KR890014737A - 화학적으로 조절 가능한 dna 서열 및 유전자 그리고 이들의 용도 - Google Patents

화학적으로 조절 가능한 dna 서열 및 유전자 그리고 이들의 용도 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

화학적으로 조절 가능한 DNA 서열 및 유전자 그리고 이들의 용도
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 λtobchrPR1013의 부분적인 제한 효소 지도이고,
제2도는 λtobchrPR1013으로부터 pBS-PR1013Cla의 작성을 도시하며,
제3도는 λtobchrPR1013으로부터 pBS-PR1013E채의 작성을 도시한다.

Claims (118)

  1. 식물 또는 식물조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있고 그 조절이 화학적 조절제에 따라 다른 비코딩 DNA 서열.
  2. 제 1항에 있어서, 실질적으로 순수한 비코딩 DNA 서열.
  3. 제 2 항에 있어서, 연합 DNA 서열이 코딩서열인 DNA 서열.
  4. 제 2 항에 있어서, 조절이 유도성 화학적 조절제에 따라 다른 DNA 서열.
  5. 제 1항에 있어서, 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자의 부분인 화학적으로 조절가능한 비코딩 DNA 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  6. 제 5항에 있어서, 식물 또는 식물조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있고 또 그 연합 DNA서열이 코딩서열한 DNA 서열.
  7. 제 6항에 있어서, 전사가 유도성 화학적 조절제에 의하여 조절되는 DNA 서열.
  8. 제 5항에 있어서, 화학적으로 조절가능한 유전자가 PR 단백질 유전자인 DNA 서열.
  9. 제 8항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배의 PR-1a, PR-1b, PR-1c, PR-1′, PR-Q 또는 PR-R 유전자, 오이 키티나재 유전자 또는 담배의 염기성 및 산성 β-1,3-글루카나제 유전자인 DNA 서열.
  10. 제8항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배 PR-1a, PR-1b, PR-1c, PR-1′ 또는 PR-R 유전자 또는 오이 키타나제 유전자인 DNA 서열.
  11. 제 8항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배 PR-1a 유전자인 DNA 서열.
  12. 제 8항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배 PR-1′ 유전자인 DNA 서열.
  13. 제 8항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배의 염기성 β-1,3-글루카나제 유전자인 DNA 서열.
  14. 제 8항에 있어서, PR 단백질 유전자의 5′측 영역에 존재하는 DNA 서열.
  15. 제 6항에 있어서, 전사가 벤조산, 살리실산, 아세틸살리실산, 폴리아크릴산 및 이들의 치환된 유도체로 구성된 군으로부터 선정된 조절제에 의하여 조절되는 DNA 서열.
  16. 제 6항에 있어서, 전사가 벤조-1,2,3-디티아디아졸카르복시산, 벤조-1,2,3-티아디아졸티오카르복시산, 시아노벤조-1,2,3-티아디아졸, 벤조-1,2,3-티아티아졸 카르복시산 아미드, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산 히드라지드 및 그의 유도체로 구성된 군으로부터 선정된 조저제에 의하여 조절되는 DNA 서열.
  17. 제16항에 있어서, 전사가 메릴틸벤조-1,2,3-티아디아졸-카르복실레이트에 의하여 조절되는 DNA 서열.
  18. 제 6항에 있어서, 전사가 디클로로이소니코틴산 또는 그의 유도체에 의하여 조절되는 DNA 서열.
  19. 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자의 화학적으로 조절가능한 비코딩 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 가지며, 식물 또는 식물 조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있고 그 조절이 화학적 조절재에 따라서 다른 제1 DNA 성분 서열, 및 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자에서 제1성분이 결합된 전사가능 DNA 서열의 전체가 아닌 일부이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제2 DNA 성분서열을 포함하는 DNA 서열.
  20. 제19항에 있어서, 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  21. 제20항에 있어서, 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자가 식물에서 유래하며 또 제2DNA 성분서열이 코딩 서열인 DNA 서열.
  22. 제21항에 있어서, 유전자가 PR 단백질 유전자인 DNA 서열.
  23. 제21항에 있어서, 코딩 서열이 시그널 펩티드를 코드하는 DNA 서열.
  24. 식물 또는 식물조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있고 또 그 조절이 화학적 조절제에 따라 다른 화학적으로 조절가능한 제1 비코딩 DNA 성분서열, 및 식물 또는 식물조직에서 전사될 수 있는 제2 DNA 성분서열을 포함하는 키메라 DNA 서열.
  25. 제24항에 있어서, 제2 DNA 성분서열이 안티센스 메카니즘에 의하여 표현형 특징의 발현을 조절할 수 있는 카메라 DNA 서열.
  26. 제24항에 있어서, 제2 DNA 성분서열이 전사되고 번역되어 표현형 특징을 나타내는 폴리펩티드를 제조할 수 있는 코딩 서열인 키메라 DNA 서열.
  27. 제24항에 있어서, 제2 DNA 성분 서열이 제 1성분 서열과 접하는 키메라 DNA서열.
  28. 제24항에 있어서, 제1 DNA성분 서열이 억제성 화학적 조절재에 의하여 조절되는 키메라 DNA 서열.
  29. 제24항에 있어서, 제1 DNA 서열이 유도성 화학적 조절재에 의하여 조절되는 키메라 DNA 서열.
  30. 제24항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 식물로부터 유래된 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자 내의 화학적으로 조절가능한 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 키메라 DNA 서열.
  31. 제24항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 식물로부터의 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자 내의 화학적으로 조절가능한 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖고 또 제2 DNA 성분 서열이 전사 및 번역되어 표현형 특징을 나타내는 폴리펩티드를 생산할 수 있는 코딩 서열인 키메라 DNA 서열.
  32. 제31항에 있어서, 제2 DNA 성분 서열이 제1 DNA 코딩 서열에 접하는 키메라 DNA 서열.
  33. 제31항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 유도성 화학적 조절제에 의하여 조절되는 키메라 DNA 서열.
  34. 제31항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 PR 단백질 유전자 내의 화학적으로 유도가능한 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 키메라 DNA 서열.
  35. 제34항에 있어서, PR 단백질 유전자가 PR-1a, PR-1b. PR-1c, PR-1′, PR-Q 또는 PR-R 유전자, 오이 기티나재 유전자 또는 담배의 염기성 또는 산성 β-1,3-글루카나제 유전자인 키메라 DNA 서열.
  36. 제34항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배 PR-1a, PR-1b, PR-1c, PR-1′ 또는 PR-R 유전자 또는 오이 키티나재 유전자인 키메라 DNA 서열.
  37. 제34항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배 PR-1a, 또는 PR-1′ 유전자인 키메라 DNA 서열.
  38. 제34항에 있어서, PR 단백질 유전자가 담배의 염기성 β-1,3-글루카나제 유전자인 키메라 DNA 서열.
  39. 제31항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 담배 PR-1a 유전자의 5′측 영역이고 또 전사개시 부위옆에 약 300 또는 그 이상의 염기쌍을 함유하는 키메라 DNA 서열.
  40. 제39항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 전사개시 부위 옆에 약 600 및 1000 사이의 염기쌍을 함유하는 키메라 DNA 서열.
  41. 제31항에 있어서, 제2 DNA 성분 서열이 표현형 특정을 로드하는 키메라 DNA 서열.
  42. 제41항에 있어서, 표현형 특징이 제초제, 진균, 비루스, 세균, 곤충, 선충 또는 절지동물류에 대한 내약력 또는 내성 ; 2차 대사산물의 제조 ; 자성 또는 응성 붙임 ; 및 효소 또는 기타 리포터 화합물의 재조로 구성된 군에서 선정된 키메라 DNA 서열.
  43. 제41항에 있어서, 표현형 특징이 제초제에 대한 내약력 또는 내성 또는 곤충에 대한 내성인 키메라 DNA 서열.
  44. 제43항에 있어서, 제초제에 대한 내약력 또는 내성이 야생형 또는 제초제 내성 아세토히드록시산 신타제(AHAS)를 코딩하는 DNA 서열에 위하여 유발되는 키메라 DNA 서열.
  45. 제43항에 있어서, 곤충에 대한 내성이 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)를 코딩하는 DNA 서열에 의하여 유발되는 키메라 DNA 서열.
  46. 제41항에 있어서, 표현형 특징이 루시페라제(LUX), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), 네오마이신 포스포트랜스퍼라제(NPT), 노팔린 신타제(NOS), 옥토핀 신타제(OCS), 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 및 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선정된 리포터 화합물인 키메라 DNA 서열.
  47. 제41항에 있어서, 표현형 특징이 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 및 바실루스 투린지엔시스 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선정된 리포터 화합물인 키메라 DNA서열.
  48. 제24항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 식물에서 PR 단백질 유전자를 유도하는 화학적 조절제에 의하여 조절되는 키메라 DNA 서열.
  49. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 벤조산, 살리실산, 아세틸살리실산, 폴리아크릴산 및 이들의 치환된 유도체로 구성된 군으로부터 선정되는 키메라 DNA 서열.
  50. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산, 벤조-1,2,3-디아디아졸티오카르복시산, 시아노벤조-1,2,3-티아디아졸, 벤조-1,2,3-타아디아졸카르복시산아미드, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산 히드라지드 및 그의 유도체로 구성된 군으로부터 선정되는 키메라 DNA 서열.
  51. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 벤조-1,2,3-타아디아졸-7-카르복시산, 벤조-1,2,3-티아디아졸-7-디오카르복시산, 7-시아노벤조-1,2,3-티아디아졸, 벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복시산 아미드, 벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복시산 히드라지드 및 그의 유도체로 구성된 군으로부터 선정되는 키메라 DNA 서열.
  52. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 벤조-1,2,3-디아디아졸 카르복시산, 알킬기가 1 내지 6개 탄소원자를 함유하는 알킬벤조-1,2,3-디아디아졸카르복실레이트 및 이들 화합물의 치환된 유도체로 구성된 군에서 선정되는 키메라 DNA 서열.
  53. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 디클로로이소니코틴산 또는 그의 유도체인 키메라 DNA 서열.
  54. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 벤조-1,2,3-타이디아졸-7-카르복시산, 메틸벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복실레이트, n-프로필벤조-1,2,3-타아디아졸-7-카르복실레이트, 벤질벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복실레이트, 벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복시산 2차 부틸히드라지드, 2,6-디클로로이소니코틴산 및 메틸 2,6-디클로로이소니코타내이트로 구성된 군에서 선정된 키메라 DNA 서열.
  55. 제48항에 있어서, 화학적 조절제가 메틸벤조-1,2,3-티아디아졸-7-카르복실레이트인 키메라 DNA 서열.
  56. 제24항에 있어서, 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자의 화학적으로 조절가능한 비코딩 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 가지며 또 식물 또는 식물조직에 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있으며 그 조절이 화학적 조절체에 따라 다른 제1 DNA 성분서열, 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자에서, 제1성분이 연합된 전사가능한 DNA 서열 전부가 아닌 일부이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제2 DNA 성분 서열, 및 식물 또는 식물조직에서 전시될 수 있는 제3 DNA 성분 서열을 포함하는 키메라 DNA 서열.
  57. 제56항에 있어서, 제1 DNA 성분 서열이 PR 단백질 유전자 내의 화학적으로 조절가능한 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 키메라 DNA서열.
  58. 제56항에 있어서, 제2 DNA 성분 서열이 시그널 펩티드를 코드하는 키메라 DNA 서열.
  59. 제58항에 있어서, 제2 DNA 성분 서열이 PR 단백질 유전자로부터의 시그널 펩티드이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 펩티드를 코드하는 키메라 DNA 서열.
  60. 제59항에 있어서, PR 단백질 유전자가 PR-1a 유전자인 키메라 DNA 서열.
  61. 제56항에 있어서, 제3 DNA 성분 서열이 표현형 특징을 코드하는 키메라 DNA 서열.
  62. 제 1항의 비코딩 DNA 서열을 포함하는 벡터.
  63. 제62항에 있어서, 제24항의 키메라 DNA 서열을 포함하는 벡터.
  64. 제62항에 있어서, 식물세포 또는 아그로바테룸(Agrobacteriem)에서 작용하는 벡터.
  65. 1988년 2월 12일 기탁되어 기탁번호가 ATCC 67628인 제62항에 따른 대장균 HB101/pTJS75-Km.
  66. 1988년 2월 12일 기탁되어 기탁 번호가 ATCC-40426인 제62항에 따른 플라스미드 pBS-PR1013C1a.
  67. 1988년 2월 12일 기탁되어 기탁번호가 ATCC 40427인 제62항에 따른 플라스미드 pBS-PR1019.
  68. 1988년 12월 29일 기탁되어 기탁번호가 ATCC 40526인 제62항에 따른 플라스미드 pBS-Gluc39.1.
  69. 1988년 12월 29일 기탁되어 기탁번호가 ATCC 40527인 제62항에 따른 플라스미드 pBS-Gluc39.3.
  70. 1988년 12월 29일 기탁되어 ATCC 40528인 제62항에 따른 플라스미드 pBScucchi/키티나제.
  71. 1989년 1월 18일 기탁되어 기탁번호가 ATCC 40535인 제62항에 따를 플라스미드 PBSGLGe.
  72. 제24항의 키메라 DNA 서열을 함유하는 식물조직, 식물 또는 종자.
  73. M e t G l y P h e V a l L e u P h e S e r G l n L e u P r o S e -rPheLeuLeuVaISerThrLeuLeuPheLeuValIleSerHisSerCysArgAla의 아미노산 서열을 갖는 실질적으로 순수한 시그널 펩티드 또는 펩티드와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 펩티드.
  74. 제73항에 시그널 펩티드 또는 시그널 펩티드와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 펩티드를 코드하는 DNA 서열.
  75. “서열 1”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 1”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제19항에 따른 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  76. “서열 2”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 2”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제19항에 따른 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  77. “서열 3”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 3”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  78. “서열 4”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 4”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  79. “서열 5”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 5”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제19항에 따른 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  80. “서열 6”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 6”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제19항에 따른 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  81. “서열 7”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 7”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  82. “서열 8”에 나타낸 바와같거나 또는 “서열 8”에 나타낸 서열과 실질적으로 상동인 서열을 갖는 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  83. (a) 게에서, 화학적으로 조절가능한 유전자로부터 RNA의 발현을 활성화시키고 ; (b) RNA를 분리하며 ; (c) 활성화되지 않은 대조용 게로부터 분리된 RNA로부터 발생된 RNA 분 아니라 활성화된 게로부터 분리된 RNA로부터 발새오된 RNA에 대한 게놈 라이브러리를 특이적으로 스크리닝하고 ; (d) 게놈클론을 분리하며 ; (e) 상기 게놈클론의 화학적으로 조절가능한 유전자를 서브클로닝 하고 : 또 (f) 소망하는 화학적으로 조절가능한 DNA 서열을 분리하는 단계를 포함하는 유전자를 함유하는 천연적으로 존재하는 게 내의 화학적으로 조절가능한 유전자로부터 실질적으로 순수한 화학적으로 조절가능한 DNA 서열을 제조하는 방법.
  84. 제53항의 방법에 의하여 분리된 실질적으로 순수한 DNA 서열.
  85. 제83항에 있어서, (a) 화학적으로 조절가능한 유전자로부터 폴리 A+RNA의 식물에서의 발현을 활성화하고, (b) 폴리 A+RNA를 분리하며 (c) 이 폴리 A+RNA로부터 cDNA 라이브러리를 제조하고 ; (d) 활성화되지 않은 대조용 식물에서 RNA로부터 발생한 cDNA로 상기 cDNA라이브러리를 특이적으로 스크리닝하며 ; (e) 화학적으로 조절가능한 cDNA클론을 분리하고 ; (f) 상기 단계(e)의 cDNA 클론을 프로브로 사용하여 상기 식물의 게놈 라이브러리로부터 게놈 클론을 분리하며 ; (g) 상기 게놈 클론으로부터의 화학적으로 조절가능한 유전자를 서브클로닝하고 ; 또 (h) 소망하는 화학적으로 조절가능한 DNA 서열을 분리하는 단계를 포함하는 게가 식물인 방법.
  86. 제85항에 있어서, 화학적으로 조절가능한 유전자가 PR 단백질 유전자인 방법.
  87. 제86항에 있어서, PR 단백질 유전자가 (a) 단계에서 화학적 유도물질 또는 병원체에 의하여 활성화되는 방법.
  88. 제87항에 있어서, 화학적 유도물질이 벤조산, 살리실산, 아세틸살리실산, 폴리아크릴산, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산, 벤조-1,2,3-티아디아졸티오카르복시산. 시아노벤조-1,2,3-티아디아졸, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산 아미드, 벤조-1,2,3-티아디아졸 카르복시산 히드라지드, 디클로로이소니코틴산 및 그의 유도체로 구성된 군에서 선정되는 방법.
  89. 제24항의 키메라 DNA 서열을 함유하는 식물조직, 식물 또는 종자에 화학적 조절제를 투여하는 것을 포함하는 화학적으로 조절가능한 유전자의 전사를 조절하는 방법.
  90. 제89항에 있어서, 조절제가 벤조산, 살리실산, 아세틸살리실산, 폴리아크릴산, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산, 벤조-1,2,3-티아디아졸티오카르복시산 시아노벤조-1,2,3-티아디아졸, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산 아미드, 벤조-1,2,3-티아디아졸카르복시산 히드라지드, 디클로로이소니코틴산 및 그의 유도체로 구성된 군에서 선정되는 방법.
  91. 제89항에 있어서, 키메라 DNA의 제1 DNA 성분 서열이 PR 유전자의 화학적으로 유도가능한 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 화학적으로 유도가능한 서열인 방법.
  92. 제89항에 있어서, 화학적으로 조절가능한 유전자가 성장상태, 붙임선, 질병내성, 해충내성, 제초제 내약력 또는 내성, 2차 대사산물의 제조 및 분석가능한 효소 마커의 제조로 구성된 군에서 선정된 표현형 특징으로 코드하는 방법.
  93. 제92항에 있어서, 효소마커가 루시페라제(LUX), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), 내오마이신 포스포트랜스퍼라제(NPT), 노팔린 신타제(NOS), 옥토핀 신타제(OCS), 베타 1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 또는 바실러스 투린지엔스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)인 방법.
  94. 제93항에 있어서, 효소마커가 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 또는 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)인 방법.
  95. 제31항의 키메라 DNA 서열 또는 상기 키메라 DNA 서열을 함유하는 벡터로 숙주를 형질전환시키고, 임의의 화학적 조절제를 형질전환된 숙주에 투여하며, 또 표현형 특징의 발현을 측정하는 것을 포함하는 화학적 조절제의 확인방법.
  96. 제95항에 있어서, 형질전환된 숙주가 식물조직 또는 식물세포인 방법.
  97. 제96항에 있어서, 키메라 DNA의 제1 DNA 성분 서열이 PR 단백질 유전자의 화학적으로 유도가능한 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 화학적으로 유도가능한 서열인 방법.
  98. 제95항에 있어서, 키메라 DNA에 의하여 코드된 표현형 특징이 분석가능한 효소 마커인 방법.
  99. 제98항에 있어서, 효소마커가 루시페라제(LUX), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), 내오마이신 포스포트랜스퍼라제(NPT), 노팔린 신타제(NOS), 옥토핀 신타제(OCS), 베타-1,3-글루코로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 또는 바실러스 투린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)인 방법.
  100. (a) 임의의 화학적으로 조절가능한 DNA 서열 또는 상기 서열, 숙주 선별가능 유전자 마터인 제2 DNA서열 및 표현형 특징을 코드하는 제3 DNA 서열을 함유하는 벡터로 숙주를 형질전환시키고 ; (b) 이 형질전환된 숙주에 화학적 조절제를 투여하며 ; 또 (c) 발현을 측정하거나 또는 제3 DNA서열이 코드하는 표현형특징의 발현상의 변화를 선별하는 단계를 포함하는 화학적으로 조절가능한 DNA 서열의 확인 방법.
  101. 제100항에 있어서, 제3 DNA 서열이 숙주 선별가능 또는 분석가능한 유전자 마커인 방법.
  102. 제100항에 있어서, 형질전환된 숙주가 식물조직 또는 식물세포인 방법.
  103. 제100항에 있어서, 제2 DNA 서열 또는 제3 DNA 서열이 제초제 내성 또는 항생물질 내성에 대한 유전자 마커인 방법.
  104. 제100항에 있어서, 유전자 마커가 히그로마이신, 카나마이신, 클로람페니콜, 블레오마이신, 푸로마이신, 린코마이신 및 메토트레세이트 내성 유전자로 구성된 군으로부터 선별된 항생물질 내성 유전자인 방법.
  105. 제100항에 있어서, 유전자 마커가 아미노글리코시드 포스포트랜스퍼라제 IV 히그로마이신 내성 유전자인 방법.
  106. 제100항에 있어서, 제3 DNA 서열이 루시베라제(LUX), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), 내오마이신 포스포트랜스퍼라제(NPT), 노팔린 신타제(NOS), 옥토핀 신타제(OCS), 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS), 및 바실러스 투린지엔스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선별된 분석가능한 효소마커를 코드하는 방법
  107. 제100항에 있어서, 제3 DNA 서열이 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS) 및 바실러스 투린지엔시스 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선별된 분석가능한 효소마커를 코드하는 방법.
  108. 제100항에 방법에 의하여 확인된 실질적으로 순수한 화학적으로 조절가능한 DNA 서열.
  109. a) 임의의 형질전환제를 공지된 화학적 조절제로 처리하고 또 b) 제2 DNA서열이 로드하는 표현형 특징의 발현에 따라서 형질전환체를 선별하는 단계를 포함하는, 공지된 화학적 조절제에 의하여 화학적으로 조절가능한 제1 DNA 성분서열 및 표현형 특징을 코딩하는 연합된 제2 DNA 서열을 포함하는 형질전환성 DNA로 처리되어진 형질전환된 식물세포 또는 조직을 선별하는 방법.
  110. 제109항에 있어서, 표현형 특징이 항생물질 내성인 방법.
  111. 제110항에 있어서, 항생물질 내성이 히그로마이신, 카나마이신, 클로람페니콜, 블레오마이신, 푸로마이신, 린코마이신, G418 및 메토트레세이트에 대하여 내성인 방법.
  112. 제109항에 있어서, 표현형 특징이 분석가능한 효소 마커인 방법.
  113. 제112항에 있어서, 효소 마커가 루시베라제(LUX), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), 내오마이신 포스포트랜스퍼라제(NPT), 노팔린 신타제(NOS), 옥토핀 신타제(OCS), 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS), 및 바실리스 투린지엔스(Bacillus thuringiensis) 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선별되는 방법.
  114. 제113항에 있어서, 효소 마커가 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS), 아세토히드록시산 신타제(AHAS)및 바실러스 투린지엔시스 내부독소(BT)로 구성된 군에서 선별되는 방법.
  115. 1.5 내지 3mM의 4-메틸 음벨리페릴 글루쿠로니드를 함유하는 0.5ml 미만의 시료내에 있는 식물 조직 추출물을 37℃ 근처에서 1 내지 5시간 동안 반응시키고 또 방출된 형광 지시제의 농도를 측정하는 것을 포함하는 베타-1,3-글루쿠로니다제(GUS)활성분석.
  116. (a) 12 및 18 뉴클레오티드 길이의 RNA 특이프라이머 올리고뉴클레오티드를 특이적 방사능이 높게 표지시키고 ; (b) RNA를 0.1 및 20nM사이의 농도인 이 표지된 올리고뉴클레오티드로써 37℃ 근처의 온도에서 2분 내지 24시간 동안 잡종화하고, (c) 0.003 및 1mM 사이 농도인 뉴클레오티드 삼인산 존재하에서 1분 및 120분동안 프라이머 올리고뉴클레오티드의 길이를 역전시효소로 신장하고, 또 (d) 신장된 산물을 분리하고 방사선 사진으로 확인하는 것을 포함하는 RND 용액에서 특징 RNA의 양을 측정하는 방법.
  117. 식물 또는 식물조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있고 그 조절이 화학적 조절제에 따라서 다른 화학적으로 조절가능한 제1 비코딩 DNA 성분서열 ; 및 식물 또는 식물조직에서 전사될 수 있는 제2 DNA를 포함하며, 이들 DNA 성분 서열들이 결찰되는 것을 특징으로 하는 화학적으로 조절가능한 키메라 DNA 서열의 제조방법.
  118. 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 비코딩 DNA 서열이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 가지며 또 식물 또는 식물조직에서 연합 DNA 서열의 전사를 조절할 수 있으며 그 조절이 화학적 조절제에 따라 다른 제1 DNA 성분서열, 천연적으로 존재하는 화학적으로 조절가능한 유전자에서 제1 성분이 연합된 전사가능한 DNA 서열 전부가 아닌 일부이거나 또는 그와 실질적으로 상동인 서열을 갖는 제2 DNA 성분 서열, 및 식물 또는 식물조직에서 전사될 수 있는 제3 DNA 성분 서열을 포함하며, 이들 DNA 성분 서열들이 동시에 또는 연속적으로 결찰된 것을 특징으로 하는 키메라 DNA 서열의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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