KR970707292A - 생존성 오염 입자-비함유 아데노바이러스, 이의 제조 방법 및 용도(viable contaminant particle free adenoviruses, their preparation and use) - Google Patents

생존성 오염 입자-비함유 아데노바이러스, 이의 제조 방법 및 용도(viable contaminant particle free adenoviruses, their preparation and use) Download PDF

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Abstract

신규 아데노바이러스-유도된 바이러스 벡터, 이의 제조 방법, 유전자 치료에 있어서 이의 용도가 기술됨. 특히, (ⅰ) E1 영역이 불활성화되고, (ⅱ) 게놈 구성이 변형되며, (ⅲ) 생성 세포주 게놈과의 임의의 재조합으로 비-생존성 바이러스 입자를 생성하는 아데노바이러스 게놈을 포함하는 재조합 아데노바이러스가 기재됨.

Description

생존성 오염 입자-비함유 아데노바이러스, 이의 제조 방법 및 용도(VIABLE CONTAMINANT PARTICLE FREE ADENOVIRUSES, THEIR PREPARATION AND USE)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 Ad5 아데노바이러스의 유전자 구성도. Ad5의 완전한 서열은 데이터 베이스로 입수할 수 있으며, 당해 분야의 전문가로 어떠한 제한 부위도 선택하거나 고안하고 이에 따라 게놈의 어떠한 영역도 분리해낼 수 있게 한다, 제2도는 아데노바이러스와 세포주 293간의 재조합도, 제3도는 본 발명의 벡터 유형 및 이의 세포주 293과의 재조합 다이아그램도, 제5도는 상호교환된 말단을 갖는 본 발명의 아데노바이러스의 다이아그램도. E4+는 기능성 E4 영역을 나타내고;E4는 비-기능성 E4 영역을 나타내며, Ψ는 캡시드화 서열을 나타낸다. 해당 유전자의 발현 카세트는 도시되지 않았지만, 텍스트에 표시된 바와 같이 삽입될 수 있다. 제7도는 플라스미드 pCO1에 함유되어 있는 HindⅢ 단편의 제한지도.

Claims (37)

  1. E1 영역이 불화성화되어 있고, 게놈 구성이 변형되어 있으며, 생성 세포주 게놈과의 가능한 재조합이 비-생존성 바이러스 입자의 생성을 유도하는 아데노바이러스 게놈을 포함함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  2. 제1항에 있어서, 복제 및/또는 증식에 필수적인 적어도 하나의 영역이 최초 위치와 다른 게놈 위치에 존재함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  3. 제2항에 있어서, 필수 영역이 비-기능성인 다른 하나의 게놈 영역에 있거나 이에 근접하여 있음을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  4. 제3항에 있어서, 비-기능성 게놈 영역이 하나 이상의 염기의 돌연변이 및/또는 결실에 의해 불화성화된 영역임을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  5. 제3항 또는 4항에 있어서, 비-기능성 영역이 부분 결실 또는 전체 결실에 의하여 불활성화됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  6. 제2항 내지 5항 중 어느 한 항에 있어서, 비-기능성 영역이 불활성화된 E1 영역 및/또는 E3 영역으로 표현됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  7. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서, E1 영역이 454 내지 3328번 뉴클레오타이드에 걸친 PvuⅡ-BglⅡ 단편, 또는 382 내지 3446번 뉴클레오타이드에 걸친 HinfⅡ-Sau3A 단편의 결실에 의하여 불활성화됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  8. 제2항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 복제 및/또는 생존능에 필수적인 영역이 E4 영역의 전부 또는 일부 및/또는 pⅨ-Ⅳa2 영역의 전부 또는 일부 및/또는 pⅨ 영역의 전부 또는 일부 및/또는 L5 영역의 전부 또는 일부중에서 선택됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  9. 제1항 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 게놈 구성이 E4 영역이 E1 영역결실 부위에 또는 이에 근접하여 전부 또는 부분적으로 위치되어 있도록 함을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  10. 제9항에 있어서, E4 영역이 35835 내지 32720번 뉴클레오타이드에 상응하는 MaeⅡ-MscⅠ 단편으로 표현됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  11. 제9항에 있어서, E4 영역이 적어도 암호화 프레임 ORF3로 표현됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  12. 제7항 또는 8항에 있어서, E4 영역이 적어도 암호화 프레임 ORF6로 표현됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  13. 제1항 내지 7항 중 어느 한 항에 있어서, 게놈 구성이 pⅨ 및 Ⅳa2 단백질-암호화 영역의 전부가 E3 영역에 임의로는 결실 서열의 대치물로서 위치되어 있도록 함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  14. 제13항에 있어서, pⅨ-Ⅳa2-암호화 영역이 Ad5 아데노바이러스 서열상의 3328 내지 6316번 뉴클레오타이드를 포함하는 BglⅡ-NruⅠ 단편으로 이루어짐을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  15. 제1항에 있어서, 생성 세포주가 293 세포주임을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  16. 게놈이 불활성화된 E1 및 E4 영역을 보유하고, E4 영역의 전부 또는 기능성 부분이 불활성화된 E1 영역에 또는 이에 근접하여 존재함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  17. 게놈 구성이 pⅨ 단백질-암호화 영역의 전부 및 E4 영역의 전부 또는 단지 기능성 부분만이 이들의 최초 위치로부터 이동되도록 함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  18. 제17항에 있어서, 두 영역이 결실 서열에 대한 대치물로서 E1 영역으로 이동됨을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  19. 제17항 또는 18항에 있어서, pⅨ 단백질-암호화 영역에 상응하는 판독 프레임이 판독 프레임 중에 역방향으로 위치됨을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  20. 제17항 내지 19항 중 어느 한 항에 있어서, ITR 및 캡시드화 영역을 함유하는 좌측 말단, 및 ITR을 함유하는 추측 말단이 상호교환됨을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  21. 게놈이 불활성화된 E1 영역을 보유하고, ITR 및 캡시드화 영역을 함유하는 좌측 말단과, ITR 및 E4 영역의 전부 또는 기능성 부분을 함유하는 우측 말단이 상호교환됨을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  22. 제20항 또는 21항에 있어서, 좌측 말단이 Ad5 게놈의 처음 382개의 뉴클레오타이드안에 함유되어 있고, 우측 말단이 Ad5 게놈의 최종 3215개의 뉴클레오타이드안에 함유되어 있음을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  23. 게놈이 불활성화된 E1 및 L5 영역을 보유하고, L5 영역의 전부 또는 기능성 부분이 불활성화된 E1 영역에 또는 이에 근접하여 존재함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  24. 제1항 내지 23항 중 어느 한 항에 있어서, ITR 및 캡시드화 영역을 포함함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  25. 제1항 내지 24항 중 어느 한 항에 있어서, 이종 핵산 서열을 함유함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  26. 제25항에 있어서, 이종 핵산 서열이 하나 이상의 치료 유전자를 포함함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  27. 제25항 또는 26항에 있어서, 이종 핵산 서열이 추가로 또는 결실 서열에 대한 대치물로서 E1, E3 또는 E4 영역에 존재함을 특징으로 하는 재조합 아데노바이러스.
  28. 제1항 내지 27항 중 어느 한 항에 있어서, 아데노바이러스 게놈이 사람, 동물 또는 혼합 기원임을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  29. 제28항에 있어서, 사람 기원의 아데노바이러스가 C그룹으로 분류된 것들, 바람직하게는 아데노바이러스 유형 2 또는 5(Ad2 또는 Ad5) 중에서 선택됨을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  30. 제28항에 있어서, 동물 기원의 아데노바이러스가 개, 소, 쥐, 양, 돼지, 조류 및 원숭이 기원의 아데노바이러스 중에서 선택됨을 특징으로 하는 아데노바이러스.
  31. 제1항 내지 30항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 결손 재조합 아데노바이러스를 포함하는 약학 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 주사 제형에 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  33. 측 ITR 내지 6316번 뉴클레오타이드에 이르는 Ad5 아데노바이러스 게놈의 촤측 부분을 포함하고, E1 유전자에 상응하는 382 내지 3446번 뉴클레오타이드 사이에 놓인 영역이 결실되어 있으며, 이 영역에 E4의 전부 또는 기능성 부분이 삽입되어 있는 pCO1-E4 플라스미드.
  34. 컴피턴트 세포주를 그 안에 또는 인접하여 E4 영역의 적어도 기능성 부분이 삽입되어 있는 E1 영역에 결실을 보유하는 아데노바이러스 게놈의 좌측 부분을 포함하는 제1DNA, 및 불활성화된 E4 영역을 보유하는 아데노바이러스 게놈의 적어도 우측 부분, 및 제1DNA와의 공통 부분을 포함하는 제2DNA로 동시형질감염시킨 다음, 재조합에 의해 생성된 아데노바이러스를 회수함을 특징으로 하는, 복제성 입자가 결여되어 있는 재조합 아데노바이러스의 제조 방법.
  35. 제34항에 있어서, 세포주가 세포주 293임을 특징으로 하는 방법.
  36. 제34항에 있어서, 제1DNA가 pCO1-E4 유형의 플라스미드에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  37. 제34항에 내지 36항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 또는 제2DNA가 추가로 해당 이종 DNA 서열을 함유함을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개되는 것임.
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