RU2000797C1 - Способ выделени дигидрокверцетина - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касаетс  способа выделени  дигидрокверцетина (ДКВ) из опилок древесины лиственницы Целью изобетени   вл етс  сокращение времени способа и повышение степени очистки ДКВ Цепь достигаетс  тем. что в охлажденный экстракт, полученный путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, внос т полиамидный порошок при соотношении 1:10, смесь перемешивают в течение 2 ч отфильтрованный полиамидный порошок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаллизуют его из гор чей воды Положительный эффект заключаетс  в сокращении времени способа с 26 ч по прототипу до 11.4 ч по за вл емому способу и в повышении степени очистки целевого продукта с 94% до 97% 2 ил

Description

Ы

О

о о J чо |

Изобретение относитс  к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности , и касаетс  способа выделени  дигидрокверцетина (ДКВ).

ДКВ обладает широким спектром биологической активности: про вл ет противовоспалительное и радиозацитное действие (журнал Фармакологи  и токсикологи . № 5. 1975, с. 607).

Известен способ выделени  ДКВ из коры Дугласооой пихты путем обработки водного экстракта коры сульфитом щелочных металлов (Патент США N: 2744919). Однако применение сульфитных реагентов о данном процессе нежелательно из-за их окисл ющей способности. ДКВ в этом случае в значительном количестве переходит в квер- цетин. Кроме того значительные различи  в химическом составе водорастворимых экстрактивных веществ коры Дугласовой пихты и древесины лиственницы не позвол ют использовать этот способ как аналог дл  выделени  ДКВ из водных экстрактов последней.

Наиболее близким к-за вл емому  вл етс  способ выделени  ДКВ путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, охлаждени  Экстракта, фильтровани , хроматографмровани  на колонке с полиамидом, элюировани  водно- ацетоновой смесью и упаривани .

Недостатками известного способа  вл етс  использование хроматографического процесса выделени  ДКВ, требующего регул рного аналитического контрол  за ходом разделени , что затрудн ет осуществление известного способа в промышленном масштабе . Применение флуориметрического метода определени  чистоты выдел емого ДКВ в прототипе не позвол ет избирательно определ ть содержание целевого продукта . Выдел емый по данному способу ДКВ требует дополнительной очистки.

Целью изобретени   вл етс  сокращение времени способа и повышение степени очистки ДКВ.

Поставленна  цель достигаетс  гем, что водную экстракцию древесины лиственницы ведут при 98-100°С с последующим выделением ДКВ путем перемешивани  водного экстракта с полиамидным порошком в адсорбере с динамическим режимом и последующей промывкой полиамида этм- лацетатом. избирательно р.аствор ющим ДКВ и не смешивающимс  с водой.

Кристаллизаци  выделенного таким образом сырого ДКВ из гор чей воды позвол ет получить продукт с содержанием основного вещества 90-96%. При этом контрол  степени чистоты ДКВ используетс 

метод ВЭЖХ, позвол ющий количественно оценить содержание ДКВ и каждой из возможных примесей.

Дл  увеличени  эффективности процесса предложена обработка водного экстракта полиамидным порошком в динамическом режиме и последующее вымывание ДКВ с высушенного полиамида этилэцетатом-рас- творителем, не смешивающимс  с водой.

Введение этой стадии предотвращает нежелательные  влени , замедл ющие процесс: уплотнение сорбента, заиливание и т.п., возникающие при пропускании водного экстракта через слой полиамида в колонке.

5 Кроме того применение этилацетата эффективнее по сравнению с использованием более пол рных растворителей (ацетон, спирты, например, изопропиловый спирт), привод щих к получению продукта с более

0

низким содержанием основного вещества

(60-65%).

Предлагаемый способ получени  ДКВ обладает следующими достоинствами: способ базируетс  на легкодоступном

5 сырье. В качестве сырь  можно использовать отходы древесины лиственницы, накапливающиес  в больших количествах на целлюлозных и деревообрабатывающих предпри ти х;

0 технологический процесс получени  ДКВ не содержит химических превращений. Выдел емый ДКВ  вл етс  нативным природным соединением, сохран ющим трансконфигурацию центра хиральности и

5 оптическую активность d а р +22,45°);

предлагаемый способ легко можно реализовать в промышленном масштабе на стандартном оборудовании;

применение водонесмешивающегос 

0 растворител , избирательно раствор ющего флавоноиды, в частности этилацетат, позвол ет получить продукт высокой степени чистоты.

П р и м е р 1. 200 г опилок древесины

5 лиственницы заливают 2 л гор чей воды и кип т т с обратным холодильником в течение 1 ч. Гор чий раствор отфильтровывают от опилок и получают водный экстракт (1,67 л) с концентрацией ДКВ 0,065%. что составл 0 ет 1,085 г.

В охлажденный водный экстракт внос т 11 г полиамидного порошка (соотношение ДКВ и порошка 1:10). Полученную смесь интенсивно перемешивают в течение 1 ч, по5 еле чего полиамидный порошок отфильтровывают и высушивают на воздухе .

Сухой полиамидный порошок заливают (220 мл) и выдерживают смог ь при перемешивании в течение 30 мин З;МРМ полиамидный порошок отфильтровывают и этилаце- татный фильтрат упаривают. Получают 1,12 г сырого продукта, содержащего 82% ДКВ, После кристаллизации сырого продукта из гор чей воды (80°С) получают 0,95 г ДКВ с чистотой 91%. Выход ДКВ 87,2% от извлеченного из древесины.

Пример 2. В услови х примера 1 из 250 г опилок и 2,5 л гор чей воды получили 2,1 л водного экстракта с концентрацией ДКВ 0.068%. Экстракт перемешивали с 13,8 г полиамидного порошка. Смыв ДКВ с высушенного полиамида провели 276 мл этила- цетата. Получили 1,51 г сырого продукта, содержащего 81,2% ДКВ. После двухкратной перекристаллизации из гор чей воды получили 1,24 г ДКВ с чистотой 94,5%. Выход ДКВ 86,6% от извлеченного из древесины.

Количественный анализ за содержанием ДКВ в выдел емых продуктах осуществл ли методом ВЭЖХ на приборе Милихром с УВ-детектором, рабоча  длина волны 290 нм, колонка 60-2,1 мм, сорбент Сепарон Cis, подвижна  фаза - ацетонитрил - 2%-на  уксусна  кислота (30:70 об). Относительна  ошибка определени  при уровне веро тности 0,95 не превышает 3%.

Как видно из примера 1 оптимальное врем  контакта при перемешивании составл ет 2 ч. Оно установлено путем контрол  за наличием в жидкой фазе, т.е. в экстракте, смешиваемом с полиамидным порошком, флавоноидных соединений с помощью экспресс-пробы: капл  экстракта наноситс  на хроматографическую бумагу, п тно высушиваетс  и обрабатываетс  1 %-ным спиртовым раствором и после подсушивани  просматриваетс  в УФ-свете. По мере снижении концентрации флавоноидных соединений на бумагу в одно п тно производ т нанесение нескольких капель. Отсутствие  рко-желтого свечени  соответствует полной сорбции (полному поглощению) флавоноидных соединений полиамидным порошком.

Оптимальное соотношение экстракта и полиамидного порошка составл ет 1:10. Описанным путем устанавливалось количество полиамидного порошка, необходимого дл  полного поглощени  флавоноидных соединений ,

В прототипе соотношение экстракта и полиамидного порошка составл ет 1:20. чем и объ сн етс  больший расход полиамида. При проведении процесса под словами 5 интенсивное перемешивание подразумеваетс  перемешивание с равномерным распределением полиамидного порошка по всему объему экстракта.

Поскольку ранее использованный флуориметрический метод не позвол ет отличить примесь к ДКВ родственного флавоноидного соединени  - дигидрокемп- ферола (аромадендрина) из-за их неодинаковы спектральных характеристик, то

5 приводима  в прототипе степень чистоты ДКВ завышена. Как видно из хромэтогрэмм, полученных современным методом ВЭЖХ - получаемый в за вл емом способе ДКВ имеет спепень чистоты 97,2% с примесью

0 2,8% дигидрокемпферола (рис. 2), а полученный в услови х прототипа ДКВ по данным флуориметрического анализа имеет 94% степень чистоты, а по данным ВЭЖХ - 81.1% с примесью 2,8% аромадендрина и

5 2,6% нарингенина (рис. 1).

Таким образом, предлагаемый способ выделени  ДКВ позвол ет сократить врем  способа с 26 часов по прототипу по 11,4 часа и повысить степень очистки целевого про0 Дуктас94% до 97%.

На фиг. 1 представлена хроматограмма субстанции ДКВ, полученной в услови х прототипа: по данным флуориметрического анализа содержит 94% ДКВ, по методу

5 ВЭЖХ 81,1%; на фиг. 2 - хроматограмма субстанции ДКВ, полученной по за вл емому способу: по методу ВЭЖХ содержит 97,2% ДКВ.

Использовалс  жидкостный хроматог0 рдф Милихром, сорбент Сепарон 18, колонна 6 0 2,1 мм. Подвижна  фаза ацетонитрил-2%-на  уксусна  кислота, 30:70 об. Скорость потока 50 мкл/мин, УФ- детектор, аналитическа  длина воды 290 нм.

5 Объем вводимой пробы 2 мкл раствора ДКВ о ацетонитриле с концентрацией 1 мг/мл.

При использовании предлагаемого способа сокращаетс  врем  на выделени  ДКВ.

0 (56) Авторское свидетельство СССР № 351847, кл. С 07 D 7/24, 1970.

Прототип

Экстракци  опилок древесины лиственницы водой при нагревании 2 ч

Охлаждение экстракта и фильтрование2 ч Подготока колонки к хроматографирова- нию1 ч Пропускание экстракта 2,5 ч Промывка колонки водой 7 ч Элюирование колонки водно-ацетоновой смесью 2,5 ч Регенераци  сорбента ацетоном

2,5ч

2 %-ной HCI2,5ч

Упаривание2 ч

Контроль за ходом хроматографического

процесса2 ч

ИТОГО: 26ч

За вл емый способ

Экстракци  опилок древесины лиственницы водой при нагревании1 ч

Охлаждение экстракта и фильтрование2 ч Перемешивание экстракта с полиамидным порошком2 ч Фильтрование 0,5 ч

Высушивание полиамидного порошка 2ч Экстракци  этилацетатом: 1-  стади  регенерации полиамидного порошка J,5 ч Фильтрование 0,5 ч Упаривание 0,5 ч Кристаллизаци : растворение 0,5 ч охлаждение и выпадение кристаллов 0,5 ч фильтрование 0,15ч сушка ( 1 ч Регенераци  (2-  стади ) полиамидного порошка 2 % -ной HCI 0.5 ч

ИТОГО: 11,4 ч

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА путем экстракции опилок древесины лиственницы водой при нагревании, охлаждени , фильтровани  и упаривани , отличающийс  тем, что, с целью сокращени  времени способа и повышени  степени очистки, в охлажденный экстракт внос т полиамидный порошок в соотношении 1 : 10, смесь перемешивают в течение 2 ч, отфильтрованный полиамидный поро- шок высушивают, целевой продукт экстрагируют этилацетатом и кристаллизуют его из гор чей воды.

   L

   L1I

   О I 4 S 8 Ю 12 К 16 № 20

   Фиг.1

   1 Дигидрохдерце/far/f

   ъДиийшберцемш g}j% ,Дргм/х хенлф( 2,8% Нарингелм z $%

   фгифоленн- Нармге м ферол л ш

   Диеидрокберцег ин 37,2%

   i

   Л Дигмдроке/члсрерол