EP0124420B1 - Nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé pour leur préparation et médicaments les contenant - Google Patents

Nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé pour leur préparation et médicaments les contenant Download PDF

Info

Publication number
EP0124420B1
EP0124420B1 EP84400787A EP84400787A EP0124420B1 EP 0124420 B1 EP0124420 B1 EP 0124420B1 EP 84400787 A EP84400787 A EP 84400787A EP 84400787 A EP84400787 A EP 84400787A EP 0124420 B1 EP0124420 B1 EP 0124420B1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
tyr
asp
met
glu
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
EP84400787A
Other languages
German (de)
English (en)
Other versions
EP0124420A2 (fr
EP0124420A3 (en
Inventor
Jean Martinez
Jean-Pierre Bali
Bertrand Castro
Dino Nisato
Henri Demarne
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Public Dit Centre National de la Ets
Sanofi SA
Original Assignee
Sanofi SA
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi SA, Centre National de la Recherche Scientifique CNRS filed Critical Sanofi SA
Priority to AT84400787T priority Critical patent/ATE30919T1/de
Publication of EP0124420A2 publication Critical patent/EP0124420A2/fr
Publication of EP0124420A3 publication Critical patent/EP0124420A3/fr
Application granted granted Critical
Publication of EP0124420B1 publication Critical patent/EP0124420B1/fr
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/595—Gastrins; Cholecystokinins [CCK]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • Caeruleine, cholecystokinin and gastrin are natural polypeptides with various pharmacological activities.
  • cholecystokinin stimulates the release of pancreatic enzymes while caeruleine increases gastric, pancreatic and biliary secretions.
  • these 3 compounds have the particularity of presenting the same C-terminal sequence which, using the 3 letter abbreviations recommended by the Nomenclature Commission of IUPAC-IUB, to designate the ⁇ -amino acids, can be represented by :
  • peptide compounds derived from the C-terminal sequences of caeruleine, cholecystokinin and gastrin by suppression of the Phe NH 2 terminal group surprisingly have the property of inhibiting gastric secretion .
  • the compounds according to the invention can be prepared by the usual techniques of peptide synthesis either in the solid phase according to Merrifield, or in the liquid phase.
  • the various amino acids present in the sequence are successively introduced.
  • the coupling reactions are carried out with an activated ester of the amino acid to be introduced into dimethylformamide and in the presence of diisopropylethylamine and hydroxy-1-benzotriazole.
  • amino acids are incorporated in the form of the derivative protected on the amine at ⁇ , the protective group being chosen from the benzyloxycarbonyl and t-butyloxycarbonyl groups.
  • the amino acid used has functions capable of reacting in its side chain, these must be blocked beforehand.
  • the acid functions in s of aspartic acid or glutamic acid must be blocked in the form of an ester, in particular the benzyl ester or the tert-butyl ester and the guanidino group of arginine can be protected by a group. nitro.
  • the deprotection of the amine to a is carried out either by hydrogenolysis if it is a benzyloxy carbonyl group, or by acid hydrolysis if it is a butyloxycarbonyl group.
  • the compounds of formula (I), where TYR represents tyrosine-a-sulfate, are obtained from the compounds where TYR represents tyrosine by action of sulfuric anhydride in the presence of pyridine.
  • the catalyst is filtered and the solvents are concentrated in vacuo.
  • the residue is dissolved in dimethylformamide (100 ml) and 1.8 g of Z-Trp-ONp, 1.6 g of DIEA and 0.75 g of HOBt are added.
  • the mixture is left in contact overnight and then concentrated to approximately 50 ml and filtered through 30 g of neutral alumina. The elution is continued with 200 ml of dimethylformamide, evaporated to dryness and triturated the residue with ethyl acetate.
  • a white powder is obtained.
  • a white powder is obtained in the same way. Mp 187-189 ° C; Yield: 75%.
  • the protected peptide obtained above is dissolved in trifluoroacetic acid in an amount of 5 ml per g of product and 0.5 ml of anisole and 0.5 ml of thioanisole are added. It is left in contact for 2 hours and then 200 ml of ether are added. The precipitate is drained, which is washed several times with ether.
  • Trifluoroacetate is obtained in the form of a colorless solid.
  • Example 1 f 1.8 g of the trifluoroacetate obtained in Example 1 f) are dissolved in dimethylformamide, then 1.12 g of Z-Tyr-ONp and 0.71 g of DIEA are added and the mixture is left in contact for 12 hours.
  • Example 2 0.1 g of the peptide obtained in Example 2 is dissolved in 3 ml of dimethylformamide and 3 ml of pyridine. 0.75 g of the sulfuric anhydride / pyridine complex is added and the mixture is stirred overnight.
  • IR spectrum a band at 1060 cm -1 due to the sulfate.
  • Rf 0.3 (ethyl acetate 60 - pyridine 20 - acetic acid 6 - water 10, vol / vol).
  • the solution is cooled to 5 ° C and 2.06 ml of DIEA is added. After 8 hours, the mixture is concentrated under vacuum and the oily residue is taken up in ethyl acetate (200 ml).
  • the organic solution is washed with a saturated sodium bicarbonate solution (2 times 50 ml), with water (1 time 50 ml), with a saturated sodium chloride solution (1 time 50 ml), with a solution citric acid 20% (1 time 50 ml) then again with water (1 time 50 ml) and with a saturated solution of sodium chloride and concentrates the solvent under vacuum at a temperature below 50 ° C .
  • the product is dissolved in 10 ml of dimethylformamide and 1.7 g of Boc-Trp-ONp and 0.56 g of HOBt are added. After cooling to 5 ° C, 1.47 ml of DIEA are added.
  • Rf 0.2 (ethyl acetate 8 - hexane 2, vol / vol).
  • the terminal Boc group is eliminated from the peptide obtained in paragraph b) by the action of trifluoroacetic acid.
  • 1 g of the trifluoroacetate obtained is dissolved in dimethylformamide and 0.48 g of Boc-Gly-ONp, 0.22 g of HOBt and 0.6 g of DIEA are added. After 8 hours of reaction, the solution is concentrated and treated as described in a).
  • Rf 0.4 (ethyl acetate 9 - methanol 1 - acetic acid 0.5, vol / vol).
  • This product is prepared according to the GI-SIN method by the action of alpha chloroacetamide on Boc-glycine in dimethylformamide at 40-50 ° C for 24 hours.
  • Boc-Gly-Cam 2.4 g are dissolved in 10 ml of trifluoroacetic acid and left for 30 minutes. 150 ml of ether are added, the precipitate is filtered off, washed with ether several times and dried.
  • This product is dissolved in 20 ml of dimethylformamide and 3.22 g of Boc-Tyr-ONp are added. Cool to 0 ° C and add 1.3 ml of DIEA. It is left for 12 hours at room temperature and then evaporated to dryness under vacuum while maintaining the temperature below 50 ° C. The residue is taken up in 200 ml of ethyl acetate, washed with a sodium bicarbonate solution, then with water, with a 10% solution of citric acid and again with water.
  • the compounds according to the invention have been studied with regard to their therapeutic properties. More particularly, these compounds have been studied in vivo with regard to their gastric secretory effect in rats.
  • the model chosen for the measurement of the secretory effect is that of the stomach of anesthetized rat re-perfused.
  • the protocol followed is a modification of that previously written by Ghos and Schild.
  • a propionic-succinic solute (pH 5.5) which gives a linear variation of the pH as a function of the concentration of H + ions is used to perfuse the stomach in open or closed circuit with a flow rate of 3 ml / min.
  • the body temperature, as well as that of the solute, is controlled and maintained at 30 ° C.
  • Acid secretion from the stomach will cause a change in pH detected by the glass electrode and recorded as a function of time.
  • the gastrin is injected intravenously either as an infusion or as a single injection. The response is recorded as a function of time and the quantity of acid secreted is measured on the recording by difference with the basal secretion.
  • the same experiment is carried out either by injecting the peptide to be studied i.v. onto a plate of acid secretion stimulated by gastrin, or by associating the peptide with the stimulant in variable concentration ratios. Finally, the peptide is administered alone at different doses to examine its agonist effect.
  • the compounds according to the invention may be used in human therapy in all cases where it is useful to reduce gastric secretion and in particular for the treatment of peptic ulcers.
  • the compounds of the present invention can be used preferably by injectable route: intravenous, intramuscular or subcutaneous. They are used in a solvent such as physiological saline (isotonic saline solution).
  • the dosage can vary depending on the intensity of the therapeutic effect sought, the severity of the condition to be treated and the route of administration used. It must therefore be determined for each patient according to these various criteria. Most often it is between 1 and 100 mg of active principle per kg of body weight.

Description

  • La caeruleine, la cholécystokinine et la gastrine sont des polypeptides naturels doués d'activités pharmacologiques diverses.
  • Ainsi la gastrine stimule la sécrétion gastrique, la cholécystokinine stimule la libération d'enzymes pancréatiques alors que la caéruleine augmente les sécrétions gastriques, pancréatiques et biliaires.
  • Sur le plan structural ces 3 composés possèdent la particularité de présenter la même séquence C-terminale qui, en utilisant pour désigner les a-aminoacides les abréviations à 3 lettres recommandées par la Commission de Nomenclature de l'IUPAC-IUB, peut être représentée par:
    Figure imgb0001
  • Selon la présente invention, il a été trouvé que des composés peptidiques dérivés des séquences C-terminale de la caéruleine, de la cholécystokinine et da la gastrine par suppression du groupe Phe NH2 terminal possèdent de façon surprenante la propriété d'inhiber la sécrétion gastrique.
  • Ces composés répondent à la formule générale où tous les aminoacides sont de configuration L:
    Figure imgb0002
    dans laquelle:
    • - Asp NH2 représente l'amide en a de l'acide aspartique de formule
      Figure imgb0003
    • - R représente l'hydrogène, un groupe protecteur de la fonction amine terminale tel que t.butyloxy carbonyl (BOC), benzyloxy carbonyl (Z), al- canoyle inférieur, etc.
    • - A désigne:
    • - soit la tyrosine, la tyrosine-0-sulfate, la thréonine ou la méthionine;
    • - soit un dipeptide choisi parmi: - Ala - TYR
    • - TYR - Thr-, - TYR - Met -, en désignant par TYR l'ensemble des 2 amino-acides constitués par la tyrosine ou la tyrosine-O-sulfate;
    • - soit un tripeptide choisi parmi: - Glu - Ala - TYR-,Asp-TYR-Thr-,-Asp-TYR-Met-;
    • - soit un tétrapeptide choisi parmi: - Glu - Glu
    • - Ala - TYR -, - Gln - Asp - TYR - Thr -, - Arg - Asp - TYR - Met-;
    • - soit un pentapeptide choisi parmi: - Glu - Glu - Glu - Ala - TYR -, - Pyr - Gln - Asp - TYR - Thr-,
    • -Asp-Arg-Asp-TYR-Met-.
    • - B désigne la méthionine, la leucine ou la nor- leucine.
  • Les composés selon l'invention peuvent être préparés par les techniques habituelles de synthèse peptidique soit en phase solide selon Merri- field, soit en phase liquide.
  • A partir de l'acide aspartique a-amide, on introduit successivement les différents aminoacides présents dans la séquence. Les réactions de couplage sont effectuées avec un ester activé de l'acide aminé à introduire au sein du diméthylformamide et en présence de diisopropyléthylamine et d'hydroxy-1-benzotriazole.
  • Tous les aminoacides sont incorporés sous la forme du dérivé protégé sur l'amine en a, le groupe protecteur étant choisi parmi les groupes benzyloxycarbonyle et t-butyloxycarbonyle. Lorsque l'aminoacide utilisé présente dans sa chaîne latérale des fonctions susceptibles de réagir, celles-ci doivent être bloquées au préalable. Ainsi les fonctions acides en s de l'acide aspartique ou de l'acide glutamique doivent être bloquées sous forme d'ester en particulier l'ester benzylique ou l'ester tertiobutylique et le groupe guanidino de l'arginine peut être protégé par un groupe nitro.
  • Après chaque réaction de couplage, la déprotection de l'amine en a est effectuée soit par hydrogénolyse s'il s'agit d'un groupe benzyloxy carbonyle, soit par hydrolyse acide s'il s'agit d'un groupe butyloxycarbonyle.
  • Finalement, les peptides protégés dans leurs fonctions des chaînes latérales sont partiellement ou entièrement déprotégés pour conduire aux composés de formule (1).
  • Les composés de formule (I), où TYR représente la tyrosine-a-sulfate, sont obtenus à partir des composés où TYR représente la tyrosine par action de l'anhydride sulfurique en présence de pyridine.
  • Les exemples suivants non limitatifs permettront de mieux comprendre l'invention.
  • Dans ces exemples, on utilisera les abréviations suivantes:
  • Acides aminés et groupes protecteurs:
    Figure imgb0004
  • A l'exception de la glycine, tous ces acides aminés sont de confiquration L.
    Figure imgb0005
    Figure imgb0006
    On utilisera également les abréviations suivantes:
    Figure imgb0007
    • Exemple 1 H - Met - Gly - Trp - Met - Asp NH2 (1) R = H ; A = Met; B = Met a) -Z-Asp βO But) - NH2
  • On dissout 5 g d'acide N-benzyloxycarbonyl aspartique a ester de N-hydroxy succinimide β ester de tertiobutyle dans un mélange de 100 ml d'acétate d'éthyle et 100 ml de dichlorométhane. On fait passer un courant d'ammoniac gazeux au-dessus de la solution bien agitée durant 1 heure.
  • Par évaporation, on obtient le produit attendu. F: 88-92 °C; Rendement: 95%.
    • b) - Z - Met - Asp (β O But) - NH2
  • La solution de 3,5 g du composé obtenu en a) dans l'éthanol absolu est additionnée de 2 ml d'acide chlorhydrique et 0,35 g de palladium sur charbon à 10%. On hydrogène pendant 4 heures puis on filtre le catalyseur et évapore le solvant. Le résidu est lavé plusieurs fois avec de l'éther, puis il est ajouté à une solution de 2,7 g de Z - Met - ONp, 2,3 ml de DIEA et 0,9 g d'HOBt dans le diméthylformamide.
  • Après 24 heures, on évapore le solvant sous vide et reprend le résidu dans le dichlorométhane. On lave la solution avec de l'eau plusieurs fois avec une solution d'acide chlorhydrique à 5% et avec une solution saturée de bicarbonate de sodium. On évapore à siccités sous vide et obtient le produit attendu.
    • F:155-157 °C; Rendement: 80%.
  • Figure imgb0008
     = -3,9 (c=1, diméthylformamide).
    • c) - Z - Trp - Met - Asp (β O But) - NH2
  • 2,2 g du composé obtenu ci-dessus sont dissous dans un mélange de 150 ml de diméthylformamide, 30 ml d'eau et 15 ml de DIEA. On ajoute 0,4 g de palladium sur sulfate de baryum à 10% et hydrogène pendant une nuit.
  • On filtre le catalyseur, et concentre les solvants sous vide. On dissout le résidu dans le diméthylformamide (100 ml) et ajoute 1,8 g de Z - Trp - ONp, 1,6 g de DIEA et 0,75 g d'HOBt.
  • On laisse une nuit en contact puis on concentre à environ 50 ml et filtre sur 30 g d'alumine neutre. On poursuit l'élution avec 200 ml de diméthylformamide, évapore à siccité et triture le résidu avec de l'acétate d'éthyle.
  • On obtient une poudre blanche.
  • Figure imgb0009
    = -30 (c=1, diméthylformamide); Rendement: 82%.
    • d)-Z-Gly-Trp-Met-Asp (β O But)-NH2
  • A partir du composé obtenu ci-dessus, on opère comme indiqué dans le paragraphe c) en remplaçant Z - Trp - ONp par une quantité équivalente de Z- Gly- ONp.
  • On obtient de la même façon une poudre blanche. F: 187-189 °C; Rendement: 75%.
  • Figure imgb0010
     = -18 (c=1, diméthylformamide).
  • e) - Boc - Met - Gly - Trp - Met - Asp (β O But) -NH2
  • A partir du composé obtenu au paragraphe d), on opère comme en c) en remplaçant Z - Trp - ONp par une quantité équivalente de Boc- Met-ONp. On isole de la même façon le produit attendu.
    • F: 194 °C (dec); Rendement: 75%. f) - H - Met - Gly - Trp - Met - Asp - NH2
  • Le peptide protégé obtenu ci-dessus est dissous dans l'acide trifluoracétique à raison de 5 ml par g de produit et on ajoute 0,5 ml d'anisole et 0,5 ml de thioanisole. On laisse en contact pendant 2 heures puis on ajoute 200 ml d'éther. On essore le précipité qui est lavé plusieurs fois avec de l'éther.
  • On obtient le trifluoracétate sous forme de solide incolore.
    • Rendement: 85%. Exemple 2
  • Z - Tyr - Met - Gly - Trp - Met - Asp - NH2
  • (I) R =Z; A = -Tyr - Met; B = Met
  • On dissout 1,8 g du trifluoracétate obtenu à l'exemple 1 f) dans le diméthylformamide, puis on ajoute 1,12 g de Z - Tyr - ONp et 0,71 g de DIEA et laisse 12 heures en contact.
  • On ajoute de l'acétate d'éthyle et essore le précipité qu'on lave plusieurs fois avec de l'acétate d'éthyle puis avec de l'éther.
  • On chromatographie sur gel de silice et, en éluant avec le mélange acétate d'éthyle-pyridine- acide acétique-eau (60-20-6-10 vol/vol), on obtient le produit attendu avec un rendement de 80%.
    • Exemple 3
  • Z - Tyr (S03H) - Met - Gly - Trp - Met - Asp - NH2
    • (I) R = Z; A = - Tyr (S03H) - Met; B = Met
  • On dissout 0,1 g du peptide obtenu à l'exemple 2 dans 3 ml de diméthylformamide et 3 ml de pyridine. On ajoute 0,75 g du complexe anhydride sulfurique/pyridine et agite durant une nuit.
  • On évapore les solvants sous vide et amène le pH à 6,5-7 par addition de solution saturée de bicarbonate de sodium. On laisse 1 heure en contact puis on isole le précipité qui est purifié par chromatographie sur gel de silice de façon analogue à la purification du peptide de l'exemple 2.
  • On obtient le produit attendu avec un rendement de 55%. F: 260 °C (déc).
  • Spectre IR: une bande à 1060 cm-1 due au sulfate.
  • Rf = 0,3 (acétate d'éthyle 60 - pyridine 20 - acide acétique 6 - eau 10, vol/vol).
    • Exemple 4 Boc - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp - NH2 (I) R = Boc; A = Tyr; B = Met a) - Boc - Met - Asp (β O Bzl)-NH2
  • On dissout 1,91 g de trifluoracétate de Asp (β 0 Bzl) - NH2 dans 10 ml de diméthylformamide et on ajoute 2,07 g de Boc - Met - ONp et 0,76 g d'HOBt.
  • On refroidit la solution à 5 °C et ajoute 2,06 ml de DIEA. Après 8 heures, on concentre sous vide et reprend le résidu huileux dans l'acétate d'éthyle (200 ml). On lave la solution organique avec une solution saturée de bicarbonate de sodium (2 fois 50 ml), avec de l'eau (1 fois 50 ml), avec une solution saturée de chlorure de sodium (1 fois 50 ml), avec une solution d'acide citrique à 20% (1 fois 50 ml) puis à nouveau avec de l'eau (1 fois 50 ml) et avec une solution saturée de chlorure des- odium et concentre le solvant sous vide à température inférieure à 50 °C.
  • Le résidu, lavé plusieurs fois avec le mélange acétate d'éthyle-éther (1-9, vol/vol), puis avec de l'éther, cristallise.
    • F: 109-111 °C; Rendement: 85%.
  • Chromatographie en couche mince:
    • Rf = 0,4 (chloroforme 7 - hexane 3 vol/vol)
    • Rf = 0,3 (acétate d'éthyle 8 - hexane 2 vol/ vol).
    b) - Boc-Trp- Met-Asp (β O Bzl) - NH2
  • 2 g du composé obtenu ci-dessus sont dissous dans 5 ml d'acide trifluoracétique. On laisse 1/2 heure puis on ajoute 100 ml d'éther en agitant. On essore le précipité qui s'est formé, on le rince plusieurs fois avec de l'éther puis on le sèche sur potasse.
  • On dissout le produit dans 10 ml de diméthylformamide et on ajoute 1,7 g de Boc - Trp - ONp et 0,56 g d'HOBt. Après avoir refroidi à 5 °C, on ajoute 1,47 ml de DIEA.
  • On laisse 8 heures et traite comme indiqué en a). On obtient un solide, F: 178-180 °C; Rendement: 86%.
    • Chromatographie en couche mince:
  • Rf = 0,35 (chloroforme 7 - hexane 3 vol/vol)
  • Rf = 0,2 (acétate d'éthyle 8 - hexane 2, vol/vol).
    • c) - Boc - Gly - Trp - Met - Asp (β 0 Bzl) - NH2
  • On élimine le groupe Boc terminal du peptide obtenu au paragraphe b) par action de l'acide trifluoracétique. 1 g du trifluoracétate obtenu est mis en solution dans le diméthylformamide et on ajoute 0,48 g de Boc - Gly - ONp, 0,22 g de HOBt et 0,6 g de DIEA. Après 8 heures de réaction on concentre la solution et on traite comme décrit en a).
  • On obtient après évaporation du solvant un solide, F: 152-156 °C; Rendement: 86%.
    • Chromatographie en couche mince:
  • 1 seule tache de Rf = 0,55 (acétate d'éthyle - méthanol 9-1, vol/vol).
    • d) - Boc - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp (βO Bzl) -NH2
  • Le produit obtenu au paragraphe c) (0,71 g) est traité par 3,5 ml d'acide trifluoracétique pendant 30 minutes à température ambiante. Par addition d'éther, on précipite une poudre blanche qu'on essore, lavec avec de l'éther et sèche sous vide en présence de potasse.
  • Ce solide est dissous dans le diméthylformamide (10 ml) et on ajoute 0,4 g de Boc - Tyr - ONp et 0,18 ml de DI EA. Après 8 heures de réaction, on traite comme indiqué au paragraphe c). On chromatographie sur une colonne de gel de silice en éluant avec un mélange acétate d'éthyle- méthanol, 9-1 (vol/vol) pour obtenir un solide, F: 128-135 °C; Rendement: 72%.
  • Chromatographie en couche mince:
    • 1 seule tache de Rf = 0,4 (acétate d'éthyle-méthanol, 95-5, vol/vol).
    e) - Boc - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp - NH2
  • 0,2 g du produit obtenu ci-dessus sont dissous dans un mélange diméthylformamide-eau-DIEA (8-1-1, vol/vol) et on hydrogène en présence de palladium sur sulfate de baryum à 10% (0,050 g) pendant 12 heures. On filtre le catalyseur et évapore les solvants à siccité sous vide à température inférieure à 50 °C.
  • Le résidu est repris dans 20 ml d'acétate d'éthyle et 20 ml de solution d'ammoniaque à 5%. On agite et décante. La phase aqueuse est acidifiée par addition d'acide citrique solide et extraite 2 fois avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits organiques réunis sont lavés avec de l'eau, séchés et concentrés à siccité sous vide. On obtient une poudre blanche, F: 210°C (déc); Rendement: 56%.
    • Chromatographie en couche mince:
  • Rf = 0,4 (acétate d'éthyle 9 - méthanol 1 - acide acétique 0,5, vol/vol).
    • Exemple 5
  • Z - Glu - Ala - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp - NH2 R = Z; A = Glu - Ala - Tyr; B = Met
    • A) - Z - Glu (γ O But) - Ala - Tyr - Gly - OH
    • a) - Boc - Gly - Cam
  • Ce produit est préparé selon la méthode de GI-SIN par action de l'alpha chloracétamide sur la Boc-glycine au sein du diméthylformamide à 40-50 °C durant 24 heures.
    • Rendement: 80% environ; F: 64-67 °C (éther). b) - Boc - Tyr - Gly - Cam
  • On dissout 2,4 g de Boc-Gly-Cam dans 10 ml d'acide trifluoro-acétique et laisse 30 minutes. On ajoute 150 ml d'éther, essore le précipité, lave avec de l'éther plusieurs fois et sèche.
  • On dissout ce produit dans 20 ml de diméthylformamide et ajoute 3,22 g de Boc - Tyr - ONp. On refroidit à 0 °C et ajoute 1,3 ml de DIEA. On laisse 12 heures à température ambiante puis on évapore à siccité sous vide en maintenant la température inférieure à 50 °C. On reprend le résidu dans 200 ml d'acétate d'éthyle, lave avec une solution de bicarbonate de sodium, puis avec de l'eau, avec une solution à 10% d'acide citrique et à nouveau avec de l'eau.
  • On sèche sur sulfate de sodium et évapore à siccité sous vide. On obtient un solide.
  • F:113-116 °C
    Figure imgb0011
     = -9,2 (C=1, diméthyl-formamide). Rendement: 85%.
    • c)-Boc-Ala-Tyr-Gly-Cam
  • On laisse 1/2 heure à température ambiante la solution de 3,55 g du dipeptide obtenu ci-dessus dans 15 ml d'acide trifluoroacétique. On ajoute 200 ml d'éther et essore le précipité qu'on lave plusieurs fois avec de l'éther et sèche.
  • On dissout le solide dans 15 ml de diméthylformamide et ajoute 2,63 g de Boc - Ala - ONp et 1,7 ml de DIEA. Après 12 heures à température ambiante, on traite le mélange réactionnel comme indiqué au paragraphe b).
    • On isole le produit attendu;
  • F:129-132 °C
    Figure imgb0012
    = -21,1 (C=1, diméthyl-formamide). Rendement: 80%.
    • d)-Z-Glu (γ O But) - Ala - Tyr - Gly - Cam
  • On traite 0,932 g du tripeptide préparé ci-dessus par 5 ml d'acide trifluoroacétique pendant 30 minutes à température ambiante et isole le tripeptide déprotégé à l'azote par précipitation à l'éther comme indiqué précédemment. On dissout le produit obtenu dans 10 ml de diméthylformamide et ajoute 1,08 g de Z - Glu (y 0 But) - ONp et 0,38 ml de DIEA. On laisse 12 heures et traite comme indiqué précédemment.
    • F: 135-137 °C (acétate d'éthyle-éther, 1-1 vol/vol)
    • Figure imgb0013
       = -12 (C=1, diméthylformamide). Rendement: 85%.
    e) - Z - Glu (y 0 But) - Ala - Tyr - Gly - OH
  • A la solution de 1,37 g du peptide préparé ci-dessus dans 25 ml de diméthylformamide, on ajoute sous agitation la solution de 0,318 g de carbonate de sodium dans 25 ml d'eau puis laisse 1 heure 30 sous agitation.
  • On neutralise à pH voisin de 7 par addition d'une solution d'acide citrique à 20% et concentre à siccité sous vide. On dissout le résidu dans 20 ml d'une solution de carbonate de sodium à 20% et on lave la phase aqueuse avec 2 fois 15 ml d'acétate d'éthyle. On acidifie la phase aqueuse à froid par addition d'acide citrique solide. On essore le précipité, lave avec de l'eau et sèche.
  • F:184-185 °C
    Figure imgb0014
    = -12 (C=1, diméthyl-formamide). Rendement: 75%.
    • B) - FMOC-Trp-Met-Asp (β O But) - NH2 a) - FMOC - Met - Asp (β O But) NH2
  • On dissout à froid dans 50 ml de diméthylformamide 5 g de HCI, Asp (p 0 But) - NH2, 7,42 g de FMOC méthionine, 8,84 g de BOP.
  • On ajoute 7,8 ml de DIEA et agite pendant 12 heures à température ambiante. On évapore à siccité sous vide à température inférieure à 50 °C. On reprend le résidu dans un mélange acétate d'éthyle-éther et laisse cristalliser.
  • F: 184-185 °C
    Figure imgb0015
    = -9,1 (C=1, diméthyl-formamide). Rendement: 87%.
    • b) - FMOC- Trp- Met-Asp (β 0 But) - NH2
  • On dissout 5,41 g du dipeptide protégé obtenu ci-dessus dans 150 ml de diméthylformamide contenant 15 ml de diéthylamine et laisse 2 heures sous agitation à température ambiante.
  • On évapore à siccité sous vide et reprend le résidu dans 20 ml de diméthylformamide. On ajoute cette solution à une solution contenant 3,82 g de FMOC - Trp, 3,98 g de BOP et 3,4 ml de DIEA dans 20 ml de diméthylformamide. On agite 12 heures à température ambiante et traite comme indiqué au paragraphe précédent en cristallisant dans l'acétate d'éthyle.
  • F: 175 °C (décomposition)
    Figure imgb0016
    = -23 (C=1, diméthylformamide), Rendement: 75%.
    • C) -Z-Glu - Ala - Tyr - Gly - Trp - Met-Asp-NH2 a) - Z - Glu (a0 But) - Ala - Tyr - Gly - Trp - Met-Asp (β O But)-NH2
  • On dissout 5 g du tripeptide protégé de l'exemple 5 B - b) dans 100 ml de diméthylformamide contenant 10 ml de diéthylamine et laisse 2 heures sous agitation à température ambiante. On évapore à siccité et reprend le résidu dans 20 ml de diméthylformamide. On ajoute 1,26 g du tétrapeptide protégé obtenu à l'exemple 5 A - e), 0,84 g de BOP et 0,69 ml de DIEA, et agite pendant 12 heures à température ambiante. On évapore à siccité sous vide et triture le résidu dans l'acétate d'éthyle. On filtre et lave avec une solution saturée de carbonate de sodium, avec de l'eau, avec une solution d'acide citrique à 20%, avec de l'eau et finalement avec de l'acétate d'éthyle. On sèche sous vide.
  • F: 210 °C (décomposition)
    Figure imgb0017
    = -23 (C=1, diméthylformamide). Rendement: 72%.
    • b) - Déprotection
  • On dissout 1,1 g de l'heptapeptide protégé obtenu ci-dessus dans 10 ml d'acide trifluoroacétique contenant 1 ml de thioanisole. On laisse 1 heure à température ambiante puis on ajoute 200 ml d'éther. On essore le solide blanc qui s'est séparé et on lave plusieurs fois avec de l'éther puis sèche sous vide.
  • F: 210 °C (décomposition)
    Figure imgb0018
    = - 24 (C=1, diméthylformamide). Rendement: 97%.
    • Essais pharmacologiques
  • Les composés selon l'invention ont été étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques. Plus particulièrement, ces composés ont été étudiés in vivo en ce qui concerne leur effet sécrétoire gastrique chez le rat.
  • Le modèle choisi pour la mesure de l'effet sécrétoire est celui de l'estomac de rat anesthésié re- perfusé. Le protocole suivi est une modification de celui d'écrit préalablement par Ghos et Schild.
  • Un rat mâle de souche Wistar de 300 g, à jeun de 18 heures, est anesthésié à l'uréthane (solution à 10%, 1,5 ml/100 g i.p.). On pratique ensuite une trachéotomie et un cathétérisme de la veine du pénis qui permettra l'administration i.v. des peptides. On place ensuite une canule dans l'oesophage jusqu'au cardia et une seconde dans le duodénum (par une duodénotomie effectuée à 3 cm environ du pylore) jusque dans la zone antrale gastrique.
  • Un soluté propionique-succinique (pH 5,5) qui donne une variaton linéaire du pH en fonction de la concentration en ions H+ est utilisé pour perfuser l'estomac en circuit ouvert ou fermé avec un débit de 3 ml/min. La température corporelle, ainsi que celle du soluté, est contrôlée et maintenue à 30 °C. La sécrétion acide de l'estomac va entraîner une variation de pH détectée par l'électrode de verre et enregistrée en fonction du temps. Après stabilisation de la sécrétion basale, on injecte la gastrine par voie intraveineuse soit en perfusion, soit en injection unique. La réponse est enregistrée en fonction du temps et la quantité d'acide sécrété est mesurée sur l'enregistrement par différence avec la sécrétion basale.
  • La même expérience est réalisée soit en injectant le peptide à étudier i.v. sur un plateau de sécrétion acide stimulée par la gastrine, soit en associant le peptide avec le stimulant dans des rapports de concentration variables. Enfin, le peptide est administré seul à différentes doses pour examiner son effet agoniste.
  • Les expériences effectuées avec les produits de l'exemple 3: Z - Tyr (0 S03H) - Met - Gly - Trp - Met - Asp - NH2 et de l'exemple 4: Boc-Tyr-Gly - Trp - Met - Asp - N H2 ont donné les résultats suivants.
    Figure imgb0019
    Figure imgb0020
  • D'après les résultats, on constate que:
    • - les composés selon l'invention présentent un effet agoniste extrêmement faible vis-à-vis de la gastrine et ce malgré la valeur élevée des doses utilisés;
    • - les composés selon l'invention présentent un effet inhibiteur important sur la sécrétion gastrique, de l'ordre de 50% dans les conditions expérimentales utilisées.
  • Par suite, les composés selon l'invention pourront être utilisés en thérapeutique humaine dans tous les cas où il est utile de diminuer la sécrétion gastrique et en particulier pour le traitement des ulcères gastro-duodénaux.
  • Les composés de la présente invention peuvent être utilisés de préférence par voie injectable: intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée. Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique).
  • La posologie peut varier suivant l'intensité de l'effet thérapeutique recherchée, la gravité de l'affection à traiter et la voie d'administration utilisée. Elle doit donc être déterminée pour chaque patient en fonction de ces divers critères. Le plus souvent elle est comprise entre 1 et 100 mg de principe actif par kg de poids corporel.

Claims (8)

1. Peptides de formule générale
Figure imgb0021
 dans laquelle:
- Asp NH2 représente l'amide en a de l'acide aspartique de formule:
Figure imgb0022
- R représente l'hydrogène, un groupe protecteur de la fonction amine terminale tel que t.butyloxy carbonyl (BOC), benzyloxy carbonyl (Z), al- canoyle inférieur
- A désigne
- soit la tyrosine, la tyrosine-0-sulfate, la thréonine ou la méthionine;
- soit un dipeptide choisi parmi: - Ala - TYR -,
- TYR - Thr -, - TYR - Met -, en désignant par TYR l'ensemble des 2 amino-acides constitué par la tyrosine ou la tyrosine-0-sulfate;
- soit un tripeptide choisi parmi: - Glu - Ala - TYR - , - Asp - TYR - Thr - , - Asp - TYR - Met-;
- soit un tétrapeptide choisi parmi: - Glu - Glu
- Ala - TYR -, - Gln - Asp - TYR - Thr -, - Arg - Asp - TYR - Met -;
- soit un pentapeptide choisi parmi: - Glu - Glu - Glu - Ala - TYR -, - Pyr - Gln - Asp - TYR - Thr-,-Asp-Arg-Asp-TYR-Met-.
- B désigne la méthionine, la leucine ou la nor- leucine.
2. Peptide selon la revendication 1 de formule H - Met - Gly - Trp - Met - Asp NH2
3. Peptide selon la revendication 1 de formule R - Tyr - Met - Gly - Trp - Met - Asp - NH2,
4. Peptide selon la revendication 1 de formule R- Tyr(S03H) - Met - Gly - Trp - Met - Asp-N H2.
5. Peptide selon la revendication 1 de formule R - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp - NH2.
6. Peptide selon la revendication 1 de formule: - Glu - Ala - Tyr - Gly - Trp - Met - Asp - NH2.
7. Procédé de préparation des peptides selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que:
- on utilise comme produit de départ l'acide aspartique a-amide
- on réalise successivement sur ledit acide les couplages des divers acides aminés en utilisant un ester activé desdits acides, la réaction étant réalisée au sein du diméthylformamide et en présence d'un composé choisi parmi la diisopropyléthylamine et l'hydroxy-1 benzotriazole, lesdits acides aminés ayant été au préalable convernablement protégés sur leur fonction amine en a.
8. Médicaments utiles notamment comme inhibiteurs de la sécrétion gastrique, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un peptide selon les revendications 1 à 6.
EP84400787A 1983-04-20 1984-04-19 Nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé pour leur préparation et médicaments les contenant Expired EP0124420B1 (fr)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT84400787T ATE30919T1 (de) 1983-04-20 1984-04-19 Magensekretion hemmende peptidderivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende arzneimittel.

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8306492 1983-04-20
FR8306492A FR2544715B1 (fr) 1983-04-20 1983-04-20 Nouveaux derives peptidiques inhibiteurs de la secretion gastrique et procede pour leur preparation

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EP0124420A2 EP0124420A2 (fr) 1984-11-07
EP0124420A3 EP0124420A3 (en) 1985-11-27
EP0124420B1 true EP0124420B1 (fr) 1987-11-19

Family

ID=9288053

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP84400787A Expired EP0124420B1 (fr) 1983-04-20 1984-04-19 Nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé pour leur préparation et médicaments les contenant

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4636490A (fr)
EP (1) EP0124420B1 (fr)
JP (1) JPS6034995A (fr)
AT (1) ATE30919T1 (fr)
CA (1) CA1249100A (fr)
DE (1) DE3467581D1 (fr)
FR (1) FR2544715B1 (fr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2544715B1 (fr) * 1983-04-20 1985-12-13 Sanofi Sa Nouveaux derives peptidiques inhibiteurs de la secretion gastrique et procede pour leur preparation
IL84478A0 (en) * 1986-11-18 1988-04-29 Pennwalt Corp Peptides with sulfate ester groups and their preparation
US4888385A (en) * 1987-04-30 1989-12-19 Millipore Corporation BOP reagent for solid phase peptide synthesis
US4943561A (en) * 1988-11-28 1990-07-24 Merck & Co., Inc. Gastrin releasing peptide antagonist
US5189016A (en) * 1990-05-18 1993-02-23 Clintec Nutrition Co. Nutrient compositions containing peptides and method for administering the same
US5122515A (en) * 1990-06-19 1992-06-16 Smith Ross C Nutrient composition containing dipeptides and method for administering the same
RU2449805C1 (ru) * 2011-01-27 2012-05-10 Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" Пептидная фармацевтическая композиция, средство на ее основе для лечения гастродуоденальных заболеваний, вызываемых helicobacter pylori, и способ его использования
CN104276966A (zh) * 2014-11-04 2015-01-14 崇州合瑞科技有限公司 一种制备Boc-L-天冬氨酸的方法
CN113461574B (zh) * 2021-07-05 2023-04-11 成都郑源生化科技有限公司 Fmoc-AA-NH2的制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1042487A (en) * 1964-06-25 1966-09-14 Ici Ltd Polypeptide derivatives
US4351829A (en) * 1980-09-26 1982-09-28 Farmitalia Carlo Erba Spa Use of polypeptides as analgesic drugs
FR2544715B1 (fr) * 1983-04-20 1985-12-13 Sanofi Sa Nouveaux derives peptidiques inhibiteurs de la secretion gastrique et procede pour leur preparation

Also Published As

Publication number Publication date
FR2544715B1 (fr) 1985-12-13
CA1249100A (fr) 1989-01-17
ATE30919T1 (de) 1987-12-15
FR2544715A1 (fr) 1984-10-26
EP0124420A2 (fr) 1984-11-07
EP0124420A3 (en) 1985-11-27
DE3467581D1 (en) 1987-12-23
JPS6034995A (ja) 1985-02-22
US4636490A (en) 1987-01-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0190058A1 (fr) Nouveaux dérivés peptidiques à structure polycyclique azotée, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0517589A2 (fr) Dérivés de tachykinines, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
EP0192554A1 (fr) Dérivés peptidiques inhibiteurs de la rénine et des protéases acides
FR2460291A1 (fr) Nouveaux tripeptides agissant sur le systeme nerveux central et leur procede de preparation
EP0104964A1 (fr) Dérivés peptidiques inhibiteurs de protéases acides
EP0124420B1 (fr) Nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé pour leur préparation et médicaments les contenant
EP0187095B1 (fr) Esters de tri- et tétrapeptides inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques les contenant
EP0211744B1 (fr) Dérivés aminoalcools peptidiques contenant un atome de carbone tetrasubstitué inhibiteurs de la rénine et des protéases acides - Procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques
EP0184243B1 (fr) Procédé pour la synthèse de peptides
HU181843B (en) Process for producing acth derivatives of psichopharmacological activity
EP0188947B1 (fr) Peptides réduits, inhibiteurs de la sécrétion gastrique, procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2460292A1 (fr) Nouveaux tripeptidamides actifs sur le systeme nerveux central et procede de preparation de ceux-ci
EP0485458B1 (fr) Reactifs thioacylates et intermediaires, thiopeptides, et methodes de preparation et d'application de ceux-ci
FR2522655A1 (fr) Analogues de la somatostatine possedant une liaison du type hydrazide et medicaments en contenant
EP0354108B1 (fr) Amino-acides et peptides présentant un résidu tyrosine modifiée, leur préparation et leur application comme médicaments
FR2595705A1 (fr) Derives de gonadoliberine contenant un acide aminocarboxylique aromatique en position 6, compositions pharmaceutiques et veterinaires les contenant et procede pour les preparer
FR2535715A1 (fr) Peptides biologiquement actifs, procede pour leur preparation et leur emploi comme medicaments
CH655727A5 (fr) Derives n-(vinblastinoyl-23) d'acides amines et composition pharmaceutique les contenant.
GB2109796A (en) Anorexigenic tripeptides, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
EP0165151A1 (fr) Dérivés peptidiques inhibiteurs de la rénine, leur procédé de préparation et leur application en thérapeutique
FR2600067A1 (fr) Pseudopeptides inhibiteurs de la secretion gastrique
BE885283A (fr) Nouveaux peptides biologiquement actifs et leur emploi comme medicaments
EP0005248A2 (fr) Dérivés d'hydrazides de tétrapeptides et procédé pour leur préparation
FR2523125A1 (fr) Analogues de la somatostatine a activite biologique modifiee et medicaments en contenant
FR2522656A1 (fr) Analogues de la somatostatine substitues par la taurine, et medicaments, utiles notamment pour le traitement du diabete, en contenant

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

AK Designated contracting states

Designated state(s): AT BE CH DE FR GB IT LI LU NL SE

17P Request for examination filed

Effective date: 19850419

PUAL Search report despatched

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009013

AK Designated contracting states

Designated state(s): AT BE CH DE FR GB IT LI LU NL SE

RAP1 Party data changed (applicant data changed or rights of an application transferred)

Owner name: ETABLISSEMENT PUBLIC DIT: CENTRE NATIONAL DE LA

Owner name: SANOFI, SOCIETE ANONYME

17Q First examination report despatched

Effective date: 19870219

GRAA (expected) grant

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009210

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: B1

Designated state(s): AT BE CH DE FR GB IT LI LU NL SE

REF Corresponds to:

Ref document number: 30919

Country of ref document: AT

Date of ref document: 19871215

Kind code of ref document: T

ITF It: translation for a ep patent filed

Owner name: JACOBACCI & PERANI S.P.A.

REF Corresponds to:

Ref document number: 3467581

Country of ref document: DE

Date of ref document: 19871223

GBT Gb: translation of ep patent filed (gb section 77(6)(a)/1977)
PLBE No opposition filed within time limit

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009261

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: NO OPPOSITION FILED WITHIN TIME LIMIT

26N No opposition filed
PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: AT

Payment date: 19920320

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: CH

Payment date: 19920409

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: LU

Payment date: 19920413

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: GB

Payment date: 19920414

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: DE

Payment date: 19920421

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: BE

Payment date: 19920428

Year of fee payment: 9

PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: SE

Payment date: 19920429

Year of fee payment: 9

Ref country code: FR

Payment date: 19920429

Year of fee payment: 9

ITTA It: last paid annual fee
PGFP Annual fee paid to national office [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: NL

Payment date: 19920430

Year of fee payment: 9

EPTA Lu: last paid annual fee
PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: LU

Free format text: LAPSE BECAUSE OF NON-PAYMENT OF DUE FEES

Effective date: 19930419

Ref country code: GB

Effective date: 19930419

Ref country code: AT

Effective date: 19930419

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: SE

Effective date: 19930420

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: LI

Effective date: 19930430

Ref country code: CH

Effective date: 19930430

Ref country code: BE

Effective date: 19930430

BERE Be: lapsed

Owner name: CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE CNRS

Effective date: 19930430

Owner name: S.A. SANOFI

Effective date: 19930430

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: NL

Effective date: 19931101

GBPC Gb: european patent ceased through non-payment of renewal fee

Effective date: 19930419

NLV4 Nl: lapsed or anulled due to non-payment of the annual fee
PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: FR

Effective date: 19931229

REG Reference to a national code

Ref country code: CH

Ref legal event code: PL

PG25 Lapsed in a contracting state [announced via postgrant information from national office to epo]

Ref country code: DE

Effective date: 19940101

REG Reference to a national code

Ref country code: FR

Ref legal event code: ST

EUG Se: european patent has lapsed

Ref document number: 84400787.2

Effective date: 19931110