KR900000479A - 바실루스에서의 섭틸리신 칼스버그 제조용 하이브리드 플라스미드 - Google Patents

바실루스에서의 섭틸리신 칼스버그 제조용 하이브리드 플라스미드 Download PDF

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KR900000479A
KR900000479A KR1019890008771A KR890008771A KR900000479A KR 900000479 A KR900000479 A KR 900000479A KR 1019890008771 A KR1019890008771 A KR 1019890008771A KR 890008771 A KR890008771 A KR 890008771A KR 900000479 A KR900000479 A KR 900000479A
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plasmid
subtilisin carlsberg
hybrid plasmid
hybrid
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가몬 콘라드
베르거 하랄트
행기 우르스
마르크그라프 마르티나
코레프트 쥐르겐
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게오르그 차이트, 요한 글라슬
헨켈 코만디트 게젤샤프트 아우프 아크티엔
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
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    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
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Abstract

내용 없음

Description

바실루스에서의 섭틸리신 칼스버그 제조용 하이브리드 플라스미드
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 pC50의 지도이다.
제2도는 플라스미드 pKL1의 지도이다.
제3도는 플라스미드 pKL2의 지도이다.

Claims (10)

  1. Aval과 같은 효소에 대한 하나이상의 제한 부위를 갖는 바실루스에 적당한 출발플라스미드, 및 임상의 내성마커, 및 출발플라스미드에 삽입되고, -바실루스속의 미생물의 RNA-폴리머라제에 의해 인지되는 프로모터, -리보솜 결합 부위, -개시코돈, -그의 리더 서열을 포함하여, 섭틸리신 칼스버그 또는 그의 단백질분해된 활성 서브-유닛 또는 단백질 분해된 활성변이체만을 코딩하는 구조 유전자, -정지코돈을 함유하는 단리된 이중-가닥 DNA 및 개시코돈의 하류에 임의로 존재하는 특정 형질발현 효과가 없으며 400염기쌍 이하의 올리고누클레오티드 사슬을 함유하는 바실루스속의 미생물을 위한 하이브리드 플라스미드로서, 삽입된 이중-가닥 DNA가 프로모터 및 바실루스 리케니포르미스로 부터의 섭틸리신 칼스버그의 구조 유전자를 함유하며 프로(pro)-/프리(pre)-섭틸리신의 개시토돈으로부터 -227위치에서 시작합을 특징으로 하는 하이브리드 홀리스미드.
  2. 제1항에 있어서, 삽입된 이중-가닥 DNA가 프로모터 및 프리-/프로- 영역앞에 Aval제한 부위에서 시작하는 바실루스 리케니포르미스로 부터 섭틸리신 칼스버그의 구조유전자를 함유하고, 출발 플라스미드쪽의 Aval제한부위가 삽입된 DNA의 프리-/프로-/영역 앞의 제한 부위사이에 있는 DNA단편을 제한 효소 Aval으로 2회 절단시킴으로써 하이브리드 플라스미드의 크리가 감소된 하이브리드 플라스미드.
  3. 제1항 또는 제2항이 있어서, 플라스미드 pBCE16으로부터 유래된 하이브리드 플라스미드.
  4. 제1항 내지 제3항중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 내성 마커를 함유하는 하이브리드 플라스미드.
  5. 바실루스에 적당한 플리스미드를 개환시키고, Aval제한 부위 및 섭틸리신 칼스머그의 제조에 요구되는 정보를 함유하는 단리된 DNA를 삽입시키고, 양쪽 Aval제한 부위를 절단하여 다시 연결시킴을 특징으로 하는 청구범위 제3 또는 4항에서 청구된 하이브리드 플라스미드의 제조방법.
  6. 제5항에 있어서. 리더 서열을 포함하여, 구조유전자의 개시 코돈으로 부터 ~222위치에 Aval제한 부위를 함유하는 DNA를 사용하는 방법.
  7. 청구범위 제1,2,3 및/또는 4항에서 청구된 하이브리드 플리스미드를 함유하는 바실루스속의 미생물 균주.
  8. 제7항에 있어서, 바실루스 섭틸리스 또는 바실루스 리케니포르미스 종에 속하는 미생물 균주.
  9. 청구범 제7 및 8항에서 청구된 미생물 균주를 배양시킴을 특징으로하는 섭틸리신 칼스버그의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서, 157위치에 아미노산 아스파라긴 대신 아미노산 세린 및 160위치에 세린 대신에 아스파리긴을 함유하는 변형 섭틸리신 칼스버그를 제조하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019890008771A 1988-06-25 1989-06-24 바실루스에서의 섭틸리신 칼스버그 제조용 하이브리드 플라스미드 KR900000479A (ko)

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