CN101142220A - 从生物材料分离加兰他敏 - Google Patents

Abstract

本发明的主题涉及分离和纯化多种植物所产生的加兰他敏及其衍生物的方法。

Description

从生物材料分离加兰他敏

发明领域

本发明涉及将加兰他敏及其衍生物以基本纯形式分离的方法，这种方法克服了现知方法的缺点。

发明背景

加兰他敏，即4a，5，9，10，11，12-六氢-3-甲氧基-11-甲基-6H-苯并呋喃[3a，3，2-ef]-(2)-苯并氮杂环庚烯-6-醇，是由石蒜科(Amaryllidaceae)例如雪花莲属(Galanthus)、水仙属(Narcissus)、雪片莲属(Leucojum)和石蒜属(Lycoris)的植物产生的天然生物碱。图1显示它的结构。它最早由Proskurnina和Jakovleva从Galanthus woronowi分离(J.Gen.Chem.USSR，1952，22，1899-1902)。

药理学上，加兰他敏是如同毒扁豆碱的可逆胆碱酯酶抑制剂，但毒性要低得多。它还具有镇痛和抗氧化性质。这一独特的性质组合使得它能用于治疗阿尔茨海默病(例如L.J.Scott和K.L.Goa，Drugs2000，60，1095-1122)以及酒精、药物和尼古丁成瘾和其它一些疾病(美国专利第5,643,905号)。

虽然已有多种加兰他敏合成方法得到描述(例如Kametani等，J.Chem.Soc.C，1971，6，1043-1047或者Shimizu等，Heterocycles，1977，8，277-282及众多专利)，从植物材料分离加兰他敏仍是其大规模制造的有效替代途径。从植物材料分离加兰他敏的已知方法的共同缺点是缺乏适于大规模分离的粗放性和可放大性。这些方法通常是为加工一种确定来源的植物材料而特制的。它们如用于加工另一种植物材料，则不能够生产出足够基本纯的加兰他敏。有毒的和/或对环境有害的溶剂如二氯乙烷和其它氯代烃类及二乙醚的使用，也会阻碍这些方法用于大规模生产。而且，这些现知方法中采用的一些操作难以放大，例如初级提取物的浓缩至干和残余物在另一溶剂中的溶解。

专利DE 1,193,061描述的从石蒜科植物分离加兰他敏，是用二氯乙烷或其它氯代烃类(二氯甲烷、氯仿)提取已用氨水碱化的植物材料。所获得的初级提取物进一步用稀硫酸处理，其附带的生物碱类用氨水沉淀。留在溶液中的加兰他敏用二乙醚或二氯甲烷萃取并进一步纯化。美国专利第5,877,172号提供了对这个方法的实质改进。粉碎的植物材料(Narcissus pseudonarcissus“Carlton”)在提取前先与粉末化碳酸钠混合，然后用二氯乙烷萃取。初级提取物的进一步加工与以上所述类似，但乳浊液的形成减至最低。尽管如此，所用的溶剂二氯乙烷和二乙醚并不适合于工业规模分离。

美国专利第5,877,172号还描述了这样提取植物材料：提取前先加入粉末化碳酸钠将植物材料碱化，然后用汽油萃取获得初级提取物。将初级提取物蒸发至干，干残余物溶于稀硫酸中，溶液的pH调至约4，用二乙醚萃取非生物碱性质的附带成分。将所获得的精制水溶液碱化至pH9，生物碱类被萃取到二乙醚中。将二乙醚提取物浓缩至干，然后从2-丙醇中结晶，产生加兰他敏。虽然取消了有毒二氯乙烷的使用，该方法仍要使用二乙醚。此外，用汽油来萃取效率低下，且需要大量的溶剂。而且，将初级萃取物蒸发成干残余物并不方便。该方法包括几个用来从大量非生物碱成分分离生物碱的操作，但确保加兰他敏与其它生物碱类分离的唯一操作是生物碱浓缩物从2-丙醇的结晶。这个事实意味着该方法并不足够粗放，以确保从如下所述的复杂材料分离出纯加兰他敏。

以上对从植物材料提取加兰他敏的技术现状的概述给出了证据，证明仍需要有粗放的方法来从不同植物材料大规模提取和纯化加兰他敏以提供高纯产物。

附图简述

图1.加兰他敏的结构式。

图2.实施例1获得的初级提取物的HPLC分析。

图3.实施例1获得的粗生物碱浓缩物的HPLC分析。

图4.实施例1获得的纯化加兰他敏的HPLC分析。

图5.实施例1获得的盐酸加兰他敏的HPLC分析。

图6.实施例1获得的加兰他敏的碱的HPLC分析。

图7.实施例2获得的加兰他敏的碱的HPLC分析。

图8.实施例3获得的初级提取物的HPLC分析。

图9.实施例3获得的加兰他敏的碱的HPLC分析。

发明概述

在一个方面，本发明提供用以从所有已知产生加兰他敏的植物大规模分离加兰他敏的粗放且有效的方法，所述植物为石蒜科植物，例如雪花莲属、水仙属、雪片莲属和石蒜属的植物。所用的植物材料可以是干燥的，例如干燥植物叶子或全部地上部分，或者是新鲜的，例如粉碎的鳞茎和/或地上部分。

在另一个方面，本发明提供分离加兰他敏的方法，所述方法包括用无机酸或有机酸的水溶液提取植物材料从而获得初级提取物，将初级提取物中的有机化合物吸附到吸附剂上，用水洗涤吸附剂和用水混溶性有机溶剂将有机化合物从吸附剂上洗脱下来，从而获得生物碱类的浓缩物。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化生物碱类的浓缩物的方法，所述方法包括使生物碱类的浓缩物中的生物碱类吸附在阳离子交换聚合物树脂上，和用无机碱的水溶液将生物碱类从树脂上洗脱下来，获得含水生物碱浓缩物。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化含水生物碱浓缩物的方法，所述方法包括将含水生物碱浓缩物中的生物碱类萃取到与水不混溶的有机溶剂中，和将萃取物浓缩获得粗生物碱浓缩物。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化粗生物碱浓缩物的方法，所述方法包括用与水不混溶的有机溶剂作为流动相，在氧化铝上对粗生物碱浓缩物进行色谱纯化获得加兰他敏级分，从而获得纯化的加兰他敏。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化加兰他敏的方法，所述方法包括将纯化的加兰他敏从合适的溶剂中结晶出来，获得纯化的结晶加兰他敏。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化加兰他敏的方法，所述方法包括将结晶加兰他敏从甲基异丁基酮或叔丁基甲基醚中重结晶。

在另一个方面，本发明提供进一步纯化加兰他敏的方法，所述方法包括将加兰他敏碱从盐酸加兰他敏中释放出来，和将其从甲基异丁基酮或叔丁基甲基醚中结晶出来。

在另一个方面，本发明提供除去那维定(narwedine)的方法，即用能够将那维定的羰基还原成仲醇基的合适还原剂还原那维定。

在另一个方面，本发明提供从所有上述类型的植物材料分离高纯加兰他敏的方法。分离的加兰他敏的纯度超过80％优选超过90％，甚至更优选超过99％。

在另一个方面，本发明提供不需使用高度有毒的溶剂或对环境有害的溶剂例如氯化烃类来分离基本纯的加兰他敏的方法。

发明详述

本发明提供从生物质分离高纯度加兰他敏的方法。生物质这个术语指能产生加兰他敏的植物的干燥或新鲜部分，所述植物为石蒜科植物，例如雪花莲属、水仙属、雪片莲属和石蒜属的植物。所述方法由几个连续步骤组成，这些步骤经设计能使分离过程的效率和除去不需要的生物碱类的能力最优化，不需要的生物碱类存在于植物材料中，必须将其认为是加兰他敏的潜在杂质。对各个步骤进行设计，以避免使用有毒的溶剂或对环境有害的溶剂如氯代烃类和低沸点溶剂如二乙醚、丙酮和石油醚。各个步骤的顺序经设计能使总体过程有效率。

分离过程的第一步是生物质的提取。实验发现无机酸或有机酸的稀水溶液是提取植物材料的极好手段。与使用有机溶液的现知方法对比，水提取法具有以下几个优点：1)不必在提取前将植物材料碱化，这从提取方法中省去一个机械操作(如美国专利第5,877,172号中所述的将植物材料与粉末化碳酸钠混合)；2)当提取溶剂是水时，对环境的影响减至最低；3)不必从被提取材料中除去溶剂，这从提取方法中再省去一个操作(废生物质的干燥)；4)还省去了所用溶剂的回收过程。从提取效率和选择性方面来看，选择使用何种酸并不重要。酸的选择决定于其价格、处理和对所用设备(如有的话)的腐蚀的影响。使用浓度为约0.1％(w/w)的磷酸有利。当要提取新鲜的植物材料例如鳞茎时，采用生物质水提取法的另一个优点显现。由于这种材料含有很多水，用与水不混溶的有机溶剂来提取将会达不到预期目标。

生物质的提取可通过不同的方式来实现，不过使用一组渗滤器会非常方便。使用渗滤器组能使初级提取物的体积减至最低。实施例1证明从1kg的鳞茎只获得约1.5l的初级提取物。不过，当使干燥生物质在渗滤器组上进行提取时，由于被提取材料的堆密度低和渗滤器中死体积大，初级提取物的体积还是大得多。另一方面，如实施例3(使用15∶1(v/w)的初级提取物与干燥植物材料之提取比达到定量提取)所证明，干燥材料当在渗滤器组上提取时不需要进行粉碎。

分离过程的下一个操作是将初级提取物中存在的有机化合物吸附在吸附剂上。实验发现非离子聚合物树脂对此目的来说是非常适合的吸附剂。实验还发现，在初级提取物中以盐形式存在的生物碱类必须通过加入一些无机碱(例如氢氧化钠或氢氧化钾)将其转化成碱形式。然后生物碱类就非常有效地与初级提取物中存在的其它一些中等极性有机化合物一起被吸附在树脂上。极性有机化合物如糖类和无机化合物不被吸附，因此这个操作等于是一个重要的纯化步骤。适合于吸附的聚合物树脂是任何任何聚(苯乙烯-二乙烯基苯)共聚物。对于吸附的效率或选择性而言，树脂的颗粒大小分布和孔径大小并不是关键参数。吸附可例如通过将树脂与碱化的初级提取物混合来实现，不过最方便的是在填充在柱子中的树脂上的吸附。这样可只将碱化的初级提取物荷载在柱子上，然后用水洗涤柱子，用可与水混溶的有机溶剂或这种溶剂与水的混合物(便利的是用60％(v/v)乙醇水溶液)洗脱生物碱类和其它有机化合物，获得生物碱类的浓缩物。该浓缩物含有初级提取物中存在的所有生物碱类和其它一些有机化合物。

使生物碱类的浓缩物进一步进行生物碱类在阳离子交换聚合物树脂上的吸附。发现可将从非离子聚合物树脂洗脱获得的生物碱类的浓缩物直接荷载在填充有阳离子交换剂的柱子上。虽然成功使用了几种类型的阳离子交换剂，但最佳结果是用凝胶类型的强酸性阳离子交换树脂获得的，该树脂是用不超过4％的二乙烯基苯交联的聚磺酸化(苯乙烯-二乙烯基苯)共聚物。使用这种类型的阳离子交换树脂，生物碱类被定量保留，而浓缩物中存在的其它有机化合物则被除去。然后通过用合适无机碱的水溶液(便利的是稀释的氨水)进行洗脱，将生物碱类从柱子上解吸下来，从而获得含水生物碱浓缩物。

在有机化合物的浓缩物中生物碱类之外的有机化合物含量低的情况下，生物碱类在阳离子交换剂上的吸附可省略。这种情况在实施例3中说明。这样可将从非离子聚合物树脂洗脱获得的生物碱类的浓缩物进行浓缩以除去有机溶剂，残余水溶液可通过加入氨水进行碱化，按这种方式获得的含水生物碱浓缩物可与从阳离子交换剂洗脱获得的含水浓缩物一样，按类似的方式进行下一步纯化。

将加兰他敏和其它亲脂性生物碱类进一步从水溶液萃取到有机溶剂中。然后将萃取物浓缩，所获得的粗生物碱浓缩物进一步在氧化铝上进行色谱纯化。任何与水不混溶的溶剂(除脂族烃外)都可用于从含水浓缩物提取生物碱类，但优选的溶剂是甲苯、甲基异丁基酮和/或一些乙酸酯例如乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯和乙酸异丁酯。使用它们的优点在于这个事实，即可用相同的溶剂对粗生物碱浓缩物进行氧化铝色谱纯化，使得不同溶剂的混合减至最少，溶剂回收非常简单。

粗生物碱浓缩物的色谱纯化是能够分离出单独生物碱的第一个操作。特别是如实施例1所说明的(比较图3和图4)，主要存在于从水仙属植物获得的浓缩物的heamanthamine可通过这个操作得到有效分离。上述溶剂使得能够以无梯度方式进行加兰他敏与heamanthamine和其它一些生物碱类的色谱分离，这对于大规模制备是非常方便的。加兰他敏作为主要级分(纯化的加兰他敏)从色谱柱洗脱出来，而其它一些生物碱类(主要是heamanthamine)则被捕获在柱子上。纯化的加兰他敏的组成达到了能通过结晶以特别高的得率获得相对较纯的加兰他敏的地步。加兰他敏从纯化的加兰他敏的结晶可通过两种方式实现：作为与盐酸所成的盐或者作为碱。虽然加兰他敏的盐的结晶能得出非常高的结晶产物得率，但它对产物纯度的效果仅为中等。意外发现，加兰他敏的碱能从一些在文献中未提到的溶剂例如甲基异丁基酮或叔丁基甲基醚结晶出来。从这些溶剂的结晶能非常有效地除去大多数的潜在杂质。如实施例1所述的以下两种可能操作的组合非常有效：将盐酸加兰他敏结晶然后再释放出加兰他敏碱和将加兰他敏碱结晶。虽然分离过程中涉及到两个结晶步骤，但累积得率惊人地高，且两个不同结晶步骤的组合产生出纯度高于99％的加兰他敏。

如实施例1和3所说明，氧化铝色谱和结晶操作的组合使得有可能除去大部分的潜在杂质，例外的是N-去甲加兰他敏和那维定。那维定这种加兰他敏生物合成前体物往往存在于用来分离加兰他敏的植物材料中。它通过如上所述的简单氧化铝色谱几乎不被除去，通过结晶只被部分除去。本发明的另一公开内容使得有可能将那维定从加兰他敏除去。发现含有超过约0.5％那维定的结晶加兰他敏可通过将那维定还原来纯化，所使用的还原剂能够将那维定的羰基还原，从而提供加兰他敏的仲醇基或表加兰他敏。这种还原可通过多种还原剂来实现，但特别方便的是使用硼氢化钠。将含有那维定的盐酸加兰他敏溶于水中，加入少量的硼氢化钠。如实施例2所说明，从这种反应混合物分离的加兰他敏几乎不含有任何那维定。

本发明的方法能够从所有上述植物材料分离高纯度的加兰他敏。产物的纯度取决于所用的植物材料，但从未低于99％，在一些情况下，分离的加兰他敏的纯度甚至超过99.5％。而且本发明方法的得率非常高，如实施例1和3所说明通常超过计算量的80％。

本发明在以下实施例中进行描述。

实施例

以下实施例意在说明而不是限制本发明。

实施例1

从水仙的鳞茎分离盐酸加兰他敏：

将含有0.12％加兰他敏(HPLC测定)的水仙(Narcissuspseudonarcissus“Carlton”)的鳞茎粉碎，加料到中试渗滤器组4×100l(一个提取器加入75kg的粉碎鳞茎)中。将加了料的各个提取器连接成组，用0.1％(w/w)磷酸水溶液以逆流方式提取。从一个提取器获得125l的初级提取物。图2给出了初级提取物的HPLC分析记录结果。将来自一个提取器的初级提取物用10％氢氧化钾水溶液碱化至pH9-10，并将溶液荷载到填充有非离子树脂SP-825L的60l柱子上。接着用100l的水洗涤柱子，用60％(v/v)乙醇水溶液进行洗脱以将有机化合物从树脂上解吸下来，获得220l的生物碱类的浓缩物。将此浓缩物再荷载在含有阳离子交换树脂SK 104的3l柱子上，所有的生物碱类都被吸附。用水洗涤该柱子，用0.5％(w/w)氨水将生物碱类从柱子上洗脱下来，获得30l的含水生物碱浓缩物。

将含水生物碱浓缩物用30l的甲基异丁基酮萃取，萃取物蒸发获得约1升的粗生物碱浓缩物。根据HPLC分析，该浓缩物含有45.8％(干燥)的加兰他敏——HPLC记录结果在图3中给出。用甲基异丁基酮作为流动相，使该浓缩物在含有2kg碱性氧化铝的柱子上进行色谱分离。将含有加兰他敏的级分(经TLC检测)集中并浓缩，获得134g的干残余物(纯化的加兰他敏)。其HPLC分析结果在图4中给出。将纯化的加兰他敏溶于450ml乙醇中，加入浓盐酸将溶液的pH调至约4。将结晶盐酸加兰他敏的悬浮液在冰箱中冷却，然后滤出结晶产物，用100ml乙醇洗涤并干燥，获得106g的盐酸加兰他敏。其HPLC分析结果在图5中给出。

将30g的以上制备的盐酸加兰他敏溶于50ml的热水中，向溶液中加入12ml的氨水。通过过滤分离出加兰他敏的结晶碱并干燥。将干燥的加兰他敏碱从100ml的甲基异丁基酮重结晶，获得21.9g的加兰他敏，其纯度经HPLC测定为99.4％(HPLC记录结果在图6中给出)。未算从母液所作的第二次回收，到该加兰他敏碱为止，过程得率达理论得率的85.0％。

实施例2

盐酸加兰他敏的纯化

将根据HPLC分析含有1.1％那维定的实施例1制备的30g盐酸加兰他敏溶于120ml的水中，在约30分钟内搅拌下分六批加入1.2g的硼氢化钠。将溶液在实验室温度下再搅拌30分钟，然后向溶液加入12ml的25％(w/w)氨水和200ml的甲基异丁基酮。分离有机相，浓缩至体积约100ml，放在冰箱中让其结晶24小时。通过过滤分离出加兰他敏的结晶碱并干燥，获得19.3g的加兰他敏，其纯度经HPLC测定为99.7％，那维定的含量为0.04％(HPLC记录结果在图7中给出)。

实施例3

从夏雪片莲(Leucojum aestivum，L.)的干叶分离加兰他敏(碱)：

将40kg的含有0.26％加兰他敏(HPLC测定)的夏雪片莲(Leucojum aestivum，L.)干叶粉碎，加到中试渗滤器组4×100l(一个提取器加入10kg的粉碎叶)中。将加了料的各个提取器连接成组，用0.1％(w/w)磷酸水溶液以逆流方式提取。从一个提取器获得150l的初级提取物。图8给出了初级提取物的HPLC分析记录结果。将来自一个提取器的初级提取物直接吸附在60L的充入柱子中的非离子树脂SP-825L上，用100l的水洗涤，用90％(v/v)的乙醇水溶液(200l)然后是50l的水解吸，获得生物碱类的浓缩物。

将从所有四个提取器获得的生物碱类的浓缩物合并，蒸发至体积为75l，用水稀释至最终体积为300l，加入氨水调节溶液的pH至约10，获得含水生物碱浓缩物。将该浓缩物在连续逆流提取器中用200l的甲基异丁基酮进行萃取。将所得的萃取物蒸发至体积为约1000l，荷载在填充有1000g碱性氧化铝的柱子上。用甲基异丁基酮洗脱该柱，将含有加兰他敏(经TLC检测)的级分集中并蒸发至干，获得112.5g的残余物(纯化的加兰他敏)。将残余物从340ml的叔丁基甲基醚重结晶，获得83.6g的加兰他敏，其纯度经HPLC测定为99.0％(HPLC记录结果在图9中给出)。未算从母液所作的第二次回收，该过程的得率达理论得率的80.0％。

本发明的方法还可适合加兰他敏衍生物。虽然就本发明的某些具体实施方案描述和说明了本发明，但本领域技术人员会认识到，可不偏离本发明的精神和范围，对各个程序和方案作出各种改编、变化、修改、替换、删除或添加。因此，本发明由所附权利要求书的范围限定，且这个权利要求书应尽其合理性作宽泛的解释。

Claims (37)

1.一种从含有加兰他敏的生物材料分离加兰他敏的方法，所述方法包括：

a)用合适有机酸或无机酸的水溶液提取生物材料，从而获得初级提取物，

b)使初级提取物中的有机化合物吸附在吸附剂上，用水洗涤吸附剂，用水混溶性有机溶剂将有机化合物从吸附剂上洗脱下来，获得生物碱类的浓缩物。

2.权利要求1的方法，其中所述含有加兰他敏的生物材料是石蒜科植物的干燥部分或新鲜部分。

3.权利要求2的方法，其中所述石蒜科植物是雪花莲属(Galanthus)、水仙属(Narcissus)、雪片莲属(Leucojum)和/或石蒜属(Lycoris)的植物。

4.权利要求2的方法，其中所述植物新鲜部分是该植物的鳞茎和/或全部地上部分。

5.权利要求2的方法，其中所述植物干燥部分是该植物的叶子或全部地上部分。

6.权利要求1的方法，其中所述用以提取生物质的有机酸或无机酸选自乙酸、酒石酸、柠檬酸、磷酸、硫酸和盐酸。

7.权利要求6的方法，其中所述有机酸或无机酸在水中的浓度为0.05％至2％。

8.权利要求1的方法，其中所述生物质用浓度为约0.1％(w/w)的磷酸水溶液提取。

9.权利要求1的方法，其中所述生物质的提取在渗滤器组上以逆流方式实现。

10.权利要求1的方法，其中从1重量份的生物质获得1-3重量份的初级提取物。

11.权利要求1的方法，其中所述用以从初级提取物吸附生物碱类的吸附剂是聚(苯乙烯-二乙烯基苯)共聚物。

12.权利要求1的方法，其中所述生物碱类在吸附剂上的吸附在pH约8至约11下实现。

13.权利要求1的方法，其中所述用以从吸附剂洗脱生物碱类的极性有机溶剂是甲醇、乙醇、2-丙醇、丙酮、它们的混合物或它们的含水混合物。

14.权利要求1的方法，其中所述生物碱类的浓缩物通过使生物碱类从浓缩物吸附到阳离子交换树脂上作进一步的纯化，生物碱类从阳离子交换树脂的洗脱用合适碱的水溶液进行，以获得含水生物碱浓缩物。

15.权利要求14的方法，其中所述阳离子交换树脂是凝胶类型的强酸性阳离子交换树脂。

16.权利要求14的方法，其中所述阳离子树脂是用不超过4％的二乙烯基苯交联的聚磺酸化(苯乙烯-二乙烯基苯)共聚物。

17.权利要求14的方法，其中所述用以从阳离子交换树脂洗脱生物碱类的碱是氨水。

18.权利要求1的方法，其中对所述生物碱类的浓缩物进行浓缩以除去有机溶剂，从而获得含水生物碱浓缩物。

19.权利要求14或18的方法，其中所述含水生物碱浓缩物通过将生物碱类萃取到与水不混溶的有机溶剂中作进一步的纯化，将所获得的萃取物浓缩以获得粗生物碱混合物。

20.权利要求19的方法，其中所述与水不混溶的有机溶剂是甲基异丁基酮、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、甲苯或它们的混合物。

21.权利要求19的方法，其中所述粗生物碱混合物通过用与水不混溶的有机溶剂作为流动相进行氧化铝色谱作进一步的纯化，从而获得纯化的加兰他敏。

22.权利要求21的方法，其中所述与水不混溶的有机溶剂是甲基异丁基酮、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、甲苯或它们的混合物。

23.权利要求19或21的方法，其中将相同的溶剂用于从含水浓缩物萃取生物碱类和进行色谱纯化。

24.权利要求19或21的方法，其中将甲基异丁基酮用于萃取和色谱两者。

25.权利要求21的方法，其中将所述纯化的加兰他敏浓缩并从甲基异丁基酮、丙酮或叔丁基甲基醚中结晶出来，获得结晶加兰他敏。

26.权利要求21的方法，其中将所述纯化的加兰他敏浓缩，残余物溶于乙醇中，加入一当量的盐酸，以促进盐酸加兰他敏的结晶。

27.权利要求25的方法，其中所述结晶加兰他敏通过从甲基异丁基酮、叔丁基甲基醚或它们的混合物中重结晶作进一步的纯化。

28.权利要求26的方法，其中将所述盐酸加兰他敏转变成碱，所述碱再通过从甲基异丁基酮、叔丁基甲基醚或它们的混合物中结晶作进一步的纯化。

29.权利要求26的方法，其中含有超过0.5％(w/w)那维定的结晶盐酸加兰他敏如下进行纯化：将其溶于合适的溶剂中，加入能够将那维定的羰基还原成醇基的还原剂。

30.权利要求29的方法，其中所述合适的溶剂是水。

31.权利要求29的方法，其中所述还原剂是硼氢化钠。

32.权利要求29的方法，其中将不超过0.1mol的硼氢化钠用于1mol含有超过0.5％(w/w)那维定的加兰他敏。

33.权利要求27或28的方法，其中所获得的结晶加兰他敏的纯度超过99％。

34.权利要求27或28的方法，其中所述结晶加兰他敏用于制备氢溴酸加兰他敏。

35.一种从含有加兰他敏的生物材料分离加兰他敏的方法，所述方法包括：

a)用合适有机酸或无机酸的水溶液提取生物材料，从而获得初级提取物，

b)使初级提取物中的有机化合物吸附在吸附剂上，

c)将有机化合物从吸附剂上洗脱下来，获得生物碱类的浓缩物。

36.权利要求35的方法，其特征在于所获得的加兰他敏从合适的介质中重结晶。

37.权利要求35的方法，其中所获得的加兰他敏以药物剂型使用。

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