KR850005497A - Dna 및 그의 이용 - Google Patents
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 및 제2도는 각각 플라스미드 pBTM119 및 플라스미드 pBTM127의 제한 효소지도를 나타낸다.
제3도는 플라스미드 pBTM508 및 pBTM515의 형성과정을 나타낸다.
Claims (32)
- 프로모터 및 시그날 펩티드 코오딩 부분을 함유하며 중성 프로테아제 코오딩 부분의 일부분 이상이 3' 말단뉴클레오티드 또는 3'말단 뉴클레오티드 및 그에 연결된 하나 이상의 연속 뉴클레오티드의 부분에서 절단된 중성프로테아제 유전자를 함유하는 DNA.
- 제1항에 있어서, 시그날 펩티드가 하기의 아미노산서열 : Met-Gly-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Val-Ala-Val-Ala-Ala-Ser-Phe-Met-Ser-Leu-Thr-Ile-Ser-Leu-Pro-Gly-Val-Gln-Ala을 갖는 펩티드를 함유하는 DNA.
- 제1항에 있어서, 프로모터가 중성 프로테아제 프로모터인 DNA.
- 제1항에 있어서, 프로모터의 -35및 -10부분이 각각 TTGCAG 및 TATTAT로 표시되는 뉴클레오티드를 포함하는 DNA.
- 제1항에 있어서, 프로모터의 -35및 -10부분이 각각 AGTTTT 및 GAGATTGCT로 표시되는 뉴클레오티드를 포함하는 DNA.
- 제1항에 있어서, 프로모터 -35및 -10부분이 각각 AATTC및 TAGTTTTATA로 표시되는 뉴클레오티드를 포함하는 DNA.
- 제1항에 있어서, 프로모터가 100염기 이하의 폴리뉴클레오티드 사슬 및 TTGCAG, TATTAT, AGTTTT, GAGATTGCT, AATTC 및 TAGTTTTATA로 표시되는 염기서열 부분을 갖는 DNA.
- 제7항에 있어서, 폴리뉴클레오티드 사슬이 그의 5' 및 3' 말단에 각각 뉴클레오티드 AATTCC및 TATTAT 를 갖는 DNA.
- 제8항에 있어서, 폴리뉴클레오티드 사슬이 AATTCAGCCGCGGAGTCTCTACTTTTATATT GCAGAATGCGAGATTGCTGGTTTATTAT로 표시되는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 DNA.
- 제1항에 있어서, pTEX101인 DNA.
- 제1항에 있어서, 중성 프로테아제 외에 단백질을 코오딩하는 구조 유전자를 더 함유하는 DNA.
- 제 11항에 있어서, 중성 프로테아제 유전자가 중성프로테아제 유전자로부터 아랫쪽에 위치한 구조유전자와 함께 프로모터의 아랫쪽에 위치하는 DNA.
- 제12항에 있어서, pBTM150인 DNA.
- 제12항에 있어서, pTEX201인 DNA.
- 제12항에 있어서, pTEX202인 DNA.
- (a) 프로모터, 시그날 펩티드 코오딩 부분 및 중성프로테아제코오딩 부분을 갖는 중성 프로테아제유전자를 함유한 제1 DNA 단편을 제한 효소로 분해하여 3'말단뉴클레오티드 또는 3'말단뉴클레오티드 및 그에 연결된 하나 이상의 연속 뉴클레오티드 부분에서 중성 프로테아제코오딩 부분을 절단하거나; (b)프로모터 활성을 갖는 제2 DNA 단편을 중성 프로테아제 유전자의 시그날 펩티드 코오딩 부분 및 3'말단 뉴클레오티드 또는 3'말단 뉴클레오티드 및 그에 연결된 하나 이상의 연속 뉴클레오티드 부분에서 상기 중성 프로테아제 코오딩 부분일부 이상이 삭제된 중성 프로테아제 코오딩부분을 함유하는 제3 DNA단편에 결합시키고; 필요하다면 (c)목적 단백질 코오딩 유전자를 상기 시그날 펩티드 코오딩 부분의 아랫쪽 위치에 연결시켜, 프로모터, 및 시그날 펩티드 코오딩부분 및 3' 말단뉴클레오티드 또는 3'말단 뉴클레오티드 및 그에 연결된 하나 이상의 연속뉴클레오티드 부분이 절단된 중성 프로테아제 코오딩 부분 일부분 이상을 갖는 중성 프로테아제를 함유하며, 임의로 상기 시그날 펩티드 코오딩 부분의 아랫쪽 위치에 목적 단백질 코오딩 유전자를 갖는 DNA를 수득함을 특징으로 하는 DNA의 제조방법.
- 제16항에 있어서, 시그날 펩티드가 하기의 아미노산 서열,Met-Gly-Leu-Gly-Lys-Lys-Leu-Ser-Val-Ala-Ala-Val-Ala-Ala-Ser-Rhe-Met-Ser-Leu-Thr-Ile-Ser-Leu-Pro-Gly-Val-Gln-Ala을 갖는 펩티드를 함유하는 방법.
- 제16항에 있어서, 제1 DNA 단편이 중성 프로테아제를 생성할 수 있는 미생물의 염색체로부터 유도된 방법.
- 제16항에 있어서, 제1 DNA 단편이 바실루스속에 속하는 미생물 균주의 염색체로부터 유도된 방법.
- 제16항에 있어서, 제1 DNA 단편이 첨부하는 도면 제5도에 기재된 제한 효소 절단지도를 갖는 방법.
- 제16항에 있어서, 제2 DNA 단편이 중성 프로테아제 프로모터를 포함하는 방법.
- 제16항에 있어서, 목적 단백질이 인체 인터페론 또는 페니실리나제인 방법.
- 제16항에 있어서, DNA 생성물이 pTEX101인 방법
- 제16항에 있어서, DNA 생성물이 pBTM150,pTEX201 또는 pTEX202인 방법
- 제1항에 따른 DNA를 함유하는 바실루스 속에 속하는 미생물 균주의 형질 전환체.
- 제25항에 있어서, DNA가 중성 프로테아제 외에 단백질을 코오딩한 유전자를 더 함유하는 형질 전환체.
- 제26항에 있어서, 비실루스 서브틸리스 MH401/pBTM150인 형질 전환체.
- 제26항에 있어서, 비실루스 서브틸리스 1A274/pTBX201인 형질 전환체.
- 제26항에 있어서, 비실루스 서브틸리스 1A274/pTBX202인 형질 전환체.
- 프로모티, 시그날 펩티드 코오딩 부분을 함유하여 중성 프로테아제 코오딩 부분의 일부분 이상이 3' 말단뉴클레오티드 또는 3' 말단뉴클레오티드 및 그에 연결된 하나 이상의 연속 뉴클레오티드의 부분에서 절단된 중성 프로테아제 유전자, 및 중성프로테아제 외에 단백질을 코오딩하는 유전자를 함유하는 DNA를 함유한 바실루스속의 미생물 균주의 형질 전환체를 배지에서 배양하여 펩티드르 배지에 분비시키고, 배지로부터 단백질을 회수함을 특징으로하는 단백질의 제조방법.
- 제30항에 있어서, 중성 프로테아제 유전자가 중성프로테아제 유전자로부터 아랫쪽에 위치한 구조유전자와 함께 프로모터의 아랫쪽에 위치하는방법.
- 제30항에 있어서, 형질 전환체가 바실루스 서브틸리스 MH401/pBTM150, 바실루스 서브틸리스 1A 274/pTEX201 또는 바실루스 서브틸리스 1A 274/pTEX20인 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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