KR950700420A - 두개의 유발요소들을 함유한 합성 진핵 세포의 프로모터 - Google Patents

두개의 유발요소들을 함유한 합성 진핵 세포의 프로모터

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Abstract

이 명세서의 요약으로, 본 발명은 신규의 개선된 유발가능한 포유 동물의 발현 시스템의 제조와 사용, 특별히, 기본적인 유전자 발현의 낮은 수준을 유지하면서 글루코코르티코이드들과 금속 이온들에 의해 상승적으로 유발될 수 있는 하나의 또는 몇개의 부가적인 글루코코르티코이드-반응적 요소들을 함유한 변형된 사람의 MT-ⅡA 프로모터들의 제조와 사용을 제공한다. 유발 비율은 본질적인 요소들을 삭제함으로써 더욱 증가시킬 수 있다. 유사한 전략이 부가적인 금속-반응적인 요소들을 삽입함으로써 개선된 쥐의 유방암 바이러스(MMTV) 프로모터를 생성하는데 사용될 수 있다. 변형들은 본 발명의 범주안에서 가능하다.

Description

두개의 유발요소들을 함유한 합성 진핵 세포의 프로모터
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제 1 도는 hMT-IIA 프로모터와 본 발명의 한 실시예에 따라 hMT-IIA 프로모터에 영향을 주는 여러가지 수정으로 변형된 프로모터의 유전자 지도이다.

Claims (42)

  1. 합성 유발 가능한 진핵 세포의 프로모터에 있어서, 적어도 두개의 다른 부류의 유발 가능한 요소들을 포함하고 유전자의 전사를 조절하기 위한 것임을 특징으로 하는 합성 유발 가능한 진핵 프로모터.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 유발 가능한 요소들의 부류들이 호르몬-반응적인 요소들(HREs), 금속-반응적인 요소들(MREs), 열 충격-반응적인 요소들(HSREs), 인터페론-반응적인 요소들(IREs)로 이루어진 그룹으로부터 선택되어진 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 프로모터가 자연적인 프로모터로부터 파생된 것이고 상기 유발가능한 요소들의 다른 부류중 하나가 자연적인 유발가능한 요소이고 상기 유발가능한 요소들의 또 다른 부류가 상기 자연적인 프로모터내에 제공되는 다른 유발가능한 요소임을 특징으로 하는 프로모터.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 유발가능한 요소들의 다른 부류들이 진핵 세포의 발현 시스템에서 유전자 생성물의 발현의 상승적 수준을 제공하도록 선택되어지는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 유발가능한 요소들의 다른 부류들이 진핵 세포의 발현 시스템에서 효과적으로 연결된 유전자 발현의 상승적 수준을 제공하도록 선택되어지는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  6. 제 2 항에 있어서, 상기 유발가능한 요소들의 다른 부류들이 진핵 세포의 발현 시스템에서 효과적으로 연결된 유전자 발현의 상승적 수준을 제공하도록 선택되어지는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  7. 제 1 항에 있어서, 프로모터가 자연적인 프로모터로부터 파생되고, 상기 다른 부류들중 하나가 자연적인 유도가능한 요소이고 상기 다른 부류들중 또다른 하나가 상기 자연적 프로모터에 제공된 다른 유발 가능한 요소이고, 상기 유발가능한 요소들의 다른 부류들이 진핵세포의 발현 시스템에서 유전자 발현의 상승적 수준을 제공하도록 선택되어진 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  8. 제 1 항에 있어서, 프로모터가 적어도 하나의 본질적인 요소를 함유하는 자연적인 프로모터로부터 파생되고, 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 기능적으로 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 자연적인 프로모터와 비교되었을때, 기본적 유전자 발현의 감소된 수준과 기본적 유전자 발현의 수준에 대한 유발된 유전자 발현의 증가율을 제공하도록 충분히 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  10. 제 8 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 자연적인 프로모터로부터의 삭제 및/또는 그안에 유발가능한 요소의 삽입에 의해서 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  11. 제 3 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 자연적인 유발가능한 요소가 금속-반응적인 요소(MRE)이고 적어도 하나의 상기 다른 유발가능한 요소가 호르몬-반응적인 요소(HRE)임을 특징으로 하는 프로모터.
  12. 제11항에 있어서, 상기 적어도 하나의 호르몬-반응적인 요소가 적어도 하나의 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)의 삽입에 의해 상기 자연적인 프로모터에 제공되어지는 것임을 특징으로하는 프로모터.
  13. 제12항에 있어서, 상기 삽입된 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)가 GRE 일치서열을 함유하고 뉴클레오타이드 서열 5′-GATCTGGTACAGGATGTTCTAGCTACG -3′(서열번호 1)를 가진 정(正)사슬을 가진 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  14. 제13항에 있어서, 복수의 글로코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)들이 BamHI와 Bg1Ⅱ의존재하에 자가-연결된 다합적 머리-에서-꼬리 요소의 형태로 상기 자연적인 프로모터내에 삽입되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  15. 제12항에 있어서, 프로모터가 적어도 하나의 본질적인 요소를 함유하는 자연적인 프로모터로부터 유도되고, 그안의 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 기능적으로 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  16. 제15항에 있어서, 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 자연적인 프로모터로부터의 삭제 및/또는 그안에 유발가능한 프로모터의 삽입에 의해 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  17. 제16항에 있어서, 상기 적어도 하나의 본질적인 요소가 기본적 유전자 발현의 감소된 수준과 유발된 유전자 발현의 증가율을 제공하도록 충분히 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  18. 제17항에 있어서, 상기 자연적인 프로모터가 hMT-ⅡA 프로모터인 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  19. 제12항에 있어서, 상기 자연적인 프로모터가 hMT-ⅡA 프로모터인 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  20. 제19항에 있어서, 자연적인 프로모터안으로 상기 적어도 하나의 글루코코르티코이트-반응적인 요소(GRE)의 삽입이 진핵 세포의 발현 시스템에서 상기 적어도 하나의 자연적인 금속-반응적인 요소(MRE)와 적어도 하나의 첨가된 GRE의 유발에 대한 상승적 유전자 발현을 생성하는 것을 특징으로 하는 프로모터.
  21. 제20항에 있어서, 자연적인 프로모터내로 상기 적어도 하나의 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)의 삽입에 진핵 세포의 발현 시스템에서 증대된 유전자 발현 수준을 생성하는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  22. 제19항에 있어서, 다중 연결된 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)들이 자연적인 프로모터내에 삽입되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  23. 제19항에 있어서, 적어도 하나의 자연적인 본질적 요소가 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  24. 제23항에 있어서, 상기 본질적 요소가 삭제 및/또는 그안에 적어도 하나의 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)의 삽입에 의해 무능력화된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  25. 제24항에 있어서, 자연적인 hMT-ⅡA프로모터의 -79 내지 -129 염기 사이에 위치한 자연적인 본질적 요소 AP1과 AP2가 삭제된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  26. 제25항에 있어서, 적어도 하나의 글로코코르티코이드-반응적인 요소(GRE) 서열이 자연적인 hMT-ⅡA 프로모터의 SacⅡ부위(-175 염기)에 삽입됨으로서 그 위치의 AP2 본질적 요소 무능력화함을 특징으로 하는 프로모터.
  27. 제19항에 있어서, 상기 적어도 하나의 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)가 자연적인 hMT-ⅡA 프로모터의 SacⅡ 부위(-175 염기)와 XmaⅢ부위(-129 염기)의 적어도 하나의 삽입되는 것을 특징으로 하는 프로모터.
  28. 제27항에 있어서, 두개의 연결된 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE) 서열들이 XamⅢ부위에 삽입되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  29. 제27항에 있어서, 세개의 연결된 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE) 서열들이 SacⅡ부위에 삽입되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  30. 제 3 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 자연적인 유발가능한 요소가 호르몬-반응적인 요소(HRE)이고 상기 적어도 하나의 다른 유발가능한 요소가 금속-반응적인 요소(MRE)인 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  31. 제30항에 있어서, 상기 적어도 하나의 호르몬-반응적인 요소가 글루코코르티코이드-반응적인 요소(GRE)이고 상기 금속-반응적인 요소(MRE)가 상기 자연적인 프로모터안에 삽입에 의해 제공되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  32. 제31항에 있어서, 상기 삽입되는 금속-반응적인 요소(MRE)가 MRE일치서열을 함유하고 뉴클르레오타이드 서열 5′-GATCTTGCGCCCGGCCCG-3′(서열번호 2)를 가진 정(正)사슬을 가진 합성 분자인 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  33. 제32항에 있어서, 복수의 금속-반응적인 요소(MRE)들이 BamHI와 Bg1Ⅲ의 존재하에 자가-연결된 다합적 머리-에서-꼬리 요소의 형태로 자연적인 프로모터내에 삽입되는 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  34. 제31항에 있어서, 상기 자연적인 프로모터가 MMTV-LTR프로모터인 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  35. 제34항에 있어서, 최소한 두개의 연결된 금속-반응적인 요소(MRE)들이 자연적인 프로모터에 삽입된 것임을 특징으로 하는 프로모터.
  36. 유전자 생성물의 진색세포의 발현을 위한 벡터에 있어서, 벡터가 최소한 두개의 다른 부류의 유발가능한 요소들로 이루어진 합성 유발가능한 진핵세포의 프로모터를 포함하는 것임을 특징으로 하는 유전자 생성물의 진핵세포의 발현을 위한 벡터.
  37. 제36항에 있어서, 상기 프로모터가 유전자에 효과적으로 연결되어 있는 것임을 특징으로 하는 벡터.
  38. 제37항에 있어서, 상기 프로모터가 제19항에 청구된 바와같이 변형된 자연적인 hMT-ⅡA 프로모터임 것임을 특징으로 하는 백터.
  39. 제37항에 있어서, 상기 프로모터가 제35항에서 청구된 바와같이 변형된 자연적인 MMTV- LTR 프로모터인 것임을 특징으로 하는 벡터.
  40. 진핵 세포의 발현 시스템에서, 유발된 유전자 발현에 영향을 미치는 제37항에서 청구된 바의 벡터를 함유하는 진핵 세포들을 포함하는 진핵 세포의 발현 시스템.
  41. 제40항에 있어서, 상기 진핵 세포들이 포유류의 세포들인 것임을 특징으로 하는 발현 시스템.
  42. 제41항에 있어서, 상기 포유류 세포들이 Vero, CHO. HeLa, RatⅡ 및 상기 세포들로부터 선택되어지는 것임을 특징으로 하는 발현 시스템.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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