, 1 ug î j : 217,5 (4,67); 2b5 (4,13); 286,5 (3,99); 295,5 (3,95).

15 -1

Spectre infra-rouge (KBr, cm ) : 3560; 3460; 3400; 2860; 2830; 1730; 1650; 1610; 1500; 1455. Spectre de masse (rn/e, % j : 20 958(17); 944(41); 930(35); 871(64); 651(41); 588(41); 571 (53); 401(100).

Spectre de résonance magnétique nucléaire (Cl)Cl^ ,ppmgjOQMIIz ) : 9,48 (1H,bs,~C.16-OH) ; 8,1 (1H,s ,N*' -H) ; 7,6 (lH,d) ; 7,5 (1H,d); 25 7,3 à 7,02 (7H,m); 6,6 (1H,s,C9-H); 6,1 (1H,s ,C]2-H); 5,87 (2H, m,C14-H + C15-H) (J15‘14=12Hz; J14‘3 = 8,6Iiz) ; 4,9 (lH,m°^CH-); 4,16 (2H,q,COO-CH2); 3,8 (3H,s,-OCHj); 3,56 (3H,s,-OCH3); I 3,43 (1H,s,C5-H); 2,74 (3H,s,Ν^-ΟΗ,); 1,20 (3H,t,-CH3 (ester)); jL 0,97 (3H,t,-C18'H3) ; 0,88 (3H, t,-C '8'h.,) .

* i ί i -43- 1 Exemple_10 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leuein-amide (VL-amide) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31, » on obtient la VL-amide avec un rendement de 39 %.

physico-chiaiques de la VL-amide

10 Point de fusion : 240,2°C

Gfc CHC13 : 47,1 ° c=0,254

Spectre ultraviolet (CII^OH, xmax, nm, loge) : 15 219 (4,76); 263 (4,29); 288 (4,1 ép); 295 (4,03 ëp).

-1

Spectre infra-rouge (KBr, cm ): 3460, 3400, 2960, 2940, 2860, 1715, 1665, 1610, 1495, 1455, 1225.

20

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDCl^,60MHz,ppm): 9,76 (bs,1H,Cl6-OH); 8,33 (s,1H,N-H); 7,4c (m,2H); 7,16 (m,2H); 6,5 (s,1H,C9-H); 6,3 (s,1H,C12-H) ; 5,66 (m,2H, C14-H et C15-H); 3,76 (s ,3H,COOCH3); 3,6 ,3H,-0CH3); 25 3,46 (s,1H,-C5-H); 2,76 (s,3H,N-CH3).

h ν' ' -44- ♦ .

1 Exemgle_11 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L~isoleucinate de méthyle (VILM) 5

En appliquant le mode opératoire général de la page 31, on obtient la VILM avec un rendement de 66 %.

Proprietes_physico-chimiques_de_la_VILM

10 [°Jn CHC13 : 66,6 ° C=0,135 ! Spectre ultraviolet (MeQH, λmax, nm, log ε) : I 225 (4,55); 266 (4,18); 288 (4,05); 295 (4,00).

15

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDCl^,360MHz): 9,48 (bs,lH,C16-0H); 8,03 (s,1H,NH); 7,51 (m,2H); 7,23- 7,06 (m,2H); 6,58 (s,1H,C9-H); 6,20 (s,1H,012-H); 5,85 (dd,1H,C14-H; J15_14 = 12Hz; J1 4-3 = 3,6Hz) ; 5,78 (-d,1H,ClS-H) ; 20 4,62 (m,1H h^C^qûr) ; 4,17 (d,1H); 3,77 ( s , 3H,COOCH3) ; 3,75 (s,3H,C00CH,); 3,6 (s,3H,-OMe-j; 2,73 (s,3H, N^-CH.,) ; 91^ i ο i o » ^ 2,58 (s,1H,c -H); 0,92 (m,12H,C' IL-C 1 0 H).

T

-45-

V *, V

1 £xemple_12 · N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tyrosinate d’éthyle (V-Tyr E) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31, " on obtient la V-Tyr E avec un rendement de 48 %.

?I2Eïï§£ê§ J^h^sico-chimiques de_la_V-Tyr E

(a]D CHClj ; 64,4° 10 c=0,1087

Spectre ultra-violet (CH^OH^max, nm, loge) : 227 (4,73); 266 (4,26); 288 (4,07); 296 (3,94).

15 Spectre infra-rouge (KBr, cm~^) : 3460, 3400, 3040, 2950, 2840, 1715, 1660, 1610, 1500, 1455, 1225.

20 Spectre de résonance magnétique nucléaire (360 MHz) : 9.6 (bs,1H,Cl6-OH); 8,05 (s,1H,NH); 7,55 (m,2H); 7,21 - 7.06 (m,2H); 7,03 (d,2H, arom tyr J=7,5); 6,7 (d,2H,arom tyr.J = 7,5) ; 6,55 (s,1H,C9-H); 6,05 (s , 1H,012-H); 5,83 (dd,1H,CU-H; J15"14 = 12Hz; J14~3 = 3,6 Hz); 5,76 (d,1H, 25 C15-H); 4,83 (m,1H,CH); 4,13 (massif 3H,-COOCH2,0Ί7-H); 3,76 (s,3H,-0CH3-); 3,6 (s,3H,-COOCiy; 3,45 (s,1H,C5-H); 2,71 (s,3H,-N^-CHj); 1,21 (t,3H,-CHj-(CH?OOCjJ ; 0,88 (m, 6H,-C18H_-C18'hJ .

f- 4 ! -46-

• A

1 Exemple_13 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle (V-Trypt E) 5

En appliquant le mode opératoire général de la page 31 on obtient la V-Trypt E avec un rendement de 72 I.

_de_l a _V-T rypt JE

Γ Ί CHC1X

10 LaJD ύ : 89,8 0 c=0,51119

Spectre ultra-violet (MeOH,λ max, nm, log ε) : —J—— —----- — - ' - -.--K , « *· 225 (5,15) ; 267 (4,65); 280 (ep); 290 (4,55).

15

Spectre de masse (ra/e %) : 970, 391, 279, 165, 108, 35;

Spectre infra-rouge (KBr, cm~^) : 20 3460, 3400, 3040, 2960, 2940, 2880, 1725, 1660, 1610, 1500, 1455, 1225, 740.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CDC1^,360MHz) : 9,5 (1H,s,C16-OH); 8,2 (1H,s,NH,trypt); 8,05 (1H,s,NH); 25 7,66 (1H,d,trypt; J=7,2Hz); 7,58 (1H,d,trypt; J=7,2Hz); 7,51 (1H,d,trypt; J=7,2Hz); 7,31 (1H,d,trypt; J=7,2Hz); 7,25-7,04 (5H,m); 6,58 (1H,s,C9-H); 6,06 (1H,s,C12-H); 5,83 (1H,dd,C -H;j=i2Hz; J=3,6Hz); 5,78 (1H,d,C15-H; J=12Hz); 4,95 (1H,qf>CH); 3,75 (3H,s,-COOCHj); 3,6 (3H,s, 30 -OCH3); 3,4 (1H,s,C5-H); 2,77 (1H,s,N-CH3) ; 1,15 (311,t, -cooch2(CH3)). ^ 4 ' -47- 1 Exem£le_14 : N-(désacétyl-ü-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate de méthyle (V-Trypt M) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31 , On obtient la V-Trypt M avec un rendement de 41 %.

Propriétés physico-chimiques_de_la_V-Trypt_M : 10 t“] CHC13 : 93,9 ° U c=1,82

Spectre ultra-violet (MeQH, ima:?;, nm, loge ) : 269 (4,48); 280; 289 (4,32).

15 -1

Spectre infra-rouge (KBr, cm ) : 1730, 1710, 1660, 1610, 1495, 1455, 1220, 740.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (360 MHz) :

20 9,5 (lH,bs,C16-OH); 8,06 (1H,s,NH ind) ; 8,01 (\-,s,NH

ind) ; 7,65 (1H,d) ; 7,58 (1H,d) ; 7,38-7,06 (7H,r ; 6,41 (1H,s,C9-H); 6,05 (1H,s,C12-H) ; 5,85 (1H,cc,C14-H; J=12Hz ; J'=3,6Hz); 5,78 (1H,d,C15-H;J=12Hz); 4.-5 (1H, q,C); 4,2 (1H,m,C17-H); 3,75 (3H,s ,-OCH3); 3,fe (3H,s, 25 -COOCH3); 3,58 (3H,s,-C00CH3) ; 3,43 (2H,s,CS-H . 2,6 f3H,s,N-CH3).

* 4 -48- t j 1 Exemple_15 : ! ' N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-valinate I d'éthyle (VVE) 5

En appliquant le mode opératoire général de la page 31, on obtient la VVE avec un rendement de 63 %.

Propriétés physico-chimiques de la VVE

10

Spectre ultra-violet (MeOH^max, nm, loge ) : 226 (4,95); 267 (4,57); 285 (4,45); 296 (4,40).

15 Spectre de masse (m/e I) : 910 (0,1); 896 (2); 882(5); 823(4,5); 822(6); 708(5,3); 1 653(9,2); 651(8,7); 650(14,6); 572(8,7); 571(23,3); 539 (10,7); 355(16); 354(10); 353(31); 294(17); 188(8,5); 156(100); 155(11,8); 154(11,3); 144(12,2); 141(12,1); 20 140(16,4); 136(13); 135(20,4); 124(61); 122(35,5); 121 (15,3).

Spectre infra-rouge (KBr, cm ^) : 3540, 3470, 3420, 2960, 2930, 2870, 1730, 1720, 1670, 25 1610, 1500, 1455, 1225, 745.

Spectre de résonance magnétique nucléaire : 9,48(1H,bs,C16-OH); 8,03 (1H,bs,NH ind) ; 7,55 (1H,d;J= 7,2Hz); 7,51 (1H,d,J=7,2Hz); 7,51 (1H,d); 7,23 à 7,06 30 (3H,m); 6,58 (1H,s,C9-H); 6,06 (1H,s,C12-H); 5,85 (1H, dd,Cl4-H; J14”15=12Hz; J14'3=3,6Hz); 5,78 (1H,d,C15-H; J=12Hz); 4,56 (1H,dd, C); 4,21 (2H,q,COOCH2); 4,15 (1H, d,C17-H); 3,96 (1H,t); 3,76 (3H,s,OCH3); 3,6 (3H,s, ; C00CH3); 3’46 OH,s,C5-H); 2,73 (3H,s,N-CH^); 1,31 (6H, 35,; m,C00CH7CHL); 0,96 (14H,m); 0,9 (14H,tj.

ί l· 4 ' k ί -49- j 1 Exemple 16 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23j-L-iso-leucinate d'éthyle (VILE) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31, - on obtient la VILE avec un rendement de 58 I.

Propriétés physico-chimique_de_la_VILE

10 Spectre ultra-violet (MeOH,Xmax, nm, loge) : 226 (4,94);, 266 (4,56); 285 (4,44); 295 (4,38).

Spectre de masse (m/e %) : 15 924(7); 910(11); 897(23); 896(44,4); 867(11,3); 837 (18,7); 836(26,6); 822(4); 709(10); 650(21); 571(13); 570(34,7); 366(21,7); 154(100); 126(11).

Spectre infra-rouge (KBr, cm ^) : 20 3460, 3440, 3040, 2960, 2940, 2880, 1730 1665, 1610, 1500, 1455, 1225, 745.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CPC13,360MHz): 9,46(1H,bs,Cl6-OH) ; 8,03(1H,bs ,NH) ; 7,55(1H,d;J = 7,2Hz) ; 25 7,51(1H,d); 7,23 à 7,06 (3H,m); 6,58 (1H,s,C9-H); 6,06 (lH,s,C12-H); 5,85 (1H,dd,C14-H; J=12Hz ;J 1 = 3,6Hz); 5,78 (1H,d,C1S-H; J=12Hz); 4,61 (1H,q(dd), ; 4,21 (2H,q, COO-CH2-); 4,15 (1H,d,C17-H); 3,96 (1H,t); 3,76 (3H,s, OCH3 ester); 3,6 (3H,s,OCH3); 3,46 (1H,s,C5-H); 2,73 30 (3H,s,N-CH3); 1,25 (3H,t,COOCH2CH3) .

1 Λ * * * - -50- 1 Exem£le_17 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-D-tryptophanate d'éthyle (VD Trypt E) 5 . En appliquant le mode opératoire général de la page 31 , on obtient la VD Trypt E avec un rendement de 69 %.

£ es physi co-chimiques de _la_VD_Try]3t_E

10 [“3d CDC13 : 69,8° c-0,3295

Spectre ultra-violet (MeOH, À max, nm, loge) : 225 (4,77); 269 (4,30); 290 (4,20); 320 (ep).

15 Spectre de masse (m/e %) : 970, 391, 279, 165, 108, 35.

Spectre infra-rouge (KBr, cnT^) : 3460, 3400, 3050, 2960, 2940, 2870, 1735, 1665, 1610, 20 1495, 1455, 1210, 740.

Spectre de résonance magnétique nucléaire : 9,53 (1H,bs,Cl6-OH); 8,1 (1H,s,NH ind tryp); 8,02 (1H,s, NH ind); 7,76 (1H,d); 7,65 (1H,d); 7,51 (1H,d); 7,35 (1H,

25 d); 7,2 à 7,05 (6H,m); 6,53 (1H,s,C9H); 5,98 (1H,dd,C14H

J1 4-1 5=-] 2Hz ,J * l4-3_ 3>6 Hzj. 5>73 (lH,d,C15-H; J = 12Hz); 4,86 (1H,q,C-); 4,1 (SH.mjC17-H-COOCH2); 3,75 (3H,s, COOCH,); 3,6 (3H,s,-OCHj); 3,33 (2H,s,C5-H); 2,43 (3H,s, /N-CH3); 1,16 (3H,t,-COOCH2-CH3); 0,93 (8H,m).

i j Λ -51- 1 Exemple 18 : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-valinyl-L-tryptophanate d’éthyle (V-Val-Trypt-E) 5 En appliquant le mode opératoire général de la page 31, on obtient la V-Val-Trypt E avec un rendement de 40 %.

?Γ2ΕϊϊΙΐ§5_physico-chimiques_de_la V-yal-Trypt-E

1Q a D CHC13 : 36,2 0 c=0,3589

Spectre ultra-violet (méthano3,A max, nm, loge) : 270 (4,42) ; 290; 312 (4,96).

15 Spectre infra-rouge (KBr, cm ^) : 3480, 3400, 2960, 2940, 2870, 1735, 1725, 1660, 1610, 1500, 1455, 1230.

Spectre de résonance magnétique nucléaire (CüCl3,360MHz) :

20 9,5 (1H,bs,C16-OH); 8,18 (1H,s,NH ind); 8,01 (1H,s,NH

ind); 7,6 à 7,06 (10H,m arom); 6,41 (1H,s,C^-H); 5,95 (1H,s,C12-H); 5,85 (1H,dd,C14-H; J15-14 = 12Hz; J8'14=3,6Hz) 5,75 (1H,d,C15-H; J15_14=12Hz); 5,02 (1H,m,C); 4,9 (1H,m, £); 3,73 (3H,s,COOCH3); 3,56 (3H,s,-OCHj); 3,43 (2H,s,C5-H); 25 2,61 (3H,s,N-CH3); 1,18 (3H, t,-COOCH2-CH3); 1,05-0,86 (+ 16H,m,CH3).

L

if -52- } 1 Exemgle_l_9 : N-(désacêtyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophane (V-Trypt Ac) 5

En appliquant le mode opératoire général de la page 31 , on obtient la V-Trypt Ac avec un rendement de 67

Propriétés_ghysico-chimiques_de_la_V-Trypt_Ac ^ ^ Spectre ultra-violet (MeOH,A max, nm, loge ) : 270 (4,29); 289 (4,18); 321 (ép)

Spectre infra-rouge (KBr, cm 1) : 15 3400, 2860, 2820, 2760, 1720, 1650, 1605, 1590, 1500, 1455, 1225, 780.

Λ •χ

Claims (12)

1. A titre de composés nouveaux, les dérivés de la Vinblastine répondant à la formule générale suivante : CH3°2C Jf ! <M J XCŒ- CH3 CILj Vf >ÜK2 “u ’c-R, il 1 0 dans laquelle R.j représente un ester d’acide aminé ou de peptide, éventuellement protégé, couplé au fragment vinblas-tinoyl-23 par un lien amide, le peptide comprenant de 1 à 6 acides aminés différents ou identiques, et le groupe ester, ramifié ou non, possédant de 1 à 8 atomes de carbone et, R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyl-carbonyle comportant de 2 à 9 atomes de carbone, ainsi que ses sels d'addition avec les acides | minéraux ou organiques; J r I . .......“ i $ i 4 ’ -54-

2. Composés nouveaux de formule générale (;H3Ü2C ff » * I i (HJL J XDŒ- 0c«3 >üK2 "V-( NH-ÇH-Ç-fcOR υ R3 0 dans laquelle représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkylcarbonyle comportant de 1 à 9 atomes ; de carbone; représente chaque fols indépendamment, un atome d'hydrogène, un groupe alkyle ramifié ou non comportant de 1 à 8 atomes de carbone, un groupe carboxy-, hydroxy-, amino-, amido-, guanadino-, thiol-alkyle comportant de 1 à 8 atomes de carbone, cystéinyl méthyle, méthyle thioëthyle, benzyle, hydroxybenzyle, ou R^, ensemble avec le carbone auquel il est rattaché et l'azote du groupe amide forme un cycle azole; n varie de 1 à 6 et OR^ est un groupe > benzyloxy, alkoxy, ramifié ou non, comportant de 1 ί à 8 atomes de carbone; ainsi que ses sels d'addition avec les acides minéraux pu organiques. i U . . -55- »

3. Composés suivant les revendications 1 et 2 caractérisés en ce qu'il s'agit du N-(désacétyl-0-4 vinblasti-noyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle ou de méthyle et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceutique-ment acceptables.

4. Composés suivant les revendications 1 et 2 caractérisés en ce qu'il s'agit du N-(désacêty1-0-4 vinblasti-noyl-23)-leucinate d'éthyle ou de méthyle et leurs a sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables.

5. Composés suivant les revendications 1 et 2 caractérisés en ce qu'il s'agit du N-(désacétyl-0-4 vinblasti- ' noyl-23)-L-valyl-L-tryptophanate d'éthyle et les sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables. b. Composés suivant les revendications 1 à 5 caractérisés en ce qu'ils se présentent sous la forme de leurs sels d'addition 1:1 avec l'acide sulfurique.

7. Le sulfate de N-(dêsacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate d’éthyle. 1 Composé suivant la revendication 1 caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par les dérivés de la vinblastine suivants, éventuellement sous la forme d'un sel d'addition avec un acide - minéral ou organique : - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate d'éthyle - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-Jeucinate de méthyle fj - N-(désacêtyl-0-4 vinblast inoyl-23)-L-leucinate \J/ de n-butyle Ί 4 ' -5b- j - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23j-L-leucinate ! d'octyle ! - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucin-amide I- N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23)-D-leucinate d'éthyle - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-glutamate d'éthyle - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-sérinate a d'éthyle o - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate d'éthyle - N-(dêsacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate de méthyle - N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophane - N-(désacéty1-0-4 vinblastinoy1-23)-D-tryptophanate d'éthyle i - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-alaninate d'éthyle - N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23)-L-phenyl alaninate d'éthyle - N-(désacétyl-û-4 vinblastinoyl-23j-L-isoleucinate d'éthyle - N-(désacéty1-0-4 vinb1astinoy1 -23j-L-isol eueinate de méthyle - N-(désacéty1-0-4 vinblastinoyl-23J-L-valinate d’éthyle - N-(désacéty1-0-4 vinblastinoy1 -23)-L-tyrosinate d'éthyle v - N-(désacéty 1-0-4 vinblastinoyl-23)-£-trif 1 uoro- ; acétyl-L-lysinate d'éthyle - N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-valinyl-L-tryptophanate d'éthyle jt- . ' \ «. V * Λ ‘ -57-

9. Composition pharmaceutique utilisée en médecine humaine et vétérinaire pour le traitement de maladies néoplasiques contenant un ou plusieurs dérivés définis dans l'une quelconque des revendications 1 ä 8 ,

10. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon * la revendication 9 caractérisée en ce qu'elle est j administrée à un patient à une dose comprise entre 0,05 mg/kg/semaine et environ 5 mg/kg/semaine.

11. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce que le principe actif est le N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-tryptophanate d'ethyle, éventuellement sous la forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.

12. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce que le principe actif est le N-(désacétyl-0-4 vinblast inoyl-23)-L-valyl-L-tryptophanate d'éthyle, éventuellement sous la forme d'un sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable.

13. Composition pharmaceutique selon la revendication 9 caractérisée en ce que le principe actif se trouve dans un diluant pharmaceutiquement acceptable.

14. Composition pharmaceutique selon la revendication 13 1 caractérisée en ce que le diluant est une solution aqueuse stérile tamponnée. 1 Utilisation d'une composition pharmaceutique selon la revendication 9 pour le traitement de leucémies, de tumeurs solides et de la maladie de Hodgkin.