KR950702639A - 리포터 유전자에 융합된 세균의 스트레스 프로모터를 이용하여 독성을 측정하는 방법 및 진단 킷트(methods and diagnostic kits for determining toxicity utilizing bacterial stress promoters fused to peporter genes) - Google Patents

리포터 유전자에 융합된 세균의 스트레스 프로모터를 이용하여 독성을 측정하는 방법 및 진단 킷트(methods and diagnostic kits for determining toxicity utilizing bacterial stress promoters fused to peporter genes) Download PDF

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Abstract

본 발명은 화합물의 독성을 측정하기 위한 방법 및 진단 킷트에 관한 것이다. 본 발명의 방법 및 진단 킷트는 다수의 세균 숙주들을 이용하며, 이 숙주들은 각각 분석가능한 생성물을 암호하는 유전자에 융합된 상이한 스트레스 프로모터를 암호하는 DNA 서열을 갖고 있다. 이 스트레스 프로모터들은 각각 다른 종류의 세포 스트레스에 노출시 유도된다. 본 발명에 사용된 스트레스 프로모터들은 모두 산화환원 스트레스, DNA 스트레스, 단백질 스트레스, 에너지 스트레스 및 pH 스트레스에 대해 응답반응하는 프로머터들을 포함한다. 본 발명의 방법 및 진단킷트는 화합물의 독성을 특성규명하고 정량하며, 그 독성 작용의 세포 기작을 규명하는데 사용될 수 있다. 더욱기, 본 발명의 방법은 아세포수준에서 화합물의 작용에 관한 정보를 산출한다. 이 정보는 독성인 것으로 밝혀진 화합물에 대한 항독소를 설계하고 활성 약물설계에 이용될 수 있다.

Description

리포터 유전자에 융합된 세균의 스트레스 프로모터를 이용하여 독성을 측정하는 방법 및 진단 킷트(METHODS AND DIAGNOSTIC KITS FOR DETERMINING TOXICITY UTILIZING BACTERIAL STRESS PROMOTERS FUSED TO PEPORTER GENES)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제2도는 β-갈락토시다제 합성으로 측정되는 바와 같이, 4-니트로퀴놀린의 농도변화에 대한 sfiA, ada-alkA, nfo 및 dinD 프로모터의 유도 반응을 도시한 것이다.
제7도는 β-갈락토시다제 합성으로 측정되는 바와 같이, 여러 pH에서의 aniG, sfiA 및 soi 17 프로모터의 유도반응을 도시한 것이다.
제11도는 β-갈락토시다제 활성의 수배 증가로 측정되는 바와 같이 본 발명의 가장 바람직한 진단 킷트중에 있어서의 16가지 스트레스 프로모터들 각각의 유도반응에 대한 니트로퀴놀린 옥사이드의 농도변화에 따른 효과를 도시한 것이다.

Claims (22)

  1. 화합물의 독성을 측정하거나 독성 화합물에 대한 항독소를 규명하기 위한 진단 킷트로서, 이 킷트는 다수의 세균 숙주를 포함하며, 이 숙주들은 각각 스트레스에 대해 응답 반응하는 프로모터를 갖고 있으며, 이 프로머터는 이것과 이성질이며 분석가능한 생성물을 암호하는 유전자에 작동적으로 연결되어 있고, 상기 다수의 숙주들은 모두 산화환원 스트레스, DNA 스트레스, 단백질 스트레스, 에너지 스트레스 및 pH 스트레스 각각에 대해 응답 반응하는 하나 이상의 프로머터를 함유하는 것을 특징으로 하는 진단 킷트.
  2. 제1항에 있어서, 산화환원 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 sodA, soi 28, katG, ahp, rdc, gsh, zwf 및 micF 중에서 선택되는 진단 킷트.
  3. 제1항에 있어서, DNA 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 dinD, ada-alka, ada, leu-500, gyr, top mutT 또는 nfo 중에서 선택되는 진단 킷트.
  4. 제1항에 있어서, 단백질 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 rpoD, lon, clpB, merR, fepB-entc, groE 또는 meto 중에서 선택되는 진단 킷트.
  5. 제1항에 있어서, 에너지 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 sdh, cyo, cyd 또는 unc 중에서 선택되는 진단 킷트.
  6. 제1항에 있어서, pH 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 hag, micF, aniG 또는 katF 중에서 선택되는 진단 킷트.
  7. 제1항에 있어서, 상기 다수의 세균숙주가 모두 프로머터 soi 28, dinD, hag, ada, gyr, katG, nfo, clpB, merR, top, cyd, micF, zwf, groE, katF 및 aniG를 포함하는 진단 킷트.
  8. 제7항에 있어서, rdc, ahp, lon, unc, fepB-entC, leu-500, cyo, sdh, rpoD, ada-alkA, sodA, mutT, gsh 또는 meto 중에서 선택된 하나 이상의 프로모터를 포함하는 진단 킷트.
  9. 제1항 내지 제8항중 어느 한항에 있어서 분석가능한 생성물을 암호하는 상기 유전자가 lacZ인 진단 킷트.
  10. (a) 다수의 세균 숙주 각각을 별도로 배양하는 단계로서, 이때, 상기 숙주들은 각각 스트레스에 대해 응답반응하는 하나 이상의 프로모터를 갖고 있으며, 이 프로모터는 이것과 이질성이며 분석가능한 생성물을 암호하는 유전자에 작동적으로 연결되어 있고, 상기 다수의 숙주들은 모두 산화환원 스트레스, DNA 스트레스, 단백질 스트레스, 에너지 스트레스 및 pH 스트레스 각각에 대해 응답 반응하는 프로머터를 포함하는 단계; (b) 상기 배양물을 각각 화합물과 항온배양하는 단계; 및 (c) 각 배양물에서 상기 분석가능한 생성물을 검측하는 단계를 포함하여 화합물의 독성을 측정하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 산화환원 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 sodA, katG, ahp, soi 28, rdc, gsh, micF 및 zwf중에서 선택되는 방법.
  12. 제10항에 있어서, DNA 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 dinD, ada-alkA, ada, leu-500, gyr, top, mutT 또는 nfo 중에서 선택되는 방법.
  13. 제10항에 있어서, 단백질 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 rpoD, lon, clpB, merR, fepB-entC, meto 및 gtrE 중에서 선택되는 방법.
  14. 제10항에 있어서, 에너지 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가sdh, cyo, cyd 또는 unc중에서 선택되는 방법.
  15. 제10항에 있어서, pH 스트레스에 대해 응답반응하는 상기 프로모터가 hag, katF, micF 또는 aniG 중에서 선택되는 방법.
  16. 제10항에 있어서, 상기 다수의 세균숙주가 모두 프로모터 soi 28, dinD, hag, ada, gyr, katG, nfo, clpB, merR, top, cyd, micF, zwf, groE, katF 및 aniG를 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 다수의 세균 숙주들이 rdc, ahp, lon, unc, fepB-entC, leu-500, cyo, sdh, rpoD, ada-alkA, sodA, mutT, gsh 또는 meto 중에서 선택되는 하나 이상의 프로모터를 추가로 포함하는 방법.
  18. 제10항 내지 제17항중 어느 한 항에 있어서, (b)단계 이전에 상기 화합물과 S9간 추출물을 항온처리하는 추가 단계를 포함하는 방법.
  19. 제10항 내지 제18항중 어느 한 항에 있어서, 분석가능한 생성물을 암호하는 상기 유전자가 lacZ인 방법.
  20. (a) 제10항 내지 제19항중 어느 한 항의 방법에 따라 상기 독성 화합물에 의해 유발되는 스트레스의 종류를 측정하는 단계; (b) 제10항 내지 제19항중 어느 한 항의 방법에 따라 상기 독성 화합물에 의해 유발되는 스트레스와 유사한 스트레스를 유발시키는 공지된 독성 화합물을 규명하는 단계; 및 (c) 상기 공지된 독성 화합물에 대한 항독소를 규명하는 단계를 포함하여 독성 화합물에 대한 항독소를 규명하는 방법.
  21. (a) 제10항 내지 제19항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 약물에 의해 유발되는 스트레스의 종류를 측정하는 단계; 및 (b) 상기 측정된 스트레스를 일으키는 상기 약물의 일부분을 변형시키거나 제거하는 단계를 포함하여 약물의 독성을 감소시키는 방법.
  22. 제21항의 방법에 의해 생성된 변형 약물.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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