KR900009054B1 - 설포-아데노실-l-메티오닌염의 제조방법 - Google Patents
설포-아데노실-l-메티오닌염의 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR900009054B1 KR900009054B1 KR1019840005106A KR840005106A KR900009054B1 KR 900009054 B1 KR900009054 B1 KR 900009054B1 KR 1019840005106 A KR1019840005106 A KR 1019840005106A KR 840005106 A KR840005106 A KR 840005106A KR 900009054 B1 KR900009054 B1 KR 900009054B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- same
- yeast
- reverse osmosis
- solution
- eluate
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 44
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 24
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 claims description 19
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 17
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 17
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000000155 melt Substances 0.000 claims description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 4
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- XHJLCRULHISREH-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenesulfonic acid;sulfo hydrogen sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 XHJLCRULHISREH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 5'-deoxy-5'-methylthioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 0.000 description 1
- WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 5alpha-Hydroxy-3abeta,5beta,8-trimethyl-1-(1,5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-4abetaH,7abetaH-dicyclopentano[a.d]cyclooctaen-(8) Natural products OC1C(O)C(CSC)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000007791 dehumidification Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
내용 없음.
Description
본 발명은 메틸 그룹의 주요한 생물학적 공여체인 설포-아데노실-L메티오닌(SAMe)(Ⅰ)의 안정한 염을 SAMe함량이 높은 효모로부터 산업적으로 대규모로 생산하는 신규한 방법에 관한 것이다.
SAMe는 이러한 특성으로 인하여, 우선 생화학적 관점에서 그리고 그의 치료학적 적용가능성 때문에 주요한 관심의 대상이 되어 왔다.
이러한 분자를 대규모로 사용하는 것과 관련된 중요한 문제는 당해 분자가 주위온도에서도 열에 대해 불안정하고 제조과정과 정제과정이 복잡하다는 것이다.
따라서, 안정한 염을 수득하는 것과 이러한 염의 제조를 산업적 규모로 수행할 수 있는 공정이 본 출원인의 광범위한 연구 및 수많은 특허의 주제가 되어 왔다. 안정한 SAMe염 및 이의 제조방법과 관련된 본 출원인의 특허로는 미합중국 특허 제3,893,999호, 제3,954,726호, 제4,057,686호 및 유럽 특허원 제82107333.5호가 있다.
상기한 특허에 기술된 방법들은 한정된 염 또는 염의 그룹에 특정한 것이다. 더우기, 이러한 방법들을 제한된 규모로 이용하였을 때에는 우수한 결과를 얻게 되지만 SAMe염을 대량으로 생산할 때에는 문제점이 따르게 된다.
이러한 관점에서, 이제까지 기술되어온 방법들은, SAMe가 풍부한 효모 융해물(SAMe 5 내지 7g/효모융해물 ㎏)에 함유된 SAMe를 피크롤론산과 함께 침전시킨 후 피크롤론산 음이온을 제거하고, SAMe를 약산성 이온 교환 수지 칼럼 속으로 통과시키고, SAMe염을 활성 탄소로 처리하거나 활성 탄소 칼럼 속으로 통과시켜 정제하고, 30 내지 35℃에서 진공하에 농축시키고, 최종 염을 동결건조시키는 공정을 하나 이상 포함한다. 상기한 모든 공정이 비교적 소량 생산 규모로 수행되는 경우에는 특별한 문제점이나 비용 문제가 따르지 않으나, 에너지 비용 및 가공되는 용량 때문에 대규모 생산에의 작용은 실질적으로 불가능하다.
어떠한 SAMe염이라도 이전에는 얻을 수 없었던 고순도 생산물로 대규모 생산하기에 경제적이고도 간편하게 이용될 수 있는, 안정한 SAMe염의 생산을 위한 새로운 방법이 밝혀졌으며, 이것이 본 발명의 요지이다.
본 발명에 따르는 신규한 방법은 필수적으로 다음과 같은 단계들로 구성된다.
a) 메티오닌을 연속 단계로 첨가하여 최종 SAMe농도가 12 내지 20g/습윤 효모 ㎏으로 되도록 효모내에 SAMe를 축적시키고 ; b) 세포를 융해시킨 다음 SAMe가 풍부한 수용액(융해물)을 회수하며 ; c) 융해물을 공칭 컷-오프(Nominal cut-off)치가 10,000인 한외여과막으로 한외여과처리하고 ; d) 한외여과 예비 정제한 후의 융해물을 입자 크기가 100 내지 200메쉬인 약산성 이온 교환 수지 칼럼속으로 통과시키며 ; e), (d) 단계 칼럼의 용출액을 흡착 수지 칼럼 속으로 통과시키고 ; f), (e) 단계 칼럼의 용출액을 고 선별성 역삼투 탈염막(High rejection reverse osmosis desalination membrane)을 이용한 역삼투작용으로 농축시키며 ; g) 농축된 수용액을 분무 건조기로 건조시킨다.
축적단계(a)는 적당한 효모[예 : 삭카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 토룰롭시스 유틸리스(Torulopsis utilis), 캔디다 유틸리스(Candidautilis)등]를 사용하고 슐렌크의 축적방법(Schlenkenrichment method)에 의하여 메티오닌을 첨가함으로써 수행할 수 있다[참조 : Enzymologia, 29,238(1965)].
본 발명에 따르는 방법을 수행함에 있어서, 최종 SAMe이온 농도가 12 내지 20g/습윤 효모 ㎏이 될 때까지 축적공정을 수회 반복하는 것이 매우 중요하다는 사실이 밝혀졌다.
이제까지 기술되어온 모든 공정은 SAMe 6 내지 7g/효 ㎏의 농도로 축적된 출발 효모를 사용하여 왔다. 고농도 축적은 고려되지도 않았을뿐더러 SAMe염의 산업적생산에 있어서 유리하리라고 생각되지도 않았다.
단계(b)는 SAMe 12 내지 20g/㎏ 농도로 축적된 효모를 우선 물과 에틸 아세테이트로 처리하고, 이어서 0.1N 내지 0.5N, 바람직하게는 0.35N의 황산으로 주위온도에서 처리하여 세포융해를 일으키고 존재하는 실질적으로 100%의 SAMe가 용액중으로 빠져나가게 한다.
사용되는 물과 아세테이트의 양은 중량을 기준으로 하여 습윤 세포의
내지
인 것이 바람직하고, 처리는 15 내지 45분, 바람직하게는 30분 동안 계속 수행한다.
이어서 황산을 가하고 1 내지 2시간, 바람직하게는
시간 동안 계속 융해시킨다.
상기한 융해방법이 공지된 유일한 방법이 아니라 용액이 세포 잔여물로부터 쉽게 야기되는 조건하에 주위 온도에서 수행된다는 점에서 바람직한 방법이라는 것을 인식해야만 한다.
한외여과단계(C)는 본 발명의 공정에 필수적인 것은 아니라 융해물이 단백질 잔사를 함유하는 경우에는 실사하는 것이 바람직하다. 이러한 경우에 있어서는 단백질 잔사가 다음 단계에 사용되는 수지에 점착되면, 수지의 활성이 점차적으로 감소된다는 사실이 밝혀졌다.
한외여과는 공칭 컷-오프치가 10,000인 평면 또는 관형, 바람직하게는 관형 막을 사용하여 수행한다.
상기와 같은 조건하에서 융해물을 한외여과시키면 다음 단계에서 사용되는 수지 칼럼의 평균 수명은 상당히 연장되고 이것은 생산 비용의 결정적인 절감을 가져온다. 한외여과 정제된 융해물은 단계(d)에서, 수지 용적당 1 내지 3, 바람직하게는 2액체 용량/시간의 속도로 pH 3.5 내지 7, 바람직하게는 pH 5에서 H+형인, 입자 크기가 100 내지 200메쉬인 약산성 수지(COOH) 칼럼 속으로 공급한다.
기술한 바와 같이 SAMe용액을 약산성 이온 교환수지 칼럼 속으로 통과시켜 정제하는 것은 공지된 공정이다. 그러나, 놀랍게도 상기한 성질의 수지를 사용하되(통상적으로 사용되는 칼럼의 입자 크기가 50메쉬 이상인 것과 비교해서) 입자 크기가 100 내지 200메쉬인 것을 사용하면, 고순도의 SAMe를 함유하는, 특히 유기염, 폴리펩타이드 및 분해 생성물이 제거된 용출액을 얻을 수 있다. 본 발명에 따르는 처리시 잔여하는 유일한 불순물은 5'-데옥시-5'-메틸티오아데노신(3 내지 10%), 소량의 아데닌 및 미량의 착색 화합물이다.
사용되는 수지의 양은 SAMe ㎏당 10 내지 50ℓ, 바람직하게는 30ℓ이다.
용해물을 칼럼 속으로 통과시키고 다량의 증류수로 세척한 다음, 용출액의 pH가 3이하로 될 때까지 0.1M 아세트산으로 세척하고, 다시 다량의 증류수로 세척한 후 0.2N 황산으로 SAMe를 용출시킨다.
황산염 이외의 염을 목적할 때에는, 목적하는 산의 0.2N 용액으로 용출시킨다.
이러한 처리후의 잔여 불순물의 질과 양으로 볼때, 용출후에 SAMe를 활성 탄소로 처리하는 것을 불필요 하지만, 공지의 방법에서는 필수적인 것으로 여겨진다.
이러한 처리공정 또한 본 발명에 따르는 신규한 방법의 극히 유리한 국면인데, 이는 활성 탄소가 비록 효과적이긴 하지만, 그것의 중량에 대하여 적어도 15%에 이르는 양의 SAMe를 보유하므로 수득량이 상당히 감소되기 때문이다.
이와는 대조적으로, 입자 크기가 100 내지 200메쉬인 약산성 수지를 통과한 후의 SAMe중에 함유된 불순물이 단순한 흡착 중합체를 통과함으로써 전부 제거된다는 것이 예상외로 밝혀졌다. 적당한 중합체는 앰벌라이트(Amberlite)XAD2, XAD4 및 XAD7이며, 이들은 실질적으로 단계(d)의 용출액과 같은 강산성 용액으로부터 SAMe를 전혀 보유하지 않는다.
단계(e)는 용출액을 상기한 수지의 칼럼 속으로 수지 용적당 0.2 내지 1, 바람직하게는 0.5 액체 용량/시간의 속도로 통과시킴으로써 수행된다.
사용되는 수지의 양은 SAMe ㎏당 10 내지 50ℓ, 바람직하게는 30ℓ이다. SAMe용액을 칼럼 속으로 통과시킨 다음, 20mN의 황산(또는 목적하는 다른 산)으로 SAMe가 용출액중에 존재하지 않을 때까지 세척한다.
ℓ당 약 10g의 고순도 SAMe를 함유한 용출액을 농축을 위한 다음 단계에 공급한다.
역삼투현상을 이용한 농축단계(f)는 실질적으로 SAMe를 완전히 보유하는 반면, 물 및 과량의 황산 또는 다른 동등한 산을 침투중 제거할 수 있는 염화나트륨 고선별성 역삼투 탈염막을 이용한 역삼투공정에 단계 (e)의 용출액을 작용시킴으로써 수행한다.
폴리아미드 막은 강산성 용액에 대한 저항성이 양호하므로 바람직하게 사용된다.
역삼투현상에 의한 농축으로, 단계(e)의 용축액이 10g/1 내지 100 내지 200g/l, 바람직하게는 120g/l로 농축될 수 있다.
SAMe용액을 농축시키기 위한 역삼투현상의 이용은 다른 종래의 방법(예 : 진공하의 농축)과 비교할 때 두가지의 큰 장점을 갖는다는 점에 주목하여야 한다 :
첫째, 진공하의 농축에 요구되는 30 내지 35℃와 비교할때 최대온도 20℃에서 농축되며, 이는 SAMe의 열불안정성을 고려할 때 매우 중요하다.
둘째, 용출액이 최종 염의 화학양론적 양을 넘는 과량의 황산을 함유하는 경우, 산은 역삼투과정에서 제거되므로, 산의 침전을 위한 수산화바륨의 사용, 그에 따른 황산바륨 여과의 난점 및 비교적 높은 비용문제를 배재할 수 있다.
본 발명에 따르는 신규한 방법에서 극히 유리한 것으로 기술된 이러한 농축방법은 전단계에서 유출되는 SAMe의 순도 및 특정 농축도에 의해서 가능하며, 공지의 기술 공정에는 전혀 이용될 수 없다.
역삼투에 의해 농축된 SAMe용액을 SAMe 및 황산 (또다른 염이 요구될 때에는 다른 산)의 농도에 대하여 분석하고 요구되는 화학양론적 조성에 맞추어 황산 및/또는 다른 산을 적절히 가한다.
예를 들면, 화학양론적 조성을 조정하여 SAMe 디설페이트-p-톨루엔설포네이트 용액을 수득한다.
이어서 이 용액을 분무 건조 공정을 포함하는 다음 단계(g)에 공급하여 최종 생성물을 수득한다.
단계(g)에서는, 공온의 공기가 공급되는 건조실내에 생산물을 분무한다.
유입 용액의 농도(SAMe이온으로 표시됨)는 100 내지 200g/l, 바람직하게는 120g/l이다.
건조용 공기는 미리 건조시키는 것이 바람직하고, 공급온도는 140 내지 200℃, 바람직하게는 160℃이다. 배출되는 공기의 온도는 40 내지 100℃, 바람직하게는 60℃이다.
이러한 조건하에서, 생산물은 40 내지 50℃의 온도로 배출되고, 건조 공기에 의하여 주위온도로 급속히 냉각된다. 건조 생산물을 연속적으로 추출할 수 있는 적합한 장치를 설비해야만 한다.
상기한 모든 조건들은 건조시 SAMe염이 분해온도에 이르는 것을 방지하는 데에 있어서 중요하다.
분무 건조 SAMe염은 이 염의 고온에 대한 감수성으로 인하여 이제까지는 불가능한 것이었음을 밝혀둔다.
본 발명의 신규한 공정단계는 신규한 역삼투단계에 의한 생성물의 농축도의 결과, 및 생성물이 분해되지 않고 건조될 수 있는, 공기의 유입 및 배출온도, 탈습 및 배출속도 조건을 결정한 결과로써 가능하다.
본 발명에 따르는 SAMe염의 분무건조는 공지의 건조방법, 특히 동결건조방법과 비교할 때 에너지 및 장치의 측면에서 비용이 대폭 절감된다는 것을 주목하여야 한다.
결론적으로, 본 발명에 따라서 SAMe염을 산업적 규모로 제조하는 신규한 방법은 각각의 단계나 전체로서 신규한 것이며, 공지의 모든 방법보다 저렴하고 휠씬 간편한 공정으로서, 고순도의 생산물을 이제까지 얻을 수 없었던 수율, 즉 90% 이상의 수율로 생산한다.
본 발명의 신규한 방법을 좌우하는 몇몇 결정적 인자를 예상외로 발견함에 따라 놀라운 결과를 얻게 되었다.
본 발명의 공정을 보다 쉽게 재현할 수 있도록 하고 그 결과로 얻어진 잇점을 설명하기 위하여 다음에 실시예를 제시하며, 이러한 실시예들은 단지 설명하기 위한 것이며 어떤 경우에 있어서도 본 발명의 범주를 제한하는 것은 아니다.
[실시예 1]
[SAMe 디설페이트-p-톨루엔설포네이트의 제조]
슐렌크의 방법[참조 : Enzymologia 29,283(1965)]에 의해 SAMe(17g/㎏)가 축적된 효모 720㎏에 주위 온도에서 에틸 아세테이트 110ℓ와 물 110ℓ를 가한다.
30분 동안 격렬하게 교반한 후 0.35N 황산 1000ℓ를 가하고
시간 동안 계속 교반한다.
회전 여과기로 혼합물을 여과하고, 케이크를 물로 세척하여 ℓ당 4,40g의 SAMe를 함유하는 용액 280ℓ를 수득하며, 이는 출발물질에 존재하는 SAMe의 99.5%에 상당하는 양이다.
이와 같이 하여 수득된 SAMe용액(pH 2.5)을 컷-오프치가 10,000인 관형 막이 설치된 한외여과장치에 공급한다.
막을 통과한 침투액을 적절한 용기에 수집하는 반면, 농축물을 그의 최종 부피가 200ℓ로 될 때까지 계속 재순환시킨다. 이때 증류수를 가하고, SAMe가 완전히 추출될 때까지 계속 재순환시킨다.
한외여과된 융해물 3500ℓ를 수득하고, 여기에 2N 수산화나트륨을 가하여 pH 5로 조정한다.
H+형의 앰벌라이트 CG 50 400ℓ를 포함하는 칼럼을 제조하고, 증류수로 조심스럽게 세척한다.
융해물을 수지 칼럼 속으로 800l/hr의 속도로 통과시키고, 이 속도를 전 공정 동안 유지시킨다.
증류수 400ℓ, 0.1M 아세트산 3200ℓ 및 증류수 400ℓ를 차례로 통과시킨다.
SAMe를 0.2N 황산 800ℓ로 용출시킨다. 이렇게 하여 얻어진 용출액 800ℓ는 SAMe 약 11.6㎏을 함유한다.
0.1N 수산화나트륨 800ℓ와 0.1N 황산 800ℓ로 미리 활성화시킨 앰벌라이트 XAD4수지 400ℓ를 포함하는 칼럼을 제조하고, 증류수로 조심스럽게 세척한다.
미리 수득된 SAMe 용액을 칼럼 속으로 200l/hr의 속도로 통과시키고, 이 속도를 전 공정 동안 유지시킨다.
이어서 20mN 황산 400ℓ를 통과시킨다.
SAMe를 함유하는 용출액(용액 1000ℓ당 11.3㎏의 SAMe를 함유함)을 모은다.
이와 같이 하여 수득한 용액을 폴리아미드탈염막을 포함하는 평면 형태의 역삼투장치에 공급한다.
이러한 장치에서 SAMe용액은 SAMe 11.2㎏을 함유하는 용액 80ℓ로 농축된다.
진한 황산 1.8㎏과 p-톨루엔설폰산 4,8㎏을 가한다.
이와 같이 하여 얻어진 용액을 160℃하에서 공기가 공급되는 분무 건조기에 공급한다.
건조 생산물을 분무 건조기로부터 연속적으로 배출시킨다.
분말 2.16㎏을 수득하면, 조성은 다음과 같다(SAMe 2H2SO4·p-톨루엔설폰산염) :
-SAMe 51%
-H2SO425%
-p-톨루엔설폰산 22%
-H2O 2%
수율은 약 90%이다.
[실시예 2]
[SAMe 디설페이트-디-p-톨루엔설포네이트의 제조]
실시예 1의 방법을 따라 역삼투현상에 의한 농축단계까지 실시한다.
진한 황산 1.8㎏과 p-톨루엔설폰산 9.6㎏을 역삼투에 의한 농축용액에 가한다.
실시예 1에서와 같이 건조한다.
분말 2.65㎏을 수득하면 조성은 다음과 같다(SAMe 2H2SO42 p-톨루엔설폰산염) :
-SAMe 41.5%
-H2SO420.5%
-p-톨루엔설폰산 36%
-H2O 2%
수율은 약 90%이다.
[실시예 3]
[SAMe 2.5설페이트의 제조]
실시예 1의 방법을 따라 역삼투현상에 의한 농축단계까지 실시한다.
진한 황산 3.5㎏을 역삼투에 의한 농축용액에 가한다.
실시예 1에서와 같이 건조한다.
분말 18.2㎏을 수득하면 조성은 다음과 같다(SAMe 2.5H2SO4염) :
-SAMe 60.6%
-H2SO437.4%
-H2O 2%
수율은 약 90%이다.
Claims (8)
- a) 출발 효모중의 SAMe농도를 습윤 효모 ㎏당 12 내지 20g으로 조절하고, b) SAMe가 축적된 효모로부터 고 SAMe농도의 융해물을 제조하며, c) 융해물을 한외여과시키고, d) 여과된 생성물을 입자 크기가 100 내지 200메쉬인 약산성 수지 속으로 통과시킨 다음 산 용액으로 용출시키며, e) 이러한 용출액을 흡착 중합체 속으로 통과시킨 다음 수성 산 용액으로 용출시키고, f) 용출액을 염화나트륨 고 선별성 역삼투탈염막을 이용하여 역삼투처리하고, 농축된 SAMe용액을 화학양론적 양의 산으로 처리하여 목적하는 염으로 완전히 전환시키고, g) 농축된 SAMe염 용액을 분무 건조기 속에서 건조시킴을 특징으로 하여, SAMe를 함유하는 효모 농축물로부터 안정한 SAMe염을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 단계(a)를, 수개의 연속적 단계로 효모를 메티오닌으로 처리하여 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 단계(b)를, SAMe가 축적된 효모를 에틸 아세테이트와 황산으로 처리하여 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 한외여과단계(c)를, 공칭 컷-오프치가 10,000인 막을 사용하여 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 단계(d)를, pH 3.5 내지 7에서 H+형의 약산성 수지(COOH)를 1 내지 3액체 용량/시간의 속도로 사용하여 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 단계(e)를, 앰벌라이트(AMBERLITE) XAD2, 앰벌라이트 XAD4 및 앰벌라이트 XAD7로 이루어진 그룹으로부터 선택된 수지를 사용하고, 용출액을 0.2 내지 1액체 용량/시간의 속도로 통과시켜 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 역삼투단계(f)를, 염화나트륨 고 선별성 역삼투 탈염막을 사용하여 농축물중의 SAMe함량이 100 내지 200g/l로 될 때가지 수행함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 분무 건조단계(g)를, 유입온도가 140 내지 200℃이고 배출온도가 40 내지 100℃인 건조 공기를 사용하여 수행함을 특징으로 하는 방법.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT22622/83A IT1169773B (it) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina |
| IT22622A/83 | 1983-08-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR850001750A KR850001750A (ko) | 1985-04-01 |
| KR900009054B1 true KR900009054B1 (ko) | 1990-12-17 |
Family
ID=11198536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019840005106A KR900009054B1 (ko) | 1983-08-24 | 1984-08-23 | 설포-아데노실-l-메티오닌염의 제조방법 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4621056A (ko) |
| EP (1) | EP0141914B1 (ko) |
| JP (1) | JPS6070097A (ko) |
| KR (1) | KR900009054B1 (ko) |
| AT (1) | ATE31550T1 (ko) |
| AU (1) | AU569107B2 (ko) |
| CA (1) | CA1223535A (ko) |
| DE (1) | DE3468234D1 (ko) |
| DK (1) | DK162240C (ko) |
| ES (1) | ES8506044A1 (ko) |
| FI (1) | FI77043C (ko) |
| IT (1) | IT1169773B (ko) |
| MX (1) | MX7625E (ko) |
| NO (1) | NO159669C (ko) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1173992B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente idonei per uso farmaceutico orale |
| IT1173990B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale |
| US4794174A (en) * | 1987-02-10 | 1988-12-27 | Southern Research Institute | 5'deoxy-5'-substituted adenosines |
| US5180714A (en) * | 1990-10-31 | 1993-01-19 | Health Research, Inc. | Adenosine compounds for the treatment of diseases caused by parasitic protozoa |
| IT1315236B1 (it) * | 1999-10-05 | 2003-02-03 | Chementecno Srl | Processo per la purificazione di s-adenosil-l-metionina e per lapreparazione dei suoi sali farmaceuticamente accettabili. |
| IT1318535B1 (it) * | 2000-05-25 | 2003-08-27 | Chementecno Srl | Processo per la preparazione di sali farmaceuticamente accettabili di(ss,rs)-s-adenosil-l-metionina. |
| IT1317920B1 (it) * | 2000-10-20 | 2003-07-15 | Univ Roma | S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer. |
| US6649753B2 (en) * | 2001-06-07 | 2003-11-18 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation |
| US6881837B2 (en) | 2001-06-07 | 2005-04-19 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Chemical synthesis of S-adenosyl-L-methionine with enrichment of (S,S)-isomer |
| EP1812454A2 (en) | 2004-06-23 | 2007-08-01 | Orchid Chemicals and Pharmaceuticals Ltd | Chemical synthesis of s-adenosyl-l-methionine with enrichment of (s,s)-isomer |
| US8148348B2 (en) | 2006-01-17 | 2012-04-03 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method of stabilizing S-adenosyl-L-methionine and stabilized composition |
| EP2017331B1 (en) | 2006-05-16 | 2015-04-01 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method of producing s-adenosyl-l-methionine-containing dry yeast having excellent storage stability |
| US9200250B2 (en) | 2007-01-25 | 2015-12-01 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method for production of dry yeast containing S-adenosyl-L-methionine and having excellent storage stability, product produced by the method, and molded composition of the dry yeast |
| CN102321136B (zh) * | 2011-09-19 | 2014-10-22 | 北京化工大学 | S-腺苷-l-甲硫氨酸对甲苯磺酸硫酸双盐的制备方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE37913B1 (en) * | 1972-08-02 | 1977-11-09 | Bioresearch Sas | Salt of s-adenosyl-l-methionine |
| JPS5631897B2 (ko) * | 1972-11-13 | 1981-07-24 | ||
| US3962034A (en) * | 1973-02-01 | 1976-06-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing s-adenosylmethionine or methylthioadenosine by yeast |
| IE39517B1 (en) * | 1973-06-27 | 1978-10-25 | Bioresearch Sas | Double salts of s-adenosyl-l-methhionine |
| FR2275220A1 (fr) * | 1974-06-21 | 1976-01-16 | Merieux Inst | Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus |
| AR221676A1 (es) * | 1974-07-12 | 1981-03-13 | Bioresearch Sas | Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico |
| US4109079A (en) * | 1975-10-16 | 1978-08-22 | Yamasa Shoyu Kabushiki Kaisha | Stabilized s-adenosyl-l-methionine preparations |
| JPS53107485A (en) * | 1977-02-28 | 1978-09-19 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Preparation of s-adenosyl-l-methionine salt |
| GB2001976B (en) * | 1977-08-03 | 1982-03-10 | Yamasa Shoyu Kk | S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof |
| JPS5699499A (en) * | 1980-01-10 | 1981-08-10 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Composition containing s-adenosyl-l-methionine, and its preparation |
| IT1137640B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1137892B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1139974B (it) * | 1981-09-11 | 1986-09-24 | Bioresearch Srl | Derivati della s-adenosilmetionina,processo per la preparazione e composizioni terapeutiche che li contengono come principio attivo |
| GB2116172B (en) * | 1982-02-25 | 1986-07-09 | Nippon Zeon Co | Microbial cells containing s-adenosyl methionine in high concentrations and process for production of s adenosyl methionine |
-
1983
- 1983-08-24 IT IT22622/83A patent/IT1169773B/it active
-
1984
- 1984-08-01 DE DE8484109109T patent/DE3468234D1/de not_active Expired
- 1984-08-01 AT AT84109109T patent/ATE31550T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-01 EP EP84109109A patent/EP0141914B1/en not_active Expired
- 1984-08-02 US US06/637,051 patent/US4621056A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-08-03 CA CA000460362A patent/CA1223535A/en not_active Expired
- 1984-08-22 FI FI843315A patent/FI77043C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-22 MX MX8411264U patent/MX7625E/es unknown
- 1984-08-23 KR KR1019840005106A patent/KR900009054B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-08-23 AU AU32328/84A patent/AU569107B2/en not_active Ceased
- 1984-08-23 ES ES535378A patent/ES8506044A1/es not_active Expired
- 1984-08-23 DK DK402884A patent/DK162240C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-23 NO NO843366A patent/NO159669C/no unknown
- 1984-08-24 JP JP59175326A patent/JPS6070097A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES535378A0 (es) | 1985-06-16 |
| FI77043C (fi) | 1989-01-10 |
| EP0141914A1 (en) | 1985-05-22 |
| EP0141914B1 (en) | 1987-12-23 |
| DK402884D0 (da) | 1984-08-23 |
| CA1223535A (en) | 1987-06-30 |
| FI77043B (fi) | 1988-09-30 |
| US4621056A (en) | 1986-11-04 |
| NO159669B (no) | 1988-10-17 |
| AU3232884A (en) | 1985-02-28 |
| NO843366L (no) | 1985-02-25 |
| DE3468234D1 (en) | 1988-02-04 |
| DK162240C (da) | 1992-03-02 |
| FI843315A (fi) | 1985-02-25 |
| JPS6070097A (ja) | 1985-04-20 |
| IT8322622A1 (it) | 1985-02-24 |
| DK162240B (da) | 1991-09-30 |
| AU569107B2 (en) | 1988-01-21 |
| KR850001750A (ko) | 1985-04-01 |
| ATE31550T1 (de) | 1988-01-15 |
| DK402884A (da) | 1985-02-25 |
| ES8506044A1 (es) | 1985-06-16 |
| IT8322622A0 (it) | 1983-08-24 |
| NO159669C (no) | 1989-01-25 |
| IT1169773B (it) | 1987-06-03 |
| FI843315A0 (fi) | 1984-08-22 |
| MX7625E (es) | 1990-03-27 |
| JPH0421478B2 (ko) | 1992-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR900009054B1 (ko) | 설포-아데노실-l-메티오닌염의 제조방법 | |
| EP0162323B1 (en) | Stable sulpho-adenosyl-l-methionine (same) salts, particularly suitable for parenteral use | |
| EP0554090B1 (en) | Process for preparing high alpha-glycosyl-L-ascorbic acid | |
| JPS60199390A (ja) | クエン酸の取得法 | |
| SK64496A3 (en) | A method of recovering a desired amino acid and method of recovering l-lysine from an aqueous solution | |
| CN108358989A (zh) | 一种从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法 | |
| WO2001032298A1 (de) | Verfahren zur aufreinigung von aminosäure-haltigen lösungen durch elektrodialyse | |
| JPH02150286A (ja) | 発酵媒体からの２―ケト―ｌ―グロン酸の分離方法 | |
| US5369122A (en) | Process for manufacturing a humectant | |
| NL8503286A (nl) | Werkwijze voor het afscheiden en zuiveren van l-fenylalanine. | |
| EP1091001B1 (en) | Process for the purification of S-adenosyl-L-methionine and for the preparation of the pharmaceutically acceptable salts thereof | |
| JP3347822B2 (ja) | キナ酸の抽出、精製方法 | |
| CN114891050B (zh) | 一种从发酵液或提取液中分离虫草素的方法 | |
| SU654612A1 (ru) | Способ выделени цитохрома | |
| HU213477B (en) | Process for preparing framycetin sulphate | |
| JPH0718256A (ja) | コーヒー抽出滓の処理方法 | |
| CN110294775A (zh) | 一种磷酸肌酸钠的纯化方法 | |
| JPH0533715B2 (ko) | ||
| JPH0292927A (ja) | 遊離ε−ポリリシンの製造法 | |
| CN110551039A (zh) | 一种离心除菌体后色谱提取谷氨酸的工艺 | |
| KR20000013854A (ko) | 전기투석을 이용한 엘-트레오닌의 회수방법 | |
| AGADZHANYAN | Isolation of Citric Acid from a Citrate Solution | |
| WO1994012197A1 (en) | Process for the manufacture of a preparation having immunomodulating activity and stimulating cytokine formation by extracting plants and plant residues | |
| PL138771B2 (en) | Method of obtaining a pectinic preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| G160 | Decision to publish patent application | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 19981208 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |