KR20230017165A

KR20230017165A - Axl/mer 및 pd-1/pd-l1 억제제를 포함하는 병행 요법

Info

Publication number: KR20230017165A
Application number: KR1020227034644A
Authority: KR
Inventors: 조나단 리오스-도리아; 홀리 케이. 코블리쉬
Original assignee: 인사이트 코포레이션
Priority date: 2020-03-06
Filing date: 2021-03-05
Publication date: 2023-02-03
Also published as: JP2023516441A; WO2021178779A1; EP4114401A1; CA3174539A1; CL2022002410A1; US20210275666A1; CN115697343A; MX2022010860A; AU2021230385A1; TW202140027A; IL296065A

Abstract

본 개시내용은 AXL/MER 키나제 억제제인 화합물을 PD-1에 결합하는 항체, 또는 이의 항체 단편과 조합하여 투여함으로써 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

AXL/MER 및 PD-1/PD-L1 억제제를 포함하는 병행 요법

수용체 티로신 키나제 (RTK)는 생존, 성장, 증식, 분화, 부착 및 이동과 같은 세포 이벤트를 조절하기 위해 세포외 환경에서 세포 세포질 및 핵으로 신호를 전송하는 세포 표면 단백질이다.

TAM 서브패밀리는 Tyro3, AXL 및 Mer를 포함하는 3개의 RTK로 구성된다 (Graham 등, 2014, Nature Reviews Cancer 14, 769-785; Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83). TAM 키나제는 2개의 면역글로불린 유사 도메인과 2개의 피브로넥틴 유형 III 도메인으로 구성된 세포외 리간드 결합 도메인을 특징으로 한다. TAM 키나제에 대해 두 가지 리간드인 성장 정지 특이적 6(GAS6) 및 단백질 S(PROS1)가 확인되었다. GAS6는 3가지 TAM 키나제 모두에 결합하여 활성화할 수 있는 반면, PROS1은 Mer 및 Tyro3에 대한 리간드이다 (Graham 등, 2014, Nature Reviews Cancer 14, 769-785).

AXL (UFO, ARK, JTK11 및 TYRO7로도 알려짐)은 원래 만성 골수성 백혈병 환자의 DNA에서 형질전환 유전자로 확인되었다 (O'Bryan 등, 1991, Mol Cell Biol 11, 5016-5031; Graham 등, 2014, Nature Reviews Cancer 14, 769-785; Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83). GAS6는 AXL에 결합하고 AXL 티로신 키나제의 후속적인 자가 인산화 및 활성화를 유도한다. AXL은 PI3K-Akt, Raf-MAPK, PLC-PKC를 포함한 여러 다운스트림 신호 전달 경로를 활성화한다 (Feneyrolles 등, 2014, Molecular Cancer Therapeutics 13, 2141-2148; Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83).

MER (MERTK, EYK, RYK, RP38, NYK 및 TYRO12로도 알려짐)은 원래 림프모구 발현 라이브러리의 인-단백질로 확인되었다 (Graham 등, 1995, Oncogene 10, 2349-2359; Graham 등, 2014, Nature Reviews Cancer 14, 769-785; Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83). GAS6 및 PROS1 모두 Mer에 결합하여 Mer 키나제의 인산화 및 활성화를 유도할 수 있다 (Lew 등, 2014). AXL과 마찬가지로, MER 활성화는 또한 PI3K-Akt 및 Raf-MAPK를 포함한 다운스트림 신호 전달 경로를 전달한다 (Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83).

TYRO3 (DTK, SKY, RSE, BRT, TIF, ETK2로도 알려짐)는 원래 PCR-기반 복제 연구를 통해 확인되었다 (Lai 등, Neuron 6, 691-70, 1991; Graham 등, 2014, Nature Reviews Cancer 14, 769-785; Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83). 두 리간드, GAS6 및 PROS1은 TYRO3에 결합하여 활성화할 수 있다. TYRO3 활성화의 다운스트림 신호 경로가 TAM RTK 중에서 가장 적게 연구되었지만, PI3K-Akt 및 Raf-MAPK 경로가 모두 관련된 것으로 보인다 (Linger 등, 2008, Advances in Cancer Research 100, 35-83). AXL, MER 및 TYRO3는 암세포에서 과발현되는 것으로 밝혀졌다.

PD-1에 결합하는 항체, 또는 이의 항체 단편과 조합된 AXL/MER 키나제의 조절제를 사용하는 암에 대한 새로운 치료 요법에 대한 필요성이 남아 있다. 본 개시내용은 이러한 필요 및 다른 것에 관한 것이다.

본 출원은 특히, 상기 환자에게 다음을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하고:

(i) 다음 구조를 갖는 화합물 1:

화합물 1;

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및

(ii) 인간 PD-1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 항체는 (ii-1) VH 상보성 결정 영역 (CDR)1, VH CDR2, 및 VH CDR3를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 도메인; 및 (ii-2) VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하고; 여기서:

(a) VH CDR1은 아미노산 서열 SYWMN (서열 번호 6)을 포함하고;

(b) VH CDR2는 아미노산 서열 VIHPSDSETWLDQKFKD (서열 번호 7)를 포함하고;

(c) VH CDR3는 아미노산 서열 EHYGTSPFAY (서열 번호 8)를 포함하고;

(d) VL CDR1은 아미노산 서열 RASESVDNYGMSFMNW (서열 번호 9)를 포함하고;

(e) VL CDR2는 아미노산 서열 AASNQGS (서열 번호 10)를 포함하고; 그리고

(f) VL CDR3는 아미노산 서열 QQSKEVPYT (서열 번호 11)를 포함한다.

본 출원은 환자에게 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 레티판리맙을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.

본 출원은 또한 암 치료용 약제의 제조를 위한 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 항체, 또는 본원에 기재된 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.

본 출원은 본원에 기재된 임의의 방법에서 사용하기 위한 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 항체, 또는 본원에 기재된 항원 결합 단편을 추가로 제공한다.

도 1은 MER 키나제 대 ATP 농도에 대한 화합물 1의 IC₅₀ 값의 플롯이다.
도 2는 H1299 세포에서 화합물 1에 대한 포스포-AXL (pAXL)의 억제 백분율의 플롯이다.
도 3은 G361 흑색종 세포에서 화합물 1에 대한 포스포-MER (pMER)의 억제 백분율의 플롯이다.
도 4는 화합물 1로 2시간 동안 전처리한 후 MER-특이적 작용제 항체 MAB8912로 자극한 인간 말초혈 단핵 세포 (PBMC)로부터 시험관 내 분화된 1차 대식세포에서 pMER 및 총 MER의 웨스턴 블롯이다.
도 5a는 화합물 1로 전처리된 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 시험관 내 분화된 1차 대식세포에서의 T-세포 증식의 플롯이다.
도 5b는 화합물 1로 전처리된 인간 PBMC로부터 시험관 내 분화된 1차 대식세포에서의 IFN-γ 생산의 플롯이다.
도 6a는 PBMC에서 화합물 1 및/또는 레티판리맙에 의한 인터루킨 (IL)-2의 시험관 내 유도를 보여주는 히트맵이다.
도 6b는 PBMC에서 화합물 1 및/또는 레티판리맙에 의한 인터페론 (IFN)-γ의 시험관 내 유도를 보여주는 히트맵이다.
도 6c는 PBMC에서 화합물 1 및/또는 레티판리맙에 의한 종양 괴사 인자 (TNF)-α의 시험관 내 유도를 보여주는 히트맵이다.
도 6d는 PBMC에서 화합물 1 및/또는 레티판리맙에 의한 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF)의 시험관 내 유도를 보여주는 히트맵이다.
도 6e는 PBMC에서 화합물 1 및/또는 레티판리맙에 의한 IL-12 p70의 시험관 내 유도를 보여주는 히트맵이다.
도 7a는 C3H 마우스에서 MBT-2 종양 모델에서 화합물 1의 종양 성장 억제 효능을 입증하는, 화합물 1로 처리한 후 MBT-2 종양 부피의 플롯이다.
도 7b는 BALB/c 마우스에서 4T1 종양 모델에서 화합물 1의 종양 성장 억제 효능을 입증하는, 화합물 1로 처리한 후 4T1 종양 부피의 플롯이다.
도 7c는 흉선이 없는 누드 마우스에서 4T1 종양 모델에서 화합물 1의 종양 성장 억제 효능을 입증하는, 화합물 1로 처리한 후 4T1 종양 부피의 플롯이다.
도 7d는 화합물 1로 처리된 4T1 종양 보유 마우스의 M1/M2-유사 대식세포 비율의 그래프이다.
도 8a는 화합물 1, 항-예정된 사멸 리간드 1 (PD-L1), 또는 조합을 경구 투여한 C57BL/6 마우스의 MC38 종양 부피의 플롯이다.
도 8b는 화합물 1, 항-PD-L1 또는 조합으로 처리한 후 MC38 종양 보유 마우스에서 CD4⁺Ki67⁺ 세포의 백분율 그래프이다.
도 8c는 화합물 1, 항-PD-L1 또는 조합으로 처리한 후 MC38 종양 보유 마우스에서 CD8⁺Ki67⁺ 세포의 백분율 그래프이다.
도 8d는 화합물 1, 항-PD-L1 또는 조합으로 처리한 후 MC38 종양 보유 마우스의 종양 추출물에서 인터페론 (IFN)-γ의 농도 그래프이다.
도 9a는 화합물 1로 처리한 후 흉선이 없는 누드 마우스에서 CTG-2041 종양의 종양 부피 플롯이다.
도 9b는 화합물 1로 처리한 후 흉선이 없는 누드 마우스에서 CTG-1302 종양의 종양 부피 플롯이다.
도 9c는 화합물 1로 처리한 후 흉선이 없는 누드 마우스에서 CTG-1339 종양의 종양 부피 플롯이다.
도 9d는 화합물 1 또는 비히클로 처리한 마우스로부터 CTG-2041 또는 CTG-1339 종양의 pAXL, AXL, pMER, MER, GAS6, pAKT, AKT, 및 β-액틴에 대한 웨스턴 블롯을 나타낸다.

본 출원은 특히, 상기 환자에 다음을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공한다:

(i) 다음 구조를 갖는 화합물 1:

화합물 1;

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및

(ii) 인간 PD-1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 (예를 들어, 레티판리맙).

시험관 내 연구는 단일 작용제 화합물 1 치료 및 단일 작용제 레티판리맙 치료에 의한 전염증성 사이토카인의 유도를 입증했지만, 화합물 1과 PD-1 항체 레티판리맙의 조합은 사이토카인의 훨씬 더 큰 유도를 초래하였다 (실시예 G).

인간 PD-1 단백질의 아미노산 서열 (Genbank 수탁 번호 NP_005009)은 다음과 같다: MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL (서열 번호 1).

레티판리맙은 인간 PD-1에 결합하는 인간화, IgG4 단일클론 항체이다 (US 2019/0127467 참조, 이는 그 전체가 참고로 본원에 포함됨). 성숙한 레티판리맙 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 하기에 기재되어 있다.

가변 중쇄 (VH) 도메인 및 가변 경쇄 (VL) 도메인의 상보성 결정 영역 (CDR) 1, 2, 및 3은 성숙한 VL 및 VH 서열의 N에서 C-말단까지의 순서로 표시되며 모두 밑줄과 굵게 처리된다. 하기에 나열된 성숙한 중쇄 (서열 번호 2) 및 성숙한 경쇄 (서열 번호 3)로 이루어진 항체를 레티판리맙이라고 한다.

성숙한 레티판리맙 중쇄 (HC)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYWMN WVRQAPGQGLEWIG VIHPSDSETWLDQKFKD RVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EHYGTSPFAY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (서열 번호 2)

성숙한 레티판리맙 경쇄 (LC)

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNYGMSFMNW FQQKPGQPPKLLIH AASNQGS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC QQSKEVPYT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 3)

레티판리맙의 가변 중쇄 (VH) 도메인은 다음 아미노산 서열을 갖는다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFT SYWMN WVRQAPGQGLEWIG VIHPSDSETWLDQKFKD RVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR EHYGTSPFAY WGQGTLVTVSS (서열 번호 4)

레티판리맙의 가변 경쇄 (VL) 도메인은 다음 아미노산 서열을 갖는다:

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC RASESVDNYGMSFMNW FQQKPGQPPKLLIH AASNQGS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC QQSKEVPYT FGGGTKVEIK (서열 번호 5)

레티판리맙의 VH CDR의 아미노산 서열은 하기 나열된 바와 같다:

VH CDR1: SYWMN (서열 번호 6);

VH CDR2: VIHPSDSETWLDQKFKD (서열 번호 7);

VH CDR3: EHYGTSPFAY (서열 번호 8)

레티판리맙의 VL CDR의 아미노산 서열은 하기 나열된 바와 같다:

VL CDR1: RASESVDNYGMSFMNW (서열 번호 9);

VL CDR2: AASNQGS (서열 번호 10); 및

VL CDR3: QQSKEVPYT (서열 번호 11).

따라서, 본 개시내용은 상기 환자에게 다음을 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법을 제공하고:

(i) 다음 구조를 갖는 화합물 1:

화합물 1;

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및

(a) VH CDR1은 아미노산 서열 SYWMN (서열 번호 6)을 포함하고;

일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, VH 도메인은 서열 번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 VL 도메인은 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 다음을 포함하는 변이체 Fc 영역을 포함한다:

(A) FcγR에 대한 변이체 Fc 영역의 친화도를 감소시키는 하나 이상의 아미노산 변형, 여기서 FcγR에 대한 변이체 Fc 영역의 친화도를 감소시키는 하나 이상의 변형은 L234A; L235A; 또는 L234A 및 L235A의 치환을 포함하고, 여기서 넘버링은 카밧에서와 같은 EU 인덱스의 넘버링이고/거나;

(b) 변이체 Fc 영역의 혈청 반감기를 향상시키는 하나 이상의 아미노산 변형, 여기서 변이체 Fc 영역의 혈청 반감기를 향상시키는 하나 이상의 변형은 M252Y; M252Y 및 S254T; M252Y 및 T256E; M252Y, S254T 및 T256E; 또는 K288D 및 H435K의 치환을 포함하고, 여기서 넘버링은 카밧에서와 같은 EU 인덱스의 넘버링이다.

일부 구현예에서, 항체는 Fc 영역이 IgG4 이소형인 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG4 이소형의 Fc 영역을 및 안정화 돌연변이를 포함하는 IgG4 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, IgG4 이소형의 Fc 영역 및 항체는 가닥 교환의 발생을 감소시키기 위해 S228P 치환을 포함하는 IgG4 힌지 도메인을 포함한다 (예를 들어, 서열 번호 12: ESKYGPPCPPCP, (Lu et al, (2008) "The Effect Of A Point Mutation On The Stability Of IgG4 As Monitored By Analytical Ultracentrifugation," J. Pharmaceutical Sciences 97:960-969 참조). 따라서, 일부 구현예에서, (a) 항체는 Fc 영역 및 힌지 도메인을 포함하고; (b) Fc 영역 및 힌지 도메인은 IgG4 유형이고; 그리고 (c) 힌지 도메인은 안정화 돌연변이를 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 중쇄를 포함하고, 여기서 중쇄는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 경쇄를 포함하고, 여기서 경쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 경쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 IgG1 유형인 Fc 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 변이체 CH2-CH3 도메인 (L234A/L235A (AA) 치환을 포함)을 포함하지만, C-말단 리신 잔기가 없는 IgG1 유형의 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 IgG1 유형의 Fc 영역을 포함하고, 여기서 성숙한 중쇄 및 경쇄 서열은 서열 번호 13 및 서열 번호 3이다.

성숙한 중쇄 (HC)

QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYSFT SYWMNWVRQA PGQGLEWIGV IHPSDSETWL DQKFKDRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREH YGTSPFAYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG (서열 번호 13)

일부 구현예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 인간화 항체이다.

일부 구현예에서, 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 레티판리맙은 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 레티판리맙은 환자에게 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 레티판리맙은 환자에게 순차적으로 투여된다.

화합물 1 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 다양한 방법에 의해 대상체, 예를 들어 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 많은 적용에서 투여 경로는 경구이다. 일부 구현예에서, 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물로서 투여된다.

화합물 1의 제형 (예를 들어, 고체 경구 투여 형태)은 미국 특허 공개 번호 2020/0000812 A1에 기술되어 있고, 이는 그 전체가 참고로 포함된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 다음을 포함하는 고체 경구 투여 형태로 제형화된다:

(a) 화합물 1 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 (예를 들어, 화합물 1 말레에이트), 용매화물 또는 수화물;

(b) 유기산; 및

(c) 계면활성제.

용어 "유기산"은 산성 특성을 갖는 유기 화합물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 유기산은 각각 하나 이상의 산성 기 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 카르복실산, 알코올, 또는 설폰산 기)로 치환된, C_1-6알킬, C_2-6알케닐, 또는 5-6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-6 원 헤테로시클로알킬은 하나 이상의 산성 기 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개의 카르복실산, 알코올, 또는 설폰산 기)로 임의로 치환된 C_1-6알킬기로 임의로 치환된다. 유기산은 하나 이상의 산성 기 (예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개의 카르복실산, 알코올, 또는 설폰산 기)로 치환된 C_1-6알킬 또는 C_2-6알케닐일 수 있다. 일부 구현예에서, 유기산은 1, 2, 또는 3 카르복실산 기로 치환되고 0, 1, 또는 2개의 알코올 기로 치환된 C_1-6 알킬 또는 C_2-6알케닐이다. 일부 구현예에서, 유기산은 하나 이상의 산성 기 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 카르복실산, 알코올, 또는 설폰산 기)로 치환되고 C_1-6알킬로 임의로 치환된 5-6 원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C_1-6알킬은 하나 이상의 산성 기 (예를 들어, 1, 2, 또는 3개의 카르복실산, 알코올, 또는 설폰산 기)로 임의로 치환된다. 예시적인 유기산은 시트르산, 아스코르브산, 푸마르산, 말산, 소르브산, 타르타르산 및 이들의 수화물 또는 용매화물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 제형 중 유기산은 약 1 wt% 내지 약 50 wt%일 수 있다. 제형 중 유기산은 약 5 wt% 내지 약 40 wt%일 수 있다. 제형 중 유기산은 약 5 wt% 내지 약 30 wt%일 수 있다. 제형 중 유기산은 약 5 wt% 내지 약 20 wt%일 수 있다. 제형 중 유기산은 약 10 wt% 내지 약 20 wt%일 수 있다. 예를 들어, 제형 중 유기산은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50 중량%일 수 있다. 일부 구현예에서, 제형 중 유기산은 약 10 wt%이다. 일부 구현예에서, 제형 중 유기산은 약 20 wt%이다.

일부 구현예에서, 유기산은 시트르산이다. 일부 구현예에서, 시트르산은 시트르산 일수화물이다. 제형 중 시트르산은 약 1 wt% 내지 약 50 wt% 일 수 있다. 제형 중 시트르산은 약 5 wt% 내지 약 40 wt% 일 수 있다. 제형 중 시트르산은 약 5 wt% 내지 약 30 wt% 일 수 있다. 제형 중 시트르산은 약 5 wt% 내지 약 20 wt% 일 수 있다. 제형 중 시트르산은 약 10 wt% 내지 약 20 wt% 일 수 있다. 예를 들어, 제형 중 시트르산은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50 중량%일 수 있다. 일부 구현예에서, 제형 중 시트르산은 약 10 wt%이다. 일부 구현예에서, 제형 중 시트르산은 약 20 wt%이다.

계면활성제는 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 (예를 들어, 화합물 1 말레에이트), 용매화물, 또는 수화물의 생체이용률을 증가시키는 것을 도울 수 있다. 용어 "계면활성제"는 두 액체 사이 또는 액체와 고체 사이의 표면 장력을 낮추는 화합물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 계면활성제는 또한 세제, 습윤제, 유화제, 발포제 및 분산제와 같은 다른 기능을 가질 수 있다. 예시적인 계면활성제는 폴록사머를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 폴록사머의 예는 폴록사머 407, 폴록사머 338, 폴록사머 237, 및 폴록사머 188이다. 한 구현예에서, 폴록사머는 폴록사머 188이다. 한 구현예에서, 폴록사머는 폴록사머 407이다. 폴록사머는 약물 방출을 도울 수 있는 열가역성 특성 및 졸-겔 전이 특성을 갖는 폴리에틸렌-프로필렌 글리콜 공중합체 (알려진 상품명은 Supronic, Pluronic 또는 Tetronic임)이다. 예를 들어, 폴록사머는 실온 미만에서 졸 상태를 나타내고 체온 (37.2℃)에서 겔 상태로 전환되어 약물 방출 특성을 수정할 수 있다 (D. Ramya Devi et al, J. Pharm. Sci. & Res. Vol.5(8), 2013, 159 - 165; Y. Mao 등 Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 35 (2004) 1127-1142).

항-PD-1 또는 이의 항원-결합 단편은 다양한 방법에 의해 대상체, 예를 들어, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 다수의 적용에 대해, 투여 경로는 다음 중 하나이다: 정맥 주사 또는 주입 (IV), 피하 주사 (SC), 복강 내 (IP), 또는 근육 주사. 관절 내 전달을 사용하는 것도 가능하다. 다른 비경구 투여 방식도 사용할 수 있다. 이러한 모드의 예는 동맥 내, 척수강 내, 피막 내, 안와 내, 심장 내, 피내, 기관 간, 표피하, 관절 내, 피막하, 지주막하, 척수 내, 경막외 및 흉골 내 주사를 포함한다. 일부 경우에, 경구 투여가 가능하다.

항-PD-1 또는 이의 항원-결합 단편은 다양한 방법에 의해 대상체, 예를 들어, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 다수의적용에 대해, 투여 경로는 다음 중 하나이다: 정맥 주사 또는 주입 (IV), 피하 주사 (SC), 복강 내 (IP), 또는 근육 주사. 관절 내 전달을 사용하는 것도 가능하다. 다른 비경구 투여 방식도 사용할 수 있다. 이러한 모드의 예는 동맥 내, 척수강 내, 피막 내, 안와 내, 심장 내, 피내, 기관간, 표피하, 관절 내, 피막하, 지주막하, 척수 내, 경막외 및 흉골 내 주사를 포함한다. 일부 경우에, 경구 투여가 가능하다.

항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 경로 및/또는 방식은 또한 예를 들어, 종양을 시각화하기 위해 예를 들어, 단층촬영 영상화를 사용하여 대상체를 모니터링함으로써 개별 사례에 맞춰질 수 있다.

항체 또는 이의 항원 결합 단편은 고정 용량으로, 또는 mg/kg 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 또한 항-PD-1 항체에 대한 항체 생성을 감소시키거나 피하도록 선택할 수 있다. 투여 요법은 원하는 반응, 예를 들어 치료 반응 또는 병행 치료 효과를 제공하도록 조정된다. 일반적으로, 항-PD-1 항체 (및 임의로 제2 작용제)의 용량은 대상체에게 생체이용 가능한 양의 작용제를 제공하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 0.1-100 mg/kg, 0.5-100 mg/kg, 1　mg/kg -100 mg/kg, 0.5-20 mg/kg, 0.1-10 mg/kg, 또는 1-10 mg/kg 범위의 용량이 투여될 수 있다. 다른 용량도 사용할 수 있다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체를 사용한 치료를 필요로 하는 대상체는 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 또는 40 mg/kg의 용량으로 항체가 투여된다.

조성물은 약 1 mg/mL 내지 100 mg/ml 또는 약 10 mg/mL 내지 100 mg/ml 또는 약 50 내지 250 mg/mL 또는 약 100 내지 150 mg/ml 또는 약 100 내지 250 mg/ml의 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 투여 단위 형태 또는 "고정 투여량" 또는 "편평 투여량"은 치료될 대상체에 대한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하며; 각 단위는 필요한 약학적 담체 및 선택적으로 다른 제제와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다. 단일 또는 다중 투여가 주어질 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 항체는 연속 주입을 통해 투여될 수 있다. 예시적인 고정 용량은 375 mg, 500 mg 및 750 mg을 포함한다.

항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 용량은 예를 들어, 적어도 2회 용량, 3회 용량, 5회 용량, 10회 이상의 용량을 포함하기에 충분한 기간 (치료 과정)에 걸쳐 주기적인 간격, 예를 들어, 1일 1회 또는 2회, 또는 주당 약 1 내지 4회, 또는 바람직하게는 매주, 격주로 (2주마다), 3주마다, 매월, 예를 들어, 약 1 내지 12주, 바람직하게는 2 내지 8주, 보다 바람직하게는 약 3 내지 7주, 및 더욱 더 바람직하게는 약 4, 5, 또는 6주 동안 투여될 수 있다. 대상체를 효과적으로 치료하는 데 필요한 투여량 및 시기에 영향을 미칠 수 있는 요인은 예를 들어, 질환 또는 장애의 중증도, 제형, 전달 경로, 선행 치료, 대상체의 일반적인 건강 및/또는 연령, 및 다른 기존 질환을 포함한다. 더욱이, 치료적 유효량의 화합물로 대상체를 치료하는 것은 단일 치료를 포함할 수 있거나, 바람직하게는 일련의 치료를 포함할 수 있다.

예시적인 투여 요법은 3주마다 1회 375 mg의 고정 용량으로 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 4주마다 1회 500 mg의 고정 용량으로 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 4주마다 1회 750 mg의 고정 용량으로 항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 용어 "약"은 값의 플러스 또는 마이너스 10%를 지칭한다. 당업자는 여기에 제시된 값이 데이터 수집 또는 기기의 가변성과 같은 실험 조건으로 인해 달라질 수 있음을 알 것이다.

화합물 1

화합물 1 (N-(4-(4-아미노-7-(1-이소부티릴피페리딘-4-일)피롤로[1,2-f][1,2,4]트리아진-5-일)페닐)-1-이소프로필-2,4-디옥소-3-(피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-5-카르복사미드)는 하기 구조를 갖는다:

화합물 1은 미국 특허 번호 9,981,975 및 미국 공개 번호 2019/112313에 기술된 바와 같이 합성될 수 있고, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.

본 개시내용은 또한 본원에 기재된 화합물 1의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

화합물 1의 결정질 염 형태는 미국 공개 번호 2019/112313에 기재되어 있고, 이는 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

일부 구현예에서, 화합물 1 및 이의 염은 실질적으로 단리된다. "실질적으로 단리된"은 화합물이 그것이 형성되거나 검출된 환경으로부터 적어도 부분적으로 또는 실질적으로 분리됨을 의미한다. 부분적인 분리는 예를 들어, 화합물 1이 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적인 분리는 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 99 중량%의 화합물 1, 또는 이의 염을 함유하는 조성물을 포함할 수 있다. 화합물 및 이의 염을 단리하는 방법은 당업계에서 일상적이다.

화합물 1은 다양한 고체 형태로 존재할 수 있다. 본원에 사용된 "고체 형태"는 예를 들어, 융점, 용해도, 안정성, 결정도, 흡습성, 수분 함량, TGA 특성, DSC 특성, DVS 특성, XRPD 특성과 같은 하나 이상의 특성을 특징으로 하는 고체를 지칭하는 것을 의미한다. 고체 형태는 예를 들어, 무정형, 결정질 또는 이들의 혼합물일 수 있다.

상이한 결정질 고체 형태는 전형적으로 상이한 결정질 격자 (예를 들어, 단위 셀)를 가지며, 일반적으로 결과적으로 상이한 물리적 특성을 갖는다. 일부 경우에, 상이한 결정질 고체 형태는 상이한 물 또는 용매 함량을 갖는다. 다른 결정질 격자는 X선 분말 회절 (XRPD)과 같은 고체 상태 특성화 방법으로 식별할 수 있다. 시차 주사 열량계 (DSC), 열중량 분석 (TGA), 동적 증기 흡착 (DVS) 등과 같은 기타 특성화 방법은 고체 형태를 식별하는 데 도움이 될 뿐만 아니라 안정성 및 용매/수분 함량을 결정하는 데 도움이 된다.

반사의 XRPD 패턴 (피크)은 일반적으로 특정 결정 형태의 지문으로 간주된다. XRPD 피크의 상대적 강도는 특히 샘플 준비 기술, 결정 크기 분포, 사용된 다양한 필터, 샘플 장착 절차 및 사용된 특정 기기에 따라 크게 달라질 수 있다는 것은 잘 알려져 있다. 일부 경우에, 기기 유형이나 설정에 따라 새로운 피크가 관찰되거나 기존 피크가 사라질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "피크"는 최대 피크 높이/강도의 적어도 약 4%의 상대 높이/강도를 갖는 반사를 지칭한다. 또한, 기기 변동 및 기타 요인이 2-세타 값에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 본원에 보고된 것과 같은 피크 할당은 약 0.2°(2-세타)만큼 플러스 또는 마이너스로 변할 수 있고, 본원에서 XRPD의 맥락에서 사용되는 용어 "실질적으로"는 상기 언급된 변화를 포함하는 것을 의미한다.

동일한 방식으로, DSC, TGA, 또는 기타 열 실험과 관련된 온도 판독값은 기기, 특정 설정, 샘플 준비 등에 따라 약 ±3℃ 달라질 수 있다.

따라서, 일부 구현예에서, 본 출원은 N-(4-(4-아미노-7-(1-이소부티릴피페리딘-4-일)피롤로[1,2-f][1,2,4]트리아진-5-일)페닐)-1-이소프로필-2,4-디옥소-3-(피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-5-카르복사미드 말레산 염 (또한 화합물 1의 말레에이트 염, 화합물 1 말레에이트 염, 또는 이의 임의의 변형으로 본원에서 지칭됨)을 제공한다.

일부 구현예에서, 염은 N-(4-(4-아미노-7-(1-이소부티릴피페리딘-4-일)피롤로[1,2-f][1,2,4]트리아진-5-일)페닐)-1-이소프로필-2,4-디옥소-3-(피리딘-2-일)-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-5-카르복사미드 대 말레산의 1:1 화학량론적 비이다.

일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물 1의 말레산 염은 결정질이다. 본원에 사용된 바와 같이, "결정질" 또는 "결정질 형태"는 결정질 물질의 특정 격자 배열을 지칭하는 것을 의미한다. 동일한 물질의 상이한 결정 형태는 전형적으로 각각의 결정 형태의 특징인 상이한 물리적 특성에 기인하는 상이한 결정 격자 (예를 들어, 단위 셀)를 갖는다. 일부 경우에, 상이한 격자 구성이 상이한 물 또는 용매 함량을 갖는다.

화합물 1의 화합물의 말레산 염은 예를 들어, 미국 공개 번호 2019/112313에 기재된 형태 I, 형태 II, 형태 III, 형태 IV, 또는 형태 V를 포함하는 다양한 결정질 형태로 제조될 수 있으며, 이는 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

화합물 1 말레산 염, 형태 I:

형태 I로 지칭되는 화합물 1의 결정질 형태가 본원에 제공되며, 이는 하기 실시예 5에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 약 4.3°, 약 8.4°, 약 12.6°, 약 13.2°, 및 약 18.5°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 하나의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 약 4.3°, 약 8.4°, 약 12.6°, 약 13.2°, 및 약 18.5°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 2개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 약 4.3°, 약 8.4°, 약 12.6°, 약 13.2°, 및 약 18.5°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 3개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 약 4.3°, 약 8.4°, 약 12.6°, 약 13.2°, 및 약 18.5°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 4개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 4.3°, 약 8.4°, 약 12.6°, 약 13.2°, 및 약 18.5°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 4.3°, 약 8.4°, 및 약 13.2°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염은 약 211℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다.

화합물 1 말레산 염, 형태 II:

형태 II로 지칭되는 화합물 1의 결정질 형태가 본원에 제공되며, 이는 하기 실시예 6 및 7에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 II는 약 3.8°, 약 7.8°, 약 23.5°, 및 약 26.0°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 하나의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 II는 약 3.8°, 약 7.8°, 약 23.5°, 및 약 26.0°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 2개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 II는 약 3.8°, 약 7.8°, 약 23.5°, 및 약 26.0°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 3개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 II는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 3.8°, 약 7.8°, 약 23.5°, 및 약 26.0°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 II는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 3.8°, 약 7.8°, 및 약 23.5°.

화합물 1 말레산 염, 형태 III:

형태 III으로 지칭되는 화합물 1의 결정질 형태가 본원에 제공되며, 이는 하기 실시예 6 및 8에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1°, 약 18.9°, 및 약 20.6°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 하나의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1°, 약 18.9°, 및 약 20.6°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 2개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1°, 약 18.9°, 및 약 20.6°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 3개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1°, 약 18.9°, 및 약 20.6°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 4개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1°, 약 18.9°, 및 약 20.6°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 3.8°, 약 7.7°, 약 12.1° 및 약 18.9°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 165.4℃ 및 약 195.4℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 165.4℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 III는 약 195.4℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다.

화합물 1 말레산 염, 형태 IV:

형태 IV로 지칭되는 화합물 1의 결정질 형태가 본원에 제공되며, 이는 하기 실시예 6 및 9에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 약 9.1°, 및 약 22.8°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 하나의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 약 9.1°, 및 약 22.8°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 2개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 약 9.1°, 및 약 22.8°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 3개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 약 9.1°, 및 약 22.8°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 4개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 형태 IV 화합물 1의 말레산 염은 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 약 9.1°, 및 약 22.8°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 3.9°, 약 4.6°, 약 7.8°, 및 약 9.1°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 152.1℃ 및 202.6℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 152.1℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다. 일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 IV는 약 202.6℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다,

화합물 1 말레산 염, 형태 V:

형태 V로 지칭되는 화합물 1의 결정질 형태가 본원에 제공되며, 이는 하기 실시예 6 및 10에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 약 18.0°, 및 약 27.3°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 하나의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 약 18.0°, 및 약 27.3°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 2개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 약 18.0°, 및 약 27.3°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 3개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 약 18.0°, 및 약 27.3°로부터 선택되는 2-세타로 환산하여 적어도 4개의 XRPD 피크를 갖는다.

일부 구현예에서, 형태 V 화합물 1의 말레산 염은 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 약 18.0°, 및 약 27.3°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 2-세타로 환산하여 다음 XRPD 피크를 포함한다: 약 4.1°, 약 8.3°, 약 8.8°, 및 약 27.3°.

일부 구현예에서, 화합물 1의 말레산 염의 형태 V는 약 200.1℃에서 흡열 피크를 갖는 DSC 온도기록도를 갖는다.

항체의 제조 및 항체의 약학 조성물

특정 구현예에서, 인간 PD-1에 결합하는 항체는 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 CH1 도메인 및 힌지 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 CH3 도메인을 포함한다. 중쇄 불변 영역이 치환을 포함하는 경우, 이러한 치환은 항체의 특성을 변형시킨다 (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가 또는 감소시킨다). 특정 구현예에서, 항체는 IgG 항체이다. 특정 구현예에서, 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된다.

레티판리맙과 같은 항체는 예를 들어 인용된 아미노산 서열을 암호화하는 합성 유전자를 제조 및 발현하거나 인간 생식계열 유전자를 돌연변이시켜 인용된 아미노산 서열을 암호화하는 유전자를 제공함으로써 제조될 수 있다. 더욱이, 이 항체 및 인간 PD-1에 결합하는 다른 항체는 예를 들어, 하기 방법 중 하나 이상을 사용하여 수득될 수 있다.

인간화 항체는 항원 결합에 직접적으로 관여하지 않는 Fv 가변 영역의 서열을 인간 Fv 가변 영역의 동등한 서열로 대체함으로써 생성될 수 있다. 인간화 항체를 생성하기 위한 일반적인 방법은 Morrison, S. L., Science, 229:1202-1207 (1985), Oi 등, BioTechniques,4:214 (1986), 및 US 5,585,089; US 5,693,761; US 5,693,762; US 5,859,205; 및 US 6,407,213에 제공된다. 이러한 방법은 중쇄 또는 경쇄 중 적어도 하나로부터 면역글로불린 Fv 가변 영역의 전부 또는 일부를 암호화하는 핵산 서열을 단리, 조작 및 발현하는 것을 포함한다. 이러한 핵산의 공급원은 당업자에게 잘 알려졌으며, 예를 들어, 상기 기재된 바와 같이 소정의 표적에 대한 항체를 생성하는 하이브리도마, 생식계열 면역글로불린 유전자, 또는 합성 작제물로부터 수득될 수 있다. 그런 다음 인간화 항체를 암호화하는 재조합 DNA는 적절한 발현 벡터로 클로닝될 수 있다.

인간 생식계열 서열은 예를 들어, Tomlinson, I.A. 등, J. Mol. Biol., 227:776-798 (1992); Cook, G. P. 등, Immunol. Today, 16: 237-242 (1995); Chothia, D. 등, J. Mol. Bio. 227:799-817 (1992); 및 Tomlinson 등, EMBO J., 14:4628-4638 (1995)에 개시되어 있다. V BASE 디렉토리는 인간 면역글로불린 가변 영역 서열의 포괄적인 디렉토리를 제공한다 (Tomlinson, I.A. 등 MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UK에 의해 편집됨). 이들 서열은 예를 들어, 프레임워크 영역 및 CDR에 대한 인간 서열의 공급원으로서 사용될 수 있다. 공통 인간 프레임워크 영역은 또한, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,300,064에 기술된 바와 같이 사용될 수 있다.

항체를 인간화하기 위한 다른 방법이 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 다른 방법은 항체의 3차원 구조, 결합 결정기에 3차원적으로 근접한 프레임워크 위치, 및 면역원성 펩티드 서열을 설명할 수 있다. 예를 들어, WO 90/07861; 미국 특허 번호 5,693,762; 5,693,761; 5,585,089; 5,530,101; 및 6,407,213; Tempest 등 (1991) Biotechnology 9:266-271 참조. 또 다른 방법은 "인간화"라고 하며, 예를 들어, U.S.　2005-008625에 설명되어 있다.

항체는 인간 Fc 영역, 예를 들어 야생형 Fc 영역 또는 하나 이상의 변경을 포함하는 Fc 영역을 포함할 수 있다. 한 구현예에서, 불변 영역은 항체의 특성을 변형시키기 위해 (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 효과기 세포 기능, 또는 보체 기능 중 하나 이상을 증가 또는 감소시키기 위해) 변경, 예를 들어 돌연변이될 수 있다. 예를 들어, 인간 IgG1 불변 영역은 하나 이상의 잔기, 예를 들어, 잔기 234 내지 237 중 하나 이상 (카밧 넘버링에 기초함)에서 돌연변이될 수 있다. 항체는 효과기 기능, 예를 들어, Fc 수용체 결합 및 보체 활성화를 감소 또는 변경하는 중쇄의 CH2 영역에 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들어, 항체는 미국 특허 번호 5,624,821 및 5,648,260에 기술된 것과 같은 돌연변이를 가질 수 있다. 항체는 또한 당업계에 개시된 바와 같이 IgG4의 힌지 영역에서의 돌연변이와 같이 면역글로불린의 2개의 중쇄 사이의 이황화 결합을 안정화시키는 돌연변이를 가질 수 있다 (예를 들어, Angal 등 (1993) Mol. Immunol. 30:105-08). 또한, 예를 들어, U.S. 2005-0037000 참조.

인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체는 전장 항체의 형태, 또는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체의 저분자량 형태 (예를 들어, 생물학적 활성 항체 단편 또는 미니바디), 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, Fd, dAb, scFv, 및 sc(Fv)2일 수 있다. 본 개시내용에 포함되는 다른 항체는 VH 또는 VL과 같은 단일 가변 사슬, 또는 그의 생물학적 활성 단편을 함유하는 단일 도메인 항체 (sdAb)를 포함한다. 예를 들어, Moller 등, J. Biol. Chem., 285(49): 38348-38361 (2010); Harmsen 등, Appl. Microbiol. Biotechnol., 77(1):13-22 (2007); U.S. 2005/0079574 및 Davies 등 (1996) Protein Eng., 9(6):531-7 참조. 전체 항체와 마찬가지로, sdAb는 특정 항원에 선택적으로 결합할 수 있다. 분자량이 12-15kDa에 불과한 sdAb는 일반 항체보다 훨씬 작고 Fab 단편 및 단일 사슬 가변 단편보다 훨씬 작다.

인간 PD-1 또는 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 이의 하나 이상의 산성 변이체의 혼합물을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 예를 들어, 여기서 산성 변이체(들)의 양은 약 80%, 70%, 60%, 60%, 50%, 40%, 30%, 30%, 20%, 10%, 5% 또는 1% 미만이다. 또한, 적어도 하나의 탈아미드화 부위를 포함하는 인간 PD-1 또는 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물이 제공되며, 여기서 조성물의 pH는 약 5.0 내지 약 6.5이고, 이에 따라, 예를 들어, 항체의 적어도 약 90%가 탈아미드화되지 않는다 (즉, 항체의 약 10% 미만이 탈아미드화된다). 특정 구현예에서, 항체의 약 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 탈아미드화된다. pH는 5.0 내지 6.0, 예를 들어 5.5 또는 6.0일 수 있다. 특정 구현예에서, 조성물의 pH는 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4 또는 6.5이다.

"산성 변이체"는 관심 폴리펩티드보다 더 산성 (예를 들어 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 결정됨)인 관심 폴리펩티드의 변이체이다. 산성 변이체의 예는 탈아미드화된 변이체이다.

폴리펩티드 분자의 "탈아미드화된" 변이체는 원래 폴리펩티드의 하나 이상의 아스파라긴 잔기(들)가 아스파르테이트로 전환된, 즉 중성 아미드 측쇄가 전체적인 산성 특성을 갖는 잔기로 전환된 폴리펩티드이다.

인간 PD-1 또는 PD-L1에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물과 관련하여 본원에 사용된 용어 "혼합물"은 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 원하는 항체 둘 모두, 또는 이의 항원 결합 단편, 및 이의 하나 이상의 산성 변이체의 존재를 의미한다. 산성 변이체는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 주로 탈아미드화된 항체를 포함할 수 있으며, 소량의 다른 산성 변이체(들)도 포함할 수 있다.

특정 구현예에서, 탈아미드화를 제거하도록 돌연변이된 항체의 결합 친화도 (K_D), 온-속도 (K_D on) 및/또는 오프 속도 (K_D off)는 예를 들어, 약 5배, 2배, 1배 (100%), 50%, 30%, 20%, 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 차이를 갖는 야생형 항체의 것과 유사하다.

항체 단편

항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Facb, 및 Fv)은 온전한 항체의 단백질 분해 소화에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 전체 항체를 파파인, 펩신 또는 플라스민과 같은 효소로 처리하여 얻을 수 있다. 전체 항체의 파파인 소화는 F(ab)2 또는 Fab 단편을 생성하고; 전체 항체의 펩신 소화는 F(ab')2 또는 Fab'를 산출하고; 전체 항체의 플라스민 소화는 Facb 단편을 생성한다.

대안적으로, 항체 단편은 재조합적으로 생산될 수 있다. 예를 들어, 관심 항체 단편을 암호화하는 핵산을 작제하고, 발현 벡터에 도입하고, 적합한 숙주 세포에서 발현시킬 수 있다. 예를 들어, Co, M.S. 등, J. Immunol., 152:2968-2976 (1994); Better, M. 및 Horwitz, A.H., Methods in Enzymology, 178:476-496 (1989); Plueckthun, A. 및 Skerra, A., Methods in Enzymology, 178:476-496 (1989); Lamoyi, E., Methods in Enzymology, 121:652-663 (1989); Rousseaux, J. 등, Methods in Enzymology, (1989) 121:663-669 (1989); 및 Bird, R.E. 등, TIBTECH, 9:132-137 (1991)) 참조. 항체 단편은 대장균에서 발현 및 분비될 수 있으므로 이러한 단편의 대량 생산이 용이하다. 항체 단편은 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 대장균으로부터 직접 회수되고 화학적으로 결합되어 F(ab)2 단편을 형성할 수 있다 (Carter 등, Bio/Technology, 10:163-167 (1992)). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체 내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab') 2 단편은 미국 특허 번호 5,869,046에 기재되어 있다.

미니바디

인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체의 미니바디는 디아바디, 단일 사슬 (scFv), 및 단일 사슬 (Fv)2 (sc(Fv)2)를 포함한다.

"디아바디"는 유전자 융합에 의해 구성된 2가 미니바디이다 (예를 들어, Holliger, P. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 90:6444-6448 (1993); EP 404,097; WO 93/11161 참조). 디아바디는 두 개의 폴리펩티드 사슬로 구성된 이량체이다. 디아바디의 각 폴리펩티드 사슬의 VL 및 VH 도메인은 링커에 의해 결합된다. 링커를 구성하는 아미노산 잔기의 수는 2 내지 12개 잔기 (예를 들어, 3 내지 10개 잔기 또는 5개 또는 약 5개 잔기)일 수 있다. 디아바디에서 폴리펩티드의 링커는 일반적으로 너무 짧아서 VL과 VH가 서로 결합할 수 없다. 따라서, 동일한 폴리펩티드 사슬에 암호화된 VL 및 VH는 단일 사슬 가변 영역 단편을 형성할 수 없고, 대신에 상이한 단일 사슬 가변 영역 단편과 이량체를 형성한다. 결과적으로, 디아바디는 두 개의 항원 결합 부위를 갖는다.

scFv는 VH 및 VL을 링커로 연결함으로써 수득된 단일 사슬 폴리펩티드 항체이다 (예를 들어, Huston 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 85:5879-5883 (1988); 및 Plickthun, "The Pharmacology of Monoclonal Antibodies" Vol.113, Ed Resenburg and Moore, Springer Verlag, New York, pp.269-315, (1994) 참조). 연결되는 VH 및 VL의 순서는 특별히 제한되지 않으며 임의의 순서로 배열될 수 있다. 배열의 예는 [VH] 링커 [VL]; 또는 [VL] 링커 [VH]를 포함한다. scFv의 H 쇄 V 영역 및 L 쇄 V 영역은 본원에 기재된 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 임의의 항체, 또는 이의 항원 결합 단편으로부터 유래될 수 있다.

sc(Fv)2는 2개의 VH와 2개의 VL이 링커에 의해 연결되어 단일 사슬을 형성하는 미니바디이다 (Hudson, 등, J. Immunol. Methods, (1999) 231: 177-189 (1999)). sc(Fv)2는 예를 들어, scFv를 링커와 연결함으로써 제조할 수 있다. 본 개시내용의 sc(Fv)2는 단일 사슬 폴리펩티드의 N 말단에서 시작하여 바람직하게는 2개의 VH 및 2개의 VL이 VH, VL, VH, 및 VL ([VH] 링커 [VL] 링커 [VH] 링커 [VL])의 순서로 배열된 항체를 포함하지만; 그러나 2개의 VH 및 2개의 VL의 순서는 상기 배열에 한정되지 않고 임의의 순서로 배열될 수 있다.

이중특이적 항체

이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이적 항체는 PD-1 단백질의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 이러한 항체는 PD-1 결합 부위를 다른 단백질에 대한 결합 부위와 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 이의 저분자량 형태 (예를 들어, F(ab')₂ 이중특이적 항체, sc(Fv)2 이중특이적 항체, 디아바디 이중특이적 항체)로서 제조될 수 있다.

전장 이중특이적 항체의 전통적인 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동-발현에 기초하며, 여기서 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (Millstein 등, Nature, 305:537-539 (1983)). 다른 접근법에서, 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 면역글로불린 중쇄 융합체 및 원하는 경우 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 DNA를 별도의 발현 벡터에 삽입하고 적합한 숙주 세포에 공동 형질감염시킨다. 이는 3개의 폴리펩티드 단편의 비율을 조정할 때 더 큰 유연성을 제공한다. 그러나 동일한 비율의 적어도 2개의 폴리펩티드 사슬의 발현이 높은 수율을 초래하는 경우 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 사슬에 대한 코딩 서열을 단일 발현 벡터에 삽입하는 것이 가능하다.

미국 특허 번호 5,731,168에 기술된 다른 접근볍에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면은 재조합 세포 배양에서 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 C_H3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 첫 번째 항체 분자의 계면에서 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄가 더 큰 측쇄 (예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 보상 "공동"은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 측쇄 (예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 두 번째 항체 분자의 계면에 생성된다. 이는 동종이량체와 같은 다른 원치 않는 최종 생성물보다 이종이량체의 수율을 증가시키는 메커니즘을 제공한다.

이중특이적 항체는 가교 또는 "이종접합체" 항체를 포함한다. 예를 들어, 이종접합체의 항체 중 하나는 아비딘에, 다른 하나는 비오틴에 결합될 수 있다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 만들 수 있다.

"디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편을 만들기 위한 대체 메커니즘을 제공한다. 단편은 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함하는데, 링커는 너무 짧아서 동일한 사슬의 두 도메인 사이의 짝짓기를 허용하지 않는다. 따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 짝을 이루도록 강제되어 2개의 항원 결합 부위를 형성한다.

다가 항체

다가 항체는 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해 2가 항체보다 더 빨리 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. 본원에 기재된 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다가 항체 (예를 들어, 4가 항체)일 수 있으며, 이는 항체의 폴리펩티드 사슬을 암호화하는 핵산의 재조합 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 예시적인 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함 (또는 이로 구성)한다. 다가 항체는 3개 내지 약 8개 (예를 들어, 4개)의 항원 결합 부위를 포함할 수 (또는 이로 구성될 수 있다). 다가 항체는 선택적으로 적어도 하나의 폴리펩티드 사슬 (예를 들어, 적어도 2개의 폴리펩티드 사슬)을 포함하고, 여기서 폴리펩티드 사슬(들)은 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩티드 사슬(들)은 VD1-(X1)_n-VD2-(X2)_n-Fc를 포함할 수 있으며, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc의 폴리펩티드 사슬이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 펩티드 스페이서를 나타내고, n은 0 또는 1이다.

접합 항체

본원에 개시된 항체는 중합체와 같은 거대분자 물질 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), PEG로 변형된 폴리에틸렌이민 (PEI) (PEI-PEG), 폴리글루탐산 (PGA) (N-(2- 히드록시프로필) 메타크릴아미드 (HPMA) 공중합체), 히알루론산, 방사성 물질 (예를 들어 ⁹⁰Y, ¹³¹I) 형광 물질, 발광 물질, 합텐, 효소, 금속 킬레이트, 약물 및 독소 (예를 들어, 칼케아미신, 슈도모나스 외독소 A, 리신 (예를 들어 탈당화된 리신 A 사슬))을 포함하는 다양한 분자에 결합하는 접합 항체일 수 있다.

한 구현예에서, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체의 세포독성 작용 및 결과적으로 그의 치료 효과를 개선하기 위해, 항체는 방사성 동위원소 및 세포독성제를 비롯한 고독성 물질과 접합된다. 이들 접합체는 표적 부위 (즉, 항체에 의해 인식되는 항원을 발현하는 세포)에 선택적으로 독성 부하를 전달할 수 있는 반면, 항체에 의해 인식되지 않는 세포는 보존된다. 독성을 최소화하기 위해, 접합체는 일반적으로 짧은 혈청 반감기를 갖는 분자를 기반으로 조작된다 (따라서, 쥐과 서열, 및 IgG3 또는 IgG4 이소형 사용).

특정 구현예에서, 인간 PD-1 또는 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 순환, 예를 들어, 혈액, 혈청 또는 다른 조직에서 그 안정화 및/또는 잔류를 예를 들어, 적어도 1.5, 2, 5, 10, 또는 50배로 개선하는 모이어티로 변경된다. 예를 들어, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 중합체, 예를 들어, 폴리알킬렌 옥사이드 또는 폴리에틸렌 옥사이드와 같은 실질적으로 비항원성 중합체에 결합 (예를 들어, 접합)될 수 있다. 적합한 중합체는 중량에 따라 실질적으로 달라질 것이다. 약 200 내지 약 35,000 달톤 (또는 약 1,000 내지 약 15,000, 및 2,000 내지 약 12,500) 범위의 분자량 평균을 갖는 중합체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 수용성 중합체, 예를 들어, 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들어, 폴리비닐알코올 또는 폴리비닐피롤리돈에 접합될 수 있다 이러한 중합체의 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜과 같은 폴리알킬렌 옥사이드 단독중합체, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이들의 공중합체 및 이들의 블록 공중합체를 포함하며, 블록 공중합체의 수용성이 유지된다. 추가적인 유용한 중합체는 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 및 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체와 같은 폴리옥시알킬렌; 폴리메타크릴레이트; 카보머; 및 분지형 또는 비분지형 다당류를 포함한다.

전술한 접합 항체는 본원에 기재된 항체 또는 이의 저분자량 형태에 화학적 변형을 수행함으로써 제조될 수 있다. 항체를 변형시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, US 5057313 및 US 5156840).

항체를 생산하는 방법

항체는 박테리아 또는 진핵 세포에서 생산될 수 있다. 일부 항체, 예를 들어, Fab는 박테리아 세포, 예를 들어 대장균 세포에서 생산될 수 있다. 항체는 또한 형질전환된 세포주 (예를 들어, CHO, 293E, COS)와 같은 진핵 세포에서 생산될 수 있다. 또한, 항체 (예를 들어, scFv)는 피치아 (예를 들어, Powers 등, J Immunol Methods. 251:123-35 (2001) 참조), 한세울라, 또는 사크로마이세스와 같은 효모 세포에서 발현될 수 있다. 관심 항체를 생산하기 위해 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 구축하고 발현 벡터에 도입한 후 적합한 숙주 세포에서 발현시킨다. 표준 분자 생물학 기술은 재조합 발현 벡터를 준비하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 데 사용된다.

항체가 박테리아 세포 (예를 들어, 대장균)에서 발현되어야 하는 경우, 발현 벡터는 박테리아 세포에서 벡터의 증폭을 허용하는 특성이 있어야 한다. 또한, JM109, DH5α, HB101, 또는 XL1-블루와 같은 대장균을 숙주로 사용할 때, 벡터는 프로모터, 예를 들어, lacZ 프로모터 (Ward 등, 341:544-546 (1989), araB 프로모터 (Better 등, Science, 240:1041-1043 (1988)), 또는 대장균에서 효율적인 발현을 허용할 수 있는 T7 프로모터를 가져야 한다. 이러한 벡터의 예는 예를 들어, M13-시리즈 벡터, pUC-시리즈 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script, pGEX-5X-1 (Pharmacia), "QIAexpress system" (QIAGEN), pEGFP, 및 pET (이 발현 벡터를 사용하는 경우, 숙주는 바람직하게는 T7 RNA 중합효소를 발현하는 BL21)를 포함한다. 발현 벡터는 항체 분비를 위한 신호 서열을 포함할 수 있다. 대장균의 주변 세포질로의 생산을 위해, pelB 신호 서열 (Lei 등, J. Bacteriol., 169:4379 (1987))이 항체 분비를 위한 신호 서열로 사용될 수 있다. 박테리아 발현의 경우, 염화칼슘 방법 또는 전기천공법을 사용하여 발현 벡터를 박테리아 세포에 도입할 수 있다.

항체가 CHO, COS, 및 NIH3T3 세포와 같은 동물 세포에서 발현되는 경우, 발현 벡터는 이들 세포에서 발현에 필요한 프로모터, 예를 들어, SV40 프로모터 (Mulligan 등, Nature, 277:108 (1979)), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터 (Mizushima 등, Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)), 또는 CMV 프로모터를 포함한다. 면역글로불린 또는 이의 도메인을 암호화하는 핵산 서열에 더하여, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제 기점) 및 선택 가능한 마커 유전자와 같은 추가 서열을 보유할 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예를 들어, 일반적으로 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 선별 마커가 있는 벡터의 예는 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV, 및 pOP13을 포함한다.

한 구현예에서, 항체는 포유동물 세포에서 생산된다. 항체를 발현하기 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO 세포) (Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220에 기술된 dhfr ^- CHO 세포를 포함, 예를 들어, Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601-621에 기술된 바와 같은 DHFR 선택 가능한 마커와 사용됨), 인간 배아 신장 293 세포 (예를 들어, 293, 293E, 293T), COS 세포, NIH3T3 세포, 림프구성 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, 및 형질전환 동물, 예를 들어 형질전환 포유동물로부터의 세포를 포함한다. 예를 들어, 세포는 유방 상피 세포이다.

항체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 인간 PD-1 또는 PD-L1에 결합하는 항체의 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 암호화하는 재조합 발현 벡터는 인산칼슘 매개 형질감염에 의해 dhfr ^- CHO 세포로 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 유전자의 높은 수준의 전사를 유도하기 위해 각각 인핸서/프로모터 조절 요소 (예를 들어, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소와 같이, SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유래됨)에 작동 가능하게 연결된다. 재조합 발현 벡터는 또한 DHFR 유전자를 보유하고, 이는 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 허용한다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 항체 중쇄 및 경쇄의 발현이 가능하도록 배양되고 항체는 배양 배지로부터 회수된다.

항체는 또한 형질전환 동물에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,849,992는 형질전환 포유동물의 유선에서 항체를 발현시키는 방법을 기술하고 있다. 우유 특이적 프로모터 및 관심 항체를 암호화하는 핵산 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하는 이식유전자가 구축된다. 그러한 형질전환 포유동물의 암컷에 의해 생산된 우유는 그 안에서 분비되는 관심 항체를 포함한다. 항체는 우유에서 정제하거나 일부 응용 분야에서는 직접 사용할 수 있다. 본원에 기재된 핵산 중 하나 이상을 포함하는 동물이 또한 제공된다.

본 개시내용의 항체는 숙주 세포의 내부 또는 외부 (예를 들어 배지)로부터 단리되고 실질적으로 순수하고 균질한 항체로서 정제될 수 있다. 항체 정제에 일반적으로 사용되는 분리 및 정제 방법은 항체의 분리 및 정제에 사용될 수 있으며, 임의의 특정 방법에 제한되지 않는다. 항체는 예를 들어, 컬럼 크로마토그래피, 여과, 한외여과, 염석, 용매 침전, 용매 추출, 증류, 면역침전, SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 등전점 집속, 투석 및 재결정을 적절히 선택하고 조합함으로써 단리 및 정제될 수 있다. 크로마토그래피는 예를 들어, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그래피, 겔 여과, 역상 크로마토그래피, 및 흡착 크로마토그래피를 포함한다 (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak 등, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996). 크로마토그래피는 HPLC 및 FPLC와 같은 액상 크로마토그래피를 사용하여 수행할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에 사용되는 컬럼은 단백질 A 컬럼 및 단백질 G 컬럼을 포함한다. 단백질 A 컬럼을 사용하는 컬럼의 예는 Hyper D, POROS, 및 세파로오스 FF (GE Healthcare Biosciences)를 포함한다. 본 개시내용은 또한 이러한 정제 방법을 사용하여 고도로 정제된 항체를 포함한다.

변경된 글리코실화가 있는 항체

상이한 글리코형은 약동학, 약력학, 수용체-상호작용 및 조직-특이적 표적화를 포함하는 치료제의 특성에 중대한 영향을 미칠 수 있다 (Graddis 등, 2002, Curr Pharm Biotechnol. 3: 285-297). 특히, 항체의 경우 올리고당 구조는 항체의 효과기 기능 (예를 들어, CDC를 유도하는 보체 복합체 C1에 대한 결합, 및 ADCC 경로 조절을 담당하는 FcγR 수용체에 대한 결합)에 더하여 단백지분해효소 저항성, FcRn 수용체에 의해 매개되는 항체의 혈청 반감기, 식균 작용 및 항체 피드백에 관련된 특성에 영향을 줄 수 있다 (Nose 및 Wigzell, 1983; Leatherbarrow 및 Dwek, 1983; Leatherbarrow 등,1985; Walker 등, 1989; Carter 등, 1992, PNAS, 89: 4285-4289).

따라서, 항체의 효과기 기능을 조절하는 또 다른 수단은 항체 불변 영역의 글리코실화를 변경하는 것을 포함한다. 변경된 글리코실화는 예를 들어, 글리코실화된 잔기의 수의 감소 또는 증가, 글리코실화된 잔기의 패턴 또는 위치의 변화, 뿐만 아니라 당 구조(들)의 변화를 포함한다. 인간 IgG에서 발견된 올리고당은 효과기 기능의 정도에 영향을 미친다 (Raju, T.S. BioProcess International April 2003. 44-53); 인간 IgG 올리고당의 미세이질성은 CDC 및 ADCC와 같은 생물학적 기능, 다양한 Fc 수용체에 대한 결합 및 C1q 단백질에 대한 결합에 영향을 미칠 수 있다 (Wright A. & Morrison SL. TIBTECH 1997, 15 26-32; Shields 등 J Biol Chem. 2001 276(9):6591-604; Shields 등 J Biol Chem. 2002; 277(30):26733-40; Shinkawa 등 J Biol Chem. 2003 278(5):3466-73; Umana 등 Nat Biotechnol. 1999 Feb; 17(2): 176-80). 예를 들어, C1q에 결합하고 보체 캐스케이드를 활성화하는 IgG의 능력은 2개의 CH2 도메인 (일반적으로 Asn297에 고정됨) 사이에 위치한 탄수화물 모이어티의 존재, 부재 또는 변형에 따라 달라질 수 있다 (Ward and Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77-94 (1995).

Fc-함유 폴리펩티드, 예를 들어 IgG 항체와 같은 항체의 글리코실화 부위는 표준 기술에 의해 확인될 수 있다. 글리코실화 부위의 식별은 실험적이거나 서열 분석 또는 모델링 데이터를 기반으로 할 수 있다. 공통 모티프, 즉 다양한 글리코실 트랜스퍼라제에 의해 인식되는 아미노산 서열이 기술되어 있다. 예를 들어, N-연결된 글리코실화 모티프에 대한 공통 모티프는 종종 NXT 또는 NXS이며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 모든 아미노산일 수 있다. 잠재적인 글리코실화 모티프를 찾기 위한 여러 알고리즘도 설명되었다. 따라서, 항체 또는 Fc-함유 단편 내의 잠재적인 글리코실화 부위를 확인하기 위해, 예를 들어, 생물학적 서열 분석 센터에서 제공하는 웹사이트와 같은 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스를 사용하여 항체의 서열을 검사한다 (N-연결된 글리코실화 부위 예측에 대한 NetNGlyc 서비스 및 O-연결된 글리코실화 부위 예측을 위한 NetOGlyc 서비스 참조).

생체 내 연구는 아글리코실 항체의 효과기 기능의 감소를 확인했다. 예를 들어, 아글리코실 항-CD8 항체는 마우스에서 CD8-보유 세포를 고갈시킬 수 없고 (Isaacs, 1992 J. Immunol. 148: 3062) 아글리코실 항-CD3 항체는 마우스 또는 인간에서 사이토카인 방출 증후군을 유도하지 않는다 (Boyd, 1995 상기; Friend, 1999 Transplantation 68:1632). PD-1 항체의 비당화된 형태는 또한 감소된 효과기 기능을 갖는다.

중요하게도, CH2 도메인에서 글리칸의 제거는 효과기 기능에 상당한 영향을 미치는 것으로 보이지만 항체의 다른 기능적 및 물리적 특성은 변경되지 않은 상태로 남아 있다. 특히, 글리칸의 제거는 혈청 반감기와 항원 결합에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다 (Nose, 1983 상기; Tao, 1989 상기; Dorai, 1991 상기; Hand, 1992 상기; Hobbs, 1992 Mol. Immunol. 29:949).

본 개시내용의 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체는 증가 또는 감소된 효과기 기능(들)을 유도하도록 변형되거나 변경될 수 있다 (제2 PD-1-특이적 항체와 비교하여). 항체의 글리코실화 부위를 변경하는 방법은 예를 들어, US 6,350,861 및 US 5,714,350, WO 05/18572 및 WO 05/03175에 설명되고; 이러한 방법은 글리코실화가 변경되거나 감소되거나 또는 전혀 없는 본 개시내용의 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다.

사용 방법

본원에 설명된 방법은 암의 치료를 포함한다. 예시 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 소장암, 결장암, 직장암, 항문암, 자궁내막암, 위암, 두경부암 (예를 들어, 후두, 하인두, 비인두, 구강인두, 입술 및 입의 암), 신장암, 간암 (예를 들어, 간세포 암종, 담관세포 암종), 폐암 (예를 들어, 선암종, 소세포 폐암 및 비소세포 폐암, 반세포 및 비반세포 암종, 기관지 암종, 기관지 선종, 흉막폐아세포종), 난소암, 전립선암, 고환암, 자궁암, 식도암, 담낭암, 췌장암 (예를 들어 외분비성 췌장암), 위암, 갑상선암, 부갑상선암, 피부암 (예를 들어, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 메르켈 세포 피부암), 및 뇌암 (예를 들어, 성상세포종, 수모세포종, 뇌실막종, 신경 외배엽 종양, 송과체 종양)을 포함한다.

본 개시내용의 치료 방법으로 치료할 수 있는 다른 암은 골암, 안내암, 부인과암, 내분비계 암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 뇌하수체암, 삼중음성유방암 (TNBC) 및 석면에 의해 유발된 암을 포함한 환경적으로 유발된 암을 포함한다.

추가의 예시적인 암은 백혈병 또는 림프종과 같은 조혈 악성종양, 다발성 골수종, 만성 림프구성 림프종, 성인 T 세포 백혈병, B 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 또는 비호지킨 림프종, 골수증식성 신생물 (예를 들어, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판 증가증 및 원발성 골수섬유증), 발덴스트롬 마크로글루불린혈증, 모발 세포 림프종, 만성 골수성 림프종, 급성 림프모구성 림프종, AIDS-관련 림프종, 및 버킷 림프종을 포함한다.

본 개시내용의 치료 방법으로 치료할 수 있는 다른 암은 눈의 종양, 교모세포종, 흑색종, 횡문근종, 림프육종 및 골육종을 포함한다.

본 개시내용의 방법은 또한 전이성 암, 특히 PD-L1을 발현하는 전이성 암의 치료에 유용하다.

일부 구현예에서, 본 개시내용의 방법을 사용하여 치료할 수 있는 질환 및 징후는 혈액암, 두경부암, 육종, 폐암, 위장관암, 비뇨생식기암, 간암, 골암, 신경계 암, 부인과 암 및 피부암을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

예시적인 혈액암은 림프종 및 백혈병, 예를 들어 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 전골수구성 백혈병 (APL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소림프구성 림프종 (SLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 외투 세포 림프종 (MCL), 변연부 림프종 (MZL), 비호지킨 림프종 (재발성 또는 불응성 NHL 포함), 여포성 림프종 (FL), 호지킨 림프종, 림프모구 림프종, 골수증식성 질환 (예를 들어, 원발성 골수섬유증 (PMF), 진성 적혈구증가증 (PV), 본태성 혈소판 증가증 (ET)), 골수이형성 증후군 (MDS), T-세포 급성 림프모구성 림프종 (T-ALL), 다발성 골수종, 피부 T-세포 림프종, 말초 T-세포 림프종, 발덴스트롬 마크로글루불린혈증, 모발 세포 림프종, 만성 골수성 림프종 및 버킷 림프종을 포함한다.

예시적인 육종은 연골육종, 유잉 육종, 골육종, 횡문근육종, 혈관육종, 섬유육종, 지방육종, 점액종, 횡문근종, 횡문근육종, 섬유종, 지방종, 과종종 및 기형종을 포함한다.

예시적인 폐암은 비소세포폐암 (NSCLC), 소세포 폐암, 기관지암종 (편평세포, 미분화 소세포, 미분화 대세포, 선암종), 폐포 (세기관지) 암종, 기관지 선종, 연골종 과오종, 및 중피종을 포함한다.

예시적인 위장관암은 식도암 (편평세포암종, 선암종, 평활근육종, 림프종), 위암 (암종, 림프종, 평활근육종), 췌장암 (관선암종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, 비포마), 소장암 (선암종, 림프종, 카르시노이드 종양, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장암 (선암종, 관상 선종, 융모 선종, 과오종, 평활근종), 결장직장암 및 담관암을 포함한다.

예시적인 비뇨생식기암은 신장암 (선암, 윌름종양 [신모세포종], 신세포암종), 방광 및 요도암 (편평세포암종, 이행세포암종, 선암, 요로상피암종), 전립선암 (선암, 육종), 및 고환암 (정상피종, 기형종, 배아 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 선종 종양, 지방종)을 포함한다.

예시적인 간암은 간암 (간세포 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 선종 및 혈관종을 포함한다.

예시적인 골암은 예를 들어, 골형성 육종 (골육종), 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 림프종(세망 세포 육종), 다발성 골수종, 악성 거대 세포 종양 척삭종, 골연화증 (골연골성 외배설물), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 골성골종, 및 거대세포종양을 포함한다.

예시적인 신경계 암은 두개골 암 (골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 기형 골염), 수막암 (수막종, 수막육종, 신경교종증), 뇌암 (성상세포종, 수모세포종, 신경교종, 뇌실막종, 생식세포종 (송과체종), 교모세포종), 희소돌기아교종, 신경초종, 망막모세포종, 선천성 종양), 및 척수암 (신경섬유종, 수막종, 신경교종, 육종), 뿐만 아니라 신경모세포종, 레르미트 뒤클로병, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종 및 척수 축 종양을 포함한다.

예시적인 부인과 암은 자궁암 (자궁내막암종), 자궁경부암 (자궁경부암종, 종양전 자궁경부 이형성증), 난소암 (난소암종 (장액성 낭선암종, 점액성 낭선암종, 분류되지 않은 암종), 과립막 수막 세포 종양, 세르톨리라이디히 세포 종양, 배아이상종, 악성 기형종), 외음부암 (편평세포암종, 상피내암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질암 (투명세포암종, 편평세포암종, 보트로이드 육종 (배아 횡문근육종), 및 나팔관암 (암종)을 포함한다.

예시적인 피부암은 흑색종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 메르켈 세포 피부암, 두더지 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부 섬유종 및 켈로이드를 포함한다.

예시적인 두경부암은 교모세포종, 흑색종, 횡문근종, 림프육종, 골육종, 편평 세포 암종, 선암종, 구강암, 후두암, 비인두암, 비강 및 부비강암, 갑상선 및 부갑상선암을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 환자에서 간세포 암종을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 환자에서 횡문근육종, 식도암, 유방암, 또는 두경부암의 치료 방법을 제공한다.

일부 구현예에서, 본 개시내용은 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 간세포암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 항문암, 메르켈 세포 암종, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 전립선암, 식도암, 담낭암, 췌장암, 갑상선암, 피부암, 백혈병, 다발성 골수종, 만성 림프구성 림프종, 성인 T 세포 백혈병, B-세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 림프종 또는 비호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글루불린혈증, 모발 세포 림프종, 버킷 림프종, 교모세포종, 흑색종 및 횡문근육종으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 본 개시내용은 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 간세포암, 유방암, 방광암, 결장직장암, 흑색종, 중피종, 폐암, 전립선암, 췌장암, 고환암, 갑상선암, 편평세포암, 교모세포종, 신경모세포종, 자궁암, 및 횡문근종으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 본 개시내용은 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 암은 육종, 두경부암, 흑색종, 및 비소세포 폐암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 육종이다. 일부 구현예에서, 암은 두경부암이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 암은 비소세포 폐암이다.

본원에 기재된 방법은 암, 예를 들어 고형 종양의 치료를 포함한다.

일부 구현예에서, 고형 종양은 피부암, 폐암, 림프종, 육종, 방광암, 요관암, 요도 및 요도암, 위암, 자궁경부암, 간암, 유방암, 신장암, 편평 세포 암종, 결장직장암, 자궁내막암, 항문암, 및 높은 미세부수체 불안정성 (MSI-H), 불일치 복구 결핍 (dMMR) 및/또는 DNA 중합효소 ε 엑소뉴클레아제 도메인 돌연변이 양성 질환이 있는 종양으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 고형 종양은 담관암종, 흑색종, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 호지킨 림프종, 요로상피암, 위암, 간세포 암종, 메르켈 세포 암종, 삼중음성 유방암, 신세포 암종, 두경부 편평 세포 암종, 및 결장직장암으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 고형 종양은 육종, 두경부암, 흑색종, 및 비소세포 폐암으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 육종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 두경부암이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 흑색종이다. 일부 구현예에서, 고형 종양은 비소세포 폐암이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "세포"는 시험관 내, 생체 외 또는 생체 내인 세포를 의미한다. 일부 구현예에서, 생체 외 세포는 포유동물과 같은 유기체로부터 절제된 조직 샘플의 일부일 수 있다. 일부 구현예에서, 시험관 내 세포는 세포 배양물 중의 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 생체 내 세포는 포유동물과 같은 유기체에 살고 있는 세포이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "접촉하는"은 시험관 내 시스템 또는 생체 내 시스템에서 지시된 모이어티를 함께 모으는 것을 지칭한다. 예를 들어, TAM 키나제를 화합물 1과 "접촉시키는"은 화합물 1을 인간과 같은 개인 또는 환자에게 투여하는 것뿐만 아니라, 예를 들어, 화합물 1을 TAM 키나제를 함유하는 세포성 또는 정제된 제제를 함유하는 샘플로 도입하는 것을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체", "개체" 또는 "환자"는 상호교환적으로 사용되며, 포유동물을 비롯한 임의의 동물, 바람직하게는 마우스, 랫트, 기타 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말 또는 영장류, 가장 바람직하게는 인간을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 1) 질환 억제; 예를 들어, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개인의 질환, 병태 또는 장애를 억제 (즉, 병리 및/또는 증상의 추가 발달을 저지), 또는 2) 질환 개선; 예를 들어, 질환, 병태 또는 장애의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개체의 질환, 병태 또는 장애를 개선 (즉, 병리 및/또는 증상을 역전)을 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 질환, 병태 또는 장애에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 질환의 병리 또는 증상을 경험하거나 나타내지 않는 개인의 질환, 병태 또는 장애를 예방하는 것을 지칭한다.

병행 요법

I. 암 치료법

암세포의 성장과 생존은 여러 신호 전달 경로의 기능 장애에 의해 영향을 받을 수 있다. 따라서, 활성을 조절하는 표적에서 상이한 선호도를 나타내는 상이한 효소/단백질/수용체 억제제를 조합하여 그러한 상태를 치료하는 것이 유용하다. 하나 이상의 신호 경로 (또는 주어진 신호 경로에 관련된 하나 이상의 생물학적 분자)를 표적으로 하는 것은 세포 집단에서 발생하는 약물 내성 가능성을 감소시키고/거나 치료의 독성을 감소시킬 수 있다.

예를 들어, 화학요법제, 항염증제, 스테로이드, 면역억제제, 면역항암제, 대사 효소 억제제, 케모카인 수용체 억제제, 및 포스파타제 억제제와 같은 하나 이상의 추가 약제, 뿐만 아니라 예를 들어, WO 2006/056399에 기재된 것과 같은 Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, JAK, c-MET, VEGFR, PDGFR, c-Kit, IGF-1R, RAF, FAK, CDK2, 및 CDK4/6 키나제 억제제와 같은 표적 치료제가 암 및 고형 종양의 치료를 위해 본 개시내용의 치료 방법 및 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 치료 항체와 같은 다른 제제는 암 및 고형 종양의 치료를 위해 본 개시내용의 치료 방법 및 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 하나 이상의 추가 약제는 환자에게 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

본원에 개시된 치료 방법은 암 및 본 명세서에 기재된 다른 질환 또는 장애와 같은 질환의 치료를 위한 하나 이상의 다른 효소/단백질/수용체 억제제 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 암 치료를 위해 하기 키나제의 하나 이상의 억제제와 조합될 수 있다: Akt1, Akt2, Akt3, BCL2, CDK2, CDK4/6, TGF-R, PKA, PKG, PKC, CaM-키나제, 포스포릴라제 키나제, MEKK, ERK, MAPK, mTOR, EGFR, HER2, HER3, HER4, INS-R, IDH2, IGF-1R, IR-R, PDGFR, PDGFR, PI3K (알파, 베타, 감마, 델타 및 다중 또는 선택적), CSF1R, KIT, FLK-II, KDR/FLK-1, FLK-4, flt-1, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, c-Met, PARP, Ron, Sea, TRKA, TRKB, TRKC, TAM 키나제 (Axl, Mer, Tyro3), FLT3, VEGFR/Flt2, Flt4, EphA1, EphA2, EphA3, EphB2, EphB4, Tie2, Src, Fyn, Lck, Fgr, Btk, Fak, SYK, FRK, JAK, ABL, ALK 및 B-Raf. 암 치료를 위한 본 개시내용의 치료 방법 및 요법과 조합될 수 있는 억제제의 비제한적 예는 FGFR 억제제 (FGFR1, FGFR2, FGFR3 또는 FGFR4, 예를 들어, 페미가티닙 (INCY54828), INCB62079), EGFR 억제제 (ErB-1 또는 HER-1로도 알려짐; 예를 들어 에를로티닙, 게피티닙, 반데타닙, 오르시머티닙, 세툭시맙, 네시투무맙, 또는 파니투무맙), VEGFR 억제제 또는 경로 차단제 (예를 들어 베바시주맙, 파조파닙, 수니티닙, 소라페닙, 악시티닙, 포노페닙, 카보잔티닙, 반데타닙, 라무시루맙, 렌바티닙, 지브-애플리버셉트), PARP 억제제 (예를 들어 올라파립, 루카파립, 벨리파립 또는 니라파립), JAK 억제제 (JAK1 및/또는 JAK2, 예를 들어, 룩소리티닙, 바리시티닙, 이타시티닙 (INCB39110), LSD1 억제제 (예를 들어, INCB59872 및 INCB60003), TDO 억제제, PI3K-델타 억제제 (예를 들어, INCB50465 및 INCB50797), PI3K-감마 억제제 예를 들어 PI3K-감마 선택적 억제제, Pim 억제제 (예를 들어, INCB53914), CSF1R 억제제, TAM 수용체 티로신 키나제 (Tyro-3, Axl, 및 Mer), 아데노신 수용체 길항제 (예를 들어, A2a/A2b 수용체 길항제), HPK1 억제제, 케모카인 수용체 억제제 (예를 들어 CCR2 또는 CCR5 억제제), SHP1/2 포스파타제 억제제, 히스톤 데아세틸라제 억제제 (HDAC) 예를 들어 HDAC8 억제제, 혈관 신생 억제제, 인터루킨 수용체 억제제, 브로모 및 추가 말단 패밀리 구성원 억제제 (예를 들어, 브로모도메인 억제제 또는 BET 억제제 예를 들어 INCB54329 및 INCB57643), c-MET 억제제 (예를 들어, 캡마티닙), 항-CD19 항체 (예를 들어, 타파시타맙), ALK2 억제제 (예를 들어, INCB00928); 또는 이들의 조합을 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 PI3Kδ 억제제의 투여와 조합된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 JAK 억제제의 투여와 조합된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 JAK1 또는 JAK2 억제제 (예를 들어, 바리시티닙 또는 룩소리티닙)의 투여와 조합된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 JAK1 억제제의 투여와 조합된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 JAK2에 비해 선택적인 JAK1 억제제의 투여와 조합된다.

병행 요법으로 투여될 수 있는 예시적인 항체는 트라스투주맙 (예를 들어, 항-HER2), 라니비주맙 (예를 들어, 항-VEGF-A), 베바시주맙 (AVASTIN^TM, 예를 들어, 항-VEGF), 파니투무맙 (예를 들어, 항-EGFR), 세툭시맙 (예를 들어, 항-EGFR), 리툭산 (예를 들어, 항-CD20), 및 c-MET에 대한 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

하기 작용제 중 하나 이상이 본 개시내용의 치료 방법과 조합하여 환자에게 투여될 수 있고 비제한적인 목록으로서 제시된다: 세포증식억제제, 시스플라틴, 독소루비신, 탁소테레, 탁솔, 에토포시드, 이리노테칸, 캄프토스타, 토포테칸, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에포틸론, 타목시펜, 5-플루오로우라실, 메톡트렉세이트, 테모졸로미드, 시클로포스파미드, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, IRESSA^TM(게피티닙), TARCEVA^TM (에를로티닙), EGFR에 대한 항체, 인트론, ara-C, 아드리아마이신, 사이토잔, 젬시타빈, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포라민, 부술판, 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 다카르바진, 플록슈리딘, 시타라빈, 6-메르캅토푸린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 옥살리플라틴, 류코비린, ELOXATIN™ (옥살리플라틴), 펜토스타틴, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미트라마이신, 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 테니포시드 17.알파.-에치닐에스트라디올, 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 프레드니손, 플루옥시메스테론, 프로피온산드로모스타놀론, 테스토락톤, 초산메제스트롤, 메틸프레드니솔론, 메틸테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로제스테론, 아미노글루테티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론아세테이트, 류프롤리드, 플루타미드, 토레미펜, 고세렐린, 카보플라틴, 히드록시우레아, 암사크린, 프로카바진, 미토탄, 미톡산트론, 레바미솔, 나벨벤, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 레록사핀, 드롤록사핀, 헥사메틸멜라민, 아바스틴, HERCEPTIN^TM (트라스투주맙), BEXXAR^TM (토시투모맙), VELCADE^TM (보르테조밉), ZEVALIN^TM (이브리투모맙 티욱세탄), TRISENOX^TM (삼산화비소), XELODA^TM (카페시타빈), 비노렐빈, 포르피머, ERBITUX^TM (세툭시맙), 티오테파, 알트레타민, 멜팔란, 트라스투주맙, 레로졸, 풀베스트란트, 엑세메스탄, 이포스파미드, 라툭시맙, C225 (세툭시맙), 캠패스 (알렘투주맙), 클로파라빈, 클라드리빈, 아피디콜론, 리툭산, 수니티닙, 다사티닙, 테자시타빈, Sml1, 플루다라빈, 펜토스타틴, 트리아핀, 디독스, 트리미독스, 아미독스, 3-AP, 및 MDL-101,731.

본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 예를 들어 화학요법, 방사선 요법, 종양-표적 요법, 보조 요법, 면역요법 또는 수술에 의해 암을 치료하는 다른 방법과 조합하여 추가로 사용될 수 있다. 면역요법의 예는 사이토카인 치료 (예를 들어, 인터페론, GM-CSF, G-CSF, IL-2), CRS-207 면역요법, 암 백신, 단일클론 항체, 이중특이적 또는 다중특이성 항체, 항체 약물 접합체, 입양 T 세포 전달, Toll 수용체 작용제, RIG-I 작용제, 종양용해성 바이러스 요법 및 탈리도마이드 또는 JAK1/2 억제제, PI3Kδ 억제제 등을 포함하는 면역조절 소분자를 포함한다. 화합물은 화학요법제와 같은 하나 이상의 항암 약물과 조합하여 투여될 수 있다. 화학요법의 예는 다음 중 하나를 포함한다: 아바렐릭스, 알데스류킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로퓨리놀, 알트레타민, 아나스트로졸, 삼산화비소, 아스파라기나제, 아자시티딘, 베바시주맙, 벡사로텐, 바리시티닙, 블레오마이신, 보르테조밉, 부술판 정맥 주사, 부술판 경구, 칼루스테론, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카르무스틴, 세툭시맙, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 달테파린 나트륨, 다사티닙, 다우노루비신, 데시타빈, 데닐류킨, 데닐류킨 디프티톡스, 덱스라조산, 도세탁셀, 독소루비신, 프로피온산드로모스타놀론, 에쿨리주맙, 에파카도스타트, 에피루비신, 에를로티닙, 에스트라무스틴, 에토포사이드 포스페이트, 에토포사이드, 엑세메스탄, 펜타닐 구연산염, 필그라스팀, 플록슈리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 풀베스트란트, 게피티닙, 젬시타빈, 젬투주맙 오조가미신, 고세렐린 아세테이트, 히슬린 아세테이트, 이브리투모맙 티우세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙 메실레이트, 인터페론 알파 2a, 이리노테칸, 라파티닙 디토실레이트, 레날리도마이드, 레트로졸, 류코보린, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔, 로무스틴, 메클로레타민, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트, 메톡살렌, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 난드롤론 펜프로피온산염, 네라라빈, 노페투모맙, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트, 파니투무맙, 페카스파가세, 페그필그라스팀, 페메트렉스 이나트륨, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 프로카르바진, 퀴나크린, 라스부리케이스, 리툭시맙, 룩소리티닙, 소라페닙, 스트렙토조신, 수니티닙, 수니티닙 말레에이트, 타목시펜, 테모졸로미드, 테니포시드, 테스토락톤, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레티노인, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 보리노스타트 및 졸레드로네이트.

화학요법제의 추가 예는 프로테오솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉), 탈리도미드, 레블리미드, 및 DNA 손상제, 예를 들어 멜팔란, 독소루비신, 시클로포스파미드, 빈크리스틴, 에토포사이드, 카무스틴 등을 포함한다.

예시적인 스테로이드는 덱사메타손 또는 프레드니손과 같은 코르티코스테로이드를 포함한다.

Bcr-Abl 억제제의 예는 이마티닙 메실레이트 (GLEEVAC™), 닐로티닙, 다사티닙, 보스티닙 및 포나티닙, 및 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 적합한 Bcr-Abl 억제제의 다른 예는 미국 특허 번호 5,521,184, WO 04/005281, 및 미국 일련 번호 60/578,491에 개시된 속 및 종의 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

적합한 Flt-3 억제제의 예는 미도스타우린, 레스타우르티닙, 리니파닙, 수니티닙, 수니티닙, 말레에이트, 소라페닙, 퀴자르티닙, 크레놀라닙, 파크리티닙, 탄두티닙, PLX3397 및 ASP2215, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 적합한 Flt-3 억제제의 다른 예는 WO 03/037347, WO 03/099771, 및 WO 04/046120에 개시된 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

적합한 RAF 억제제의 예는 다브라페닙, 소라페닙 및 베무라페닙, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 적합한 RAF 억제제의 다른 예는 WO 00/09495 및 WO 05/028444에 개시된 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

적합한 FAK 억제제의 예는 VS-4718, VS-5095, VS-6062, VS-6063, BI853520, 및 GSK2256098, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 적합한 FAK 억제제의 다른 예는 WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, 및 WO 01/014402에 개시된 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

적합한 CDK4/6 억제제의 예는 팔보시클립, 리보시클립, 트리라시클립, 레로시클립 및 아베마시클립, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 적합한 CDK4/6 억제제의 다른 예는 WO 09/085185, WO 12/129344, WO 11/101409, WO 03/062236, WO 10/075074, 및 WO 12/061156에 개시된 화합물, 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 특히 이마티닙 또는 다른 키나제 억제제에 내성인 환자를 치료하기 위해 이마티닙을 비롯한 하나 이상의 다른 키나제 억제제와 조합하여 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 개시내용의 치료 방법은 암의 치료에서 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있고, 그의 독성 효과의 악화 없이 화학요법제 단독에 대한 반응과 비교하여 치료 반응을 개선할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 치료 방법은 본원에 제공된 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 다발성 골수종의 치료에 사용되는 추가 약제는 멜팔란, 멜팔란 + 프레드니손 [MP], 독소루비신, 덱사메타손 및 벨케이드 (보르테조밉)를 제한 없이, 포함할 수 있다. 다발성 골수종의 치료에 사용되는 추가 제제는 Bcr-Abl, Flt-3, RAF 및 FAK 키나제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 작용제는 알킬화제, 프로테아좀 억제제, 코르티코스테로이드 또는 면역조절제이다. 알킬화제의 예는 시클로포스파미드 (CY), 멜팔란 (MEL), 및 벤다무스틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 프로테아좀 억제제는 카르필조밉이다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 덱사메타손 (DEX)이다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 레날리도마이드 (LEN) 또는 포말리도마이드 (POM)이다. 부가적 또는 상승적 효과는 본 개시내용의 치료 방법을 부가적 제제와 조합하는 바람직한 결과이다.

작용제는 단일 또는 연속 투여 형태로 본 치료 방법의 화합물 1 및/또는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편과 조합될 수 있거나, 작용제는 별개의 제형으로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 덱사메타손과 같은 코르티코스테로이드는 덱사메타손이 연속적이 아니라 간헐적으로 투여되는 본 개시내용의 치료 방법과 조합하여 환자에게 투여된다.

본원에 기재된 치료 방법은 암 세포, 정제된 종양 항원 (재조합 단백질, 펩티드 및 탄수화물 분자를 포함), 세포, 및 면역 자극 사이토카인을 암호화하는 유전자로 형질감염된 세포와 같은 다른 면역원성 제제와 조합될 수 있다. 사용될 수 있는 종양 백신의 비제한적인 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예를 들어 gp100의 펩티드, MAGE 항원, Trp-2, MARTI 및/또는 티로시나제, 또는 사이토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포를 포함한다.

본원에 기재된 치료 방법은 암 치료를 위한 백신접종 프로토콜과 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 세포는 GM-CSF를 발현하도록 형질도입된다. 일부 구현예에서, 종양 백신은 인간 유두종 바이러스 (HPV), 간염 바이러스 (HBV 및 HCV) 및 카포시 헤르페스 육종 바이러스 (KHSV)와 같은 인간 암에 연루된 바이러스로부터의 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 종양 조직 자체로부터 단리된 열 충격 단백질과 같은 종양 특이적 항원과 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 방법은 강력한 항종양 반응을 활성화하기 위해 수지상 세포 면역화와 조합될 수 있다.

본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 Fe 알파 또는 Fe 감마 수용체-발현 효과기 세포를 종양 세포로 표적화하는 이중특이적 거대고리 펩티드와 조합하여 사용될 수 있다. 본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 또한 숙주 면역 반응성을 활성화시키는 거대고리 펩티드와 조합될 수 있다.

일부 추가 구현예에서, 본 개시내용의 치료 방법은 골수 이식 또는 줄기 세포 이식 이전, 동안 및/또는 이후에 환자에게 다른 치료제를 투여하는 것과 조합된다. 본 개시내용의 치료 방법 및 요법은 조혈 기원의 다양한 종양의 치료를 위해 골수 이식과 조합하여 사용될 수 있다.

임의의 상기 구현예에서 논의된 바와 같이, 하나 이상의 약제학적 제제가 환자에게 투여되는 경우, 이들은 동시에, 개별적으로, 순차적으로, 또는 조합하여 (예를 들어 2개 이상의 제제에 대해) 투여될 수 있다.

이들 대부분의 화학요법제의 안전하고 효과적인 투여 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 또한, 그들의 관리는 표준 문헌에 설명되어 있다. 예를 들어, 많은 화학요법제의 투여는 "Physicians' Desk Reference" (PDR, 예를 들어, 1996 edition, Medical Economics Company, Montvale, NJ)에 기술되어 있으며, 이의 개시 내용은 그 전체가 제시된 바와 같이 본원에 참고로 포함된다.

II. 면역 제크포인트 요법

본 개시내용의 화합물 (화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염)은 암 또는 감염과 같은 질환의 치료를 위한 하나 이상의 면역 제크포인트 억제제와 조합하여 사용될 수 있다. 예시적인 면역 제크포인트 억제제는 CBL-B, CD20, CD28, CD40, CD70, CD122, CD96, CD73, CD47, CDK2, GITR, CSF1R, JAK, PI3K 델타, PI3K 감마, TAM, 아르기나제, HPK1, CD137 (4-1BB로도 알려짐), ICOS, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, LAG3, TIM3, TLR (TLR7/8), TIGIT, CD112R, VISTA, PD-1, PD-L1 및 PD-L2와 같은 면역 제크포인트 분자에 대한 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자는 CD27, CD28, CD40, ICOS, OX40, GITR 및 CD137로부터 선택된 자극성 체크포인트 분자이다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자는 A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR, LAG3, PD-1, TIM3, TIGIT, 및 VISTA로부터 선택된 억제성 체크포인트 분자이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 KIR 억제제, TIGIT 억제제, LAIR1 억제제, CD160 억제제, 2B4 억제제 및 TGFR 베타 억제제로부터 선택된 하나 이상의 제제와 조합하여 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 제공된 화합물은 면역 제크포인트 분자의 하나 이상의 작용제, 예를 들어, OX40, CD27, GITR, 및 CD137 (4-1BB로도 알려짐)과 조합하여 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 항-PD1 항체, 항-PD-L1 항체, 또는 항-CTLA-4 항체이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 단일클론 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, 세미필리맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 티즐리주맙, 스파르타리주맙 (PDR001), 세트렐리맙 (JNJ-63723283), 토리팔리맙 (JS001), 캠렐리주맙 (SHR-1210), 신틸리맙 (IBI308), AB122 (GLS-010), AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, BMS936559, JTX-4014, BGB-108, SHR-1210, MEDI4736, FAZ053, BCD-100, KN035, CS1001, BAT1306, LZM009, AK105, HLX10, SHR-1316, CBT-502 (TQB2450), A167 (KL-A167), STI-A101 (ZKAB001), CK-301, BGB-A333, MSB-2311, HLX20, TSR-042, 또는 LY3300054이다. 일부 구현예에서 PD-1 또는 PD-L1의 억제제는 미국 특허 번호 7,488,802, 7,943,743, 8,008,449, 8,168,757, 8,217, 149, 또는 10,308,644; 미국 공개 번호 2017/0145025, 2017/0174671, 2017/0174679, 2017/0320875, 2017/0342060, 2017/0362253, 2018/0016260, 2018/0057486, 2018/0177784, 2018/0177870, 2018/0179179, 2018/0179201, 2018/0179202, 2018/0273519, 2019/0040082, 2019/0062345, 2019/0071439, 2019/0127467, 2019/0144439, 2019/0202824, 2019/0225601, 2019/0300524, 또는 2019/0345170; 또는 PCT 공개 번호 WO 03042402, WO 2008156712, WO 2010089411, WO 2010036959, WO 2011066342, WO 2011159877, WO 2011082400, 또는 WO 2011161699에 개시된 것이고, 이는 그 전체가 참고로 각각 본원에 포함된다. 일부 구현예에서, PD-L1의 억제제는 INCB086550이다.

일부 구현예에서, 항체는 항-PD-1 항체, 예를 들어, 항-PD-1 단일클론 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미필리맙, 스파르타리주맙, 캠렐리주맙, 세트렐리맙, 토리팔리맙, 신틸리맙, AB122, AMP-224, JTX-4014, BGB-108, BCD-100, BAT1306, LZM009, AK105, HLX10, 또는 TSR-042이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미필리맙, 스파르타리주맙, 캠렐리주맙, 세트렐리맙, 토리팔리맙, 또는 신틸리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세미필리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 스파르타리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 캠렐리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 세트렐리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 토리팔리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 신틸리맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 AB122이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 AMP-224이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 JTX-4014이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 BGB-108이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 BCD-100이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 BAT1306이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 LZM009이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 AK105이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 HLX10이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 TSR-042이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 단일클론 항체는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD1 항체는 SHR-1210이다. 다른 항암제(들)은 4-1BB (예를 들어, 우렐루맙, 우토밀루맙)와 같은 항체 치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 PD-L1의 억제제, 예를 들어, 항-PD-L1 단일클론 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 단일클론 항체는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 티즐리주맙, BMS-935559, MEDI4736, 아테졸리주맙 (MPDL3280A; RG7446로도 알려짐), 아벨루맙 (MSB0010718C), FAZ053, KN035, CS1001, SHR-1316, CBT-502, A167, STI-A101, CK-301, BGB-A333, MSB-2311, HLX20, 또는 LY3300054이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 또는 티즐리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 아벨루맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 더발루맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 티즐리주맙이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-935559이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 FAZ053이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 KN035이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 CS1001이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 SHR-1316이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 CBT-502이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 A167이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 STI-A101이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 CK-301이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 BGB-A333이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MSB-2311이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 HLX20이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 LY3300054이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 PD-L1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 결합하는 소분자이다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 PD-L1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 결합하고 내부화하는 소분자이다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 US 2018/0179201, US 2018/0179197, US 2018/0179179, US 2018/0179202, US 2018/0177784, US 2018/0177870, US 일련 번호 16/369,654 (2019년 3월 29일 출원됨), 및 US 일련 번호 62/688,164의 것, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로부터 선택된 화합물이고, 이들 각각은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 KIR, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및 TGFR 베타의 억제제이다.

일부 구현예에서, 억제제는 MCLA-145이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CTLA-4의 억제제, 예를 들어, 항-CTLA-4 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙, 트레멜리무맙, AGEN1884, 또는 CP-675,206이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 LAG3의 억제제, 예를 들어, 항-LAG3 항체이다. 일부 구현예에서, 항-LAG3 항체는 BMS-986016, LAG525, INCAGN2385, 또는 에프틸라지모드 알파 (IMP321)이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CD73의 억제제이다. 일부 구현예에서, CD73의 억제제는 올레클루맙이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 TIGIT의 억제제이다. 일부 구현예에서, TIGIT의 억제제는 OMP-31M32이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 VISTA의 억제제이다. 일부 구현예에서, VISTA의 억제제는 JNJ-61610588 또는 CA-170이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 B7-H3의 억제제이다. 일부 구현예에서, B7-H3의 억제제는 에노블리투주맙, MGD009, 또는 8H9이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 KIR의 억제제. 일부 구현예에서, KIR의 억제제는 리릴루맙 또는 IPH4102이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 A2aR의 억제제이다. 일부 구현예에서, A2aR의 억제제는 CPI-444이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 TGF-베타의 억제제이다. 일부 구현예에서, TGF-베타의 억제제는 트라베데르센, 갈루세티닙, 또는 M7824이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 PI3K-감마의 억제제이다. 일부 구현예에서, PI3K-감마의 억제제는 IPI-549이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CD47의 억제제이다. 일부 구현예에서, CD47의 억제제는 Hu5F9-G4 또는 TTI-621이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CD73의 억제제이다. 일부 구현예에서, CD73의 억제제는 MEDI9447이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CD70의 억제제이다. 일부 구현예에서, CD70의 억제제는 쿠사투주맙 또는 BMS-936561이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 TIM3의 억제제, 예를 들어, 항-TIM3 항체이다. 일부 구현예에서, 항-TIM3 항체는 INCAGN2390, MBG453, 또는 TSR-022이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 억제제는 CD20의 억제제, 예를 들어, 항-CD20 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 오비누투주맙 또는 리툭시맙이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 OX40, CD27, CD28, GITR, ICOS, CD40, TLR7/8, 및 CD137 (4-1BB로도 알려짐)의 작용제이다.

일부 구현예에서, CD137의 작용제는 우렐루맙이다. 일부 구현예에서, CD137의 작용제는 우토밀루맙이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 GITR의 억제제이다. 일부 구현예에서, GITR의 작용제는 TRX518, MK-4166, INCAGN1876, MK-1248, AMG228, BMS-986156, GWN323, MEDI1873, 또는 MEDI6469이다. 일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 OX40의 작용제, 예를 들어, OX40 작용제 항체 또는 OX40L 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 항-OX40 항체는 INCAGN01949, MEDI0562 (타볼리맙), MOXR-0916, PF-04518600, GSK3174998, BMS-986178, 또는 9B12이다. 일부 구현예에서, OX40L 융합 단백질은 MEDI6383이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 CD40의 작용제이다. 일부 구현예에서, CD40의 작용제는 CP-870893, ADC-1013, CDX-1140, SEA-CD40, RO7009789, JNJ-64457107, APX-005M, 또는 Chi Lob 7/4이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 ICOS의 작용제이다. 일부 구현예에서, ICOS의 작용제는 GSK-3359609, JTX-2011, 또는 MEDI-570이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 CD28의 작용제이다. 일부 구현예에서, CD28의 작용제는 테랄리주맙이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 CD27의 작용제이다. 일부 구현예에서, CD27의 작용제는 바르릴루맙이다.

일부 구현예에서, 면역 제크포인트 분자의 작용제는 TLR7/8의 작용제이다. 일부 구현예에서, TLR7/8의 작용제는 MEDI9197이다.

본 개시내용의 화합물은 이중특이적 항체와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체의 도메인 중 하나는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, GITR, OX40, TIM3, LAG3, CD137, ICOS, CD3 또는 TGFβ 수용체를 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 PD-1 및 PD-L1에 결합한다. 일부 구현예에서, PD-1 및 PD-L1에 결합하는 이중특이적 항체는 MCLA-136이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 PD-L1 및 CTLA-4에 결합한다. 일부 구현예에서, PD-L1 및 CTLA-4에 결합하는 이중특이적 항체는 AK104이다.

일부 구현예에서, 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 대사성 효소 억제제와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 대사성 효소 억제제는 IDO1, TDO, 또는 아르기나제의 억제제이다. IDO1 억제제의 예는 에파카도스타트, NLG919, BMS-986205, PF-06840003, IOM2983, RG-70099 및 LY338196을 포함한다. 아르기나제 억제제의 억제제는 INCB1158을 포함한다.

전반에 제공된 바와 같이, 추가 화합물, 억제제, 제제 등은 단일 또는 연속 투여 형태의 본 화합물과 조합될 수 있거나, 이들은 개별 투여 형태로서 동시에, 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

약학 조성물

일부 구현예에서, 화합물 1, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 약학 조성물의 일부로서 제제화될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체는 약학 조성물의 일부로서 제제화될 수 있다. 화합물, 및 본원에 기재된 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학 조성물은 예를 들어, 본원에 기재된 장애를 치료하기 위해 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제제화될 수 있다. 전형적으로, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 양립 가능한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어 산 부가 염 또는 염기 부가 염을 포함할 수 있다 (예를 들어, Berge, S.M., 등 (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19 참조).

약제학적 제형은 잘 확립된 기술이며, 예를 들어, Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th Ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727); 및 Kibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3^rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)에 추가로 설명되어 있다.

약학 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이는 예를 들어, 액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예를 들어 액체 용액 (예를 들어, 주사 및 주입 가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 따를 수 있다. 전형적으로 본원에 기재된 제제용 조성물은 주사가능 또는 주입가능한 용액의 형태이다.

조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포솜, 또는 고농도에서 안정한 저장에 적합한 다른 정렬된 구조로 제제화될 수 있다. 멸균 주사 용액은 필요에 따라 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 본원에 기재된 제제를 혼입한 후 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 위에 열거된 것들로부터 필요한 기타 성분을 함유하는 멸균 비히클에 본원에 기재된 작용제를 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조로, 이전에 멸균 여과된 용액으로부터 본원에 기재된 제제 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성한다. 용액의 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함함으로써 야기될 수 있다.

특정 구현예에서, 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편은 이식물을 포함하는 제어 방출 제제와 같은 신속 방출에 대해 화합물을 보호할 담체, 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템과 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체를 사용할 수 있다. 이러한 제형을 제조하는 많은 방법이 특허를 받았거나 일반적으로 알려져 있다. 예를 들어, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978) 참조.

일부 구현예에서, 화합물은 적어도 하나의 부형제를 추가로 포함하는 약학 조성물의 일부로서 제제화된다.

일부 구현예에서, 본원에 제공된 조성물을 제조할 때, 화합물은 부형제와 혼합되거나, 부형제에 의해 희석되거나 예를 들어 캡슐, 사쉐, 종이 또는 기타 용기의 형태로 이러한 담체 내에 봉입된다. 부형제가 희석제 역할을 하는 경우, 활성 성분에 대한 비히클, 담체 또는 매질로 작용하는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 따라서, 조성물은 정제, 환제, 분말, 로젠지, 사쉐, 카세제, 엘릭시르, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체 또는 액체 매질로서), 예를 들어, 최대 10 중량%의 활성 화합물을 함유하는 연고, 질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사 용액 및 멸균 포장 분말 형태일 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 정제 형태이다.

제형을 제조할 때, 화합물은 다른 성분과 조합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공하도록 밀링될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 200 메쉬 미만의 입자 크기로 밀링될 수 있다. 일부 구현예에서, 입자 크기는 제형에 실질적으로 균일한 분포, 예를 들어 약 40 메쉬를 제공하도록 밀링에 의해 조정될 수 있다.

적합한 부형제의 일부 예는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 검 아카시아, 인산칼슘, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 규산칼슘, 미결정 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽 및 메틸 셀룰로스를 포함한다. 제형은 추가로 마그네슘 스테아레이트 및 광유와 같은 윤활제; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 메틸- 및 프로필히드록시-벤조에이트와 같은 보존제; 감미료; 및 향미제를 포함할 수 있다. 본원에 제공된 조성물은 당업계에 공지된 절차를 사용하여 환자에게 투여한 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다.

조성물은 단위 투여 형태로 제형화될 수 있다. 용어 "단위 투여 형태"는 인간 대상체 및 다른 포유동물을 위한 단일 투여량으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하고, 각 단위는 적절한 약학적 부형제와 함께 원하는 치료 효과 (예를 들어, 원하는 PK 프로파일)를 생성하도록 계산된 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다.

특정 구현예에서, 정제와 같은 고체 조성물을 제조하기 위해, 화합물은 약학 부형제와 혼합되어 화합물의 균질한 혼합물을 함유하는 고체 예비-제형 조성물을 형성한다. 이러한 예비-제형 조성물을 균질한 것으로 언급할 때, 화합물은 일반적으로 조성물 전체에 고르게 분산되어 조성물이 정제, 환제 및 캡슐과 같은 동등하게 효과적인 단위 투여 형태로 쉽게 분할될 수 있다. 그런 다음 이러한 고체 예비 제형은 단위 투여 형태로 분할된다.

본 개시내용의 정제 또는 환제는 코팅되거나 달리 배합되어 장기간 작용의 이점을 제공하는 투여 형태를 제공할 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 투여량 및 외부 투여량 구성성분을 포함할 수 있으며, 후자는 전자 위에 외피 형태이다. 구성성분은 위에서 분해되지 않고 내부 성분이 그대로 십이지장으로 통과하거나 방출이 지연되도록 하는 장내 층에 의해 분리될 수 있다. 장용층 또는 코팅에 다양한 재료가 사용될 수 있고, 이러한 재료는 다수의 고분자산 및 셀락, 세틸 알코올 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 재료와 고분자산의 혼합물을 포함한다.

본원에 기재된 조성물이 경구 투여를 위해 혼입될 수 있는 액체 형태는 수용액, 적합하게 향미가 첨가된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 면실유, 참기름, 코코넛유 또는 땅콩유와 같은 식용유를 갖는 향미 에멀젼, 엘릭시르 및 이와 유사한 약제학적 비히클을 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 통상적인 멸균 기술에 의해 멸균되거나 멸균 여과될 수 있다. 수용액은 그대로 사용하기 위해 포장되거나 동결건조될 수 있으며, 동결건조된 제제는 투여 전에 멸균된 수성 담체와 조합된다. 화합물 제제의 pH는 전형적으로 3 내지 11, 보다 바람직하게는 5 내지 9, 가장 바람직하게는 7 내지 8일 것이다. 상기 특정 부형제, 담체 또는 안정화제의 사용은 약학적 염의 형성을 유발할 것임이 이해될 것이다.

일부 구현예에서, 화합물 1은 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 경구 캡슐로서 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 1은 1일 1회 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 150 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 120 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 100 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 80 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 60 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 40 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 20 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg 내지 약 10 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 150 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 120 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 100 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 80 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 60 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 40 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 10 mg 내지 약 20 mg의 1일 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 20 mg, 약 30 mg, 약 45 mg, 약 60 mg, 약 90 mg, 또는 약 120 mg의 1일 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, 화합물 1은 연속 투여 요법으로 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 28일 투여 요법으로 투여된다.

일부 구현예에서, 레티판리맙은 정맥 내 투여된다.

일부 구현예에서, 레티판리맙은 매월 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 레티판리맙은 4주마다 1회 투여된다.

일부 구현예에서, 레티판리맙은 약 250 mg 내지 약 1000 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 레티판리맙은 약 400 mg 내지 약 600 mg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 레티판리맙은 약 500 mg의 용량으로 투여된다.

표지된 화합물

본 개시내용의 다른 양태는 이미징 기술뿐만 아니라 시험관 내 및 생체 내 분석에서도 유용한 표지된 화합물 1 (방사성 표지, 형광 표지, 동위원소 표지 등)에 관한 것이다.

본 개시내용은 동위원소로 표지된 화합물 1을 추가로 포함한다. "동위원소로" 또는 "방사성 표지된" 화합물은 화합물 1이며, 여기서 하나 이상의 원자는 자연에서 일반적으로 발견되는 (즉, 천연 발생) 원자 질량 또는 질량 수와 다른 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자로 대체되거나 치환된다. 본 개시내용의 화합물에 혼입될 수 있는 적합한 방사성핵종은 ²H (중수소의 경우 D로도 표기됨), ³H (삼중수소의 경우 T로도 표기됨), ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁸F, ³⁵S, ³⁶Cl, ⁸²Br, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I 및 ¹³¹I를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 본 개시내용의 화합물에서 하나 이상의 수소 원자는 중수소 원자로 대체될 수 있고, 이는 중수소 원자로 임의로 치환될 수 있다.

화합물 1의 하나 이상의 구성 원자는 자연적 또는 비자연적 풍부 원자의 동위원소로 대체되거나 대체될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물 1 은 적어도 하나의 중수소 원자를 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 화합물에서 하나 이상의 수소 원자는 중수소로 대체되거나 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 2개 이상의 중수소 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물은 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 또는 1-6개의 중수소 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 화합물의 모든 수소 원자는 중수소 원자로 대체되거나 치환될 수 있다.

동위원소를 유기 화합물에 포함시키는 합성 방법은 관련 기술분야에 알려져 있다 (Deuterium Labeling in Organic Chemistry by Alan F. Thomas (New York, N.Y., Appleton-Century-Crofts, 1971; The Renaissance of H/D Exchange by Jens Atzrodt, Volker Derdau, Thorsten Fey and Jochen Zimmermann, Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 7744-7765; The Organic Chemistry of Isotopic Labelling by James R. Hanson, Royal Society of Chemistry, 2011). 동위원소로 표지된 화합물은 NMR 분광법, 대사 실험 및/또는 분석과 같은 다양한 연구에 사용할 수 있다.

중수소와 같은 더 무거운 동위원소로 대체하면 대사 안정성이 높아져, 예를 들어 생체 내 반감기 증가 또는 용량 요구 사항 감소로 인한 특정 치료 이점을 얻을 수 있다. (예를 들어, A. Kerekes 등 J. Med. Chem. 2011, 54, 201-210; R. Xu 등 J. Label Compd. Radiopharm. 2015, 58, 308-312 참조). 특히, 하나 이상의 대사 부위에서의 치환은 하나 이상의 치료 이점을 제공할 수 있다.

"방사성 표지된" 또는 "표지된 화합물"은 하나 이상의 방사성핵종을 포함하는 화합물인 것으로 이해된다. 일부 구현예에서, 방사성 핵종은 ³H 및 ¹⁴C로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 방사성 핵종은 ¹¹C, ¹⁸F, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, 및 ⁷⁷Br로 이루어진 군으로부터 선택된다.

키트

본 개시내용은 또한 예를 들어, 본원에 언급된 암 치료에 유용한 제약 키트를 포함하고, 이는 본원에 기재된 약학 조성물을 함유하는 하나 이상의 용기를 포함한다. 이러한 키트는 원하는 경우 예를 들어, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 용기, 추가 용기 등과 같은 다양한 통상적인 약학적 키트 성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있고, 이는 당업자에게 쉽게 자명할 것이다. 투여할 성분의 양, 투여 지침 및/또는 성분 혼합 지침을 나타내는 삽입물 또는 라벨과 같은 지침도 키트에 포함될 수 있다.

실시예

본 발명은 특정 실시예를 통해 더욱 상세하게 설명될 것이다. 하기 실시예는 예시의 목적으로 제공되며 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하도록 의도되지 않는다. 당업자는 본질적으로 동일한 결과를 산출하기 위해 변경 또는 수정될 수 있는 다양한 중요하지 않은 매개변수를 쉽게 인식할 것이다.

일반적인 방법

H1299 세포 (RRID: CVCL_0060)를 10% 소 태아 혈청 (FBS; GE Healthcare; #SH30071.03)가 있는 RPMI-1640 (RPMI, ThermoFisher Scientific, Carlsbad, CA; #11875-093) 배양 배지에서 유지하고 미국 유형 배양 컬렉션 (ATCC; #CRL-5803)으로부터 얻었다. BAF3 세포를 독일 미생물 및 세포 배양 컬렉션 (DSMZ; Braunschweig, 독일; #ACC 300)로부터 얻고 10% FBS + 4 ng/mL 인터루킨 (IL)-3이 보충된 RPMI에서 성장시켰다. G361 세포 (RRID: CVCL_1220)를 ATCC (#CRL-1424)로부터 얻고 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 유지했다. 모든 인간 세포주는 지난 3년 이내에 짧은 직렬 반복 프로파일링을 사용하여 인증되었다. 모든 실험은 마이코플라스마가 없는 세포로 수행되었다. 레티판리맙은 Incyte에서 제공한 항-인간 예정 세포 사멸 (PD)-1 항체이다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 2명의 건강한 기증자의 정상 백혈구 성분채집술에서 얻었다 (Biological Specialties, Colmar, PA).

실시예 A. 생화학적 분석

TAM 패밀리 구성원의 효소 활성을 억제하는 화합물 1의 생화학적 효능은 AXL, MER 및 TYRO3에 대한 키나제 도메인의 재조합 인산화된 형태를 사용하는 TR-FRET 분석에 의해 조사되었다.

포스포-AXL (pAXL), cMER 및 Tyro3 키나제 활성은 시간 분해 형광 에너지 전달 (TR-FRET) 분석에 의해 측정되었다. AXL의 자가인산화는 실온에서 1시간 동안 50 mM 트리스, pH 7.5, 0.2 mg/mL AXL, 5 mM ATP, 20 mM MgCl₂ 및 2 mM 디티오트레이톨 (DTT)을 함유하는 완충액에서 재조합 AXL 단백질 (ThermoFisher Scientific; #PV4275)을 배양함으로써 키나제 분석 전에 수행했다. 키나제 분석 완충액은 50 mM HEPES, pH　7.5, 10　mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 0.01% NP-40 및 2 mM DTT를 함유했다. 0.69 nM 포스포-AXL, 또는 0.088 nM cMER (Carna Biosciences, Kobe, Japan; #08-108) 또는 0.137 nM TYRO3 (Life Technologies, PR7480A)의 효소 용액을 분석 완충액에서 제조했다. 디메틸 술폭시드 (DMSO)에 용해된 펩티드 기질 비오틴-EQEDEPEGDYFEWLE-아미드 (Quality Controlled Biochemicals, Hopkinton, MA)의 1mM 스톡 용액을 2000 μM ATP를 함유하는 분석 완충액에서 1 μM로 희석하였다. 화합물 1 (15 nL)을 DMSO에 용해시키고 화합물 플레이트로부터 저용량 백색 384-웰 검정 플레이트 (Perkin Elmer ProxiPlate, Waltham, MA)로 옮겼다. 효소 용액 (6 μL; 또는 효소 블랭크용 분석 완충액)을 플레이트의 적절한 웰에 첨가하고 30분 동안 배양했다. 그런 다음, 6 μL/웰 기질 용액을 첨가하여 반응을 개시하였다. 플레이트를 빛으로부터 보호하고 실온 (21℃)에서 60분 (cMER 및 TYRO3) 또는 90분 (AXL) 동안 배양했다. 50 mM 트리스-HCl, pH 7.8, 150　mM NaCl, 0.05%　소 혈청 알부민 (BSA), 45 mM EDTA, 180 nM SA-APC (Perkin Elmer; CR130-100) 및 3　nM Eu-W1024 항-포스포티로신 PY20 (Perkin Elmer; AD0067)을 함유하는 6-μL 검출 용액을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 배양하고, 균일 시간 분해 형광 (HTRF) 신호를 PheraStar FS 플레이트 판독기 (BMG Labtech, Ortenberg, 독일) 상에서 측정했다. 각각의 농도에 대해 억제율을 계산하고, 최대 억제 농도의 절반 (IC₅₀) 값을 GraphPad Prism 소프트웨어 (캘리포니아주 샌디에이고)를 사용한 곡선 피팅으로부터 생성했다.

화합물 가역성은 cMER-억제제 복합체의 신속 대량 희석 후 cMER 효소 활성의 회복을 측정하여 결정했다. cMER, ATP, 및 비오틴 표지된 펩티드 기질을 50 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.01% NP-40, 및 2 mM DTT를 함유하는 키나제 분석 완충액에 희석하였다. 검출 시약 (240 nM SA-APC [Perkin Elmer; CR130-100] 및 4 nM Eu-W1024 항-포스포티로신 PY20 [Perkin Elmer; AD0067])을 50 mM 트리스-HCl, pH 7.8, 150 mM NaCl, 0.05% BSA, 및 45 mM EDTA를 함유하는 검출 완충액에서 제조했다. 화합물의 억제 모드를 확인하기 위해, IC₅₀ 값을 상이한 ATP 농도 (25, 100, 300, 및 1000 μM 반응의 최종 농도)에서 측정했다. 화합물 1을 연장된 시간 (2시간) 동안 8-μL 분석 완충액에서 ATP 및 효소 (66 pM cMER)와 함께 배양했다. 이러한 조건에서, 4 μL의 1.5-μM 비오틴 표지 펩티드를 첨가하여 반응을 시작하기 전에 화합물, ATP 및 효소 사이의 평형에 도달하였다. 1시간의 배양 후, 60 mM EDTA, 240 nM SA-APC (Perkin Elmer; CR130-100), 및 4 nM Eu-W1024 항-포스포티로신 PY20 (Perkin Elmer; #AD0067)을 함유하는 4-μL 검출 시약으로 반응을 멈췄다. 30분 배양 후 PheraStar 플레이트 판독기에 의해 HTRF 모드에서 분석 플레이트를 판독했다. 용량-반응 곡선을 피팅하고 IC₅₀ 값을 ATP 농도의 함수로 표시했다. 화합물 1에 대한 억제 상수 (K_i)는 경쟁적 억제에 대한 방정식 (IC₅₀ = K_i (1+ [ATP]/Km))에 데이터를 피팅함으로써 계산했다.

AXL, MER 및 TYRO3에 대한 화합물 1의 다중 로트로부터의 평균 IC₅₀ 값은 각각, 0.61 ± 0.31 nM (n = 18), 3.17 ± 1.97 nM (n = 25), 및 101 ± 27 nM (n = 25)였고, TYRO3에 비해 약 30배 선택성을 보여준다. 화합물 1은 또한 179개의 키나제를 포함하는 포괄적인 키나제 연구에서 200nM에서 평가되었다. 화합물 1은 c-Met와 비교하여 AXL 및 MER에 대해 약 60배 선택성이었으며 다른 키나제를 억제하지 않았다. 이들 결과는 화합물 1이 AXL 및 MER 키나제의 강력하고 고도로 선택적인 억제제임을 입증한다. ATP 농도에 대한 억제 방식은 MER 키나제 분석을 사용하여 평가되었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, MER 키나제에 대한 화합물 1의 IC₅₀ 값은 ATP 농도에 따라 선형적으로 증가하여, ATP-경쟁적 억제 방식을 나타낸다.

실시예 B. 세포 증식 분석

TAM 수용체 패밀리 내의 세포 효능 및 선택성을 평가하기 위해, AXL, MER 또는 TYRO3의 안정적인 발현을 갖는 마우스 BAF3 세포주를 생성하였다.

이량체화 서열 및 HA 태그와 융합된 AXL, MER 또는 TYRO3의 세포질 도메인을 퓨로마이신 내성 마커가 있는 pMSCV (쥐 줄기 세포 바이러스) 벡터에 클로닝하여 BAF3 세포에 전기천공에 의해 개별적으로 3개의 작제물을 생성했다. IL-3-독립적이고 퓨로마이신 내성인 단일 클론을 선택하고 특성화했다. BAF3 세포 증식에 대한 효과를 평가하기 위해, 1000 세포/웰의 BAF3, BAF3-AXL, BAF3 MER, 또는 BAF3-TYRO3 세포를 화합물 1의 존재 또는 부재하에 384-웰 플레이트에서 48시간 동안 2% FBS가 포함된 RPMI-1640에서 희석된 다양한 농도 (최고 농도 10 μM로부터 3배 희석된 10개의 농도 점)에서 처리하였다. 세포 생존율은 제조사의 절차에 따라 ATP 분석 (CellTiter-Glo Assay, Promega, Madison, WI)에 의해 측정되었다. 데이터를 DMSO 대조군에 대한 억제율로 변환하고, IC₅₀ 곡선을 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 피팅하였다.

화합물 1을 사용한 안정한 BAF3 형질감염체의 처리는 각각 16 ± 11 nM 및 14 ± 4.9 nM의 50% 성장 억제 (GI₅₀) 값에 대해 필요한 농도로 AXL 또는 MER 키나제를 발현하는 BAF3 세포의 증식을 강력하게 억제했지만, TYRO3-발현 BAF3 세포 (IC₅₀ = 498 ± 161 nM)의 성장을 약하게 억제했고 모 BAF3 세포 (IC₅₀ >4000 nM)에 대해 불활성이었다. 이들 세포 데이터는 생화학적 데이터와 일치하고 화합물 1이 AXL 및 MER의 강력한 억제제이고 TYRO3에 대해 >30배 선택성임을 확인시켜준다.

실시예 C. H1299 세포에서 pAXL 억제 분석

AXL 활성을 조절하는 화합물 1의 능력을 높은 수준의 내인성 AXL을 발현하는 종양 세포주에서 평가하였다. 비소세포 폐암 세포주 H1299는 현저하게 증가된 AXL 단백질 발현을 나타내는 것으로 나타났다.

H1299 세포를 96-웰 조직 배양 플레이트 (Costar, Corning Incorporated, Corning, NY)에 플레이팅하고 (30,000 세포/웰) 5% CO₂와 함께 37℃에서 밤새 배양했다. 적절한 농도의 화합물 1을 첨가하고 5% CO₂와 함께 37℃에서 1시간 동안 배양했다. rhGAS6 (R&D Systems, Minneapolis, MN; #885-GSB)을 1 μg/mL로 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5% CO₂와 함께 37℃에서 15분 동안 배양하였다. 세포를 수거하고 얼음 위에서 1시간 동안 프로테아제 및 포스파타제 억제제 (ThermoFisher Scientific; #78446)와 함께 110 μL의 얼음처럼 차가운 용해 완충액 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA; #9803)에서 용해하고 ELISA를 위해 -80℃에서 보관했다. ELISA 플레이트는 Greiner lumitrac 고결합 플레이트를 8 μg/mL의 항-AXL 항체 (R&D Systems; MAB154)와 함께 실온에서 밤새 배양하여 준비했다. 플레이트를 세척하고 0.1% BSA가 포함된 인산염 완충 식염수 (PBS)로 차단했다. 세포 용해물을 ELISA 플레이트에 로딩하고 실온에서 2시간 배양했다. 플레이트를 세척하고 DELFIA 분석 완충액 (Perkin Elmer; #4002-0010)에서 LANCE Eu-W1024 항-포스포-티로신 항체 (Perkin Elmer; #AD0067)와 함께 실온에서 2시간 동안 배양하고, 세척하고, DELFIA 증진 용액 (Perkin Elmer; #4001-0010)을 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 15분 동안 부드럽게 진탕하고 PheraStar (BMG Labtech)에서 판독했다. 데이터를 DMSO 대조군에 대한 억제율로 변환하고, 화합물 1 IC₅₀ 결정은 GraphPad Prism을 사용하여 억제율 대 억제제 농도의 로그 곡선으로 피팅하여 수행했다.

도 2에 나타낸 바와 같이, H1299 세포의 화합물 1 처리는 8 ± 0.63 nM (N = 19)의 IC₅₀ 값으로 pAXL를 강력하게 억제하였다.

실시예 D. G361 세포에서 포스포-MER 억제 분석

MER 자가-인산화를 차단하는 화합물 1의 효능은 높은 수준의 MER 키나제를 발현하는 흑색종 세포주인 G361 세포에서 평가되었다.

새로 해동된 G361 세포는 사용 전 3회 계대 동안 회복하도록 하고, 해동 후 20회 계대 이내의 세포만을 분석에 사용하였다. 세포를 비융합성 조건으로 두고 대수기 성장에 사용했다. 2 mL의 1 Х 10⁶ 세포/mL (2 Х 10⁶ 세포/웰) G361 세포를 6-웰 조직 배양 플레이트 (Corning Incorporated; #3961)에 2일 동안 첨가했다. 분석 시, 각 웰에 1mL의 배지를 첨가하였다. 화합물 1의 활성을 결정하기 위해, DMSO 중 5 mM 화합물 1의 스톡 용액을 사용하여 배양 배지에서 추가로 희석된 DMSO 작업 스톡의 3배 연속 희석을 만들고, 100 μL의 희석된 화합물을 0.2 nM 내지 1 μM 범위의 최종 농도로 각 웰에 첨가하였다. 화합물 1이 없는 대조군 웰의 경우, 100 μL의 0.22% DMSO를 모든 샘플에서 최종 0.02% DMSO 농도를 유지하기 위해 첨가했다. 세포 및 화합물의 혼합물을 5% CO₂가 보충된 가습 인큐베이터에서 37℃에서 1시간 동안 배양한 다음, PBS 중 10 μL의 55.5 μg/mL MER-활성화 항체 (R&D Systems; #MAB8912; 최종 농도는 500 ng/mL)를 자극되지 않은 샘플을 제외한 각 웰에 첨가하고, 5% CO₂가 보충된 가습 인큐베이터에서 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 배양 후, 각 웰을 2 mL의 차가운 PBS로 2회 세척하였다. 1 mM PMSF, Halt 포스파타제 억제제 (1:100 희석; ThermoFisher Scientific; #78426) 및 프로테아제 억제제 (1:50 희석; Cal Biochem^® #535140; MilliporeSigma, Burlington, MA)를 함유하는 용해 완충액 (120 μL; Cell Signaling Technology; #9803)을 각 샘플에 첨가하고 얼음 위에서 30분 동안 배양했다. 세포 추출물을 96-웰 V 바닥 플레이트로 옮기고, 4℃에서 10분 동안 3000rpm으로 원심분리하고 세포 추출물을 포스포-MER (pMer; R&D Systems; #DYC2579)에 대한 ELISA로 분석할 때까지 80℃에서 보관하였다. 플레이트의 광학 밀도는 540 nm에서 파장 보정과 함께 450 nm에서 Molecular Devices SpectraMax Plus 마이크로플레이트 판독기 (Molecular Devices, San Jose, CA)를 사용하여 측정하였다. 4-매개변수 알고리즘 곡선 피팅 소프트웨어 (SOFTmax PRO application, Molecular Devices)를 사용하여 표준 곡선을 생성하기 위해 농도에 대한 표준 흡광도를 플롯팅했다. 미지의 샘플에 대한 pMER 농도는 표준 곡선으로부터의 외삽법에 의해 결정되었다. IC₅₀ 값을 가변 기울기를 갖는 비선형 회귀 S자형 용량-반응 곡선을 사용하여 GraphPad Prism 7.0로 계산하였다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 화합물 1은 8.3 ± 3.1 nM (N = 2)의 IC₅₀ 값으로 G361 흑색종 세포에서 MAB8912에 의해 유도된 MER 인산화를 효과적으로 차단하였다.

실시예 E. 원발성 대식세포에서 MER 키나제 활성의 억제

대식세포에서 MER 키나제의 활성을 조절하는 화합물 1의 능력을 평가하였다.

인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 피콜-파크 밀도 구배 원심분리를 사용하여 분리하고 실온에서 5분 동안 1Х RBC 용해 완충액 (Cell Signaling Technology)을 사용하여 남아 있는 적혈구 (RBC)를 분리하였다. PBMC를 지정된 대로 제조업체 (AutoMacs Pro, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, 독일)의 프로토콜에 따라 CD14 마이크로비드 양성 선택 분리를 사용하여 단핵구에 대해 농축되기 전에 PBS로 세척하였다. CD14⁺ 세포를 100 ng/mL 대식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF; R&D Systems; #216-MC)가 보충된 RPMI-1640 + 10% 열 불활성화 FBS 및 10% AB 인간 혈청 (Sigma-Aldrich Corp., St Louis, MO), 100 U/mL 페니실린 + 100 μg/mL 스트렙토마이신 (Corning)에서 6-웰 플레이트에서 웰당 1.5 Х 10⁶로 초기에 접종하고, 10일 동안 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 대식세포가 부착될 때까지 3일마다 새로운 M-CSF를 첨가하였다. 분석을 준비하기 위해, 배지를 제거하고 세포에 인간 혈청이 없는 새로운 배지를 다시 공급했다. 화합물 1 스톡을 100% DMSO 중 1000Х로 제조하고 먼저 배지에 67배 희석한 다음 대식세포에 첨가할 때 추가로 15배 희석하였다. 대식세포를 37℃, 5% CO₂에서 2시간 동안 화합물 1로처리하였다. 5 μg/mL 항-MER 항체 MAB8912 (R&D Systems)를 추가 30분 동안 대식세포에 첨가하고, 이때 세포를 차가운 PBS로 세척하였다. 모든 PBS를 웰에서 조심스럽게 흡인하고 건조 플레이트를 -20℃에서 동결했다.

대식세포를 얼음 위에서 해동시킨 후 250 μL/웰의 1Х 용해 완충액 (Cell Signaling Technology; #9803) 및 Halt 프로테아제 및 포스파타제 억제제 (ThermoFisher Scientific)로 4℃에서 1시간 동안 용해시켰다. 용해된 세포를 긁어내고 얼음 상에서 에펜도르프 바이알로 옮겼다. 용해물을 4℃에서 15분 동안 12,700rpm에서 원심분리했다. PDX 종양을 칭량하고 프로테아제 및 포스파타제 억제제 칵테일 (Roche, Basel, Switzerland; #11836170001)이 보충된 용해 완충액으로 균질화했다. 종양을 얼음 위에서 30분 동안 용해시킨 다음, 13,000rpm에서 10분 동안 원심분리했다. BCA 단백질 분석 키트 (Pierce, ThermoFisher Scientific; #23225)를 사용하여 단백질 용해물을 정량화했다. 용해물을 6 × Laemmli SDS 샘플 완충액 (Alfa Aesar, Haverhill, MA)과 함께 새 튜브로 옮기고 샘플을 95℃에서 6분 동안 가열했다. 대략 50 μg의 단백질 샘플을 Novex™ 8-16% 트리스-글리신 미니 겔 또는 4-12% 트리스-글리신 Novex WedgeGels (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 사용하여 웰당 로딩하였다. iBlot (ThermoFisher Scientific) 건식 블로팅 시스템을 사용하여 단백질을 니트로셀룰로오스 막으로 옮겼다. 막을 실온에서 1시간 동안 세척 완충액 (100 mM NaCl, 10 mM 트리스-HCl, pH 8.0, 0.1% Tween 20) 중 0.5% 무지방 분유로 차단했다. pMER에 사용된 1차 항체는 PhosphoSolutions (Aurora, CO; #p186-749)로부터 얻었다. 나머지 항체는 Cell Signaling Technology로부터 얻었다: MER (#4319), pAXL (#5724), AXL, (#4566), GAS6 (#67202), pAKT (#4060), AKT (#9272), 및 β-액틴 (#4970). 1차 항체를 0.5% 우유/세척 완충액에 각각 1:500 및 1:1000으로 첨가하고 4℃에서 밤새 흔들어 섞었다. 막을 실온에서 2시간 동안 0.5% 우유/세척 완충액에서 1:2500으로 이차 항체 (항-토끼 IgG1-HRP; Cell Signaling Technology)와 함께 배양하기 전에 세척 완충액에서 3회 세척하였다. SuperSignal West Dura Extended Duration Chemiluminescent 기질 (ThermoFisher Scientific)로 검출하기 전에 막을 세척하고 Fluorochem M Digital Imager (Protein Simple, San Jose, CA)를 사용하여 시각화했다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 화합물 1은 1.6 ± 0.4 nM (N = 2)의 IC₅₀로 농도 의존적 방식으로 1차 대식세포에서 pMER를 억제할 수 있었다. 이러한 데이터는 화합물 1이 종양 및 1차 인간 면역 세포 모두에서 MER 키나제 활성을 억제할 수 있음을 시사한다.

실시예 F. T-세포 증식 분석의 대식세포 억제

화합물 1의 기능적 활성을 조사하기 위해 대식세포 매개 T 세포 증식 억제 효과를 평가하였다.

인간 PBMC를 피콜-하이팩 (GE Healthcare, Chicago, IL; #17-1440-02)에서 밀도 구배 원심분리 후 항-CD14 마이크로비드 (Miltenyi Biotec; #130-050-201)로 정제하여 건강한 기증자의 말초 혈액에서 단리하였다. 단리된 CD14⁺ 단핵구/대식세포를 37℃에서 6일 동안 100 ng/mL M-CSF (R&D Systems; #216-MC) 및 50 ng/mL TGF

1 (R&D Systems; #240-B)와 함께 배양하였고; 100 μL/웰의 CD14⁺ 대식세포를 96-웰 둥근 바닥 배양 플레이트 (Costar; #3799)에서 0.5 Х 10⁶ 세포/Ml로 접종하고 37℃에서 밤새 화합물 1로 처리하였다. CD4⁺CD25^- 효과기 T (T_eff) 세포를 다이나비드 조절 CD4⁺CD25⁺ T-세포 키트 (Life Technologies; #11363D)를 사용하여 단리하고 T_eff세포를 CellTrace CFSE 세포 증식 키트 (ThermoFisher Scientific; #C34554)를 사용하여 카르복시플루오레세인 숙신이미딜 에스테르 (CFSE)로 표지하였다. 새로 CFSE로 표지된 T_eff 세포를 5:1의 비율로 다이나비드 인간 T-활성화제 CD3/CD28 (ThermoFisher Scientific; #11132D)와 혼합한 다음, 100 μL/웰의 T 세포/비드 혼합물 1 Х 10⁶ 세포/mL를 화합물 1-처리된 CD14⁺ 대식세포에 첨가하고 37℃에서 5일 동안 계속 배양하였다. T_eff 세포를 유세포 분석기 (BD LSRFortessa X-20, BD Biosciences, San Jose, CA)로 분석하고 상이한 사이토카인과 케모카인의 농도를 측정하기 위해 무세포 상청액을 Luminex 분석 (Millipore; #HCYTOMAG-60K_38plex)에서 시험하였다.

도 5a는 화합물 1이 T-세포 증식의 대식세포 매개 억제를 부분적으로 역전시켰다는 것을 입증한다. 도 5b에 나타낸 바와 같이, 이는 IFN-γ 생산 증가와 관련이 있었다.

실시예 G. PBMC 세포 공동 배양 분석

항종양 반응을 추가로 증가시키기 위해 체크포인트 차단과 협력하는 화합물 1의 능력을 평가하였다. H1299 폐암 세포를 화합물 1, 항-인간 예정 세포 사멸 (PD)-1 항체 레티판리맙 또는 조합으로 처리된 자극된 인간 PBMC와 공동 배양하고, 전염증성 사이토카인의 생산을 2개의 상이한 실험에서 평가하였다 (도 6). 세 번째 실험을 수행하여 이러한 결과를 확인했다 (나타내지 않음).

H1299 세포를 10% FBS, 100U/mL의 페니실린-스트렙토마이신 (ThermoFisher Scientific; #15140-122) 및 1 × 베타-머캅토에탄올 (ThermoFisher Scientific; #21985-023)을 함유하는 RPMI에서 각각 4 또는 16 Х 10⁴ 세포/mL로 인간 PBMC와 공동 배양하였다. 화합물 1 또는 레티판리맙을 단일 제제로 또는 조합하여 세포에 첨가하였다. 항-CD3 (BD Biosciences #555336), 항-CD28 (BD Biosciences #555725) 또는 SEA (Toxin Technology, Sarasota, FL; #AT101레드)를 세포 성장을 자극하기 위해, 각각, 1 μg/mL, 0.5 μg/mL 또는 100 ng/mL의 최종 농도로 첨가하였다. 배양물을 4일 동안 5% CO₂ 배양기에서 37℃에서 배양하였다. 다중 분석 시스템 (맞춤형 인간 ProcartaPlex Luminex 키트, ThermoFisher Scientific; #PPX-15-MXRWE6P)을 사용하여 사이토카인 분석을 위해 상청액을 수집했다.

화합물 1 단독은 IFN-γ, 종양 괴사 인자-α, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 및 적당히 유도된 IL-12 p70 (도 6b-6d)을 유도했다. 레티판리맙이 또한 공여자의 부분집합에서 이들 사이토카인을 유도한 반면, 화합물 1 및 레티판리맙의 조합은 IL-2 (도 6a)를 포함하는 개별 작용제(도 6)와 비교하여 사이토카인 생산의 현저한 증가를 나타내었다. 이들 데이터는 화합물 1과 체크포인트 차단의 조합이 시험관 내에서 전염증성 사이토카인 생성을 유도할 수 있음을 입증한다.

실시예 H. 생체 내 효능 연구

생체 내에서 화합물 1의 잠재적인 면역조절 활성을 시험하기 위해, 항종양 효능 연구를 동계 종양 모델에서 수행하였다.

환자 유래 이종이식 (PDX) 모델은 항암제의 항종양 효능을 평가하기 위해 일반적으로 사용되는 동물 종양 모델이다 (Jin K, Teng L, Shen Y, He K, Xu Z, Li G. Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review, Clin Transl Oncol (2010) 12:473-80. doi: 10.1007/s12094-010-0540-6). PDX 모델은 환자의 새로운 암 조직을 면역이 손상된 마우스에 직접 이식하여 생성된다. 이러한 모델은 PDX 모델이 시험관 내 계대되지 않는다는 점에서 세포 기반 이종이식 모델과 다른 반면, 세포 기반 이종이식은 조직 배양에서 성장한 이식된 세포에 의해 생성된다. PDX 모델은 1차 환자 종양의 유전적 구성과 조직 형태를 유지하는 것으로 나타났으며, 이는 이들을 전임상 약물 발견에서 가치 있는 도구로 되게 한다 (Izumchenko E, Paz K, Ciznadija D, Sloma I, Katz A, Vasquez-Dunddel D, 등 Patient-derived xenografts effectively capture responses to oncology therapy in a heterogeneous cohort of patients with solid tumors. Ann Oncol (2017) 28:2595-605. doi: 10.1093/annonc/mdx416). PDX 모델은 암 적응증 전반에 걸친 종양 모델에서 항암제의 반응을 평가하는 데 활용되었다 (Gao H, Korn JM, Ferretti S, Monahan JE, Wang Y, Singh M, 등 High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response. Nat Med (2015) 21:1318-25. doi: 10.1038/nm.3954). 이러한 연구는 동일한 암 적응증의 종양에서 발생할 수 있는 치료에 반응하는 모델과 반응하지 않는 모델을 식별하는 데 유용한 것으로 입증되었다.

MBT-2 세포를 일본 연구 생물 자원 세포 은행의 컬렉션으로부터 얻었고 10% FBS가 보충된 DMEM에서 유지되었다. MC38 세포를 NCI로부터 얻었다. 4T1 세포를 ATCC로부터 얻었고 10% FBS가 보충된 RPMI 배지에서 유지되었다. MBT-2 실험의 경우, 5 Х 10⁵ MBT-2 세포를 6- 내지 8-주령 C3H 마우스 또는 흉선이 없는 누드 마우스 (Charles River Laboratories, Wilmington, MA)의 오른쪽 뒷 옆구리에 피하 접종했다. MC38 연구의 경우, 12-주령 암컷 C57BL/6 마우스는 MC38 종양(생체 내 계대 6)을 오른쪽 뒷 옆구리에 접종했다. 4T1 연구의 경우, 7.5 Х 10⁵ 4T1 세포를 6- 내지 8-주령 암컷 BALB/c 마우스 또는 흉선이 없는 누드 마우스 (Charles River Laboratories)의 오른쪽 뒷 옆구리에 피하 접종했다. 마우스는 그룹당 n = 10-12인 종양 부피로 무작위화되었다. 화합물 1은 연구 시작부터 연구 종료까지 지속적으로 하루 2회 (BID) 경구 투여되었다. MC38 연구에서, 항-예정 사멸 리간드 1 (PD-L1) (BE0101, Bio X Cell, West Lebanon, NH)을 일주일에 두 번 15mg/kg으로 복강 내 투여했다. 비히클 그룹 및 화합물 1 그룹은 또한 치료 시작 시부터 랫트 IgG2b 대조군 항체를 주 2회 투여하였다 (BE0090, Bio X Cell). 4T1 연구에서, 항-PD-L1의 단일 용량은 연구 시작 시 15 mg/kg으로 복강 내 투여되었다. 조합 연구에서, 비히클 대조군 및 항-PD-L1을 투여받은 마우스는 연구가 끝날 때까지 비히클 BID를 지속적으로 투여받았다. 비히클 및 화합물 1을 BID 경구 투여하였다. 마우스는 실험 과정에 걸쳐 종양 성장 및 명백한 내약성에 대해 모니터링되었다. PDX 종양 모델은 Champions Oncology (Hackensack, NJ)에서 수행되었다. PDX 종양을 6- 내지 8-주령 암컷 흉선이 없는 누드 마우스에 이식했다. 종양 부피가 대략 150-250 mm³인 경우, 마우스를 종양 부피로 무작위화하고 경구 위관 영양법으로 화합물 1을 10, 30 또는 100 mg/kg BID로 투여하였다. 종양 부피는 공식 (L Х W²)/2를 사용하여 계산되었으며, 여기서 L 및 W는 각각 길이 및 너비 치수를 나타낸다. 종양 성장 억제 (TGI)를 공식 (1 - (V_T/V_C)) Х 100을 사용하여 계산되었으며, 여기서 V_T는 처리마지막 날 처리군의 종양 부피이고, V_C는 처리 마지막 날 대조군의 종양 부피이다. 더넷의 다중 비교 테스트를 사용한 이원 분산 분석 (ANOVA)을 사용하여 처리 그룹 간의 통계적 차이를 결정했다 (GraphPad Prism). 동물은 국제 실험 동물 관리 평가 및 인증 협회에서 완전히 인증한 차단 시설에 수용되었다. 모든 절차는 인간 관리 및 실험 동물 사용에 관한 미국 공공 서비스 정책과 초기 동물 관리 및 사용 위원회 지침에 따라 수행되었다.

연구 종료 시, 화합물 1의 마지막 투여 4시간 후에 종양을 수집하고 얼음 위에 두었다. 종양 샘플을 2mm 조각으로 절단하고 Miltenyi C 튜브 (Miltenyi Biotec; #130-096-334)로 옮겼다. 종양 해리는 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다 (Miltenyi Biotec; #130-096-730). 필터를 차가운 PBS로 헹구고 샘플을 펠릿화했다. 적혈구는 Pharm Lyse (BD Biosciences; #555899)에서 용해되었다. 세포를 PBS로 세척하고 실온에서 15분 동안 Live/Dead 염색 (LifeTech Scientific, Shenzhen, China; #L34966)이 있는 PBS에 재현탁했다. 그런 다음 세포를 PBS로 세척하고 염색 완충액 (BD; #554657)에 재현탁하고 다음 항체를 4℃에서 30분 동안 샘플에 첨가했다: CD3 (BD; #553062), CD45 (BD; #564279), CD8 (BD; #560182), CD4 (BD; #552775), CD11b (BD; #557657), F4/80 (eBiosciences, San Diego, CA; #12-4801-82), MHC Class II (BD; #562564) 및 CD206 (BioLegend; #141708). 세포를 세척하고 고정하고 고정/투과성 완충액 (eBioscience 00-5523-00)으로 투과화시켰다. 세포를 투과 완충액 (eBioscience; 00-8333)에 재현탁시켰다. Ki-67 항체 (BioLegend, San Diego, CA; #652413)를 실온에서 1시간 동안 샘플에 첨가하였다. 그런 다음 세포를 세척하고 획득을 위해 염색 완충액 (BD; #554657)에 재현탁했다. M1 대식세포는 CD45⁺, CD11b⁺ F4/80⁺ 집단 내에서 MHC 클래스 II^Hi/CD206^Lo로확인되었고 M2 대식세포는 MHC 클래스 II^Lo/CD206^Hi로 확인되었다. BD Fortessa에서 데이터를 수집하고 FlowJo 소프트웨어로 분석했다. 종양 내 인터페론 (IFN)-γ 수준은 제조업체의 프로토콜에 따라 다중 단백질 검출 키트로 정량화되었다 (MesoScale Diagnostics, Rockville, MD). 통계적 유의성은 더넷의 다중 비교 테스트를 사용한 일원 ANOVA에 의해 결정되었다 (GraphPad Prism).

화합물 1은 MBT-2 및 4T1 종양 모델에서 용량 의존적 효능을 유도하였다 (도 7a 및 7b). 동일한 종양을 갖는 면역결핍 마우스에서는 활성이 없었고, 이는 항종양 활성이 적어도 이들 모델에서 기능적 면역계에 의존적임을 입증하였다 (도 7c). 4T1 모델에서, 화합물 1 처리는 M1-유사 대 M2-유사 대식세포의 비율을 용량 의존적 방식으로 증가시켰다 (도 7d). 1차 인간 PBMC로 관찰된 향상된 시험관 내 활성에 기초하여, 화합물 1을 생체 내 체크포인트 차단과 조합하여 시험하였다. MC38 모델에서, 화합물 1 및 항-PD-L1 모두 단일 작용제 항종양 활성을 가졌지만, 조합에서 훨씬 더 높은 활성을 가졌다 (도 8a). 단일 제제 치료 둘 모두는 CD4⁺ 및 CD8⁺ 종양-침윤 림프구의 증식을 유도하였고, 조합에서 더 높은 정도로 유도하였다 (도 8b 및 8c). 병행 요법은 또한 단일 작용제 치료와 비교하여 종양에서 증가된 IFN-γ 수준을 초래하였다 (도 8d). 이들 데이터는 화합물 1이 대식세포 분극화를 유도하고, 기능적 CD4⁺ 및 CD8⁺ T-세포 활성을 증가시키고 생체 내 항종양 활성을 향상시키기 위해 체크포인트 차단과 조합되었음을 입증한다.

실시예 I. 육종 PDX 모델

육종 PDX 모델에서 화합물 1의 활성을 PDX 모델에 대한 실시예 H에 기술된 바와 같이 평가하였다. (a) CTG-2041, (b) CTG-1302, 또는 (c) CTG-1339 종양을 보유하는 흉선이 없는 누드 마우스에 10 mg/kg, 30 mg/kg, 및 100 mg/kg로 화합물 1을 하루 2회 경구 투여하였다. 화합물 1 또는 비히클로 처리된 마우스로부터의 CTG-2041 또는 CTG-1339 종양을 용해시키고 pAXL, AXL, pMER, MER, GAS6, pAKT, AKT, 및 β-액틴에 대해 웨스턴 블롯에 의해 처리하였다. 그룹당 3마리의 마우스를 분석했다. 웨스턴 블롯 데이터는 상이한 겔에서 얻었다. CTG-2041 종양에 대한 실험은 혈관육종의 모델을 나타낸다. CTG-1302 종양에 대한 실험은 평활근육종의 모델을 나타낸다. CTG-1339 종양에 대한 실험은 골육종 모델을 나타낸다.

강력한 항종양 반응이 CTG-2041에서 10, 30 및 100 mg/kg BID 화합물 1 투여에서 동등한 활성으로 관찰되었고 95% TGI를 나타냈다 (도 9a). 강력한 항종양 반응이 또한 CTG-1302에서 관찰되었다 (도 9b). 대조적으로, CTG-1339는 화합물 1 처리에 저항성이었다 (도 9c). 비반응자 모델과 비교하여 반응자에서 관찰된 차이에 책임이 있는 잠재적 메커니즘을 이해하기 위해, CTG-2401 및 CTG-1339 종양에서 AXL 및 MER 활성화뿐만 아니라 다운스트림 신호전달에 대한 화합물 1의 영향을 평가하였다 (도 9d). 화합물 1은 두 모델 모두에서 pAXL 및 pMER를 억제한 반면, CTG-2041은 상당히 더 높은 수준의 총 AXL 및 MER, 특히 pAXL 및 pMER을 발현했다 (도 9d). pAKT는 화합물 1의 항종양 효능과 상관관계가 있는 CTG-2041에서만 억제되었다. 화합물 1 처리는 또한 CTG-2041에서 GAS6 수준뿐만 아니라 두 종양 모델 모두에서 총 MER 수준을 증가시켰다.

실험은 (a) CTG-2426 (점액섬유육종) 및 (b) CTG-1861 (위장관 기질) 종양이 있는 흉선이 없는 누드 마우스에서 추가로 수행되었다. 이러한 실험의 결과는 아래 표에 나와 있다.

실시예 J. 인간화 마우스 모델

동물은 국제 실험 동물 관리 평가 및 인증 협회에서 완전히 인증한 차단 시설에 수용되었다. 모든 절차는 인간 관리 및 실험 동물 사용에 관한 미국 공공 서비스 정책과 초기 동물 관리 및 사용 위원회 지침에 따라 수행되었다. 500만 개의 H1299 세포 (ATCC)를 20- 내지 24-주령 암컷 인간 CD34⁺ 재구성된 NSG 마우스의 오른쪽 뒤쪽 옆구리에 피하 이식했다 (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME). 세포 접종은 인산 완충 식염수 (PBS)에 1:1 부피비로 마트리겔 (#354248; Corning, NY)를 포함했다. 종양 부피가 평균 ~150 mm³인 경우, 마우스를 종양 부피 및 공여자 (그룹당 2-5명의 공여자)에 의해 10개의 그룹으로 무작위화하고 비히클 + 인간 IgG1 이소형 대조군 항체, 화합물 1, 레티판리맙, 또는 조합으로 처리하였다. 화합물 1을 0.5% 메틸 셀룰로스 중 50mM 시트레이트 완충제에 용해시키고 30 mg/kg BID로 경구 투여하였다. 레티판리맙을 PBS에 희석하고 5일마다 5 mg/kg으로 복강 내 투여하였다. 종양 성장 억제 (TGI)를 공식 (1-(V_T/V_C))*100을 사용하여 계산하였고, 여기서 V_T는 처리 마지막 날에 치료군의 종양 부피이고 V_C는 처리 마지막 날의 대조군의 종양 부피이다. 통계 분석은 이원 분산 분석을 사용하여 수행되었다.

실시예 K. 1상 연구

이 실시예는 단일 제제 화합물 1 (파트 1) 및 레티판리맙과 조합된 화합물 1 (파트 2)의 안전성 및 내약성, 약동학, 약력학 및 예비 효능을 평가하기 위한 1상 공개 표지 연구를 기술한다.

파트 1과 파트 2는 모두 용량 발견 및 용량 확장으로 구성된다. 파트 1A 및 1B는 선택된 고형 종양이 있는 참가자를 등록한다; 파트 1C는 AML이 있는 참가자를 등록한다. 파트 2A 및 2B는 선택된 고형 종양이 있는 참가자만 등록한다. 연구 치료는 질환 진행, 허용할 수 없는 독성, 사망, 동의 철회 또는 기타 치료 철회 기준이 충족될 때까지 계속된다.

파트 1: 단일 제제 화합물 1

연구는 파트 1A부터 시작된다. 초기에, 시작 용량 수준 코호트의 3명의 참가자는 화합물 1의 단일 용량을 받은 다음 연속 투여가 시작되기 약 1주 전에 노출을 확인하기 위해 시한 PK 평가를 받는다. 각 참가자의 연속 투여 용량 수준은 하기 나열된 노출 기반 투여 지침에 따라 이 PK 평가에서의 노출을 기반으로 결정된다:

·단일 용량 PK 분석의 AUC_0-24h가> 1000 nM·h이지만 < 2000 nM·h이고 C_24h가 ≥15 nM인 경우, 단일 제제 화합물 1 용량의 10 mg 1일 1회 (QD)로 연속 투여가 개시된다.

·단일 용량 PK 분석의 AUC_0-24h가> 2000 nM·h이고 C_24h가 > 15 nM인 경우, 5 mg QD로 연속 투여가 개시된다.

·단일 용량 PK 분석의 AUC_0-24h가< 1000 nM·h 또는 C_24h < 15 nM인 경우, 15 mg QD로 연속 투여가 개시된다.

·단일 용량 PK 분석의 AUC_0-24h가> 15,000 nM·h 또는 C_24h > 50 nM인 경우, 의료 모니터는 참가자의 노출 수준을 평가하여 참가자를 안전하게 치료할 수 있는지 연구 치료를 중단 여부를 결정한다.

용량 증량은 초기 3명의 참가자 중에서 투여된 가장 낮은 용량에서 시작된다. 예를 들어, 초기 참가자 3명 중 1명이 5 mg QD를 받는 경우, 지정된 시작 용량 수준 코호트는 5 mg QD가 되고 3 + 3 + 3 연구 설계를 사용하여 안전성 및 내약성에 대해 평가된다. 이 시나리오를 기반으로, 참가자는 충분한 참가자와 5mg 용량을 허용할 수 있다고 선언하는 데이터가 있을 때까지 5mg 코호트에 등록된다. 유사하게, 초기 3명의 참가자 중 최저 용량이 10 mg QD 또는 15 mg QD인 경우, 각각 10 mg QD 또는 15 mg QD가 지정된 시작 용량 수준이 될 것이며, 참가자는 그 용량 수준 코호트가 허용 가능한 것으로 선언될 때까지 최저 용량 수준 코호트에 등록될 것이다. 화합물 1의 지정된 시작 용량보다 높은 용량으로 시작하는 단일 용량 PK 분석의 초기 3명의 참가자 중 누구라도 자신의 노출 기반 용량을 유지하고 해당 용량 수준 코호트 분석에 포함된다.

주기 1 1일차의 초기 참가자 3명의 수준이 목표 노출 미만인 경우 (AUC_0-24h1000 nM·h 또는 C24h가 ≤15 nM), 다음 용량 수준 증가는 50%를 초과 100% 이하일 수 있다. 단일 용량 PK 분석은 용량이 50% 이상 증가된 임의의 용량 수준 코호트에서 초기 참가자 3명에서 수행되며, 후원자의 재량에 따라 추가 참가자 또는 임의의 다른 용량 수준 코호트에서 수행될 수 있다. 화합물 1에 대한 용량 발견 계획은 다음과 같다:

파트 1A에서 확장을 위한 권장 용량 ("RDE")을 선택하면 파트 1B가 시작된다.

파트 1B는 화합물 1의 RDE의 안전성, 내약성, 효능 및 약력학적 효과를 추가로 특성화하기 위해 각각 약 12명의 참가자로 구성된 4개의 독립적인 종양 특이적 (흑색종, NSCLC, SCCHN, 및 연조직 육종) 용량 확장 코호트를 포함한다. 파트 1B의 모든 참가자는 쌍체 종양 생검 (전처리 및 주기 2 1일차와 주기 3 1일차 사이)이 필요하다. 화합물 1 및 레티판리맙의 파트 2A 조합의 안전성 데이터가 이용 가능하고 조합의 용량이 안전하고 내약성이 있는 것으로 결정되면, 초기 치료 중 생검 및 종양 영상화 완료 후 후원자의 승인을 받고 파트 1B 용량 확장 코호트의 진행 중인 참가자는 또한 레티판리맙을 투여받을 수 있다. 병행 요법을 시작하는 파트 1B 참가자는 주기 1 및 주기 2의 안전성 및 약동학 평가를 반복해야 하며 병행 치료를 시작한 후 4 내지 8주에 반복 생검을 실시하는 데 동의해야 한다. 화합물 1의 용량은 파트 2A에서 레티판리맙과 조합하여 안전하고 허용 가능한 것으로 시험되고 결정된 용량을 초과하지 않는다.

연구의 파트 1C는 또한 파트 1A에서 RDE를 식별하는 즉시 시작될 수 있으며, 파트 1B와 병행하여 수행된다. 이 확장 집단에 등록을 시작하는 것은 후원자의 재량에 따른다. 연구의 이 부분은 재발성 및/또는 불응성 AML을 가진 참가자를 1개의 독립적인 확장 코호트에 등록하고 이 집단에서 화합물 1의 RDE의 안전성, 내약성 및 예비 효능을 평가한다. 파트 1C는 관찰된 반응이 없는 경우 1단계가 끝날 때 조기 종료를 허용하는 중지 규칙이 있는 시몬 2단계 설계를 사용한다. 1단계에서는 10명의 참가자가 등록된다; 객관적인 반응이 관찰되지 않으면 임상 활성의 증거 없이 치료되는 참가자의 수를 최소화하기 위해 추가 등록이 없을 것이다. 적어도 하나의 객관적인 반응이 관찰되면 최대 19명의 추가 참가자가 해당 코호트에 등록되어 최대 29명이 파트 1C에 등록될 수 있다.

파트 2: 레티판리맙과 조합된 화합물 1

파트 2는 파트 2A 및 파트 2B를 포함한다. 파트 2A는 선택된 진행성 고형 종양이 있는 참가자에서 레티판리맙과 조합된 화합물 1의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해 3 + 3 + 3 디자인을 사용하여 수행되는 용량 발견 단계이다.

파트 2A는 파트 1A에서 용량 수준이 안전하고 허용 가능한 것으로 확인되면 시작되며 파트 1A와 병행하여 등록할 수 있지만 현재 설정된 허용 가능한 용량보다 낮은 1 용량 수준에서 등록할 수 있다.

레티판리맙과 조합된 화합물 1에 대한 용량 발견 계획은 하기에 나열되어 있다:

파트 2B는 파트 2A에서 결정된 레티판리맙과 조합된 화합물 1의 RDE에서 안전성, 내약성, 효능 및 약력학적 효과를 추가로 평가하기 위한 용량 확장이다. 각각 약 12명의 참가자로 구성된 4개의 독립적인 종양 특이적 (흑색종, NSCLC, SCCHN, 및 연조직 육종) 확장 코호트가 등록될 것이다. 파트 2B의 모든 참가자는 쌍체 종양 생검 (전처리 및 주기 2, 1일차와 주기 3, 1일차 사이)이 필요하다.

연구 치료

화합물 1은 각 28일 주기로 경구 캡슐 QD로 투여된다. 레티판리맙은 각 28일 주기의 1일째에 IV를 통해 투여된다. 연구 약물(들)은 질환 진행, 약물 중단이 필요한 이상 반응, 또는 참가자 또는 의사의 결정이 있을 때까지 단일 제제 또는 병행 요법을 계속한다. 참가자는 최대 1년 동안 혜택을 받는 경우 계속 치료를 받는다; 그 때, 조사자와 후원자는 치료를 계속하는 것이 임상적으로 적절한지 여부를 논의할 것이다.

참가자는 매일 아침 거의 같은 시간에 화합물 1을 복용해야 한다. 투여 일정은 새로운 약동학 관찰에 따라 조정될 수 있다.

포함 기준

참가자는 다음 기준이 모두 적용되는 경우에만 연구에 포함될 자격이 있다:

첫째, 모든 참가자는 18세 이상이어야 한다.

파트 1A, 1B, 2A, 및 2B: 아래에 요약된 코호트별 요구 사항을 포함한, 화학 요법, 표적 요법, 생물학적 요법, 및 면역 요법을 포함할 수 있는 표준 요법을 사용할 수 없거나, 표준 요법에도 불구하고 진행되었거나 표준 요법에 내성이 없는 고형 신생물의 조직학적 또는 세포학적 증거:

* RECIST v1.1에 따라 수술이나 기타 치유적 치료 또는 절차로 다룰 수 없는 것으로 간주되는 측정 가능한 병변으로 평가에 사용할 수 있는 대상 병변이 적어도 하나 있다. 이전에 방사선 조사된 영역 또는 다른 국소 치료를 받은 영역에 위치한 종양 병변은 병변에서 진행이 입증된 경우 측정 가능한 것으로 간주된다.

파트 1A 및 파트 2A 단독: 진행성 또는 전이성 위 또는 GEJ 선암종, HCC, 흑색종, NSCLC, RCC, 연조직 육종, SCCHN (재발 또는 전이성), TNBC, 또는 요로상피암. MSI-H 종양을 포함한 추가 종양 조직학은 의료 모니터의 승인을 받아 허용될 수 있다.

파트 1B 및 2B 단독:

코호트 1: 진행성 또는 전이성 흑색종

- 1회의 이전 PD-1/L1 함유 요법 (단일 제제 또는 조합)을 포함하지만 이제 제한되지 않는 이용 가능한 표준 치료를 받았고, 항-PD-1/L1 제제를 적어도 2회 투여 받았어야 하며, 치료 중 또는 치료 후에 PD를 경험했다.

- 알려진 BRAF 상태 (V600e 및 V600k).

- 안구 흑색종은 제외된다.

코호트 2: 진행성 또는 전이성 NSCLC

- 이전에 적절한 표적 제제로 치료를 받은 알려진 구동자 돌연변이 (EGFR, ALK, ROS1, BRAF) 가 있는 종양이 있는 참가자는 등록할 수 있다.

- 알려진 PD-L1 발현 상태 및/또는 TPS

코호트 3: 재발성 또는 전이성 SCCHN

- 알려진 PD-L1 발현 상태 및/또는 TPS

- 비인두, 갑상선, 침샘, 비편평조직의 암종은 제외한다.

코호트 4: 진행성 또는 전이성 연조직 육종

- 이용 가능한 표준 치료를 받았어야 한다

- 적격 하위유형은 평활근육종, 저분화/역분화 지방육종, 고급 다형성 미분화 육종/MFH, 점액섬유육종, 악성 말초신경초 종양, 상피양 육종, 투명 세포 육종, 활액 육종, 섬유종, 횡문근육종을 포함한다; 추가 조직학은 의료 모니터의 승인을 받아 등록할 수 있다.

- 이전에 항-PD-1/L1 표적 치료를 받은 적이 없어야 한다.

파트 1C: WHO 기준에 의해 정의된 재발성 및/또는 원발성 불응성 AML; 급성 전골수구성 백혈병 (M3), 치료 관련 AML, 및 형질전환된 MDS는 제외된다.

배제 기준

참가자는 다음 기준 중 하나에 해당하는 경우 연구에서 제외된다:

1. CYP3A4의 강력한 억제제 또는 유도제를 투여받는 참가자.

a. 강력한 CYP3A4 억제제를 사용한 사전 치료를 위한 연구에 등록하려면 화합물 1의 첫 번째 용량 이전에 ≥5 반감기의 휴약 기간이 필요하다.

b. CYP3A4 유도제로 치료받은 모든 참가자에 대한 연구 등록을 위해서는 화합물 1의 첫 번째 투여 전 ≥14일의 휴약 기간이 필요하다.

2. 황반변성, 증식성 당뇨망막병증 또는 황반부종을 동반한 당뇨망막병증, 망막정맥폐쇄, 포도막염, 중심장액망막병증, 백혈병성 망막병증, 유전성 망막변성, 유전성 망막변성의 가족력이 있는 참가자, 및 동공 확장으로 인한 폐쇄각 녹내장의 위험이 있는 참가자는 부적격이다. 안과적 선별 검사 중에 안과 모니터링을 혼란스럽게 할 수 있는 임상적으로 유의한 다른 이상이 확인된 참가자는 부적격이다. 조사자는 안과 선별 검사 중에 이상이 확인되면 의료 모니터에 연락하여 적격성을 논의해야 한다.

3. LVEF < 40%, 불안정 협심증, 주기 1 1일차의 6개월 이내 급성 심근경색증, 뉴욕 심장 협회 클래스 III 또는 IV 울혈성 심부전, 및 치료를 요하는 부정맥을 포함하는 임상적으로 유의한 심장 질환.

4. 조사자의 의견으로는 임상적으로 의미가 있는 ECG의 병력 또는 존재. 스크리닝 QTcF 간격 > 480 밀리초는 제외된다. 단일 QTc가 > 480 밀리초인 경우, 참가자는 3개의 ECG에 대한 평균 QTc가 < 480밀리초인 경우 등록할 수 있다 심실내 전도 지연 (QRS 간격 > 120 밀리초)이 있는 참가자의 경우, 후원자의 승인을 받아 QTc 대신 JTc 간격을 사용할 수 있다. JTc가 QTc 대신 사용되는 경우 JTc는 ≤340 밀리초여야 한다. 왼쪽 번들 분기 블록이 있는 참가자는 제외된다.

5. 치료되지 않은 뇌 또는 CNS 전이 또는 진행된 뇌 또는 CNS 전이 (예를 들어, 뇌 또는 CNS 전이에 기인하는 새로운 또는 확대되는 뇌 전이 또는 새로운 신경학적 증상의 증거). 이전에 치료를 받았고 임상적으로 안정적인 뇌 또는 CNS 전이가 있고 모든 코르티코스테로이드를 2주 이상 중단한 참가자가 자격이 있다.

6. 자가면역 또는 염증성 질환에 대한 지난 2년 전신 치료가 필요하거나 전신 요법을 받고 있는 (즉, 질환 변형제, 코르티코스테로이드 또는 면역억제제 사용) 이전 요법과 무관하거나 이전의 면역 체크포인트 억제제 요법에 의해 유발된 활성 또는 비활성 자가면역 질환 또는 증후군 (예를 들어, 류마티스 관절염, 중등도 또는 중증 건선, 다발성 경화증, 염증성 장 질환)이 있는 참가자.

7. 이전에 3등급 이상의 면역 관련 AE 또는 이전 면역요법에 대한 임의의 안구 독성이 있는 참가자. 다음 3등급 이상의 AE가 허용된다:

a. 국소 요법으로 해결된 3등급 발진.

b. 치료 중단이 필요하지 않은 무증상 리파아제 상승.

c. 위의 배제 기준 #6에 따라 자가면역 조건이 허용된다.

8. 프로토콜 정의 범위 내에 있지 않은 실험실 값. 아래의 스크리닝 화학 및 혈액학 검사가 치료 시작 >7일 전에 수행된 경우, 주기 1 1일차에 연구 약물 투여 전에 검사를 반복하고 적격성을 확인해야 한다. 스크리닝 실험실 값이 다음과 같은 참가자는 부적격이다:

9. 아세노쿠마롤, 플루인디온, 펜프로쿠몬 및 와파린을 포함하지만 이에 국한되지 않는 비타민 K 길항제를 투여받는 참가자는 제외된다.

10. 연구 약물의 첫 투여 전 다음 간격 내에서 항암제 또는 연구 약물로 치료:

a. 화학 요법, 표적 소분자 요법, 또는 방사선 요법의 경우 적어도 14일. 참가자는 치료의 결과로 방사선 폐렴에 걸린 적이 없어야 한다. 후원자의 승인을 받아 비-CNS 질환에 대한 완화 방사선에 대해 1주간의 휴약 기간이 허용된다.

b. 항암 치료에 사용된 이전 단일 클론 항체의 경우 적어도 28일. 반감기가 긴 다른 약제 (예를 들어, > 5일)의 경우, 5번째 반감기 이전에 등록하려면 의료 모니터 승인이 필요하다.

11. 연구 치료를 시작하기 전에 이전 요법 (이전 면역요법 포함) 및/또는 이전 외과적 개입으로 인한 합병증의 독성 효과로부터 ≤1등급 또는 기준선으로 회복되지 않았음; 말초신경독성, 탈모, 피로와 같이 해소될 것으로 예상되지 않는 안정적인 만성독성은 허용된다.

12. 연구 치료의 첫 번째 투여 전 7일 이내에 전신 코르티코스테로이드를 사용하지 않음.

13. 연구 치료의 첫 번째 투여로부터 3개월 이내에 생백신의 수령

14. 전신 치료가 필요한 활동성 감염. 전신 항생제에 대한 28일 세척이 필요하다. 연구 중 및 검사 중 프로바이오틱 사용은 금지된다.

15. HBV 또는 HCV 감염 또는 재활성화 위험의 증거. B형 간염 바이러스 DNA 및 HCV RNA는 검출되지 않아야 한다. 참가자는 HBV DNA, HCV RNA, B형 간염 표면 항원 또는 항 B형 간염 코어 항체에 대해 양성일 수 없다.

16. HIV의 알려진 병력 (HIV 1/2 항체).

17. 연구 약물의 성분 또는 제형 성분에 대한 알려진 과민성 또는 중증 반응.

18. 스크리닝 방문부터 시작하여 연구 치료의 마지막 투여 후 180일까지 연구의 계획된 기간 내에 임신 또는 모유 수유 중이거나 임신 또는 출산 예정.

19. 연구자의 판단에 따른, 연구 치료의 투여 및 필수 연구 방문 참석을 포함하여 완전한 참여를 방해하거나, 참가자에게 상당한 위험을 초래하거나. 또는 연구 데이터의 해석을 방해하는 모든 상태.

20. 참가자 (또는 부모, 보호자 또는 법적 권한을 위임받은 대리인)가 ICF를 이해할 수 없거나 ICF에 서명할 의지가 없음.

21. 알려진 연하곤란, 단장 증후군, 위마비, 또는 경구 투여되는 약물의 섭취 또는 위장 흡수를 제한하는 기타 상태가 있는 참가자.

22. 파트 1C 단독: 화합물 1의 첫 번째 용량의 60일 이내에 HSCT를 받은 참가자, 또는 스크리닝 시점에 HSCT 후 면역억제 요법을 받는 참가자, 또는 임상적으로 유의한 GVHD가 있는 참가자. (진행 중인 피부 GVHD에 국소 스테로이드를 사용하는 것은 허용된다.)

23. 파트 1C 단독: 활동성 CNS 백혈병 또는 알려진 CNS 백혈병을 시사하는 임상 증상이 있는 참가자. 뇌척수액 평가는 스크리닝 중 백혈병에 의한 CNS 침범의 임상적 의심이 있는 경우에만 필요하다.

24. 간질성 폐질환의 증거, 간질성 폐질환의 병력, 또는 활동성, 비감염성 폐렴.

25. 동종 줄기 세포 이식을 포함한 장기 이식 이력 (코호트 1C 제외).

26. (제품 표지 또는 공통 지침에 따라) 치료의 영구 중단이 권장되는 이전 체크포인트 억제제 치료 중 면역 관련 독성 또는 (대체 호르몬으로 잘 조절되는 내분비병증을 제외하고) 관리를 위해 집중적 또는 장기간 면역 억제가 필요한 면역 관련 독성.

27. 안피부 백색증 진단.

본원에 기재된 것 외에 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 그러한 변형은 또한 첨부된 청구항의 범위에 속하는 것으로 의도된다. 본 출원에 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 간행물을 포함하는 각각의 참고 문헌은 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> INCYTE CORPORATION <120> COMBINATION THERAPY COMPRISING AXL/MER AND PD-1/PD-L1 INHIBITORS <130> 20443-0665WO1 <150> US 62/986,482 <151> 2020-03-06 <160> 13 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(288) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 1 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 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PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 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Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(111) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 5 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 6 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 7 Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(10) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(10) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 8 Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 9 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(16) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(16) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 9 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Met Ser Phe Met Asn Trp 1 5 10 15 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 10 Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 11 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 12 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(12) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(12) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 12 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 13 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> humanized, IgG4 monoclonal antibody <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(448) <223> Human PD-1 Polypeptide (NCI Sequence NP 005009.2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> Human PD-1 Signal Sequence <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Trp Leu Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu His Tyr Gly Thr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Claims

환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 환자에,
(i)하기 구조를 갖는 화합물 1:

화합물 1;
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염; 및
(ii) 인간 PD-1에 결합하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 항체는 (ii-1) VH 상보성 결정 영역 (CDR)1, VH CDR2, 및 VH CDR3를 포함하는 가변 중쇄 (VH) 도메인; 및 (ii-2) VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3를 포함하는 가변 경쇄 (VL) 도메인을 포함하며;
(a) VH CDR1은 아미노산 서열 SYWMN (서열 번호 6)을 포함하고;
(b) VH CDR2는 아미노산 서열 VIHPSDSETWLDQKFKD (서열 번호 7)를 포함하고;
(c) VH CDR3는 아미노산 서열 EHYGTSPFAY (서열 번호 8)를 포함하고;
(d) VL CDR1은 아미노산 서열 RASESVDNYGMSFMNW (서열 번호 9)를 포함하고;
(e) VL CDR2는 아미노산 서열 AASNQGS (서열 번호 10)를 포함하고; 그리고
(f) VL CDR3는 아미노산 서열 QQSKEVPYT (서열 번호 11)를 포함하는 것인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물 1 및 항체가 동시에 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물 1 및 항체가 순차적으로 투여되는 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물 1이 경구 투여되는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 또는 항원 결합 단편은 정맥 내 투여를 통해 투여되는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 3주마다 1회 375 mg의 용량으로 투여되는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 4주마다 1회 500 mg의 용량으로 투여되는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 4주마다 1회 750 mg의 용량으로 투여되는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열 번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열 번호 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열 번호 5에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 항체는 Fc 영역 및 힌지 도메인을 포함하고;
(b) Fc 영역 및 힌지 도메인은 IgG4 유형이고; 그리고
(c) 힌지 도메인은 안정화 돌연변이를 포함하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 중쇄를 포함하고 상기 중쇄는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 경쇄를 포함하고 상기 경쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 유형의 것인 Fc 영역을 포함하는 방법.
제1항 내지 제12항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 중쇄를 포함하고 상기 중쇄는 서열 번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제12항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 경쇄 및 중쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열 번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 경쇄는 서열 번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간화 항체인 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 간세포암, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 항문암, 메르켈 세포 암종, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 난소암, 전립선암, 식도암, 담낭암, 췌장암, 갑상선암, 피부암, 백혈병, 다발성 골수종, 만성 림프구성 림프종, 성인 T 세포 백혈병, B 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 또는 비호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글루불린혈증, 모발 세포 림프종, 버킷 림프종, 교모세포종, 흑색종 및 횡문근육종으로부터 선택되는 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 육종, 두경부암, 흑색종 및 비소세포 폐암으로부터 선택되는 방법.