KR950003446A - 돌연변이체 aox2 프로모터, 이를 보유한 벡터, 형질 전환체, 및 이종 단백질의 제조방법 - Google Patents

돌연변이체 aox2 프로모터, 이를 보유한 벡터, 형질 전환체, 및 이종 단백질의 제조방법 Download PDF

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Abstract

야생형 AOX2 프로모터의 부분 DNA 단편의 5` 말단에 1 내지 3개의 올리고뉴클레오티드(들) GATAGGCTATTTTTGTCGCZATAAAT가 정방향, 역방향, 또는 정방향 및 역방향으로 첨가된 돌연변이체 AOX2 프로모터, 이 프로모터를 보유한 벡터, 이 벡터가 도입된 형질 전환체 및 이 형질 전환체를 배양하는 것으로 구성된 이종 단벡질의 제조방법이 개시되어 있다. 본 발명의 돌연변이체 AOX2 프로모터는 야생형 AOX2 프로모터에 비해 현저히 향상된 프로모터 활성을 가지고 있다. 따라서, 본 발명의 프로모터는 이종 단백질을 발형할 수 있는 벡터에 의해 보유되는 프로모터로서 매우 유용하다. 본 발명의 벡터는 숙주내에서 각종 유용한 이종 단백질을 효율적으로 발현하고 생산할 수 있다.

Description

돌연변이체 AOX2 프로모터, 이를 보유한 벡터, 형질 전환체, 및 이종 단백질의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 AOX2 유전자 및 그 주변영역의 제한 효소 지도를 나타낸다. 괄호안의 숫자는XbaⅠ인식 부위를 0으로 했을때의 거리(×100뉴클레오티드)를 표시한 것이다. 제2도는 PC4130 균주의 AOX1 유전자 영역 및 AOX2 유전자 영역을 나타낸다. 도면에서 term. 은 터미네이터를 의미하고 prom. 은 프로모터를 의미한다. 제3도는 pMM030 플라스미드에 클로닝된 AOX2 프로모터의 제한 효소 지도를 나타낸다. 괄호안의 숫자는EcoRI 인식 부위를 0으로 했을때의 거리(×100뉴클레오티드)를 표시한 것이다.

Claims (15)

  1. 야생형 AOX2 프로모터의 부분 DNA 단편의 5` 말단에 1 내지 3개의 올리고뉴클레오티드(들) GATAGGCTATTTTTGTCGCATAAAT가 정방향, 역방향, 또는 정방향 및 역방향으로 첨가된 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  2. 제1항에 있어서, 부분 DNA 단편이 서열목록, 서열번호 1에 표시된 것과 같이 뉴클레오티드 1325~1528을 적어도 포함하는 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  3. 제1항에 있어서, 부분 DNA 단편이 서열목록, 서열번호 1에 표시된 것과 같이 뉴클레오티드 1274~1528을 적어도 포함하는 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  4. 제1항에 있어서, 부분 DNA 단편이 서열목록, 서열번호 1에 표시된 것과 같이 뉴클레오티드 1192~1528을 적어도 포함하는 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  5. 제1항에 있어서, 부분 DNA 단편이 서열목록, 서열번호 1에 표시된 것과 같이 뉴클레오티드 845~1528을 적어도 포함하는 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  6. 야생형 AOX2 프로모터로 부터 제1항 내지 5항중 어느 한 항에 기재된 부분 DNA 단편을 부분적으로 치환, 결실 또는 첨가함으로써 수득 가능한 부분 DNA 단편의 5`말단에 1 내지 3개의 올리고뉴클레오티드(들) GATAGGCTATTTTTGTCGCATAAAT를 정방향, 역방향, 또는 정 및 역방향으로 첨가함으로써 수득가능한 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  7. 제6항에 있어서, 제1항, 제3항, 제4항 및 제5항중 어느 한 항에 기재된 부분 DNA 단편의 뉴클레오티드 1274~1314가 부분적으로 치환, 결실 또는 첨가된 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  8. 제6항에 있어서, 제1항, 제4항 및 제5항중 어느 한 항에 기재된 부분 DNA 단편의 뉴클레오티드 1192~1216가 부분적으로 치환, 결실 또는 첨가된 돌연변이체 AOX2 프로모터.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 야생형 AOX2 프로모터로 부터의 제1항, 제3항 및 제4항중 어느 한 항에 기재된 부분 DNA 단편을 하기 돌연변이 형태중의 하나이상으로 변이시킨 돌연변이체로 AOX2 프로모터; a) 1274번째 티민을 시토신으로 치환, b) 1314번째 뉴클레오티드와 1315번째 뉴클레오티드 사이에 뉴클레오티드 1296~1314의 첨가, c) 1209번째 구아닌을 티민으로 치환, d) 1212번째 티민을 구아닌으로 치환, e) 1193번째 아데닌을 구아닌으로 치환, 및 f) 1195번째 아데닌을 구아닌으로 치환.
  10. 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 기재된 돌연변이체 AOX2 프로모터를 보유한 벡터.
  11. 제10항에 있어서, 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 기재된 돌연변이체 AOX2 프로모터의 전사 조절하에 있는 이종 단백질 구조 유전자를 포함하는 벡터.
  12. 제11항에 있어서, 구조 유전자가 인간혈청 알부민, 프로우로키나아제, 조직 플라스미노겐 액티베이터 및 인터페론으로 구성된 군에서 선택되는 벡터.
  13. 제10항 내지 제13항중 어느 한 항에 기재된 벡터로 형질 전환된 형질 전환체.
  14. 제13항에 있어서, 숙주가피키아 파스토리스(Pichia pastoris)인 형질 전환체.
  15. 제13항 또는 제14항의 형질 전환체를 배양하고, 그 배양액으로 부터 이종 단백질을 수집함을 특징으로 하는 이종 단백질의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019940018340A 1993-07-27 1994-07-27 돌연변이체aox2프로모터,이를보유한벡터,형질전환체,및이종단백질의제조방법 KR100342448B1 (ko)

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