"Nouveaux peptides biologiquement actifs et leur emploi comme médicaments" L'invention a pour objet de nouveaux peptides biologiquement actifs, leurs sels pharmaceutiquement acceptables , leur emploi comme agents thérapeutiques.
Elle se rapporte plus particulièrement à des peptides ayant la formule générale suivante :
<EMI ID=1.1>
dans laquelle :
<EMI ID=2.1>
nal choisi dans le groupe composé des groupes de protection de type acyle, des groupes de protection de type
<EMI ID=3.1>
alkyle, des groupes de protection de type uréthane aliphatique, ou, en variante, un résidu d'un L-amino acide naturel ou un dipeptide provenant de deux L-amino acides naturels . dans lesquels le groupe amino libre peut être remplacé par l'un quelconque des groupes de protection de N-terminal cités ci-dessus ;
Y est un atome d'hydrogène, ou un groupe de protection du
groupe hydroxyle phénolique de la tyrosine choisi dans le groupe comprenant les corps suivants : tétrahydropyranyle, méthyle, tert-butyle, trityle, benzyle, 2,4-dichlorobenzyle, benzyloxycarbonyle, 2-bromobenzyloxycarbonyle, tert-butyl-oxycarbonyle, ou un acyle inférieur, avantageu-
<EMI ID=4.1>
benzoyle, propionyle ;
A est un résidu de D-amino acide avec une chaîne latérale
constituée par un alkyle inférieur ou un groupe thioalkyle inférieur ;
B est un résidu de L-amino acide neutre, de préférence choisi
dans le groupe composé des corps suivants: acide oc-arnino-
<EMI ID=5.1>
nine et la L-N-méthyl-phënylalanine;
C peut être présent ou absent et, quand il est présent, il
est constitué par un résidu d'un amino acide ou un résidu d'un di- ou tripeptide, <EMI ID=6.1>
- par exemple d'un élimine acide, avantageusement choisi dans le groupe composé des corps suivants : Pro, 3-hydroxyproline, 4-hydroxyproline, acide pipécolique, acide 2-azétidinecarhoxylique, acide 4-thiazolidine carboxylique, <EMI ID=7.1>
- par exemple d'un N-méthyl amino acide, avantageusement choisi dans le groupe composé des corps suivants : Sar,
<EMI ID=8.1>
tous ces corps étant de configuration L ou D, à condition qu'il ne soit pas basique ou acide ,
- par exemple d'un dipeptide qui peut être avantageusement choisi parmi les dipeptides qui résultent de la condensa-
<EMI ID=9.1>
qui ont été définis ci-dessus, à condition que les deux amino acides ne soient pas les mêmes ;
- par exemple d'un tripeptide qui peut être avantageusement choisi parmi les tripeptides J-L-M dans lesquels J est Tyr, Trp, Phe, Phg, hexahydro-Phe, Gly, Val et Phe substitué en para, le substituant étant choisi dans le groupe composé du chlore, du brome, du fluor, des groupements amino et nitro,
L est Val, Leu, Ile, Gly, Ala, Nva, Sar, MePhe, MeAla, et
<EMI ID=10.1>
ci-dessus, M est Ser, Hse, Thr, Abu, Gly à condition que
J soit différent de L et que L soit différent de M.
Les hydroxy amino acides ne sont pas protégés
ou sont protégés par un groupe de protection de la fonction hydroxy. Comme groupes protecteurs convenables on peut citer:
méthyle, tert-butyle, trityle, benzyle, 2,4-dichlorobenzyle,
<EMI ID=11.1>
R est :
- un alkyle C(l-10) linéaire ou ramifié, substitué ou non substitué, avantageusement un des suivants : méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, sec-butyle, iso-butyle, 2,2,2-trifluoroéthyle,
- un cycloalkyle C(1-10), avantageusement choisi entre cyclohexyle et adamantyle,
- un aralkyle C(6-8), avantageusement choisi entre le phényle, le benzyle, le phényléthyle, et R' est
- un atome d'hydrogène,
- un alkyle C(l-lO) linéaire ou ramifié, un cycloalkyle ou <EMI ID=12.1> <EMI ID=13.1>
- un groupe alkényle ayant de 2 à 8 atomes de carbone, de préférence allyle,
- un groupe de type acyle linéaire, ramifié ou cyclique aliphatique ayant de 1 à 16 atomes de carbone, avantageusement choisi parmi les suivants :
formyle, acétyle, propionyle, butyryle, lauryle, 1-adamantancarbonyle, non substitués ou substitués par hydroxy, amino, un alcoxy C(l-4) ou un atome d'halogène, un bon exemple de
<EMI ID=14.1>
trifluoroacétyle,
- un groupe de type acyle aromatique comme un des suivants:
benzoyle, phénylacétyle et un résidu de cinnamyle, non substitué ou substitué par un des corps suivants :
hydroxy, amino, un atome d'halogène ou alcoxy C(l-4),
- un groupe de type uréthane aliphatique linéaire, ramifié ou cyclique C(3-ll), avantageusement tel que défini ci-
-dessous pour X,
- un groupe de type uréthane aromatique avantageusement tel que défini ci-dessous pour X. Quand X est un groupe de protection de type acyle, il est de préférence l'un des suivants : formyle, acétyle, trifluoroacétyle, propionyle, benzoyle; quand X est un groupe de protection du type uréthane aromatique, il est avantageusement un des suivants : benzyloxycarbonyle, 2,4-dichlorobenzyloxycarbonyle, 2-bromobenzyloxycarbonyle, 4-nitro- <EMI ID=15.1> <EMI ID=16.1>
est avantageusement l'un des suivants : text-butyloxycarbonyle,
1-méthylcyclobutyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle et isobornyloxycarbonyle; quand X est un groupe de protection du'type alkyle, il est avantageusement un des suivants :
trityle, benzyle, méthyle, éthyle, isopropyle; quand X est un reste de L-amino acide naturel, il est de préférence choisi dans le groupe comprenant les suivants : Gly, Ala, Leu, Met, Lys, Arg, His, Phe, Trp, Ser, Thr; quand X est un dipeptide provenant de deux L-amino acides naturels
il provient de préférence de deux L-amino acides choisis
<EMI ID=17.1>
suivants : Arg-Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Lys-lys, Leu-His, His-Leu, Leu-Leu, Leu-Met, Met-Leu, Leu-Trp, Trp-Leu, Thr-Ala, Ala-Thr, Ser-Ala, Ala-Ser.
A est de préférence un reste de D-amino acide
<EMI ID=18.1>
leu, pro, ser, thr, met, met-sulfoxyde, S -éthyle-homocystéine.
Les lettres minuscules indiquent des restes de D-amino acides.
Les sels des composés répondant à la formule
<EMI ID=19.1>
fluorhydrique, l'acide acétique, l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, ainsi que d'autres sels pharmaceutiquement acceptables des composés de cette même formule générale (I) doivent être considérés comme entrant tous dans le cadre de l'invention.
La synthèse des peptides de l'invention peut être accomplie soit par les méthodes classiques en solu-
<EMI ID=20.1>
_/ On donnera ci-dessous des exemples des deux méthodes. La synthèse selon la méthode classique en solution consiste essen-
<EMI ID=21.1>
des amino acides protégés ou peptides. La condensation est effectuée de façon que les peptides obtenus possèdent la séquence désirée des restes 4-7 amino acides. Dans les amino acides et peptides qui sont condensés selon la méthode connue en soi dans la chimie des polypeptides, les groupes amino et carboxyle qui ne sont pas impliqués dans la formation de la liaison peptidique sont bloqués par un groupe de protection convenable.
Les fonctions hydroxyle des amino acides hydroxylës peuvent être protégées par des groupes de protection appropriés (pendant toute la durée de la synthèse ou pendant certaines opérations seulement) ou elles peuvent être laissées sans protection. Les groupes protégés sont susceptibles d'être éliminés par acidolyse, saponification ou hydrogénolyse.
Ppur la protection des groupes amino on peut utiliser, par exemple, les groupes de protection suivante : benzyloxycarbonyle (Z), t-butyloxycarbonyle (Boc), trityle, formyle, trifluoroacétyle, o-nitrophénylsulphényle.
Pour la protection des groupes carboxyle , on peut utiliser, par exemple, les groupes de protection suivants : méthyle, éthyle, tert-butyle, benzyle,
<EMI ID=22.1>
Pour la protection des groupes hydroxy on peut utiliser, par exemple, les groupes de protection suivants :
acétyle, tert-butyloxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, 2-bromo-benzyloxycarbonyle, tétra-hydropyranyle, tert-butyle, trityle, benzyle, 2,4-dichlorobenzyle, méthyle.
La condensation entre un groupe amino d'une molécule et un groupe carboxyle d'une autre molécule pour donner une liaison peptidique peut se faire à travers un dérivé acyle activé comme un anhydride mixte, un azide, un, ester activé, etc., ou par condensation directe entre un groupe amino libre et un groupe carboxyle libre, en présence d'un agent de condensation comme la dicyclo-hexyl-carbodimide,
<EMI ID=23.1>
comme les suivants : N-hydroxysuccinimide, 1-hydroxybenzotriazole.
La condensation peut s'effectuer dans un solvant tel que l'un des suivants : diméthylformamide, pyridine, acëtonitrile, tétrahydrofuranne, etc.
La température de réaction peut s'étendre entre
-30[deg.]C et la température ambiante.
La durée de la réaction va généralement de
1 heure à 120 heures.
Le schéma de la synthèse, les groupes de protection, les agents de condensation, doivent être tous choisis de manière à éviter le risque de la racémisation.
Les réactions de dé-protection sont exécutées conformément à des méthodes connues en soi dans la chimie des polypeptides.
Les peptides dans lesquels W est OR sont préparés, par exemple, à partir d'amino acide à C-terminal estérifié par un alcool approprié. Les peptides dans lesquels W=OH peuvent être préparés, par exemple, au moyen d'une hydrolyse
<EMI ID=24.1>
Les peptides dans lesquels W=NH2, NHR et NR2 peuvent être préparés au moyen d'une ammonolyse des esters correspondants.
Dans la méthode en phase solide on utilise un support polymère. Le polymère est de préférence un copolymère de styrène avec 1 à 2 % en poids de divinylbenzêne comme agent de réticulation qui fait que le polymère de polystyrène devient complètement insoluble dans la plupart des solvants organiques.
<EMI ID=25.1>
C-terminal du peptide, par fixation de l'amino acide nécessaire à une résine chlorométhylée, une résine hydroxyméthyle, une résine benzhydrylamine.
Les groupes de protection du groupe amino et de la chaîne latérale sont ceux décrits à propos de la synthèse classique en solution.
Pendant la préparation des composés de l'inven-
<EMI ID=26.1>
résine chlorométhylée à l'aide, par exemple, d'un catalyseur
il de bicarbonate de césium ou à un groupe hydroxymêthyle ou une résine benzhydrylamine à l'aide d'un agent de condensation comme la dicyclo-hexylcarbodiimide.
Après le couplage initial, le groupe protégeant le groupe amino est éliminé par un choix de réactifs comprenant des solutions d'acide trifluoroacétique ou d'acide chlorhydrique dans des solvants organiques à la température ambiante. Après élimination de ce groupe protégeant le groupe amino, les amino acides protégés restants sont couplés opération par opérations dans l'ordre désiré jusqu'à obtention du peptide voulu.
Chaque amino acide protégé est, en général, mis à réagir dans un excès au coefficient 3 d'un activateur approprié à groupe carboxyle comme le dicyclo-hexylcarbodiimide en solution, par exemple dans des mélanges chlorure de méthylène- <EMI ID=27.1>
Quand la séquence désirée de l'amino acide a été
<EMI ID=28.1>
de support par un traitement à l'aide d'un réactif comme l'acide fluorhydrique, qui non seulement sépare les peptides de la résine mais, aussi, sépare la plupart des groupes de protection restants des chaînes latérales. Quand on utilise une résine chlorométhylée ou hydroxyméthylée, le traitement
à l'acide fluorhydrique se traduit par la formation du peptide acide libre (W = OH). Quand on utilise une résine benzhydrylamine, le traitement à l'acide fluorhydrique conduit directement au peptide amide libre (W=NH2). En variante, quand on se sert de la résine chlorométhylée ou hydroxyméthylée, le peptide à chaîne latérale protégée peut être détaché par le traitement de la résine supportant le peptide à l'aide d'ammoniac ou d'un alkyle ou d'une dialkylamine donnant l'amide désiré à chaîne latérale protégée, une alkylamide ou une dialkylamide (W = NH2, NHR, NR2). La protection de la chaîne latérale peut être éliminée par l'une quelconque des méthodes connues dans ce domaine.
Pour préparer les esters selon l'invention (W=OR), on se sert des résines utilisées pour préparer l'acide (W=OH) et on sépare le peptide à chaîne latérale protégée à l'aide d'une base et de l'alcool approprié. La protection de la
_ chaîne latérale est éliminée ensuite de la manière habituelle.
En variante, les peptides acides et amides peuvent être obtenus à partir des esters par saponification ou ammonolyse.
Les dérives hydrazido ou hydrazido substitués, conformes à l'invention, sont préparés par condensation du peptide à N-protégé ou d'un amino acide avec une hydrazine convenablement substituée, comme par exemple : benzylcarbazate, t-butylcarbazate, adamantylscarbazate, phénylhydrazine ou adamantylhydrazine, ou par réaction du peptide à N-protégé ou de l'hydrazide de l'amino acide avec un agent convenable d'alkylation comme un chlorure d'alkyle ou avec un agent
<EMI ID=29.1>
le t-butylchloroformate, le fluoroformate d'adamantyle.
Les symboles utilisés ici sont ceux qui sont communément employés dans la chimie des peptides. Dans les exemples qui vont suivre, les résidus de D-amino acide sont désignés par des lettres minuscules, par exemple: ala =D-Ala.
Les valeurs de Rf ont été déterminées sur des
<EMI ID=30.1>
une épaisseur de couche de 0,25 mm, la longueur de la plaque étant de 20 cm, à l'aide des milieux de développement suivants :
Milieu A : benzène-acétate d'éthyle-acide acétique-eau
(10:10:2:1) (phase supérieure)
Milieu B : benzène-acétate d'éthyle-acide acétique-eau
(100:100:40:15) (phase supérieure)
Milieu C : alcool n-butylique-acide acétique-eau
(4:1:1)
Milieu D : chloroforme-alcool méthylique - hydroxyde
d'ammonium à 32% (65:45:20)
Milieu E : chloroforme-alcool méthylique (8:2).
Les analyses en chromatographie sur couche mince ont été effectuées selon les conditions normalisées de la déposante. Des valeurs de Rf peuvent changer par conséquent, en particulier à des températures différentes. Les points de fusion ont été déterminés par la méthode à capillaire ouvert et ne sont pas corrigés. La plupart des dérivés se ramollissent
i et se décomposent (dec.) avant fusion. Les solvants utilisés pour la cristallisation, la précipitation ou le broyage sont indiqués entre crochets.
L'électrophorèse à haute tension sur papier a été
<EMI ID=31.1>
<EMI ID=32.1>
<EMI ID=33.1>
-eau 123:100:777). Les mobilités électrophorétiques (E 1,2) sont données par rapport à celles de l'acide glutamique.
Les composés de formule générale (I) ont montré des activités pharmacologiques intéressantes dans des essais effectués sur des aninaux de laboratoire. Plus particulièrement, les composés de formule générale (I) ont montré une activité sur le système nerveux central cornue analgésiques, antipsychotiques et agents utilisables en neuroendocrinologie.
Cette activité analgésique a été évaluée sur la souris par l'essai du pincement de queue, comme décrit par
<EMI ID=34.1>
Les substances essayées ont été administrées par voie intraveineuse, sous-cutanée, intrapéritonéale ou orale. Quand ils ont été administrés par voie intraveineuse ou sous-cutanée, les produits essayés ont montré un effet analgésique à des doses allant, en général, de 0,2 à 50 mg /kg.
Les composés de formule générale (I) montrent des affinités réceptrices vis-à-vis des médicaments d'analgésie centrale quand ils sont essayés in vitro sur le cerveau du rat conformément au processus décrit par PERT and SNYDER dans Molec.Pharmacol., 10, 878, 1974. D'après ces propriétés, les composés de formule générale (I) peuvent trouver une application thérapeutique pour le traitement des douleurs.
Les composés de formule générale (I) présentent aussi une activité sur le système nerveux central avec les propriétés caractéristiques des médicaments antipsychotiques, comme l'ont montré des essais effectués sur des rats selon le processus décrit par JANSSEN, JAGENEAU and SCHELLEKENS dans Psychopharmacologia (Berl.), 1, 389. 1960. Les doses actives sont généralement comprises entre 0,2 et 60 mg/kg. En raison de cette activité, les composés de formule générale
9<1> (I) peuvent trouver une application thérapeutique comme médicaments antipsychntigues.
Les composés de formule générale (I) stimulent, entre autre, la libération de l'hormone de croissance et de la prolactine comme l'ont montré des épreuves de radio-immunisation chez le rat, qui ont été effectuées conformément au processus décrit par NISWENDER, CHEN, MIDGLEY, METTES, ELLIS, Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 130, 793, 1968. Les doses actives sont généralement comprises entre 0,01 et 10 mg/kg. En raison de cette activité, les composés de formule générale (I) peuvent trouver une application thérapeutique pour la stimulation de la libération de l'hormone de croissance et
<EMI ID=35.1>
Par conséquent, l'usage en tant que médicaments des composés de formule générale (I) est également compris dans le cadre de l'invention. Aux fins thérapeutiques, les composés de formule générale (I) et leurs sels sont administrés avec des véhicules ou des diluants classiques pharmaceutiquement acceptables.
Les composés préférés réalisés conformément à l'invention sont les suivants :
r-.i
<EMI ID=36.1>
<EMI ID=37.1>
<EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
J-3
dans lesquels :
Me = CH3
Et = CH2CH3
Z = benzyloxycarbonyle
Lrl = lauryle
Bnl = benzoyle
<EMI ID=40.1>
Ad = adamantyle
<EMI ID=41.1>
MePhe = N-néthylphénylalanine
Ppa = acide pipécolique
Aze = acide 2-azétidine carboxylique
Tia = acide 4-tiazolidine carboxylique
<EMI ID=42.1>
Phe(N02) = p-nitro-phénylalanine
<EMI ID=43.1>
Tyr(Bzl) = tyrosine O-benzyl-éther
Ser(Bzl) = serine 0-benzyl-éther
Cha = hexahydrophénylalanine
Phg = phénylglycine
Phe(F) = p-fluorophénylalanine
�Ala = �-alanine
allô Hyp = 4-allohydroxyproline
3Hyp = soit 3-hydroxyproline, soit 3-allohydroxyproline Nva = valine normale
<EMI ID=44.1>
On donnera maintenant, uniquement à titre d'illustration et sans aucune intention limitative, la description de la préparation de plusieurs composés de l'invention.
Exemple 1
Préparation de H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2.CF3 COOH A une solution de 1 g (4,65 mmoles) de Boc-Pro-OH dans 10 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on a ajouté successivement à une température de -12[deg.]C 0,52 ml (4,65 mmoles)
de N-méthyl-morpholine et 0,45 ml (4,65 mmoles) de chloroformate d'éthyle. Après agitation à cette température pendant 2 minutes, on a ajouté une solution froide de 0,48 g (4,65
<EMI ID=45.1>
mélange en réaction à -10[deg.]C pendant 3 heures et à 20[deg.]C pendant 1 heure, puis on a filtré pour séparer les sels et on a soumis à évaporation sous vide. On a repris le résidu
avec du tétrahydrofuranne, on a filtré et on a fait évaporer
<EMI ID=46.1>
<EMI ID=47.1>
<EMI ID=48.1>
<EMI ID=49.1>
<EMI ID=50.1>
vide la solution, on l'a diluée avec du méthanol et on l'a soumise à nouveau à évaporation sous vide. On a isolé le produit (II) à partir du milieu diéthyléther-éther de pétrole;
<EMI ID=51.1>
Opération 3. Boc-Tyr (Bzl)-Pro-Ser-NH2 (III)
On a refroidi à 0[deg.]C une solution de 1 g (3,2 mmoles) de H-Pro-Ser-NH2.CF3COOH (II) dans 35 ml de diméthylformamide puis on a ajouté 0,36 ml (3,2 mmoles) de N-méthyl-morpholine suivis de 1,2 g (3,2 mmoles) de Boc-Tyr
(Bzl)-OH, de 0,43 g (3,2 mmoles) de 1-hydroxybenzotriazole, et de 0,73 g (3,52 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide. On a agité le mélange en réaction pendant 1 heure à 0[deg.]C puis
à la température de la pièce pendant une nuit, ensuite on l'a filtré et on l'a soumis à évaporation sous vide. On a fait dissoudre le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on a lavé la solution successivement avec des solutions saturées en NaCl d'acide citrique 1 M, de NaHC03 1 M et d'eau. On a
n/ <EMI ID=52.1>
éliminé le solvant sous vide. On a obtenu le produit (III) par cristallisation à partir du milieu acétate d'éthyle -
-éther de pétrole ; poids 1,4 g, point de fusion 115[deg.]C ;
<EMI ID=53.1>
(IV)
En opérant comme à l'opération 2, à partir de 1 g (1,8 mmoles) de Boc-Tyr (Bzl)-Pro-Ser-NH2 (III) on
<EMI ID=54.1>
Opération 5. Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (V)
On a ajouté successivement à -12[deg.]C 0,42 ml
(3,8 mmoles) de N-méthylmorpholine et 0,3 ml (3,8 mmoles) de chloroformate d'éthyle à une solution de 1 g (3,8 mmoles) de Boc-Phe-OH dans 10 ml de tétrahydrofuranne anhydre. Après agitation à cette température pendant 2 minutes, on a ajouté une solution froide de 0,95 g
<EMI ID=55.1>
J.Amer.Chem.Soc. 94, 6171, 1972) et 0,4 ml (3,7 mmoles)
de N-méthylmorpholine dans 15 ml de diméthylformamide.
On a agité le mélange en réaction à -10[deg.]C pendant 3 heures et à 20[deg.]C pendant 1 heure, puis on a filtre pour séparer les sels et on l'a soumis à évaporation sous vide. On a fait dissoudre le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on l'a lavé plusieurs fois successivement avec des solutions saturées en NaCl d'acide citrique 1 M, de NaHCO- 1 M et d'eau. On a fait sécher la couche organique sur Na2S04 anhydre et on a éliminé le solvant sous vide. On a récupéré le produit (V) (1,4 g) à partir du milieu méthanol- <EMI ID=56.1>
On a traité pendant 30 minutes à la température ambiante 1 g (2,1 mmoles) de Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (V) avec
10 ml d'une solution 1,3 N d'acide chlorhydrique dans de l'acide acétique glacial. L'élimination du solvant sous
a vide à 30[deg.]C et le broyage du résidu avec de l'éther diéthylique a donné 0,89 g du produit (VI); point de fusion 178[deg.]C;
<EMI ID=57.1>
En partant de 1 g (5,3 mmoles) de Boc-ala-OH et de 2,09 g (5,1 mmoles) de H-Phe-Gly-NH-NH-Z.HCl (VI) , et en
procédant comme à l'opération 5, on a obtenu le composé
(VII) (2,5 g) à partir du milieu méthanol-éther diiso-
<EMI ID=58.1>
Opération 9. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX) En partant de 1 g (3,5 mmoles) de Boc-Tyr-OH et
<EMI ID=59.1>
et en procédant comme à l'opération 5, on a obtenu 2,24 g du produit (IX) (cristallisation à partir du milieu méthanol-éther diisopropylique); point de fusion 148[deg.]C;
<EMI ID=60.1>
Opération 10. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH2 (X) On a hydrogéné à la température ambiante en présence de 0,27 g d'un catalyseur 10% Pd/C une quantité de 1 g (1,4 mmoles) de Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX) dans 10 ml de méthanol. On a éliminé le catalyseur par filtration et on a concentré la solution sous vide. Par dilution avec de l'acétate d'éthyle on a obtenu 0,64 g du
<EMI ID=61.1>
(c=l, MeOH) ; RfB = 0,34.
Opération 11. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr
<EMI ID=62.1>
Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH2 (X) dans 20 ml de diméthylformamide anhydre, on a ajouté successivement à une température de -30[deg.]C 2,18 ml (8,75 mmoles) d'acide chlorhydrique 4 N dans du tétrahydrofuranne anhydre et 0,45 ml (3,85 mmole� de nitrite de n-butyle. Après agitation à cette température pendant 30 minutes, on a ajouté 1 ml (8,75 mmoles) de
<EMI ID=63.1>
-9 [deg.]C pendant trois jours puis on a filtré pour éliminer les sels, on a éliminé le solvant sous vide et on a fait précipiter le produit à partir du milieu méthanol-acétate d'éthyl-éther diéthylique. Le produit brut obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice
(Merck) , 70-230 niesh, (0,.197 à 0,066 mm), en éluant avec le mélange acétate d'éthyl-méthanol (8:2), on a obtenu 2 g du composé (XI) à partir du milieu méthanol- <EMI ID=64.1>
Opération 12. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-
-Ser-NH� (XII)
On a hydrogéné à 35[deg.]C en présence d'un catalyseur,0,30 g de 10% Pd/C,une quantité de 1,'3 g (1,3 mmoles) de Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr (Bzl)-Pro-Ser-NH2 (XI) en solution dans 20 ml de méthanol. On a éliminé le catalyseur par filtration et on a concentré la solution sous vide. Par dilution avec de l'éther diéthylique, on a obtenu 1,1 g
<EMI ID=65.1> l'aide de 10 ml d'acide trifluoroacétique. On a éliminé le solvant sous vide et on a broyé le résidu avec de l'éther diéthylique, ce qui a donné 0,90 g du composé
<EMI ID=66.1>
Exemple 2
<EMI ID=67.1>
mide anhydre et on a refroidi à -30[deg.]C. On a ajouté successivement 2 ml (12 mmoles) d'acide chlorhydrique 6 N dans du tétrahydrofuranne anhydre ,et 0,63 ml (5,28 mmoles) de nitrite de n-butyle et on a agité le mélange en réaction pendant 30 minutes à -30[deg.]C. On a ajouté 1,34 ml (12 mmoles) de N-méthyl-morpholine à -40[deg.]C, suivis d'une solution
<EMI ID=68.1>
(K.Blau and S.G. Waley, Biochem.J., 57, 538, 1954) et 0,456 ml (4 mmoles) de N-méthyl-morpholine dans 50 ml de diméthylformamide. On a laissé le mélange réagir pendant 7 jours à -10[deg.]C, puis on l'a concentré jusqu'à un faible volume, on a filtré pour éliminer les sels et on a fait précipiter le produit par dilution avec du chloroforme. Par cristallisation à partir du milieu alcool méthylique-
-chloroforme, on a obtenu 2 g du composé (XIV); point de
<EMI ID=69.1>
(XV)
On a fait réagir 1 g (1,4 mmoles) de Boc-Tyr-
-ala-Phe-Gly-Tyr-NH2 (XIV) avec 12 ml d'acide trifluoro- <EMI ID=70.1>
isopropylique-êther diisopropylique, on a obtenu 0,94 g du
<EMI ID=71.1>
Synthèse en phase solide. La synthèse sur un support polymère peut être effectuée, par exemple, selon l'un quelconque des procédés suivants :
<EMI ID=72.1>
De la résine polystyrène chlorométhylée a été <EMI ID=73.1>
les indications de Gisin, Helv. Chim.Acta, 56, 1476 (1973).
L'ester de polystyrène a été traité conformément aux opérations portées sur le tableau A qui suit pour l'incorpo-
<EMI ID=74.1>
la résine indiquée en titre. '
Tableau A
<EMI ID=75.1>
2. Traitement avec TFA-CH2Cl2 (1:1) deux fois
pendant 1 minute ;
<EMI ID=76.1>
5. Traitement avec 10% TEA dans CH2C12 deux fois
pendant 1 minute ;
<EMI ID=77.1>
7. Lavage avec CH2C12 x 3 ;
8. Lavage avec DMF x 3. ;
9. Lavage avec CH2C12 x 3 ;
10. Adjonction de 2 ou 3 équivalents de l'anhydride symétrique du dérivé de l'amine acide correspondant, préparé comme décrit par Hagenmayer and Frank, Hoppe-
-Seyler's Z.Physiol.Chem., 353, 1973 (1972), en solution dans CH2C12. Durée de la réaction 1 à 2 heures.
<EMI ID=78.1>
12. Lavage avec de l'alcool isopropylique x 3 ;
13. Lavage avec CH2C12 x 3 ;
<EMI ID=79.1>
En cas de réaction incomplète répétition du processus 4 à 14 comme ci-dessus.
Les abréviations utilisées pour désigner les solvants et les réactifs mentionnés sur le tableau A sont les suivantes :
<EMI ID=80.1>
<EMI ID=81.1>
Après adjonction du. dernier dérivé d'amino acide selon le tableau A (procédé A), lavage de la résine 3 fois à l'aide d'acide acétique, répétition des opérations 1 à 9
et lavage 4 fois à l'aide d'alcool isopropylique.
<EMI ID=82.1>
benzhydrylamine par l'intermédiaire de la dicyclohexylcarbodiimide, comme décrit par Pietta et al, J.Org.Chem.,
39, 44 (1974). Les groupes amino qui n'ont pas réagi ont été acétylés avec le mélange anhydride acétique/pyridine/ /CH2C12 (2:1:10). Le polystyrène amide a été traité conformément au tableau A (procédé A) pour l'incorporation des autres résidus d'amino.acide afin de parvenir à la résine indiquée en titre.
<EMI ID=83.1>
On a opéré conformément au procédé B en partant de la résine peptide du procédé C.
Exemple 3
<EMI ID=84.1>
1 g de résine peptide du procédé B ayant la séquence voulue des résidus d'amino acide (introduite sous forme de Boc-Gly-OH, Boc-Phe-OH, Boc-ala-OH.et Boc-Tyr-OH, dans cet ordre) a été mis en suspension dans 25 ml d'alcool méthylique et 2 ml de triéthylamine pendant 3 jours à la température ambiante. On a éliminé la résine par filtration,
<EMI ID=85.1>
rer le solvant sous vide. Par cristallisation du résidu à partir d'alcool isopropylique, on a obtenu 0,16 g du composé indiqué en titre (XVI), point de fusion 216[deg.]-218[deg.]C;
<EMI ID=86.1>
acides : Gly 1,04; ala 1,06; Tyr 0,99; Phe 1.
Exemple 4
<EMI ID=87.1>
d (i) 1 g de la même résine peptide que celle de l'exemple 3 a été traité pendant 45 minutes à 0[deg.]C à l'aide de
10 ml de HF anhydre (distillé sur CoF3) contenant 1 ml d'anisole. On a fait évaporer l'acide fluorhydrique sous une pression réduite et on a éliminé l'anisole par lavage à l'éther diisopropylique. Le peptide brut a été extrait de la résine à l'aide d'acide acétique à 50%, purifié par chromatographie sur une colonne de Sephadex G-15 par élution à l'aide d'acide acétique 0,5 N et finalement transformé en
<EMI ID=88.1>
(ii) En variante, on a mis en suspension 0,10 g de l'ester du peptide (XVI) dans 5 ml d'eau et 3 ml d'alcool méthylique et on a saponifié à l'aide de 0,32 ml NaOH 1 N pendant 90 minutes à la température ambiante. On a ajouté 0,32 ml HC1 1 N et on a concentré la solution sous vide. En diluant à l'aide d'éthanol à 95% on a obtenu 0,08 g du composé indiqué en titre (XVII); point de fusion 250[deg.]-252[deg.]C
<EMI ID=89.1>
amino acides : Gly 1,04; ala 0,94; Tyr 1 ; Phe 1,05.
Exemple 5
<EMI ID=90.1>
(i) On a mis en suspension 1 g de la même résine peptide que celle de l'exemple 3 dans 10 ml d'un mélange
<EMI ID=91.1>
0[deg.]C avec de l'ammoniac. On a agité le mélange en réaction pendant 3 jours à la température ambiante, puis on a filtré pour enlever la résine, on a lavé à l'aide de diméthylformamide, et on a fait évaporer les solvants sous vide. On a traité le résidu par une solution d'acide chlorhydrique dans du tétrahydrofuranne anhydre et on a récupéré le produit sous forme de chlorhydrate à partir d'alcool isopropylique. On a obtenu 0,09 g du composé indiqué en
<EMI ID=92.1>
ala 1 ; Tyr 0,91; Phe 1,03.
(ii) En variante, on peut obtenir le même peptide
(XIX) à partir de la résine peptide du procédé D (avec la séquence voulue des résidus d'aminoacides) en opérant de la même façon que celle décrite à l'exemple 4(i).
.1
Exemple 6
<EMI ID=93.1>
(XIV' )
<EMI ID=94.1>
A une solution de 1 g (4,87 mmoles) de Boc-Ser-OH dans 20 ml de tétrahydrcfuranne anhydre, on a ajouté successivement 0,55 ml (4,87 mmoles) de N-méthyl-morpholine et
<EMI ID=95.1>
rature de-12[deg.]C. Après agitation à cette température pendant
2 minutes, on a ajouté une solution froide de 1 g (4,87 mmoles) de H2N-NH-Z.HCl et 0,55 ml (4,87 mmoles) de N-méthyl- <EMI ID=96.1>
dant 3 heures et à 20[deg.]C pendant 1 heure, puis on a filtré pour éliminer les sels et on a soumis à évaporation sous vide.
On a fait dissoudre le résidu dans de l'acétate d'éthyle et on a lavé plusieurs fois successivement avec une solution saturée en NaCl d'acide citrique 1 M, NaHC03
1 M et de l'eau. La couche organique a été séchée sur Na2S04 anhydre et on a éliminé le solvant sous vide. On a purifié le produit par chromatographie sur colonne de gel de silice,éluée avec CHCl,:MeOH = 98:2. Les fractions homogènes à la chromatographie sur couches minces ont été recueillies et le solvant éliminé sous vide.
Par broyage avec le mélange éther diéthylique- <EMI ID=97.1>
RfA = 0,52.
<EMI ID=98.1>
On a fait dissoudre 1 g (2,83 mmoles) de Boc-Ser-NH-NH-Z (Il) dans 10 ml d'une solution 4 N d'acide chlorhydrique dans du tétrahydrofuranne anhydre, à la température ambiante. Après 30 minutes à cette même température, on a ajouté de l'éther diéthylique et le précipité a été recueilli par filtration.
Le'produit brut a été recristallisé à partir du mélange éthanol absolu-éther diëthylique; on a obtenu
<EMI ID=99.1> <EMI ID=100.1>
Opération 3. Boc-Tyr-Pro-OH (III')
On a fait dissoudre 1 g (8,7 mmoles) de H-Pro-OH à la température ambiante dans 4,35 ml de NaOH 2 N. On a refroidi la solution à 0[deg.]C, on l'a diluée avec 10 ml de diméthylformamide et on a évacué les solvants sous vide à
<EMI ID=101.1>
1
Bcc-Tyr-ONp.
On a agité le mélange en réaction pendant 1 heure
<EMI ID=102.1>
sous vide.
On a fait dissoudre le résidu dans de l'eau et on l'a lavé plusieurs fois à l'aide d'acétate d'éthyle.
<EMI ID=103.1>
acidifiée avec une solution aqueuse 5 N d'acide chlorhydrique, jusqu'au pH 2, puis on l'a soumise à extraction à l'aide d'acétate d'éthyle.
On a lavé la couche organique jusqu'à neutralité avec une solution aqueuse saturée en NaCl, on l'a fait sécher sur Na2SO4 anhydre et, après élimination du solvant
à 30[deg.]C, on a obtenu 3,7 g du composé (III'); point de fusion
<EMI ID=104.1>
Bzl Une quantité de 1 g (2,13 mmoles) de Boc-Tyr-Pro-
-OH (III') dans 15 ml de méthanol a été hydrogénée à 30[deg.]C en présence d'un catalyseur 0,27 g 10% Pd/C. On a éliminé ce dernier par filtration, on a dilué la solution à l'aide d'acétate d'éthyle et on l'a concentrée sous vide jusqu'à précipitation. On a obtenu 0,7 g du composé (IV'); point de
<EMI ID=105.1>
Opération 5. Boc-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (V')
En partant de 1 g (2,65 mmoles) de Boc-Tyr-Pro-OH
(IV') et de 0,77 g (2,65 mmoles) de H-Ser-NH-NH-Z . HC1 (Il') <EMI ID=106.1>
<EMI ID=107.1>
Opération 6. H-Tyr.Pro-Ser-NH-NH-Z . HC1 (VI') En partant de 1 g (1,63 mmoles) de Boc-Tyr-
-Pro-Ser-NH-NH-Z (V') et en procédant comme à l'opération 2, on a obtenu 0,78 g du composé (VI') à partir. d'éther
<EMI ID=108.1>
Opération 7. Boc-Phe-Gly-NH-NH-Z (VII')
En partant de 1 g (3,8 mmoles) de Boc-Phe-OH
<EMI ID=109.1>
(K. Hofmann et al., J. Am. Chem. Soc. 94, 6171, 1972) et en procédant comme à l'opération 1, on a récupéré à partir du mélange méthanol-éther diisopropylique le composé (VII')
<EMI ID=110.1>
<EMI ID=111.1>
<EMI ID=112.1>
On a traité 1 g (2,1 mmoles) de Boc-Phe-Gly-NH-
-NH-Z (VII') pendant 30 minutes à la température ambiante
à l'aide de 10 ml d'une solution 1,3 N d'acide chlorhydrique dans de l'acide acétique glacial. L'élimination du solvant sous vide à 30[deg.]C et le broyage du résidu avec de l'éther diéthylique a donné 0,89 g du composé (VIII'); point de
<EMI ID=113.1>
E1 2 = 0,88.
Opération 9. Boc-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX') En partant de 1 g (5,3 mmoles) de Boc-ala-OH et de 2,09 g (5,1 mmoles) de H-Phe-Gly-NH-NH-Z . HC1 (VIII'), et en procédant comme à l'opération 5, on a obtenu du mélange méthanol-éther diisopropylique le composé (IX')
<EMI ID=114.1>
En partant de 1 g (1,8 mmoles) de Boc-ala-Phe-
-Gly-NH-NH-Z (IX') et en procédant comme à l'opération 6,
<EMI ID=115.1>
<EMI ID=116.1>
1 Opération 11. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (XI') En partant de 1 g (3,5 mmoles) de Boc-Tyr-OH et
<EMI ID=117.1>
et en procédant comme à l'opération 5, on a obtenu 2,24 g du composé (XI) (cristallisation à partir du mélange méthanol- <EMI ID=118.1> <EMI ID=119.1>
Une quantité de 1 g (1,4 mmoles) de Boc-Tyr-ala-
-Phe-Gly-NH-NH-Z (XI') dans 10 ml de méthanol a été hydrogénée à la température ambiante en présence de 0,27 g d'un catalyseur 10% Pd/C. En procédant comme à l'opération 4, on a obtenu 0,64 g du composé (XII'); point de fusion 148[deg.]C;
<EMI ID=120.1>
Opération 13. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-
-Ser-NH-NH-Z (XIII')
<EMI ID=121.1>
-30[deg.]C 1,1 ml (4,38 mmoles) d'acide chlorhydrique 4 N dans du tétrahydrofuranne anhydre et 0,2 ml (1,93 mmoles) de nitrite de n-butyle. Après- agitation à la température de <EMI ID=122.1> de N-méthylmorpholine, suivis d'une solution froide (-30[deg.]C) de 0,803 g (1,46 mmoles) de H-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z . HCl
(VI') et 0,16 ml (1,46 .mincies) de N-méthyl-morpholine dans
15 ml de diméthylformamide anhydre.
<EMI ID=123.1>
jours, puis on a éliminé les sels par filtration, on a éliminé le solvant sous vide et on a versé le produit dans une
<EMI ID=124.1>
le précipité par filtration, on a lavé jusqu'à neutralité avec de l'eau et on a séché sous vide. Le produit a été recristallisé à partir du mélange acétate d'éthyle-éther
<EMI ID=125.1> Opération 14. H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-
-NH-NH-Z . HC1 (XIV')
En partant de 1 g (0,95 mmoles) de Boc-Tyr-ala-
-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH-NH-Z (XIII') et en procédant comme à l'opération 2, on a obtenu 0,89 g du composé (XIV') à <EMI ID=126.1>
Opération 1. Boc-Tyr-NH-NH-Z (XV')
A une solution de 1 g (3,55 mmoles) de Boc-Tyr-
-OH dans 20 ml de tétrahydrofuranne anhydre, on a ajouté
<EMI ID=127.1>
de N-méthyl-morpholine et 0,48 ml (3,55 mmoles) de chloroformate d'iso-butyle. Après agitation à la température de <EMI ID=128.1> agité le mélange en réaction à une température de -10"C pendant 90 minutes, puis on a filtré pour séparer les sels et on a soumis à évaporation sous vide. On a fait dissoudre le résidu dans l'acétate d'éthyle et on a lavé plusieurs fois successivement avec une solution aqueuse d'acide
<EMI ID=129.1>
<EMI ID=130.1>
On a fait dissoudre 1 g (2,33 mmoles) de Boc-
-Tyr-NH-NH-Z (XV') dans 10 ml d'une solution 4 N d'acide
<EMI ID=131.1>
température ambiante. Après 30 minutes à cette même température, on a fait évaporer le solvant sous vide et on a fait précipiter le produit à partir du mélange alcool isopropyli-
<EMI ID=132.1>
_1 <EMI ID=133.1>
Opération 3. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-NH-Z
<EMI ID=134.1>
A une solution de 1 g (1,75 mmoles) de Boc-Tyr-
-ala-Phe-Gly-NH-NH2 (XII') dans 15 ml de diméthylformamide anhydre, on a ajouté successivement à une température de
-30[deg.]C 1,1 ml (4,38 mmoles) d'acide chlorhydrique 4 N dans du tétrahydrofuranne'anhydre et 0,2 ml (1,93 mmoles) de nitrite de n-butyle. Après agitation à cette température de
-30[deg.]C pendant 30 minutes, on a ajouté 0,5 ml (4,38 mmoles) de N-méthylmorpholine, suivis d'une solution froide (-30[deg.]C) de 0,535 g (1,46 mmoles) de H-Tyr-NH-NH-Z . HC1 (XVI') et <EMI ID=135.1>
diméthylformamide anhydre. On a laissé le mélange réagir
<EMI ID=136.1>
les sels, on a évacué le solvant sous vide et on a versé le produit dans une solution aqueuse d'acide citrique à 10%
<EMI ID=137.1>
on a lavé jusqu'à neutralité avec de l'eau et on a séché
<EMI ID=138.1>
Le produit a été recristallisé à partir du mélange alcool isopropylique-éther diëthylique; on a obtenu
<EMI ID=139.1>
Opération 4. H-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr-NH-NH-Z .
. HC1 (XVIII')
En partant de 1 g (1,15 mmoles) de Boc-Tyr-ala-
-Phe-Gly-NH-NH-Z (XVII') et en procédant comme à l'opération
<EMI ID=140.1>
Exemple 8
<EMI ID=141.1>
<EMI ID=142.1>
-Gly-NH-NH-Z (XI'), et en procédant comme à l'opération 8 de l'exemple 6, on a obtenu � partir d'acétate d'éthyle <EMI ID=143.1>
Exemple 9
<EMI ID=144.1>
En partant de 0,12 ml (1,3 mmoles) d'acide buty-rique et de 0,742 g (1,3 mmoles) de Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-
-NH2 (XII'), et en procédant comme à l'opération 1 de l'exemple 6, on a obtenu à partir d'acétate d'éthyle 0,8 g du <EMI ID=145.1>
<EMI ID=146.1>
-Phe-Gly-NH-NH-CO-CH2-CH2-CH3 (XX'), et en procédant comme à l'opération 2 de l'exemple 6, après purification sur une colonne de chromatographie de gel de silice et en éluant avec le mélange chloroforme-méthanol = 9:1, on a obtenu 0,58 g du composé (XXI') à partir du mélange alcool isopropylique-éther diéthylique; point de fusion 215[deg.]-218[deg.]C <EMI ID=147.1>
Exemple 10
Préparation de H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-�
<EMI ID=148.1>
<EMI ID=149.1>
Opération 1. Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-
-Boc (XXII')
<EMI ID=150.1>
et de 2,03 'g (3,55 mmoles) de Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH2
(XII') et en procédant comme à l'opération 1 de l'exemple 6, on a obtenu à partir d'acétate d'éthyle 2,3 g du
<EMI ID=151.1>
Opération 2. H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH-tyr-H .
<EMI ID=152.1>
En partant de 1 g (1,2 mmoles) de Boc-Tyr-ala-
i -Phe-Gly-NH-NH-tyr-Boc (XXII'), et en procédant comme à l'opération 2 de l'exemple 1, on a obtenu à partir d'éther diéthylique 0,760 g du composé (XXIII'); point de fusion <EMI ID=153.1>
<EMI ID=154.1>
En utilisant la méthode classique en solution, on a synthétisé aussi les autres dérives suivants :
XX) H-Tyr-ala-Phe-Gly-NH-NH2.2 HCl
<EMI ID=155.1>
XXII) H-Tyr-ala-Phe-Sar-NH-NH-Z.HCl
p.f. 150[deg.]-155[deg.]C (dec.) (acétate d'éthyle);
<EMI ID=156.1>
p.f. 110[deg.]-115[deg.]C (dec.) (acétate d'éthyle-éther dié-
<EMI ID=157.1>
<EMI ID=158.1>
p.f. 180[deg.]-183[deg.]C (dec.) (acétate d'éthyle);
<EMI ID=159.1>
<EMI ID=160.1>
XXVIII) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Tyr (Bzl) -Pro-NH2
p.f. 143[deg.]C (éther diéthylique) ; RfB 0,47.
<EMI ID=161.1>
<EMI ID=162.1>
XXXIII) Boc-Tyr-ala--Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2
p.f. 156[deg.]-160[deg.]C (dec.) (acétate d'éthyle-éther
<EMI ID=163.1>
p.f. 203[deg.]-206[deg.]C (dec.) (éther diëthylique);
<EMI ID=164.1>
p.f. 230[deg.]C (dec.) (éther diisopropylique) ;
RfE 0,47.
<EMI ID=165.1>
p.f. 245[deg.]-250[deg.]C (dec.) (éther diéthylique-éther
<EMI ID=166.1>
p.f. 190[deg.]-195[deg.]C (dec.) (alcool méthylique-éther
<EMI ID=167.1>
XL) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Phe-Pro-Ser-NH2
p.f. 155[deg.]-160[deg.]C (dec.) (alcool méthylique-acétate
<EMI ID=168.1> <EMI ID=169.1>
XLVI) Boc-Tyr-ala-Phe-Gly-Trp-Pro-Ser-NH2
p.f. 175[deg.]-180[deg.]C (dec.) (alcool méthylique-acétate
<EMI ID=170.1>
<EMI ID=171.1>
p.f. 140[deg.]-145[deg.]C (éther diéthylique);
<EMI ID=172.1>
L) H - Tyr - ala - Phe - Gly - Leu - NH2 . HCl
p.f. 143[deg.]-147[deg.]C (alcool isopropylique-éther
<EMI ID=173.1>
LII) H - Tyr - ala - Phe - Sar - Tyr - Pro - Ser - NH2 .HCl
p.f. 195[deg.]-200[deg.]C (dec.) (éther diéthylique);
10 <EMI ID=174.1> <EMI ID=175.1>
<EMI ID=176.1>
LIV) H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - NHMe.HCl
p.f. 240[deg.]C (dec.) (éther diéthylique);
<EMI ID=177.1> <EMI ID=178.1>
LV) H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Prc - Ser-NHEt.HCl
<EMI ID=179.1>
<EMI ID=180.1>
LVI) H - Tyr - ala - Phe - Gly - Tyr - Pro - Ser - OMe.HCl
p.f. 240[deg.] (dec.) (éther diéthylique); <EMI ID=181.1>
LXI) H - Tyr - ala - Phe - Gly - NHNH Adoc
p.f. 142[deg.]-144[deg.]C (dec.) (alcool isopropylique/éther
<EMI ID=182.1>
LXII) H - Tyr - ala - Phe - Gly - NHNHBoc
<EMI ID=183.1>
<EMI ID=184.1>
<EMI ID=185.1>
<EMI ID=186.1>
<EMI ID=187.1>