LT3114B - Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles - Google Patents

Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles Download PDF

Info

Publication number
LT3114B
LT3114B LTIP377A LTIP377A LT3114B LT 3114 B LT3114 B LT 3114B LT IP377 A LTIP377 A LT IP377A LT IP377 A LTIP377 A LT IP377A LT 3114 B LT3114 B LT 3114B
Authority
LT
Lithuania
Prior art keywords
nitrogen
acid
atom
microorganisms
hydroxy
Prior art date
Application number
LTIP377A
Other languages
English (en)
Inventor
Andreas Kiener
Andreas Tschech
Andreas Tinschert
Klaus Heinzmann
Original Assignee
Lonza Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lonza Ag filed Critical Lonza Ag
Publication of LTIP377A publication Critical patent/LTIP377A/xx
Publication of LT3114B publication Critical patent/LT3114B/lt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • C12P17/12—Nitrogen as only ring hetero atom containing a six-membered hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C07D213/80—Acids; Esters in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Azoto turinčiomis heterociklinėmis karboninėmis rūgštimis, kurios gali būti hidroksilintos ar nehįdroksilintoš, taip pat laikomos ir jų tirpios, druskos,.pavyzdžiui, šarminės arba amonio druskos.
Azoto turinčios 2-hidroksi-heterociklinės karboninės rūgštys yra svarbūs biologiškai aktyvių medžiagų, sintezės tarpiniai produktai. Pavyzdžiui, 2hidroksinikotino rūgštis yra pradinė medžiaga 2chlornikotino rūgšties (US-PS 4 081 451) gamybai, kuri yra svarbus tarpinis produktas, skirtas gaminti vaistus. (Ann. Pharm. Fr., 1980, 38(3),243-252).
Ligšiol azotą turinčių hidroksi-heterociklinių karbo30 ninių rūgščių mikrobiologiniai gamybos būdai nežinomi.
Šio išradimo tikslas buvo sukurti paprastą ir ekologiškai švaių mikrobiologinį būdą cheminiu požiūriu sunkiai prieinamos azotą turinčios 2-hidrokslhete35 rociklinės karboninės rūgšties gamybai.
£;
' 2 ;
Šis tikslas buvo pasiektas išradime aprašytu būdu pagal išradimo apibrėžties 1 punktą, naudojantis naujais r
mikroorganizmais pagal išradimo apibrėžties 6 punktą.
Pagal šį išradimą šio būdo esmė yra tai, kad azotą turinti heterociklinė karboninė rūgštis, formulės
kurioje Ri ir R2 yra tokie patys arba skirtingi ir 15 reiškia vandenilio atomą, halogeno atomą arba Ci-G^alkilinę grupę, o X ~ azoto' atomą arba ?CR3 funkciją, kur R3 reiškia vandenilio arba halogeno atomą, yra6metilnikotino rūgštį naudojančių mikroorganizmų, turinčių specifinę hidr oksidazę, substratas, kuris paverčiamas į azotą turinčią hidrcksi-heterociklinę karboninę rūgštį, kurios bendra formulė yra , - i ·
kurioje Rt, R2 ir X turi minėtas reikšmes.
. Sąvoka 6-metilnikotino rūgštį naudojantys mikroorganizmai, turintys specifinę hidroksilazę” reiškia:.
jei pavyzdžiui, išvalytų nutekamųjų vandenų inokuliate 35 su 6-metilnikotino rūgštimi auginti biomasę, tai gaunami 6-metilnikotinp rūgštį naudojantys mikroorganizmai, kurie auga naudodami β-metilnikotino rūgštį kaip vienintelį anglies, azoto bei energijos šaltinį.
Jei pagal įprastinius, specialistų taikomus metodus selekcionuoti mikroorganizmus, kurie 6-metilnikotinO rūgštį per 2-hidroksi-6-metilnikotino visiškai suskaldo kaip tarpinį produktą, tai' gaunami mikroorganizmai, turintys specifinę hidroksilazę, t.y., mikroorganizmai, kurie hidroksilina specifinį tarp rūgštinės funkcijos ir azoto atomo esantį vienintelį anglies atomą.
Iš esmės metodui tinka visi mikroorganizmai, kurie selekcionuojami pagal šį principą, pavyzdžiui, iš valytų nutekamųjų vandenų arba iš dirvožemi© mėginių.
Šie mikroorganizmai neaprašyti literatūroje ir yra šio į išradimo sudėtinė dalis. ' / ·.
'.1' 1 '
Šiam būdui tikslinga naudoti mikroorganizmus, žymimus Ki 101 (DSM 6920), taip pat jų palikuonis bei mutantus.
Jie yra 1992. 03. 25 deponuoti firmoje Deutsche
Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, /'2Ū1 :':Mascher.gde;rwėg’· 1b, D-3300 Braunschweig.
' Mokslini s Ki .101 (DSM 6920) aprašymas; ‘ ·
Ląstelių forma Plotis milimikronais Ilgis milimikronais Judrumas mažytės lazdelės 0.4-0.5 1.0-1.5
Ūseliai Gram-reakcija ·
Lizaviraas 3.% KOH
Aminopeptidazė (Cerny) + '
Sporos ' -
Oksidazė +
Katalazė
Atliekant 16S rRNA sekos analizę, rūšis nebuvo
nustatyta.
'Vi· 4
Šių mikroorganizmų selekcija ir auginimas, naudojant 6metilnikotino rūgštį» atliekama pagal .įprastus, specialistų taikomus metodus.
- Selekcijos ••-meto '//tikslingai vyksta mikroorganizmų //:skriningas- .aerabin^nisYsąly^mįs,. < ’.
/ Pirmenybė (telkįai^:/(mikroorganizmų. auginimuiskriningo >/-.// metodu/· ramybės būsenų je /Cnepurtantj., ^-/-///7--- ''/.//- -i', -///(-. /7r'//' v- ' > ' t '/''··.' .'.·*
'../ Selekcijos:/'įr//auginįim3../;fflėtu'/-naudojaus' S-metilnikotiso - 7 rūgšties .-kiekis://yra· iki 1 svorio %, labiau -tinka kiekis : .' /iki -0+.5-svorio/T··^. :(''//.
1-5- ../Selekcįja/-.,įi-/''augįnįmas/:;.'.vyksta-//esant(:pe..'7nuo'7.'5.'?iki. 9,'
-/- '-/7- „ypač/tinka/reikšmės- nuo S/.ifci 8.
Selekci jos Ir auginimo metu temperatūra- turi būti tarp
-'.- 15 ir 50°C, 7ypa£/'tlnka.-'--teH^eratura';/tarpv/25/ir·: 40 °C.
/ // ---//¾ 77. '/'.'-// ' ',P^jrastai/,'./;selekcija.v.'įr\ /auginimas vyksta /.(mineralinių,. - : druskų 'Ιοηρβ5ο+/··/ΐ3&Ιοη..-7/Ιχηΐ£3/;'Ισ;&ΐθ7.ιηχηεΓθ1χη^<;.<Ιτη3ΐη.(..-.
/ - terpė, :/kuriQS<sudėtį.s.iaprašyta./lentelėje I. -.7'(//-;7 .-, Jei'.· pasiektas /-/tikslinis aptinis/Tankls/'/esant /650 nm ' tQD65o) nuo- 0,5 iki///100, tai; mikroorganizmai gali būti '.surinkti-.- arba -/-įprast-inlais,-.: ,/;specialistų·/ /naudojamais metodais, arba substratas, azoto turinti heterociklinė karboninė rūgštis,, / tiesiogiai /... pridedama prie mikroorganizmų, kad vyktų norima reakcija (biotransformacija).
Norima biotransformacija tada vyksta pagal įprastus, specialistų taikomus metodus su neaugančiomis ląstelėmis.
Substratai, kurių bendroji formulė II, gali, pavyzdžiui, būti nikotino rūgštis, pirazinkarboninė rūgštis arba jų halogeniniai arba alkilinti C1-Č4 dariniai.
5, '
Halogenintų nikotino rūgšties arba pirazino karboninės rūgšties dariniu tarpe ypač tinka hidroksilinimuį 6chlor-nikotino rūgštis, 5,6-dichlor-nikotino rūgštis ir
5-chlor-pirazinkarboninė rūgštis.
10
C^-Cį Pirazinkarboninės rūgšties darinių ta.rpe ypač hidroksilinimui tinka 5-metilpirazinkarboninė rūgštis.
Substratas į biotransformacijos mišinį gali būti 15 dedamas nuolatos arba vienu kartu. Tikslinga substratą dėti taip, kad jo koncentracija maitinamoje terpėje neviršytų 10 svorio %, o ypač 7 svorio %. /.
* r . Biotransformacijai naudotinos įprastinės, specialistų 20 naudojamos terpės. Ypač tinkamas biotransformacijai žemo molingumo fosfatinis buferis.
Paprastai biotransformacija atliekama naudojant mikroorganizmų suspensiją, kurios optinis tankis esant
650 nm (OD650) yra nuo 0,5 iki 100, ypač tinka optinis tankis nuo 5 iki 50. ‘
Biotransformacija vyksta esant temperatūrai nuo 15 iki 50°C, ypač tinka temperatūra nuo 25 iki 35°C, esant pH nuo 5 iki 9, ypač tinka pH nuo 6,5 iki 7,5.
Po įprastinės transformacijos trukmės nuo 5 valandų iki 3 dienų,' hidroksiįintas produktas, turintis formulę I, gali būti išskirtas taikarit įprastinius specialistų naudojamus metodus, pavyzdžiui, parūgštinant sterilų supernatantą.
Pagal šį metodą pagamintos literatūroje neaprašytos azoto turinčios hidroksi-heterociklinės karboninėj rūgštys, kurių bendra formulė yra
kurioje, tuo a tve j u, kai X yra azoto atomas, Rr ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir gali būti vandenilis, halogenas arba C1-C4-alkilii)ė . grupė, tačiau išimtį y sudaro tai, kad Rx ir R2 Vienu metu negali būti vandenilis, taip pat jei X reiškia CH funkciją, Rx ir R2 reiškia halogeno atomą.
15'/././/.../.7.77/(///// '/Y/I Y<( Y.)(Y/( /( //γ y, /7.
Y Ypač tinkami šių naujų junginių atstovai yra 5,6dichlor-2-hidroksi-nikotino rūgštis, 3-hidroksi-5metil-pirazinkarboninė rūgštis ir 3-hidroksi-5-chlorpirazinkarboninė rūgštis.
(y/ky.y / Pavyzdys 1
Mikroorganizmų/ naudojančių 6-metil-nikotino rūgštį, išskyrimas -·-··.··· .··.
./(/./''/ y '''\/X\.';7)'''':':;'.(')'7k':7v'/; y· '/k y 'k..
300 ml talpos Erlenmejerio kolba buvo pripildyta 100 ml mineralinių druskų terpės su 1 mmol 6-metilnikotino rūgšties (1 lentelė) ir sumaišyta su 10 ml valytų nutekamųjų vandenų, paimtų iš firmos LONZA AG Vispe,
Šveicarijoje, arba LONZA gamyklos grunto mėginiais, Vispe ir statiškai inkubuota esant 30°C temperatūrai. Po10 dienų kai kuriuose mėginiuose spektrofotometriniu būdu buvo aptikta 2-hidroksi-6-metilnikotino rūgštis. Šios kultūros vėliau buvo keletą kartų persėtos į
Λ šviežią mineralinių druskų terpę. Po to 2-hidroksi-6metilnikotino rūgštį gaminančių ląstelių suspensijos buvo persėtos į tą pačią terpę, turinčią 1,6 % (s/t) agaro. Po to agaro lėkštelės esant 30°C buvo inkubuotos atmosferoje, turinčioje 4 % 02 ir 96 % N2. Tada pavienės kolonijos perkeltos i, skystą terpę ir inkubuotos statiškoje būklėje. Bakterijų štamas, žymimas KilOl (DSM 6920), augimo metu 6-metil-nikotino rūgšti, pavertė 2-hidroksi-6-metil-nikotino rūgštimi.
Pavyzdys 2 ' 10 Nikotino rūgšties mikrobinė oksidacija i, 2-hidroksinikotino rūgšti, ’
Mikroorganizmai, žymimi KilOl (DSM 6920), buvo ./4/4'·-'.: inkubuoti 800 ml mineralinių druskų terpėje (lentelė 15 I), pridedant 8 .mmol 6-metil-nikotino rūgšties 1 1 talpos .. Fernbacho kolboje, esant 30°C temperatūrai, purtyklėje, esant 100 rpm.’ Inokuliatas sudarę 5% (t/t) .
Po 5 dienų OD650 siekė apie 0,5. Po to ląstelės . surinktos ir vieną kartą praplautos 50molių fosfatinio buferio (pH 7.0).
o Tada ląstelės buvo resuspenduotos 20 ml 50 mM fosfatinio buferio, esant pH 7.0, kuriame yra 200 mg (1.38 mmol) nikotino rūgšties natrio druskos. OD6S0 buvo lygu 20. Po 6 vai. trukusios inkubacijos purtyklėje prie 30°C, atlikus plonasluoksnę chromatografiją, nikotino rūgšties nerasta. Po to biomasė nucentrifuguota ir superriatantas parūgštintas iki pH 2.5, siekiant išsodinti 2-hidroksi-nikotino rūgštį.
'30.' ·' '/ >
Atlikus įfl-NMR (DMSO) analizę, išskirtame produkte nerasta priemaišų. Iš viso buvo išskirta 140 mg (1 mmol) 2-hidroksinikotino rūgšties, tai atitinka 72% išeigą, skaičiuojant pagal nikotino rūgštį.
'35 is
Lentelė 1 ' - .
' 8 o
Mineralinių druskų terpės tirpalai
Koncentruotas tirpalasI:
NaH2PO4.2H2O 156.0 g
MSįd//'/ 10.0 g
K2SO4 .'7 \ 1.·.'. 1.2 g
pH (koreguojan la KOH iki) 7.0
Dist. vanduo 500.0 ml
p-amino benzoj ;w>.JL .vI.inZ -.L- -L »- .nė rūgštis 8.0 mg
D-biotinas 2.0 mg
Nikotino rūgst sis/;/////// 20-0 mg
Ca-D-pantote,ne itas 10.0 mg
Pirido ksa1hid i rochloridas / 30.0 mg
T i amindich1or j .das 20.0 mg
Ciankobalamine iš-//.//.' / /-’ / 10.0 mg
Dist.vanduo 7 100.0 ml, £ steriliai filtruoti
Koncentruotas tirpalas III:
HCl (37%) 7.0 ml
FeCl2.4H2O 7 7 -1.5 g
ZnCl2 ' 0.07g
MnCl2.4H2O 7 //-. 0.1 g
H3BO3 0.006 g
CoC12.6H2O 0.19 g
CuC12;?H2O 0.002 g
NiCl2.6H2O 0.024 g
Na2Mo04.2H20 0.036 g
Dist. vanduo 1000.0 ml, . autoklavuoti prie
121°C, 20 min.
Koncentruotas tirpalas IV:
NaOH - . 0.5 g
Na2SeO3.5H2O 0.003 g
Na2WO4.2H2O 0.004 g
Dist. vanduo 1000.0 ml, autoklavuoti prie 'r. A ’ \ ’ 121°C, 20 min.
Koncentruotas tirpalas V:
, 5 , · ' -,.'/.
MgCl2.6H2O 40.0 g
CaCl2.2H2O · 7' ' 7' '; 5.0 g - ' /
Dist. vanduo 200.0ml, autoklavuoti prie 121°C, min.
6-metil-nikotino rūgštis (500 mM)
6-metil-nikotino rūgšties Na druska 80.0 g
Dist. vanduo 1000.0 ml, autoklavuoti prie 121°G 20 min.
o Augimo terpė 10 mM 6-metil-nikotino rūgšties *
. Tirpalas I : 25.0 ml
6-metil-nikotino rūgštis 20.0 ml
Dist. vanduo 100010 ml, 'autoklavuoti , prie 121°C 20 min.
' Po sterilizacijos pridedama
Tirpalas I • 0.5 ml
Tirpalas III ' 1.0 ml
Tirpalas IV 1.0 ml
Tirpalas v 0.5 ml
ίο '
Lentelė 2:
· Pavyzdžiai 3-7 atitinka aprašytąjį 2 pavyzdį. Apibendrinti rezultatai pateikti lentelėje 2.
Pvz. A',,. ' Pradinė Eone. medžiaga OD650 Laikas nm (h) Produktas /Išeiga
3 .6-chlor- 1%(s/t) / nikotino '\.A-+/A./.-. ?/ rūgšties +'-/./ natrio .··/·. .·.+ druska 20 16 6-chlor-2- hidroksinikot ino rūgštis 70% (gauta)
/4'+-'. 5,6-di- l%(s/t) chlor- -+/(./7/( nikotino rūgšties -'natrio/·-' druska (-:''('(/' 20 16 5,6-dichlor- 2-hidroksi- nikotino rūgštis 20% (a- nalit.)
5 + Pirazinkar- 0,3% boninės (s/t) rūgšties natrio druska ','/'·5./'; 24 ? 3-hidroksi- pirazinkarbon inė rūgštis 70% (analit.)
/6>' 5-metil- 0,3% pirazinkar- (s/t) boninės rūgšties natrio druska 5 - 24 3-hidroksi-5- metil- pirazinkarbon inė rūgštis 80% (analit.)
.''..7'-.' 5-chlor- 0,3% pirazinkar- (s/t) boninės rūgšties '- '/. 5 -' 24 3-hidroksi-5- chlor-pira- zinkarboninė rūgštis 50% (a- nalit.)
natrio druska
Analitiniai duomenys pavyzdžiui 6:
(3-tidroksi-5-metil-pirazinkarboninė rūgštis) 1H-NMR: (DMSO, 400 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.)
2.4, s; 2.6, s; 3.8, s; 7.8, s.
13C-NMR: (DMSO, 100,5 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) · .
20, t; 40, m; 130, s; 134, s; 155, s; 164, s; 170, s.
Analitiniai duomenys 7 pavyzdžiui:
(3-hidroksi-5-chlor-pirazinkarboninė rūgštis) ^H-NMR: (D2O ir dioksanas, '400 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) ,7 7
3.8, s; 4.7, s; 8.0, s.
c 13C-NMR: (D2O ir dioksanas, 100.5 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) >
132, s; 133, s; 149, s; 164, s; 172, s.

Claims (7)

  1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS
    1. Mikrobiologinis būdas, skirtas gaminti azotą turinčias hidroksi-keterociklines karbonines rūgštis ar
    5 - jų tirpias druskas, kurių bendroji formulė kurioje Rx ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio atomą, halogeno atomą arba C1-C4-alkilo
    15 . grupę; o X - azoto atomą arba CR3 funkciją, kur R3 •R reiškia vandenilį arba halogeno atomą, b e s i s k ir i ant i s tuo, kad azotą turinti heterociklinė karboninė rūgštis ar jos tirpios druskos, kurių bendroji formulė yra . kurioje Rlf R2 ir X turi minėtas reikšmes, yra 6-metilnikotino rūgštį naudojančių mikroorganizmų, turinčių specifinę hidroksilazę, substratas, kurį
    30 paverčia į produktą, turintį formulę I.
  2. 2. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad substratu naudoja azotą turinčias heterociklines karbonines rūgštis, kurių bendroji
    35 formulė yra kurioje ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio atomą, chloro atomą arba metilo grupę, o X
    10 reiškia azoto atomą arba CH. .
  3. 3. Būdas pagal bent vieną iš 1 arba 2 punkto, b e s i sk i r I-a n t i s tuo, kad transformacijai naudoja mikroorganizmus Ki 101 T DSM 6920) arba jų įpėdinius ar
    15 mutantus.
  4. 4. Būdas pagal bent vieną rš 1-3 punktų, b e sis k ir i a n t i s tuo, kad transformaciją vykdo pridedant, •substrato vieną kartą ar nuolatos taip, kad substrato
    20 koncentracija kultūrinėje terpėje neviršytų 10 svorio
  5. 5. Būdas pagal bent vieną' iš 1-4 punktų, b e ši s k ΙΑ r. i a n t i. s . tuo , kad transformaciją vykdo esant
    25 temperatūrai nuo 15 iki 50 C, o pH - nuo 5 iki 9.
  6. 6. Aiikroorganizmai, kurie yra taip atrinkti, kad jie kaip vieningą anglies, azoto ir energijos šaltinį naudoja 6-metilnikotino rūgštį, paversdami ją 230 hidroksi-6-metiĮnikotIno rūgštimi.
  7. 7. Mikroorganizmai pagal 6 punktą, žymimi KilOl (DSM 6920), taip pat jų įpėdiniai bei,mutantai.
    35 8. Azoto turinčios hidroksi-heterociklinės karboninės rūgštys, kurių bendroj i formulė i* atomas, -Rį ir Rz yra '' vienodi ; arba skirtingi \/ir/.. gali ' -..būti. . vandenilis, ybaiogenad'-ūehdą;.'.Ci'-7C4taIItLIO;;.;grnpė,:.· tači au' išimti sudaro tai, / /kad+->L\</ir+'-Eg^/vienu /metu / negali būti vandenilis, .· taip pat' j ei X'- ^reiškia CH -ftaįkęi ją,;;. Rr ir i R2 ' reiškia' • 15;.;; ;^9.:/5,'6-Dięhiort2tfaidrdkėiyE5ikofcinp;; rūgštis.
LTIP377A 1992-03-04 1993-03-03 Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles LT3114B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH67292 1992-03-04

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LTIP377A LTIP377A (en) 1994-06-15
LT3114B true LT3114B (en) 1994-12-27

Family

ID=4192473

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LTIP377A LT3114B (en) 1992-03-04 1993-03-03 Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles

Country Status (17)

Country Link
US (2) US5306630A (lt)
EP (1) EP0559116B1 (lt)
JP (1) JPH06199797A (lt)
KR (1) KR100274205B1 (lt)
CN (1) CN1077748A (lt)
AT (1) ATE153698T1 (lt)
CA (1) CA2091005C (lt)
CZ (1) CZ282939B6 (lt)
DE (1) DE59306547D1 (lt)
DK (1) DK0559116T3 (lt)
ES (1) ES2101887T3 (lt)
GE (1) GEP19991710B (lt)
GR (1) GR3024286T3 (lt)
LT (1) LT3114B (lt)
LV (1) LV10504B (lt)
RU (1) RU2122029C1 (lt)
SK (1) SK279322B6 (lt)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9426293D0 (en) * 1994-12-28 1995-02-22 Zeneca Ltd Composition,compound and use
US5763232A (en) * 1996-02-15 1998-06-09 Mitsubishi Chemical Corporation Method for producing 3-hydroxy nitrogen-containing six-membered cylic compound
CA2383460C (en) * 1999-08-27 2015-10-13 Invitrogen Corporation Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions
US6767741B1 (en) * 1999-08-27 2004-07-27 Invitrogen Corporation Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions
WO2002029021A2 (de) * 2000-10-06 2002-04-11 Lonza Ag Biotechnologisches verfahren zur herstellung von hydroxy-stickstoff-heterocyclus-carbonsäuren
PL2192117T3 (pl) * 2007-09-27 2014-10-31 Toyama Chemical Co Ltd Sól 6-fluoro-3-hydroksy-2-pirazynokarbonitrylu z organiczną aminą i sposób jej wytwarzania
BR112013011418B1 (pt) * 2010-11-12 2021-03-16 Fujifilm Toyama Chemical Co., Ltd Derivado de pirazino[2,3-d]isoxazol, métodos para a produção de um derivado de pirazino [2,3-d]isoxazol e compostos

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4081451A (en) 1975-03-20 1978-03-28 Schering Corporation Process for preparing 2-halogeno nicotinic acids

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6061567A (ja) * 1983-09-14 1985-04-09 ロンザ　リミテツド ２−ピリジンカルボン酸−ν−オキサイドから２−ヒドロキシピリジンを製造する方法
CH658866A5 (de) * 1984-02-21 1986-12-15 Lonza Ag Verfahren zur herstellung von 6-hydroxynikotinsaeure.
CH658867A5 (de) * 1984-02-22 1986-12-15 Lonza Ag Verfahren zur herstellung von 6-hydroxynikotinsaeure.
IN170700B (lt) * 1989-12-20 1992-05-02 Lonza Ag
US5236832A (en) * 1990-02-13 1993-08-17 Lonza, Ltd. Microbiological oxidation of methyl groups in heterocycles
US5242816A (en) * 1990-07-10 1993-09-07 Lonza Ltd. Microbiological oxidation of alkyl groups in heterocycles
CZ279464B6 (cs) * 1990-09-24 1995-05-17 Lonza A.G. Způsob hydroxylace methylových skupin v aromatických heterocyklech, hybridní plasmidy pL05 a p L04 uložené v mikroorganismech Pseudomonas putida a Escherichia coli
CZ279488B6 (cs) * 1990-09-25 1995-05-17 Lonza A.G. Způsob mikrobiologické výroby hydroxylovaných heterocyklů
KR100233330B1 (ko) * 1991-02-04 1999-12-01 하인즈 모제르 6-히드록시피콜린산을 제조하기 위한 미생물학적 방법
US5238830A (en) * 1991-02-04 1993-08-24 Lonza Ltd. Microbiological process for the production of 6-hydroxypicolinic acid
JPH0740951B2 (ja) * 1991-03-30 1995-05-10 池田食研株式会社 微生物による含窒素複素環化合物の水酸化物の製造方法
JPH0728750B2 (ja) * 1991-03-30 1995-04-05 池田食研株式会社 微生物によるピラジン酸の水酸化物の製造方法
FI922125A (fi) * 1991-06-21 1992-12-22 Lonza Ag Mikrobidogiskt foerfarande foer framstaellning av 5-hydroxipyrazinkarboxylsyra
MX9204902A (es) * 1991-08-30 1993-05-01 Lonza Ag Procedimiento microbiologico para la preparacion de acido 6-hidroxipirazincarboxilico.
JP2583719B2 (ja) * 1992-08-10 1997-02-19 株式会社日立製作所 ガス制御式出力安定化ガスレーザ装置

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4081451A (en) 1975-03-20 1978-03-28 Schering Corporation Process for preparing 2-halogeno nicotinic acids

Also Published As

Publication number Publication date
JPH06199797A (ja) 1994-07-19
CZ282939B6 (cs) 1997-11-12
RU2122029C1 (ru) 1998-11-20
SK13793A3 (en) 1993-10-06
GR3024286T3 (en) 1997-10-31
CN1077748A (zh) 1993-10-27
EP0559116A3 (en) 1994-07-06
CZ27293A3 (en) 1994-01-19
EP0559116A2 (de) 1993-09-08
ES2101887T3 (es) 1997-07-16
LV10504B (en) 1996-02-20
US5364940A (en) 1994-11-15
DE59306547D1 (de) 1997-07-03
EP0559116B1 (de) 1997-05-28
KR100274205B1 (ko) 2000-12-15
CA2091005A1 (en) 1993-09-05
GEP19991710B (en) 1999-08-05
SK279322B6 (sk) 1998-10-07
US5306630A (en) 1994-04-26
ATE153698T1 (de) 1997-06-15
DK0559116T3 (da) 1997-06-16
KR930019834A (ko) 1993-10-19
CA2091005C (en) 2001-09-25
LTIP377A (en) 1994-06-15
LV10504A (lv) 1995-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5173412A (en) Microbiological process for the production of hydroxylated pyrazine derivatives
US4758518A (en) D-2-haloalkanoic acid halidohydrolase
LT3114B (en) Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles
JPH0569514B2 (lt)
SK278496B6 (en) Microbiological producing method of 6-hydroxypicolinic acid
Yasuda et al. Microbial hydroxylation of 3-cyanopyridine to 3-cyano-6-hydroxypyridine
US5516661A (en) Microbiological process for the production of aromatic hydroxy-heterocyclic carboxylic acids
JPWO2006030909A1 (ja) ２−ヒドロキシ−４置換ピリジンの製造方法
Arima et al. BACTERIAL OXIDATION OF DIPICOLINIC ACID I: Isolation of Microorganisms, Their Culture Conditions, and End Products
US5270203A (en) Biologically pure culture of Alcaligenes faecalis DSM 6335
US4673646A (en) Production of 2-hydroxymuconic semialdehyde
KR100471703B1 (ko) 알칼리게네스속미생물을사용하여헤테로방향족카르복실산을제조하는미생물학적방법
US5264361A (en) Microbiological process for the production of 6-hydroxypicolinic acid
US5364939A (en) Process for the production of carboxylic acid chlorides of aromatic nitrogen heterocycles
KR100216996B1 (ko) 6-히드록시니코틴산의 미생물학적 제조방법
US4617156A (en) 2-hydroxymuconic semialdehyde bisulfite adduct
US5266482A (en) Agrobacterium useful for the microbiological process for the production of hydroxylated pyrazine derivatives
US4666841A (en) Production of picolinic acid and pyridine products
CA2163602A1 (en) Di-and trisubstituted pyridines and their preparation
LT3122B (en) Microbiological process for preparing malonyl-7-aminocephalosporanic acid derivatives
Clark et al. Genetic Deregulation of Ethanol-Related Genes
PL184111B1 (pl) Mikrobiologiczny sposób wytwarzania heteroaromatycznych kwasów karboksylowych

Legal Events

Date Code Title Description
MM9A Lapsed patents

Effective date: 20030303