KR20220121272A - 궁궁이 유래의 앱솔루트 타입 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃 유래 앱솔루트 타입(Absolute type) 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게 궁궁이 꽃으로부터 앱솔루트 타입 정유를 추출하는 방법을 제공하며, 상기 방법을 통해 제조된 궁궁이 꽃 유래 정유는 인체 피부 세포 수준에서 세포 증식과 이동 및 콜라겐 합성을 유도하여 표피 조직의 재생, 탄력 증진 및 상처복원에 효과적임을 확인하였다. 따라서 이는 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물로서 사용 될 수 있다.

Description

궁궁이 유래의 앱솔루트 타입 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물{Composition for skin regeneration and wound treatment comprising an absolute type essential oil derived from a Angelica polymorpha as an active ingredient}

본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 유래의 앱솔루트 타입 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 궁궁이 꽃에서 유기용매 추출법(solvent extraction)으로 추출한 앱솔루트 타입(Absolute type) 정유의 표피 조직 재생 또는 상처복원 효과에 관한 것이다.

피부(skin)는 인체의 가장 큰 조직으로 유해한 물질의 체내 침투에 대한 방어벽의 제공을 통해 체내의 근육과 기관을 보호하는 다수의 상피(epithelial)조직이다. 또한 신체 내의 필수 화학물질과 영양소를 유지시키거나 합성을 유도하며, 피부의 구성으로는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하지방층(subcutaneous fat)으로 구성된다. 표피는 다층상피(stratified epithelium)로 가장 밖에서부터 각질층, 투명층, 과립층, 기저층이 순서대로 위치한다. 표피는 각질형성세포와 멜라닌 세포 등으로 구성되어 있으며, 각질형성세포(keratinocyte)는 기저층에서 분열 후 위쪽으로 이동하면서 증식과 분화가 일어나 각질층의 형성을 통해 세균의 침투 및 기계적 자극으로부터 보호하며 수분의 증발을 방지하여 인체 항상성을 유지시키며, 다양한 사이토카인(cytokine)의 분비를 통해 염증반응과 면역반응에 관여한다.

피부조직의 노화는 활성산소(ROS, reactive oxygen species)와 자외선(UV, ultraviolet rays) 등에 의한 원인으로 발생된다. 노화된 피부는 물리적, 화학적인 자극에 의해 쉽게 상처를 입으며, 그 기능이 약화되거나 상실된다. 그 중 가장 대표적인 변화는 콜라겐(collagen) 섬유의 구조변화이다. 콜라겐 분해의 증가와 생합성의 감소가 초래되면서 콜라겐의 항상성에 변화를 유발시키며, 최종적으로 피부 탄력의 감소와 주름을 야기한다. 하지만 피부는 재생과정을 통해 면역반응을 유발하고 표피세포의 증식과 분열을 촉진시켜 혈관 생성을 유도하며, 콜라겐의 합성 등 결체 조직의 수축을 통해 노화된 피부를 회복시킨다. 이때 각질형성세포 증식과 이동은 피부의 재생 및 상처회복에 관여하며, 기저막에 존재하는 구성분자 중 라미닌(Laminin)과 Ⅳ형 콜라겐은 기저막의 기본 골격을 형성하여 피부 탄력 향상과 기저막 형성에 중요한 역할을 한다. 따라서 피부의 노화에 의한 주름, 탄력 저하 및 기능의 약화에 대하여 각질형성세포는 증식과 이동, Ⅳ형 콜라겐 합성 및 분비를 증가시키며, 손상된 피부의 재생 및 탄력을 유도하여 노화된 피부를 개선 및 회복시킨다.

한편, 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.)는 산형과로 여러해살이풀이다. 제주, 전남, 전북, 경남, 경북, 강원, 경기, 평남, 평북, 함남에서 야생하며, 이외는 일본과 만주에 분포한다. 궁궁이는 산골짜기 냇가 근처에서 자라며, 다년생 식물이다. 높이는 0.8 m~1.5 m까지 자라며, 잎은 삼각형 또는 삼각상의 넓은 달걀 모양으로 털이 없고 3개씩 3~4 회 갈라지는 모양이거나 달걀모양 또는 바소꼴의 형태로 3~6 cm이고 깊게 패인 톱니가 나있으며 끝이 뾰족하다. 꽃은 8월에서 9월 사이에 피며 백색으로 그 모양은 큰 겹우산 모양에 20~40개의 꽃이 달린다. 화관은 작고 꽃받침은 5개이며 달걀을 반대로 세운 모양으로 안으로 굽는다. 궁궁이의 어린싹은 식용으로 사용하며, 전통의학에서는 뿌리를 이용하여 부인병, 만성 위염, 위궤양, 복통, 류머티즘 통증 진정제 및 두통의 치료제로 쓰인다. 궁궁이의 활성 성분으로는 쿠마린, 테르페노이드, 임페라테린, 이소임페라센 및 p-시멘 같은 휘발성 오일이 함유되어있다.

식물 유래 정유(essential oil)는 꽃, 잎, 가지, 줄기, 뿌리의 채취 및 정제를 통해 얻는다. 식물 유래 정유는 식물이 생성하는 2차 대사물질로 주로 알칼로이드, 테르페노이드, 페놀류 등의 유기화합물로 구성된다. 식물 유래 정유의 2차 대사물질은 피부, 순환계 및 후각계를 통하여 근육 이완, 피로 회복, 스트레스 해소, 항균작용, 면역 증강 및 항알러지 작용에 효과를 나타내며, 과거에서부터 현대까지 질병의 치료와 예방에 활용되고 있다. 최근 제약 및 식품뿐만 아니라 화장품, 바이오 산업 분야에 이르기까지 식물 유래 정유의 효능 효과에 대한 다양한 활용과 연구가 활발하게 진행되고 있다. 특히 화장품 분야에서는 합성 물질을 대신해 식물 유래 정유 같은 천연 소재의 성분이 주목 받고 있어 식물 유래 정유 개발에 대한 관심도가 증가하고 있다.

그러나 현재까지 궁궁이를 활용한 피부생리활성연구 진행이 미흡하며, 특히 궁궁이에 다량 함유되어있는 정유를 활용한 연구는 전무하다. 따라서 본 발명자들은 궁궁이 꽃에서 유기용매 추출법으로 추출한 정유가 각질형성세포의 증식과 이동을 유도하고, 콜라겐 type Ⅳ 의 합성과 분비를 유도하며, 콜라겐 맹아의 성장을 촉진시키는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

KR10-2002-002203

상기와 같은 문제를 해소하기 위해, 본 발명은 궁궁이 꽃 유래 정유를 추출하여 이의 구성 성분을 규명하고, 표피의 조직 재생, 상처복원 및 탄력증진의 효능을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. 더불어, 본 발명은 궁궁이 꽃 정유의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기한 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘정유’는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출된 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃’은 건조되지 않은 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘정유’는 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트 타입인 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘조성물’은 아로마덴드렌(Aromadendrene), 메톡살렌(Methoxsalen), 버갑텐(Bergapten), 이소핌피넬린(Isopimpinellin) 및 노나데칸(Nonadecane)의 휘발성 유기 화합물을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘정유’는 0.1 ~ 250 μg/mL의 범위로 포함되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘조성물’은 표피 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘조성물’은 표피 각질형성세포 콜라겐 type I 또는 콜라겐 type Ⅳ의 합성을 유도하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 ‘조성물’은 표피 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 성장(out growth) 촉진 효과를 유도하는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃을 세척하는 1단계; 상기 궁궁이 꽃은 헥산(n-hexane)에 침전하는 2단계; 상기 침전물을 회전식 증발기(rotary evaporation)에서 증발시켜 농축 및 정제시킴으로써 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하는 3단계; 상기 콘크리트를 에틸 알코올(ethyl alcohol)을 넣어 용해시키고, 불용성 왁스(wax)를 제거하는 4단계; 및 회전식 증발기(rotary evaporation)를 이용하여 농축, 분리 및 정제함으로써 궁궁이 꽃 정유를 제조하는 5단계를 포함하는, 피부 재생, 주름 개선 또는 상처 치료 효과를 가지는 궁궁이 꽃 정유를 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출한 Absolute type 정유의 성분을 규명하고, 각질형성세포의 증식과 이동, 콜라겐 type Ⅳ의 합성과 분비를 유도하며, 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 촉진하여 상처복원 및 표피 조직 재생에 우수한 효과를 나타냄을 확인하였다. 따라서 궁궁이 꽃으로부터 추출된 정유는 뛰어난 피부 재생 및 상처 치유 효과를 나타내고 있어, 화장료 또는 피부외용제 등으로서 다양하게 적용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃으로부터 Absolute type 정유를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 생존율에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3A는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 3B는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4A는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 type I 콜라겐의 합성과 분비에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4B는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 type Ⅳ 콜라겐의 합성과 분비에 미치는 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5A는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 효과를 나타낸 결과이다.
도 5B는 본 발명의 일 실시예에 있어서 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 표피 각질형성세포의 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는(w/w) %, 고체/액체는(w/v) %, 그리고 액체/액체는(v/v) %이다.

일 측면에서, 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일 구현예에서, 정유는 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃을 유기용매 추출법으로 추출하여 콘크리트를 얻고, 이를 유기용매에 용해 및 여과하여 불용성 왁스를 제거하여 앱솔루트를 얻음으로써 제조될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃을 세척하는 1단계; 상기 궁궁이 꽃을 헥산(n-hexane)에 침전하는 2단계; 상기 침전물을 회전식 증발기(rotary evaporation)에서 증발시켜 농축 및 정제시킴으로써 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하는 3단계; 상기 콘크리트를 에틸 알코올(ethyl alcohol)을 넣어 용해시키고, 불용성 왁스(wax)를 제거하는 4단계; 및 회전식 증발기(rotary evaporation)를 이용하여 농축, 분리 및 정제함으로써 궁궁이 꽃 정유를 제조하는 5단계를 포함하는, 피부 재생, 주름 개선 또는 상처 치료 효과를 가지는 궁궁이 꽃 정유를 제조할 수 있다.

상기 유기용매 추출법과 추출물로부터 앱솔루트를 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 보통의 지식을 가진 자가 변형할 수 있는 모든 방법을 포함하는 것이 가능하다.

일 구현예에서, 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃에서 추출한 정유는 아로마덴드렌(Aromadendrene), 메톡살렌(Methoxsalen), 버갑텐(Bergapten), 이소핌피넬린(Isopimpinellin) 및 노나데칸(Nonadecane)의 휘발성 유기 화합물 성분을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃은 꽃이 피기 직전의 꽃봉오리일 수 있으며, 건조되지 않은 꽃일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 화장료 조성물은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃에서 추출한 정유를 0.1 내지 250 μg/mL의 농도로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 200 μg/mL의 농도로 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 10 내지 100 μg/mL의 농도로 포함하는 것이 가장 우수한 피부 재생 및 상처 치유 효과를 가진다.

본 발명에서 사용된 용어 “정유(精油)"란 식물(식물의 잎, 줄기, 열매, 꽃, 뿌리 등)로부터 추출 분리한 방향유(휘발성 물질)을 통칭하는 용어로서, 추출물, 추출법, 용도 및 목적에 따라 다양하게 분류된다. 천연물 유래 정유는 추출법에 따라 에센셜오일(essential oil), 앱솔루트(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다.

본 발명에서 사용된 용어 "추출물(extract)"이란 천연물로부터 분리된 활성성분 즉, 목적하는 활성을 보이는 물질을 의미한다. 상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할수 있으며, 추출물 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. 또한, 상기 추출물에는 상기 추출과정을 거친 추출물을 분획한 것도 포함된다. 추출물의 추출 방법은 특별히 제한되지 않으며, 예컨대 교반 추출, 진탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법으로 추출될 수 있다. 추출 용매로는 물, C₁-C₄의 저급 알코올과 같은 극성 용매나 헥산, 클로로 포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매, 또는 이들 중 2 이상의 혼합물을 사용할 수도 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 본 발명의 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃에서 추출한 정유의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.

본 명세서에서 용어 "화장품학적 유효량"은 상술한 본 발명의 조성물의 표피 각질형성세포의 증식을 통한 피부 재생 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.

화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장품으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬, 화장수 등의 화장품 및 샴푸, 비누 등의 세정제에 적용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃에서 추출한 정유 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

일 측면에서, 본 발명은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 피부외용제 조성물에서, 상기 정유는, 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트인 것을 특징으로 하고, 상기 정유는 0.1 ~ 250 μg/mL의 범위로 포함되는 것을 특징으로 한다.

일 구현예에서, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 표피 각질형성세포 증식, 재생 및 콜라겐 형성용일 수 있으며, 이는 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 피부의 탄력, 재생, 및/또는 상처치유 등에 유용할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃에서 추출한 정유를 0.1 내지 250 μg/mL의 농도로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 200 μg/mL의 농도로 포함할 수 있고, 더욱 바람직하게는 10 내지 100 μg/mL의 농도로 포함하는 것이 가장 우수한 피부 재생 및 상처 치유 효과를 가진다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예 또는 실험예들을 참조하면 명확해질 것이다. 이하, 본 발명을 실시예 또는 실험예들에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예 또는 실험예들은 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 한정되는 것은 아니다.

준비예 1. 궁궁이 꽃 Absolute type 정유의 제조

도 1은 본 발명의 실시예에 따라 궁궁이 꽃으로부터 앱솔루트 타입의 정유를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이며, 이와 같은 방법으로 궁궁이 꽃 유래 정유를 제조하였다. 본 실시예의 궁궁이 꽃은 전남 해남군에서 자생하는 궁궁이 꽃을 10월에 채취하여, 건조하지 않고 헥산(n-hexane)에 침지하여 추출하여 얻은 침전물의 추출물을 농축시켜 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하였다. 그 후, 상기 고형의 콘크리트에 알코올을 첨가하여 반응시키고, 불용성 왁스를 제거 후, 농축하여 궁궁이 꽃 앱솔루트(Absolute) 타입의 정유를 획득하였다. 제조한 궁궁이 꽃 앱솔루트는 -80℃의 저온고에서 보관하였다.

준비예 2. 궁궁이 꽃 Absolute type 정유의 성분 분석

궁궁이 꽃 정유의 성분 분석은 KBSI(Korea Basic Science Institute, Seoul Center)에 의뢰하였다. 가스 크로마토그래피/질량분석계(7890B GC/ 7010 QQQ Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 칼럼(Column)은 DB-5MS (30 m×0.25 μm, 0.25 μm)를 이용하였으며, 캐리어 가스(Carrier gas)는 헬륨을 사용하여 1 ml/분으로 흐르게 하여 분석하였다. 오븐의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(15분)으로 유지하였으며, Injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 290℃, Ion source의 온도는 230℃, Analyzer의 온도는 150℃ Mass range는 50-800 m/z에서 분석하였다.

궁궁이 꽃 정유 성분의 확인은 휘발성분의 지체시간(retention indices, RI) 및 표준물질의 지체시간이 일치하거나 휘발물질의 질량 스펙트럼과 Wiley 7Nist 05 library의 질량 스펙트럼을 비교하여 물질을 확인하였다.

RI는 C₈~C₃₂(n-alkane)를 이용하여 시료와 동일한 조건에서 결정하였다. 그 결과, 하기 표 1과 같이 총 6개의 성분으로 구성되어 있으며, Isopimpinellin이 34.95%, Bergapten 이 30.74%의 순서대로 높은 함량을 나타내었다.

실험예 1. 궁궁이 꽃 유래 정유의 각질형성세포에 대한 세포독성 확인

상기 준비예 1에서 얻은 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 피부 표피 각질형성세포에 독성을 나타내는지 확인하였다. 각질형성세포(HaCaT)를 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지에 배양하여, 본 발명의 실험예에서 활용되었다. 피부 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포 수 3.5ⅹ10³cells/100μL/well이 되도록 분주한 후, 37℃의 5% CO₂배양기에서 배양하였다. 그 후 궁궁이 꽃 유래 정유를 0 내지 250 μg/mL의 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 48시간 동안 배양하였다. Ez-cytox를 well에 30 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시킨 후, ELISA 플레이트 리더(Synerge 2, BioTek, USA)를 사용하여 450 nm의 흡광도에서 측정하였다. 그 결과는 백분율로 환산하여 궁궁이 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 생존율을 계산하였다.

그 결과 도 2에 나타난 바와 같이, 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유는 농도 1 ~ 200 μg/mL에서 유의한 세포독성이 관찰되지 않았지만 농도 250 μg/mL에서는 세포독성이 관찰되었다. 또한 농도 1 ~ 100 μg/mL 의 농도에서는 세포의 생존율이 증가함을 확인하였다. 따라서 본 발명에서 사용하는 궁궁이 꽃 정유 성분의 농도는 200 μg/mL 이하의 농도가 바람직한 것으로 확인하였으며, 더욱 바람직하게는 100 μg/mL 이하의 농도가 바람직하므로 이후 실험에 적용하였다.

실험예 2. 궁궁이 꽃 Absolute type 정유가 각질형성세포의 증식에 미치는 효과

상기 준비예 1에서 얻은 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 피부 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 확인하였다. 인체 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCaT)는 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지에 배양하여, 본 발명의 실험예에 활용하였다. 인체 피부 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포 수 3ⅹ10³cells/100μL/well을 분주하고 37℃, 5% CO₂배양기에서 배양하였다.

궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유를 0.1 내지 150 μg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 분주하여, 48시간동안 배양하였다. 여기서 음성 대조군은 궁궁이 꽃 유래 정유를 처리하지 않은 무처리군(con)이며, 양성대조군은 표피 조직 재생 및 상처 복원제에 활용되는 표피 성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 사용하였다. 그 후, Ez-cytox를 well에 30 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시킨 후, ELISA 플레이트 리더(Synerge 2, BioTek, USA)를 사용하여 450 nm의 흡광도에서 측정하였다.

그 결과 도 3(A)에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유는 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 즉, 표피성장인자(50 ng/mL)에 의한 표피 각질형성세포의 증식은 159.57±7.25% 유도 되었으며, 양성 대조군과 비교하여 궁궁이 꽃 정유 50 μg/mL 농도에서 144.15±11.36%의 증식 유도율을 나타내었으며, 10 μg/mL 농도에서 158.69±7.24%의 최대 증식 유도율을 나타내어 각질형성세포의 증식을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 3. 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 각질형성세포 이동에 미치는 효과

상기 준비예 1에서 얻은 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 피부 표피 각질형성세포 이동에 미치는 효과를 확인하였다. 각질형성세포(HaCaT)를 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 사용하여 배양하여, 본 발명의 실험예에 활용하였다. 48 well Boyden microchemotaxis chamber를 사용하여 표피 각질형성세포의 이동률을 확인하였다. 우선, lower chamber에 궁궁이 꽃 유래 정유를 각 0.1 내지 150 μg/mL의 농도를 처리하고, 콜라겐(collagen) 코팅이 된 8 μm pore의 poly-carbonate membrane을 올려 준다. 이후, upper chamber에 표피 각질형성세포를 well 당 5ⅹ10⁴cell/50μl씩 분주한다. 이후, chamber를 37℃ 배양기에서 210분 동안 인큐베이션 시킨 후, membrane을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하여 membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어 백분율로 환산하여 궁궁이 꽃 유래 정유의 피부 표피 각질형성세포의 이동률에 대한 결과를 확보하였다. 음성대조군은 궁궁이 꽃 유래 정유를 처리하지 않은 무처리군이며, 양성대조군은 종래에 상처복원 및 또는 표피 조직 재생에 활용되는 표피성장인자(epidermal growth factor, EGF 1 ng/mL)를 이용한 것이다.

그 결과 도 3의 (B)에 나타난 바와 같이, 본 발명의 준비예 1에 따른 궁궁이 꽃 유래 정유는 각질형성세포의 이동을 농도의존적으로 유도하였으며, 표피성장인자(1 ng/mL)에 의한 표피 각질형성세포의 이동은 139.44±3.96% 유도 되었으며, 양성 대조군과 비교하여 궁궁이 꽃 정유 50 μg/mL 농도에서 122.33±6.33%의 최대 이동률을 나타내며, 궁궁이 꽃 유래 정유가 각질형성세포의 이동을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 4. 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 미치는 효과

상기 준비예 1에 의해 얻은 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 각질형성세포의 콜라겐 합성과 분비에 미치는 효과를 확인하였다. 96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 주입하여 코팅하였다. Blocking 후, 각각의 샘플을 처리하여 반응시켰으며, 음성대조군은 궁궁이 꽃 유래 정유를 처리하지 않은 각질형성세포의 배양액(CM)을 사용하고, 샘플은 궁궁이 꽃 유래 정유 50 μg/mL, 100 μg/mL 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)을 처리하였다. 그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 반응시킨 다음, avidin-HRP를 처리하여 반응시켰다. ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well에 주입하여 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하여 궁궁이 꽃 유래 정유의 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성 및 분비에 대한 결과를 도출하였다.

그 결과 도 4(A)에 나타난 바와 같이, 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유는 표피 각질형성세포의 type I 콜라겐 합성과 분비에 대해 유의한 효과를 나타내지 않았다. 그러나, 도 4(B)에 나타난 바와 같이, 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유는 표피 각질형성세포의 type Ⅳ 콜라겐 합성과 분비를 유의하게 증가시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)의 100 μg/mL 농도에서 콜라겐 type Ⅳ의 합성과 분비가 202.87±14.79% 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 5. 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 피부 표피 각질형성세포의 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 효과

상기 준비예 1에 의해 얻은 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유가 피부 표피 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)에 미치는 효과를 확인하였다. Type I 콜라겐과 표피 각질형성세포를 섞은 후, 24 well plate에 spotting하고, 상온에서 건조하여 인공피부조직을 형성하였다.

궁궁이 꽃 유래 정유를 1 내지 100 μg/mL 농도로 처리한 후, 48시간 동안 37℃, 5% CO₂배양기에서 배양하였다. 이후, 배양액을 제거하고, Diff-Quik solution을 사용하여 세포와 조직을 고정 및 염색하였으며, 염색된 세포와 조직을 촬영하여 결과를 확보하였다. 음성 대조군은 궁궁이 꽃 유래 정유를 처리하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처복원 및/또는 표피 조직 재생에 활용되는 있는 표피 성장인자(epidermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 처리한 것이다.

그 결과, 도 5 (A)에 나타난 바와 같이, 궁궁이 꽃 유래 Absolute type 정유는 피부 표피 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 양성 대조군과 비교하여 궁궁이 꽃 유래 정유 50 μg/mL 농도에서 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 자연성장(out growth)을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다. 특히, 도 5(B)에 나타난 바와 같이 궁궁이 꽃 유래 정유 50 μg/mL 농도에서 326.24±14.99%가 유도되는 것을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시 예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시 예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구 범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (10)

1. 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 정유는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 정유는 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트 타입인 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
4. 제3항에 있어서,
   상기 조성물은 아로마덴드렌(Aromadendrene), 메톡살렌(Methoxsalen), 버갑텐(Bergapten), 이소핌피넬린(Isopimpinellin) 및 노나데칸(Nonadecane)의 휘발성 유기 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 정유는 0.1 ~ 250 μg/mL의 범위로 포함되는 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 표피 각질형성세포의 증식 및 이동을 유도하는 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 표피 각질형성세포 콜라겐 type I 또는 콜라겐 type Ⅳ의 합성을 유도하는 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 표피 각질형성세포 콜라겐 맹아(sprouting)의 성장(out growth) 촉진 효과를 유도하는 것을 특징으로 하는, 피부 재생 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
9. 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃으로부터 추출된 정유를 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 피부외용제 조성물.
10. 궁궁이(Angelica polymorpha Maxim.) 꽃을 세척하는 1단계;
    상기 궁궁이 꽃을 헥산(n-hexane)에 침전하는 2단계;
    상기 침전물을 회전식 증발기(rotary evaporation)에서 증발시켜 농축 및 정제시킴으로써 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하는 3단계;
    상기 콘크리트를 에틸 알코올(ethyl alcohol)을 넣어 용해시키고, 불용성 왁스(wax)를 제거하는 4단계;
    및 회전식 증발기(rotary evaporation)를 이용하여 농축, 분리 및 정제함으로써 궁궁이 꽃 정유를 제조하는 5단계를 포함하는, 피부 재생, 주름 개선 또는 상처 치료 효과를 가지는 궁궁이 꽃 정유를 제조하는 방법.
    

Images