Dérivés N-(viablastinoyl-23) d'acides amines et de peptides, leur
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à de nouveaux dérivée de couplage d'acides aminés avec la vinblastine, y compris des dérivés peptidiques, à leur procédé de préparation, � leur application en tant qu'agents antitumoraux et aux compositions pharmaceutiques les contenant.
Ces nouveaux dérives de la vinblastine peuvent être utilisas pour le traitement des leucémies et des tumeurs malignes chez l'homme.
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sont des composés bien connus possédant le squelette carboné de la formule générale suivante :
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(brevet américain 3 097 137), la leurocristine ou vincristine et la leurosidine (brevet américain 3 205 220), le vinglycinate (brevet belge 659 112) et la vindésine (brevet belge 813 168). Ce dernier composé a été obtenu par transformation chimique de la vinblastine
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La vinblastine, la vincristine et la vindésine sont commercialisées pour leur utilisation en thérapeutique humaine, plus particulièrement pour le traitement de leucémies et de certaines tumeurs solides.
Ces médicaments possèdent néanmoins des effets secondaires défavorables. La vincristine est neurotoxique et la vinblas-
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postulé pour l'action antimitotique de la colchicine. Ces médicaments agiraient par inhibition de la polymérisation de la tubuline en micro-
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L'utilisation de complexes 1:1 d'alcaloïdes bieindoliques antitumoraux avec la tubuline a été décrite dans le brevet beige 854 053.
Dans certains cas, il peut en résulter une toxicité
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des alcaloïdes libres correspondants.
D'autres dérivés obtenus par modification chimique de la vinblastine ont été testés. Ainsi le sulfate de vinglycinate
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a été étudié en expérimentation clinique mais ne s'est généralement pas révélé supérieur à la vinblaatine et à la vincristine.
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88, 1978).
Les dérivés de couplage d'acides aminés avec la vin-
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posés d'une manière générale dans le brevet belge 813 168 susmentionné,
Néanmoins, aucun exemple de dérivé d'acide aminé spé-
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mique n'a été fournie. Aucune méthode de préparation spécifique et aucun résultat pharmacologique particulier n'a été mentionné.
Il peut donc en être déduit que ces dérivés n'ont pas été réellement synthétisée et/ou n'ont pas été testés pour leur activité antitumorale.
Page 3, ligne 10 et suivantes, il est en outre mentionné que "l'activité anti-néoplasique semble être limitée à des structures très spécifiques et les chances d'obtenir des médicaments plus actifs en modifiant ces structures semblent également faibles".
Il a maintenant été constaté que les nouveaux composés décrits dans la présente invention sont capables de retarder efficacement la mort de souris auxquelles on a transplante par voie intraveineuse des tumeurs P 388 et L 1210.
Alors que les alcaloïdes Vinca administrés par voie intraveineuse ne présentent généralement aucune activité sur la leucémie L 1210, les résultats obtenus montrent pour les nouveaux dérivés une activité très significative et inattendue.
Les activités sur les tumeurs expérimentales P 388 se
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celles des alcaloïdes Vines de référence. De nombreuses rémissions complètes ont été observées.
Les dérivés de l'invention possèdent en outre d'autres
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et a ses analogues connus, en particulier la vindésine.
En particulier, les toxicités observées sont générale-
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cris fine.
Les nouveaux composés de l'invention répondent plus particulièrement à la formule générale II
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reprisent, un radical de n'importa lequel des acides aminés naturels et de leurs isomères optiques de configuration D, notamment :
la glycine acide aspartique cystine
alanine acide glutamique méthionine valine asparagine phénylalanine leucine glutamine tyrosine isoleucine arginine tryptophane sérine lysine proline thréonine cystéine histidine hydroxyproline hydroxylysine ou thyroxine.
On peut considérer ces composés comme étant des dérivés de la descarbométhoxy-3 désacétyl-0-4 vinblastine carboxamide-3. On préférera cependant Les désigner comme étant des dérivés N-(vinblastinoyl-23) d'acide aminé.
Les composés préférés de l'invention répondent à la formule II dans Laquelle R,, représente un atoca d'hydrogène et la partie acide aminé est dérivée d'un des acides aminés suivant: .
L ou D tryptophane, leucine, valine, isoleucine, alanine et phénylalanine. Parmi ces derniers, le L-tryptophane, la L-isoleucine et
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aminés sont choisis dans la liste mentionnée ci-dessus, suivant n'importe quelle séquence.
En ce qui concerne les propriétés pharmacologiques, il est prévisible que de légères modifications de la structure du squelette peptide fourniront des composée d'activité comparable.
En particulier, la présence d'un acide a-aminé non
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ou un acide aminé a,a-dialkyle) fournirait dee composés d'activité similaire contre un certain nombre de tumeurs.
Pareils composés entrent donc dans le cadre de la présente invention.
Les nouveaux dérivés biaindoliques de l'invention sont obtenus à partir de la vinblastine par hydrazinolyse, nitrosation puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de polypeptide approprié.
Lorsque l'acide aminé ou le peptide contient des groupes
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tionnels en utilisant les méthodes bien connues de l'homme de l'art.
Cette protection peut être effectuée, selon la nature du groupe à protéger, par le greffage d'un groupe benzyle, t-butyle, benzyioxycarbonyle, t-butoxy-trifluoroacétyl carbonyle ou trityle. D'autres agents bien connus en chimie peptidique peuvent être avantageusement utilisés.
Selon le procédé mentionné ci-dessus, les composés suivant l'invention peuvent être obtenus à partir de la vinblastine,
de manière classique, par hydrazinolyse suivie de nitrosation, puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de peptide selon le schéma réactionnel I
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Schéma 1
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nol anhydre. Le mélange réactionnel est alors chauffé sous atmosphère
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de réaction étant alors de 24 heures.
L'hydrazide de la désacétyl-4-vinblastine est alors isolé par addition d'eau, extraction au dichlorométhane et concentra-
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préparative (silice neutre).
Lors de la deuxième étape, la fonction hydrazide de la vinblastine modifiée est transformée en azoture d'acide. Cette transformation est effectuée de manière connue, par addition de nitrite de sodium à l'hydrazide en solution dans un mélange eau-méthanol-acide.
L'acide utilisé peut être l'acide chlorhydrique.
La température de réaction est maintenue entre 0 et 5[deg.]C. Après extraction par un solvant aprotique non joluble dans l'eau, de préférence le chlorure de méthylène, la phase organique est partiellement concentrée.
L'azoture d'acide lui-même n'est de préférence pas isolé, mais directement mis en présence de l'ester d'acide aminé ou de polypeptide ou, le cas échéant, le dérivé correspondant protégé, en solution dans le chlorure de méthylène.
La quantité d'acide aminé mise en oeuvre est de 1 à
5 équivalents de vinblastine carboxazide.
Le milieu réactionnel est maintenu entre -3 et +10[deg.]C pendant 8 à 72 heures, le plus souvent environ 15 heures. La réaction est facilement suivie par chromatographie sur couche mince. Après concentration, on isole le composé de l'invention II qui peut être
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par cristallisation à partir d'une solution méthanolique de l'acide correspondant.
Les composés de l'invention sont purifiés en utilisant les techniques bien connues de chromatographie et de recristallisation.
Le cas échéant, la dérivé de désacétyl-0-4 vinblastine ainsi obtenu peut être réacétylé soit directement pour donner le
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391, 1979) ou par formation préliminaire du dérivé diacétoxy-3,4 suivie d'une hydrolyse sélective du groupe acétoxy en position 3. Le
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carbone.
La présente invention s'étend également aux applications industrielles et notamment pharmaceutiques des composés bisindoliques nouveaux.
Les composés de l'invention présentent en particulier des propriétés antitumoralea particulièrement intéressantes et auaceptibles d'être utilisées en thérapeutique humaine.
Ces dérives d'acide aminé peuvent être, en particulier, utilisés pour le traitement des leucémies du type L 1210, P 388, de gliomes, lymphosarcomes et d'autres leucémies ou tumeurs malignes.
En thérapeutique humaine, ils sont utilisés pour le traitement de la maladie de Hodgkin et pour d'autres tumeurs pouvant bénéficier d'un traitement avec la vinblastine, la vincristine et la
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cine vétérinaire pour le traitement des tumeurs chez les animaux.
D'autres applications thérapeutiques intéressantes peuvent être envisagées pour ces nouveaux dérives d'alcaloïdes biaindoliques. Il a en effet été relevé que la vinblastine pourrait être utilisée dans le traitement de certaines arthrites (brevet des EtatsUnis d'Amérique n[deg.] 4 208 411) et la vincristine pour le traitement
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Pour le traitement des tumeurs malignes chez les animaux, les activités chimie thérapeutiques ont été testées en utilisant les sala de sulfate des composés de l'invention.
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ont été inoculées par voie intraveineuse avec 10 4 cellules leucémiques provenant d'une ascite leucémique P 388 ou L 1210 de sept jours. Le jour 0 est le jour d'inoculation des cellules tumorales. Le composé de l'invention (sous forme sulfate) est alors injecté par voie intraveineuse en solution dans l'eau physiologique (NaCl 9/1000) suivant
le schéma en une injection (jour 1) ou le schéma en trois injections
(jours 1, 2 et 3). On calcule alors le MST (Median Survival Time), jour où la moitié des animaux sont morts.
Ce calcul est effectué la trentième jour.
Le pourcentage d'ILS (Increased Life Span) ou pourcentage d'augmentation de survie est calculé l'aide de la formule suivante :
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Le nombre de sourie survivant au trentième et au soixantième jour est également indiqué.
A des doses trop toxiques, le pourcentage d'ILS devient négatif, c'est-à-dire que les sourie non traitées survivent plus long-
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Dans certains cas, les ILS observés dépendent de la variété de souris utilisée (DBA France ou Etats-Unis d'Amérique).
Les résultats obtenus sont à comparer à ceux observés avec la vinblaetine (VLB), la vindésine (VDS) et la vincristine (VCR) dans
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Le tableau II fournit les résultats obtenus avec quelques dérivés de la leucine naturelle. Les dérivés suivants ont ainsi été testés :
VLE : N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23)-L-leucinate d'éthyle
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Le tableau III rassemble les résultats obtenus avec un dérivé de la D-leucine, en l'occurrence le N-(désacétyl-0-4 vinblastinoyl-23) D-leucinate d'éthyle (VDLE).
Les résultats obtenus avec les dérivés suivant/" du L-tryptophane sont repris dans le tableau IV :
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méthyle.
Le tableau V présente les activités observées avec la dérivé du tryptophanate d'éthyle de configuration absolue D (VDTryptE).
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(tableau VIII) <EMI ID=45.1>
phanate d'éthyle (tableau XI).
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VINBLASTINE (VLB)
P 388
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P 388
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L 1210
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VINCRISTINE (VCR),
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<EMI ID=53.1>
L 1210
<EMI ID=54.1>
<EMI ID=55.1>
VLE
P 388
<EMI ID=56.1>
<EMI ID=57.1>
VLM
P 388
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
<EMI ID=61.1>
VDLE
P 388
<EMI ID=62.1>
L 1210
<EMI ID=63.1>
<EMI ID=64.1>
V-Trypt-E
P 388
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L 1210
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P 388 (ILS calculé au jour 60)
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<EMI ID=68.1>
P 388
<EMI ID=69.1>
L 1210
<EMI ID=70.1>
TABLEAU V
<EMI ID=71.1>
P 388
<EMI ID=72.1>
L 1210
<EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
P 388
<EMI ID=75.1>
L 1210
<EMI ID=76.1>
TABLEAU 'Il 1
VPE
P 388
<EMI ID=77.1>
L 1210
<EMI ID=78.1>
<EMI ID=79.1>
VILE
P 388
<EMI ID=80.1>
L 1210
<EMI ID=81.1>
VILM
P 388
<EMI ID=82.1>
L 1210
<EMI ID=83.1>
<EMI ID=84.1>
WE
<EMI ID=85.1>
<EMI ID=86.1>
<EMI ID=87.1>
<EMI ID=88.1>
TABLEAU X
V-Tyr E
P 388
<EMI ID=89.1>
<EMI ID=90.1>
V-Val-Trypt E
P 388
<EMI ID=91.1>
<EMI ID=92.1>
<EMI ID=93.1>
<EMI ID=94.1>
cisées.
<EMI ID=95.1>
<EMI ID=96.1>
survie.
"Lewis Lung Carcinoma" (3LL)
<EMI ID=97.1>
culairement dans la patte postérieure droite de souris C57B1 femelles.
Les drogues sont administrées par voie intraveineuse suivant un schéma en 3 injections.
Les animaux sont sacrifiée le 23e jour après la greffe.
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pulmonaires sont comptées et leur diamètre mesuré. Le poids des métastases est évalué en supposant qu'il s'agit de sphères de densité égale à 1 ; le nombre de souris sans métastase est également relevé.
Le tableau XIII reprend les résultat* obtenus. les produits présentent une activité sur la tumeur primaire.
Le poids moyen des métastases, leur nombre moyeu ainsi
<EMI ID=99.1>
trés.
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TABLEAU XIII
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<EMI ID=102.1>
administrées aux doses indiquées. Le 23e jour les souris sont sacrifiées ; la tumeur primaire est pesée, les métastases pulmonaires sont numérotées et leur diamètre est mesuré.
<EMI ID=103.1>
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<EMI ID=105.1>
tumeurs injectées par voie i.v. que par voie i.p. (tableau XII). L'activité exceptionnelle de ces dérivés sur les tumeurs L 1210 est démontrée.
Il y a lieu de noter que, parmi les tumeurs expérimentales actuellement accessibles, la leucémie L 1210 est reconnue comme
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tumeur primaire est en outre comparable à celle de la vindésine.
On notera en particulier l'activité exceptionnelle du
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qui a fourni un ILS calculé à 60 jours (P 388) de 4571 avec la moitié
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alors aux environs de 60 mg. Par contre, lea dérivés d'acides aminés qui ont été testés sous la forme amide ou acide ne présentent que des activités faibles ou non significatives. Ces dérivés peuvent cependant être utilisés comme intermédiaires utiles pour l'obtention d'autres alcaloïdes bisindoliques très actifs.
En général, les composés de l'invention se sont révélés être beaucoup moins toxiques que les alcaloïdes Vinca actuellement
<EMI ID=110.1>
la VLE a été déterminée en utilisant des souris femelles de souche Charles River CD1 et pesant au moins 24 g. La méthode de calcul de
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Les doses correspondantes pour la vinblastine et la vindésine sont respectivement de 24 mg/kg et environ 11 mg/kg. On a noté en particulier contrairement aux cas de la vinblastine et de la désacétyl vinblastine, l'absence de toxicité hépatique à des doses de 20 à 40 mg/kg.
Les toxicité aiguës du V-Trp-E et du VILE ont été éga-
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avec les valeurs correspondantes de la vinblastine et de la vindésine, c'est-à-dire respectivement 27,4 et 13,8 mg/kg. Le V-Trp-E est donc nettement moins toxique que la VLB ou la VDS.
Pour leur application thérapeutique, Les composes de l'invention, éventuellement sous forme lyophilises,.peuvent être
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par exemple par voie intra-veineuse, dissous dans un diluant pharmaceutiquement acceptable, sous la forme d'une base ou d'un sel d'addition d'un acide pharmaceutiquement acceptable, Parmi ces sels d'addition, on préférera les sels non toxiques
<EMI ID=114.1>
L'eau physiologique ou d'autres solutions salines tamponnées, par exemple avec un phosphate, sont des solvants appropriés. D'une manière générale, ces composés peuvent être utilisés en s'inspirant des techniques et des limitations qui sont connue* pour les traitements thérapeutiques avec les autres alcaloïdes de la classe des Vinca.
La substance active est généralement administrée à une posologie pouvant varier de 0,01 mg à environ 5 mg/kg, en fonction du dérivé utilisé et du schéma thérapeutique adopté.. Les doses hebdotaadaires totales varieront généralement de 0,1 mg à environ 35 mg/kg.
Les compositions selon l'invention sont présentées sous des formes d'administration contenant le principe actif à la dose unitaire de 2 à 900 mg.
Les composés de l'invention peuvent être utilisée seuls
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méthotrexate, le fluoro-5-uracile, la mercapto-6 purine, la thio-6 guanine, les arabinosides de la cytosine et les antibiotiques tels que
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dichloro-platine. En particulier, ces nouveaux dérivés de la vinblastine peuvent être utilisés en association entre eux.
Les exemples suivants illustrent de manière non limitative le procédé conduisant aux composés de l' invention .
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une fois.
Le mélange réactionnel est abandonné alors pendant 10
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mince, le milieu réactionnel est alcalinisé a pH 8,5 à -10[deg.]C, par une solution saturée de bicarbonate de sodium.
<EMI ID=119.1>
On y ajoute alors 1.43.10 -3 M (1,1 équivalent) de l'ester aminé retenu et on concentre sous vide jusqu'à un volume de
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4[deg.]C. L'évolution de la réaction est suivie par la chromatographie sur couche min ce.
La solution est alors tirée à sec et fournit 1,05 g de
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sur couche mince.
Purification.
Le résidu sec obtenu ci-dessus est placé sur une colonne de gel de silice et élué avec un mélange éther-méthanol
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(cérique +).
Les fractions identiques sont rassemblées, concentrées
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l'alcalotde dimère couplé avec l'acide aminé tout pur dont les données physico-chimiques seront faites sur une partie aliquote. Le restant sera directement transformé en sulfate. Les rendements en base des
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La base amorphe (mousse) obtenue ci-dessus est reprise dans 20 fois son poids en éthanol.
A cette solution, on ajoute alors, très lentement et
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l'addition des 2 équivalents, on laisse encore agiter pendant une demi-heure avant de concentrer sous pression réduite. Par addition d'éther sulfurique anhydre, sous vive agitation, le sulfate du dérivé
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La numérotation adoptée pour la description des spectres de résonance magnétique nucléaire des exemples qui suivent est inspirée de celle proposée par Le Men et Taylor pour les dérivés du type
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Exemple 1
Préparation de la vinblastine (VLB) base
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sous vive agitation, 15 cc de chlorure de méthylène ainsi que
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est décanté et la phase aqueuse extraite avec encore 3 x 15 cc de chlorure de méthylène. Les phases organiques rassemblées aont <EMI ID=132.1>
7 ml d'éthanol anhydre, on ajoute 14 ml d'hydrazine anhydre ec 7 ml d'éthanol anhydre. Le mélange réactionnel ainsi formé est
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jusqu'à obtention d'une réaction de Meyer négative sur la phase aqueuse acidifiée.
Les phases organiques sont séchées sur MgS04 et évaporées à sec sous pression réduite.
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est unitache en chromatographie sur couche mince.
Exemple 2 :
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nitrite de sodium.
On laisse agiter pendant 25 minutes avant de revenir à un pH de 8,5 par addition d'une solution de bicarbonate de
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La phase organique est séchée sur MgS04 et filtrée. On y ajoute
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sous vide, jusqu'à l'obtention de 4 ml environ.
Cette solution est alors laissée pendant 24 heures
au réfrigérateur.
La réaction étant alors terminée, on ajoute 50 ml de chlorure de méthylène et on lave plusieurs fois avec le même volume d'eau déminéralisée puis une fois avec une solution saturée
<EMI ID=138.1>
Les phases organiques sont séchées sur MgS04, filtrées puis évaporées sous vide.
On recueille ainsi 300 mg de produit brut auxquels on
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Le précipité est lavé dix fois avec 50 ce d'éther diéthylique anhydre.
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VLE pratiquement pur et exempt de leucinate d'éthyle.
Après libération des bases, ces dernières peuveat être chromatographiées sur gel de silice (10 g de Si02) et éluées avec
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Propriétés physico-chimiques de la VLE Point de fusion : � 169[deg.]C
<EMI ID=143.1>
938 (68) ; 772 (19) ; 709 (25) ; 651 (43) ; 571 (69).
<EMI ID=144.1>
<EMI ID=145.1>
Propriétés physico-chimiques de la VLn-But
<EMI ID=146.1> <EMI ID=147.1>
CH3 isopropyl).
Exemple 5 :
<EMI ID=148.1>
<EMI ID=149.1>
Propriétés physico-chimiques de la VSE :
CECI..
<EMI ID=150.1>
3460 ; 3400 ; 2965 ; 2935 ; 2880 ; 1730 ; 1665 ; 1605.
<EMI ID=151.1>
<EMI ID=152.1>
<EMI ID=153.1>
Propriétés physico-chimiques de la VGE :
Point de fusion : 149[deg.]C
<EMI ID=154.1>
Propriétés physico-chimiques de la VPE :
Point de fusion : 154[deg.]C
<EMI ID=155.1>
217,5 (4,67) ; 265 (4,13) ; 286,5 (3,99) ; 295,5 (3,95).
Spectre infra-rouge (KBr, cm-1) .
3560 ; 3460 ; 3400 ; 2860 ; 2830 ; 1730 ; 1650 ; 1610 ; 1500 ; 1455.
<EMI ID=156.1>
958(17) ; 944(41) ; 930(35) ; 871(64) ; 651(41) ; 588(41)
571(53) ; 401(100).
<EMI ID=157.1>
4,9
<EMI ID=158.1>
<EMI ID=159.1>
<EMI ID=160.1>
Z1
<EMI ID=161.1>
<EMI ID=162.1>
4,62
<EMI ID=163.1>
<EMI ID=164.1>
<EMI ID=165.1>
<EMI ID=166.1>
<EMI ID=167.1>
Propriétés physico-chimiques de la V-Tyr E
<EMI ID=168.1>
3460, 3400, 3040, 2950, 2840, 1715, 1660, 1610, 1500, 1455, 1225. Spectre de résonance magnétique nucléaire (360 MHz) :
<EMI ID=169.1>
(V-Trypt E)
<EMI ID=170.1>
<EMI ID=171.1>
<EMI ID=172.1>
225 (5,15) ; 267 (4,65) ; 280 (ep) ; 290 (4,55). Spectre de masse (m/e) :
<EMI ID=173.1>
3460, 3400, 3040, 2960, 2940, 2880, 1725, 1660, 1610, 1500, 1455,
1225, 740 <EMI ID=174.1>
<EMI ID=175.1>
<EMI ID=176.1>
<EMI ID=177.1>
1730, 1710, 1660, 1610, 1495, 1455, 1220, 740. Spectre de résonance magnétique nucléaire (360 MHz) :
<EMI ID=178.1>
226 (4,95) ; 267 (4,57) ; 285 (4,45) ; 296 (4,40).
<EMI ID=179.1>
<EMI ID=180.1>
Propriétés physico-chimiques de la VILE
<EMI ID=181.1>
226 (4,94) ; 266 (4,56) ; 285 (4,44) ; 295 (4,38).
<EMI ID=182.1>
3460, 3440, 3040, 2960, 2940, 2880, 1730, 1665, 1610, 1500, 1455,
1225, 745.
<EMI ID=183.1>
225 (4,77) ; 269 (4,30) ; 290 (4,20) ; 320 (ep).
<EMI ID=184.1>
0,93 (8H,m).
<EMI ID=185.1>
<EMI ID=186.1>
Propriétés physico-chimiques de la V-Val-Trypt-E
<EMI ID=187.1>
3480, 3400, 2960, 2940, 2870, 1735, 1725, 1660, 1610, 1500, 1455,
1230.
<EMI ID=188.1>
En appliquant le mode opératoire général et en préparant l'azoture à partir de 700 mg de monohydrazide, le couplage avec
<EMI ID=189.1>
60 heures fournie 213 mg de V-Leu-Ala-Leu-Ala-E pure. La purification est effectuée par passage du produit brut d'abord sur
<EMI ID=190.1>
identique en utilisant comme éluant un mélange isopropanol-acétate d'éthyle-cyclohexane (40:20:40).
<EMI ID=191.1>
285-288 (4,12) ; 296 (4,07)
Spectre de masse (DCI à l'isobutane, ionisation moléculaire)
<EMI ID=192.1> 6.88 (d), 7.00 (d), 7.39 (d), 7.49 (d), 7.53 (d), 8.02 (s),
9.57 (s).
Exemple 19 :
<EMI ID=193.1>
d'éthyle (V-Tryp-Tryp-E).
En appliquant le mode opératoire général et en utilisant 1 g d'hydrazide et 543 mg de L-tryptophyl-L-tryptophanate d'éthyle, on isole 268 mg de V-Tryp-Tryp-E pure. La purification est effectuée par passage sur une colonne de silice en utilisant
<EMI ID=194.1>
puis un mélange identique en proportion 86:14.
Propriétés physico-chimiques
Spectre UV (MeOH) : max 272 (4,38), 278 (4,37), 2,90 (4,31)
<EMI ID=195.1>
498, 165
Spectre IR (KBr) : 3410, 2970, 2880, 1725, 1665, 1615, 1500,
<EMI ID=196.1>
(V-Tryp-Gly-E)
La condensation de 596 mg d'hydrazide et de 226 mg
<EMI ID=197.1>
d'éthyle (V-Val-Tryp-E)
A partir de 500 mg de l'hydrazide de la désacétyl-VLB et
<EMI ID=198.1>
V-Val-Tryp-E pure après passage sur colonne chromatographique.
<EMI ID=199.1>
Exemple 22 :
<EMI ID=200.1>
En appliquant le mode opératoire général mais en utilisant l'acide aminé non estérifié, on obtient la V-Trypt Ac
<EMI ID=201.1>
<EMI ID=202.1>
3400, 2860, 2820, 2760, 1720, 1650, 1605, 1590, 1500, 1455, 1225,
780.
Exemple 23 :
N-(vinblastinoyl-23)-L-valinate d'éthyle
<EMI ID=203.1>
La phase organique est séchée sur Na2S04 et concentrée sous vide.
Le produit est purifié par chromatographie sur couche mince en utilisant comme éluant un mélange isopropanol/acétate d'éthyle/ cyclohexane (40/20/40). On recueille ainsi 29 mg de N-(vinblastinoyl-
23)-L-valinate d'éthyle.
Spectre de masse : ionisation moléculaire à l'isobutane :
<EMI ID=204.1>
0,97(3H,d), 0,95(3Hd), 0,90(3H,t), 0,81(3H,t).