LT3419B

LT3419B - Composition for stabilizing blood plasma during pasteurization, method of pasteurization and plasma preparing by this method

Info

Publication number: LT3419B
Application number: LTIP264A
Authority: LT
Inventors: Miryana Burnouf; Thierry Burnouf
Original assignee: Centre Regional De Transfusion
Priority date: 1990-07-03
Filing date: 1992-12-29
Publication date: 1995-09-25
Also published as: FI96918C; WO1992000767A1; FR2664165A1; PT98190A; JPH05501417A; DE69117920T2; CA2065284A1; AU8062991A; PT98190B; JP3132828B2; EP0497929A1; HU9200701D0; HU208404B; PL294037A1; NO179127C; LV10384A; NO179127B; RU2045902C1; FR2664165B1; ATE135238T1

Description

Išradimas liečia kompoziciją, įgalinančią stabilizuoti kraujo plazmą pasterizavimo metu, patį būdą, naudojant minėtą kompoziciją, ir gautus tokiu būdu plazmos tirpalus, skirtus ypač plazmos ir kraujo krešėjimo V, XI ir XIII faktorių pakaitalų terapijai.

Visa žmogaus plazma ar plazma, atskirta nuo krioproteinų, panaudojama pakaitalų terapijoje, esant sunkiems nudegimams, pacientams, patyrusiems dideles traumas arba rimtas chirurgines operacijas, t. y. visais atvejais, kad netenkama didelio skysčio kiekio.

Paprastai šio tipo terapijoje naudojama plazma, gauta iš individualių donorų, sveikų ir iš anksto patikrintų asmenų, išvengiant rizikos, pernešant virusinius susirgimus. Vienok ši procedūra neužtikrina virusinio užkrėtimo negalimumo priešserologiniame periode, ypač įvairiais hepatito virusais ir AIDS virusu.

Todėl reikalinga sukurti virusinės inaktyvacijos metodą, kuris neturėtų poveikio įvairioms plazmos biologinėms funkcijoms.

Buvo įrodyta, jog hepatito B virusas yra pilnai inaktyvuoj amas kaitinant prie 60°C 10 vai., esant 0.5 M natrio citrato (Tabor ir kt. Trombosis Res., 22, 1981, 233-238). Vienok šis apdorojimas iššaukia kai kurių plazmos proteinų biologinio aktyvumo praradimą (Tabor ir kt., ir Barrowcliffe ir kt., Fr. J. Haematology, 55, 1983, 37-47).

Yra įrodyta, jog įvairūs proteinai, reikšmingi terapijai, išskirti ir išvalyti iš kraujo plazmos, atlaiko klasikinį pasterizavimą prie 60°C 10 vai. laikotarpyje, esant įvairiems stabilizatoriams. Be to, parodyta, jog molekulės, stabilizuojančios vieną biologinį aktyvumą, gali būti visiškai neefektyvios kitų aktyvumų atžvilgiu.

Taigi, albuminas gali būti stabilizuojamas acetiltriptofanu ir kaprilatu (Gellis ir kt., J. Clin. Invest., 27, 1948, 238-244), tuo tarpu šie stabilizatoriai nerodo poveikio plazminogeno atžvilgiu. Trombinas gali būti stabilizuojamas aukštomis gliukozidų koncentracijomis (Seegers. Arch. Biochem., 3, 1944, 363-367), bet jos neapsaugo protrombino. Amino rūgščių ir karbohidratų priedas duoda gerus rezultatus VIII faktoriaus ir III antitrombino atžvilgiu (žiūr. VFR patentą Nr. 29 16 711).

Europos patentas Nr. 0 035 204 aprašo a-antitripsino, III antitrombino, prekalikreino, fibronektino ir VIII faktoriaus stabilizavimą polialkoholių pagalba, kaip vieną iš paskutinių pavyzdžių nurodydamas sacharozę; vienok parodyta, kad tokiomis pačiomis sąlygomis IX faktorius ir prekalikreinas praranda savo visą terapinį aktyvumą.

Šie skirtingi eksperimentiniai duomenys patvirtina tą nuomonę, jog virusinė visos plazmos (šviežios plazmos, užšaldytos šviežios plazmos ar krionusodinto supernatanto) inaktyvacija pasterizavimo būdu.

Kadangi medicinoje jaučiamas pareiškėjas turėjo tikslą užtikrinančią vienalaikę terapijai, biologinio aktyvumo pasterizavimo metu.

Įskaitant tai, jog sorbitas prieš terminę denatūraciją, tarp plazmos pavyzdžių ir negali būti pasiekta visos plazmos trūkumas, pasiūlyti kompoziciją, sų faktorių, svarbių apsaugą prieš denatūraciją duoda tam tikrą apsaugą bet rezultatai varijuoja išeigos yra nedidelės, pareiškėjas pateikė naujus priedus, kurių mišiniai su sorbitu padidina jų stabilizuojančią galią.

Taigi, pagal šj, išradimą siūlomą kompoziciją sudaro sorbitas, kalcio chloridas, heparinas ir lizinas. Įvairių komponentų koncentracijos reguliuojamos tokiu būdu, kad plazmoje, skirtoje pasterizavimui, būtų sekančios galutinės koncentracijos:

- 50-80% sorbito, tinkamiausia 60%,

- 0.1-1% vienetų/ml heparino, tinkamiausia 0.5 vienetų/ml,

- 1-10 g/1 lizino, tinkamiausia 4 g/1,

- 3-5 mM CaCl₂, tinkamiausia 4 mM.

Sutinkamai su išradimu, kompozicija yra dedama j, šviežią plazmą, j, užšaldytą-atšildytą šviežią plazmą arba Į plazmą, iš kurios pašalinti krionuosėdų pavidalu proteinai prieš tai, kai pastaroji pasterizuojama prie 60°C ± 1°C 10 vai.

Pasibaigus pasterizavimui, temperatūra palaipsniui sumažinama iki 20°C, ir tirpalas yra dializuojamas, kad pašalintų sorbitą ir hepariną. Dializės buferio tirpalo pH yra 7, jis turi 4-10 mM natrio citrato, 4 mM kalcio chlorido, 0.13 M natrio chlorido ir 4 g/1 lizino.

Priklausomai nuo poreikio, dializės buferiai gali turėti j, vairias sudėtis. Po to tirpalas yra koncentruojamas, kad atstatyti plazmos proteinų fiziologinę normą. Gautas tirpalas steriliai filtruojamas, kondicionuojamas, po to užšaldomas ar liofilinamas.

Išradimas taip pat apima plazmos pasterizavimo būdą, kurį sudaro kompozicijos, sutinkamai su išradimu, pridėjimas į plazmą, prieš ją kaitinant, ir po to pasterizuotos plazmos dializė prieš anksčiau nustatytą buferio tirpalą.

Šis būdas vertingas ypač tuo, kad jį galima taikyti didelėms plazmos partijoms, gaunamoms iš keleto individualių donorų. Dar daugiau, partijų nuo 100 iki 200 1 ar daugiau pasterizavimas įgalina po atitinkamų testų garantuoti partijų kokybės pastovumą.

Iš kitos pusės plazmos partijos, pasterizuotos kaip pateikta išradime, gali būti naudojamos kaip pakaitalai pacientams, turintiems krešėjimo faktorių, tokių kaip V faktoriaus, XI faktoriaus ir XIII faktoriaus, kuriems nėra valytų koncentratų, nepakankamumą.

Tokiu būdu, išradimas apima taip pat pasterizuotus plazmos tirpalus, gautus sutinkamai su išradimu, ir ypač skirtus, iš vienos pusės, V, XI ir XIII faktorių nepakankamumui gydyti, iš kitos pusės - pakaitalų terapijai, reikalaujančiai visos plazmos arba krionusodinto supernatanto.

Sekantis pavyzdys aprašo išradimo įgyvendinimo variantą, neapribojant jo apimties.

PAVYZDYS:

Į du litrus atšildytos plazmos pridedama heparino (1000 vienetų), lizino (8 g) ir kalcio chlorido (220 mg). Šie du produktai pridedami druskų miltelių pavidale, plazma atsargiai maišoma. Po to palaipsniui dedama 120 g neištirpinto sorbito.

Pasterizavimas atliekamas 5 1 tūrio inde kaitinant 60°C temperatūroje 10 vai. vandens vonioje arba termostatuojamame rezervuare. Po pasterizavimo sorbitas ir heparinas pašalinami dializuojant dirbtiniu inkstu arba ultrafiltracijos sistema, kaip Pellikon^M sistema su kasetėmis, naudojant citratinį buferinį tirpalą, turintį 4 g/1 lizino, 4 mM CaCl₂ ir 0,13 M NaCl. Dializę gali lydėti koncentravimas tokia pat sistema, kad pasiektų krešėjimo faktorių kiekį apytiksliai iki 1 vieneto/ml, kas rodo gerą terapinę plazmos kokybę. Plazma dializuojama prie 370 mosmol/ltr osmosinio slėgio ir pH 7. Produktas tada steriliai filtruojamas, pav., naudojant Millipack” 40 filtrą (Millipore), turintį 0.22 ųm dydžio poras. Produktas yra paskirstomas į plastikinius maišelius užšaldymui arba į medicininius flakonus liofilinimui.

Plazmos stabilizavimas pasterizuojant ir ultrafiltruoj ant, pridėjus kalcio chlorido, heparino ir lizino, įgalina gauti sekančias išeigas, lyginant su kontroliniu pavyzdžiu, turinčiu tik liziną ir sorbitą.

FVIIIc	87%	prieš	66%
FVc	77%	prieš	35%
FVIIc	55%	prieš	52%
FIXc	60%	prieš	49%
Koaguliuoj anti fibrinogenas	81%	prieš	57%
FXIII	77%	prieš	71%

Nebuvo pastebėta krešėjimo faktorių aktyvacijos požymių, naudojant šį kalcio chlorido kiekį. Tokiu būdu, santykis jaučio FVII/koagulianto FVII yra 0.95 prieš 1.09 kontroliniame pavyzdyje. Stabilumas, tirtas FVIII aktyvumo atžvilgiu, 24 vai. konservavus produktą skystame būvyje prie kambario temperatūros, nepablogėjo, palyginus su kontroliniu pavyzdžiu (atsistatė

100% aktyvumo). Tai patvirtina procentinis kiekis PKA < 2% pasterizuotiems produktams ir kontroliniams pavyzdžiams.

Be to, bandymai su žiurkėmis, gavusiomis intraveniniu būdu tokiu metodu pasterizuotą plazmą, rodo, jog nestebima hipotenzinio efekto ir nesukeliama jokių pokyčių širdies ritme.

Claims

IŠRADIMO APIBRĖŽTIS

1. Kompozicija kraujo plazmai stabilizuoti pasterizavimo metu, besiskirianti tuo, kad ją sudaro sorbito, heparino, kalcio chlorido ir lizino mišinys.
2. Kompozicija pagal 1 punktą, besiskiriant i tuo, kad sorbito koncentracija yra tarp 500 ir 800 g/1.
3. Kompozicija pagal 2 punktą, besiskiriant i tuo, kad sorbito koncentracija yra 600 g/1.
4. Kompozicija pagal vieną iš 1-3 punktų, besiskirianti tuo, kad heparino koncentracija yra tarp 100 ir 1000 vienetų/1.
5. Kompozicija pagal 4 punktą, besiskiriant i tuo, kad heparino koncentracija yra 500 vienetų/1.
6. Kompozicija pagal vieną iš 1-5 punktų, besiskirianti tuo, kad kalcio chlorido koncentracija yra tarp 3 ir 5 mM.
7. Kompozicija pagal 6 punktą, besiskiriant i tuo, kad kalcio chlorido koncentracija yra 4 mM.
8. Kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, besiskirianti tuo, kad lizino koncentracija yra tarp 1 ir 10 g/1.
9. Kompozicija pagal 8 punktą, besiskiriant i tuo, kad lizino koncentracija yra 4 g/1.
10. Būdas kraujo plazmai pasterizuoti, besiskiriantis tuo, kad prieš terminį apdorojimą i plazmą deda kompoziciją pagal vieną iš 1-9 punktų ir po to ją pašalina dializuojant.
11. Būdas pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad dializę atlieka prie pH 7 buferio tirpalu, turinčiu 4-10 mM natrio citrato, 4 mM kalcio chlorido, 0.13 M natrio chlorido ir 4 g/1 lizino.
12. Būdas pagal 10 arba 11 punktą, besiskiriantis tuo, kad jis tinka plazmos tūriams nuo 1 iki keleto šimtų litrų.
13. Plazmos tirpalas terapiniam naudojimui, skirtas kraujo krešėjimo V, XI ir XIII faktorių nepakankamumui kompensuoti, besiskiriantis tuo, kad jis yra gautas, naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.
14. Visa plazma terapiniam naudojimui, besiskirianti tuo, kad ją pasterizuoja naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.
15. Krionusodintos ir atskirtos nuo krioproteinų plazmos supernatantas terapiniam naudojimui, besiskiriantis tuo, kad jį pasterizuoja naudojant būdą pagal vieną iš 10-12 punktų.