DK162240B - Fremgangsmaade til fremstilling af stabile s-adenosyl-l-methionin-salte - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af stabile s-adenosyl-l-methionin-salte Download PDFInfo
- Publication number
- DK162240B DK162240B DK402884A DK402884A DK162240B DK 162240 B DK162240 B DK 162240B DK 402884 A DK402884 A DK 402884A DK 402884 A DK402884 A DK 402884A DK 162240 B DK162240 B DK 162240B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- same
- yeast
- resin
- concentration
- reverse osmosis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 32
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical class O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 title description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 33
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 18
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 claims abstract description 18
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 5
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 claims description 2
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 abstract description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 3
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 2
- 229910003556 H2 SO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 2
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- SQASAHFPWITLNX-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenesulfonic acid;sulfo hydrogen sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 SQASAHFPWITLNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XHJLCRULHISREH-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenesulfonic acid;sulfo hydrogen sulfate Chemical compound OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 XHJLCRULHISREH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 5'-deoxy-5'-methylthioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-WOIOKPISSA-N 0.000 description 1
- OVFUUSPKWADLNJ-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-4-nitro-2-(4-nitrophenyl)-4h-pyrazol-3-one Chemical compound O=C1C([N+]([O-])=O)C(C)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OVFUUSPKWADLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 5alpha-Hydroxy-3abeta,5beta,8-trimethyl-1-(1,5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-4abetaH,7abetaH-dicyclopentano[a.d]cyclooctaen-(8) Natural products OC1C(O)C(CSC)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- -1 picrolonic acid anion Chemical class 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i
DK 16224G B
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til produktion af stabile S-adenosyl-L-methioninsalte (SAMe) i industriel skala ud fra gærarter, der er yderst berigede med SAMe.
5 S-adenosyl-L-methionin (I) er kendt for at være den biologiske hoveddonor for methylgrupper.
10 S ch3 /*** CH - S - CH - CH„ - CH 1 © <T ^ 15 %_
OH OH
Denne specielle egenskab har gjort forbindelsen til gen-20 stand for betragtelig interesse, først og fremmest ud fra det biokemiske aspekt og dernæst på grund af dens mulige terapeutiske anvendelser.
Hovedproblemerne forbundet med anvendelse i stor skala af 25 dette molekyle er dets termiske instabilitet selv ved omgivelsernes temperatur og den indviklede fremstilling og oprensning deraf.
Det har derfor været genstand for omfattende forskning og 30 adskillige patenter fra opfinderens side, rettet mod opnåelse af stabile salte og fremgangsmåder til fremstilling af sådanne salte, som kan udføres i industriel skala. Ansøgernes patenter vedrørende såvel stabile SAMe-salte som deres fremstillingsmetoder er følgende: US pa-35 tentskrift nr. 3 893 999, US patentskrift nr. 3 954 726, US patentskrift nr. 4 057 686 og EP patentskrift nr.
73 376 og 72 980. Patenter udstedt til andre omfatter
DK 162240 B
2 følgende: DE patent skrift nr. 2 646 269, GB patentskrift nr. 2 116 172 og US patentskrift nr. 3 962 034.
De i førnævnte patenter beskrevne fremgangsmåder er spe-5 cifikke for bestemte salte eller grupper af salte. Skønt de giver fremragende resultater, når de anvendes i begrænset målestok, bliver de dog besværlige, når de anvendes til fremstilling af meget store mængder SAMe-salte.
10 De hidtil beskrevne fremgangsmåder omfatter en eller flere af følgende operationer: - udfældning af SAMe indeholdt i gærlysater beriget med SAMe (5-7 g/kg SAMe) med picrolonsyre og derpå fjernel- 15 se af picrolonsyreanionen, - passage af SAMe gennem en søjle med en svagt sur ionby tterharpiks, 20 - rensning af SAMe-saltet ved behandling med aktiveret- carbon eller ved passage gennem en søjle med aktiveret carbon, - koncentrering under vakuum ved 30-35 °C, 25 - lyofilisering af slutsaltet, hvilke operationer hver især, hvis de udføres på forholdsvis små mængder produkt, ikke repræsenterer speciel-30 le vanskeligheder eller uacceptable omkostninger, hvorimod de bliver praktisk umulige, når de udføres på større produktmængder, både på grund af energibehovet og på grund af de involverede volumener.
35 Der er nu fundet en hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af stabile SAMe-salte, der let kan anvendes økonomisk og enkelt til produktion i stor målestok af et
DK 162240 B
3 vilkårligt SAMe-salt, med meget rene produktudbytter, som det hidtil ikke har været muligt at opnå.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at 5 man a) behandler gæren med methionin i flere på hinanden følgende trin, indtil SAMe-koncentrationen når 12-20 g/kg fugtig gær, 10 b) fremstiller et lysat med høj SAMe-koncentration ud fra ovennævnte gærkoncentrat ved behandling af dette med vand og ethylacetat i mængder på mellem 1/20 og 1/5 af vægten af de fugtige celler i et tidsrum på mellem 15 15 og 45 minutter og derefter med ved en koncentra tion på mellem 0,1 N og 0,5 N, c) underkaster det i trin b) opnåede lysat ultrafiltrering udført med en membran med en nominel molvægtsaf- 20 skæringsværdi på 10 000 til opnåelse af en filtreret væske, d) passerer den filtrerede væske holdt ved en pH-værdi på mellem 3,5 og 7 gennem en svagt sur ionbytterharpiks 25 af typen -C00H på H+-form, hvilken harpiks har en par tikelstørrelse på mellem 0,147 og 0,074 mm, og derefter eluerer SAMe med en 0,2 N vandig opløsning af en stærk syre, 30 e) passerer det i trin d) opnåede eluat gennem en absorptionspolymer af den ikke-polære type eller med mellemstor polaritet, valgt blandt polystyren og polyacryl-syreestere, med en hastighed på mellem 0,2 og 1 volumen væske pr. time pr. volumen harpiks, f) underkaster det i trin e) opnåede eluat for omvendt osmose med kraftig NaCl-afvisende afsaltningsmembraner 35
DK 162240 B
4 til omvendt osmose, indtil der fås et SAMe-indhold i koncentratet på 100-200 g/liter, og derefter behandler den koncentrerede SAMe-opløsning med den støkiometriske mængde syre til at transformere den fuldstændigt 5 til det ønskede SAMe-salt, og g) tørrer den koncentrerede opløsning af SAMe-salt i en forstøvningstørrer, hvori luften har en indgangstemperatur på mellem 140 °C og 200 °C og en udgangstempera-10 tur på mellem 40 “C og 100 °C.
Berigelsestrinnet a) kan udføres på en vilkårlig egnet gær (f.eks. Saccharomyces cerevisiae, Torulopsis utilis og Candida utilis) ved den kendte Schlenk-berigelsesmeto-15 de (Enzymologia, 29, 238 (1965)) ved tilsætning af me-thionin.
Ansøgeren har imidlertid fundet, at det er kritisk for udførelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen at genta-20 9© berigelsesoperationen flere gange, indtil der er opnå et en SAMe-slutionkoncentration på mellem 12 og 20 g/kg fugtig gær.
Alle hidtil beskrevne processer har gjort brug af en be-25 riget startgær indeholdende 6-7 g/kg SAMe. Højere beri gelse er hverken taget i betragtning eller ment at være fordelagtig i den industrielle produktion af SAMe-salte.
Trin (b) udføres ved behandling af den med SAMe op til 30 12-20 g/kg berigede gær først med vand og ethylacetat og derpå med svovlsyre med en styrke mellem 0,1 N og 0,5 N, og foretrukkent 0,35 N, ved omgivelsernes temperatur for at forårsage cellelyse og forårsage, at praktisk talt 100% af tilstedeværende SAMe-salte passerer over i opløs-35 ningen.
DK 162240 B
5
Der anvendes vand og acetat i mængder på mellem 1/20 og 1/5 af vægten af de fugtige celler, og behandling fortsættes i et tidsrum på mellem 15 og 45 minutter, fore-trukkent 30 minutter.
5
Derpå tilsættes svovlsyre, og lysen fortsættes i et tidsrum på mellem 1 og 2 timer, fortrinsvis 1,5 time.
Det skal bemærkes, at den beskrevne lysemetode ikke er 10 den eneste kendte metode, men den foretrækkes, fordi den kan udføres ved omgivelsernes temperatur under sådanne betingelser, at opløsningen let kan filtreres fra celleresterne.
15 Ultrafiltreringstrinnet (c) udføres, fordi lysatet indeholder proteinrester. I denne henseende har det vist sig, at sådanne proteinrester adhærerer til den harpiks, der anvendes i næste trin, så dens aktivitet reduceres progressivt.
20
Ultrafiltreringen må udføres under anvendelse af membraner, der har en nominel afskæring på 10 000, og som enten er flade eller rørformede, men foretrukkent rørformede.
25 Det har vist sig, at når lysatet underkastes ultrafiltrering under disse betingelser, har de harpikssøjler, der anvendes i næste trin, en betydeligt større gennemsnitlig levetid, hvilket afgjort forbedrer produktionsomkostningerne. Det ved ultrafiltrering rensede lysat 30 føres i trin d) til en søjle med svagt sur harpiks (COOH) med en partikelstørrelse på mellem 0,147 og 0,074 mm (100 og 200 mesh), på H+-form ved et pH på mellem 3,5 og 7, foretrukkent 5, ved en hastighed på mellem 1 og 3 volumen væske/time pr. volumen harpiks, foretrukkent 2.
Som anført er passagen af SAMe-opløsninger gennem svagt sure ionbytterharpikssøjler til rensningsformål en kendt 35
DK 162240 B
6 operation. Det har imidlertid overraskende vist sig, at ved anvendelse af en harpiks med nævnte egenskaber, men med en partikelstørrelse på mellem 0,147 og 0,075 mm (100 og 200 mesh) (i sammenligning med den større partikel-5 størrelse på 0,290 mm (50 mesh) for normalt anvendte søjler) opnås et eluat, som indeholder meget ren SAMe, og som er fri for organiske salte, polypeptider og nedbrydningsprodukter. De eneste resturenheder ved behandlingen ifølge opfindelsen er 5’-deoxy-5'-methylthioadenosin (3-10 10%) fulgt af små mængder adenin og spor af farvede for bindelser.
Den anvendte mængde harpiks er 10-50 liter pr. kg SAMe og foretrukkent 30 liter pr. kg.
15
Lysatet passeres gennem søjlen, vaskes med en mængde destilleret vand og derpå med 0,1 M eddikesyre, indtil eluatet har et pH på mindre end 3, og igen med en mængde destilleret vand, hvorefter SAMe elueres med 0,2 N ^SO^.
20
Hvis der kræves et andet salt end sulfatet, elueres det med en 0,2 N opløsning af den tilsvarende syre.
Kvantiteten og kvaliteten af de resterende urenheder 25 efter denne behandling betyder, at behandling af SAMe med aktiveret carbon efter eluering er overflødig, hvilken behandling betragtes som væsentlig i den kendte teknik.
Dette er en anden yderst fordelagtig ting ved den fore-30 liggende fremgangsmåde, fordi det aktiverede carbon, skønt det er effektivt, tilbageholder en del SAMe, mindst 15% af dets egen vægt, hvilket således fører til et betragteligt tab i udbytte.
35 I modsætning hertil har det uventet vist sig, at de urenheder, der er indeholdt i SAMe-saltet efter passage gennem den svagt sure harpiks med en partikelstørrelse på
DK 162240 B
7 0,074-0,147 mm (100-200 mesh), fuldstændig fjernes ved passage gennem en enkel absorptionspolymer. Egnede polymere er Amberlite® XAD2, XAD4 og XAD7, som praktisk talt ikke tilbageholder noget SAMe-salt fra en stærkt sur op-5 løsning, såsom eluatet fra trin d).
Trin e) udføres ved at passere eluatet gennem en søjle af førnævnte harpiks med en hastighed på mellem 0,2 og 1 volumen væske/time pr. volumen harpiks, og foretrukkent 10 0,5.
Mængden af anvendt harpiks er 10-50 liter pr. kg SAMe, foretrukkent 30. SAMe-opløsningen passeres gennem søjlen, og derpå vaskes med 20 mN (eller en anden syre sva- 15 rende til det ønskede salt), indtil SAMe forsvinder fra eluatet.
Eluatet indeholdende ca. 10 g/liter meget rent SAMe-salt føres til det næste trin til koncentrering.
20
Koncentreringstrinnet f), der gør brug af omvendt osmose, udføres ved at underkaste eluatet fra trin e) omvendt osmose under anvendelse af yderst kraftige NaCl-afvisende omvendt osmose afsaltningsmembraner, som er i stand til 25 praktisk talt fuldstændigt at tilbageholde SAMe, hvorimod vandet og overskuddet af svovlsyre eller en anden tilsvarende syre elimineres i permeatet.
Polyamidmembraner anvendes foretrukkent på grund af deres 30 gode resistens i en stærkt sur opløsning.
Koncentrering ved omvendt osmose muliggør koncentrering af eluatet fra trin e) fra 10 g/liter til 100-200 g/liter, foretrukkent 120 g/liter.
Det skal bemærkes, at anvendelsen af omvendt osmose til koncentrering af SAMe-opløsningerne sammenlignet med 35
DK 162240 B
8 andre hidtil kendte metoder (f.eks. koncentrering under vakuum) har to store fordele: 1) koncentrering effektueres ved en maksimal temperatur 5 på 20 0C sammenlignet med 30-35 °C, der er nødvendig for koncentrering under vakuum. Dette er meget vigtigt med henblik på den termiske instabilitet for SAMe, 2) hvis eluatet indeholder et overskud af I^SO^ i forhold 10 til støkiometrien for det endelige salt, fjernes denne syre under omvendt osmose, hvorved man undgår anvendelsen af Ba-hydroxid til udfældning deraf med de deraf følgende vanskeligheder med frafiltrering af BaSO^ og de tilsvarende forøgede omkostninger.
15
Anvendelsen af denne koncentreringsmetode, der som anført er yderst fordelagtig i fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er blevet muliggjort ved den særlige koncentrationsgrad og renhed, med hvilken SAMe-saltet forlader de for-20 udgående trin, og metoden kunne på ingen måde have været anvendt i processer hørende til teknikkens stade.
Opløsningen af SAM*e koncentreret ved omvendt osmose-analyseres for sin koncentration af SAMe og svovlsyre (eller 25 en anden syre, hvis der ønskes et andet salt), og egnede tilsætninger af svovlsyre og/eller andre syrer foretages til opnåelse af den påkrævede støkiometriske sammensætning.
30 F.eks. indstilles den støkiometriske sammensætning til opnåelse af en opløsning af SAMe-disulfat-p-toluensulfat.
Denne opløsning føres derpå til det næste trin g), der involverer forstøvningstørring til opnåelse af slutpro-35 duktet.
DK 162240 B
9 I trin g) forstøves produktet i et tørrekammer fødet med varm luft.
Koncentrationen af indgangsopløsningen (udtrykt som SAMe-5 ion) ligger mellem 100 og 200 g/liter og er foretrukkent 120 g/liter.
Fødetemperaturen for tørreluften, der foretrukkent er befriet for fugt i forvejen, ligger mellem 140 og 200 °C og 10 er foretrukkent 160 °C. Temperaturen for udgangsluften ligger mellem 40 og 100 °C og er foretrukkent 60 °C.
Under disse betingelser har det produkt, der forlader tørretrinnet, en temperatur mellem 40 og 50 °C, og det 15 afkøles hurtigt til omgivelsernes temperatur af luft, der er befriet for fugt. Anlægget skal helst være udstyret med et egnet organ til kontinuerlig udtagelse af det tørre produkt.
20 Alle de førnævnte betingelser er kritiske til undgåelse af, at SAMe-saltet, der tørres, når en temperatur, ved hvilken det ville dekomponere.
Det skal bemærkes, at forstøvningstørring af SAMe-salte 25 aldrig tidligere har været mulig på grund af saltenes følsomhed over for høj temperatur.
Gennemførligheden af et sådant nyt procestrin er en uventet følge af koncentrationsgraden, ved hvilken produktet 30 forlader det nye trin med omvendt osmose, og en følge af, at man har bestemt den kritiske indgangs- og udgangstemperatur for luften, fugtfjernelsen og udtagelsesbetingelserne, som muliggør tørring af produkterne uden, at de undergår nedbrydning.
Det skal også bemærkes, at forstøvningstørring af SAMe-saltene ifølge opfindelsen fører til store omkostningsre- 35
DK 162240 B
10 duktioner i henseende til udstyr og energi sammenlignet med kendte tørremetoder, og især sammenlignet med tørring ved lyofilisering.
5 Følgelig muliggør den hidtil ukendte fremgangsmåde til fremstilling af SAMe-salte i industriel skala ifølge opfindelsen opnåelse af et meget rent produkt i udbytter, der aldrig er nået før, nemlig tæt ved 90% eller mere, ved hjælp af en fremgangsmåde, som er meget enklere og 10 mindre kostbar end alle de tidligere kendte processer.
Dette virkeligt overraskende resultat er blevet opnået som følge af, at man uventet har fundet et vist antal kritiske parametre, som styrer den hidtil ukendte proces.
15
For at gøre fremgangsmåden ifølge opfindelsen lettere reproducerbar og for at illustrere nogle af de opnåede resulterende fordele gives i det følgende praktiske eksempler på udførelsen af fremgangsmåden.
20 EKSEMPEL 1
Fremstilling af SAMe-disulfat-p-toluensulfonat 25 110 liter ethylacetat og 110 liter vand sættes ved omgi velsernes temperatur til 720 kg gær beriget med SAMe (17 g/kg) ved Schlenk-metoden (Enzymologia 29, 283 (1965)).
Efter energisk omrøring i 30 minutter tilsættes 1000 30 liter 0,35 N svovlsyre, og omrøring fortsættes i yderligere 1,5 time.
Blandingen filtreres gennem et roterende filter, og kagen vaskes med vand til opnåelse af 2800 liter opløsning in-35 deholdende 4,40 g/liter SAMe, hvilket svarer til 99,5% af det i udgangsmaterialet tilstedeværende.
DK 162240 B
11
Den således opnåede SAMe-opløsning (pH 2,5) føres til et ultrafiltreringsanlæg med rørformede membraner med en afskæring på 10 000.
5 Det permeat, der forlader membranerne, samles i en egnet beholder, mens koncentratet kontinuerligt recirkuleres, indtil det får et slutvolumen på 200 liter. På dette tidspunkt tilsættes destilleret vand, og recirkulering fortsættes, indtil SAMe er fuldstændig ekstraheret.
10 3500 liter ultrafiltreret lysat opnås, som indstilles til pH 5 ved tilsætning af 2 N NaOH.
Der fremstilles en søjle indeholdende 400 liter Amber-15 lite® CG 50 på H+-form, som vaskes omhyggeligt med destilleret vand.
Lysatet passeres gennem harpikssøjlen ved en hastighed på 800 liter/time, som holdes konstant under hele processen.
20 400 liter destilleret vand, 3200 liter 0,1 M eddikesyre og 400 liter destilleret vand passeres derpå successivt.
SAMe elueres med 800 liter 0,2 N svovlsyre. Det på denne 25 opnåede eluat på 800 liter indeholder ca. 11,6 kg SAMe.
En søjle fremstilles indeholdende 400 liter Amberlite® XAD4 harpiks forud aktiveret med 800 liter 0,1 N NaOH og 800 liter 0,1 N H2S04 og derpå omhyggeligt vasket med de-30 stilleret vand.
Den tidligere opnåede SAMe-opløsning passeres gennem søjlen med en hastighed på 200 liter/time, som holdes konstant under hele processen.
Derpå passeres 400 liter 20 mN svovlsyre igennem.
35
DK 162240 B
12
Eluatet indeholdende SAMe (ca. 1000 liter indeholdende 11,3 kg SAMe) samles*
Den således opnåede opløsning føres til et anlæg for om-5 vendt osmose af den flade type indeholdende polyamid-af-saltningsmembraner.
I dette anlæg koncentreres SAMe-opløsningen til 80 liter indeholdende 11,2 kg SAMe.
10
Der tilsættes 1,8 kg koncentreret I^SO^ og 4,8 kg p-toluen- sul fonsyre .
Den således opnåede opløsning føres til en forstøvnings-15 tørrer fødet med luft ved 160 0C,
Det tørrede produkt udtages kontinuerligt fra forstøvningstørreren.
20 Der opnås 2,16 kg pulver, som ved analyse viser følgende sammensætning: - SAMe 51% - H2S04 25% 25 - p-toluensulfonsyre 22% - H20 2% svarende til SAMe-2H2S04-p-toluensulfonsyresaltet. Udbytte ca. 90%.
30 35
DK 162240 B
13 EKSEMPEL 2
Fremstilling af SAMe-disulfat-di-p-toluensulfonat 5 Proceduren ifølge eksempel 1 følges til og med koncentrering ved omvendt osmose.
1,8 kg koncentreret og 9,6 kg p-toluensulfonsyre sættes til den koncentrerede opløsning fra den omvendte 10 osmose.
Tørring udføres som i eksempel 1.
Der opnås 26,5 kg pulver, som ved analyse viser følgende 15 sammensætning: - SAMe 41,5% - H2S04 20,5% - p-toluensulfonsyre 36% 20 - H20 2% svarende til SAMe-2H2SC>4-2-p-toluensulfonsyresaltet. Udbytte ca. 90%.
25 EKSEMPEL 3
Fremstilling af SAMe-2,5-sulfat
Proceduren ifølge eksempel 1 følges til og med koncentre-30 ring ved omvendt osmose.
3,5 kg koncentreret i^SO^ sættes til den koncentrerede opløsning fra den omvendte osmose.
35 Tørring udføres som i eksempel 1.
DK 162240 B
14
Der opnås 18,2 kg pulver, som ved analyse viser følgende sammensætning: - SAMe 60,6% 5 - H2S04 37,4% - H20 2% svarende til SAMe-2,5 H2S04* Udbytte ca. 90%.
10 15 20 25 30 35
Claims (1)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af stabile salte af S-5 adenosyl-L-methionin (SAMe) ud fra gærkoncentrater opnået ved dyrkning af gær beriget med SAMe ved behandling med methionin og passage af dyrkningsvæsken gennem en svagt sur ionbytterharpiks, kendetegnet ved, at man 10 a) behandler gæren med methionin i flere på hinanden følgende trin, indtil SAMe-koncentrationen når 12-20 g/kg fugtig gær, 15 b) fremstiller et lysat med høj SAMe-koncentration ud fra ovennævnte gærkoncentrat ved behandling af dette med vand og ethylacetat i mængder på mellem 1/20 og 1/5 af vægten af de fugtige celler i et tidsrum på mellem 15 og 45 minutter og derefter med ved en koncentra- 20 tion på mellem 0,1 N og 0,5 N, c) underkaster det i trin b) opnåede lysat ultrafiltrering udført med en membran med en nominel molvægtsaf-skæringsværdi på 10 000 til opnåelse af en filtreret 25 væske, d) passerer den filtrerede væske holdt ved et pH på mellem 3,5 og 7 gennem en svagt sur ionbytterharpiks af typen -C00H på H+-form, hvilken harpiks har en parti- 30 kelstørrelse på mellem 0,147 og 0,074 mm og derefter eluerer SAMe med en 0,2 N vandig opløsning af en stærk syre, e) passerer det i trin d) opnåede eluat gennem en absorp- 35 tionspolymer af den ikke-polære type eller med mellem stor polaritet valgt blandt polystyren og polyacryl-syreestere, med en hastighed på mellem 0,2 og 1 volu- 16 DK 16224GB men væske pr. time pr. volumen harpiks, f) underkaster det i trin e) opnåede eluat omvendt osmose med kraftigt NaCl-afvisende afsaltningsmembraner til 5 omvendt osmose, indtil der fås et SAMe-indhold i kon centratet på 100-200 g/liter, og derefter behandler den koncentrerede SAMe-opløsning med den støkiometriske mængde syre til at transformere den fuldstændigt til det ønskede SAMe-salt, og 10 g) tørrer den koncentrerede opløsning af SAMe-salt i en forstøvningstørrer, hvori luften har en indgangstempe-ratur på mellem 140 og 200 °C og en udgangstemperatur på mellem 40 og 100 °C. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2262283 | 1983-08-24 | ||
| IT22622/83A IT1169773B (it) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK402884D0 DK402884D0 (da) | 1984-08-23 |
| DK402884A DK402884A (da) | 1985-02-25 |
| DK162240B true DK162240B (da) | 1991-09-30 |
| DK162240C DK162240C (da) | 1992-03-02 |
Family
ID=11198536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK402884A DK162240C (da) | 1983-08-24 | 1984-08-23 | Fremgangsmaade til fremstilling af stabile s-adenosyl-l-methionin-salte |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4621056A (da) |
| EP (1) | EP0141914B1 (da) |
| JP (1) | JPS6070097A (da) |
| KR (1) | KR900009054B1 (da) |
| AT (1) | ATE31550T1 (da) |
| AU (1) | AU569107B2 (da) |
| CA (1) | CA1223535A (da) |
| DE (1) | DE3468234D1 (da) |
| DK (1) | DK162240C (da) |
| ES (1) | ES535378A0 (da) |
| FI (1) | FI77043C (da) |
| IT (1) | IT1169773B (da) |
| MX (1) | MX7625E (da) |
| NO (1) | NO159669C (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1173990B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale |
| IT1173992B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente idonei per uso farmaceutico orale |
| US4794174A (en) * | 1987-02-10 | 1988-12-27 | Southern Research Institute | 5'deoxy-5'-substituted adenosines |
| US5180714A (en) * | 1990-10-31 | 1993-01-19 | Health Research, Inc. | Adenosine compounds for the treatment of diseases caused by parasitic protozoa |
| IT1315236B1 (it) * | 1999-10-05 | 2003-02-03 | Chementecno Srl | Processo per la purificazione di s-adenosil-l-metionina e per lapreparazione dei suoi sali farmaceuticamente accettabili. |
| IT1318535B1 (it) * | 2000-05-25 | 2003-08-27 | Chementecno Srl | Processo per la preparazione di sali farmaceuticamente accettabili di(ss,rs)-s-adenosil-l-metionina. |
| IT1317920B1 (it) * | 2000-10-20 | 2003-07-15 | Univ Roma | S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer. |
| US6881837B2 (en) | 2001-06-07 | 2005-04-19 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Chemical synthesis of S-adenosyl-L-methionine with enrichment of (S,S)-isomer |
| US6649753B2 (en) * | 2001-06-07 | 2003-11-18 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation |
| KR20070048700A (ko) | 2004-06-23 | 2007-05-09 | 오키드 케미칼즈 앤드 파마수티컬즈 리미티드 | （ｓ，ｓ）－이성질체가 풍부한ｓ－아데노실－ｌ－메티오닌의 화학 합성 |
| EP1982721B1 (en) | 2006-01-17 | 2011-11-09 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method of stabilizing s-adenosyl-l-methionine and stabilized composition |
| US9080158B2 (en) | 2006-05-16 | 2015-07-14 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method of producing S-adenosyl-L-methionine-containing dry yeast having excellent storage stability, the product thereof and composition for oral intake |
| US9200250B2 (en) | 2007-01-25 | 2015-12-01 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Method for production of dry yeast containing S-adenosyl-L-methionine and having excellent storage stability, product produced by the method, and molded composition of the dry yeast |
| CN102321136B (zh) * | 2011-09-19 | 2014-10-22 | 北京化工大学 | S-腺苷-l-甲硫氨酸对甲苯磺酸硫酸双盐的制备方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IE37913B1 (en) * | 1972-08-02 | 1977-11-09 | Bioresearch Sas | Salt of s-adenosyl-l-methionine |
| JPS5631897B2 (da) * | 1972-11-13 | 1981-07-24 | ||
| US3962034A (en) * | 1973-02-01 | 1976-06-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing s-adenosylmethionine or methylthioadenosine by yeast |
| IE39517B1 (en) * | 1973-06-27 | 1978-10-25 | Bioresearch Sas | Double salts of s-adenosyl-l-methhionine |
| FR2275220A1 (fr) * | 1974-06-21 | 1976-01-16 | Merieux Inst | Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus |
| AR221676A1 (es) * | 1974-07-12 | 1981-03-13 | Bioresearch Sas | Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico |
| US4109079A (en) * | 1975-10-16 | 1978-08-22 | Yamasa Shoyu Kabushiki Kaisha | Stabilized s-adenosyl-l-methionine preparations |
| JPS53107485A (en) * | 1977-02-28 | 1978-09-19 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Preparation of s-adenosyl-l-methionine salt |
| GB2001976B (en) * | 1977-08-03 | 1982-03-10 | Yamasa Shoyu Kk | S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof |
| JPS5699499A (en) * | 1980-01-10 | 1981-08-10 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Composition containing s-adenosyl-l-methionine, and its preparation |
| IT1137892B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1137640B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
| IT1139974B (it) * | 1981-09-11 | 1986-09-24 | Bioresearch Srl | Derivati della s-adenosilmetionina,processo per la preparazione e composizioni terapeutiche che li contengono come principio attivo |
| GB2116172B (en) * | 1982-02-25 | 1986-07-09 | Nippon Zeon Co | Microbial cells containing s-adenosyl methionine in high concentrations and process for production of s adenosyl methionine |
-
1983
- 1983-08-24 IT IT22622/83A patent/IT1169773B/it active
-
1984
- 1984-08-01 DE DE8484109109T patent/DE3468234D1/de not_active Expired
- 1984-08-01 AT AT84109109T patent/ATE31550T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-01 EP EP84109109A patent/EP0141914B1/en not_active Expired
- 1984-08-02 US US06/637,051 patent/US4621056A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-08-03 CA CA000460362A patent/CA1223535A/en not_active Expired
- 1984-08-22 FI FI843315A patent/FI77043C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-22 MX MX8411264U patent/MX7625E/es unknown
- 1984-08-23 NO NO843366A patent/NO159669C/no unknown
- 1984-08-23 KR KR1019840005106A patent/KR900009054B1/ko not_active Expired
- 1984-08-23 ES ES535378A patent/ES535378A0/es active Granted
- 1984-08-23 AU AU32328/84A patent/AU569107B2/en not_active Ceased
- 1984-08-23 DK DK402884A patent/DK162240C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-24 JP JP59175326A patent/JPS6070097A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI77043B (fi) | 1988-09-30 |
| IT8322622A1 (it) | 1985-02-24 |
| ES8506044A1 (es) | 1985-06-16 |
| NO843366L (no) | 1985-02-25 |
| AU3232884A (en) | 1985-02-28 |
| CA1223535A (en) | 1987-06-30 |
| FI843315A7 (fi) | 1985-02-25 |
| FI77043C (fi) | 1989-01-10 |
| DK402884D0 (da) | 1984-08-23 |
| FI843315A0 (fi) | 1984-08-22 |
| DE3468234D1 (en) | 1988-02-04 |
| DK162240C (da) | 1992-03-02 |
| MX7625E (es) | 1990-03-27 |
| KR900009054B1 (ko) | 1990-12-17 |
| US4621056A (en) | 1986-11-04 |
| JPH0421478B2 (da) | 1992-04-10 |
| JPS6070097A (ja) | 1985-04-20 |
| IT8322622A0 (it) | 1983-08-24 |
| ATE31550T1 (de) | 1988-01-15 |
| ES535378A0 (es) | 1985-06-16 |
| NO159669B (no) | 1988-10-17 |
| DK402884A (da) | 1985-02-25 |
| AU569107B2 (en) | 1988-01-21 |
| IT1169773B (it) | 1987-06-03 |
| NO159669C (no) | 1989-01-25 |
| KR850001750A (ko) | 1985-04-01 |
| EP0141914A1 (en) | 1985-05-22 |
| EP0141914B1 (en) | 1987-12-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI81381C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av stabila sulfoadenosyl-l-metionin (same)-salter. | |
| DK162240B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af stabile s-adenosyl-l-methionin-salte | |
| RU2121848C1 (ru) | Способ получения инулина | |
| CN102329340A (zh) | 一种d-甘露糖制备方法 | |
| SG11202111535QA (en) | Purification of oligosaccharides from a fermentation broth by using filtration | |
| WO2021250191A1 (en) | Improved demineralization of fermentation broths and purification of fine chemicals such as oligosaccharides | |
| CN111233658B (zh) | 一种提取银杏叶中莽草酸和奎宁酸的方法 | |
| JP2003534349A (ja) | （ｓｓ，ｒｓ）−ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニンの薬剤として許容される塩の調製方法 | |
| CN111171097B (zh) | 发酵生产腺苷的分离纯化方法 | |
| CN105837488B (zh) | 一种羟脯氨酸发酵生产工艺 | |
| CN112625120B (zh) | 连续规模化生产重组胶原蛋白的工艺 | |
| RU2039817C1 (ru) | Способ получения биологически активных веществ из биомассы культивируемых клеток растений | |
| KR20080007985A (ko) | 결정화 공정을 이용한 5'-이노신산 발효액의 정제방법 | |
| CN113881725A (zh) | 一种电渗析制备1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸盐的方法 | |
| JPS62249956A (ja) | カルニチンの精製方法 | |
| JPS6128396A (ja) | 乳酸塩の製造方法 | |
| CN116023419B (zh) | 一种高纯度丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法 | |
| JP2002293803A (ja) | 抗ウイルス剤 | |
| CN106518745A (zh) | 一种虾青素分离工艺 | |
| CN102786591B (zh) | 定向诱导合成金属硫蛋白的工艺 | |
| JPH07313182A (ja) | アントシアニンの製造方法 | |
| JPS63233783A (ja) | 蘚苔植物の培養細胞の培養方法 | |
| CN110885369A (zh) | 一种在提取甘油葡萄糖苷过程中回收藻蓝蛋白的方法 | |
| CN111454381A (zh) | 一种高产率透明质酸的制备方法 | |
| CZ111698A3 (cs) | Způsob koncentrační purifikace kyseliny citronové |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |