KR20230042724A - 항 IL13Rα2 항체 - Google Patents

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KR20230042724A
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파트리치우스 헨드리쿠스 코르넬리스 반 버켈
프랑수아 베르텔리
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에이디씨 테라퓨틱스 에스에이
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Abstract

본 발명은 인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 및 생산을 위한 관련 용도 및 방법에 관한 것이다.

Description

항 IL13Rα2 항체
이전 출원
이 출원은 2020년 7월 31일에 출원된 영국 출원 번호 GB 2011993.9의 우선권을 주장한다.
분야
본 발명은 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다. 또한, 항-IL13Rα2 항체의 생산 및 사용 방법이 개시되어 있다.
IL13Rα2
인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL-13Rα2; 분화 클러스터 213A2, CD213A2라고도 함)는 IL-4Rα와 함께 인터루킨-13 유형 I 사이토카인 수용체 복합체의 서브유닛인 IL-13Rα1과 밀접하게 관련된 막 결합 단백질이다.
IL13Rα1과 IL-4Rα는 함께 이량체를 형성한다. IL-13은 IL-13Rα1 사슬에 결합하는 반면 IL-4Rα는 이 상호작용을 안정화한다. 이 IL-13 수용체는 또한 IL-4 신호를 유발할 수 있다. 두 경우 모두 이것은 JAK(Janus kinase)/STAT(Signal Transducer and Activator of Transcription) 경로의 활성화를 통해 발생하여 STAT6의 인산화를 초래한다. 인산화된 STAT6는 이합체화되어 eotaxin과 같은 많은 유전자를 활성화하는 전사 인자로 작용한다. (Murata T 외, Int J Mol Med. 1998년 3월;1(3):551-7; Chomarat P 외, Int Rev 면역. 1998;17(1-4):1-52).
IL-13Rα2는 IL13RA2 유전자에 의해 인코딩된다. IL-13Rα2는 매우 높은 친화도로 IL-13에 결합하지만(따라서 이를 격리할 수 있음) IL-4 결합은 허용하지 않는다. 이는 IL-13 및 IL-4 둘 다의 음성 조절자로 작용하지만, 이것의 메커니즘은 여전히 미정이다 (Seyfizadeh N 외, Acta Microbiol Immunol Hung. 2015 Dec;62(4):341-78).
IL-13Rα2는 췌장암(Fujisawa 외, Cancer Res. 2009 Nov 15;69(22):8678-85), 난소암(Kioi 외, Cancer. 2006 Sep 15; 107(6):1407-18), 흑색종(Okamoto 외, Sci Rep. 2019 Feb 4;9(1):1281) 및 악성 신경아교종(Joshi 외, Cancer Res. 2000 Mar 1;60(5):1168-72)을 비롯한 다양한 암에서 과발현되는 것으로 밝혀졌다.
항-IL13Rα2 항체
인간 재조합 IL13Rα2 융합 단백질을 사용한 암컷 BALB/c 마우스의 면역화에 의한 뮤린 항-IL13Rα2 모노클로날 항체의 생성은 문헌[Balyasnikova 외(J Biol Chem. 2012 Aug 31; 287(36): 30215-30227)]에 기재되어 있다. 이 간행물에서 생성되고 특성화된 뮤린 항-IL13Rα2 항체 중에는 "클론 47"로 지정된 항체가 있다.
항체-약물 접합체
항체 요법은 암, 면역학적 및 혈관신생 장애가 있는 환자의 표적 치료를 위해 확립되었다(Carter, Nat Rev Immunol. 2006 May;6(5):343-57). 항체-약물 접합체(ADC), 즉 면역접합체는 암 치료에서 세포독성제 또는 세포증식억제제, 즉 종양 세포를 죽이거나 억제하는 약물의 국소 전달에 사용된다. 이들은 종양에 대한 약물 모이어티의 표적화된 전달 및 그 안에 세포내 축적을 제공하는 반면, 이러한 접합되지 않은 약물 제제의 전신 투여는 정상 세포에 허용할 수 없는 수준의 독성을 초래할 수 있다(Xie 외 (2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun 외 (2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121; Law 외 (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337; Wu 외 (2005) Nature Biotech. 23(9):1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail 외 (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Syrigos 및 Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614).
최소한의 독성으로 최대 효능을 추구한다. ADC를 설계하고 개선하기 위한 노력은 단클론 항체(mAb)의 선택성과 약물 작용 메커니즘, 약물 연결, 약물/항체 비율(로딩) 및 약물 방출 특성에 초점을 맞췄다(Junutula 외, 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 외 (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina 외 (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson 외 (2006) Cancer Res. 66(8):1-8; Sanderson 외 (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey 외 (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett 외 (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070). 약물 모이어티는 튜불린 결합, DNA 결합, 프로테아좀 및/또는 토포이소머라제 억제를 포함하는 메커니즘에 의해 세포 독성 및 세포 증식 억제 효과를 부여할 수 있다. 일부 세포독성 약물은 큰 항체 또는 단백질 수용체 리간드에 접합될 때 비활성이거나 덜 활성인 경향이 있다.
인간 암에서 IL-13Rα2의 역할을 고려할 때, IL-13Rα2에 특이적으로 결합하는 유리한 특성을 갖는 항체를 확인하는 것이 바람직하다. 본 발명은 그러한 항체에 관한 것이다.
본 발명은 문헌[Balyasnikova 외(J Biol Chem. 2012 Aug 31; 287(36): 30215-30227)]에 기재된 뮤린 항-IL13Rα2 항체 "클론 47" 의 인간화로부터 유도된 인간화 항-IL13Rα2 항체를 제공한다.
뮤린 "클론 47"에서 시작하여, 본 발명자는 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 키메라 항체보다 인간 개체에서 더 낮은 면역원성을 갖는 항체를 생성하기 위해 다수의 인간화 중쇄(heavy chain) 및 경쇄(light chain) 서열을 생성하였다.
놀랍게도, 이들 인간화 변이체는 보다 낮은 면역원성 외에도 뮤린 클론 47 및/또는 다른 인간화 항-IL13Rα2 항체와 비교하여 다른 유리한 특성, 예를 들어 본원의 다른 곳에서 약술된 바와 같이 인간 IL13Rα2에 대한 개선된 친화성을 가질 수 있음이 밝혀졌다.
따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 인간화 항체를 제공하며, 여기서 항체는 서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 하나 이상의 인간 항체로부터 유래된 불변영역을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함한다.
일부 바람직한 구현예에서, 항체는 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iv) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(vi) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(vii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역.
일부 더 바람직한 구현예에서, 항체는 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 및
(iii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역.
일부 특히 바람직한 구현예에서, 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체 는 5×10-10 M 이하, 예를 들어 2.5×10-10 M 이하 또는 1.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합한다. 일부 실시예에서, 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 더 높은 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합한다. 일부 실시예에서, 친화도(KD)는 실시예에 기재된 바와 같은 프로토콜, 예를 들어 Biacore 분석에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체의 IL13Rα2에 대한 결합을 경쟁적으로 억제한다.
일부 실시예에서, IL13Rα2는 인간 IL13Rα2이다.
본원에 개시된 항체 중쇄 가변영역 및/또는 경쇄 가변영역의 서열은 예를 들어 인간화 항체가 IL13Rα2에 결합하는 능력을 유지하는 정도로 삽입, 치환 및/또는 결실에 의해 변형될 수 있다. 당업자는 본원에 기술되거나 당업계에 공지된 기능 분석을 수행함으로써 이러한 활성의 유지를 확인할 수 있다.
따라서, 일부 실시예에서 중쇄 가변영역은 20개 이하의 삽입, 치환 및/또는 결실을 포함하고, 15개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하의 삽입, 치환 및/또는 삭제. 일부 구현예에서 경쇄 가변영역은 20개 이하, 예컨대 15개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하의 삽입, 치환 및/또는 결실과 같다.
일부 실시양태에서 본 발명의 인간화 항체는 본원에 기재된 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체를 포함한다.
제2 측면에서 본 발명은 본 발명의 제1 측면에 따른 인간화 항체를 포함하는 항체 약물 접합체를 제공한다. 본 발명의 접합체는 약물 모이어티에 접합된, 즉 링커에 의해 공유 부착된 항체를 포함한다.
제3 측면에서, 본 발명은 제1 측면에 따른 항체 또는 제2 측면에 따른 항체 약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 치료 방법에 사용하기 위한 이러한 항체, 접합체 및 약학적 조성물, 및 치료 방법에 사용하기 위한 의약 제조에서의 이러한 항체, 접합체 및 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및 이러한 벡터를 포함하는 숙주세포 뿐만 아니라 본 발명의 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 이러한 숙주세포를 배양하는 것을 포함하는 본 발명의 항체를 생산하는 방법을 제공한다.
도 1
뮤린 "클론 47" 및 "HuCL47" 중쇄(VH) 및 경쇄(VK) 가변 도메인의 서열 비교. CDR에는 밑줄이 그어져 있다.
도 2
뮤린 클론47, 인간화 변이체 HuCL47 및 이소형 대조군 B12 항체의 비교.
도 3
인간화 변이체 HuCL47 및 이소형 대조군 B12 항체 의 ELISA 결합 비교.
본 발명의 측면 및 실시예는 이제 첨부된 도면을 참조하여 논의될 것이다. 추가 측면 및 실시예는 당업자에게 명백할 것이다. 이 텍스트에 언급된 모든 문서는 여기에 참조로 포함된다.
인간화 항체(Humanised antibodies)
본 발명은 인간화 항-IL13Rα2 항체를 제공한다.
"클론 47"은 문헌[Balyasnikova et al(J Biol Chem. 2012 Aug 31; 287(36): 30215-30227)]에 기재된 뮤린 항-IL13Rα2 항체이다. 뮤린 클론 47의 중쇄 및 경쇄 서열(각각 서열번호 1 및 서열번호 2)로부터 시작하여, 본 발명자들은 보다 낮은 항체를 생성하기 위해 다수의 인간화 중쇄 및 경쇄 서열을 생성하였다. 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 키메라 항체보다 인간 개체에서 면역원성이 더 높다.
놀랍게도, 이렇게 생성된 특정 인간화 변이체는 키메라 클론 47과 비교하여 인간 IL13Rα2에 대해 개선된 친화도를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 인간화 항체는 또한 개선된 안정성 및/또는 세포 사멸과 같은 하나 이상의 추가 유리한 특성을 보유할 수 있으며, 하기에 요약된 바와 같다.
따라서, 본 발명은 IL13Rα2에 결합하는 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 3(VHA; HuCL47 VH); 서열번호 5(VHAback); 서열번호 6(VHA1); 서열번호 7(VHA2); 및 서열번호 8(VHA3)로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 일부 바람직한 실시예에서, 항체는 서열번호 3(VHA; HuCL47 VH)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
일부 실시예에서 항체는 서열번호 4(VKA; HuCL47 VL); 서열번호 9(VKAback); 서열번호 10(VKA1); 및 서열번호 11(VKA2)로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 실시예에서, 항체는 서열번호 4(VKA; HuCL47 VL)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 구체적으로 고려되는 실시예는 다음을 포함할 수 있는 항체를 포함한다:
i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
viii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ix) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
x) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xi) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiii) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvi) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xviii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xix) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 및
xx) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역.
본 발명의 일부 바람직한 구체적으로 고려되는 실시예는 하기를 포함하는 항체를 포함한다:
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA; HuCL47 VH) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL) ;
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA; HuCL47 VH) 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA1);
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA; HuCL47 VH) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA1);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2); 및
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2).
본 발명의 다른 바람직한 실시예는 하기를 포함하는 항체를 포함한다:
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA; HuCL47 VH) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL); 및
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2).
본 발명의 일부 특히 바람직한 실시예에서 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함한다. 이러한 항체는 본 명세서에서 "huCL47"로 지칭된다.
본 발명의 항체는 인간화 또는 완전 인간 항체이거나, 인간화 또는 완전 인간인 가변 도메인을 포함한다. 본 발명의 항체는 분리된 인간화 항체 또는 완전 인간 항체일 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 인간 항체로부터 유래된 항체 불변영역을 추가로 포함할 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명은 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15에 나타낸 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄; 및/또는 (i) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18에 나타낸 CDR; 및 (ii) 위치 30(서열번호 3을 참조하여 넘버링)에 있는 세린 잔기를 포함하는 경쇄를 포함하는 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체를 제공하고, 여기서 적어도 가변영역은 완전한 인간이다. 일 실시예에서 항체는 불변영역을 포함하는 완전한 인간 항체이다. 관련 실시예에서, 본 발명은 상기 항체 및 피롤로벤조디아제핀 이합체를 포함하는 항체 접합체를 제공한다. 일 실시예에서 경쇄는 인간 카파(human kappa) 경쇄이다.
항원 결합(Antigen binding)
본원에 기재된 항체는 IL13Rα2에 특이적으로 결합하는 항체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "IL13Rα2에 결합하다" 및 "IL13Rα2에 결합한다"는 항체가 소 혈청 알부민(BSA, Genbank accession no. CAA76847, version no. CAA76847.1 GI:3336842, record update date: Jan 7, 2011 02:30 PM)과 같은 비특이적 파트너보다 더 높은 친화도로 IL13Rα2에 결합하는 것을 의미하는 데 사용된다. 일부 실시예에서 항체는 생리학적 조건에서 측정했을 때, BSA에 대한 항체의 결합 상수보다 적어도 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 104, 105 또는 106배 더 높은 결합 상수(Ka)로 IL13Rα2에 결합한다.
일부 실시예에서, IL13Rα2 폴리펩티드는 UniProt 수탁번호 Q14627(엔트리 버전 190)에 개시된 아미노산 서열 또는 이의 단편에 상응한다. 일부 실시예에서, IL13Rα2 폴리펩티드는 UniProt 수탁번호 Q14627(엔트리 버전 190)에 개시된 아미노산 서열의 전체 길이와 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 또는 이의 단편에 해당한다. 일부 실시예에서, IL13Rα2 폴리펩티드는 서열번호 12의 서열을 갖는다.
항체 친화력(Antibody affinity)
놀랍게도, 본 발명자들은 인간화 과정이 Biacore 결합 분석에서 결정된 바와 같이 키메라(Ch) 클론 47과 비교하여 인간 IL13Rα2에 대한 인간화 항체의 친화도를 증가시킨다는 것을 발견하였다(실시예 2 참조).
따라서, 본 발명의 항체는 높은 친화도로 IL13Rα2에 결합할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 10-6 M 이하, 5×10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 5×10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 5×10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 5×10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 5×10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 5×10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 5×10-12 M 이하, 10-13 M 이하, 5×10-13 M 이하, 10-14 M 이하, 5×10-14 M 이하, 10-15 M 이하, 또는 5×10-15 M 이하의 해리 상수(KD)로 IL13Rα2에 결합할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 0.52, 0.51, 0.50, 0.49, 0.48, 0.47, 0.46, 0.45, 0.44, 0.43, 0.42, 0.41 또는 0.40 nM 이하의 해리 상수(KD)로 IL13Rα2에 결합할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20, 0.15 또는 0.10 nM 이하의 해리 상수(KD)로 IL13Rα2에 결합할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 10-8 M 내지 10-10 M, 10-10 M 내지 10-12 M, 10-12 M 내지 10-14 M, 또는 10-14 M 내지 10-16 M의 해리 상수(KD)로 IL13Rα2에 결합할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 5×10-10 내지 5×10-11 M의 해리 상수(KD)로 IL13Rα2에 결합할 수 있다.
항체 친화도를 결정 하기 위한 적합한 방법은 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 및 SPR(surface plasmon resonance) 기술과 같이 당업자에게 잘 알려져 있을 것이다. 일부 실시예에서, KD는 실시예에 기재된 방법에 의해 결정되고 계산될 수 있다.
일부 실시예에서 인간화 항체는 뮤린 "클론 47" 항체의 인간 IL13Rα2에 대한 인비보 및/또는 인비트로 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있다. 일부 실시예에서, 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체의 인간 IL13Rα2에 대한 인비보 및/또는 인비트로 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있다.
일부 실시예에서 같은몰(equimolar) 용량의 본 발명의 인간화 항체는 뮤린 "클론 47" 항체 결합의 적어도 20%, 예를 들어 결합의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%를 경쟁적으로 억제할 수 있다. 결합 백분율은 예를 들어 결합 억제 %가 [(1-시험 샘플의 흡광도)/(음성 대조군의 흡광도)]로 계산되는 경쟁적 ELISA 분석에 의해 측정될 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 뮤린 "클론 47" 항체보다 인간 IL13Rα2 항원에 대해 더 높은 친화도를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체보다 인간 IL13Rα2 항원에 대해 더 높은 친화도를 가질 수 있다.
일부 실시예에서 인간 IL13Rα2 항원을 갖는 인간화 항체의 KD는 뮤린 "클론 47" 항체/서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체 KD의 0.9 이하일 것이다. 예를 들어 인간 IL13Rα2 항원을 갖는 인간화 항체의 KD는 상기 기재된 항체 중 하나 이상의 KD의 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.05, 0.01 또는 0.001 이하일 수 있다. 일부 바람직한 실시예에서, KD는 상기 기재된 항체 중 하나 이상의 KD의 0.5 이하, 또는 0.2 이하일 수 있다.
항체 등전점(Antibody isoelectric point, pI)
주변의 pH가 분자 pI와 같을 때 분자는 순전하(net charge)를 가지지 않는다. 분자의 순전하는 분자의 용해도에 영향을 미치며 단백질과 같은 생물학적 분자는 일반적으로 pI에 해당하는 pH에서 물이나 염 용액에서 최소 용해도를 가진다. 따라서, pI가 7.35 - 7.45인 단백질은 pH가 일반적으로 7.35 - 7.45 범위인 인간 혈액에서 최소 용해도에 있다.
주변 환경의 pH가 단백질의 pI 보다 낮을 때 분자는 순 양전하를 띤다. 주변 환경의 pH가 단백질의 pI 보다 높을 때 분자는 순 음전하를 띤다. 일반적으로 항체의 순 양전하가 높을수록 반감기가 짧은 조직 보유 및 혈액 청소율이 증가하는 반면 pI가 낮고 순 양전하가 낮을수록 조직 보유가 감소하고 반감기가 길어진다(Boswell 외, Bioconjug Chem. 2010 Dec 15;21(12):2153-63).
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 뮤린 "클론 47" 항체보다 낮은 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체보다 낮은 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 9.0 이하, 예를 들어 8.5 이하, 8.0 이하 또는 7.5 이하의 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 8.9, 8.8, 8.7, 8.6, 8.5, 8.4, 8.3, 8.2 또는 8.1 이하의 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 7.9, 7.8 또는 7.7 이하의 pI를 가질 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 뮤린 "클론 47" 항체보다 큰 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체보다 큰 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 7.5 이상, 예를 들어 8.0 이상, 8.5 이상 또는 9.0 이상의 pI를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 또는 8.0 이상의 pI를 가질 수 있다. 일부 바람직한 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 7.6 이상의 pI를 가질 수 있다. 일부 바람직한 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 7.63 이상의 pI를 가질 수 있다.
항체 안정성(Antibody stability)
놀랍게도, 본 발명자들은 ELISA에 의해 평가된 바와 같이 4℃ 또는 45℃에서 8일 동안 인큐베이션한 다음, IL13Rα2에 대한 결합에 의해 결정된 바와 같이 인간화 과정이 인간화 항체의 안정성을 증가시킬 수 있음을 발견하였다(실시예 2 참조).
따라서, 본 발명의 항체는 비-인간화 항-IL13Rα2 항체 또는 다른 인간화 항-IL13Rα2 항체와 비교하여 개선된 안정성 특성을 가질 수 있다. 일부 실시예에서 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체와 비교하여 개선된 안정성 특성을 가질 수 있다.
안정성 특성을 평가하기 위한 적합한 수단 - 예를 들어 단백질 열 이동 및 온도 안정성 분석은 당업자에게 잘 알려져 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체의 안정성 특성은 실시예에 기재된 방법 중 하나 이상에 의해 결정될 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체의 안정성 특성은 ELISA에 의해 평가된 바와 같이 4℃ 또는 45℃에서 8일 동안 인큐베이션한 다음, IL13Rα2에 결합함으로써 결정될 수 있다.
일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 45℃에서 8일 동안 배양한 다음, IL13Rα2에 대한 결합 친화도에서 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50% 미만의 감소를 나타낼 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 45℃에서 8일 동안 배양한 다음, IL13Rα2에 대한 결합 친화도에서 4배 미만, 예를 들어 3.5배 미만, 3배 미만, 2.5배 미만, 2배 미만 또는 1.5배 미만의 결합 감소를 나타낼 수 있다.
세포 사멸 활성(Cell killing activity)/세포독성(cytotoxicity)
일부 경우에 본 발명의 인간화 항체는 및/또는 본 발명의 인간화 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 예를 들어 EC50 값에 의해 결정되는 바와 같이 높은 세포 사멸 활성을 가질 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 및/또는 항체-약물 접합체는 뮤린 "클론 47" 항체 또는 뮤린 "클론 47" 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 보다 낮은 EC50을 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체 및/또는 항체-약물 접합체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 항체-약물 접합체 보다 낮은 EC50을 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체 및/또는 항체-약물 접합체는 상기 기술된 하나 이상의 항체/접합체보다 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100% 더 낮은 EC50을 가질 수 있다. 세포 사멸 활성/세포독성 및 EC50 값을 결정하기 위한 적합한 수단은 당업자에게 잘 알려져 있다. 일부 실시예에서, 이들은 실시예에 기재된 방법에 의해 결정될 수 있다.
종양 성장 억제(Inhibition of tumour growth)
일부 경우에 본 발명의 인간화 항체 및/또는 본 발명의 인간화 항체를 포함하는 항체-약물 접합체는 IL13Rα2-발현 종양의 성장 속도를 정지시키거나 감소시킬 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 대조군 종양과 비교하여 종양 성장을 10% 이상 억제할 수 있다. 즉, 항체 처리된 종양의 부피는 대조군 종양 부피의 90% 이하이다. 예를 들어, 일부 실시예에서 본 발명의 항체는 대조군 종양에 비해 종양 성장을 20% 이상, 예를 들어 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상 억제할 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체의 종양 억제 효과는 뮤린 "클론 47" 항체 또는 뮤린 "클론 47" 항체를 포함하는 항체-약물 접합체 보다 클 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체의 종양 억제 효과는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 항체-약물 접합체 보다 더 클 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체의 종양 억제 효과는 상기 기재된 항체 중 하나 이상의 것보다 더 클 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체의 종양 억제 효과는 상기 기재된 항체 중 하나 이상의 것보다 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 이상 더 클 수 있다. 종양 성장에 대한 본 발명의 인간화 항체의 효과를 결정하기 위한 적합한 수단은 당업자에게 잘 알려져 있다.
항체 면역원성(Antibody immunogenicity)
본 발명의 인간화 항체는 동일한 특이성의 비인간화 항체(예를 들어, 인간화 이전의 마우스 항체 전구체)와 비교하여 인간 대상체에서 감소된 면역원성을 갖는다. 일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 다른 면에서 동일한 항체 또는 항체 단편보다 인간 피험자에서 더 낮은 면역원성을 가질 수 있다.
낮거나 감소된 면역원성은 증상의 측정 가능한 완화 및 낮은 및/또는 허용 가능한 독성으로 장기간 환자를 치료할 수 있는 능력을 특징으로 할 수 있다. 낮은 또는 허용 가능한 면역원성 및/또는 높은 친화도 뿐만 아니라 다른 적합한 특성은 달성되는 치료 결과에 기여할 수 있다. "감소된 면역원성"은 상기 기재된 항체로 치료했을 때 유의미한 HAHA, HACA 또는 HAMA 반응을 보이는 환자 비율의 90% 미만, 예를 들어 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 10% 미만에서 상당한 HAHA, HACA 또는 HAMA 반응을 일으키는 것으로 정의된다,
항체 생산(Antibody production)
본 발명은 또한 본 발명의 인간화 항체를 생산하는 방법 및 수단을 제공한다.
따라서, 또 다른 측면에서 본 발명은 인간화 항체를 코딩하는 핵산 분자에 상보적인 핵산 분자와 함께 인간화 항체를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 본 발명의 항체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서 본 발명은 본 발명의 핵산을 포함하는 발현벡터와 같은 벡터를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 벡터로 형질감염된 숙주세포를 제공한다. 상기 숙주세포는 원핵 또는 진핵일 수 있다. 예를 들어, 세포는 박테리아, 진균, 곤충 또는 포유류(예: 마우스, 영장류 또는 인간) 세포일 수 있다.
또 다른 측면에서 본 발명은 본 발명의 숙주세포를 배양함으로써 항체를 제조하는 방법을 제공한다.
일부 경우에, 본 발명의 숙주세포에서 발현될 때, 본 발명의 인간화 항체는 비인간화 항-IL13Rα2 항체 또는 다른 인간화 항-IL13Rα2 항체와 비교하여 더 높은 수준으로, 또는 더 높은 생산성 또는 수율로 발현될 수 있다.
일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체보다 더 높은 수준으로, 또는 더 높은 생산성 또는 수율로 발현될 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 다음을 포함하는 항체보다 더 높은 수준으로, 또는 더 높은 생산성 또는 수율로 발현될 수 있다.
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA) 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKAback);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKAback);
- 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA1) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA);
- 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA1) 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKAback);
- 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA1) 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA1);
- 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA1) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2);
- 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA2) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA);
- 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA2) 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKAback);
- 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA2) 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA1);
- 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA2) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2);
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA);
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKAback); 및
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA1).
일부 실시예에서, 본 발명의 인간화 항체는 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건 하에 배양될 때 상기 기재된 하나 이상의 항체보다 더 높은 수준으로, 또는 더 높은 생산성 또는 수율로 발현될 수 있다. 일부 실시예에서, 발현 수준 또는 생산성 또는 수율은 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건에서 배양될 때 상기 기재된 하나 이상의 항체보다 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 이상 더 높을 수 있다. 일부 실시예에서, 발현 수준 또는 생산성 또는 수율은 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건에서 배양될 때 상기 기재된 하나 이상의 항체보다 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200% 이상 더 높을 수 있다. 재조합 단백질의 발현 수준을 결정하기 위한 적합한 수단은 예를 들어 ELISA 및 웨스턴 블롯 기술과 같이 당업자에게 잘 알려져 있다. 일부 실시예에서, 발현 수준/생산성/수율은 실시예에 기재된 방법에 의해 결정될 수 있다.
일부 경우에, 본 발명의 숙주세포에서 발현될 때, 본 발명의 인간화 항체는 비인간화 항-IL13Rα2 항체 또는 다른 인간화 항-IL13Rα2 항체와 비교하여 더 낮은 수준의 응집 또는 단편화를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체 보다 더 낮은 수준의 응집 또는 단편화를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 본 발명의 인간화 항체는 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건 하에 배양될 때 비인간화 항-IL13Rα2 항체 또는 다른 인간화 항-IL13Rα2 항체보다 더 낮은 수준의 응집 또는 단편화를 가질 수 있다. 일부 실시예에서 응집 또는 단편화 수준은 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건 하에서 배양될 때 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100% 이상 더 낮을 수 있다. 일부 실시예에서 응집 또는 단편화 수준은 동일한 숙주세포 유형에서 발현되고 동일한 조건 하에서 배양될 때 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200% 이상 더 낮을 수 있다. 재조합 단백질의 응집 또는 단편화를 결정하기 위한 적합한 수단은 예를 들어 크기 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography, SEC)와 같이 당업자에게 잘 알려져 있다. 일부 실시예에서, 응집 또는 단편화 수준은 실시예에 기재된 방법에 의해 결정될 수 있다 .
정의(Definitions)
항체(Antibody)
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 구체적으로 원하는 생물학적 활성, 예를 들어, IL13Rα2에 결합하는 능력을 나타내는 한, 단클론 항체, 다클론 항체, 이량체, 다량체, 다중 특이성 항체(예: 이중특이성 항체), 온전한 항체 및 항체 단편을 포함한다. 항체는 뮤린, 인간, 인간화, 키메라, 또는 다른 종에서 파생된 것일 수 있다. 항체는 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있는 면역 체계에 의해 생성되는 단백질이다. (Janeway, C., Travers, P., Walport , M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). 표적 항원은 일반적으로 여러 항체의 CDR에 의해 인식되는 에피토프라고도 하는 수많은 결합 부위를 가지고 있다. 다른 에피토프에 특이적으로 결합하는 각 항체는 다른 구조를 가지고 있다. 따라서 하나의 항원은 하나 이상의 상응하는 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장(full-length) 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 관심 타겟의 항원 또는 이의 일부에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 포함 하며, 이러한 타겟에는 암 세포 또는 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예: IgG, IgE , IgM, IgD 및 IgA), 및 클래스(예: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 클래스, 또는 알로타입(예: 인간 G1m1, G1m2, G1m3, non-G1m1[즉, G1m1 이외의 알로타입임], G1m17, G2m23, G3m21, G3m28, G3m11, G3m5, G3m13, G3m14, G3m10, G3m15, G3m16, G3m6, G3m24, G3m26, G3m27, A2m1, A2m2, Km1, Km2 및 Km3)일 수 있다. 면역글로불린은 인간, 뮤린 또는 토끼 기원을 포함한 모든 종에서 유래할 수 있다.
"항체 단편"은 전장 항체의 일부, 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab') 2 및 scFv 단편; 디아바디(diabodies); 선형 항체; Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR(상보적 결정 영역) 및 암 세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 상기 항목의 에피토프 결합 단편, 단일-사슬 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "단클론 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 단클론 항체는 매우 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지시된다. 또한, 상이한 결정인자(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 달리, 각각의 단클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대한 것이다. 단클론 항체는 특이성 외에도 다른 항체에 오염되지 않은 상태에서 합성이 가능한 장점이 있다. 수식어 "단클론"은 실질적으로 동종의 항체 집단으로부터 얻어지는 항체의 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 Kohler 외 (1975) Nature 256:495에 처음 기술된 하이브리도마 방법에 의해 만들어질 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 만들어질 수 있다(US 4816567 참조). 단클론 항체는 Clackson 외 (1991) Nature, 352:624-628; Marks 외 (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597에 개시된 기술을 사용하여 파지(phage) 항체 라이브러리로부터, 또는 완전 인간 면역글로불린 시스템을 보유하는 트랜스제닉(transgenic) 마우스(Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459) 로부터 분리될 수 있다.
모노클로날 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유도되거나 특정 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체 및 이러한 항체의 단편에서 해당 서열과 동일하거나 상동인 "키메라" 항체를 포함하고, 나머지 사슬(들)은 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종에서 유래했거나 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 상동적이다(US 4816567; 및 Morrison 외 (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). 키메라 항체는 비인간 영장류(예: 구세계 원숭이 또는 유인원)로부터 유래된 가변 도메인 항원 결합 서열 및 인간 불변영역 서열을 포함하는 "영장류화된(primatized)" 항체를 포함한다.
본원에서 "온전한(intact) 항체"는 VL 및 VH 도메인 뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 온전한 항체는 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 나타내는 하나 이상의 "이펙터 기능(effector functions)"을 가질 수 있다. 항체 이펙터 기능의 예에는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 및 B 세포 수용체 및 BCR과 같은 세포 표면 수용체의 하향 조절을 포함한다.
중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 온전한 항체는 다른 "부류"로 분류될 수 있다. 온전한 항체에는 5개의 주요 부류가 있다: IgA, IgD , IgE , IgG 및 IgM, 그리고 이들 중 일부는 "하위 부류"(이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 더 나눌 수 있다. 상이한 부류의 항체에 해당하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 한다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 구성은 잘 알려져 있다.
인간화(Humanized)
본원에 사용된 "인간화" 항체는 본원에 기재된 항-IL13Rα2 항체의 임의의 조합을 포함한다. 이들 항체에서 키메라 MSAb-1 및 X09.2 항체의 프레임워크 잔기는 대체로 인간 면역글로불린의 해당 잔기로 대체되었다. 가능한 한 많은 인간 아미노산 잔기가 유지되지만, 중요한 인간 잔기는 CDR에 의해 형성된 항원 결합 부위를 지지하고 키메라 항체의 항원 결합 효능을 재현하기 위해 필요에 따라 변형될 수 있다. 이러한 변화 또는 변이는 변형되지 않은 항체에 비해 인간 또는 다른 영장류 종에서 선택적으로 그리고 바람직하게 면역원성을 유지하거나 감소시킨다.
"인간화 항체"는 인간 항체의 변형된 가변영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 의미하며, 여기서 가변영역의 일부, 바람직하게 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 적은 부분이 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 대체되었고, 변형된 가변영역은 또 다른 단백질의 적어도 다른 부분, 바람직하게는 인간 항체의 불변영역에 연결된다. 발현 "인간화 항체"는 하나 이상의 상보성 결정 영역("CDR") 아미노산 잔기 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역("FW" 또는 "FR") 아미노산 잔기가 설치류 또는 다른 비인간 항체에서 유사한 부위의 아미노산 잔기로 치환된 인간 항체를 포함한다. 발현 "인간화 항체"는 또한 실질적으로 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 FR 및 실질적으로 비-인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 CDR을 포함하는 면역글로불린 아미노산 서열 변이체 또는 이의 단편을 포함한다.
비인간(예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 또는, 다른 방식으로 살펴보면, 인간화 항체는 인간 서열 대신에 비인간(예: 뮤린) 항체에서 선택된 서열도 포함하는 인간 항체입니다. 인간화 항체는 그의 결합 및/또는 생물학적 활성을 크게 변경하지 않는 동일하거나 상이한 종으로부터의 보존적 아미노산 치환 또는 비천연 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 항체는 비인간 면역글로불린에서 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다.
'CDR 그래프팅', '유도 선택', '탈면역화', '재포장'('베니어링'이라고도 함), '복합 항체', '인간 문자열 콘텐츠 최적화' 및 '프레임워크 셔플링'을 비롯한 다양한 인간화 기술이 있다.
CDR 접목(CDR grafting)
이 기술에서 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수용자 항체)으로, 수혜자 항체의 상보성 결정 영역(CDR)의 잔기가 원하는 특성을 갖는 마우스(mouse), 쥐(rat), 낙타, 소, 염소 또는 토끼(실제로 비인간 CDR은 인간 프레임워크에 '이식'됨)와 같은 비인간 종(공여자 항체)의 CDR의 잔기로 대체된다. 어떤 경우에 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다(이는 예를 들어 특정 FR 잔기가 항원 결합에 상당한 영향을 미칠 때 발생할 수 있다).
또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서도, 수입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 수정은 항체 성능을 더욱 개선하고 최대화하기 위해 이루어진다. 따라서, 일반적으로 인간화 항체는 적어도 하나, 및 한 측면에서는 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기에서 모든 또는 모든 초가변(hypervariable) 루프는 비인간 면역글로불린의 루프에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 영역이다. 인간화 항체는 또한 임의로 면역글로불린 불변영역(Fc)의 적어도 일부 또는 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다.
유도 선택(Guided selection)
이 방법은 특정 에피토프에 특이적인 주어진 비인간 항체의 VH 또는 VL 도메인을 인간 VH 또는 VL 라이브러리와 결합하는 것으로 구성되며 특정 인간 V 도메인은 관심 항원에 대해 선택된다. 이 선택된 인간 VH는 VL 라이브러리와 결합되어 완전한 인간 VHxVL 조합을 생성한다. 이 방법은 Nature Biotechnology(NY) 12 , (1994) 899-903에 기술되어 있다.
복합항체(Composite antibodies)
이 방법에서, 인간 항체로부터의 아미노산 서열의 2개 이상의 세그먼트가 최종 항체 분자 내에서 결합된다. 이들은 최종 복합 항체 V 영역에서 인간 T 세포 에피토프를 제한하거나 회피하는 조합으로 다수의 인간 VH 및 VL 서열 세그먼트를 조합함으로써 구성된다. 필요한 경우, T 세포 에피토프는 T 세포 에피토프를 피하는 대체 세그먼트로 T 세포 에피토프에 기여하거나 인코딩하는 V 영역 세그먼트를 교환함으로써 제한되거나 회피된다. 이 방법은 US 2008/0206239 A1에 기재되어 있다.
면역 해제(Deimmunization)
이 방법은 치료용 항체(또는 다른 분자)의 V 영역에서 인간(또는 다른 두 번째 종) T 세포 에피토프를 제거하는 것을 포함한다. 치료용 항체 V 영역 서열은 예를 들어 MHC-결합 모티프의 데이터베이스(예: www.wehi.edu.au에서 호스팅되는 "모티프" 데이터베이스)와의 비교에 의해 MHC 클래스 II-결합 모티프의 존재에 대해 분석된다. 대안적으로, MHC 클래스 II 결합 모티프는 Altuvia 외(J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995))가 고안한 것과 같은 전산 스레딩 방법을 사용하여 식별할 수 있다. 이러한 방법에서 V-영역 서열의 연속적으로 겹치는 펩티드는 MHC 클래스 II 단백질에 대한 결합 에너지를 테스트한다. 그런 다음 이 데이터를 양친매성, 로스바드 모티프, 및 카텝신 B와 기타 처리 효소에 대한 절단 부위와 같이 성공적으로 제시된 펩티드와 관련된 다른 서열 특징에 대한 정보와 결합할 수 있다.
잠재적인 두 번째 종(예: 인간) T 세포 에피토프가 확인되면 하나 이상의 아미노산을 변경하여 제거한다. 변형된 아미노산은 일반적으로 T 세포 에피토프 자체 내에 있지만 단백질의 1차 또는 2차 구조 측면에서 에피토프에 인접할 수도 있다(따라서 1차 구조에서 인접하지 않을 수 있음). 가장 일반적으로 변경은 치환을 통해 이루어지지만 경우에 따라 아미노산 추가 또는 삭제가 더 적절할 수 있다.
모든 변경은 재조합 DNA 기술에 의해 달성될 수 있으므로 부위 지정 돌연변이 유발과 같은 잘 확립된 방법을 사용하여 재조합 숙주로부터의 발현에 의해 최종 분자가 준비될 수 있다. 그러나 단백질 화학이나 다른 분자 변형 수단을 사용할 수도 있다.
재생(Resurfacing)
이 방법에는 하기 단계를 포함한다.
(a) 비인간 항체 가변영역의 3차원 모델을 구축하여 비인간(예를 들어, 설치류) 항체(또는 이의 단편)의 가변영역의 구조적 구조를 결정하는 단계;
(b) 중쇄 및 경쇄 프레임워크 위치 세트를 제공하기 위해 충분한 수의 비-인간 및 인간 항체 가변영역 중쇄 및 경쇄의 X선 결정학적 구조로부터의 상대적 접근성 분포를 사용하여 서열 정렬을 생성하는 단계, 여기서 정렬 위치는 충분한 수의 비인간 항체 중쇄 및 경쇄의 98%가 동일함;
(c) 단계 (b)에서 생성된 프레임워크 위치 세트를 사용하여 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기 세트를 인간화할 비인간 항체에 대해 정의하는 단계;
(d) 인간 항체 아미노산 서열로부터 단계 (c)에서 정의된 표면 노출된 아미노산 잔기의 세트와 가장 근접하게 동일한 중쇄 및 경쇄 표면 노출된 아미노산 잔기의 세트를 식별하는 단계, 여기서 인간 항체의 중쇄 및 경쇄는 자연적으로 쌍을 이루거나 쌍을 이루지 않음;
(e) 인간화되는 비인간 항체의 아미노산 서열에서, 단계 (c)에서 정의된 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기 세트를 단계 (d)에서 식별된 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기 세트로 치환하는 단계;
(f) 단계 (e)에서 명시된 치환에 의해 생성된 비인간 항체의 가변영역의 3차원 모델을 구축하는 단계;
(g) 단계 (a) 및 (f)에서 구축된 3차원 모델을 비교함으로써, 단계 (c) 또는 (d)에서 식별된 세트로부터의 임의의 원자로부터 5 옹스트롬 내에 있는 임의의 아미노산 잔기를 확인한다. 인간화될 비-인간 항체 의 상보성 결정 영역의 임의의 잔기; 및
(g) 단계 (a) 및 (f)에서 구축된 3차원 모델을 비교함으로써, 단계 (c) 또는 (d)에서 식별된 세트로부터 인간화될 비-인간 항체의 상보성 결정 영역의 임의의 잔기의 임의 원자의 5 옹스트롬 내에 있는 임의의 아미노산 잔기를 확인하는 단계; 및
(h) 단계 (g)에서 식별된 임의의 잔기를 인간에서 원래의 비인간 아미노산 잔기로 변경하여 비인간 항체 인간화 표면 노출 아미노산 잔기 세트를 정의하는 단계; 단, 단계 (a)를 먼저 수행할 필요는 없지만, 단계 (g) 이전에 수행해야 한다.
초인간화(Superhumanization)
이 방법은 비인간 서열을 기능적 인간 생식계열 유전자 레퍼토리와 비교한다. 비인간 서열과 동일하거나 밀접하게 관련된 표준 구조를 암호화하는 인간 유전자가 선택된다. CDR 내에서 가장 높은 상동성을 갖는 선택된 인간 유전자는 FR 기증자로 선택된다. 마지막으로 비인간 CDR는 이러한 인간 FR에 이식된다. 이 방법은 특허 WO 2005/079479 A2에 설명되어 있다.
인간 문자열 콘텐츠 최적화(Human String Content Optimization)
이 방법은 비인간(예: 마우스) 서열을 인간 생식계열 유전자의 레퍼토리와 비교하고 그 차이를 잠재적인 MHC/T 세포 에피토프 수준에서 서열을 정량화하는 HSC(Human String Content)로 채점한다. 표적 서열은 다수의 다양한 인간화 변이체를 생성하기 위해 전체적인 동일성 척도를 사용하는 대신 그의 HSC를 최대화함으로써 인간화된다(Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998에 개시된).
프레임워크 셔플링(Framework Shuffling)
비인간 항체의 CDR은 모든 알려진 중쇄 및 경쇄 인간 생식계열 유전자 프레임워크를 포함하는 cDNA 풀에 인프레임으로 융합된다. 인간화 항체는 예를 들어 파지 디스플레이된 항체 라이브러리의 패닝에 의해 선택된다. 이것은 Methods 36, 43-60 (2005)에 설명되어 있다.
서열 수정(Sequence modifications)
본원에 개시된 항체 중쇄 가변영역 및/또는 경쇄 가변영역의 서열은 치환, 삽입 또는 결실에 의해 변형될 수 있다. 본원에 기재된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열은 아미노산 결실 및/또는 삽입 뿐만 아니라 보존적 아미노산 치환을 포함하는 서열을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 첫 번째 아미노산과 유사한 화학적 및/또는 물리적 특성(예: 전하, 구조, 극성, 소수성/친수성)을 갖는 두 번째 아미노산으로 첫 번째 아미노산을 대체하는 것을 의미한다. 바람직한 보존적 치환은 하나의 아미노산이 본원에 하기에 나타낸 아미노산 그룹 내에서 다른 아미노산으로 치환되는 것이다:
- 극성 측쇄를 갖는 아미노산(Asp, Glu, Lys, Arg, His, Asn, Gin, Ser, Thr, Tyr 및 Cys)
- 비극성 측쇄를 갖는 아미노산(Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Pro 및 Met)
- 지방족 측쇄를 갖는 아미노산(Gly, Ala Val, Leu, Ile)
- 사이클릭 측쇄를 갖는 아미노산(Phe, Tyr, Trp, His, Pro)
- 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(Phe, Tyr, Trp)
- 산성 측쇄를 갖는 아미노산(Asp, Glu)
- 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(Lys, Arg, His)
- 아미드 측쇄를 갖는 아미노산(Asn, Gln)
- 하이드록시 측쇄를 갖는 아미노산(Ser, Thr)
- 황-함유 측쇄를 갖는 아미노산(Cys, Met)
- 중성, 약한 소수성 아미노산(Pro, Ala, Gly, Ser, Thr)
- 친수성, 산성 아미노산(Gin, Asn, Glu, Asp) 및
- 소수성 아미노산(Leu, Ile, Val)
특히 바람직한 보존적 아미노산 치환기는 Val-Leu-Ile, Phe-Tyr, Lys-Arg, Ala-Val, 및 Asn-Gln이다.
일부 실시예에서, 본 발명의 항체는 본 명세서에 기재된 중쇄에 대해 80% 이상의 아미노산 서열 동일성(예를 들어, 약 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 그 이상, 99% 이상의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 항체는 본 명세서에 기재된 경쇄에 대해 80% 이상의 아미노산 서열 동일성(예를 들어, 약 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 그 이상, 99% 이상의 서열 동일성)을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 발명의 항체는 본 명세서에 기재된 중쇄의 아미노산 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 변형(예. 치환, 삽입 및/또는 결실)을 포함하는 것을 제외하고, 본 명세서에 기재된 중쇄의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 발명의 항체는 본 명세서에 기재된 경쇄의 아미노산 서열에 비해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 변형(예. 치환, 삽입 및/또는 결실)을 포함하는 것을 제외하고, 본 명세서에 기재된 경쇄의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함할 수 있다.
항체 생산(Antibody production)
인간화 항체, 단편 및 영역은 항-IL13Rα2 항체의 H 및 L 사슬 항원 결합 영역을 코딩하는 DNA 세그먼트를 클로닝하고, 이러한 DNA 세그먼트를 각각 CH 및 CL 영역을 포함하는 DNA 세그먼트에 연결하여 전장 면역글로불린 코딩 유전자를 생성함으로써 생성될 수 있다.
전장 항체 분자의 경우, 면역글로불린 cDNA는 하이브리도마 세포주의 mRNA에서 수득할 수 있다. 항체 중쇄 및 경쇄는 포유동물 발현벡터 시스템에서 클로닝된다. 어셈블리는 DNA 서열 분석으로 문서화된다. 항체 컨스트럭트는 인간 또는 다른 포유동물 숙주세포주에서 발현될 수 있다. 상기 컨스트럭트는 발현된 항체의 일시적 형질감염 검정 및 면역검정에 의해 검증될 수 있다. 생산성이 가장 높은 안정적인 세포주를 신속 분석법을 사용하여 분리하고 스크리닝할 수 있다.
치료 방법(Methods of Treatment)
본 발명의 항체 및 접합체는 치료 방법에 사용될 수 있다. 또한, 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 항체 또는 접합체 화합물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. "치료적 유효량"이라는 용어는 환자에게 이점을 나타내기에 충분한 양이다. 이러한 이점은 적어도 하나 이상의 증상의 적어도 개선일 수 있다. 투여되는 실제 양, 투여 속도 및 시간 경과는 치료되는 것의 특성 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 예를 들어 복용량 결정과 같은 치료 처방은 일반의와 다른 의사의 책임이다.
본 발명의 항체 및 접합체는 단독으로 또는 치료할 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 다른 치료와 함께 투여될 수 있다. 치료 및 치료법의 예는 화학요법(예를 들어, 화학요법제와 같은 약물을 포함하는 활성제의 투여); 수술; 및 방사선 요법을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
"화학요법제"는 작용 메카니즘에 관계없이 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 종류에는 알킬화제, 항대사물질, 스핀들 독 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 항체, 감광제 및 키나제 억제제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 화학요법제는 "표적 요법" 및 통상적인 화학요법에 사용되는 화합물을 포함한다.
화학요법제의 예는 엘로티닙(TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), 도세탁셀(TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU(플루오로우라실, 5-플루오로우라실, CAS 번호 51-21-8), 젬시타빈(GEMZAR®, Lilly), PD-0325901(CAS 번호 391210-10-9, 화이자), 시스플라틴(시스-디아민, 디클로로 백금(II), CAS 번호 15663-27-1), 카보플라틴(CAS 번호 41575-94-4), 파클리탁셀(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), 트라스투주맙(HERCEPTIN®, Genentech), 테모졸로마이드(4-메틸-5-옥소-2,3,4,6,8-펜타자비시클로 [4.3.0] 노나-2,7,9-트리엔-9-카르복스아미드, CAS 번호 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), 타목시펜((Z)-2-[4-(1,2-디페닐부트-1-에닐)페녹시]-N,N-디메틸에탄아민, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®), 및 독소루비신(ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD 및 라파마이신을 포함한다.
화학요법제의 추가 예는 옥살리플라틴(ELOXATIN®, Sanofi), 보르테조밉(VELCADE®, Millennium Pharm.), 수텐트(SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), 레트로졸(FEMARA®, Novartis), 이마티닙 메실레이트(GLEEVEC®, Novartis), XL-518(Mek 억제제, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886(Mek 억제제, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126(PI3K 억제제, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235(PI3K 억제제, Novartis), XL-147(PI3K 억제제, Exelixis), PTK787/ZK 222584(Novartis), 풀베스트란트(FASLODEX®, AstraZeneca), 류코보린(폴린산), 라파마이신(sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), 라파티닙(TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), 로나파르닙(SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), 소라페닙(NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), 제피티닙(IRESSA®, AstraZeneca), 이리노테칸(CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), 티피파닙(ZARNESTRA™, Johnson&Johnson), ABRAXANE™(Cremophor-free), 파클리탁셀의 알부민 조작된 나노입자 제제(American Pharmaceutical Partners, Sch aumberg, Il), 반데타닙(rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), 클로란부실, AG1478, AG1571(SU 5271; Sugen), 템시롤리무스(TORISEL®, Wyeth), 파조파닙(GlaxoSmithKline), 칸포스파미드(TELCYTA®, Telik), 티오테파 및 사이클로포스파미드(CYTOXAN®, NEOSAR®); 부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토제닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰기스타틴; 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴과 같은 니트로소우레아; 에네디인 항생제와 같은 항생제(예: 칼리케아미신, 칼리케아미신 감마1I, 칼리케아미신 오메가I1(Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); 디네미신, 디네미신 A; 클로드로네이트와 같은 비스포스포네이트; 에스페라미신; 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 네모루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)과 같은 항대사물질; 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄과 같은 항부신제; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 배당체; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 디포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 메이탄신 및 안사미토신과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체(JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 에토포사이드(VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈(NAVELBINE®); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 카페시타빈(XELODA®, Roche); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 및 임의의 상기의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체를 포함한다.
또한 "화학요법제"의 정의에는 다음이 포함된다: (i) 예를 들어 타목시펜(NOLVADEX®; 구연산 타목시펜 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 FARESTON®(토레미핀 시트레이트)을 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM)와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제; (ii) 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, MEGASE®(메게스트롤 아세테이트), AROMASIN®(엑세메스탄; Pfizer), 포메스타니, 파드로졸, RIVISOR®(vorozole), FEMARA®(letrozole; Novartis), 및 ARIMIDEX®(아나스트로졸; AstraZeneca)과 같이 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제; (iii) 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프로라이드 및 고세렐린과 같은 항안드로겐; 뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); (iv) MEK 억제제(WO 2007/044515)와 같은 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히 비정상적인 세포 증식에 연루된 신호 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것, 예를 들어 PKC-알파, Raf 및 H-Ras, 예를 들어 oblimersen(GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) VEGF 발현 억제제(예: ANGIOZYME®) 및 HER2 발현 억제제와 같은 리보자임; (viii) 유전자 요법 백신, 예를 들어 ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® 및 VAXID®와 같은 백신; PROLEUKIN® rIL-2; LURTOTECAN®과 같은 토포이소머라제 1 억제제; ABARELIX® rmRH; (ix) 베바시주맙(AVASTIN®, Genentech)과 같은 항혈관형성제; 및 임의의 상기의 약학적으로 허용 가능한 염, 산 및 유도체.
또한 "화학요법제"의 정의에는 알렘투주맙(Campath), 베바시주맙(AVASTIN®, Genentech); 세툭시맙(ERBITUX®, Imclone); 파니투무맙(VECTIBIX®, Amgen), 리툭시맙(RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), 오파투무맙(ARZERRA®, GSK), 페르투주맙(PERJETATM, OMNITARG™, 2C4, Genentech), 트라스투주맙(HERCEPTIN®, Genentech), 토시투모맙(Bexxar) , Corixia), 및 항체 약물 접합체, 젬투주맙 오조가미신(MYLOTARG®, Wyeth)이 포함된다.
화학요법제로서 치료 가능성이 있는 인간화 단클론 항체는 알렘투주맙, 아폴리주맙, 아셀리주맙, 아틀리주맙, 바피네우주맙, 베바시주맙, 비바투주맙 메르탄신, 칸투주맙 메르탄신, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 시드푸시투주맙, 시투주맙, 다클리주맙, 에쿨리주맙, 에팔리주맙, 에프라투주맙, 에를리주맙, 펠비주맙, 폰톨리주맙, 젬투주맙 오조가미신, 이노투주맙 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 니모투주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오크렐리주맙, 오말리주맙, 팔리비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 페르투주맙, 펙셀리주맙, 랄리비주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 타카투주맙 테트라세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투코투주맙 셀몰류킨, 투쿠시투주맙, 우마비주맙, 우르톡사주맙 및 비실리주맙을 포함한다.
본 발명에 따른, 그리고 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 활성 성분, 즉 본 발명의 항체 또는 접합체 화합물 이외에, 약학적으로 허용 가능한 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 기타 당업자에게 잘 알려진 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 무독성이어야 하며 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 기타 물질의 정확한 특성은 투여 경로에 따라 달라지며, 이는 경구 투여 또는 주사, 예를 들어 피부, 피하 또는 정맥 투여일 수 있다.
경구 투여용 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고체 담체 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약학적 조성물은 일반적으로 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성 오일과 같은 액체 담체를 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로스 또는 기타 당류 용액 또는 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 글리콜이 포함될 수 있다. 캡슐은 젤라틴과 같은 고체 담체를 포함할 수 있다 .
정맥내, 피부 또는 피하 주사 또는 고통 부위에 주사하는 경우, 활성 성분은 발열원이 없고 적절한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액 형태일 것이다. 당업자는 예를 들어 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 락티드 링거 주사액과 같은 등장 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정제, 완충제, 항산화제 및/또는 기타 첨가제가 포함될 수 있다.
병태를 치료하는 맥락에서 본원에서 사용되는 용어 "치료"는 일반적으로 인간 또는 동물(예를 들어, 수의학 적용)에 상관없이, 예를 들어, 상태의 진행 억제, 및 진행 속도의 감소, 진행 속도의 정지, 상태의 퇴행, 상태의 개선 및 상태의 치유를 포함하는 일부 원하는 치료 효과가 달성되는 치료 및 요법에 관한 것이다. 예방 조치(즉, 예방, 방지)로서의 치료도 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "치료적 유효량"은 원하는 치료 요법에 따라 투여할 때 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 일부 원하는 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투여량의 양과 관한 것이다.
유사하게, 본원에 사용된 용어 "예방적 유효량"은 원하는 치료 요법에 따라 투여할 때 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 일부 원하는 예방 효과를 생성하는 데 효과적인 활성 화합물, 또는 활성 화합물을 포함하는 물질, 조성물 또는 투여량의 양과 관한 것이다.
용도(Use)
본 발명의 항체는 표적 위치를 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 표적 위치는 바람직하게는 증식성 세포 집단일 수 있다.
본 발명의 항체는 증식성 세포 집단에 존재하는 항원에 대한 항체이다. 일부 실시예에서, 항원은 증식성 세포 집단, 예를 들어 종양 세포 집단에 존재하는 항원의 양과 비교하여 비증식성 세포 집단 에서 부재하거나 감소된 수준으로 존재한다.
표적 위치는 시험관 내(인비트로), 생체 내(인비보) 또는 생체 외(익스비보)일 수 있다.
본 발명의 항체는 항암 활성에 유용한 것을 포함한다. 따라서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체를 제공한다. 유사하게, 본 발명은 증식성 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체의 용도를 제공한다.
본 발명에 의해 또한 약물 모이어티에 접합된 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체를 포함하는 항체 약물 접합체가 제공된다. 이러한 접합체는 항암 활성에 유용한 것을 포함한다. 특히, 본 발명의 접합체는 독소일 수 있는 약물 모이어티에 접합된, 즉 링커에 의해 공유 부착된 항체를 포함한다. 약물이 항체에 접합되지 않은 경우 약물은 세포 독성 효과가 있다. 따라서 약물 모이어티의 생물학적 활성은 항체에 대한 컨쥬게이션에 의해 조절된다. 본 발명의 항체-약물 접합체(ADC)는 유효량의 세포독성제를 종양 조직에 선택적으로 전달할 수 있어 더 큰 선택성, 즉 더 낮은 유효 용량이 달성될 수 있다.
따라서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 접합체 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 본원에 기술된 접합 화합물, 및 증식성 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서 본원에 기술된 접합 화합물의 용도를 제공한다.
당업자는 후보 컨쥬게이트가 임의의 특정 세포 유형에 대한 증식성 상태를 치료하는지 여부를 쉽게 결정할 수 있다.
용어 "증식성 질환"은 시험관내에서든 생체내에서든 신생물 또는 과형성 성장과 같이 바람직하지 않은 과도하거나 비정상적인 세포의 원치 않거나 통제되지 않는 세포 증식에 관한 것이다. 증식성 상태의 예에는 신생물 및 종양(예: 조직세포종, 신경아교종, 성상세포종, 골종), 암(예: 폐암, 소세포 폐암, 위장관암, 대장암, 대장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종, 흑색종), 림프종, 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애(예: 결합 조직의) 및 죽상동맥경화증을 포함하되 이에 국한되지 않는 양성, 전악성 및 악성 세포 증식을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
폐, 위장(예를 들어 장, 결장 포함), 유방(유방), 난소, 전립선, 간(liver, hepatic), 신장(kidney, renal), 방광, 췌장, 뇌 및 피부를 포함하나 이에 제한되지 않는 모든 유형의 세포가 치료될 수 있다.
특히 관심 있는 장애는 혈액 또는 림프와 같은 체액에서 순환하는 것으로 발견될 수 있는 순환하는 종양 세포와 같은 전이성 암 및 전이성 암 세포를 포함하는 암을 포함하지만 이에 제한되지 않습니다. 특히 관심 있는 암은 폐암, 유방암, 췌장암, 난소암, 신장암, 두경부암, 중피종, 교모세포종, 흑색종, 및 신경 교종, 수모세포종, 성상세포종 및 상의세포종과 같으나 이에 제한되지 않는 뇌종양을 포함한다 .
다른 관심 질환에는 IL-13Rα2가 과발현되거나 IL-13Rα2 길항작용이 임상적 이점을 제공하는 상태(예: 염증성 장 질환 및 섬유증과 같은 염증성 상태)가 포함된다.
본 발명의 항체 및 항체-약물 접합체(ADC)는 종양 항원의 과발현을 특징으로 하는 다양한 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용될 수 있음이 고려된다. 예시적인 병태 또는 과증식 장애는 양성 또는 악성 종양; 백혈병, 혈액학적 및 림프성 악성종양을 포함한다. 기타에는 신경, 신경교, 성상세포, 시상하부, 선상, 대식세포, 상피, 간질, 포배강, 염증, 혈관신생 및 자가면역 장애를 포함하는 면역학적 장애가 포함된다.
일반적으로, 치료될 질병 또는 장애는 암과 같은 과증식성 질병이다. 본원에서 치료될 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 편평 세포암(예: 상피 편평 세포암), 소세포 폐암을 포함하는 폐암, 비소세포 폐암, 폐의 선암종 및 폐의 편평 암종, 복막암, 간세포암, 위장관 암을 포함한 위(gastric)암 또는 위(stomach)암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간암(hepatoma), 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁 내막 또는 자궁 암종, 침샘암, 신장암(kidney 또는 renal), 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문암종, 음경암종, 뿐만 아니라 두경부암을 포함한다.
ADC 화합물이 치료에 사용될 수 있는 자가면역 질환은 류마티스 질환(예를 들어, 류마티스성 관절염, 쇼그렌 증후군, 경피증, SLE 및 루푸스 신염과 같은 루푸스, 다발근염/피부근염, 한랭글로불린혈증, 항인지질 항체 증후군, 및 건선성 관절염), 골관절염, 자가면역 위장 및 간 장애(예를 들어, 염증성 장 질환(예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 자가면역 위염 및 악성 빈혈, 자가면역 간염, 원발성 담즙성 간경변증, 원발성 경화성 담관염 및 복강 질환 질병), 혈관염(예를 들어, Churg-Strauss 혈관염, 베게너 육아종증 및 다발동맥염을 포함하는 ANCA 관련 혈관염), 자가면역 신경 장애(예를 들어, 다발성 경화증, 간대성 근간대 증후군, 중증 근무력증, 시신경척수염, 파킨슨병, 알츠하이머병, 자가면역 다발신경병증), 신장 장애(예를 들어, 사구체신염, Goodpasture's 증후군 및 Berger's 질병), 자가면역 피부 질환(예를 들어, 건선, 두드러기(urticaria, hives), 심상성 천포창, 수포성 유천포창 및 피부 홍반성 루푸스), 혈액 장애(예를 들어, 혈소판감소성 자반증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 수혈 후 자반증 및 자가면역 용혈성 빈혈), 죽상경화증, 포도막염, 자가면역 청력 질환(예를 들어, 내이 질환 및 청력 상실), 베체트병 질환, 레이노 증후군, 장기 이식 및 자가면역 내분비 장애(예를 들어 인슐린 의존성 진성 당뇨병(IDDM)과 같은 당뇨병 관련 자가면역 질환, 애디슨병 및 자가면역 갑상선 질환(예를 들어 그레이브스 병 및 갑상선염))을 포함한다. 보다 바람직한 이러한 질환은 예를 들어 류마티스성 관절염, 궤양성 결장염, ANCA 관련 혈관염, 루푸스, 다발성 경화증, 쇼그렌 증후군, 그레이브스병, IDDM, 악성 빈혈, 갑상선염 및 사구체신염을 포함한다.
제형(Formulations)
본 발명의 항체 및 접합체 화합물이 단독으로 사용(예를 들어, 투여)되는 것이 가능하지만, 이를 조성물 또는 제형으로 제공하는 것이 종종 바람직하다.
일부 실시예에서, 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 접합체 화합물, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물(예를 들어, 제형, 제제, 약제)이다.
일부 실시예에서 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 항체 또는 접합체 화합물과 함께 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 부형제, 보조제, 충전제, 완충제, 방부제, 항산화제, 윤활제, 안정제, 가용화제 , 계면활성제(예: 습윤제), 차폐제, 착색제, 향미제 및 감미제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업자에게 잘 알려진 하나 이상의 다른 약학적으로 허용 가능한 성분을 포함한다.
일부 실시예에서, 조성물은 다른 활성제, 예를 들어 다른 치료제 또는 예방제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 담체, 희석제, 부형제 등은 표준 약학 문서에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 약학적 첨가제 핸드북, 제2판(eds. M. Ash and I. Ash), 2001(Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), 레밍턴의 약학, 제20판, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; 및 약학적 부형제 핸드북, 제2판, 1994.
또한, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 [11C]-방사성 표지 접합체 또는 접합체 유사 화합물을 당업자에게 잘 알려진, 예를 들어 담체, 희석제, 부형제 등 하나 이상의 다른 약학적으로 허용 가능한 성분과 혼합하는 것을 포함하는 약학적 조성물의 제조 방법이 개시된다. 분리된 단위(예: 정제 등)로 제제화되는 경우 각 단위는 미리 결정된 양(투여량)의 활성 화합물을 함유한다.
본원에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 합당한 이익/위험 비율에 상응하는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 문제의(예. 인간) 대상체의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 성분, 물질, 조성물, 제형 등에 관한 것이다. 각 담체, 희석제, 부형제 등은 제형의 다른 성분과 상용성이라는 의미에서 "허용 가능"해야 한다.
본 발명의 제형은 약학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법은 활성 화합물을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 화합물을 담체(예를 들어, 액체 담체, 미분된 고체 담체 등)와 균일하고 친밀하게 결합시킨 다음, 필요한 경우 제품을 성형함으로써 제조된다.
제형은 신속하거나 느린 방출; 즉시, 지연, 시한 또는 지속 방출; 또는 이들의 조합을 제공하도록 제조될 수 있다.
비경구 투여(예: 주사에 의한)에 적합한 제형은 활성 성분이 용해, 현탁 또는 달리 제공되는(예: 리포좀 또는 기타 미립자에서) 수성 또는 비수성, 등장성, 무발열성, 멸균 액체(예: 용액, 현탁액)를 포함한다. 이러한 액체는 항산화제, 완충제, 방부제, 안정제, 정균제, 현탁제, 증점제 및 제형을 의도된 수용자의 혈액(또는 다른 관련 체액)과 등장성으로 만드는 용질과 같은 다른 약학적으로 허용 가능한 성분을 추가로 함유할 수 있다. 부형제의 예는 예를 들어 물, 알코올, 폴리올, 글리세롤, 식물성 오일 등을 포함한다. 이러한 제형에 사용하기에 적합한 등장성 담체의 예는 염화나트륨 주사액, 링거액 또는 락테이트 링거액을 포함한다. 전형적으로, 액체 중 활성 성분의 농도는 약 1 ng/ml 내지 약 10 ㎍/ml, 예를 들어 약 10 ng/ml 내지 약 1 ㎍/ml이다. 제형은 단위 용량 또는 다중 용량 밀봉 용기, 예를 들어 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수를 첨가하기만 하면 되는 동결건조(freeze-dried, lyophilised) 상태로 보관할 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로 준비할 수 있다.
복용량(Dosage)
본 발명의 칸티바디, 접합체 화합물 및 조성물의 적절한 투여량은 환자마다 다를 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 최적의 용량을 결정하는 것은 일반적으로 위험이나 유해한 부작용에 대한 치료 효과 수준의 균형을 포함한다. 선택된 투여량 수준은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 화합물의 배설 속도, 치료 기간, 기타 조합으로 사용되는 약물, 화합물 및/또는 재료, 상태의 중증도, 및 환자의 종, 성별, 연령, 체중, 상태, 일반 건강 및 이전 병력을 포함하지만 이에 제한 되지 않는 다양한 인자에 따라 달라진다. 화합물의 양 및 투여 경로는 궁극적으로 의사, 수의사 또는 임상의의 재량에 따르지만, 일반적으로 투여량은 실질적으로 해롭거나 유해한 부작용을 미치지 않으면서 원하는 효과를 달성하는 작용 부위에서 국소 농도를 달성하도록 선택될 것입니다.
투여는 치료 과정 전체에 걸쳐 연속적으로 또는 간헐적으로(예를 들어, 적절한 간격으로 분할된 용량으로) 단일 용량으로 수행될 수 있다. 가장 효과적인 투여 수단 및 투여량을 결정하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며 요법에 사용되는 제형, 요법의 목적, 치료되는 표적 세포(들) 및 치료 대상에 따라 달라질 것이다. 단일 또는 다중 투여는 치료 의사, 수의사 또는 임상의에 의해 선택되는 용량 수준 및 패턴으로 수행될 수 있다.
일반적으로, 활성 화합물의 적합한 투여량은 1일 대상체의 체중 1 kg당 약 100 ng 내지 약 25 mg(보다 일반적으로 약 1 ㎍ 내지 약 10 mg)의 범위이다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 등인 경우, 투여되는 양은 모 화합물을 기준으로 계산되므로 사용되는 실제 중량은 그에 비례적으로 증가한다.
일 실시예에서, 활성 화합물은 하기 투여 요법에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 mg, 1일 3회.
일 실시예에서, 활성 화합물은 하기 투여 요법에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 150 mg, 1일 2회.
일 실시예에서, 활성 화합물은 하기 투여 요법에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 200 mg, 1일 2회.
그러나 일 실시예에서, 접합체 화합물은 하기 투여 요법에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 50 mg 또는 약 75 mg, 1일 3회 또는 4회.
일 실시예에서, 접합체 화합물은 하기 투여 요법에 따라 인간 환자에게 투여된다: 약 100 mg 또는 약 125 mg, 1일 2회.
상기 기재된 투여량은 항체, 접합체( 약물 모이어티 및 항체에 대한 링커 포함) 또는 제공된 약물 화합물의 유효량, 예를 들어 링커 절단 후 방출될 수 있는 화합물의 양에 적용될 수 있다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 상기 정의된 바와 같이 치료될 질병의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 환자의 항체에 대한 임상 병력 및 반응, 주치의의 재량에 따라 달라진다. 분자는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다. 질병의 유형 및 중증도에 따라, 분자의 약 1 mg/kg 내지 15 mg/kg(예를 들어, 0.1-20 mg/kg)이 예를 들어 1회 이상의 개별 투여에 의해 또는 연속 주입에 의해 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 일반적인 일일 복용량은 위에서 언급한 요인에 따라 약 1 mg/kg에서 100 mg/kg 이상 범위일 수 있다. 환자에게 투여되는 ADC의 예시적인 투여량은 환자 체중의 약 0.1 내지 약 10 mg/kg 범위이다. 수일 이상에 걸쳐 반복 투여하는 경우, 상태에 따라 원하는 질병 증상 억제가 발생할 때까지 치료를 지속한다. 예시적인 투여 섭생은 약 4 mg/kg의 초기 로딩 용량을 투여한 후 매주, 2주 또는 3주마다 추가 용량의 ADC를 투여하는 과정을 포함한다. 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 이 치료의 진행 상황은 기존의 기술과 분석법으로 쉽게 모니터링할 수 있다.
피험자/환자(Subject/Patient)
피험자/환자는 동물, 포유동물, 태반 포유동물, 유대류(예: 캥거루, 웜뱃), 단공류(예: 오리너구리 오리너구리), 설치류(예: 기니피그, 햄스터, 쥐, 마우스), 뮤린(예: 마우스), 토끼류(예: 토끼), 조류(예: 새), 개(예: 개), 고양이과(예: 고양이), 말(예: 말), 돼지(예: 돼지), 양(예: 양), 소(예: 소), 영장류, 유인원(예: 원숭이 또는 유인원), 원숭이(예: 마모셋, 개코원숭이), 유인원(예: 고릴라, 침팬지, 오랑우탄, 긴팔원숭이) 또는 인간일 수 있다.
또한, 피험자/환자는 예를 들어 태아와 같은 발달 형태 중 하나일 수 있다. 하나의 바람직한 실시예에서, 피험자/환자는 인간이다.
실시예(Embodiments)
본 발명은 항-IL13Rα2 항체를 제공한다. 본 발명의 항체의 구체적으로 고려되는 실시예는 다음을 포함한다:
인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체는 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15에 나타낸 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 중쇄; 및/또는 (i) 서열번호 16, 서열번호 17 및 서열번호 18에 나타낸 CDR; 및 (ii) 위치 30(서열번호 3을 참조하여 넘버링)에 있는 세린 잔기를 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 가변영역은 완전한 인간이다. 일 실시예에서 항체는 불변영역을 포함하는 완전한 인간 항체이다. 관련 실시예에서, 본 발명은 상기 항체 및 피롤로벤조디아제핀 이량체를 포함하는 항체 접합체를 제공한다. 일 실시예에서 경쇄는 인간 카파 경쇄이다.
인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함한다. 이러한 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및/또는 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역을 추가로 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역을 추가로 포함한다. 일부 실시예에서 가변영역은 완전한 인간이다. 일부 실시예에서 항체는 완전한 인간 항체이다. 예를 들어, 항체에 포함된 임의의 불변영역은 또한 완전 인간 항체일 수 있다.
따라서, 일부 실시예에서 항체는 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(iv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임; 또는
(v) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
일부 실시예에서, 항체는 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 추가로 포함한다.
인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 이러한 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역을 추가로 포함한다. 일부 실시예에서, 항체는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역을 추가로 포함한다. 일부 실시예에서 가변영역은 완전한 인간이다. 일부 실시예에서 항체는 완전한 인간 항체이다. 예를 들어, 항체에 포함된 임의의 불변영역은 또한 완전 인간 항체일 수 있다.
따라서, 일부 실시예에서 항체는 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(ii) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(iii) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임;
(iv) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 여기서 선택적으로 가변 도메인 및/또는 항체는 완전한 인간임.
일부 실시예에서, 항체는 서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 추가로 포함한다.
따라서, 본 발명의 구체적으로 고려되는 항체는 다음을 포함하는 것을 포함한다:
i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
viii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ix) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
x) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xi) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiii) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvi) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xviii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xix) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 및
xx) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역.
본 발명의 바람직한 항체는 다음을 포함하는 것을 포함한다:
- 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA; HuCL47 VH) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL);
- 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHAback) 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA; HuCL47 VL); 및
- 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역(VHA3) 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역(VKA2).
특히 바람직한 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체를 포함한다.
* * *
특징은 앞의 설명에서, 또는 다음 청구범위에서, 또는 첨부된 도면에서 개시되거나, 특정한 형태, 또는 개시된 기능을 수행하기 위한 수단의 관점으로 표현되거나, 또는 개시된 결과를 얻기 위한 방법 또는 프로세스는 적절하게 개별적으로 또는 이러한 특징의 임의의 조합으로 다양한 형태로 본 발명을 실현하는 데 사용될 수 있다.
본 발명은 위에서 설명된 예시적인 실시예와 관련하여 설명되었지만, 본 개시가 주어질 때 많은 등가 수정 및 변형이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 위에서 설명된 본 발명의 예시적인 실시예들은 예시적인 것으로 간주되며 제한되지 않는 것으로 간주된다. 설명된 실시예에 대한 다양한 변경이 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다.
의심의 여지를 없애기 위해 여기에 제공된 이론적 설명은 독자의 이해를 향상시키기 위한 목적으로 제공된다. 본 발명자들은 이러한 이론적인 설명에 얽매이기를 원하지 않는다.
여기에 사용된 섹션 제목은 구성 목적으로만 사용되며 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
이어지는 청구범위를 포함하여 본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 "함유하다" 및 "함유하다", "함유하는" 및 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계 그룹의 포함을 의미하지만 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계 그룹을 배제하지 않음을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다. 범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 값 및/또는 "약" 또 다른 특정 값으로 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현되는 경우, 다른 실시예는 하나의 특정 값에서 및/또는 다른 특정 값까지를 포함한다. 유사하게, 선행사 "약"을 사용하여 값이 근사치로 표현될 때, 특정 값이 다른 실시예를 형성한다는 것이 이해될 것이다. 숫자 값과 관련하여 "약"이라는 용어는 선택적이며 예를 들어 +/- 10%를 의미한다.
서열(SEQUENCES)
서열번호 1 [뮤린 CL47 VH, CDR 밑줄]
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFSNYLMNWVKQRPEQDLDWIGRIDPYDGDIDYNQNFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 2 [뮤린 CL47 VL, CDR 밑줄]
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQPPKLLIYAASRQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK
서열번호 3 [HuCL47 VH (클론 47 VHA), CDR 밑줄]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYLMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDGDIDYNQNFKDRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 4 [HuCL47 VL (클론 47 VKA), CDR 밑줄]
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDNYGISFMNWYQQKPGQAPRLLIYAASRQGSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK
서열번호 5 [클론 47 VHAback, CDR 밑줄]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYLMNWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDGDIDYNQNFKDRATLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 6 [클론 47 VHA1, CDR 밑줄]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYLMNWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDGDIDYNQNFKDRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 7 [클론 47 VHA2, CDR 밑줄]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYLMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDGDIDYNQNFKDRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 8 [클론 47 VHA3, CDR 밑줄]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSNYLMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDGDIDYNQNFKDRVTITRDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYGTAYGVDYWGQGTSVTVSS
서열번호 9 [클론 47 VKAback, CDR 밑줄]
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQAPRLLIYAASRQGSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK
서열번호 10 [클론 47 VKA1, CDR 밑줄]
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDNYGISFMNWFQQKPGQAPRLLIYAASRQGSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK
서열번호 11 [클론 47 VKA2, CDR 밑줄]
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVDNYGISFMNWYQQKPGQAPRLLIYAASRQGSGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQSKEVPWTFGGGTKLEIK
서열번호 12 [인간 IL13RA2(Uniprot Q14627)의 세포외 도메인(27-343)]
DTEIKVNPPQDFEIVDPGYLGYLYLQWQPPLSLDHFKECTVEYELKYRNIGSETWKTIITKNLHYKDGFDLNKGIEAKIHTLLPWQCTNGSEVQSSWAETTYWISPQGIPETKVQDMDCVYYNWQYLLCSWKPGIGVLLDTNYNLFYWYEGLDHALQCVDYIKADGQNIGCRFPYLEASDYKDFYICVNGSSENKPIRSSYFTFQLQNIVKPLPPVYLTFTRESSCEIKLKWSIPLGPIPARCFDYEIEIREDDTTLVTATVENETYTLKTTNETRQLCFVVRSKVNIYCSDDGIWSEWSDKQCWEGEDLSKKTLLRhhhhhh
Hhhhhh = C-terminal His Tag
서열번호 13 [HuCL47 CDRH1]
NYLMN
서열번호 14 [HuCL47 CDRH2]
RIDPYDGDIDYNQNFKD
서열번호 15 [HuCL47 CDRH3]
GYGTAYGVDY
서열번호 16 [HuCL47 CDRL1]
RASESVDNYGISFMN
서열번호 17 [HuCL47 CDRL2]
AASRQGS
서열번호 18 [HuCL47 CDRL3]
QQSKEVPWT
발명의 진술(STATEMENTS OF DISCLOSURE)
본 발명의 측면를 개략적으로 설명하는 다음의 번호가 매겨진 진술은 설명의 일부이다.
101. 인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체로,
서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역; 및
서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
102. 진술 101에 있어서, 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
103. 진술 101에 있어서, 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
104. 진술 101에 있어서, 항체는 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
105. 진술 101에 있어서, 항체는 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
106. 진술 101에 있어서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및
(i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
107. 진술 101 또는 102에 있어서, 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체.
108. 진술 101 내지 107 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 Fab, Fab', F(ab')2 및 scFv로 구성된 군에서 선택되는 항체 단편인 항체.
109. 진술 101 내지 108 중 어느 하나의 진술에 있어서, 하나 이상의 인간 항체로부터 유래된 항체 불변영역을 추가로 포함하는 항체.
110. 진술 101 내지 109 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 5×10-10 M 이하, 예를 들어 2.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 항체.
111. 진술 101 내지 110 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 1.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 항체.
112. 진술 101 내지 111 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체의 IL13Rα2에 대한 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체.
113. 진술 101 내지 112 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 더 높은 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
114. 진술 101 내지 113 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 인간 피험자에서 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 낮은 면역원성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
115. 진술 101 내지 114 중 어느 하나의 진술에 있어서, 항체는 인간 피험자에서 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체와 비교하여 개선된 안정성 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
116. 약물 모이어티(drug moiety)에 접합된 진술 101 내지 115 중 어느 하나의 진술에 따른 항체를 포함하는 항체 약물 접합체.
117. 진술 116에 있어서, 상기 약물 모이어티는 세포독성(cytotoxic) 약물 모이어티인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
118. 진술 101 내지 117 중 어느 하나의 진술에 따른 항체 또는 항체 약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
* * *
119. 인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체로,
서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역; 및
서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및/또는 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
120. 진술 119에 있어서, 상기 항체는 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체.
121. 진술 119 또는 120에 있어서, 상기 항체는
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역;
(iv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역; 또는
(v) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3를 포함하는 경쇄 가변영역
인 것을 특징으로 하는 항체.
122. 진술 119 내지 121 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함하는 항체.
123. 인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체로,
서열번호 4; 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 11로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역; 및
서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
124. 진술 123에 있어서, 상기 항체는 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 항체.
125. 진술 123 또는 124에 있어서, 상기 항체는
(i) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(ii) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
(iii) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
(iv) 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함하는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
인 것을 특징으로 하는 항체.
126. 진술 123 내지 121 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 3; 서열번호 5; 서열번호 6; 서열번호 7; 및 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체.
127. 진술 119 내지 126 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는
i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
iv) 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
v) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vi) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
vii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
viii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
ix) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
x) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xi) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiii) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xiv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xv) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvi) 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xvii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xviii) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역;
xix) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역; 또는
xx) 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역
을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
128. 진술 119 내지 127 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역, 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
129. 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및/또는 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변영역; 및/또는
서열번호 16의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1, 서열번호 17의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및/또는 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변영역
을 포함하는 항체.
130. 진술 129에 있어서, 상기 항체는 인터류킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
131. 진술 129 또는 130에 있어서, 상기 항체는 위치 30(서열번호 3을 참조하여 넘버링)에 세린 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
132. 진술 129 내지 131 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 가변영역은 완전한 인간인 것을 특징으로 하는 항체.
133. 진술 129 내지 132 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 완전한 인간 항체인 것을 특징으로 하는 항체.
134. 진술 129 내지 133 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 경쇄는 인간 카파 경쇄인 것을 특징으로 하는 항체.
135. 진술 119 내지 134 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 Fab, Fab', F(ab')2 및 scFv로 구성된 군에서 선택되는 항체 단편인 것을 특징으로 하는 항체.
136. 진술 119 내지 134 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 하나 이상의 인간 항체로부터 유래된 항체 불변영역을 추가로 포함하는 항체.
137. 진술 119 내지 진술 136 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 5×10-10 M 이하, 예컨대 2.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
138. 진술 119 내지 진술 137 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 1.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
139. 진술 119 내지 138 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체의 IL13Rα2에 대한 결합을 경쟁적으로 억제하는 것을 특징으로 하는 항체.
140. 진술 119 내지 139 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 더 높은 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
141. 진술 119 내지 140 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 낮은 면역원성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
142. 진술 119 내지 141 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체와 비교하여 개선된 안정성 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
143. 약물 모이어티에 접합된 진술 119 내지 142 중 어느 하나에 따른 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 .
144. 진술 143에 있어서, 상기 약물 모이어티는 세포독성 약물 모이어티인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
145. 진술 144에 있어서, 상기 세포독성 약물 모이어티는 피롤로벤조디아제핀 이합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
146. 진술 119 내지 145 중 어느 하나에 따른 항체 또는 항체 약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
* * *
201. 치료 방법에 사용하기 위한, 진술 101 내지 146 중 어느 하나에 따른 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물.
202. 대상체에서 증식성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한, 진술 101 내지 146 중 어느 하나에 따른 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물.
203. 진술 202에 있어서, 상기 증식성 질환은 암인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물.
204. 진술 203에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 췌장암, 난소암, 신장암, 두경부암, 중피종, 교모세포종, 흑색종, 및 신경 교종, 수모세포종, 성상세포종 및 상의세포종과 같은 그러나 이에 제한되지 않는 뇌종양으로 구성된 군에서 선택되는 암인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물.
205. 치료 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에서, 진술 101 내지 146 중 어느 하나에 따른 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물의 용도.
206. 대상체에서 증식성 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에 서, 진술 101 내지 146 중 어느 하나에 따른 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물의 용도.
207. 진술 206에 있어서, 상기 증식성 질환은 암인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물의 용도.
208. 진술 207에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 췌장암, 난소암, 신장암, 두경부암, 중피종, 교모세포종, 흑색종, 및 신경 교종, 수모세포종, 성상세포종 및 상의세포종과 같은 그러나 이에 제한되지 않는 뇌종양으로 구성된 군에서 선택되는 암인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물의 용도.
209. 증식성 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 진술 101 내지 146 중 어느 하나에 따른 항체, 항체 약물 접합체 또는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 증식성 질환을 치료하는 방법.
210. 진술 209에 있어서, 상기 대상체에게 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물과 함께 화학요법제를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
211. 진술 208 내지 210 중 어느 하나의 진술에 있어서, 상기 암은 폐암, 유방암, 췌장암, 난소암, 신장암, 두경부암, 중피종, 교모세포종, 흑색종, 및 신경 교종, 수모세포종, 성상세포종 및 상의세포종과 같은 그러나 이에 제한되지 않는 뇌종양으로 구성된 군에서 선택되는 암인 것을 특징으로 하는 방법.
* * *
301. 진술 101 내지 115 또는 119 내지 142 중 어느 하나에 따른 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
302. 진술 301의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
303. 진술 302에 있어서, 상기 벡터는 발현벡터인 것을 특징으로 하는 벡터.
304. 진술 302 내지 303 중 어느 하나에 따른 벡터를 포함하는 숙주세포.
305. 진술 304에 있어서, 상기 숙주세포는 원핵, 진핵 또는 포유류 세포인 것을 특징으로 하는 숙주세포.
예(EXAMPLES)
재료 및 방법(MATERIALS AND METHODS)
항체의 발현 및 정제(Expression and Purification of Antibodies)
제조업체의 지침에 따라 세포주를 배양하고 확장하였다. Expi293F™ 세포는 Expi293™ 발현 배지(ThermoFisher A1435102)에서 성장하였다. 간략히 설명하면, 세포를 125 mL 진탕 배양 플라스크(Corning™ 431143)에서 37℃ 오비탈 인큐베이터, 125 rpm 및 8% CO2 분위기에서 배양하고 방법 전체에 걸쳐 3-5×106 세포/ml로 유지하였다. 세포 밀도는 LUNA-II™ 자동 세포 계수기(Logo Biosystems Ltd)를 사용하여 트리판 블루 배제 분석에 의해 이중으로 측정되었다. Thermo Fisher 프로토콜에 설명된 대로 두 세포주에 대해 30 mL 부피의 DNA 형질감염 절차를 따랐다. 형질감염 당일에, ≥95% 생존율을 갖는 세포(현미경/세포 카운터를 통해 검사)를 선택하고 25.5 mL의 세포 특이적 발현 배지에서 Expi293F™에 대해 2.5×106/ml로 희석하였다. Expi293F™의 경우 30μg의 플라스미드 DNA(15μg 중쇄 + 15μg 경쇄)를 Opti-MEM® I 감소된 혈청 배지(ThermoFisher 31985070)에서 총 1.5 mL로 희석하고 동시에 81μL의 ExpiFectamine™293 시약을 별도의 바이알에 Opti-MEM® I 감소된 혈청 배지에서 총 1.5mL로 희석하였다. 각각을 부드럽게 혼합하고 실온에서 5분 동안 배양한 다음 조심스럽게 혼합하여 총 부피 3mL를 수득하였다. 이를 실온에서 추가 20분 동안 인큐베이션하여 DNA-지질 복합체가 형성되도록 한 후, 혼합물을 조심스럽게 세포 플라스크에 첨가하였다. 5일째에 배양물을 수확하고, 앞서 설명한 바와 같이 LUNA-II™ 자동 세포 계수기를 사용하여 세포 생존율 및 밀도를 측정하였다. 세포를 수확하기 위해 원심분리(2000G, 15분, 4℃)하고 상청액을 제거한 다음 정제하기 전에 0.22 μm 필터를 통해 멸균 여과하였다. 정제는 표준 단백질 A 크로마토그래피에 의해 이루어졌다.
엘리사(ELISA)
IL13RA2-6His(27-343)의 재조합 인간 세포외 도메인은 Sino Biological(Ref 10350-H08H)에서 입수하였다. 50 ㎕의 1 ㎍/ml 인간 IL13RA2/PBS를 MaxiSorp ELISA 플레이트에 4℃에서 밤새 코팅하였다. 다음날 아침, 플레이트를 PBS/Tween20 0.02%로 세척하였다. 각 웰에는 200 μl의 Superblock 차단 완충액이 추가되고 궤도 진탕기에서 120 rpm으로 1시간 동안 실온에서 배양된다. PBS/Tween20 0.02%에서 각 항체 변이체의 희석액을 사용하여 각 항체의 일련의 희석액을 준비하였다. 항체를 차단된 항원 코팅 플레이트에 첨가하고 오비탈 진탕기에서 120 rpm으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 플레이트를 200 μl의 PBS/Tween20 0.02%로 3회 세척하고 75 μl의 이차 항체(PBS/Tween20 0.02%에서 1/4000으로 희석된 마우스 항-인간-HRP)를 웰에 첨가하고 오비탈 진탕기에서 120 rpm으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 플레이트를 200 ㎕의 PBS/Tween20 0.02%로 3회 세척하였다. ELISA를 전개하기 위해 75μl의 TMB-Turbo 기질을 웰에 첨가하고 오비탈 진탕기에서 120 rpm으로 진탕하면서 실온에서 파란색이 나타날 때까지 배양한 다음 0.6N HCl 75 μl를 첨가하여 반응을 중지한다. 450 nM에서 Envision에서 플레이트를 판독하고 GraphPad 프리즘 소프트웨어를 사용하여 곡선을 분석한다.
열 이동 분석(Thermal Shift Analysis)
단백질 열 이동 염료, 2.5 μL 1:1000 희석액(Life Technologies cat.446148)을 96 웰 광학 플레이트에서 시료 단백질(PBS에서 0.5 mg/mL의 17.5 μL)에 첨가하고 완전히 혼합하였다. 플레이트를 광학 접착 필름으로 밀봉하고 500 g에서 1분 동안 원심분리하여 웰 내의 기포를 제거한 후 얼음 위에 두었다. 밀봉된 플레이트를 7500 Real-Time PCR 시스템에 도입한 후 실험을 다음과 같이 설정하였다.
Figure pct00001
데이터는 단백질 열 이동 v1.2 소프트웨어(Life Technologies)를 사용하여 분석되었다.
가속 안정성 분석(Accelerated stability analysis)
항체는 ELISA, SEC, HIC 및 RP 크로마토그래피로 분석하기 전에 멸균 PBS 에서 45℃에서 7-8일 동안 배양되었다.
비아코어 분석(Biacore Analysis)
Human IL13RA2-6His 코팅된 센서를 사용한 비아코어 분석을 사용하여 클론 47 변이체의 겉보기 친화도 상수를 계산하였다. 일련의 항체 변이체 희석액을 IL13RA2 센서 표면에 600초 동안 적용하여 결합 상수 Ka를 계산하고 완충액(HBS-EP+)을 1800초 동안 적용하여 해리 상수 Kd를 계산하였다. 두 상수의 비율은 항체의 2가가 결합 동역학에 영향을 미치므로 명백한 KD를 제공할 것이다.
HPLC 크기 배제 크로마토그래피(HPLC Size exclusion chromatography, SEC)
SEC 분석은 TSKgel Super SW mAb HTP 4 um 4.6 mm×15 cm 컬럼을 사용하는 Shimadzu HPLC 시스템(또는 동등한 시스템)을 사용하여 수행되었다. 이동상은 200 mM 인산칼륨, 250 mM 염화칼륨, 10% v/v i-프로판올, pH 6.95, 유속 0.5 ml/분 및 280 nm에서의 검출이었다.
HPLC 소수성 상호작용 크로마토그래피(HPLC Hydrophobic interaction chromatography, HIC)
HIC 분석 SEC 분석은 Proteomix HIC Butyl-NP5, 5 um, 비다공성, 4.6×35 mm(Sepax) 컬럼을 사용하는 Shimadzu HPLC 시스템(또는 동등한 시스템)을 사용하여 수행되었다. 이동상 A는 1.25 M (NH4)2SO4, 25 mM NaOAc(pH 5.50)이고, 이동상 B는 75% 25 mM NaOAc(pH 5.50), 25% i-프로판올이며 유속은 0.8 ml/분이며 214nm에서의 검출이었다.
HPLC 역상 크로마토그래피(HPLC Reverse phase chromatography)
역상 크로마토그래피는 Aeris Widepore XB-C18, 200A, 3.6 μm, 2.1×150 mm(Phenomenex, 00F-4482-AN) 컬럼을 사용하여 Shimadzu HPLC 시스템(또는 동등한 시스템)을 사용하여 수행하였다. 이동상 A는 물 + 0.1% v/v TFA이고 이동상 B는 아세토니트릴 + 0.1% v/v TFA였다. 샘플은 로딩 전에 30 μl의 물, 20μl의 NaBorate 및 10 μL의 DTT가 첨가된 40 μL의 샘플(5 mg/ml)을 첨가하여 준비하였다. 그런 다음 이를 37℃에서 30분 동안 배양하고, 49:49:2 아세토니트릴/물/포름산 100μl를 첨가하였다. 컬럼은 80℃의 온도에서 1 mL/분으로 작동되었으며 214 nm에서 검출되었다.
체외 세포독성( In vitro cytotoxicity)
A375/NCI-H1299 세포는 EDGE 플레이트의 웰에 100μL의 세포를 추가하여 완전 성장 상태에서 5×104 세포/mL로 희석되었다. 세포를 37℃/5% CO2에서 2-6시간 동안 배양하여 세포가 부착될 시간을 허용하였다. ADC를 50 ㎍/mL에서 47.7pg/mL까지 11포인트, 1/4 연속 희석으로 희석하여 최종 음성 대조군 샘플, 즉 ADC를 남기지 않고 각 농도를 두 번 실행하였다. 희석된 ADC를 표적 세포를 함유하는 EDGE 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 가습 인큐베이터에서 5일(~120시간) 동안 인큐베이션하였다. ADC의 세포 독성 효과를 확인하기 위해 Cell Titre Glow(Promega)를 사용하고 판독 용액 40μL를 플레이트의 각 웰에 추가하고 37℃/5% CO2에서 1-5시간 동안 배양하였다. 인큐베이션 후 플레이트를 광학 판독기(Molecular Devices Spectramax i3X)에서 판독하고 데이터를 기계 고유의 소프트웨어(Softmax Pro)로 분석하였다. 전반적으로 데이터는 각 세포주를 3중으로 실행한 결과이다.
FACS 분석(FACS Analysis)
NCI-H1299 세포를 분석 완충액(PBS 중 0.1% BSA/0.1% 아지드화 나트륨)에서 2×106 세포/mL로 희석하고 96-웰 플레이트에 웰당 50 μL를 첨가하였다. HuCL47 및 클론 47 항체를 40 ㎍/ml(266 nM)의 최고 농도로 희석하고 완충제 단독으로 7회 희석을 위해 1:4로 희석하였다. 50 μL의 항체를 50 μL의 세포에 첨가하여 20μg/ml의 농도를 얻었다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 플레이트를 원심분리하고 3회 세척하였다. 염소 F(ab')2 Anti-Human IgG Alexa Fluor 488-접합된 항체(Life Technologies Cat. No. H10120)를 분석 완충액에서 검출하기 위해 1/250 희석액으로 사용하였으며, 50 μL를 세포에 첨가하고 1시간 후에 실온에서 인큐베이션한 후 세포를 원심분리하고 전과 같이 세척하고 7.5% 포름알데히드로 고정하고 FlowJo를 사용하여 데이터 분석을 수행한 Flow cytometer에서 분석하였다.
실시예 1 - 인간화 항체의 설계 및 생산
다수의 인간화된 항-인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2) 항체 변이체가 뮤린 항-IL13Rα2 항체 "클론 47"로부터 시작하여 생성되었다. 뮤린 "클론 47"의 중쇄 및 경쇄 가변영역 서열은 각각 서열번호 1 및 서열번호 2이다. 이들은 인간 가변 단편 데이터베이스와 비교되었고, Vernier에서 클론 47과 가장 높은 상동성을 갖는 인간 프레임워크 영역 및 표준 잔기가 CDR 이식을 위해 선택되었다.
VH 인간화를 위해, IGHV1-3 및 IGHJ1-01 프레임워크는 CDR 접목을 위해 선택되었다. 원래 IGHV1-3 인간 프레임워크의 트레오닌 T30은 세린 S30으로 대체되었으며, 이는 인간 생식계열의 이 위치에서도 매우 일반적이며 뮤린 VH 서열의 이 위치에서 발견되는 세린과 일치한다. 생성된 인간화 VH 도메인(서열번호 3)은 "클론 47 VHA"로 명명되었다.
클론 47 VH의 추가 인간화 버전은 "클론 47 VHA"(서열번호 3) 서열에 역돌연변이를 도입함으로써 생성되었다. 이들 인간화 VH 도메인을 "클론 47 VHAback "(서열 번호 5), "클론 47 VHA1"(서열 번호 6), "클론 47 VHA2"(서열 번호 7) 및 "클론 47 VHA3"(서열번호 8)으로 지정하였다. 변이체 "클론 47 VHA1", "클론 47 VHA2" 및 "클론 47 VHA3"은 각각 뮤린 VCI 잔기 M48, V71 및 K73(카밧에 따른 번호 지정)의 영향을 평가하기 위해 생성하였다.
VL 인간화를 위해, IGKV3-NL5 및 IGHJ2-01 프레임워크는 CDR 접목을 위해 선택되었다. 생성된 인간화 VL 도메인(서열번호 4)은 "클론 47 VKA"로 명명되었다.
클론 47 VL의 추가 인간화 버전은 "Clone 47 VKA"(서열번호 4) 서열에 역돌연변이를 도입하여 생성되었다. 이들 인간화 VL 도메인은 "클론 47 VKAback "(서열 번호 9), "클론 47 VKA1"(서열 번호 10) 및 "클론 47 VKA2"(서열 번호 11)로 지정하였다. 변이체 "클론 47 VKA1" 및 "클론 47 VKA2"는 2개의 뮤린 VCI 페닐알라닌 잔기 F36 및 F87(둘 다 인간 생식계열의 티로신 잔기임)의 영향을 평가하기 위해 생성되었다.
생성된 각각의 경쇄 및 중쇄 변이체는 클로닝하고 쌍을 이루고 Expi293 세포에 형질감염시키고 발현 및 정제하였다. 표 1은 Expi293 세포에서 중쇄 및 경쇄 구조물의 일시적 동시 형질감염의 발현 수준 및 항체 수율을 나타내었다. 정제된 항체 3 ml를 수득하였다. (*)로 표시된 클론은 200 μg/ml 이상의 발현 수준을 갖고 추가 분석을 위해 선택되었다.
인간화 변이체의 발현
VH 구조 VK 구조 IgG μg/ml Yield (mg)
Clone 47 VHA* 클론 47 VKA 281 0.843
클론 47 VHA 클론 47 VKAback 175 0.525
클론 47 VHA* 클론 47 VKA1 231 0.693
클론 47 VHA* 클론 47 VKA2 300 0.900
클론 47 VHAback* 클론 47 VKA 312 0.936
클론 47 VHAback 클론 47 VKAback 100 0.300
클론 47 VHAback* 클론 47 VKA1 243 0.729
클론 47 VHAback* 클론 47 VKA2 212 0.636
클론 47 VHA1 클론 47 VKA 175 0.525
클론 47 VHA1 클론 47 VKAback 112 0.336
클론 47 VHA1 클론 47 VKA1 175 0.525
클론 47 VHA1 클론 47 VKA2 143 0.429
클론 47 VHA2 클론 47 VKA 187 0.561
클론 47 VHA2 클론 47 VKAback 131 0.393
클론 47 VHA2 클론 47 VKA1 187 0.561
클론 47 VHA2 클론 47 VKA2 168 0.504
클론 47 VHA3 클론 47 VKA 156 0.468
클론 47 VHA3 클론 47 VKAback 137 0.411
클론 47 VHA3 클론 47 VKA1 81 0.243
클론 47 VHA3* 클론 47 VKA2 200 0.600
IL13Rα2에 대한 각각의 인간화 클론의 결합을 ELISA로 평가하였다. 테스트된 모든 클론은 IL13Rα2에 대한 결합이 유사하게 나타났다.
실시예 2 - 인간화 항체의 특성화
키메라(Ch) 클론 47 및 인간 IL13Rα2에 대한 선택된 인간화 변이체의 결합 친화도를 Biacore에서 측정하였다. 결과는 아래 표 2에 나와있다. 명백한 친화도는 인간화 변이체가 키메라(Ch) 클론 47과 비교하여 인간 IL13Rα2에 대한 개선된 결합을 나타냄을 보여준다.
Variants K ass (1/Ms) K diss (1/s) K D App (nM)
Ch 클론 47 1.25x105 6.58x10-5 0.53
VHA/VKA 1.12x105 1.12x10-5 0.10
VHA/VKA1 1.24x105 2.65x10-5 0.21
VHA/VKA2 1.31x105 8.20x10-6 0.06
VHAback/VKA 1.15x105 5.30x10-6 0.05
키메라 클론 47 및 선별된 인간화 변이체의 안정성은 8일 동안 37℃ 대 4℃에서 단백질 열 이동 및 온도 안정성 분석으로 평가되었다. 결과는 하기 표 3에 나타내었다. 스트레스 조건에 적용된 선택된 인간화 변이체는 키메라 클론 47에 필적하는 안정성을 보여준다.
8 일 안정성 (PBS)
4 o C 37 o C
클론 PTS T m SEC RP HIC SEC RP HIC
Ch 클론 47 71.4 4.86/97.0 3.80/3.48 2.19 4.88/84.9 3.80/3.47 2.19
VHA/VKA 73.1 4.84/96.8 3.79/3.42 2.18 4.85/89.6 3.79/3.41 2.18
VHA/VKA1 70.3 4.84/96.6 3.79/3.45 2.19 4.84/89.2 3.79/3.55 2.18
VHA/VKA2 72.0 4.87/93.0 3.78/3.52 2.19 4.85/92.6 3.78/3.53 2.18
VHAback/VKA 74.1 4.82/97.3 3.78/3.40 2.19 4.83/93.1 3.78/3.39 2.18
VHAback/VKA1 72.3 4.82/97.8 3.79/3.43 2.19 4.83/91.2 3.80/3.54 2.19
VHA3/VKA2 71.9 4.83/97.5 3.76/3.42 2.19 4.84/92.1 3.75/3.52 2.19
단백질 열 이동(PTS): ℃에서 평균 Tm(quadruplicates)
SEC: 용출 시간 (분)/% 모노머
RP: HC/LC 머무른 시간 (분)
HIC: 머무른 시간 (분)
IL13Rα2에 대한 표 3에 나열된 변이체의 결합은 4℃ 또는 45℃에서 8일 동안 배양한 다음 ELISA에 의해 평가되었다. 표 4에 나타낸 바와 같이, 시험된 변이체 중 VHA/VKA 변이체만이 스트레스 조건(45℃에서 8일 동안 배양)으로 인한 결합 감소를 나타내지 않았으며, 이는 가장 안정적임을 나타낸다. 이러한 결합 데이터는 또한 인간화 변이체 VHAback /VKA 및 VHA3/VKA2가 키메라 클론 47과 비교하여 개선된 안정성 특성을 가짐을 나타낸다.
클론 47 변이체 EC 50 45 o C (ng/ml) EC 50 4 o C (ng/ml)
Ch 클론 47 16.8 77.7
VHA/VKA 18.4 17.8
VHA/VKA1 12.3 58.1
VHA/VKA2 20.4 147.9
VHAback/VKA 16.4 45.6
VHAback/VKA1 12.8 1012.0
VHA3/VKA2 12.3 25.8
이 데이터에 기초하여, 서열번호 3의 VH 및 서열번호 4의 VL을 포함하는 VHA/VKA 변이체(마우스 등 돌연변이가 도입되지 않은 완전한 인간)가 가장 잘 수행된다. 이 인간화 항-IL13Rα2 항체를 "HuCL47"로 명명하였다.
뮤린 "클론 47" 및 "HuCL47"의 서열 비교를 도 1에 나타내었다.
실시예 3 - 이론적 pI ANTI-IL13Rα2 항체
위에서 설명한 특정 항-IL13Rα2 항체의 이론적 pI는 https://web.expasy.org/protparam/에서 사용할 수 있는 "Protparam" 도구를 사용하여 중쇄 및 경쇄 서열을 기반으로 계산되었다. 결과는 표 5에 나타내었다.
항체 VH / VL 서열 pI
Ch 클론 47 SEQ ID NO: 1 / SEQ ID NO: 2 6.95
VHA/VKA (HuCL47) SEQ ID NO: 3 / SEQ ID NO: 4 7.63
VHAback/VKAback SEQ ID NO: 5 / SEQ ID NO: 9 7.64
VHA1/VKA1 SEQ ID NO: 6 / SEQ ID NO: 10 7.64
VHA2/VKA2 SEQ ID NO: 7 / SEQ ID NO: 11 7.28
실시예 4 - 클론 47과 HuCL47의 비교
키메라 클론 47 및 HuCL47은 NCI-H1299 세포 및 변형되지 않은 정제된 항체를 사용하는 표준 FACS 분석에 의해 NCI-H1299 세포에 대한 결합과 관련하여 비교되었다. 키메라 클론 47 및 HuCL47에 접합된 피롤로벤조디아제핀 이량체(PBD) 탄두를 사용하여 A375 및 NCI-1299 세포 모두에 대해 시험관내 세포독성 분석을 수행하였다.
결과는 도 2(NCI-H1299 세포에 대한 결합), 도 3(IL13Rα2에 대한 결합), 표 6(NCI-H1299 세포에 대한 세포독성) 및 표 7(A-375 세포에 대한 세포독성)에 나타내었다.
ADC EC 50 (pM)
Ch 클론 47-PBD 135.3
VHA/VKA (HuCL47)-PBD 113.7
B12-PBD 12400
ADC EC 50 (pM)
Ch 클론 47-PBD 7.6
VHA/VKA (HuCL47)-PBD 7.8
B12-PBD 6864
* * *
참조문헌
본 발명 및 본 발명이 속하는 최신 기술을 보다 완전하게 기술하고 개시하기 위해 다수의 간행물이 위에 인용되어 있다. 이들 각각의 참조문헌 전체가 여기에 포함된다.
표준 분자 생물학 기술에 대해서는 Sambrook, J., Russel, D.W. 분자 클로닝, 실험실 매뉴얼. 3 에디션. 2001, 콜드 스프링 하버, 뉴욕: 콜드 스프링 하버 실험실 프레스를 참조한다.

Claims (19)

  1. 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2(IL13Rα2)에 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 추가로 포함하는 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 5×10-10 M 이하, 예를 들어 2.5×10-10 M 이하 또는 1.5×10-10 M 이하의 친화도(KD)로 IL13Rα2와 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체의 IL13Rα2에 대한 결합을 경쟁적으로 억제하는 것을 특징으로 하는 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 더 높은 친화도(KD)로 IL13Rα2에 결합하는 것을 특징으로 하는 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 피험자에서 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체보다 낮은 면역원성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간 피험자에서 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변영역 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변영역, 및 선택적으로 항체 불변영역을 포함하는 항체와 비교하여 개선된 안정성 특성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 아이소타입(isotype) IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 불변영역, 또는 돌연변이된 IgG 불변영역, 및 선택적으로 아이소타입 카파 또는 람다의 경쇄 불변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체.
  9. 제8항에 있어서, 상기 불변영역은 인간 유래인 것을 특징으로 하는 항체.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, 또는 scFv인 것을 특징으로 하는 항체.
  11. 약물 모이어티(drug moiety)에 접합된 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 항체 약물 접합체로, 선택적으로 상기 약물 모이어티는 세포독성(cytotoxic) 약물 모이어티인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
  12. 제11항에 있어서, 상기 약물 모이어티는 피롤로벤조디아제핀 이합체(pyrollobenzodiazepine dimer)를 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항체 약물 접합체, 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  14. 치료 방법에 사용하기 위한, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물로, 선택적으로 상기 치료 방법은 암 치료 방법인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물.
  15. 치료 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물의 용도로, 선택적으로 상기 치료 방법은 암 치료 방법인 것을 특징으로 하는 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물의 용도.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 항체, 항체 약물 접합체, 또는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 증식성 질환을 치료하는 방법으로, 선택적으로 상기 증식성 질환은 암인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  18. 제17항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로, 선택적으로 상기 벡터는 발현벡터인 것을 특징으로 하는 벡터.
  19. 제18항에 따른 벡터를 포함하는 숙주세포로, 선택적으로 상기 숙주세포는 원핵(prokaryotic), 진핵(eukaryotic), 또는 포유류(mammalian) 세포인 것을 특징으로 하는 숙주세포.
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