KR940002796B1 - 은행잎에서 징코라이드를 분리 및 정제하는 방법 - Google Patents

은행잎에서 징코라이드를 분리 및 정제하는 방법 Download PDF

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Abstract

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Description

은행잎에서 징코라이드를 분리 및 정제하는 방법
본 발명은 은행잎에서 유효생리활성물질인 징코라이드를 대량으로 분리 및 정제하는 방법에 관한 것이다.
은행나무에는 많은 유효생리활성물질을 함유하고 있는 것이 알려져 있다.
은행나무 열매에는 페놀성화합물계, 징코올(gin㎏ol), 빌로볼(bilobal), 장코올산(gin㎏olic acid)등이 함유되어 있으며, 은행나무의 씨에는 청산배당체(Cyanogenetic Glycosides), 아미노산 등이 함유되어 있으며, 은행잎에는 방향족 화합물, 특히 페놀(phemnol)성 화합물계, 플라보노이드배당체(flavonoid glycodides) 및 단순 플라보노이드인 캄프레롤(kaempferol), 퀴세틴(Quercetin), 아이소람네틴(Isorhamnetin), 루테오린(Luteolin)등과 터페노이드(Terpenoid) 화합물로 징코라이드(Gin㎏olides) 및 빌로발리드(bilobalid)등이 함유되어 있다.
이중에서 특히 은행잎에서 존재하는 터페노이드계 화합물은 1929년 후루카와(S. Furukawa, Sci, Papers Inst. Phys. Chem. Res. Tokkyo 19. 27(1932)에 의해 처음 락톤(Lacton) 화합물이 발견되었으며, 징코라이드는 1967년 나카니시(K. Nakanishi, Pure Appl. Chem, 7. 89(1967), Tetrahedron Letter, 4. 299(1967)에 의해 은행나무 뿌리에서 처음 분리되어 그 구조가 밝혀져서 징코라이드 에이, 비이, 씨이, 엠(Gin㎏olide A,B,C,M)으로 명명되어 졌으며, 1967년에는 오카베(K. Okabe, J. Chem. Soc(S). 2201(1967)) 등이 은행잎에도 존재함을 확인하였다.
그후, 1987 웨잉(K.Weing, Lieb. Ann. Chem. 521-526(1987))에 의해 또다른 유도체인 징코라이드제이(Gin㎏olide J)가 발견되었는데, 이러한 징코라이드의 화학구조식은 아래와 같다.
Figure kpo00001
상기 구조식에서
Figure kpo00002
이와같은 징코라이드는 최근 혈소판활성인자(Platelet-activating factor : PAF-acether, AGEPC)와 경쟁적 반응으로, 혈소판 활성인자로 인한 많은 질병들, 예를들면 천식, 기관지염, 노인성치매, 알레르기, 심장질환, 쇼크증상, 류마치스질환, 기타 순환기계질환에 광범위한 분야에 효능이 있는 것으로 밝혀졌다.
그러나, 징코라이드는 은행잎에 존재하는 양이 적고 분리하기가 까다로워 아직 대량 분리방법이 발견되지 못하였다.
이에 본발명은 유효생리활성물질인 징코라이드를 은행잎으로 부터 높은 수율로 분리 및 정제하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
이하, 본발명을 상세하 설명하면 다음과 같다.
본발명은 은행잎으로부터 징코라이드를 분리하는데 있어서,
가. 은해잎 엑기스 수용액을 헥산이나 사이클로헥산으로 탈지시키고,
나. 남아있는 수용액층을 비극성용매로 추출하여 탈수, 건조시킨후,
다. 이렇게 하여 얻어진 건조분말을 저급케톤이나 저급알콜에 용해시키고,
라. 여기에다 활성탄을 가하여 불순물을 흡착시킨후 여과농축하므로서 징코라이드 혼합분말을 얻는 것을 특징으로 하는 징코라이드의 분리방법인 것이다.
본발명에 있어서, 상기 (가)공정의 은행잎 엑기스 수용액은 은행잎 건조분말을 저급알콜이나 저급케톤중에서 50℃ 내지 100℃의 온도로 5 내지 6시간동안 추출하므로서 제조되는 것이다.
또한, 본발명은 상술한 방법에 따라 얻어진 징코라이드 혼합분말을 저급아세테이트와 저급알콜의 혼합용매로 활성탄과 실리카겔의 흡착컬럼에 통과시키고, 얻어진 잔사를 무수알콜과 아세톤수용액으로 분별 재결정하는 것을 특징으로 하는 징코라이드의 정제방법인 것이다.
한편, 본발명에서는 얻어진 징코라이드 혼합분말을 저급케톤이나 저급알콜에 녹이고, 여기에 증류수를 가한 다음 이를 원심분리하여 얻어진 잔사를 무수알콜과 아세톤수용액으로 분별 재결정하므로서 징코라이드를 정제할 수도 있다.
이하, 본발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.
우선, 잘 건조, 분쇄되어진 신선한 은해잎 분말을 저급알콜이나 저급케톤에서 50℃-100℃의 온도로 5-6시간 추출하여 여과한후, 그 여액을 농축시키고 농축액과 동량의 물을 넣어 잘 교반하여, 2-3시간 방치한 다음, 불용성 물질을 제거한다. 분리된 수용액층을 헥산이나 사이클로헥산으로 분획한후 유기용매층을 제거한다.
남은 수용액층에 물과 혼합되지 않는 비극성용매인 저급아세테이트. 저급케톤, 저급에테르, 클로로포름, 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 클로로벤젠 등을 넣고 잘 교반한후 분리한다.
분리된 유기용매층에 무수 황산염이나 탄산칼슘, 인산염 등을 가해 탈수시킨후 감압 건조시킨다. 건조된 분말을 저급케톤이나 저급알콜에 용해시킨후 활성탄을 넣어 교반시킨후 여과하여 여액을 농축시키면 징코라이드 함량이 높은 분말을 얻을 수 있다.
한편, 본발명에 따라 얻어진 혼합분말을 정제하기 위해서는 상기 혼합분말을 흡착컬럼에 통과시켜 잔존해 있는 페놀성물질을 제거하고 통과된 여액을 증발건조시킨후 소량의 무수에탄올에 녹여 저온에 방치시키면 백색무정형의 고체를 얻을 수 있다.
이러한 방법 이외에도 상기 혼합분말을 아세톤 수용액에 용해시켜 원심분리하여 얻어진 물질을 알콜수용액에 녹여 저온에서 방치시키면 백색의 결정상 징코라이드를 얻을 수 있다.
위와같이 얻어진 백색고체는 지방성물질, 단백질, 페놀성화합물의 함유되지 않은 순순한 징코라이드 에이, 비이, 씨이 및 극소량의 엠 및 제이가 함유된 혼합물로 각각의 성분은 아세통과 물의 혼합용매로 분별재결정하여 분리할 수 있다.
이때 각 성분의 확인은 박판 크로마토그래피법이나 액체크로마토그래피법과 수소핵자기공명스펙트럼을 이용하여 확인할 수 있다.
이하, 본발명에 대한 실시예를 들어 본발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.
[실시예 1]
은행잎 건조분말 10㎏을 메틸알콜 50ℓ에 넣고 약 60-70℃에서 역류시키면서 5-6시간동안 2회 추출한 후 여과한다.
여액을 농축시킨후 잔사에 5ℓ의 물을 가해 교반하여 2-3시간동안 방치한후 침전물은 제거하고, 여액을 물과 포화된 헥산 2ℓ로 2회 분획하여 핵산층은 제거한다.
남아있는 수용액층을 3ℓ씩 5회 에틸아세테이트로 추출하여 황산나트륨으로 탈수시킨후 감압건조시키면 80g의 미황색 고체분말을 얻는다.
얻어진 분말을 100㎖ 아세톤에 용해시켜, 활성탄 10g을 넣고 교반시킨후 여과하여 여액을 농축시키면 65g의 징코라이드 함량이 높은 혼합분말을 얻을 수 있다.
[실시예 2]
은행잎 건조분말 10㎏을 에틸알콜 50ℓ에 넣고 약 70-80℃에서 역류시키면서 5-6시간동안 2회 추출한 후 여과한다.
여액을 농축시킨후 잔사에 5ℓ의 물을 가해 교반하여 2-3시간동안 방치한후 침전물은 제거하고, 여액을 사이클로헥산 2ℓ로 2회 분획하여 사이클로헥산층은 제거한다.
남아있는 수용액층을 3ℓ씩 5회 에틸에테르로 추출하여 탄산칼슘으로 탈수시킨후 건조시키면 80g의 황색고체 분말을 얻는다.
얻어진 분발을 100㎖ 80% 아세톤수용액에 용해시켜 활성탄 15g을 넣고 교반시킨후 여과하여 여액을 농축시키면 70g의 징코라이드 함량이 높은 혼합 분말을 얻을 수 있다.
[실시예 3]
상기 실시예1-2에서 얻어진 고체 100g을 아세톤 50㎖에 놓여 활성탄 50g과 실리카겔 1㎏을 충진한 흡착컬럼을 통과시켜 잔존 페놀성물질 및 불순물을 제거한다.
이때 용매로는 에틸아세테이트와 메탄올의 15 : 1혼합용매를 사용하고, 징코라이드의 성분 확인은 박판크로마토그래피법을 이용하여 확인할 수 있다(실리카겔박판, 전개용매 ; 에틸아세테이트 : 사이클로헥산=5 ; 5, 발색시약 ; 무수초산시약, 365㎚, 오렌지형광) 통과된 용액을 증발건조시키면 20g의 미백색분말을 얻을 수 있다.
이 분말을 무수에탄올 50㎖를 가해 50-60℃에서 완전히 용해시킨후, 저온에서 10시간 방치시키면 순수한 징코라이드인 백색의 무정형 결정 9.5g을 얻을 수 있다.
이때 얻어진 징코라이드는 징코라이드 에이 및 비이, 씨이 및 극소량의 제이 및 엠이 포함된 혼합물로서 각각의 성분은 50% 아세톤 수용액으로 분별 재결정에 의해 분리할 수 있다.
이 때 각각의 순수한 징코라이드에 대한 분석결과를 보면 다음과 같다.
· 징코라이드 에이[융점 ; 308℃, 수소핵자기공명스펙트럼데이타(100㎒,ppm); 1.20(s), 1.45(d), 2.0-2.5(m), 2.60(dd), 2.99(dd), 3.44(q), 5.05(s), 5.13(t), 5.38(s), 6.20(s), 적외선흡수스펙트럼에 데이타(υco ; 1802, 1776, 1764㎝-1, υOH ; 3551, 3453㎝-1)].
· 징코라이드 비이[융점 ; 300℃, 수소핵자기공명스펙트럼데이타(100㎒,ppm) ; 1.22(s), 1.44(d), 2.1-2.7(m), 3.36(q), 4.55(d),5.10(d), 5.49(s), 5.71(s), 6.27(s), 적외선흡수스펙트럼데이타(υco ; 1795, 1780㎝-1, υOH ; 3454㎝-1)].
· 징코라이드 씨이[융점 ; 300℃, 수소핵자기공명스펙트럼데이타(100㎒,ppm) ; 1.32(s), 1.45(d), 2.14(d), 3.36(q), 4.53(d), 4.73(dd), 5.05(d), 5.53(s), 5.61(d), 6.30(s), 적외선흡수스펙트럼데이타(υco ; 1785, 1763㎝-1, υOH ; 3579, 3529㎝-1)].

Claims (2)

  1. 은행잎으로부터 은행잎 엑기스 수용액을 제조하고 이를 유기용매로 추출하여 징코라이드를 분리함에 있어서, (가) 상기 은행잎 엑기스 수용액을 헥산이나 사이클로헥산으로 탈지시키고, (나) 남아있는 수용액층을 비극성용매로 추출하여 탈수, 건조시킨후, (다) 이렇게 하여 얻어진 건조분말을 저급케통이나 저급알콜에 용해시키고, (라) 여기에다 활성탄을 가하여 불순물을 흡착시킨후 여과농축하므로서 징코라이드 혼합분말을 얻은 다음, (마) 이를 저급아세테이트와 저급알콜의 혼합용매로 활성탄과 실리카겔의 흡착컬럼에 통과시켜서 얻어진 잔사를 무수알콜과 아세톤수용액으로 분별 재결정하여서 됨을 특징으로 하는 은행잎에서 징코라이드를 분리 및 정제하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, (나)공정의 비극성용매로는 저급아세테이트, 저급케톤, 저급에테르, 클로르포름 또는 벤젠을 사용함을 특징으로 하는 분리방법.
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