LT6013B - Ypatingai gryno dihidrokvercetino gamybos būdas - Google Patents
Ypatingai gryno dihidrokvercetino gamybos būdas Download PDFInfo
- Publication number
- LT6013B LT6013B LT2012035A LT2012035A LT6013B LT 6013 B LT6013 B LT 6013B LT 2012035 A LT2012035 A LT 2012035A LT 2012035 A LT2012035 A LT 2012035A LT 6013 B LT6013 B LT 6013B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- eluate
- product
- dihydroquercetin
- sorbent
- solution
- Prior art date
Links
- CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N (+)-taxifolin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C(O)=C1 CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N 0.000 title abstract description 32
- XCGZWJIXHMSSQC-UHFFFAOYSA-N dihydroquercetin Natural products OC1=CC2OC(=C(O)C(=O)C2C(O)=C1)c1ccc(O)c(O)c1 XCGZWJIXHMSSQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical group CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 33
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract description 8
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 abstract description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 4
- 239000011121 hardwood Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- PADQINQHPQKXNL-LSDHHAIUSA-N (+)-dihydrokaempferol Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C=C1 PADQINQHPQKXNL-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 3
- FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N (S)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N Chrysin Natural products C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N Pinocembrin Natural products Cc1cc(C)c2C(=O)C[C@H](Oc2c1)c3ccccc3 FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UIDUJXXQMGYOIN-UHFFFAOYSA-N aromadendrin Natural products CC1(C)C2C1CCC(C)C1C2C(C)CC1 UIDUJXXQMGYOIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 3
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RAYJUFCFJUVJBB-UHFFFAOYSA-N dihydrokaempferol Natural products OC1Oc2c(O)cc(O)cc2C(=O)C1c3ccc(O)cc3 RAYJUFCFJUVJBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 3
- -1 flavonoid compounds Chemical class 0.000 description 3
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 description 3
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 description 3
- URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N pinocembrin Chemical compound C1([C@@H]2CC(=O)C3=C(O)C=C(C=C3O2)O)=CC=CC=C1 URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 3
- IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N rutin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 2
- JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N (3r)-2-(3,5-dihydroxy-4-methoxyphenyl)-8-[(2r,3r,4r)-3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2h-chromen-4-yl]-3,4-dihydro-2h-chromene-3,5,7-triol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=C(O)C=C1C1[C@H](O)CC(C(O)=CC(O)=C2[C@H]3C4=C(O)C=C(O)C=C4O[C@@H]([C@@H]3O)C=3C=CC(O)=CC=3)=C2O1 JPFCOVZKLAXXOE-XBNSMERZSA-N 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 229920001991 Proanthocyanidin Polymers 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229940093797 bioflavonoids Drugs 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
- C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
- C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Abstract
Šis išradimas priklauso chromatografinio (2R,3R)-dihidrokvercetino išskyrimo sričiai, biologiškai aktyvių papildų gamybai medicinos ir farmaciniais tikslais, taip pat maisto ir kosmetikos pramonei. Siūlomas naujas (2R,3R)-dihidrokvercetino aukšto našumo išgavimo būdas, kurio metu būtų gaunamas ypatingai grynas produktas. Dihidrokvercetino turinčią kietą žaliavą tirpina etilo spirito vandens tirpale, esant 20 - 29 oC temperatūrai, iki dihidrokvercetino dalis tirpale pasiekia 50 - 250 g/l. Po to vykdant chromatografinį atskyrimą esant 100 - 500 kg/cm2 slėgiui kolonėlėje su dinaminiu ašiniu spaudimu, kur kolonėlė yra užpildyta grįžtamosios fazės sorbentu, kai sorbento eliuavimą vykdo iš anksto degazuotu ir modifikuotu etilo spirito vandens tirpalu. Eliuato frakcijų surinkimas vykdomas refraktometrinės ir masės spektrometrinės analizės būdais su po to sekančiu produkto kristalizavimu šaldant, filtracija ir liofilizacija. Šiuo būdu gaunamas produktas turi ne mažiau negu 99,9 % (2R,3R)-dihidrokvercetino.
Description
Technikos sritis
Išradimas priklauso chromatografinio (2R,3R)-dihidrokvercetino išskyrimo sričiai, biologiškai aktyvių papildų gamybai medicinos ir farmaciniais tikslais, taip pat maisto ir kosmetikos pramonei.
Technikos lygis (2R,3R)-dihidrokvercetinas ((+)-(2R,3R)-trans- dihidrokvercetinas), taip pat žinomas kaip „Taksifolinas“, priklauso bioflavonoidams ir yra natūralios kilmės etaloninis antioksidantas.
Yra žinomas flavonoidinių junginių išskyrimo iš augalinių žaliavų būdas, būtent proantocianidinų išskyrimo būdas (Patentas US Nr. 5912363, C01D 311/62, 1999). Šiuo būdu yra atliekamas kietų augalinių medžiagų ir vandens mišinio kaitinimas esant aukštam slėgiui ir sumažintam deguonies kiekiui, tirpalo separacija, filtracija ir adsorbcija bei po to sekantis adsorbuoto proantocianidino eliuavimas, poliarinio tirpiklio pagalba. Nors šis būdas leidžia išskirti flavonoidinius junginius, kuriems priskiriamas ir dihidrokvercetinas, iš įvairių, daug antioksidantų turinčių augalinių medžiagų, tokių kaip vynuogių kauliukai, riešutų kevalai, medžio žievė ir daugelis kitų, visgi gaunamų produktų grynumas neviršija 88 - 92%.
Žinomi keli būdai išgauti dihidrokvercetinui, kurio grynumas būtų ne daugiau negu 97%.
Vienu būdu dihidrokvercetinas yra išgaunamas iš susmulkintos lapuočių medienos, ekstrahuojant organiniu tirpikliu iš karto po to, kai žaliava apdorojama vandeniu, toliau garinant ekstraktą ir kristalizuojant iš karšto vandens (Patentas ΡΦ N 2038094, A 61 K 35/78, 1995).
Kitu būdu dihidrokvercetinas yra išgaunamas vykdant lapuočių medienos pjuvenų ekstrakciją kaitinant vandeniu, atšaldant, filtruojant ir valant poliamido sorbentu, eliuuojant produktą etilacetatu ir kristalizuojant iš karšto vandens. (Patentas ΡΦ N 2000797, A 61 K 35/78, 1993).
Dar kitu būdu dihidrokvercetinas yra išgaunamas apdorojant lapuočių medieną 96,6% etilo spiritu 5 kartus. Prieš apdorojant, mediena yra susmulkinama iki 1-5 mm dydžio dalelių. Toliau, 30-60 minučių, pastoviai maišant, yra vykdoma ekstrakcija esant 50-60°C temperatūrai tol, kol yra gaunamas norimas produktas. Gavus ekstraktą yra vykdoma jo filtracija ir propilenglikolio pridėjimas. Iš gauto mišinio pašalinus etilo spiritą, į gautą junginį yra dedamas 5% natrio chlorido tirpalas. Išmaišius ir išfiltravus, gautas filtratas yra praleidžiamas pro poliamido sorbentą tam, kad būtų nusodintas bioflavonoidinis kompleksas. Sorbentą praplovus distiliuotu vandeniu ir praskiestu etilo spirito vandens tirpalu, jis yra džiovinamas ir iš jo yra išplaunamas bioflavonoidinis kompleksas. Išradimas leidžia padidinti bioflavonoidinio komplekso kokybę, iš jo pašalinant nepageidaujamas medžiagas (Patentas ΡΦ 2186097, C11B9/00, A23L1/30, A23L1/29, 2001).
Bendras pateiktų būdų trūkumas yra tas, kad gautame produkte esama įvairios kilmės pašalinių medžiagų, tarp jų ir flavonoidinių junginių.
Yra žinomas aukšto grynumo dihidrokvercetino gavimo būdas, kurio metu yra vykdomas išankstinis lapuočių medienos apdorojimas verdančiu vandeniu. Sekantys žingsniai apima acetono ekstrakciją vandens tirpalu ir vandens-acetono ekstrakto išvalymą skysčių chromatografija naudojant grįžtamosios fazės Sverisorb C2 - C18 tipo sorbentus, kurių dalelių dydis yra 5 -10 μιτι, ir kaip judriąją fazę naudojant 30 50% acetono tirpalą 0,1% trifluor-acto rūgšties tirpale bei pašalinant acetoną garinimo būdu. Techninis rezultatas - gaunamas didesnio negu 99,5% grynumo dihidrokvercetinas (Patentas ΡΦ Ns 2114631 A61K35/78, C07D311/32, 1997 m.).
Esminiai šio būdo trūkumai yra proceso sudėtingumas ir su tuo susijęs nepakankamas produkto gamybos našumas; be to, yra nežinoma dihidrokvercetino stereoizomerų dalies proporcija gaunamame produkte.
Šioje paraiškoje pateiktam ypatingai gryno dihidrokvercetino gavimo būdui pats artimiausias yra būdas, kurio metu alifatinio spirito C1-C3 vandens tirpale yra gaunamas dihidrokvercetino turinčios žaliavos tirpalas, esant 1-20 % tūrio spirito koncentracijai tirpale. Taip pat, termostatinėje kolonėlėje yra atliekami vienas ar keli chromatografijos ciklai su sorbentu, pastarąjį eliuuojant alifatinio spirito C1-C3 vandens tirpalu, kurio koncentracija yra ne daugiau negu 12-30 % tūrio. Proceso pabaigoje, atlikus eliuato garinamą, gautasis produktas yra džiovinamas. Šio būdo privalumas yra aukštas gaunamo produkto grynumas: 98,5 - 99,5 %. (ΠβτθΗΤ ΡΦ Ns
2349330 A61K36/00, B01D15/08, B01D15/42, 2007 r.)
Tarp jo esminių trūkumų yra proceso sudėtingumas, nepakankamai aukšta 89-93% produkto išeiga, antioksidantinis aktyvumas, kuris yra susijęs su visų optinių dihidrokvercetino izomerų buvimu gautame produkte, ir nedidelis gaunamo tirpalo išeigos greitis - 20 ml/min.
Be to, prie visų aprašytų chromatografinio (2R,3R)- dihidrokvercetino išgavimo būdų esminių trūkumų reikia priskirti ir srautinės ultravioletinės detekcijos naudojimą, dėl kurios įvyksta dalinis produkto skilimas.
Šio išradimo tikslas yra sukurti (2R,3R)-dihidrokvercetino aukšto našumo išgavimo būdą, kurio metu būtų gaunamas ypatingai grynas produktas.
Išradimo aprašymas
Našus, ypatingai gryno (2R,3R)-dihidrokvercetino gavimas yra pasiekiamas etilo spirito vandens tirpale, kurio koncentracija yra 20 - 95 % tūrio esant 20 - 29°C temperatūrai, tirpinant kieto dihidrokvercetino turinčią žaliavą tol, kol dihidrokvercetino sudėtis tirpale pasiekia 50 - 250 g/l, po to vykdant chromatografinį atskyrimą kolonėlėje su dinaminiu ašiniu slėgiu esant 100 - 500 kg/cm2 slėgiui, kur kolonėlė yra užpildyta grįžtamos fazės sorbentu su padidintu poliarinių jungčių išlaikymu, kur sorbento dalelių dydis yra 10-20 pm, o porų dydis 120-200 A, toliau vykdant sorbento eliuavimą iš anksto degazuotu ir modifikuotu etilo spirito vandens tirpalu, eliuato frakcijų surinkimą vykdant refraktometrinės ir masės spektrometrinės analizės būdu, o proceso pabaigoje atliekant produkto kristalizaciją šaldymu, filtraciją ir liofilizaciją.
Eliuento modifikavimą yra geriau vykdyti metanoliu, izopropanoliu, acto rūgštimi, skruzdžių rūgštimi, kai jų sudėtis eliuate yra 0,001 - 5 % tūrio.
Šiuo būdu gautas produktas turi ne mažiau 99,9 % ((+)-(2R,3R)-transdihidrokvercetino.
Vykdydami pirminius šio būdo laboratorinius bandymus, išradimo autoriai netikėtai pastebėjo, kad gautame produkte yra vien tik (2R,3R)-dihidrokvercetinas ir visiškai nėra jo optinių stereoizomerų; buvo vykdomas dihidrokvercetino degazuoto vandens-spirito tirpalo chromatografinis atskyrimas, temperatūrų diapazone 20 - 29° C ir esant 100 - 500 kg/cm2 slėgiui kolonėlėje su dinaminiu ašiniu slėgiu, kur kolonėlė buvo užpildyta grįžtamos fazės sorbentu su padidintu poliarinių jungčių išlaikymu, kur sorbento dalelių dydis buvo 10-20 μιτι, o porų dydis buvo 120-200 A, kur sorbento eliuavimas buvo vykdomas modifikuotu, iš anksto degazuotu etilo spirito vandens tirpalu, o eliuato frakcijų surinkimas buvo vykdomas refraktometrinės ir masės spektrometrinės analizės būdu, po to sekant kristalizacijos šaldymu, filtracijos ir liofilizacijos žingsniams.
Etilo spirito 20 - 95 % tūrio koncentracijos ir 50 - 250 g/l dihidrokvercetino tūrio gaunamame tirpale reikšmių diapazonai parinkti pagal proceso maksimalaus našumo sąlygą, dėl skirtingo pirminio techninio dihidrokvercetino ir priemaišų tirpumo.
Išankstinis gaunamo vandens-spirito dihidrokvercetino ir eliuato tirpalo degazavimas leidžia išvengti produkto oksidacijos dėl ištirpusio deguonies ir ženkliai padidina (2R,3R)-dihidrokvercetino refraktometrinio ir masės spektrometrinio nustatymo eliuate tikslumą, o tai leidžia iš esmės padidinti gamybos našumą, produkto grynumą ir jo išeigą.
Chromatografinio atskyrimo proceso slėgio reikšmių diapazonas, 100-500 kg/cm2, buvo nustatytas preparacinėje kolonoje YMC DAU 100-700 su dinaminiu ašiniu spaudimu, naudojant grįžtamos fazės sorbentą su padidintu poliarinių jungčių išlaikymu YMC ODC-AQ-HG, kurio dalelių dydis buvo 10-20 μιτι, o porų dydis 120200 A. Pastarieji buvo nustatyti atsižvelgiant j produkto prigimtį, į eliuato padavimo maksimalų greitį, 150 - 250 ml/min diapazone, ir kurie buvo susiję su galimu trijų dihidrokvercetino stereoizomerų, turinčių kitokį poliariškumą negu (2R,3R)dihidrokvercetinas, buvimu.
Ypač svarbu yra tai, kad gauto dihidrokvercetino tirpinimo ir jo chromatografinio išskyrimo procesai vyktų 20 - 29° C temperatūrų diapazone. Jeigu procesų temperatūra bus žemesnė negu 20° C, tuomet bus pastebimas ženklus proceso našumo sumažėjimas, o jeigu temperatūra viršys 29° C, tuomet išaugs produkto stereoizomerizacijos tikimybė.
Eliuato frakcijų surinkimas refraktometrinės, spektrometrinės ir masės spektrometrinės analizės būdais vienu metu, netaikant kruopščios distiliacijos kolonėlėje, leidžia antrą kartą panaudoti tirpalą iš eliuato ir ženkliai padidinti frakcijos su molekuliniu svoriu, 100 - 1000 vienetų diapazone, analizės tikslumą, taip pat vykdyti atskirą priemaišų, kaip švarių produktų išskyrimą. Nurodytos procedūros leidžia padidinti produkto išeigą iki 99,5 - 99,9 %.
Iš eliuato frakcijos, gautos po chromatografinio atskyrimo, etilo spiritas ir vanduo yra pašalinami plokštelinio-rotorinio siurblio vakuume, rotoriumi Hei-VAP Value HB/G3 Heidolph, esant 30 - 30° C temperatūrai. Iš likusiųjų frakcijų tirpiklis distiliuojamas rotoriumi Laborota 20 ( LR 20 eco).
Surinktas ir j specialias talpas sufasuotas ((2R,3R)-dihidrokvercetinas yra perkeliamas į liofilizatorių, kur specialios fasavimo talpos automatiškai yra užsandarinamos po džiovinimo giliame vakuume, esant -55° C temperatūrai.
Produkto cheminis grynumas yra tiesiogiai kontroliuojamas chromatografinės analizės metu, kuomet eliuato srautas kreipiančiąja yra padalinimas nukreipiant j frakcijų kolektorių ir j detektorius. Refraktometriniai, spektrometriniai ir masės spektrometriniai detektoriai yra naudojami vienu metu. Produktas papildomai yra tikrinamas dujų-garų osmometru K-7000 KNAUER tam, kad nustatyti ar neturi polimerų (surištų dihidrokvercetino monomerų).
Antioksidantinis aktyvumas vertinamas spektrofluorimetru FLUOstar Optima pagal žinomą metodiką ORAC (patentas US Nr. 7132296, G01N 33/00, 2006).
Siūlomu būdu gautas ne mažesnio negu 99,9% grynumo, neatsižvelgiant j rišamąjį vandenį, (2R,3R)-dihidrokvercetinas yra laikomas -30° C temperatūroje.
Eliuato modifikavimas vykdomas metanoliu, izopropanoliu, acto rūgštimi, skruzdžių rūgštimi ar kitais lakiais junginiais, suderinamais su masės spektrometriniu detektoriumi, kol jų kiekis eliuate tampa 0,001 - 5 % tūrio, dėl ko sumažėja dihidrokvercetino sulaikymo grįžtamosios fazės sorbente laikas ir tuo pačiu ženkliai padidėja šio būdo našumas.
Šiuo būdu gautas produktas turi ne mažiau negu 99,9 % ((+)-(2R,3R)-transdihidrokvercetino, neatsižvelgiant j rišamąjį vandenį.
Galimi išradimo panaudojimo variantai
Išradimo panaudojimo variantai, patvirtinantys jo pramoninį pritaikomumą, iliustruojami sekančiais pavyzdžiais.
pavyzdys
400 ml 50% spirito tirpale ištirpiname 62 gramus pusprodukčio, turinčio 70,07 % (2R,3R)-dihidrokvercetino, 3,14 % aromadendrino, 0,96 % eriodiktiolio, 0,39 % kvercetino, 0,15 % naringenino, 0,01 % kempferolio ir 0,24 % pinocembrino.
Į 100x350 mm koloną su dinaminiu ašiniu spaudimu, užpildytą sorbentu YMC ODC-AQ-HG, kurio dalelių dydis yra 20 pm, o porų skersmuo yra 200 A, 200 ml/min. greičiu yra leidžiamas aukščiau pagamintas mėginys. Po to per koloną yra praleidžiamas eliuatas (etanolis : metanolis : vanduo santykiu 50 : 1 : 49) 200 ml/min. greičiu. Iš kolonos pagrindinis kanalas yra nukreiptas j frakcijų kolektorių, o papildomas - j refraktometrinį ir masės spektrometrinį detektorius. Detektorių rodmenų pagrindu yra surenkama (2R,3R)- dihidrokvercetino turinti frakcija.
Surinkta frakcija yra garinama vakuume iki visiško spirito pašalinimo, po to yra atvėsinama iki 4° C temperatūros, o iškritusios nuosėdos yra filtruojamos ir džiovinamos liofilizatoriuje, esant - 55° C temperatūrai.
Tokiu būdu gaunama 43,1 g tikslinio produkto, turinčio 99,60 % (2R,3R)dihidrokvercetino ir 0,35 % (2S,3S)-dihidrokvercetino. (2R,3R)-dihidrokvercetino išeiga sudaro 98,5%.
pavyzdys
300 ml 70% spirito tirpale ištirpiname 82 gramus pusprodukčio, turinčio 88,09 % (2R,3R)-dihidrokvercetino, 2,49% aromadendrino, 0,86 % eriodiktiolio, 0,59 % kvarcetino, 0,19 % naringenino, 0,03 % kempferolio ir 0,07 % pinocembrino.
Į 100x350 mm koloną su dinaminiu ašiniu spaudimu, užpildytą sorbentu YMC ODC-AQ-HG, kurio dalelių dydis yra 10 pm, o porų skersmuo yra 120 A, 150 ml/min.
greičiu yra leidžiamas aukščiau pagamintas mėginys. Po to per koloną praleidžiamas eliuatas (etanolis : izopropanolis : vanduo santykiu 70 : 5 : 25) 150ml/min. greičiu. Iš kolonos pagrindinis kanalas yra nukreiptas į frakcijų kolektorių, o papildomas - į refraktometrinį ir masės spektrometrinj detektorius. Detektorių rodmenų pagrindu yra surenkama (2R,3R)- dihidrokvercetino turinti frakcija.
Surinkta frakcija yra garinama vakuume iki visiško spirito pašalinimo, po to yra atvėsinama iki 4° C temperatūros, o iškritusios nuosėdos yra filtruojamos ir džiovinamos liofilizatoriuje esant - 55° C temperatūrai.
Tokiu būdu gaunama 71,6 g produkto, turinčio 99,81 % (2R,3R)dihidrokvercetino ir 0,014 % (2S,3S)- dihidrokvercetino. (2R,3R)-dihidrokvercetino išeiga sudaro 99,0%.
pavyzdys
500 ml 40% spirito tirpale ištirpiname 80 gramus pusprodukčio, turinčio 92,43 % (2R,3R)-dihidrokvercetino, 2,38% aromadendrino, 0,87 % eriodiktioplio, 0,53 % kvercetino, 0,18 % naringenino, 0,03 % kempferolio ir 0,07 % pinocembrino.
j 100x350 mm koloną su dinaminiu ašiniu spaudimu, užpildytą sorbentu YMC ODC-AQ-HG, kurio dalelių dydis yra 10 pm, o porų skersmuo yra 120 A, 250 ml/min. greičiu yra leidžiamas aukščiau pagamintas mėginys. Po to, per koloną praleidžiamas eliuatas (etanolis : acto rūgštis : vanduo santykiu 40 : 1 : 59) 250 ml/min. greičiu. Iš kolonos pagrindinis kanalas yra nukreiptas j frakcijų kolektorių, o papildomas - j refraktometrinį ir masės spektrometrinį detektorius. Detektorių rodmenų pagrindu yra surenkama (2R,3R)- dihidrokvercetino frakcija.
Surinkta frakcija yra garinama vakuume iki visiško spirito pašalinimo, po to yra atvėsinama iki 4° C temperatūros, iškritusios nuosėdos yra filtruojamos ir džiovinamos liofilizatoriuje.
Tokiu būdu gaunama 72,76 g tikslinio produkto, turinčio 99,91 % (2R,3R)dihidrokvercetino, 0,012 % (2S,3S)-dihidrokvercetino. (2R,3R)-dihidrokvercetino išeiga sudaro 99,0%.
Esminiai išradimo požymiai taip pat yra:
- gaunamo dihidrokvercetino tirpalo paruošimo režimas, o būtent etilo spirito vandens tirpale reikšmė yra 20-95%, dihidrokvercetino dalis vandens tirpale yra 50 250 g/l ir tirpinimo temperatūra yra 20 - 29° C;
- išankstinis gauto dihidrokvercetino vandens-spirito tirpalo degazavimas;
- chromatografinio atskyrimo proceso slėgio diapazonas -100 - 500 kg/cm2;
- grįžtamosios fazės sorbento su padidintu poliarinių jungčių išlaikymu, kurio dalelių dydis yra 10-20 μηι, o porų dydis yra 120-200 A, naudojimas;
- išankstinis eliuato degazavimas;
- išankstinis eliuato modifikavimas;
- eliuato modifikavimas metanoliu, izopropanoliu, acto rūgštimi, skruzdžių rūgštimi, kol jų dalis eliuate sudaro 0,001 - 5 % tūrio;
- eliuato frakcijų surinkimas, vykdomas vienu metu atliekamų refraktometrinės, spektrometrinės ir masės spektrometrinės analizių būdu su srautų atskyrimu;
- produkto kristalizavimas šaldymu, filtracija ir liofilizacija.
Taigi, techninis šio išradimo rezultatas yra ypatingai švaraus dihidrokvercetino gavimo būdas, kuomet gaunamas vien tik ((+)-(2R,3R)-transdihidrokvercetinas, kurio kiekis yra ne mažesnis negu 99,9 %, (2R,3R)dihidrokvercetino išeiga - 99-99,5%, o tirpalo išeigos našumas yra 150 - 250 ml/min diapazone, taip pat ir produktas, gautas nurodytu būdu.
Informacijos šaltiniai
Patentas US Ns 5912363 , C01D 311/62, 1999 m.
Patentas ΡΦ N 2038094, A 61 K 35/78, 1995 m.
Patentas ΡΦ N 2000797, A 61 K 35/78, 1993 m.
Patentas ΡΦ 2186097, C11B9/00, A23L1/30, A23L1/29, 2001 m. Patentas ΡΦ Ns 2114631 A61K35/78, C07D311/32, 1997 m. Patentas US Ns 7132296, G01N 33/00, 2006 m.
Claims (3)
1. Ypatingai gryno dihidrokvercetino gavimo būdas, dihidrokvercetino turinčią kietą žaliavą tirpinant etilo spirito vandens tirpale, kurio koncentracija yra 20 - 95 % tūrio esant 20 - 29° C temperatūrai, iki dihidrokvercetino dalis tirpale pasiekia 50 - 250 g/l, po to vykdant chromatografinj atskyrimą esant 100 - 500 kg/cm2 slėgiui kolonėlėje su dinaminiu ašiniu spaudimu, kur kolonėlė yra užpildyta grįžtamosios fazės sorbentu su padidintu poliarinių jungčių išlaikymu, kur sorbento dalelių dydis yra 10 - 20 pm, o porų dydis yra 120 - 200 A, sorbento eliuavimą vykdant iš anksto degazuotu ir modifikuotu etilo spirito vandens tirpalu, eliuato frakcijų surinkimą vykdant refraktometrinės ir masės spektrometrinės analizės būdais su po to sekančiu produkto kristalizavimu šaldant, filtracija ir liofilizacija.
2. Būdas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad eliuato modifikavimas yra vykdomas metanoliu, izopropanoliu, acto rūgštimi, kol jų kiekis eliuate pasiekia 0,001 - 5 % tūrio.
3. Produktas, gautas būdu pagal 1 ir 2 punktą, turintis ne mažiau negu 99,9 % ((+)-(2R,3R)-trans-dihidrokvercetino.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LT2012035A LT6013B (lt) | 2012-05-18 | 2012-05-18 | Ypatingai gryno dihidrokvercetino gamybos būdas |
| EP12806719.6A EP2850069A1 (en) | 2012-05-18 | 2012-11-21 | Process for preparing of highly pure dihydroquercetin |
| PCT/LT2012/000008 WO2013172693A1 (en) | 2012-05-18 | 2012-11-21 | Process for preparing of highly pure dihydroquercetin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LT2012035A LT6013B (lt) | 2012-05-18 | 2012-05-18 | Ypatingai gryno dihidrokvercetino gamybos būdas |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LT2012035A LT2012035A (lt) | 2013-11-25 |
| LT6013B true LT6013B (lt) | 2014-03-25 |
Family
ID=47436155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LT2012035A LT6013B (lt) | 2012-05-18 | 2012-05-18 | Ypatingai gryno dihidrokvercetino gamybos būdas |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2850069A1 (lt) |
| LT (1) | LT6013B (lt) |
| WO (1) | WO2013172693A1 (lt) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108623548B (zh) * | 2018-05-02 | 2022-05-06 | 齐齐哈尔大学 | 一种分离花生壳中手型圣草酚的方法及其应用 |
| CN113185485B (zh) | 2021-05-10 | 2022-03-04 | 合肥立方制药股份有限公司 | 一种二氢槲皮素的半合成方法 |
| CN113214210B (zh) | 2021-05-10 | 2022-03-04 | 合肥立方制药股份有限公司 | 一种二氢槲皮素的制备方法 |
| CN114774490B (zh) * | 2022-04-19 | 2025-01-28 | 沈阳市丽晨生物医药科技有限公司 | 用于抗癌抗氧化抗心脑血管疾病的二氢槲皮素制备方法 |
| CN121575061B (zh) * | 2026-01-23 | 2026-04-24 | 厦门欧米克生物科技有限公司 | 一种生物转化柚皮素生产圣草酚及二氢槲皮素的方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2000797C1 (ru) | 1992-05-26 | 1993-10-15 | Отдел химии древесины Иркутского института органической химии СО РАН | Способ выделени дигидрокверцетина |
| RU2038094C1 (ru) | 1994-02-08 | 1995-06-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Инкор" | Способ получения дигидрокверцетина |
| RU2114631C1 (ru) | 1997-07-22 | 1998-07-10 | Нонна Арсеньевна Тюкавкина | Способ выделения дигидрокверцетина |
| RU2186097C1 (ru) | 2001-07-06 | 2002-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Сибларекс" | Состав биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий и способ получения биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий |
| US7132296B2 (en) | 2002-02-15 | 2006-11-07 | Medical Products Manufacturing, Llc | Method for assaying the antioxidant capacity of a sample |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5912363A (en) | 1997-08-29 | 1999-06-15 | Interhealth Nutraceuticals | Method for extraction of proanthocyanidins from plant material |
-
2012
- 2012-05-18 LT LT2012035A patent/LT6013B/lt not_active IP Right Cessation
- 2012-11-21 WO PCT/LT2012/000008 patent/WO2013172693A1/en not_active Ceased
- 2012-11-21 EP EP12806719.6A patent/EP2850069A1/en not_active Withdrawn
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2000797C1 (ru) | 1992-05-26 | 1993-10-15 | Отдел химии древесины Иркутского института органической химии СО РАН | Способ выделени дигидрокверцетина |
| RU2038094C1 (ru) | 1994-02-08 | 1995-06-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Инкор" | Способ получения дигидрокверцетина |
| RU2114631C1 (ru) | 1997-07-22 | 1998-07-10 | Нонна Арсеньевна Тюкавкина | Способ выделения дигидрокверцетина |
| RU2186097C1 (ru) | 2001-07-06 | 2002-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Сибларекс" | Состав биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий и способ получения биофлавоноидного комплекса сибел для пищевых и парфюмерных изделий |
| US7132296B2 (en) | 2002-02-15 | 2006-11-07 | Medical Products Manufacturing, Llc | Method for assaying the antioxidant capacity of a sample |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2013172693A1 (en) | 2013-11-21 |
| LT2012035A (lt) | 2013-11-25 |
| EP2850069A1 (en) | 2015-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Determination of phenolic acids and flavonoids in raw propolis by silica-supported ionic liquid-based matrix solid phase dispersion extraction high performance liquid chromatography-diode array detection | |
| Liu et al. | Extraction and characterization of proanthocyanidins from grape seeds | |
| JP2009035550A (ja) | プロアントシアニジンの豊富な抽出物、及び関連する調製方法 | |
| AU2008310307B2 (en) | Method to recover bioactive compounds | |
| CN105154478B (zh) | 一种高速逆流色谱和高效液相色谱联用制备高纯度羟基酪醇的方法 | |
| CN102706980A (zh) | 利用hplc测定葡萄和柑橘果实中17种酚类物质的方法 | |
| US6264853B1 (en) | Complex containing lignan, phenolic and aliphatic substances from flax and process for preparing | |
| CN103961381B (zh) | 一种负压沸腾提取制备低酸型银杏提取物的方法 | |
| US20130237712A1 (en) | Method for isolating flavonoid dihydroquercetin (taxifolin) from conifer wood species | |
| WO2013172693A1 (en) | Process for preparing of highly pure dihydroquercetin | |
| RU2593014C2 (ru) | Способ производства проантоцианидиновой полимерной композиции | |
| CN112321656A (zh) | 一种分离制备酰化花色苷的方法 | |
| CN112175028B (zh) | 一种分离制备飞燕草素-3-o-(6-o-对香豆酰)葡萄糖苷的方法 | |
| JP5337574B2 (ja) | プロアントシアニジンの分離精製方法 | |
| CN106187975B (zh) | 一种提高米糠酚类物质生物活性的制备及纯化方法 | |
| RU2308267C1 (ru) | Способ выделения биологически активных изомеров дигидрокверцетина | |
| RU2349331C1 (ru) | Способ получения дигидрокверцетина | |
| RU2114631C1 (ru) | Способ выделения дигидрокверцетина | |
| Li et al. | Evaluation of the Antioxidative and Anti-inflammatory Effects of the Extract of Ribes mandshuricum (Maxim.) Kom. Leaves. | |
| CN105646429B (zh) | 一种制备高纯度儿茶素没食子酸酯cg的方法 | |
| CN117024393A (zh) | 一种从荔枝壳中高效绿色提取原花青素的方法 | |
| Khundamri et al. | Condensed tannins in mangosteen pericarps determined from ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry. | |
| RU2317093C1 (ru) | Способ выделения биологически активных изомеров дигидрокверцетина | |
| RU2858719C1 (ru) | Способ извлечения кумарина из донника лекарственного, произрастающего на территории ХМАО-Югры | |
| Saito et al. | Determination of proline enantiomers in honey and royal jelly by LC-UV |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB1A | Patent application published |
Effective date: 20131125 |
|
| FG9A | Patent granted |
Effective date: 20140325 |
|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20170518 |