KR890003947A - 알파- 아미드화 효소 조성물 및 그의 제조방법 및 용도 - Google Patents

알파- 아미드화 효소 조성물 및 그의 제조방법 및 용도 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

알파-아미드화 효소 조성물 및 그의 제조방법 및 용도
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 내지 4도는 실시예 1에 관한 도면.

Claims (12)

  1. 산소 및 환원제의 존재하에 펩티드 사슬의 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 펩티딜 화합물의 상기 C-말단글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 펩티딜 아마드 화합물로의 전환을 촉매작용시킬 수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소로 이루어지는 효소 조성물에 있어서, 상기 효소 조성물은 상기 효소 조성물에 존재하는 단백질 mg당 적어도 약 25mU으 비활성을 나타내도록 알파-아미드화 효소가 충분히 순수하며, 상기 효소 조성물은 상기 펩티딜 화합물, 상기 해당 펩티딜 아미드 및 상기 알파-아미드화 효소로 구성되는 기로 부터 선택된 적어도 한 실재물을 분해시킬 수 있는 단백질 분해활성이 충분히 없고, 상기 팹티딜 화합물이 L-아미노산으로 이루어질 때 상기 조성물로 하여금 상기 전환을 촉매작용하도록 허용하는 것을 특징으로 알파-아미드화 효소 조성물.
  2. 팹티드 사슬의 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 상기 C-말단 글리신 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜 아미드로의 전환을 촉매작용시킬 수 있는 팹티딜-글리신-알파-아미드화 모노옥시제나제를 함유하는 호모제니어스 정제된 효소제제에 있어서, 상기 팹티딜 화합물은 천연공급원으로 부터 정제되거나 또는 재결합 DNA기법에 의해 제조된 것이며, 상기 제제는 상기 제제에 존재하는 단백질 mg당 적어도 25mU 효소 비활성을 가지며, 상기 정제된 효소 생성물은 상기 팹티딜 화합물, 상기 해당 팹티딜 아미드, 및 상기 알파-아미드화 효소로 구성되는 군으로부터 선택된 적어도 한 실재물을 분해시킬 수 있는 단백질 분해활성이 충분히 없으며, 상기 팹티딜 화합물이 L-아미노산으로 이루어질때 상기 조성물로 하여금 상기 전환을 촉매작용하도록 허용하는 것을 특징으로 하는 호모제니어스 정제된 효소제제.
  3. 산소 및 환원제의 존재하에 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 상기C-말단 글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜 아미드로의 전환을 촉매작용시킬수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소의 정제방법에 있어서, 상기 알파-아미드화 효소를 함유하는 조성물을 약 58,000달톤 내지 약 67,000달톤의 겉보기 분자량을 갖는 단백질 종을 분리할 수 있는 크기 배타 크로마토그라피와 상기 알파-아미드화 효소를 염용액으로 용리하는 단계들로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 적어도 한 불순한 알파-아미드화 효소를 천연 또는 재결합 공급원으로 부터 수집하는 단계, 상기 불순한 효소를 약 58,000달톤과 약 67,000달톤 사이의 겉보기 분자량ㅇ르 갖는 단백질 종을 분리할 수 있는 크기 배타 크로마토그라피와 상기 효소를 결합할 수 있는 음이온 교환 수지를 사용하는 음이온 교환 크로마토그라피 둘 다에 종속시키는 단계로 이루어지며, 여기서 알파-아미드화 효소는 250mM을 초과하는 농도를 갖는 염용액으로 용리시키며, 여기서 상기 용리된 효소는 조성물에 존재하는 단백질 mg당 적어도 약 25mU의 비활성을 나타낼 만큼 충분히 순수한 것을 특징으로 하는 알파-아미드화 효소 조성물의 효율적인 제조방법.
  5. 제1항의 효소 조성물을 제공하는 단계와, 팹티드 사슬의 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물을, 상기 조성물의 효소학적 유효량의 존재항, 상기 팹티딜 화합물을 상기 C-말단글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜 아미드로 전환시키기에 충분한 시간동안 반응시키는 단계로 이루어지는 것을 특징으로하는 알파-아미드화 팹티딜 생성물의 제조방법.
  6. 적어도 한 칼시토닌 종의 아미노산 서열에 해당하는 아미노산 서열을 함유하는 기질을 제공하는 단계, 상기 기질 서열은 그의 카르복실 말단에서 글리신 잔기를 가지며, 다음에 산소 및 환원제의 존재하에 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 상기 C-말단글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜-아미드로의 전환을 촉매작용할 수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소 조성물의 전재하에 상기 기질을 반응시키는 단계로 이루어지며, 상기 효소 조성물은 상기 효소 조성물내에 존재하는 단백질 mg당 적어도 약 25mU의 비활성을 나타내도록 알파-아미드화 효소가 충분히 순수한 것을 특징으로 하는 칼시토닌의 제조방법.
  7. 적어도 한 성장호르몬 방출인자종의 아미노산 서열에 해당하는 아미노산 서열을 함유하는 기질을 제공하는 단계, 상기 기질 서열은 적어도 그 카르복실 말단에 글리신 잔기를 가지며, 다음에 산소 및 환원제으 존재하에 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 아미노기가 상기 C-말단글리신의 대신에 나타나는 해당 팹티딜-아미드로의 전환을 촉매작용할수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소를 갖는 알파-아미드화 효소 조성물의 존재하에 상기 기질을 반응시키는 단계로 이루어지며, 여기서 상기 조성물은 상기 효소 조성물에 존재하는 단백질 mg당 적어도 약 25mU의 비활성을 나타내도록 알파-아미드화 효소가 충분히 순수한 것을 특징으로 하는 성장호르몬 방출인자의 제조방법.
  8. 적어도 한 칼시토닌 유전자-관련 팹티드 종의 아미노산 서열에 해당하는 아미노산 서열을 함유하는 기질을 제공하는 단계, 상기 기질서열은 그의 카르복실 말단에 글리신 잔기를 가지며, 다음에 산소 및 환원제의 존재하에 C-말단에서 적어도 글리신 잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 상기 C-말단 글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜-아미드로의 전환을 촉매작용할수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소를 갖는 알파-아미드화 효소 조성물의 존재하에 상기 기질을 반응시키는 단계로 이루어지며, 여기서 상기 효소 조성물은 상기 효소 조성물에 존재하는 단백질 mg당 적어도 약 25mU(상기 효소 조성물에 존재에 의해 측정한 것)의 비활성을 나타내도록 알파-아미드화 효소가 충분히 순수한 것을 특징으로 하는 칼시토닌 유전자-관련 팹티드의 제조방법.
  9. 알파-아미드화 효소를 코드할 수 있는 DNA서열을 제공하는 단계, 상기 DNA서열을 발현벡터에 연결시키는 단계, 상기 발현벡터를 상기 DNA서열을 발현할수 있는 숙주세포로 형질전환을 유도하는 단계,및 상기 DNA서열을 가지며 발현하는 숙주세포를 선호적으로 선택하는 단계들로 이루어지는 알파-아미드화 효소 조성물의 제조방법.
  10. 제9항의 방법에 따라 제조된 적어도 하나의 선호적으로 선택된 숙주세포로 이루어지는 것을 특징으로 하는 유전공학적으로 만든 미생물.
  11. 산소 및 환원제의 존재하에 팹티드 사슬의 카르복실 말단에서 적어도 글리신잔기를 갖는 팹티딜 화합물의 산기 C-말단글리신의 대신에 아미노기를 갖는 해당 팹티딜 아미드 화합물의 전환을 촉매작용할 수 있는 적어도 한 알파-아미드화 효소 종으로 이루어지는 고정화된 알파-아미드화 효소 조성물에 있어서, 상기 효소종은 단독으로 아니면 다른 물질과 조합하여, 알파-아미드화 활성의 실질적인 손실없이 24시간이상동안 글리신-익스텐드된 팹티딜 기질의 연속흐름을 견디기에 충분한 강성을 갖는 지지체에 직접 또는 간접적으로 공유결합에 의해 결합되며, 여기서 상기 조성물은 상기 조성물에 존재하는 단백질의 mg당 적어도 약 25mU의 비활성을 나타내도록 알파-아미드화 효소가 충분히 순수하고, 상기 조성물은 기질화합물, 해당 팹티딜 아미드 생성물, 및 알파-아미드화 효소로 구성되는 군으로 부터 선택된 적어도 한 실재물을 분해할 수 있는 단백질 분해활성이 충분히 없으며, 상기 조성물은 상기 팹티딜 화합물이 L-아미노산으로 이루어질 때 알파-아미드화 반응을 촉매작용하도록 허용하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. 알파-아미드화 효소의 불순한 시료의 정제를 위한 이뮤노어피니티 컬럼에 있어서, 상기 컬럼은 수용액에 용해성이 아니고 알파-아미드화 효소, 글리신-익스텐드된 팹티딜 화합물, 또는 해당 팹티딜 아미드의 작용에 의해 분해되지 않는 고정화 매트릭스로 이루어지며, 상기 매트릭스는 단백질을 결합할 수 있는 작용기를 가지며, 여기서 사기 기는 알파-아미드화 효소를 선택적으로 결합하는 모노클로날 또는 폴리클로날 기원의 항체에 공유하는 결합되는 것을 특징으로 하는 아뮤노어피니티 컬럼.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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