KR20240064604A - 5-데스메틸시넨세틴을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 5-데스메틸시넨세틴을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 제주쑥 추출물 및 이의 분획물에서 분리한 5-데스메틸시넨세틴은 암세포의 증식과 종양 형성 및 전이능을 억제하며, 암 줄기세포의 형성 및 성장을 억제하여 이를 사멸시키는 효과가 있으므로, 이를 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물로 유용하게 활용할 수 있다.
본 발명은 “2021년도 지역주도형 과학기술 R&D 사업 연구비 지원에 의한 제주 수산 발효식품 유래의 유산균 소재 개발”과 관련한 연구이다.

Description

5-데스메틸시넨세틴을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating metastatic breast cancer containing 5-desmethylsinensetin as an active ingredient}
본 발명은 5-데스메틸시넨세틴을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
항암 치료가 종양내의 세포군을 효과적으로 표적화하여 치료하지 못하고, 종양의 재발 및 전이로 연결됨에 따라 암 줄기세포(종양 줄기세포)에 대한 관심이 대두되었다. 최근 모든 종양에는 암 줄기세포의 존재가 밝혀졌고, 이들 암 줄기세포는 종양세포의 기원이 됨과 동시에 항암제등의 치료에 반응하지 않은 것으로 알려지고 있다. 암 줄기세포는 자가복제(self renewal) 및 분화(differentiation)와 성장(proliferation)을 동시에 할 수 있는 능력을 보유한 세포이다. 그런 연유로 비록 암 줄기세포가 숫자는 적어도 항암제에 의해 괴사된 암세포를 복구할 수 있는 능력을 가지고 있다. 암 줄기세포는 종양발생의 기원세포로서의 역할 뿐만 아니라 항암치료에 대한 내성을 보이는 종양의 근원세포군으로 확인되어 종양의 진단, 예후, 치료 경과 추적 및 종양 줄기세포의 타깃으로 하는 새로운 항암제 개발을 위해 종양학 연구의 핵심으로 떠오르고 있다. 대부분 종양에서 이러한 암 줄기세포는 정상줄기세포군에 비해 느리게 분열하고 휴지기 상태를 유지한다. 그러므로 빠르게 증식하는 세포를 표적으로 하는 대개의 세포독성 항암제를 사용하는 세포독성 항암요법에서 암 줄기세포가 살아남을 수 있게 된다. 최근 대장암 및 뇌종양(glioblastoma)에서 종양의 기원이 되는 암 줄기세포(CD133+)의 존재가 확인되었으며 이들을 타깃으로 하는 치료제 개발 및 전략 수립의 중요성 대두되었고 암 줄기세포는 항암제 및 방사선치료 등에 내성(저항성)을 보인다. 최초로 암 줄기세포(Cancer stem cell, CSCs)가 골수성 백혈병에서 확인되었고, 이후, 유방, 뇌, 결장, 난소, 췌장, 및 전립선 암 등 다양한 고형암의 집단에서 발견되었다. 상기 암 줄기세포는 종양-시작 세포(tumorinitiating cells)와 암 줄기 유사 세포(cancer stem-like cell)로 명명될 수 있다. 또한 유방암을 포함한 다양한 암 유형이 종양의 소집단인, 암 줄기세포(CSCs)로부터 유래되는 것으로 나타났다. 이러한 집단은 자가 재생(self-renewal) 및 분화를 통해 종양 부피에 변화를 유발하는 것으로 알려져 있다. Shh(Sonic hedgehog), Stat3, NF-κB, Wnt/β-catenin, TGF-β 및 Notch 신호 전달 경로는 CSCs의 자가 재생에 결정적인 것으로 알려져 있다.암 줄기세포는 화학 요법과 방사선 치료에 대한 약제 내성 및 방사선 내성을 가지고, 암의 재발과 전이를 유발한다. 따라서 암 줄기세포에 대한 표적 치료는 암 치료에 필수적이다. 암 줄기세포는 Oct4, Sox2, Nanog, 및 알데히드 탈수소효소-1(ALDH-1)을 포함하는 특정 단백질을 발현하는 것으로 알려져 있다. 상기 ALDH는 유전 독성의 알데히드를 산화하는 효소이며, 이의 효소 활성은 백혈병, 두경부, 방광, 뼈, 결장, 간, 폐, 췌장, 전립선, 갑상선 및 자궁경부암의 CSC 마커로 널리 사용되고 있다. ALDH는 암 줄기세포의 치료표적으로 알려져 있다.
유방암은 여성에서 흔한 암이며, 여성 암 환자에서 주요 사망의 원인으로 알려져 있다(al A, Bray F,Center MM, Ferlay J, Ward E and Forman D. Globalcancer statistics. CA Cancer J Clin. 2011; 61(2):69-90). 조기 유방암에 폴리항암화학요법(polychemotherapy), 타목시펜과 함께 광범위한 유방 X 선 촬영 및 보조 요법이 유방암의 사망률을 줄였으나, 유방암은 여전히 재발과 전이로 인해 가장 위험한 질병으로 알려져 있다. 임상 표본에서 CD44high/CD24low를 발현하는 유방암 집단이 종양을 형성하는 능력이 뛰어난 것으로 알려져 있으며, 상기 유방암 줄기세포는 CD44high/CD24low, ESA +(상피 특이 항원)과 ALDH1 같은 바이오 마커의 발현에 의해 확인할 수 있다고 알려져 있다(Al-Hajj M, Wicha MS, Benito-Hernandez A, Morrison SJ and Clarke MF. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(7):3983-3988). 항암 화학 요법은 CD44high/CD24low를 발현하는 암세포의 비율과 맘모스피어 형성을 증가시키는 것으로 알려져 있다. IL-6/JAK1/2/STAT3(Signal transducers and activators of transcription 3) 신호전달 경로가 비암 줄기세포(NSCCs)의 암 줄기세포(CSCs)로의 전환에 중요한 것으로 알려져 있으며, STAT3 신호 전달경로를 차단하면 CD44high/CD24low-줄기 세포 유사(stem cell-like) 유방암 세포의 성장을 억제하는 것이 보고된 바 있다.
한편, 인간의 유방 줄기세포에 부유배양으로 기층이 없는 조건을 인공적으로 만들면 줄기세포의 성질을 가지는 세포들은 서로 부착되어 구형의 세포 덩어리를 만느는 개념을 적용한 것이 "맘모스피어(mammosphere)"이다. 맘모스피어에는 일반 인간 유방 세포보다 8배 많은 전구 세포들이 존재하며 지속적으로 계대 배양이 가능하고, 여러 번의 계대 배양 후에는 100%의 세포가 모두 bi-potent 전구체로 자라는 특징이 있다. 맘모스피어는 성인 유방 세포인 유선 상피세포(mammary gland epitherlial cell), 관 상피세포(ductal epithelial cell), 엘비올라 상피세포(alveolar epitherlial cell) 들로 모두 분화가 가능하며, 마트리겔(Matrigel)내에서 삼차원 구조를 이루면서 복잡한 기능성 유방 구조물을 형성하는 것이 관찰된다. 맘모스피어는 줄기세포의 가장 특징 중의 하나인 자가 증식을 할 수 있는 성질이 있어서 하나의 맘모스피어에서 여러개의 맘모스피어 또는 유방줄기세포를 다량으로 얻을 수 있다. 또한 조혈모 세포, 신경 줄기세포, 배아 줄기세포 등과 비교하여 많은 발현 유전자가 중복되는 것이 확인되므로, 맘모스피어가 실제적인 유방 줄기세포인 것으로 보고되었다. 이러한, 암 줄기세포의 자가 재생 능력의 표준 분석 방법은 in vivo에서의 이식(transplantation) 및 in vitro에서의 맘모스피어 형성 분석을 분석하는 것이다.
대한민국 등록특허 제10-1951108호
본 발명의 목적은 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 투여하는 단계;를 포함하는 MDA-MB-453 또는 MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어의 증식을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 투여하는 단계;를 포함하는 MDA-MB-453 또는 MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어의 증식을 억제하는 방법을 제공한다.
이어서, 본 발명은5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 제주쑥 추출물 및 이의 분획물에서 분리한 5-데스메틸시넨세틴은 암세포의 증식과 종양 형성 및 전이능을 억제하며, 암 줄기세포의 형성 및 성장을 억제하여 이를 사멸시키는 효과가 있으므로, 이를 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물로 유용하게 활용할 수 있다.
도 1은 맘모스피어 형성 분석을 이용하여 쑥 유래 유방암 줄기세포 억제제를 분리한 도이다:
A: 쑥으로부터 맘모스피어 형성 억제제를 분리하는 과정;
B: 맘모스피어 형성에 대한 쑥 추출물의 억제 효과(scale bar = 100 μ m); 및
C: 쑥 추출물의 정제된 시료의 HPLC 분석 결과.
도 2는 쑥 추출물로부터 분리 및 정제된 CSC 억제 화합물 5-데스메틸시넨세틴의 분자적 구조를 나타낸 도이다.
도 3은 5-데스메틸시넨세틴이 세포 증식 및 맘모스피어 형성에 미치는 영향을 확인한 도이다:
A: 5-데스메틸시넨세틴의 MDA-MB-231 세포에 대한 항증식능;
B: 5-데스메틸시넨세틴의 MCF-7 세포에 대한 항증식능;
C: MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어 형성에 대한 5-데스메틸시넨세틴의 억제 효과; 및
D: MCF-7 세포 유래 맘모스피어 형성에 대한 5-데스메틸시넨세틴의 억제 효과.
도 4는 5-데스메틸시넨세틴의 CD44+/CD24- 및 ALDH1+는 유방암 세포 집단 감소 효과를 확인한 도이다:
A: 5-데스메틸시넨세틴 처리 유무에 따른 MDA-MB-231 세포의 CD44+/CD24- 세포 집단; 및
B: 5-데스메틸시넨세틴 처리 유무에 따른 MDA-MB-231 세포의 ALDH1+ 세포 집단.
도 5는 5-데스메틸시넨세틴의 맘모스피어 사멸 유도 및 성장 억제 효과를 확인한 도이다:
A: FACS를 이용한 맘모스피어의 세포사멸 분석;
B: 5-데스메틸시넨세틴의 맘모스피어 성장 억제; 및
C: RT-qPCR을 이용한 맘모스피어에서 암 줄기세포 특이적 마커 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44의 mRNA 발현 분석.
도 6은 5-데스메틸시넨세틴이 Stat3 신호 전달 경로에 미치는 영향을 확인한 도이다:
A: MDA-MB-231 유래 맘모스피어의 총 단백질에서 p-Stat3, Stat3 및 NF-κB p65의 단백질 발현 수준;
B: MDA-MB-231 유래 맘모스피어의 핵 단백질에서 p-Stat3, Stat3 및 NF-κB p65의 단백질 발현 수준;
C: MDA-MB-231 유래 맘모스피어에서 핵 단백질의 전기영동 이동 분석(Electrophoresis mobility shift assays, EMSA):
레인 1: Stat3 프로브;
레인 2: 5-데스메틸시넨세틴 처리되지 않은 핵 추출물 및 Stat3 프로브;
레인 3: 5-데스메틸시넨세틴(20 μ M) 처리된 핵 단백질 및 Stat3 프로브;
레인 4: 5-데스메틸시넨세틴 처리되지 않고, 자가-경쟁자(200X) 올리고와 인큐베이션된 핵 단백질; 및
레인 5: 5-데스메틸시넨세틴 처리되지 않고, 돌연변이-Stat3(200X) 프로브랑 인큐베이션된 핵 추출물.
도 7은 5-데스메틸시넨세틴의 IL-6 및 IL-8의 분비 및 전사 수준 조절 효과를 확인한 도이다:
A: CBA 인간 염증성 사이토카인 분석 키트를 이용한 맘모스피어의 사이토카인 분비 분석; 및
B: IL-6 및 IL-8의 전사 수준.
도 8은 5-데스메틸시넨세틴의 Stat3을 통한 YAP1 경로 억제 효과를 확인한 도이다:
A: 맘모스피어의 전체 및 핵 단백질에서의 YAP1 단백질 발현 수준;
B: Stat3 낙다운된 MDA-MB-231 세포에서 Stat3 및 YAP1의 발현 수준;
C: YAP1 낙다운된 MDA-MB-231 세포에서 YAP1 발현 수준 및 맘모스피어 형성; 및
D: YAP1 낙다운된 MDA-MB-231 세포에서 RT-qPCR를 이용한 암 줄기세포 마커 발현 분석.
도 9는 5-데스메틸시넨세틴의 Stat3-IL6 신호전달 및 Stat3-YAP1 신호전달을 통한 유방암 줄기세포(breast cancer stem cells, BCSCs) 형성 억제 모식도를 나타낸 도이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
일 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)(C19H18O7; 358) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물에서, 상기 조성물은 에스트로겐 수용체 음성(estrogen receptor negative: ER-), 프로게스테론 수용체 음성(progesterone receptor negative: PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 양성(HER2(human epidermal growth factor receptor-2)-positive: HER2+)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군; 또는 에스트로겐 수용체 음성(ER-), 프로게스테론 수용체 음성(PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 음성(HER2-negative: HER2-)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군에 투여하는 것인 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 전이성 유방암 줄기세포의 형성 또는 성장을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 CD44+/CD24- 또는 ALDH1+을 발현하는 암 세포의 성장을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 전이성 유방암 유래의 맘모스피어(mammosphere)의 형성 또는 성장을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 전이성 유방암은 유방암 줄기세포(CSCs) 마커인 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 마커를 발현하는 암인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 유방암 줄기세포(CSCs) 마커인 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 맘모스피어의 핵에서 p-Stat3 및 Stat3의 발현을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 암세포 증식을 억제하고, CD44+/CD24- 또는 ALDH1+ 암세포 형성을 억제하여 종양 형성 및 전이능을 억제하며, 암 줄기세포를 사멸시키고, 암 줄기세포의 성장을 억제하며, Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44의 전사를 억제하고, Stat3의 발현 및 단백질 활성을 억제하며, IL-6 및 IL-8의 분비 및 전사를 억제하고, YAP1의 핵 이동을 억제할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 조성물은 5-데스메틸시넨세틴을 0.01 내지 1,000 μM의 농도로 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 전이성 유방암의 발생, 확산 및 재발을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 본 발명의 조성물의 투여로 전이성 유방암의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 본원의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.
본 발명에서 유효성분과 결합하여 사용된 "치료학적으로 유효한 양"이란 용어는 암을 예방 또는 치료하는데 유효한 양을 의미하며, 본 발명의 조성물의 치료적으로 유효한 양은 여러 요소, 예를 들면 투여방법, 목적부위, 환자의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 인체에 사용 시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야 한다. 동물실험을 통해 결정한 유효량으로부터 인간에 사용되는 양을 추정하는 것도 가능하다. 유효한 양의 결정시 고려할 이러한 사항은, 예를 들면 Hardman and Limbird, eds., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed.(2001), Pergamon Press; 및 E.W. Martin ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed.(1990), Mack Publishing Co.에 기술되어있다.
본 발명의 약학 조성물에는 5-데스메틸시넨세틴 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 면역성을 증가시킬 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 5-데스메틸시넨세틴을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 유효성분의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.
상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/ 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계;를 포함하는 MDA-MB-453 또는 MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어의 증식을 억제하는 방법을 제공한다.
[화학식 1]
일 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물에서, 상기 조성물은 에스트로겐 수용체 음성(estrogen receptor negative: ER-), 프로게스테론 수용체 음성(progesterone receptor negative: PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 양성(HER2(human epidermal growth factor receptor-2)-positive: HER2+)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군; 또는 에스트로겐 수용체 음성(ER-), 프로게스테론 수용체 음성(PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 음성(HER2-negative: HER2-)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군에 투여하는 것인 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
본 발명의 식품 조성물은 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 액상제제, 음료 등 다양한 형태로 제제화되어 식품에 첨가할 수 있다. 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 5-데스메틸시넨세틴을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품 및 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 5-데스메틸시넨세틴을 함유하는 건강식품 및 건강기능식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 5-데스메틸시넨세틴의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 및 건강기능식품 중의 상기 조성물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 유지를 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강식품 및 건강기능식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 5-데스메틸시넨세틴을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트라이톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강기능성 식품 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 5-데스메틸시넨세틴을 함유하는 건강식품 및 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품 및 건강기능식품 조성물은 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 5-데스메틸시넨세틴을 함유하는 건강식품 및 건강기능식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 제주쑥 추출물 제조 및 유방암 줄기세포(breast cancer stem cells, BCSCs) 억제 물질 분리
1-1. 제주쑥( Artemisia princeps ) 추출물 제조
제주쑥(Artemisia princeps)(Seogwipo, Jeju, Korea)을 물로 세척하여 동결건조하고 분쇄한 뒤(1200 g), 100% 메탄올(MeOH 36 L)로 제주쑥 추출물을 제조하였다(3L 플라스크 24개에 각각 쑥 50g 및 메탄올 1.5L).
1-2. 유방암 줄기세포 형성 억제 유효 화합물 분리
상기 실시예 1-1에서 제조한 제주쑥 메탄올 추출물을 6L로 농축한 뒤, 동일한 부피의 물(v/v = 1:1)을 첨가하여 혼합하고, 혼합물 중 메탄올을 50 ℃에서 증발시켰다. 이 후, 동일한 부피의 에틸 아세테이트(EA, v/v = 1:1)로 추출하고, EA 부분을 모아 농축하고, EA-농축된 부분을 실리콘 디옥사이드 젤 컬럼(3 × 35 cm, 40-63 마이크론 입자 크기) 상에서 분리하고 클로로폼-메탄올 혼합물(CHCl3:MeOH, 10:1)로 추출하였다. 추출한 5개의 분획을 색상에 따라 나누고 유방암 줄기세포인 맘모스피어(mammosphere) 형성 억제 정도를 평가하여 제주쑥의 유방암 줄기세포 형성 억제제를 스크리닝하였다. 이를 위해, 유방암 세포주 MDA-MB-231(KCLB, Seoul, Korea)를 6-웰 플레이트에서 2 × 104세포/웰로 분주하고 하이드로코르티손 및 헤파린을 포함하는 MammoCult™culture medium(StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada)로 7일 동안 배양하고 NICE(NIST's integrated colony enumerator) 프로그램을 이용하여 맘모스피어 형성 효율(MFE %)로 맘모스피어 형성 정도를 분석하였다. 그 결과, 제주쑥 추출물이 맘모스피어 형성을 억제하는 것으로 나타나(도 1B), 이를 Sephadex LH-20 gel column(2.5 × 30 cm, 25-100 micron article size)로 정제하고 5개의 분획으로 나누었다. 상기 5개 분획을 수집하여 맘모스피어 형성 분석을 수행하여 평가하고 맘모스피어 형성을 억제하는 것으로 나타난 5번째 분획을 prep-TLC(preparatory TLC plate)(glass plate; 20 × 20 cm)에 로딩하고 TLC glass chamber(CHCl3:MeOH, 30:1)에서 디벨롭하였다. 그 후, 주요 밴드를 실리콘 디옥사이드 젤 플레이트에서 분리하고, 분획의 맘모스피어 형성 억제 효과를 확인하였다. ODS column(10 × 250-mm, flow rate: 2 ml/min, mobile phase: acetonitrile-water)이 설치된 HPLC 기기에서 하부 분획(lower fraction)을 분석하여 정제된 화합물을 확인하였다(도 1C). 주요 피크를 수집하고 맘모스피어 형성 분석으로 평가하고, 주요 피크를 각각 수집하여 구조 분석을 수행하였다.
1-3. 화합물 구조 분석
상기 실시예 1-2에서 정제한 화합물을 NMR 및 질량분석(ESI-Mass)을 이용하여 확인하였다. 그 결과, ESI-mass 측정에 의해 분자량은 358로 확인되었으며, 구조는 NMR을 이용하여 확인함으로써, 제주쑥 메탄올 추출물로부터 분리한 유방암 줄기세포 형성 억제 활성 화합물을 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin)(C19H18O7; 358)(화학식 1)으로 확인하였다(도 2).
실시예 2. 5-데스메틸시넨세틴의 암 줄기세포 형성 억제 효과 확인
2-1. 암 증식 억제 효과 확인
상기 실시예에서 제주쑥 메탄올 추출물로부터 분리하여 유방암 줄기세포 형성 억제 활성 유효 화합물로서 특정한 화합물 5-데스메틸시넨세틴의 암 증식 억제 효과를 확인하기 위해, 유방암세포주 MDA-MB-453, MDA-MB-231 및 MCF-7에 각각 농도를 증가시키면서 처리하여 항증식 효과를 확인하였다. 구체적으로, 유방암 세포주를 96-웰 플레이트에 각각 1 × 106(MDA-MB-231) 및 1.5 × 106(MCF-7)로 분주하여 24시간 동안 배양한 뒤, 5-데스메틸시넨세틴을 각각 0, 5, 10, 20, 30, 40 및 50 μM로 처리하여 하루 동안 인큐베이션하였다. 그 후, EZ-Cytox kit(DoGenBio, Seoul, Korea)를 이용하여 암세포주의 증식 정도를 측정하였다.
그 결과, 유방암세포주 MDA-MB-453, MDA-MB-231 및 MCF-7 모두에서 50 μ M 이하 농도의 5-데스메틸시넨세틴에서는 세포 증식 억제 효과가 나타나지 않았다(도 3A 내지 C).
2-2. 암 줄기세포 형성 억제 효과 확인
상기 실시예 1-2의 방법으로 인간 유방암 세포주 MDA-MB-453, MDA-MB-231 및 MCF-7로부터 형성된 1차 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴을 농도별로 처리하고 7일 후 맘모스피어를 스캔하여 맘모스피어 형성에 대한 5-데스메틸시넨세틴의 효과를 확인한 결과, 5-데스메틸시넨세틴이 MDA-MB-453, MDA-MB-231 및 MCF-7 유래 맘모스피어의 수 및 크기를 모두 현저히 감소시키는 것으로 나타났다(도 3D 내지 F). 이를 통해, 5-데스메틸시넨세틴이 유방암 세포의 증식은 억제하지 않는 낮은 농도(50 μ M 이하)에서도 유방암 줄기세포의 형성은 현저하게 억제하는 것을 확인할 수 있다.
실시예 3. 5-데스메틸시넨세틴의 CD44 + /CD24 - 및 ALDH1 + 암세포 집단 억제 효과 확인
BCSCs의 대표적 마커인 CD44+/CD24- 및 ALDH(aldehyde dehydrogenase)1+는 유방암에서 줄기세포 유사 활성과 관련되어 있으며, CD44+/CD24- 및 ALDH1+ MDA-MB-231 세포는 CD44-/CD24+ 및 ALDH1- MDA-MB-231 세포에 비해 높은 종양 형성 및 전이능을 나타내므로, 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의한 상기 마커 발현 집단의 변화를 확인하였다. 구체적으로, 5-데스메틸시넨세틴을 MDA-MB-231 세포주에 24시간 동안 처리한 후 단일세포들로 분리한 1 × 106개의 세포를 항-인간 CD44 항체(FITC-컨쥬게이션된) 및 항-인간 CD24 항체(PE-컨쥬게이션된)(BD)와 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS로 세척한 뒤, CD44+/CD24- 세포들을 유세포분석기(Accuri C6, BD, San Jose, CA, USA)를 이용하여 검사하였다. 또한, MDA-MB-231 세포주에 5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 24시간 동안 처리하고 Alde-fluor™assay kit(StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada)를 사용하여 ALDH 분석 버퍼와 37℃에서 20분 동안 반응시켰다. ALDH-양성 세포는 Accuri C6 cytometer(BD, San Jose, CA, USA) 로 시험되었다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의해 MDA-MB-231의 CD44+/CD24- 하위 집단이 94.1%에서 81.0%로 감소하였으며(도 4A), ALDH1+ 하위 집단이 17.5%에서 8.8%로 감소하였다(도 4B). 따라서, 5-데스메틸시넨세틴이 CD44+/CD24- 및 ALDH1+인 암세포를 현저히 감소시킴으로써 종양 형성 및 전이를 억제하는 것을 확인하였다.
실시예 4. 5-데스메틸시넨세틴의 암 줄기세포 성장 억제 및 사멸 유도 효과 확인
4-1. 5-데스메틸시넨세틴의 암 줄기세포 사멸 효과
5-데스메틸시넨세틴이 유방암 줄기세포의 세포자멸사를 유도하는지 확인하기 위해, MDA-MB-231 세포 유래 5일 배양된 1차 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 처리하고, 맘모스피어를 트립신(0.05% Trypsin-EDTA 1×, Gibco, Thermo Fisher Scientific, CA, USA)을 처리하여 단일세포로 분리한 1 × 106개의 세포를 결합 버퍼의 Annexin V(FITC) 및 PI와 암조건의 상온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 그 후 세포를 유세포 분석기로 분석하였다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴이 유방암 줄기세포의 세포사멸을 유도하는 것으로 나타났다(도 5A).
4-2. 5-데스메틸시넨세틴의 암 줄기세포 성장 억제 효과
5-데스메틸시넨세틴이 유방암 줄기세포의 성장을 억제하는지 확인하기 위해, 5-데스메틸시넨세틴 처리 후 맘모스피어의 성장 정도와 암 줄기세포 특이적 마커 유전자의 mRNA 수준 변화를 확인하였다. 구체적으로, MDA-MB-231 유래 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 처리하고, 맘모스피어를 단일세포로 분리하여 6-웰 플레이트에 분주하고 3일 동안 세포수를 계수하였다. 또한, 암 줄기세포 특이적 마커인 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44의 전사 수준을 확인하기 위해, MDA-MB-231 세포 또는 맘모스피어로부터 총 RNA를 추출한 뒤, one-step RT-qPCR kit(Enzynomics, Daejeon, Korea)를 이용하여 실시간 정량적 PCR을 수행하였다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴이 맘모스피어의 성장을 억제하는 것으로 나타났으며(도 5B), 유방암 줄기세포에서 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44의 전사 수준을 감소시키는 것으로 나타났다(도 5C).
실시예 5. 5-데스메틸시넨세틴의 암 줄기세포 억제 기전 확인
5-1. 5-데스메틸시넨세틴의 p-Stat3 및 Stat3 억제
인간 종양에서 CD44+/CD24- 줄기 세포-유사 유방암 세포의 성장을 위해서는 Stat3의 활성화가 필요하므로, 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴을 처리한 뒤 이의 전체 추출물과 핵 추출물에서 Stat3, p-Stat3 및 Stat3의 보조인자인 NFκp65의 발현을 웨스턴 블롯 분석으로 확인하였다. 구체적으로, MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 48시간 동안 처리한 뒤 이의 총 단백질 및 핵 단백질을 추출하고, SDS-PAGE(8% 또는 10%)로 전기영동한 뒤 PVDF(Millipore, Billerica, MA, USA)에 트랜스퍼한 뒤, Odyssey 블로킹 버퍼(927-70001, LI-COR, Lincoln, NB, USA)를 함유하는 PBST(phosphate buffered saline with Tween 20, 0.1%, v/v)로 상온에서 60분 동안 블로킹하였다. 그 후, 멤브레인을 p-Stat3(#9145s, Cell Signaling Technology, Denver, CO, USA); Stat3 및 sc-482; NFκp65 및 sc-8008; YAP1(FNab09559, FineTest, Wuhan, China); Lamin B, sc-6216, βtin, 및 sc-47778(Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA)에 대한 일차 항체를 함유하는 블로킹 버퍼에서 4℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션하였다. 일차 항체 용액을 제거한 뒤, PBST로 세적한 멤브레인을 항-래빗 이차 항체(IRDye 800CW-conjugated) 및 항-마우스 이차 항체(IRDye 680RD-conjugated)와 인큐베이션하였다. 그 후, 밴드 신호를 ODYSSEY CLx(LI-COR, Lincoln, NB, USA)를 이용하여 검출하였다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴의 처리에 의해 맘모스피어에서 p-Stat3 및 Stat3의 총 수준이 감소된 것으로 나타났으며, 5-데스메틸시넨세틴의 처리에 의해 맘모스피어의 핵에서 p-Stat3 및 Stat3의 단백질 수준은 현저히 감소하였으나, 보조인자인 NF-κp65의 발현은 감소하지 않은 것으로 나타났다(도 6A 및 B).
5-2. 5-데스메틸시넨세틴의 Stat3의 DNA 결합 능력
5-데스메틸시넨세틴의 처리에 의한 맘모스피어에서 핵 Stat3의 전사인자로서의 DNA-결합능을 EMSA(Electrophoretic mobility shift assay)를 이용하여 확인하였다. 구체적으로, MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어에 5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 48시간 동안 처리한 뒤 이의 핵 추출물을 Mol. Pharmacol. 67 (5) (2005) 1674-1683.에 기재된 방법으로 추출하고, 핵 추출물을 IRDye-표지된 Stat3-특이적 프로브와 인큐베이션하고, 야생형 Stat3 올리고뉴클레오타이드(양성 대조군) 또는 돌연변이 Stat3 올리고뉴클레오타이드(음성 대조군)와 상온에서 10분 동안 각각 인큐베이션하였다. 그 후, Stat3 결합에 대한 EMSA를 IRDye 700-labeled special Stat3 oligonucleotide(LI-COR)를 이용하여 상온에서 20분 동안 수행하였다. 시료들을 로딩 다이와 섞고 6% native PAGE 젤에서 전기영동한 뒤 ODYSSEY CLx(LI-COR)를 이용하여 EMSA 데이터를 얻었다.
그 결과, 핵 추출물에서 IRDye-표지된 프로브가 Stat3 단백질에 결합하는 능력이 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의해 현저히 감소된 것으로 나타났다(도 6C). 이를 통해, 맘모스피어에서 핵 Stat3가 특정 올리고뉴클레오타이드에 결합하는 능력을 5-데스메틸시넨세틴이 억제하는 것을 확인하였다 .
5-3. IL-6R-Stat3-miR-34a 피드백 루프 억제
암의 EMT, 침윤 및 전이를 촉진하는 것으로 알려진 IL-6R-Stat3-miR-34a 피드백 루프 및 IL-8/Stat3 피드백 루프에 대한 5-데스메틸시넨세틴의 영향을 확인하기 위해, 5-데스메틸시넨세틴(20 μM) 또는 DMSO을 48시간 동안 처리한 MDA-MB-231 유래 맘모스피어의 배양 배지에 분비된 인간 IL-6 및 IL-8의 수준을 BD™CBA(Cytometric Bead array) 인간 염증성 사이토카인 분석 키트를 이용하여 유세포 분석기(BD, Accuri C6, San Jose, CA, USA)에서 확인하였다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의해 맘모스피어에서 분비된 IL-6 및 IL-8의 농도가 현저히 감소된 것으로 나타났다(도 7A).
5-4. IL-6 및 IL-8의 전사 수준 감소
5-데스메틸시넨세틴(20 μM)을 처리한 후 MDA-MB-231 유래 맘모스피어에서 IL-6 및 IL-8의 전사 수준(mRNA 수준)을 실시간 정량적 PCR로 확인하였다. 그 결과, IL-6 및 IL-8의 전사 수준이 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의해 현저히 감소되는 것으로 나타났다(도 7B).
5-5. Stat3-YAP1 경로 확인
Hippo 경로에 관여하는 전사 보조 활성화제인 YAP1(yes-associated protein 1)이 Stat3와 상호작용하여 증식, 이동 및 튜브 형성과 같은 여러 세포 내 이벤트를 조절하는 것으로 보고된 바 있기 때문에, Stat3를 낙다운한 유방암세포주에서 5-데스메틸시넨세틴에 의한 Stat3-YAP1 경로를 확인하였다. 구체적으로, Lipofectamine 3000(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 이용하여 MDA-MB-231 세포주 또는 이의 맘모스피어에 인간 Stat3-특이적 siRNAs(Bioneer, Daejeon, Korea) 또는 인간 YAP-특이적 siRNAs(Bioneer, Daejeon, Korea)로 트랜스펙션하고, 이에 따른 YAP1의 핵 이동, Stat3 및 YAP1의 발현 수준, 맘모스피어 형성 정도, 및 암 줄기세포 마커의 발현 수준을 확인하고, 이들의 5-데스메틸시넨세틴 처리에 의한 변화를 확인하였다.
그 결과, 5-데스메틸시넨세틴이 맘모스피어에서 YAP1의 핵으로의 이동을 억제하였다(도 8A). 또한, MDA-MB-231 세포에서 Stat3의 낙다운에 의해 YAP1 단백질 발현 수준이 감소하였다(도 8B). 아울러, YAP1의 낙다운은 맘모스피어 형성을 억제하고, 암 줄기세포 특이적 마커인 Sox2 및 Oct4의 전사 수준을 감소시켰다(도 8C 및 D).
이를 통해, 5-데스메틸시넨세틴이 Stat3 억제를 통해 YAP1의 핵으로의 이동을 억제하는 것으로 유추할 수 있다.

Claims (9)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물에서,
    상기 조성물은 에스트로겐 수용체 음성(estrogen receptor negative: ER-), 프로게스테론 수용체 음성(progesterone receptor negative: PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 양성(HER2(human epidermal growth factor receptor-2)-positive: HER2+)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군; 또는 에스트로겐 수용체 음성(ER-), 프로게스테론 수용체 음성(PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 음성(HER2-negative: HER2-)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군에 투여하는 것인, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 1]
    .
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 전이성 유방암 줄기세포의 형성 또는 성장을 억제하는 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 CD44+/CD24- 또는 ALDH1+을 발현하는 암 세포의 성장을 억제하는 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 전이성 유방암 유래의 맘모스피어(mammosphere)의 형성 또는 성장을 억제하는 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 전이성 유방암은 유방암 줄기세포(CSCs) 마커인 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 마커를 발현하는 암인 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 유방암 줄기세포(CSCs) 마커인 Oct4, c-Myc, Nanog 및 CD44로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 마커의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 맘모스피어의 핵에서 p-Stat3 및 Stat3의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 전이성 유방암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계;를 포함하는, MDA-MB-453 또는 MDA-MB-231 세포 유래 맘모스피어의 증식을 억제하는 방법:
    [화학식 1]
    .
  9. 하기 화학식 1로 표시되는 5-데스메틸시넨세틴(5-desmethylsinensetin) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물에서,
    상기 조성물은 에스트로겐 수용체 음성(estrogen receptor negative: ER-), 프로게스테론 수용체 음성(progesterone receptor negative: PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 양성(HER2(human epidermal growth factor receptor-2)-positive: HER2+)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군; 또는 에스트로겐 수용체 음성(ER-), 프로게스테론 수용체 음성(PR-) 및 상피세포 성장인자 수용체 2 음성(HER2-negative: HER2-)의 유전형을 갖는 전이성 유방암 환자군에 투여하는 것인, 전이성 유방암 줄기세포 성장 억제용 식품 조성물:
    [화학식 1]
    .
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