KR20230036758A - 수면유도 및 불면증 치료용 효소처리 초고압 혼합추출물 - Google Patents

수면유도 및 불면증 치료용 효소처리 초고압 혼합추출물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 수면유도 및 불면증 치료용 효소처리 초고압 혼합추출물 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 홉 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 신경세포를 스트레스로부터 보호할 수 있어 수면 유도 및 불면증 치료용 조성물, 기능성 식품, 약제학적 의약품 소재로 유용한 효과가 있다.

Description

수면유도 및 불면증 치료용 효소처리 초고압 혼합추출물 {MIXED EXTRACTION OF ENZYME TREATMENT ULTRAHIGH PRESSURE FOR SLEEP INDUCING AND INSOMNIA}
본 발명은 수면유도 및 불면증 치료용 효소처리 초고압 혼합추출물 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 홉(Humulus lupulus)을 포함하는 추출물을 유효성분으로 하여 수면유도 및 불면증 치료용 조성물, 또는 건강 식품에 관한 것이다.
수면은 삶의 질을 평가하는 필수적인 건강 요소이다. 수면 장애는 항상성의 조절장애를 일으키고 염증 관련 질환 및 만성 질환에 취약해지도록 한다.
벤조디아제핀은 불면증 치료를 위해 가장 일반적으로 사용되는 약물이지만 기분장애, 폐질환, 인지결손과 같은 부작용을 나타내는 것으로 보고되었다. 이러한 부작용에 따라, 천연 대안제의 개발이 중요시되고 있다.
이에 열, 이질, 통증 등의 치료에 사용되는 고삼을 사용한 수면유도용 조성물이 개발되었다(한국공개특허 제2018-0091415호). 그러나 상기 고삼을 이용한 수면유도용 조성물은 카페인에 진정 효과를 나타내는 마트린(matrine)에 따른 진정 효과에 기인한 것으로, 부작용으로 과민성 방광염을 나타내어 신규 추출물에 대한 연구가 필요한 실정이다.
한편, 홉(Humulus lupulus)는 뽕나무과에 속하는 숙근성의 덩굴식물로서, 맥주의 원료로 사용되어 왔다. 홉은 루풀린(lupulin) 성분을 포함하며, 이는 휴물렌(Humulen), 미르센(Myrcene), 휴물론(Humulon), 루풀론(Lupulon), 호프레신 등 의 복잡한 혼합물이다. 홉은 진정 작용과 항균 작용이 우수하고, 생식기, 비뇨기 및 내분비 계통에도 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 또한, 화장품 원료로서의 홉은 수렴 효과 및 자극 완화 효과를 위하여 사용되고 있다. 본 발명에서 이용되는 '홉'은 홉의 다양한 기관(예: 잎, 꽃, 줄기 및 과실 등)을 이용하는 것일 수 있고, 바람직하게는 미성숙의 암꽃 이삭 또는 열매를 의미하는 것일 수 있다. 그러나, 수면을 유도하고 불면증을 예방 또는 치료하는 성능 과 관련하여 홉(Humulus lupulus)에 대해 개시되거나 공개된 바가 없다.
또한, 산사나무(Crataegus pinnatifida)는 장미과(Rosaceae)에 속하는 산리홍(Crataegus pinnatifida Bunge)의 성숙한 과실로서, 산사육 또는 산사자라고도 불리운다. 건조된 산사는 소화제(digestive aid)로서 사용되어 왔다. 산사추출물에 대해서는 종래 자유라디컬 소거효과(대한민국 등록특허 제10-0570120호), 알츠하이머 등의 퇴행성 뇌질환 치료효과(대한민국 등록특허 제10-1194974호), 전립선 관련 질환 치료효과(대한민국 등록특허 제10-공개특허 10-2017-0141845호), 항비만 효과(대한민국 등록특허 제10-0965623호) 및 탈모방지효과(대한민국 공개특허 제10-2010-0007003호) 등 다양한 효과가 연구되었지만, 수면 유도 또는 불면증 예방과 관련된 효과는 보고된 바 없다.
이에 본 발명자들은 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 사용한 혼합물로부터 수면을 유도하는 진정 효과와 더불어 스트레스성 불면증 예방 효과를 발현할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 홉(Humulus lupulus)를 포함하는 추출물을 유효성분으로 하는 효소처리액의 초고압 추출물을 이용한 수면 유도능과 스트레스성 불면증 예방능을 발현하는 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 상기 목적 및 기타 목적들은 하기 설명된 본 발명에 의하여 모두 달성될 수 있다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매와 분해효소인 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase)을 이용하여 얻어진 효소 처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면유도 및 불면증 치료용 조성물을 제공한다.
상기 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)는 홉(a), 산사나무(b) 및 발레리안(c)이 1:1~2:1~2중량비를 만족할 수 있다.
상기 추출용매는 물, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을, 상기 고상의 건조물 중량 대비 5 내지 20 배의 중량으로 포함할 수 있다.
상기 셀룰라아제 및 펙티나아제는 1: 0.5~1.5의 중량비로 포함하며, 상기 셀룰라아제와 펙티나아제의 총 함량은 상기 고상의 건조물 총 무게 대비 0.01 내지 0.1 배의 중량으로 사용할 수 있다.
상기 효소 처리는 20 내지 70℃ 하에, 1 내지 5시간 동안 50 내지 500 rpm 교반하면서 수행할 수 있다.
상기 초고압 추출은 10 내지 200 MPa의 압력으로 20 내지 70 ℃ 하에 1 내지 120분간 고압처리 후, 리플럭스 하에 60 내지 70℃ 에서 2 내지 3 시간 동안 환류 추출한 것일 수 있다.
본 발명에 따르면, 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 발현하는 홉 유래 효소처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 하여 스트레스로부터 신경세포를 보호할 수 있는 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 실시예 1에서 수득된 샘플(HCV-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(HCV-1 내지 HCV-3)의 4종에 대한 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거활성을 대비한 그래프이다.
도 2는 실시예 1에서 수득된 샘플(HCV-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(HCV-1 내지 HCV-3)의 4종에 대한 신경세포 보호 효과를 대비한 그래프이다.
도 3은 실시예 1에서 수득된 샘플(HCV-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(HCV-1 내지 HCV-3)의 4종에 대한 수면유도 효과를 대비한 그래프이다.
도 4는 실시예 1에서 수득된 샘플(HCV-4)과 비교예 1 내지 3에서 수득된 샘플(HCV-1 내지 HCV-3)의 4종에 대한 세포독성을 대비한 그래프이다.
이하 본 발명에 대한 이해를 돕기 위하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니되며, 발명자는 발명을 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 점을 감안하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야 한다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 이용한 고상(solid phase)의 건조물을 제조하고 여기에 추출용매 및 효소를 이용하여 얻어진 효소처리액을 초고압 처리하는 방식으로 추출물을 제조할 경우 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 발현함으로써, 스트레스로부터 신경세포를 보호할 수 있는 조성물을 제공할 수 있다.
열수 추출물, 에탄올 환류 추출물, 혹은 초고압 추출물 등은 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 나타내지 않았으며, 또한 아래의 실험예에서 제시되어 있지 않지만, 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Strychnos nux-vomica)의 합량이 1:1~2 :1~2의 중량비를 만족하지 못하는 경우에도 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 나타내지 않거나 효과가 감소하였다.
본 발명의 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 구현하는 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 본 발명의 수면유도 및 불면증 치료용 조성물은 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Strychnos nux-vomica)의 1:1~2 :1~2의 중량비로 혼합한 다음 수득한 고상물(solid phase product)에 추출용매 및 효소를 이용하여 얻어진 효소처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
본 발명의 수면유도 및 불면증 치료용 조성물은 바람직하게는 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Strychnos nux-vomica)를 1:1~2 :1~2의 중량비로 혼합한 다음 수득한 고상물(solid phase product)에 추출용매 및 효소를 이용하여 얻어진 효소처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.
본 기재에서 유효성분은 달리 특정하지 않는 한, 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
본 기재에서 추출물은 달리 특정하지 않는 한, 추출 대상인 그 고상물 자체를 추출용매를 이용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출, 초고압 추출 등의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합, 정치시켜 얻은 분획물, 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다.
본 기재에서, 상기 고상물의 형상은 특별히 제한하지 않으며, 환 형태, 과립 형태, 가루 형태 등일 수 있다.
상기 고상물은 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Strychnos nux-vomica)을 깨끗이 세정한 다음 고상물 형태로 얻어질 수 있다. 깨끗이 세정한 후에는 자연건조(음건), 열풍건조 등 임의의 방식으로 건조됨으로써 수분의 일부가 제거된 후에 파쇄한 다음 효소처리에 사용될 수 있다.
본 발명에서, 홉, 산사나무 및 발레리안은 달리 특정하지 않는 한, 다양한 기관 또는 부분(예 잎, 가지, 꽃, 뿌리, 줄기, 열매 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 각각의 잎, 열매 또는 뿌리로부터 얻은 추출물이고, 가장 바람직하게는 각각의 열매 또는 뿌리로부터 얻은 추출물을 의미한다.
발레리안(Valeriana officinalis)은 서양쥐오줌풀이라고 하며, 마타리과에 속하는 다년생 식물로서, 높이 1~2미터 정도의 짙은 청색잎과, 흰색 또는 핑크색의 꽃을 피우고, 주로 유럽과 북아시아 지역에서 발견되며, 뿌리나 근경(rhizomes) 추출물은 진통작용, 항경련 등 여러 가지 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다.
또한, 분쇄물 형태 그대로, 또는 단계별 증숙한 후 건조시킨 상태로 사용될 수 있으며, 분쇄물 형태로 사용하는 경우 효소처리 후, 효소의 가수분해(효소분해) 시간을 단축하고 효소분해 수율을 향상시킬 수 있어 바람직하다.
상기 효소 처리는 가수분해효소를 사용하여 효소분해를 함으로써 기능성분을 더욱 증대시킬 수 있다.
상기 가수분해효소는 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase)의 상용 효소를 사용할 수 있다.
상기 셀룰레아제 효소는 셀룰로오스를 분해하고, 펙티나아제 효소는 펙탄질을 분해하는 효소이다. 식물세포의 각종 영양성분은 세포벽 안에 포함되어 있는데, 세포벽은 셀룰로오스, 펙틴질 등의 성분들이 단단하게 교차 연결을 하여 식물세포 형태를 잡아주고 있다. 이에 본 발명에서는 셀룰로오스 및/또는 펙티나아제 효소를 함께 접종 후 추출함으로써 홉, 산사나무 및 발레리안 내 유효성분을 효과적으로 활용하고 효능을 상승시키고자 한다.
상기 셀룰라아제와 펙티나아제의 총 함량은, 상기 고상의 건조물의 총 중량 대비 0.01 내지 0.1 배의 중량, 또는 0.01 내지 0.05 배의 중량으로 사용될 수 있다. 상기 범위를 만족하면, 홉, 산사나무 및 발레리안의 효소분해를 최적화할 수 있다.
구체적으로, 상기 셀룰라아제 및 펙티나아제는 1: 0.5~1.5의 중량비, 또는 1: 0.8~1.2의 중량비로 포함할 수 있다.
효소처리에 사용할 수 있는 추출용매는 일례로 물, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.
상기 추출용매는 상기 고상 건조물 무게 대비 일례로 5 내지 20배, 구체적인 예로 8 내지 15배로 투입하고 효소 처리하는 것이 효소분해효율을 극대화할 수 있어 바람직하다.
효소 처리시 용매로 물을 사용하는 것이 효소 처리시 알코올을 사용한 다음 알코올을 추출하는 경우보다 개선된 성능을 제공할 수 있어 바람직하다.
즉, 상기 효소처리액은 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 이용한 고상의 건조물의 효소처리 추출물 수용액일 수 있다.
상기 효소 처리는 20 내지 70℃ 하에, 1 내지 5시간 동안 50 내지 500 rpm 교반하면서 수행할 수 있다. 이 경우에 유효물질 추출효율 증대를 제공할 수 있다. 구체적으로, 상기 효소 처리는 35 내지 60℃ 하에, 2 내지 4시간 동안 100 내지 300 rpm 하에 수행할 수 있다.
그런 다음 본 기재에서는 상기 초음파 처리액을 초고압 추출하는 것이 최적의 유효성분을 추출하기에 적절하다.
상기 초고압 추출은 불순물을 제거하고 고순도로 유효 성분을 추출해낼 수 있어 효율이 우수한 것으로 공지되어 있으나, 고압 장치를 사용하여야 하므로 시설비 및 유지비가 많이 드는 단점이 있어 초고압 추출은 고효율로 이루어져야만 경제성이 있는 것으로 알려져 있다.
또한, 추출의 온도 및 압력 조건에 따라 유효성분의 성질 변화가 가능하다. 예를 들어 효소처리액을 저압조건으로 추출한 경우, 유효성분에 대한 용해력이 떨어져 추출물 중 당의 농도가 높아지게 되고, 유효성분 추출조건에 적합한 고압조건으로 추출하는 경우에도 추출 초반부의 추출물을 분획하여 별도 구분하면 후반부 추출물에 비해 유효성분 농도가 높아지게 된다. 이런 추출 방법에서 분획시점을 조정하여 유리지방산 함량과 유효성분 함량의 조절이 가능한데, 유리지방산 함량이 낮은 즉, 산가가 낮은 추출물을 얻기 위해서는 원료의 유리지방산 함량이 낮거나 유효성분의 함유량이 높은 분획구간을 섞어 농축 정도를 낮추는 방법이 있다.
원료의 유리지방산 함량은 원산지나 작황에 따라 차이가 발생하며 보통 낮은 산가의 원료는 높은 가격으로 형성되어 있기 때문에 원료 경쟁력에서 떨어지게 된다. 게다가 유리지방산이 없는 원료는 없기 때문에 추출물 농축 분획구간에는 유리지방산이 농축되어 낮은 산가의 원료를 사용하는 규격을 설정하고 제품을 만든다고 해도 어느 농도 이상의 유효성분 함량을 충족하면서 산가 규격을 충족시키는 것이 쉬운 일은 아니다. 이에 효소처리액을 이용하여 고농도 분획물을 만드는 공정이 산업적 안정성을 갖기 위해서는 초고압 추출 분획물에서 유리지방산을 제거하는 기술이 필요하다.
본 발명에 따르면, 유효성분 함량을 극대화하고 유리지방산의 함량을 낮춘 추출물을 제공하도록, 상기 초고압 추출은 일례로 20 내지 70 ℃, 또는 35 내지 60 ℃ 하에 10 내지 200 MPa의 압력, 또는 50 내지 150 MPa의 압력 으로 1 내지 120분간, 또는 40 내지 80분간 고압 처리하는 것이 바람직하다.
상기 초고압 추출 후 리플럭스 하에 환류 추출용매를 사용하여 환류 추출을 수행할 수 있다.
환류 추출에 사용할 수 있는 추출용매는 일례로 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있고, 알코올류를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 알코올로는 50 내지 90%(v/v) 에탄올을 사용하는 것이, 높은 항균력과 극성을 제공할 수 있어 바람직하며, 특히 70%(v/v) 에탄올의 경우에 농도가 더 높은 에탄올을 사용하는 것보다 살균력이 개선될 수 있다.
상기 알코올은 초고압 추출물의 무게 대비 5 내지 40배, 구체적으로 15 내지 25배의 함량으로 포함할 수 있다.
상기 환류 추출은 열처리 없이 실온에서 12시간 이하, 또는 1 내지 6시간 동안 반복하여 추출할 수 있다. 상기 반복 추출 횟수는 5회 이하, 구체적인 예로 2 내지 3회일 수 있다.
전술한 유리지방산은 제거하되 유효성분 손실은 없으며 효능에 영향을 주지 않는 정제 공정이 필요하며, 이를 위하여 미세 여과막을 사용하여 여과한 다음 감압 농축하여 유리지방산을 제거하는 방법이 바람직하고, 보다 우수한 효능효과를 제공하도록 미세 여과막은 1.0 ㎛ 이하, 바람직하게는 0.45 ㎛ 이하의 여과막을 사용하는 것이 더욱 바람직하다.
전술한 정제 공정을 거쳐 유효 추출물을 수득할 수 있다.
본 기재에서 유효 추출물은 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압농축 등의 방식으로 초고압 추출에 앞서 투입된 추출용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고상의 추출물이 포함된다.
본 기재에서, 결과 추출물의 형태는 특별히 제한되지 않으며, 환(pills) 형태, 과립 형태, 가루 형태를 비롯한 분말 또는 기타 추출물 형태일 수 있다.
본 기재에 따른 추출물 제조방법은, 일례로 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 깨끗이 세정한 다음 수득된 고상물 또는 그 건조물로부터 효소처리하는 단계; 및 효소처리액을 초고압 추출하는 단계;를 포함할 수 있다.
본 기재에서 상기 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)은 깨끗이 세정한 다음 고상물 형태로 얻어질 수 있다. 깨끗이 세정한 후에는 자연건조(음건), 열풍건조 등 임의의 방식으로 건조됨으로써 수분의 일부가 제거된 후에(고상물의 수분 함량이 10%(w/w) 이하가 되도록 분쇄물 형태로) 10 내지 50 메쉬, 구체적으로는 30 내지 50 메쉬로 파쇄하여 표면적을 높인 다음 초음파 전처리에 사용될 수 있다.
필요에 따라서는 95℃ 이하, 또는 50 내지 90℃에서 36시간 이상, 또는 48시간 이상 건조한 다음 분쇄할 수 있다.
상기 고상물은 초고압 추출하기에 앞서 사전추출 단계를 수행할 수 있다.
본 기재에서 사용되는 고상물에는 특별한 제한이 없으며, 해당 사전추출 단계는 고상물 또는 그 건조물(고상의 건조물이라고도 함)의 표면에서 미생물, 잔류농약, 보존제 등의 유해물질을 제거하기 위한 처리, 초음파의 접촉 면적을 증가시키기 위한 처리 등을 포함할 수 있다.
상기 사전추출 방법은 특별히 제한되지 않으나, 효소 처리, 자외선 조사, 열처리, 박피, 분쇄, 배전 중 1 이상을 사용할 수 있으며, 추가 부산물의 생성을 방지하면서 고순도로 분쇄할 수 있고 효소로 유효성분을 충분히 분해할 수 있는 효소 처리가 가장 바람직하다.
효소 처리할 경우, 고상의 건조물에 추출용매를 공급하여 처리 효율을 높이는 것이 바람직하며, 이때 사용가능한 추출용매는 물, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다. 이때 추출용매를 상기 고상의 건조물의 무게 대비 5 내지 20배로 포함할 수 있다.
상기 효소는 가수분해효소인 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase)를 1:0.5 내지 1.5의 중량비로 병용 사용한다.
상기 효소 처리는 일례로 20 내지 70 ℃ 하에, 1 내지 5시간 동안 50 내지 500 rpm 교반하면서 수행하는 것이 유효물질 추출효율 증대를 제공할 수 있다.
이어서, 효소처리액을 초고압 추출한다.
상기 초고압 추출은 일례로 10 내지 200 MPa의 압력으로 20 내지 70 ℃ 하에 1 내지 120분간 수행될 수 있다.
초고압 추출한 다음 리플럭스 하에 후추출을 수행할 수 있다. 이때 60 내지 70℃ 하에 12시간 이하, 또는 1 내지 6시간 동안 반복하여 추출할 수 있다. 상기 반복 추출 횟수는 5회 이하, 구체적인 예로 2 내지 3회일 수 있다.
상기 초고압 추출물은 앞서 설명한 70% 에탄올을 초고압 추출물의 무게 대 비 5 내지 40배의 중량으로 투입하고 반복 환류추출 및 감압 농축하여 추출용매를 제거하고 유효 추출물을 분리해낼 수 있다.
본 발명의 조성물은 그 유효성분 이외에 진정 효과를 제공하기 위하여 당업계에 공지된 기능성 성분, 보호 성분 등을 포함하여 제조될 수 있다. 이러한 성분들은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 그 유효성분을 제품 유형, 제품의 제형 등에 따라 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과, 수면 유도 효과 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 함량 (유효량)으로 포함할 수 있는데, 해당 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 15 wt% 범위 내에서 결정될 수 있다.
본 발명에서 유효량은, 달리 특정하지 않는 한 그 적용 대상인 포유동물, 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과, 수면 유도 효과 등 의도한 의료적/화장품학적 효과 등을 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 기능상의 구분에 있어서 제조/유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 건강기능식품에 관한 법률에 따른 건강기능 식품이거나, 식품위생법의 식품공전(식약처 고시, 식품의 기준 및 규격)상 각 식품유형에 따른 두유류, 발효음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해되는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 복용되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품위생법에 따른 식품첨가물공전(식약처 고시, 식품첨가물 기준 및 규격)에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 화학적 합성품, 천연 첨가물, 혼합 제제류로 구분하여 한정적으로 규정되어 있다.
이들 식품첨가물은 기능적 측면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수도 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다.
합성 풍미제도 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다.
산미료로는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
점증제로는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타 식품첨가물과 관련하여서는 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 약제학적 조성물로 파악할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 약제학적으로 허용이란, 달리 특정하지 않는 한 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 것을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다.
약제학적으로 허용되는 적합한 담체로는, 일례로 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다.
주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다.
경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다.
비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있다.
좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.
약제학적 조성물의 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 구체적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001 mg/kg 내지 10 g/kg 범위, 바람직하게는 0.001 mg/kg 내지 1 g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
본 발명의 식품 조성물, 약제학적 조성물은 해당 분야에 공지된 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에서 통상적으로 행하여지는 해당 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
본 기재의 수면유도 및 불면증 치료용 조성물을 설명함에 있어서, 명시적으로 기재하지 않은 다른 조건이나 장비 등은 당업계에서 통상적으로 실시되는 범위 내에서 적절히 선택할 수 있고, 특별히 제한되지 않음을 명시한다.
이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정하는 것은 아니다.
[실시예]
<실시예 1> 초고압효소가수분해 홉 추출물의 제조
(1) 홉(Humulus lupulus) 열매, 산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 및 발레리안(Valeriana officinalis) 뿌리를 깨끗이 세정한 후 70 ℃에서 48 시간 건조하여 40 mesh 이하 사이즈로 분쇄하였다.
(2) 분쇄한 원료를 일정한 중량(100 g : 100 g)으로 혼합한 다음, 고상 건조물 총 무게의 0.04배 무게로 가수분해효소인 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase)을 1:1 중량비로 첨가하면서 상기 고상 건조물 총 무게의 10배 무게로 증류수를 첨가하였다.
(3) 그런 다음 초고압 챔버에서 40 ℃ 하에 100 Mpa 조건으로 6분간 추출하였다.
(4) 상기 효소처리액 무게의 20배의 70% 에탄올을 투입하고 70 ℃에서 3시간동안 3회 반복하여 환류 추출을 수행하였다.
(5) 수득된 추출물을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 에탄올을 제거하여 초고압 효소가수분해 홉 추출물(샘플 HCV-4)을 제조하였다.
<비교예>
<비교예 1> 열수 홉 추출물의 제조
(1) 홉(Humulus lupulus) 열매, 산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 및 발레리안(Valeriana officinalis) 뿌리를 깨끗이 세정한 후 70 ℃에서 48 시간 건조하여 40 mesh 이하 사이즈로 분쇄하였다.
(2') 분쇄한 원료를 일정한 중량(100 g : 100 g)으로 혼합하고, 상기 고상 건조물 총 무게의 20배 무게로 증류수를 첨가하였다.
(3') 상기 원료를 300 rpm, 70 ℃ 하에 교반하였다.
(5) 수득된 추출물을 여과지로 여과하여 열수 홉 추출물(샘플 HCV-1)을 제조하였다.
<비교예 2> 에탄올 환류 홉 추출물의 제조
(1) 홉(Humulus lupulus) 열매, 산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 및 발레리안(Valeriana officinalis) 뿌리를 깨끗이 세정한 후 70 ℃에서 48 시간 건조하여 40 mesh 이하 사이즈로 분쇄하였다.
(2") 분쇄한 원료를 일정한 중량(100 g : 100 g)으로 혼합하였다.
(4') 상기 혼합물 총 무게의 20배의 70% 에탄올을 투입하고 70 ℃에서 3시간동안 3회 반복하여 환류 추출을 수행하였다.
(5) 수득된 추출물을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 에탄올을 제거하여 에탄올 환류 홉 추출물(샘플 HCV-2)을 제조하였다.
<비교예 3> 초고압 홉 추출물의 제조
(1) 홉(Humulus lupulus) 열매, 산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 및 발레리안(Valeriana officinalis) 뿌리를 깨끗이 세정한 후 70 ℃에서 48 시간 건조하여 40 mesh 이하 사이즈로 분쇄하였다.
(2"') 분쇄한 원료를 일정한 중량(100 g : 100 g)으로 혼합하고, 상기 고상 건조물 총 무게의 20배 무게로 70% 에탄올을 첨가하였다.
(3') 그런 다음 초고압 챔버에서 40 ℃ 하에 100 Mpa 조건으로 6분간 추출하였다.
(4”) 이어서 70 ℃에서 3시간동안 3회 반복하여 환류 추출을 수행하였다.
(5) 수득된 추출물을 0.45 ㎛ membrane filter로 여과한 다음 감압 농축기로 에탄올을 제거하여 초고압 홉 추출물(샘플 HCV-3)을 제조하였다.
<실험예>
<실험예 1> 항산화활성 시험
상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1~4)에 대한 항산화 시험으로 시료의 라디칼 소거능을 평가할 수 있는 ABTS법 및 DPPH법 radical 소거능 실험을 수행하였다.
(1-1) ABTS 라디칼 소거활성
샘플들(HCV-1 내지 HCV-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL, 1000 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 7 mM ABTS와 2.45 mM potassium persulfate를 혼합하여 암실에서 12시간동안 상온에서 반응시켜 ABTS 양이온을 형성시킨다. 이후 734 nm에서 흡광도 값이 0.70 ± 0.02가 되도록 에탄올을 넣어 조절하였다.
96 웰 플레이트에 검액 100 ㎕와 조제한 ABTS 용액 100 ㎕를 가하여 7 분간 실온에서 반응하여 734 nm에서 측정한다. 공시험액과 비교하여 ABTS 소거율을 다음과 같이 백분율(%)로 구하고 하기 도 1에 나타내었다.
ABTS radical 소거능 (%) = [Control - (Sample - Blank)]/Control Х 100
(단, Control : ABTS reagent의 흡광도, Sample : Sample + ABTS reagent의 흡광도, Blank : Sample + Blank의 흡광도)
(1-2) DPPH 라디칼 소거활성
샘플들(HCV-1 내지 HCV-4)을 각각 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL, 1000 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 96 웰 플레이트에 검액 100 ㎕와 0.2 mM DPPH 100 ㎕를 넣고 30분 후 마이크로플레이트 판독기를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험액과 비교하여 DPPH radical 소거율을 다음과 같이 백분율(%)로 구하고 하기 도 1에 나타내었다.
DPPH radical 소거능 (%) = [Control - (Sample - Blank)]/Control Х 100
(Control : DPPH reagent의 흡광도, Sample : Sample + DPPH reagent의 흡광도, Blank : Sample + Blank의 흡광도)
하기 도 1에서 보듯이, ABTS radical 분석 결과 대조군인 아스코르브산이 500 ㎍/mL에서 99.9%로 가장 높게 확인되었고, 다음으로 실시예 1에 따른 샘플(HCV-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 63.1 %로 높게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(HCV-3), 비교예 2에 따른 샘플(HCV-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(HCV-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 각각 60.1 %, 54.8 %, 53.1 %를 나타내었다.
또한, DPPH radical 분석 결과, 전술한 ABTS 분석결과와 같은 경향을 나타내었다. 구체적으로, 실시예 1에 따른 샘플(HCV-4), 비교예 3에 따른 샘플(HCV-3), 비교예 2에 따른 샘플(HCV-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(HCV-1)의 순서로 500 ㎍/mL에서 각각 58.1 %, 54.9 %, 48.7 %, 47.4 %를 나타내었다. 이때 대조군인 아스코르브산은 500 ㎍/mL에서 99.1 %로 분석되었다.
<실험예 2> 신경세포 보호효과
상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1 내지 HCV-4)에 대한 신경세포 보호실험으로 H2O2 처리를 통해 스트레스를 유도한 다음 LDH(Lactate Dehydrogenase)를 측정하였다. LDH는 몸 안의 당이 분해되어 에너지로 변할 때 작용하는 효소로, 세포가 손상되거나 사멸할 때 방출되어 세포독성을 확인할 수 있는 지표이다.
구체적으로, 실험물질(HCV-1~4)을 물에 희석하여 100 ㎍/mL, 250 ㎍/mL, 500 ㎍/mL, 1000 ㎍/mL 농도의 검액을 조제한다. 사람의 신경세포종인 SH-SY5Y(한국세포주은행) 세포를 1Х104 cell/ml 씩 분주하여 24시간 배양 후 각 농도의 실험물질(HCV-1~4)를 처리하고 다시 24시간 동안 배양하였다. 이후 H2O2 100 μM을 처리하여 24시간 동안 배양한 다음 상층액 100 ㎕를 취하여 LDH assay kit(Abcam)으로 측정하고, 하기 도 2에 나타내었다.
하기 도 2에서 보듯이, 신경세포 보호효과 분석결과, 대조군 72.1% 대비 모든 실험물질(HCV-1~4)에서 세포 보호 효과를 확인할 수 있었다.
구체적으로, 실시예 1에 따른 샘플(HCV-4)의 경우 500 ㎍/mL에서 대조군 대비 22.1 %로 가장 낮게 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(HCV-3), 비교예 2에 따른 샘플(HCV-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(HCV-1) 순서로, 각각 500 ㎍/mL에서 대조군 대비 24.8 %, 27.4 %, 29.4 %로 세포보호 효과를 확인할 수 있었다.
<실험예 3> 수면시간 연장효과
상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1 내지 HCV-4)에 대한 수면유도 동물모델의 수면시간 연장 효과를 확인하였다. 상기 수면유도 동물모델은 마우스의 복강에 Pentobarbital를 투여하여 수면을 유도하였다.
구체적으로, 4주령의 ICR 계 수컷 마우스를 구입하여 물과 고형사료를 충분히 공급시켜 실험실환경(온도 22±2℃, 습도 55±5% 12시간 명암주기)에 적응시켜 관리하였다. 각 군당 5마리씩 5개 군으로 나누어 사육하였으며, 수면유도효과를 확인하기 위하여 실험물질(HCV-1~4)을 250 mg/kg, 500 mg/kg씩 1주일간 경구투여 후 1시간 뒤에 수면 유도제인 pentobarbital 30 mg/kg을 식염수에 녹여 복강 주사하고 수면시간을 측정한다. 수면시간은 정향반사가 소실되는 시점을 기준으로 다시 정향반사가 회복될 때까지의 시간으로 측정하였다. 대조군은 실험물질 대신 0.85 % 식염수를 투여하였다. 측정 결과를 도 3에 나타내었다.
하기 도 3에서 보듯이, 수면시간 분석결과, 대조군 62.4±2.5 분 대비 모든 실험물질(HCV-1~4)에서 수면시간이 증가한 것을 확인할 수 있었다.
구체적으로,수면시간 연장 효과가 가장 뛰어난 실험군은 실시예 1에 따른 샘플(HCV-4)로서, 500 ㎍/mL에서 79.7±2.3 분으로 확인되었고, 다음으로 비교예 3에 따른 샘플(HCV-3), 비교예 2에 따른 샘플(HCV-2), 그리고 비교예 1에 따른 샘플(HCV-1) 순서로, 각각 500 ㎍/mL에서 77.9±2.1 분, 73.6±3.2 분, 72.5±1.8 분으로 각각 확인되었다.
<실험예 4> 안전성 시험
세포생존율 시험
상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1~4) 에 대한 안전성 평가(세포독성 확인)를 위해 MTS 분석을 진행하였다. 상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1~4)의 농도는 100 내지 500 ㎍/mL로 설정하였으며, 사람의 신경세포(SH-SY5Y)를 사용하여 시험물질의 세포독성을 확인하였다.
구체적으로는, 실험물질(HCV-1~4)을 물에 희석하여 100 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL, 1000 μg/mL 농도의 검액을 조제한다. 사람의 신경세포종인 SH-SY5Y(한국세포주은행) 세포를 1Х104 cell/ml 씩 분주하여 24시간 배양 후 실험물질(HCV-1~4)을 100~500 μg/ml의 농도로 희석후 첨가하고 다시 24시간 동안 배양하였다. 이후 MTS 시약 20 μL를 넣고 2시간 동안 배양 후, microplate reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였고, 세포생존율(cell viability)은 아래의 식으로 계산하고, 하기 도 4에 결과를 나타내었다.
[식 1]
세포 생존율(%) = [(Exp. - Blank)/Control] Х 100
(상기 식 1에서, Exp: 세포를 포함한 추출물의 흡광도, Blank: 세포를 포함하지 않은 추출물의 흡광도, Control: 세포를 포함한 증류수의 흡광도이다.)
하기 도 4에서 보듯이, 신경세포에서 실험물질의 세포독성 결과, 모든 농도에서 세포생존율이 95% 이상임을 확인하였다. 따라서, 실험물질(HCV-1~4)은 100~500 μg/mL농도에서 세포독성이 없는 것으로 확인되었다.
동물실험 이후 장기무게 평가
상기 실시예 1에서 수득한 샘플과 비교예 1 내지 3에서 수득한 샘플(HCV-1~4)에 대한 안전성 평가(독성 확인)를 위해 실험이 종료된 마우스의 비장과 흉선의 무게를 측정하여 비교하였다.
구체적으로는, 수면유도 동물모델 실험 후, 각 실험물질(HCV-1~4)과 대조군을 에테르로 마취하여 비장과 흉선을 적출한 다음 생리식염수로 씻어 수분을 여과지로 제거한다. 이후 실험군과 대조군의 비장과 흉선의 무게를 측정한 절대무게와 체중에서 비장과 흉선의 무게를 측정한 상대무게를 구하고 하기 표 1에 나타내었다.
Control HCV-1 HCV-2 HCV-3 HCV-4
Spleen Absolute weight(g) 0.12±0.03 0.11±0.03 0.12±0.02 0.12±0.03 0.12±0.03
Relative weight(%) 0.41±0.10 0.41±0.11 0.42±0.11 0.40±0.10 0.41±0.10
Thymus Absolute weight(g) 0.03±0.01 0.03±0.01 0.03±0.01 0.03±0.01 0.04±0.01
Relative weight(%) 0.13±0.02 0.13±0.03 0.15±0.04 0.13±0.02 0.14±0.03
상기 표 1에서 보듯이, 장기의 무게를 측정한 결과, 대조군과 실험물질(HCV-1~4)의 비장과 흉선의 절대 무게와 상대 무게 차이는 없는 것을 확인하였다.
따라서, 전술한 세포독성 실험에서 확인된 것과 마찬가지로 동물실험에서도 독성이 없는 것을 알 수 있었다.
결론적으로, 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매 및 효소를 이용하여 얻어진 효소처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 포함하는 경우, 라디칼 소거활성, 신경세포 보호 효과 및 수면 유도 효과를 동시에 발현하여 스트레스로부터 신경세포를 보호하는 효과가 탁월하므로 수면 유도 및 불면증 치료용 조성물, 기능성 식품, 약제학적 의약품 소재 등에 적합한 조성물을 제공할 수 있다.

Claims (6)

  1. 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)를 이용한 고상의 건조물에 추출용매와 분해효소인 셀룰라아제(Cellulase)와 펙티나아제(Pectinase)을 이용하여 얻어진 효소 처리액의 초고압 추출물을 유효성분으로 포함하는 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 홉(Humulus lupulus), 산사나무(Crataegus pinnatifida) 및 발레리안(Valeriana officinalis)는 홉(a), 산사나무(b) 및 발레리안(c)이 1:1~2:1~2중량비를 만족하는 것인 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 추출용매는 물, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 에틸아세테이트, 핵산 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상을, 상기 고상의 건조물 중량 대비 5 내지 20 배의 중량으로 포함하는 것인 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 셀룰라아제 및 펙티나아제는 1: 0.5~1.5의 중량비로 포함하며, 상기 셀룰라아제와 펙티나아제의 총 함량은 상기 고상의 건조물 총 무게 대비 0.01 내지 0.1 배의 중량으로 사용하는 것인 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 효소 처리는 20 내지 70℃ 하에, 1 내지 5시간 동안 50 내지 500 rpm 교반하면서 수행하는 것인 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 초고압 추출은 10 내지 200 MPa의 압력으로 20 내지 70 ℃ 하에 1 내지 120분간 고압처리 후, 리플럭스 하에 60 내지 70℃ 에서 2 내지 3 시간 동안 환류 추출한 것인 수면유도 및 불면증 치료용 조성물.
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