KR20220110224A - Bcma에 결합하는 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 제공된다. 본 개시는 추가로 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 면역접합체, 이중특이적 분자, 키메라 항원 수용체, 또는 종양용해 바이러스, 뿐만 아니라 이를 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

Description

BCMA에 결합하는 항체 및 이의 용도
관련 출원 및 참조에 의한 포함
본 출원은 2020년 1월 3일에 출원된 미국 가출원 제62/956,642호에 대한 우선권을 주장한다.
상기 출원, 및 이에 인용되거나 심사 중인 모든 문헌("출원에 인용된 문헌") 및 본원에 인용되거나 참조된 모든 문헌(본원에 인용된 모든 문헌 문서, 특허, 공개 특허 출원을 비제한적으로 포함함)("본원에 인용된 문헌"), 및 본원에 인용된 문헌에서 인용되거나 참조된 모든 문헌은 본원에 언급된 임의의 생산물을 위한 또는 본원에 참조로 포함되는 임의의 문헌 내의 임의의 제조업체의 지침, 설명, 생산물 사양 및 생산물 시트와 함께 이에 의해 참조로 본원에 포함되고 본 발명의 실시에 이용될 수 있다. 보다 구체적으로, 모든 참조된 문헌은 각각의 개별 문헌이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 포함되어 있는 것으로 지시된 것과 동일한 정도로 참조로 포함된다. 본 개시에서 언급된 임의의 젠뱅크(Genbank) 서열은 본 개시의 가장 빠른 유효한 출원일의 젠뱅크 서열을 참조로 포함한다.
발명의 분야
본 개시는 일반적으로 높은 친화성 및 작용성으로 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 단리된 단클론성 항체, 구체적으로 마우스, 키메라 또는 인간화 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 항체 또는 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 또는 항원-결합 부분을 발현하기 위한 방법도 제공된다. 본 개시는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하는 면역접합체, 이중특이적 분자, 키메라 항원 수용체, 및 종양용해 바이러스, 뿐만 아니라 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 사용하는 진단 또는 치료 방법을 추가로 제공한다.
종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 17(TNFRS17)로도 지칭되는 B 세포 성숙화 항원(B cell maturation antigen; BCMA)은 시스테인-풍부 세포 외 도메인을 갖는 막관통 단백질이다(Madry C et al., (1998) Int Immunol. 10(11):1693-702; Laabi Y et al., (1994) Nucleic Acids Res 22(7):1147-54; Laabi Y et al., (1992) EMBO Ｊ 11(11):3897-904). 상기 항원은, 2 개의 TNFR 상과 구성원 BAFF-R 및 TACI와 함께, 체액성 면역, B-세포 발생 및 항상성, 특히 B 세포 증식, 생존, 성숙 및 형질 세포(PC)로의 분화를 조절한다(Mackay F et al., (2003) Annu Rev Immunol 21:231-64; Marsters SA et al., (2000) Curr Biol 10(13):785-8; Gross JA et al., (2000), Nature 404(6781): 995-9; Thompson JS et al., (2000) J Exp Med 192(1):129-35). BCMA는 또한 수명이 긴 PC 생존에 중요하다.
BCMA는 오직 형질아세포 및 분화된 PC의 표면에서만 발현되며, 정상 PC보다 악성세포 상에서 더 고도로 발현되고(Carpenter RO et al., (2013) Clin Cancer Res 19(8):2048-60; O'Connor BP et al., (2004) J Exp Med 199(1):91-8; Benson MJ et al., (2008) J Immunol 180(6):3655-9; Yang M et al., (2005) J Immunol 175(5):2814-24; Avery DT et al., (2003) J Clin Invest 112(2):286-97; Novak AJ et al., (2004) Blood 103(2):689-94; Chiu A et al., (2007) Blood 109(2): 729-39; Lee L et al., (2018) Blood 131(7):746-58; Carpenter RO et al., (2013) supra; Tai YT et al., (2014) Blood 123(20): 3128-38; Claudio JO et al., (2002) Blood 100(6):2175-86; Seckinger A et al., (2017) Cancer Cell 31(3):396-410), 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종에 관여하는 것으로 보고된 바 있다. 예를 들어, 상승된 혈장 BCMA 수준이 만성 림프구성 백혈병 환자들에서 관찰되었으며, 이는 임상 상태와 상관관계에 있었다(Kyle A Udd et al., (2015) Blood. 126(23):2931). 또한, BCMA는 다발성 골수종 종양 세포에서 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌으며, 상기 세포들에서 BCMA 과발현 또는 BCMA에 대한 APRIL 결합은 생체내에서 세포 성장 및 생존을 상당히 촉진한다(Tai YT et al., (2016) Blood 127(25): 3225-36; Matthes T et al., (2011) Blood 118(7):1838-44). 또한, APRIL 및 BAFF는, BCMA 및 TACI에 대한 결합을 통해, NFκB 경로를 더 활성화시키고 항세포자멸 단백질(Mcl-1, Bcl-2, Bcl-xL)을 상향조절하여 다발성 골수종 종양 세포를 덱사메타손- 및 혈청 결핍-유도 세포 사멸로부터 보호한다(Moreaux J et al., (2004) Blood 103(8):3148-57; Neri P et al., (2007) Clin Cancer Res 13(19):5903-9; Shen X et al., (2016) Cell Biochem Funct 34(2):104-10).
두 번째로 만연한 조혈 악성종양으로서, 다발성 골수종은 순환계로 퍼지기 전에 골수내 여러 부위에서 신생으로 또는 의미불명 단클론성 감마글로불린병증(MGUS)으로 진행되어 발생하는 클론성 B-세포 악성종양이다. 상기 다발성 골수종은 보통 파라단백질 및 파골세포 활성의 증가, 뿐만 아니라 고칼슘혈증, 혈구감소증, 신기능부전, 과점도 및 말초 신경병증을 특징으로 한다. 정상 항체 수준 및 호중구 수 둘 모두의 감소도 또한 일반적이어서, 감염에 대해 생명을 위협하는 민감성을 초래한다. CD38 및 SLAMF7을 표적으로 하는 2 개의 단클론성 항체들이 재발성 및 불응성 다발성 골수종의 치료를 위해 2015년 말에 승인되었으나, 정상 조직에서 두 항원의 광범위한 발현으로 인해 이들의 장기간 임상 사용이 제한되었다. 그에 반해서, BCMA는 그의 제한된 발현 패턴 및 독특한 막관통 구조로 인해 잠재적인 치료 표적으로 부상되었다. 첫번째 치료용 항-BCMA 항체-약물 접합체(ADC)인 GSK2857916은 2 개의 뮤린 모델에서 다발성 골수종 세포를 신속하게 제거하고 마우스의 생존을 상당히 연장시킨다(상기 문헌[Tai YT et al., (2014)]). 또 다른 항-BCMA ADC인 HDP-101은 시험관내에서 피코몰농도 범위에서 다발성 골수종 세포에 대해 세포독성을 나타내어, 양호한 내성 하에 유의적인 종양 퇴행을 야기하였다. 여러 항-BCMA CAR-T 세포 요법들이 또한 인상적인 임상 결과를 보였다(Shih-Feng Cho et al., (2018) Frontiers in Immunology 9: 1821).
항체를 포함하여, 더 안전하고 강력한 더 많은 BCMA 결합 모이어티를 찾기 위한 노력들이 계속 시도 중이다.
본 출원에서 임의의 문헌의 인용 또는 확인은 그러한 문헌이 본 개시에 대한 종래 기술로서 이용 가능하다는 것을 인정하는 것이 아니다.
본 개시는, BCMA(예를 들어, 인간 BCMA)에 결합하고 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체와 비교하여 더 높지는 않더라도 비슷한 BCMA에 대한 결합 친화성 및 BCMA-BAFF 결합에 대한 차단 활성을 갖는, 단리된 단클론성 항체, 예를 들어, 마우스, 인간, 키메라 또는 인간화 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 본 개시의 항-BCMA 항체는 또한 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체와 비교하여 특정 농도, 예를 들어, 저농도에서 더 높은 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다.
본 개시의 항체 또는 항원-결합 부분은 BCMA 단백질의 검출, 및 BCMA 관련 질환, 예컨대, 암 및 감염성 질환의 치료 및 예방을 포함하여 다양한 적용을 위해 사용될 수 있다.
따라서, 일 양태에서, 본 개시는 i) VH CDR1 영역, VH CDR2 영역 및 VH CDR3 영역을 포함할 수 있는 중쇄 가변 영역(여기서, VH CDR1 영역, VH CDR2 영역, 및 VH CDR3 영역은 각각 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 및 SEQ ID NO: 3과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있음); 및/또는 VL CDR1 영역, VL CDR2 영역 및 VL CDR3 영역을 포함할 수 있는 경쇄 가변 영역(여기서, VL CDR1 영역, VL CDR2 영역, 및 VL CDR3 영역은 각각 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있음)을 갖는, BCMA에 결합하는 단리된 단클론성 항체(예를 들어, 마우스, 키메라 또는 인간화 항체), 또는 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다.
중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K)와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. SEQ ID NO: 7에 기재된 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 17 또는 SEQ ID NO: 24의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다. SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=S, X3=T)에 기재된 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 18의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F; X1=A, X2=P, X3=F, X4=L; X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L; X1=A, X2=V, X3=F, X4=L; 또는 X1=A, X2=P, X3=F, X4=F)과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. SEQ ID NO: 10에 기재된 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 19 또는 SEQ ID NO: 25의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다. SEQ ID NO: 11(X1=A, X2=P, X3=F, X4=F)에 기재된 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 20의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
본 개시의 단리된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 가변 영역 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 (1) 각각 SEQ ID NO: 7 및 SEQ ID NO: 10; (2) 각각 SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F; X1=A, X2=P, X3=F, X4=L; X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L; 또는 X1=A, X2=V, X3=F, X4=L); (3) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F); (4) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 11(X1=A, X2=P, X3=F, X4=L); (5) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 11(X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L); (6) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 11(X1=A, X2=V, X3=F, X4=L); (7) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=S, X3=T) 및 11(X1=A, X2=P, X3=F, X4=F)에 기재된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본 개시의 단리된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함할 수 있고, 여기서 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역을 포함하고, 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역의 C 말단은 중쇄 불변 영역의 N 말단에 연결되고, 경쇄 가변 영역의 C 말단은 경쇄 불변 영역의 N 말단에 연결되고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 상술된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 불변 영역은, 예를 들어, SEQ ID NO: 12에 기재된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 불변 영역 또는 이의 기능적 단편일 수 있고, 경쇄 불변 영역은, 예를 들어, SEQ ID NO: 13에 기재된 아미노산 서열을 갖는 인간 카파 불변 영역 또는 이의 기능적 단편일 수 있다. SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13에 기재된 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NO: 21 및 SEQ ID NO: 22의 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
본 개시의 항체는 일부 구현예에서 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄를 포함하거나 이로 이루어질 수 있고, 여기서 각각의 중쇄는 중쇄 불변 영역, 중쇄 가변 영역 또는 상기 언급된 CDR 서열을 포함하고, 각각의 경쇄는 경쇄 불변 영역, 경쇄 가변 영역 또는 상기 언급된 CDR 서열을 포함한다. 본 개시의 항체는, 예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4 이소형의 전장 항체일 수 있다. 다른 구현예에서 본 개시의 항체는 단쇄 가변 단편(scFv) 항체, 또는 항체 단편, 예컨대, Fab 또는 Fab'2 단편일 수 있다.
본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체보다 더 높지는 않더라도 비슷한 인간 BCMA에 대한 결합 친화성/결합능 및 BCMA-BAFF 차단 활성을 갖는다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 또한 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체와 비교하여 특정 농도, 예를 들어, 저농도에서 더 높은 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다.
본 개시는 또한 치료제, 예컨대, 세포독소, 예를 들어, 수용체-결합 도메인 및 연쇄구균 단백질 G(3C)의 C1, C2, 및 C3 도메인을 결여하는 디프테리아 독소(DT)를 포함한 재조합 단백질 DT3C에 연결된, 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 면역접합체, 예컨대, 항체-약물 접합체를 제공한다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 세포독소, 예컨대, DT3C와 접합될 때, GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체보다 세포에 의해 보다 빠르게 내부화되고 더 높은 표적 세포 사멸 활성을 나타낸다. 본 개시는 또한 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 이중특이적 분자를 제공하며, 본 개시의 항체, 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 항체, 또는 이의 항원-결합 부분과는 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 기능적 모이어티(예를 들어, 제2 항체)에 연결된다. 또 다른 양태에서, 본 개시의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 키메라 항원 수용체(CAR)의 일부일 수 있다. 또한, T 세포와 같은 항원 키메라 수용체를 포함하는 면역 세포가 제공된다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 또한 종양용해 바이러스에 의해 인코딩되거나 이와 함께 사용될 수 있다.
본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자, 또는 면역접합체, 이중특이적 분자, 또는 CAR, 뿐만 아니라 이러한 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터 및 이러한 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 본 개시에 의해 포괄된다. 숙주 세포를 사용하여 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 면역접합체, 이중특이적 분자, 또는 CAR을 제조하기 위한 방법으로서, (i) 숙주 세포에서 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 면역접합체, 이중특이적 분자, 또는 CAR을 발현하는 단계 및 (ii) 숙주 세포 또는 이의 세포 배양물로부터 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 면역접합체, 이중특이적 분자, 또는 CAR을 단리하는 단계를 포함하는, 방법도 제공된다.
본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 면역접합체, 이중특이적 분자, CAR, 면역 세포, 종양용해 바이러스, 핵산 분자, 발현 벡터 또는 숙주 세포, 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다.
추가의 또 다른 양태에서, 본 개시는 치료적 유효량의 본 개시의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 증가된 BCMA 발현과 관련된 종양을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 종양은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종일 수 있다. 일부 구현예에서, 적어도 하나의 추가 항-암 항체는 항-VISTA 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-LAG-3 항체, 항-CTLA-4 항체, 항-TIM-3 항체, 항-STAT3 항체, 및/또는 항-ROR1 항체와 같이 본 개시의 약학적 조성물과 함께 투여될 수 있다. 추가의 또 다른 구현예에서, 대상체는 사이토카인(예를 들어, IL-2, IL-21, GM-CSF 및/또는 IL-4), 또는 공동자극 항체(예를 들어, 항-CD137 및/또는 항-GITR 항체)를 추가로 투여받는다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, 예를 들어, 마우스, 인간, 키메라 또는 인간화일 수 있다.
본 개시의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 실시예로부터 명백해질 것이고, 이들은 제한적인 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌, 젠뱅크 항목, 특허 및 공개 특허 출원의 내용은 명백히 참조로 본원에 포함된다.
따라서, 본 발명의 목적은 출원인이 권리를 유보하도록 임의의 이전에 공지된 생산물, 생산물을 제조하는 공정, 또는 생산물을 사용하는 방법을 본 발명 내에 포함시키지 않으며, 이에 의해 임의의 이전에 공지된 생산물, 공정, 또는 방법의 포기를 개시한다. 추가로, 본 발명은 출원인이 권리를 유보하도록 USPTO(35 U.S.C. §112, 첫 단락) 또는 EPO(EPC의 83항)의 서면 기재 요건 및 실시 가능 요건을 충족하지 않는 임의의 생산물, 공정, 또는 생산물의 제조 또는 생산물의 사용 방법을 본 발명의 범주 내에 포함시키고자 하는 것이 아니고, 이에 의해 임의의 이전에 기재된 생산물, 생산물의 제조 공정, 또는 생산물의 사용 방법의 포기를 개시한다는 것이 주목된다. 본 발명의 실시에 있어서 Art. 53(c) EPC 및 규칙 28 (b) 및 (c) EPC를 준수하는 것이 유리할 수 있다. 본 출원의 계보 또는 임의의 다른 계보 또는 임의의 제3자의 종래 출원된 출원에서 출원인의 임의의 등록된 특허(들)의 요지인 임의의 구현예를 명백히 포기하는 모든 권리는 명백히 유보된다. 본 명세서에서 어떤 것도 약속으로 해석되어서는 안된다.
본 개시내용 및 구체적으로 청구항 및/또는 단락에서, "포함한다(comprises)", "포함된(comprised)", "포함하는(comprising)" 등과 같은 용어는 미국 특허법에서 이에 귀속된 의미를 가질 수 있다는 것이 주목되며; 예를 들어, 이들은 "포함한다(includes)", "포함된(included)", "포함하는(including)" 등을 의미할 수 있고; "필수적으로 이루어지는(consisting essentially of)" 및 "필수적으로 이루어진다(consists essentially of)"와 같은 용어는 미국 특허법에서 이들에게 부여된 의미를 갖고, 예를 들어, 명시적으로 열거되지 않은 요소를 허용하지만, 종래 기술에서 발견되거나 본 발명의 기본적인 또는 신규한 특징에 영향을 미치는 요소는 제외한다.
본 발명을 기술된 특정 구현예로만 제한하고자 하는 것이 아닌, 예로서 주어진 하기 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 가장 잘 이해될 수 있다.
도 1은 포획 ELISA에서 인간 BCMA에 대한 마우스 항체 B1H2의 결합능을 보여주는 것이다.
도 2는 세포 기반 결합 FACS 검정에서 인간 BCMA를 발현하는 U266 세포에 대한 마우스 B1H2 항체의 결합능을 보여주는 것이다.
도 3은 경쟁 ELISA에서 인간 BCMA-BAFF 결합에 대한 마우스 항체 B1H2의 차단 능력을 보여주는 것이다.
도 4는 경쟁 ELISA 시험에서 벤치마크-인간 BCMA 결합에 대한 마우스 항체 B1H2의 차단 능력을 보여주는 것이다.
도 5는 포획 ELISA에서 인간 BCMA에 대한 키메라 및 인간화 B1H2 항체의 결합능을 보여주는 것이다.
도 6은 간접 ELISA에서 시노몰구스 BCMA에 대한 키메라 및 인간화 B1H2 항체의 결합능을 보여주는 것이다.
도 7은 세포 기반 결합 FACS 검정에서 인간 BCMA를 발현하는 293F 세포에 대한 키메라 및 인간화 B1H2 항체의 결합능을 보여주는 것이다.
도 8은 경쟁 ELISA에서 인간 BCMA-BAFF 결합에 대한 키메라 및 인간화 B1H2 항체의 차단 능력을 보여주는 것이다.
도 9는 경쟁 ELISA 시험에서 벤치마크-인간 BCMA 결합에 대한 키메라 및 인간화 B1H2 항체의 차단 능력을 보여주는 것이다.
도 10a 및 도 10b는 시험관내에서 U266 세포에 대한 항체-의존적 세포 세포독성(ADCC)을 유도하는 키메라 및 인간화 항체 huB1H2-V10(A) 및 huB1H2-V33(B)의 능력을 보여주는 것이다.
도 11은 U266 세포에 대한 인간화 항체-DT3C 접합체의 내부화-매개 세포독성을 보여주는 것이다.
도 12a 및 도 12b는 인간화 항체 huB1H2-V10 (A) 및 huB1H2-V33 (B)의 단백질 열 이동 검정 결과를 보여주는 것이다.
본 개시를 보다 용이하게 이해할 수 있도록 보장하기 위해, 소정의 용어가 먼저 정의된다. 추가 정의가 상세한 설명 전반에 걸쳐 기재된다.
용어 "BCMA"는 B 세포 성숙화 항원, 또는 종양 괴사 인자 수용체 상과 구성원 17을 지칭한다. 용어 "BCMA"는 변이체, 동형, 동족체, 동원체 및 이원체를 포함한다. 예를 들어, 인간 BCMA 단백질에 특이적인 항체는, 특정 경우에, 원숭이와 같은 인간 이외의 종으로부터의 BCMA 단백질과 교차 반응할 수 있다. 다른 구현예에서, 인간 BCMA 단백질에 특이적인 항체는 인간 BCMA 단백질에 완전 특이적일 수 있고, 다른 종에 대한 또는 다른 유형의 교차 반응성을 나타내지 않거나, 다른 모든 종이 아니라 다른 특정 종으로부터의 BCMA와 교차 반응할 수 있다.
용어 "인간 BCMA"는 NP_001183.2의 젠뱅크 수탁 번호를 갖는 인간 BCMA의 아미노산 서열과 같은, 인간으로부터의 아미노산 서열을 갖는 BCMA 단백질을 지칭한다. 용어 "원숭이 또는 레서스 BCMA" 및 "마우스 BCMA"는 각각 원숭이 및 마우스 BCMA 서열, 예를 들어, 각각 젠뱅크 수탁 번호 XP_001106892.1 및 NP_035738.1을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것들을 지칭한다.
본원에서 지칭되는 용어 "항체"는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원-결합 부분") 또는 이의 단쇄를 포함한다. 전체 항체는 이황화 결합에 의해 상호연결된 2 개의 중쇄(H) 및 2 개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3 개의 도메인(CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 칭해지는 더욱 보존된 영역 사이에 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단부터 카복시-말단까지 다음 순서로 배열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역글로불린이 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 효과기 세포) 및 전통적인 보체계의 제1 성분(C1q)을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 결합하는 것을 매개할 수 있다.
본원에서 사용되는 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항원-결합 단편"이라는 용어(또는 간단히 "항체 부분")는 항원(예를 들어, BCMA 단백질)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 나타났다. 항체의 "항원 결합 부분"이라는 용어 내에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화 브릿지에 의해 연결된 2 개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR); 및 (viii) 단일 가변 도메인 및 2 개의 불변 도메인을 함유하는 중쇄 가변 영역인 나노바디를 포함한다. 또한, Fv 단편의 2 개의 도메인인 VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 연결될 수 있으며, 이 합성 링커는 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 사슬로 만들어질 수 있게 한다(단쇄 Fv(scFv)로 알려짐; 예를 들어, 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883] 참조). 이러한 단쇄 항체는 또한 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포함되는 것으로 하고자 한다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기법을 사용하여 수득되며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
본원에서 사용되는 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하는 것으로 하고자 한다(예를 들어, BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 BCMA 단백질 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 인간 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종으로부터의 BCMA 단백질과 같은 다른 항원에 대해 교차 반응성을 가질 수 있다. 더욱이, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단클론성 항체" 또는 "단클론성 항체 조성물"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 단클론성 항체 조성물은 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "마우스 항체"는 프레임워크와 CDR 영역 둘 모두가 마우스 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 하고자 한다. 추가로, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 마우스 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 개시의 마우스 항체는 마우스 생식계열 면역글로불린 서열에 의해 인코딩되지 않은 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-지정 돌연변이유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "마우스 항체"는 또 다른 포유동물 종의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 마우스 프레임워크 서열 상에 접목된 항체를 포함하는 것으로 하고자 하지 않는다.
용어 "키메라 항체"는 비인간 공급원으로부터의 유전 물질을 인간으로부터의 유전 물질과 조합함으로써 제조된 항체를 지칭한다. 또는 보다 일반적으로, 키메라 항체는 특정 종으로부터의 유전 물질과 함께 또 다른 종으로부터의 유전 물질을 갖는 항체이다.
본원에서 사용되는 용어 "인간화 항체"는 인간에서 자연적으로 생성된 항체 변이체와의 유사성을 증가시키도록 변형된 단백질 서열을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체를 지칭한다.
용어 "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 인코딩되는 항체 부류(예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다.
문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 "인간 BCMA에 특이적으로 결합하는" 항체는 인간 BCMA 단백질(및 가능하게는 하나 이상의 비-인간 종으로부터의 BCMA 단백질)에 결합하지만 비-BCMA 단백질에는 실질적으로 결합하지 않는 항체를 지칭하는 것으로 하고자 한다. 바람직하게는, 항체는 "고친화성", 즉, 5.0 Ｘ 10-8 M 이하, 더욱 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-8 M 이하, 및 더욱 바람직하게는 7.0 Ｘ 10-9 M 이하의 KD로 인간 BCMA 단백질에 결합한다.
본원에서 사용되는 단백질 또는 세포에 "실질적으로 결합하지 않는"이라는 용어는 단백질 또는 세포에 결합하지 않거나 고친화성으로 결합하지 않는, 즉, 1.0 Ｘ 10-6 M 이상, 더욱 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-5 M 이상, 더욱 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-4 M 이상, 더욱 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-3 M 이상, 더욱더 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-2 M 이상의 KD로 단백질 또는 세포에 결합하는 것을 의미한다.
IgG 항체에 대한 "고친화성"이라는 용어는 표적 항원에 대한 1.0 Ｘ 10-6 M 이하, 더욱 바람직하게는 5.0 Ｘ 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게는 7.0 Ｘ 10-9 M 이하 및 더욱더 바람직하게는 1.0 Ｘ 10-9 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다. 그러나, "고친화성" 결합은 다른 항체 이소형에 대해서는 다를 수 있다. 예를 들어, IgM 이소형에 대한 "고친화성" 결합은 10-6 M 이하, 더욱 바람직하게는 10-7 M 이하, 더욱더 바람직하게는 10-8 M 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭하는 것으로 하고자 하지만, 본원에서 사용되는 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭하는 것으로 하고자 한다. 본원에서 사용되는 용어 "KD"는, Kd 대 Ka의 비율(즉, Kd/Ka)로부터 수득되고 몰 농도(M)로 표현되는 해리 상수를 지칭하는 것으로 하고자 한다. 항체에 대한 KD 값은 당업계에서 잘 확립된 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 바람직한 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용하는 것, 바람직하게는 BiacoreTM 시스템과 같은 바이오센서 시스템을 사용하는 것에 의해 이루어진다.
본원에서 사용되는 용어 "항체-의존적 세포 세포독성", "항체-의존적 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 면역계의 효과기 세포가 표적 세포를, 예컨대, 항-BCMA 항체와 같은 항체에 의해 막-표면 항원이 결합된 종양 세포를 능동적으로 용해시키는 세포-매개 면역 방어의 기전을 지칭한다.
최대 유효 농도의 절반으로도 알려진 용어 "EC50"은 특정 노출 시간 후 기준선과 최대 값 사이의 중간의 반응을 유도하는 항체의 농도를 지칭한다.
최대 억제 농도의 절반으로도 알려진 용어 "IC50"은 항체의 부재에 비해 50%만큼 특정 생물학적 또는 생화학적 기능을 억제하는 항체의 농도를 지칭한다.
용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대, 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소, 말, 닭, 양서류 및 파충류를 포함하지만, 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소 및 말과 같은 포유동물이 바람직하다.
용어 "치료적 유효량"은 질환 또는 질병(예컨대, 암)과 관련된 증상을 예방하거나 개선하고/하거나 질환 또는 질병의 중증도를 감소시키기에 충분한 본 개시의 항체의 양을 의미한다. 치료적 유효량은 치료되는 질병에 대한 맥락과 관련하여 이해되며, 여기서 실제 유효량은 당업자가 용이하게 알 수 있다.
본 개시의 다양한 양태는 하기 세부 항목에서 더욱 상세히 기술된다.
인간 BCMA에 대한 증가된 결합 친화성 및 BCMA-BAFF 결합에 대한 보다 우수한 차단 활성을 갖는 항-BCMA 항체
본 개시의 항체, 또는 이의 항원-결합 부분은 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래에 기술된 항-BCMA 항체와 비교하여 더 높지는 않더라도 비슷한 결합 친화성/결합능으로 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 또한 GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체와 비교하여 특정 농도, 예를 들어, 저농도에서 더 높은 항체 의존적 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다. 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 세포독소, 예컨대, DT3C와 접합될 때, GSK2857916의 BCMA-결합 부분과 같은 종래 기술의 항-BCMA 항체보다 세포에 의해 더 빠르게 내부화되고 더 높은 표적 세포 사멸 활성을 나타낸다.
추가의 기능적 성질은 BCMA-BAFF 결합을 차단하는 능력을 포함한다.
본 개시의 바람직한 항체는 인간화 단클론성 항체이다. 추가로 또는 대안적으로, 항체는, 예를 들어, 키메라 단클론성 항체일 수 있다.
단클론성 항-BCMA 항체
본 개시의 예시적인 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 후술되는 바와 같이 구조적 및 화학적으로 특징화된다. 항체의 중쇄/경쇄 가변 영역 및 CDR의 아미노산 서열 ID 번호는 하기 표 1에 요약되어 있으며, 일부 항체는 동일한 VH 또는 VL을 공유한다. 항체에 대한 중쇄 불변 영역은, 예를 들어, SEQ ID NO: 12에 기재된 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 이의 기능적 단편일 수 있고, 항체에 대한 경쇄 불변 영역은, 예를 들어, SEQ ID NO: 13에 기재된 아미노산 서열을 갖는 인간 카파 불변 영역 또는 이의 기능적 단편일 수 있다. 이들 항체는 또한 마우스 IgG1 중쇄 불변 영역, 및 마우스 카파 불변 영역을 함유할 수 있다.
표 1의 중쇄 가변 영역 CDR 및 경쇄 가변 영역 CDR은 카바트(Kabat) 넘버링 체계에 의해 정의되었다. 그러나, 당업계에 널리 공지된 바와 같이, CDR 영역은 또한 중쇄/경쇄 가변 영역 서열에 기초하여 코티아(Chothia), IMGT, AbM, 및 콘택트(Contact) 넘버링 체계/방법과 같은 다른 체계에 의해 결정될 수 있다.
인간 BCMA에 결합하는 다른 항-BCMA 항체의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)은 본 개시의 항-BCMA 항체의 VH 및 VL 서열(또는 CDR 서열)과 "혼합 및 매칭"될 수 있다. 바람직하게는, VH 및 VL 사슬(또는 이러한 사슬 내의 CDR)이 혼합되고 매칭될 때, 특정 VH/VL 쌍형성으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체된다. 마찬가지로, 바람직하게는 특정 VH/VL 쌍형성으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체된다.
따라서, 일 구현예에서, 본 개시의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은
(a) 표 1에서 상기 열거된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
(b) 표 1에서 상기 열거된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 VL을 포함하고, 여기서 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다.
[표 1]
Figure pct00001
또 다른 구현예에서, 본 개시의 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은
(a) 표 1에서 상기 열거된 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역; 및
(b) 표 1에서 상기 열거된 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 영역 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 CDR을 포함하고, 여기서 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다.
추가의 또 다른 구현예에서, 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 BCMA에 결합하는 다른 항체의 CDR과 조합된 항-BCMA 항체의 중쇄 가변 CDR2 영역, 예를 들어, 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1 및/또는 CDR3, 및/또는 상이한 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3을 포함한다.
또한, CDR1 및/또는 CDR2 도메인(들)과 무관하게 CDR3 도메인 단독이 동족 항원에 대한 항체의 결합 특이성을 결정할 수 있고, 공통 CDR3 서열에 기초하여 동일한 결합 특이성을 갖는 다수의 항체가 예측 가능하게 생성될 수 있음이 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Klimka et al., British J. of Cancer 83(2):252-260 (2000); Beiboer et al., J. Mol. Biol. 296:833-849 (2000); Rader et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:8910-8915 (1998); Barbas et al., J. Am. Chem. Soc. 116:2161-2162 (1994); Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:2529-2533 (1995); Ditzel et al., J. Immunol. 157:739-749 (1996); Berezov et al., BIAjournal 8: Scientific Review 8 (2001); Igarashi et al., J. Biochem (Tokyo) 117:452-7 (1995); Bourgeois et al., J. Virol 72:807-10 (1998); Levi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:4374-8 (1993); Polymenis and Stoller, J. Immunol. 152:5218-5329 (1994) 및 Xu and Davis, Immunity 13:37-45 (2000)]을 참조한다. 또한, 미국 특허 제6,951,646호; 제6,914,128호; 제6,090,382호; 제6,818,216호; 제6,156,313호; 제6,827,925호; 제5,833,943호; 제5,762,905호 및 제5,760,185호를 참조한다. 이들 참고문헌 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 개시의 항체는 항-BCMA 항체의 중쇄 가변 영역의 CDR2, 및 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 적어도 CDR3, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR3을 포함하고, 여기서 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다. 이들 항체는 바람직하게는 (a) BCMA와 결합에 대해 경쟁하고/하거나; (b) 기능적 특징을 보유하고/하거나; (c) 동일한 에피토프에 결합하고/하거나; (d) 본 개시의 항-BCMA 항체와 유사한 결합 친화성을 갖는다. 추가의 또 다른 구현예에서, 항체는 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR2, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 경쇄 가변 영역의 CDR2를 추가로 포함할 수 있고, 여기서 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 개시의 항체는 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR1, 또는 또 다른 항-BCMA 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR1을 추가로 포함할 수 있고, 여기서 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있다.
보존적 변형
또 다른 구현예에서, 본 개시의 항체는 하나 이상의 보존적 변형에 의해 본 개시의 항-BCMA 항체와는 상이한 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 항원 결합을 제거하지 않는 특정 보존적 서열 변형이 이루어질 수 있음이 당업계에서 이해된다. 예를 들어, 문헌[Brummell et al., (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al., (1997) Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:26864-26870; Hall et al., (1992) J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O'Connell (1993) Biochem.32:6862-35; Adib-Conquy et al., (1998) Int. Immunol.10:341-6 및 Beers et al., (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43]을 참조한다.
따라서, 일 구현예에서, 항체는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서
(a) 중쇄 가변 영역 CDR1 서열은 상기 표 1에 열거된 서열, 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(b) 중쇄 가변 영역 CDR2 서열은 상기 표 1에 열거된 서열, 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(c) 중쇄 가변 영역 CDR3 서열은 상기 표 1에 열거된 서열, 및 이의 보존적 변형을 포함하고/하거나;
(d) 경쇄 가변 영역 CDR1, 및/또는 CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 상기 표 1에 열거된 서열(들), 및/또는 이의 보존적 변형을 포함하고;
(e) 항체는 인간 BCMA에 특이적으로 결합한다.
본 개시의 항체는 다음 상술된 기능적 특성들 중 하나 이상, 예컨대, 인간 BCMA에 대한 고친화성 결합, 및 BCMA-발현 세포에 대항하여 ADCC 또는 CDC를 유도하는 능력을 지닌다.
다양한 구현예에서, 항체는, 예를 들어, 마우스, 인간, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특징에 유의하게 영향을 미치거나 이를 변경하지 않는 아미노산 변형을 지칭하는 것으로 하고자 한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발과 같이 당업계에 공지된 표준 기법에 의해 본 개시의 항체에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 아미노산 잔기가 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당업계에 정의되었다. 이러한 계열은 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본 개시의 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 기능적 분석을 사용하여 보유된 기능(즉, 상기 제시된 기능)에 대해 시험될 수 있다.
조작되고 변형된 항체
본 개시의 항체는 변형된 항체를 조작하기 위해 출발 물질로서 본 개시의 항-BCMA 항체의 VH/VL 서열 중 하나 이상을 갖는 항체를 사용하여 제조될 수 있다. 항체는, 예를 들어, 하나 이상의 CDR 영역 내의 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내의 하나 또는 둘 모두의 가변 영역(즉, VH 및/또는 VL) 내의 하나 이상의 잔기를 변형함으로써 조작될 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 항체는, 예를 들어, 항체의 효과기 기능(들)을 변경하기 위해, 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형함으로써 조작될 수 있다.
특정 구현예에서, CDR 접목은 항체의 가변 영역을 조작하는 데 사용될 수 있다. 항체는 주로 6 개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역(CDR)에 위치한 아미노산 잔기를 통해 표적 항원과 상호작용한다. 이런 이유로 인해, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열보다 개별 항체 간에 더 다양하다. CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호작용을 담당하기 되기 때문에, 상이한 특성을 갖는 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열 상에 접목된 특정 자연 발생 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특정 자연 발생 항체의 특성을 모방하는 재조합 항체를 발현할 수 있다(예를 들어, 문헌[Riechmann et al., (1998) Nature 332:323-327; Jones et al., (1986) Nature 321:522-525; Queen et al., (1989) Proc. Natl. Acad] 참조; 또한, U.S.A. 86:10029-10033; 미국 특허 제5,225,539호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호 참조).
따라서, 본 개시의 또 다른 구현예는 상술된 바와 같은 본 개시의 서열을 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 상술된 바와 같은 본 개시의 서열을 포함하는 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 이들 항체는 본 개시의 단클론성 항체의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 상이한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
이러한 프레임워크 서열은 생식계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공공 DNA 데이터베이스 또는 공개된 참고문헌으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 "VBase" 인간 생식계열 서열 데이터베이스(인터넷 상의 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase에서 이용 가능함), 뿐만 아니라 상기 언급된 문헌[Kabat et al., (1991)]; 문헌[Tomlinson et al., (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798]; 및 문헌[Cox et al., (1994) Eur. J. Immunol. 24:827-836](이들 각각의 내용은 본원에 참조로 명백히 포함됨)에서 확인될 수 있다. 또 다른 예로서, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 젠뱅크 데이터베이스에서 확인될 수 있다. 예를 들어, HCo7 HuMAb 마우스에서 확인되는 다음 중쇄 생식계열 서열은 첨부된 젠뱅크 수탁 번호 1-69(NG--0010109, NT--024637 & BC070333), 3-33(NG--0010109 & NT--024637) 및 3-7(NG--0010109 & NT--024637)에서 이용 가능하다. 또 다른 예로서, HCo12 HuMAb 마우스에서 확인되는 다음 중쇄 생식계열 서열은 첨부된 젠뱅크 수탁 번호 1-69(NG--0010109, NT--024637 & BC070333), 5-51(NG--0010109 & NT--024637), 4-34(NG--0010109 & NT--024637), 3-30.3(CAJ556644) & 3-23(AJ406678)에서 이용 가능하다.
항체 단백질 서열은 당업자에게 널리 공지된 Gapped BLAST(상기 문헌[Altschul et al., (1997)])로 불리는 서열 유사성 탐색 방법 중 하나를 사용하여 종합된 단백질 서열 데이터베이스와 비교된다.
본 개시의 항체에서 사용하기 위한 바람직한 프레임워크 서열은 본 개시의 항체에 의해 사용된 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것들이다. VH CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 프레임워크 서열이 유래된 생식계열 면역글로불린 유전자에서 확인된 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상에 접목될 수 있거나, CDR 서열은 생식계열 서열과 비교하여 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 프레임워크 영역 상에 접목될 수 있다. 예를 들어, 항체의 항원 결합 능력을 유지하거나 향상시키기 위해 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시키는 것이 특정 경우에 이로울 수 있는 것으로 밝혀졌다(예를 들어, 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호 참조).
또 다른 유형의 가변 영역 변형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 관심 항체의 하나 이상의 결합 특성(예를 들어, 친화성)을 개선하는 것이다. 부위-지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발은 돌연변이(들)를 도입하기 위해 수행될 수 있고, 항체 결합, 또는 관심 있는 다른 기능적 특성에 대한 효과가 당업계에 공지된 바와 같이 시험관내 또는 생체내 분석에서 평가될 수 있다. 바람직하게는, 보존적 변형(당업계에 공지된 바와 같음)이 도입된다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있지만, 바람직하게는 치환이다. 더욱이, 전형적으로 CDR 영역 내의 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개 이하의 잔기가 변경된다.
따라서, 또 다른 구현예에서, 본 개시는 다음을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항-BCMA 단클론성 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다: (a) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1 영역; (b) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2 영역; (c) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 영역; (d) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1 영역; (e) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 (f) 본 개시의 서열, 또는 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역.
본 발명의 조작된 항체는, 예를 들어, 항체의 특성을 개선하기 위해, VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기가 변형된 항체들을 포함한다. 전형적으로, 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 하나의 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역-돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 거친 항체는 항체가 유래된 생식계열 서열과는 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형은 T 세포 에피토프를 제거하여 항체의 잠재적 면역원성을 감소시키기 위해, 프레임워크 영역 내의, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시키는 것을 포함한다. 이러한 접근법은 "탈-면역화"로도 지칭되며, 미국 특허 공개 제20030153043호에 더욱 상세히 기재되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형 외에도, 또는 그에 대한 대안으로, 본 개시의 항체는, 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대, 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합, 및/또는 항원-의존적 세포 세포독성을 변경하기 위해, Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 또한, 본 개시의 항체는 화학적으로 변형되거나(예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 또는 이의 당화를 변경하도록, 또 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하도록 변형될 수 있다.
일 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예를 들어, 증가되거나 감소되도록 변형된다. 이러한 접근법은 미국 특허 제5,677,425호에 추가로 기재되어 있다. CH1의 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하도록 또는 항체의 안정성을 증가시키거나 감소시키도록 변경된다.
또 다른 구현예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 항체가 네이티브 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 포도구균 단백질 A(SpA) 결합을 갖도록, 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내로 도입된다. 이러한 접근법은 미국 특허 제6,165,745호에 더욱 상세히 기재되어 있다.
추가의 또 다른 구현예에서, 항체의 당화는 변형된다. 예를 들어, 무당화된(aglycosylated) 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체는 당화를 결여함). 당화는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 항체 서열 내의 하나 이상의 당화 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 당화 부위를 제거하여 해당 부위에서 당화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 당화는 항원의 항체에 대한 친화성을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,714,350호 및 제6,350,861호를 참조한다.
추가적으로 또는 대안적으로, 변경된 유형의 당화를 갖는 항체, 예컨대, 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화(hypofucosylated) 항체 또는 증가된 바이섹팅(bisecting) GlcNac 구조를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 당화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 변경된 당화 기구를 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현함으로써 달성될 수 있다. 변경된 당화 기구를 갖는 세포는 당업계에 기술되어 있고, 본 개시의 재조합 항체를 발현하여 변경된 당화를 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포주 Ms704, Ms705, 및 Ms709는 푸코실트랜스페라제 유전자인 FUT8(α(1,6)-푸코실트랜스페라제)을 결여하고 있고, 그에 따라 Ms704, Ms705, 및 Ms709 세포주에서 발현된 항체는 이들의 탄수화물 상에 푸코스를 결여하고 있다. Ms704, Ms705, 및 Ms709 FUT8-/- 세포주는 2 개의 대체 벡터를 사용하여 CHO/DG44 세포에서 FUT8 유전자의 표적화된 파괴에 의해 생성되었다(미국 특허 공개 제20040110704호 및 문헌[Yamane-Ohnuki et al., (2004) Biotechnol Bioeng 87:614-22] 참조). 또 다른 예로서, 제EP 1,176,195호에는 푸코실 트랜스페라제를 인코딩하는 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주가 기재되어 있으며, 이러한 세포주에서 발현된 항체는 α-1,6 결합-관련 효소를 감소시키거나 제거함으로써 저푸코실화를 나타낸다. 제EP 1,176,195호에는 또한 항체의 Fc 영역에 결합하는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 부가하는 낮은 효소 활성을 갖거나 효소 활성을 갖지 않는 세포주, 예를 들어, 랫트 골수종 세포주 YB2/0(ATCC CRL 1662)가 기재되어 있다. PCT 공개 제WO 03/035835호에는 푸코스를 Asn(297)-연결된 탄수화물에 부착하는 능력이 감소되어 숙주 세포에서 발현된 항체의 저푸코실화도 초래하는 변이체 CHO 세포주인 Lec13 세포가 기재되어 있다(또한 문헌[Shields et al., (2002) J. Biol. Chem. 277:26733-26740] 참조). 변형된 당화 프로파일을 갖는 항체는 또한 PCT 공개 제WO 06/089231호에 기재된 바와 같이, 달걀에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 변형된 당화 프로파일을 갖는 항체는 좀개구리밥(Lemna)과 같은 식물 세포에서 생산될 수 있다. 식물계에서 항체를 생산하는 방법은 2006년 8월 11일에 출원된 Alston & Bird LLP 대리인 명부 제040989/314911호에 상응하는 미국 특허 출원에 개시되어 있다. PCT 공개 제WO 99/54342호에는 당단백질-변형 글리코실 트랜스페라제(예를 들어, β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스페라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주가 기재되어 있고, 조작된 세포주에서 발현된 항체는 항체의 증가된 ADCC 활성을 초래하는 증가된 바이섹팅 GlcNac 구조를 나타낸다(또한, 문헌[Umana et al., (1999) Nat. Biotech. 17:176-180] 참조). 대안적으로, 항체의 푸코스 잔기는 푸코시다제 효소를 사용하여 절단될 수 있고; 예를 들어, 푸코시다제 α-L-푸코시다제는 항체로부터 푸코실 잔기를 제거한다(Tarentino et al., (1975) Biochem. 14:5516-23).
본 개시에 의해 고려되는 본원의 항체의 또 다른 변형은 페길화이다. 항체는, 예를 들어, 항체의 생물학적(예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 페길화될 수 있다. 항체를 페길화하기 위해, 항체, 또는 이의 단편은 전형적으로 하나 이상의 PEG 그룹이 항체 또는 항체 단편에 부착하게 되는 조건 하에, PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 같은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 반응된다. 바람직하게는, 페길화는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행된다. 본원에서 사용되는 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용된 PEG의 임의의 형태, 예컨대, 모노(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포함하는 것으로 하고자 한다. 특정 구현예에서, 페길화될 항체는 무당화된 항체이다. 단백질을 페길화시키는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 본 개시의 항체에 적용될 수 있다. 예를 들어, 제EPO 154 316호 및 제EP 0 401 384호를 참조한다.
항체의 물리적 특성
본 개시의 항체는 이의 상이한 부류를 검출하고/하거나 구별하기 위한 이들의 다양한 물리적 특성을 특징으로 할 수 있다.
예를 들어, 항체는 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 내에 하나 이상의 당화 부위를 함유할 수 있다. 이러한 당화 부위는 변경된 항원 결합으로 인해 항체의 증가된 면역원성 또는 항체의 pK의 변경을 초래할 수 있다(Marshall et al (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94; Wallick et al (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al., (2000) Mol Immunol 37:697-706). 당화는 N-X-S/T 서열을 함유하는 모티프에서 발생하는 것으로 알려졌다. 일부 경우에, 가변 영역 당화를 함유하지 않는 항-BCMA 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이는 가변 영역 내에 당화 모티프를 함유하지 않는 항체를 선택함으로써 또는 당화 영역 내의 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
바람직한 구현예에서, 항체는 아스파라긴 이성(isomerism) 부위를 함유하지 않는다. 아스파라긴의 탈-아미드화는 N-G 또는 D-G 서열 상에서 발생할 수 있고, 이는 폴리펩티드 사슬 내에 링크를 도입하고 이의 안정성을 감소시키는 이소아스파트산 잔기의 생성을 초래할 수 있다(이소아스파트산 효과).
각각의 항체는 일반적으로 6 내지 9.5의 pH 범위에 속하는 고유한 등전점(pI)을 가질 것이다. IgG1 항체에 대한 pI는 전형적으로 7 내지 9.5의 pH 범위에 속하고, IgG4 항체에 대한 pI는 전형적으로 6 내지 8의 pH 범위에 속한다. 정상 범위 이외의 pI를 갖는 항체가 생체내 조건 하에 일부 언폴딩 및 불안정성을 가질 수 있다는 추측이 있다. 따라서, 정상 범위에 속하는 pI 값을 함유하는 항-BCMA 항체를 갖는 것이 바람직하다. 이는 정상 범위 내의 pI를 갖는 항체를 선택함으로써 또는 전하를 띤 표면 잔기를 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다.
본 개시의 단클론성 항체의 생산
본 개시의 단클론성 항체(mAb)는 문헌[Kohler and Milstein (1975) Nature 256: 495]의 널리 공지된 체세포 혼성화 기법(하이브리도마)을 사용하여 생산될 수 있다. 단클론성 항체를 생산하기 위한 다른 구현예는 B 림프구의 바이러스 또는 종양발생 형질전환 및 파지 디스플레이 기법을 포함한다. 키메라 또는 인간화 항체는 또한 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 내용의 전체가 특히 본원에 참조로 특히 포함되는 미국 특허 제4,816,567호; 제5,225,539호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호를 참조한다.
본 개시의 단클론성 항체를 생산하는 트랜스펙토마의 생성
본 개시의 항체는 또한, 예를 들어, 당업계에 널리 공지된 바와 같은 재조합 DNA 기법과 유전자 형질감염 방법의 조합을 사용하여, 숙주 세포 트랜스펙토마에서 생산될 수 있다(예를 들어, 문헌[Morrison, S. (1985) Science 229:1202]). 일 구현예에서, 표준 분자 생물학 기법에 의해 얻어진 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 DNA는 유전자가 전사 및 번역 조절 서열에 작동 가능하게 연결되도록 하나 이상의 발현 벡터에 삽입된다. 이러한 문맥에서 용어 "작동 가능하게 연결된"은 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 의도된 기능을 제공하도록 항체 유전자가 벡터 내로 리게이션되는 것을 의미하고자 한다.
용어 "조절 서열"은 항체 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 요소(예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 하고자 한다. 이러한 조절 서열은, 예를 들어, 문헌[Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990))]에 기재되어 있다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위한 바람직한 조절 서열은 포유동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 요소, 예컨대, 사이토메갈로바이러스(CMV), 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(AdMLP) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 대안적으로, 비바이러스 조절 서열, 예컨대, 유비퀴틴 프로모터 또는 β-글로빈 프로모터가 사용될 수 있다. 추가로 또한, 조절 요소는 상이한 공급원으로부터의 서열, 예컨대, SV40 초기 프로모터 및 인간 T 세포 백혈병 바이러스 유형 1의 긴 말단 반복으로부터의 서열을 함유하는, SRα 프로모터 시스템으로 구성되었다(Takebe et al., (1988) Mol. Cell. Biol. 8:466-472). 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 상용성이도록 선택된다.
항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 동일하거나 별개의 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 가변 영역은 이들을 요망되는 이소형의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 인코딩한 발현 벡터 내로 삽입함으로써 임의의 항체 이소형의 전장 항체 유전자를 생성하는 데 사용되고, 이로써 VH 분절은 벡터 내의 CH 분절(들)에 작동 가능하게 연결되고 VL 분절은 벡터 내의 CL 분절에 작동 가능하게 연결된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 용이하게 하는 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 신호 펩티드가 항체 사슬 유전자의 아미노 말단에 인-프레임으로 연결되도록 항체 사슬 유전자는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 이종성 신호 펩티드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 신호 펩티드)일 수 있다.
항체 사슬 유전자 및 조절 서열 외에도, 본 개시의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제 기점) 및 선별 마커 유전자와 같은 추가 서열을 가질 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다(예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예를 들어, 전형적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 내성을 부여한다. 바람직한 선별 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 dhfr-숙주 세포에서 사용하기 위함) 및 네오 유전자(G418 선별을 위함)를 포함한다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 발현 벡터(들)는 표준 기법에 의해 숙주 세포 내로 형질감염된다. 용어 "형질감염"의 다양한 형태는 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 외인성 DNA를 도입하는 데 일반적으로 사용되는 매우 다양한 기법, 예를 들어, 전기천공, 칼슘-인산염 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포괄하는 것으로 하고자 한다. 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 개시의 항체를 발현하는 것이 이론적으로 가능하지만, 진핵 세포, 및 가장 바람직하게는 포유동물 숙주 세포에서 항체의 발현이 가장 바람직한데, 그 이유는 이러한 진핵 세포, 및 특히 포유동물 세포가 원핵 세포보다 적절히 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 가능성이 더 높기 때문이다.
본 개시의 재조합 항체를 발현하기 위한 바람직한 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, 문헌[R. J. Kaufman and P. A. Sharp (1982) J. Mol. Biol. 159:601-621]에 기재된 바와 같은 DHFR 선별 마커와 함께 사용되는, 문헌[Urlaub and Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr-CHO 세포를 포함함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하기 위해, 또 다른 바람직한 발현 시스템은 WO 제87/04462호, WO 제89/01036호 및 EP 제338,841호에 개시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 항체 유전자를 인코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포 내로 도입되는 경우, 항체는 숙주 세포에서 항체를 발현하게 하거나, 더욱 바람직하게는, 항체를 숙주 세포가 성장한 배양 배지 내로 분비하게 하는 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
면역접합체
본 개시의 항체는 치료제와 접합되어 면멱접합체, 예컨대, 항체-약물 접합체(ADC)를 형성할 수 있다. 적합한 치료제는 세포독소, 예컨대, DT3C, 알킬화제, DNA 마이너 그루브 결합제, DNA 인터칼레이터, DNA 가교제, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 핵 외수송 억제제, 프로테아좀 억제제, 토포이소머라제 I 또는 II 억제제, 열 충격 단백질 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항생제 및 항-유사분열제를 포함한다. ADC에서, 항체 및 치료제는 바람직하게는 펩티딜, 디설파이드, 또는 하이드라존 링커와 같은 절단 가능한 링커를 통해 접합된다. 더욱 바람직하게는, 링커는 Val-Cit, Ala-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala-Asn, Cit-Cit, Val-Lys, Lys, Cit, Ser, 또는 Glu와 같은 펩티딜 링커이다. ADC는 개시가 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제7,087,600호; 제6,989,452호; 및 제7,129,261호; PCT 공개 제WO 02/096910호; 제WO 07/038,658호; 제WO 07/051,081호; 제WO 07/059,404호; 제WO 08/083,312호; 및 제WO 08/103,693호; 미국 특허 공개 제20060024317호; 제20060004081호; 및 제20060247295호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
이중특이적 분자
또 다른 양태에서, 본 개시는 적어도 하나의 다른 기능적 분자, 예를 들어, 또 다른 펩티드 또는 단백질(예를 들어, 수용체에 대한 또 다른 항체 또는 리간드)에 연결되어 적어도 2 개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이적 분자를 생성하는 본 개시의 하나 이상의 항체를 포함하는 이중특이적 분자를 특징으로 한다. 따라서, 본원에서 사용되는 "이중특이적 분자"는 3 개 이상의 특이성을 갖는 분자를 포함한다.
일 구현예에서, 이중특이적 분자는, 항-Fc 결합 특이성 및 항-BCMA 결합 특이성 외에, 제3 특이성을 갖는다. 제3 특이성은 항-증강 인자(EF), 예를 들어, 세포독성 활성에 관여하는 표면 단백질에 결합하여 표적 세포에 대한 면역 반응을 증가시키는 분자일 수 있다. 예를 들어, 항-증강 인자는 세포독성 T-세포(예를 들어, CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, 또는 ICAM-1을 통해) 또는 다른 면역 세포에 결합하여 표적 세포에 대한 면역 반응의 증가를 야기할 수 있다.
이중특이적 분자는 다수의 상이한 형식 및 크기일 수 있다. 크기 스펙트럼의 한 말단에서, 이중특이적 분자는 동일한 특이성의 2 개의 결합 아암을 갖는 대신, 각각 상이한 특이성을 갖는 2 개의 결합 아암을 갖는 것을 제외하고는 전형적인 항체 형식을 보유한다. 다른 말단에는 펩티드 사슬, 소위 Bs(scFv)2 작제물에 의해 연결된 2 개의 단쇄 항체 단편(scFv)으로 이루어진 이중특이적 분자가 있다. 중간-크기의 이중특이적 분자는 펩티딜 링커에 의해 연결된 2 개의 상이한 F(ab) 단편을 포함한다. 이들 및 다른 형식의 이중특이적 분자는 유전 공학, 체세포 혼성화, 또는 화학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 인용된 문헌[Kufer et al]; 문헌[Cao and Suresh, Bioconjugate Chemistry, 9 (6), 635-644 (1998)]; 및 문헌[van Spriel et al., Immunology Today, 21 (8), 391-397 (2000)], 및 이에 인용된 참고문헌을 참조한다.
항체-인코딩 또는 항체-보유 종양용해 바이러스
종양용해 바이러스는 암 세포를 우선적으로 감염시키고 사멸시킨다. 본 개시의 항체는 종양용해 바이러스와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 개시의 항체를 인코딩하는 종양용해 바이러스는 인간 신체에 도입될 수 있다.
키메라 항원 수용체
또한, 항-BCMA scFv을 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)가 제공되고, 항-BCMA scFv는 본원에 기재된 CDR 및 중쇄/경쇄 가변 영역을 포함한다.
항-BCMA CAR은 (a) 항-BCMA scFv를 포함하는 세포외 항원 결합 도메인; (b) 막관통 도메인; 및 (c) 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
CAR은 신생 수용체를 내형질 세망으로 유도하는 세포외 항원 결합 도메인의 N-말단에 신호 펩티드를 함유할 수 있고, 수용체가 결합에 더욱 이용 가능하게 만드는 세포외 항원 결합 도메인의 N-말단에 힌지 펩티드를 함유할 수 있다. CAR은 바람직하게는 세포내 신호전달 도메인에서 일차 세포내 신호전달 도메인 및 하나 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 주로 사용되며 가장 효과적인 일차 세포내 신호전달 도메인은 ITAM을 함유하는 CD3-제타 세포질 도메인이며, 이의 인산화는 T 세포 활성화를 초래한다. 공동-자극 신호 전달 도메인은 CD28, CD137 및 OX40과 같은 공동-자극 단백질로부터 유래될 수 있다.
CAR은 T 세포 확장, 지속성, 및 항-종양 활성을 향상시키는 인자, 예컨대, 사이토카인 및 공동-자극 리간드를 더 부가할 수 있다.
또한, 본원에 제공된 CAR을 포함하는 조작된 면역 효과기 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 면역 효과기 세포는 T 세포, NK 세포, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 조혈 줄기 세포, 다능성 줄기 세포, 또는 배아 줄기 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 효과기 세포는 T 세포이다.
본 개시의 항체를 인코딩하는 핵산 분자
또 다른 양태에서, 본 개시는 본 개시의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자, 면역접합체, 이중특이성 분자, 또는 CAR을 제공한다. 핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 표준 기법에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어, 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 "단리"되거나 "실질적으로 순수하게 된다". 본 개시의 핵산은, 예를 들어, DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 바람직한 구현예에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 개시의 핵산은 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 수득될 수 있다. 하이브리도마(예를 들어, 하기에 더 기재된 바와 같은 인간 면역글로불린 유전자를 갖는 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기법에 의해 수득될 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 수득된 항체의 경우(예를 들어, 파지 디스플레이 기법을 이용함), 이러한 항체를 인코딩하는 핵산은 유전자 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
본 개시의 바람직한 핵산 분자는 BCMA 단클론성 항체의 VH 및 VL 서열 또는 CDR을 인코딩하는 것들을 포함한다. VH 및 VL 분절을 인코딩하는 DNA 단편이 얻어지면, 이들 DNA 단편은, 예를 들어, 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 변환시키기 위해, 표준 재조합 DNA 기법에 의해 더 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-인코딩 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 또 다른 단백질을 인코딩하는 또 다른 DNA 단편에 작동 가능하게 연결된다. 이러한 문맥에서 사용되는 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2 개의 DNA 단편이 연결되어, 2 개의 DNA 단편에 의해 인코딩된 아미노산 서열이 인-프레임(in-frame)을 유지하는 것을 의미하고자 한다.
VH 영역을 인코딩하는 단리된 DNA는 VH-인코딩 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 인코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 변환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며, 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있으나, 가장 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-인코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 인코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 인코딩하는 단리된 DNA는 VL-인코딩 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 인코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자(뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 변환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며, 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-인코딩 DNA 단편은 가요성 링커를 인코딩하는, 예를 들어, 아미노산 서열(Gly4-Ser)3을 인코딩하는 또 다른 단편에 작동 가능하게 연결되고, 그에 따라 VH 및 VL 서열은 인접한 단쇄 단백질로서 발현될 수 있고, VL 및 VH 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다(예를 들어, 문헌[Bird et al., (1988) Science 242:423-426; Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al.,, (1990) Nature 348:552-554] 참조).
약학적 조성물
또 다른 양태에서, 본 개시는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화된 본 개시의 하나 이상의 항체(또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 항체(bispecifics), CAR-T 세포, 종양용해 바이러스, 면역접합체, 핵산 분자, 발현 벡터 또는 숙주 세포)를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 항체(또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 항체, CAR-T 세포, 종양용해 바이러스, 면역접합체, 핵산 분자, 발현 벡터 또는 숙주 세포)는 조성물이 하나 초과의 항체(또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 항체, CAR-T 세포, 종양용해 바이러스, 면역접합체, 핵산 분자, 발현 벡터 또는 숙주 세포)를 함유할 때 개별적으로 투여될 수 있다. 조성물은 선택적으로 하나 이상의 추가 약학적 활성 성분, 예컨대, 또 다른 항체, 또는 약물, 예컨대, 항-종양 약물을 함유할 수 있다.
약학적 조성물은 임의의 수의 부형제를 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 담체, 표면 활성제, 증점제 또는 에멀션화제, 고형 결합제, 분산 또는 현탁 보조제, 가용화제, 착색제, 향미제, 코팅제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 보존제, 등장제, 및 이들의 조합물을 포함한다. 적합한 부형제의 선택 및 사용은 개시가 본원에 참조로 포함되는 문헌[Gennaro, ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 2003)]에 교시되어 있다.
바람직하게는, 약학적 조성물은 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)에 적합하다. 투여 경로에 따라, 활성 성분을 산의 작용 및 불활성화를 초래할 수 있는 기타 자연 조건으로부터 보호하는 물질로 코팅할 수 있다. 본원에서 사용되는 문구 "비경구 투여"는 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식, 일반적으로 주사에 의한 것을 의미하며, 비제한적으로, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 관절낭내(intracapsular), 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 기관경유, 피하, 표피하(subcuticular), 관절내, 관절낭하(subcapsular), 지주막하(subarachnoid), 척추내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 대안적으로, 본 개시의 항체는 비-비경구 경로, 예컨대, 국소, 표피 또는 점막 투여 경로를 통해, 예를 들어, 비강내로, 경구로, 질로, 직장으로, 설하로 또는 국소로 투여될 수 있다.
약학적 조성물은 멸균 수용액 또는 분산액의 형태일 수 있다. 이들은 또한 마이크로에멀션, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로 제형화될 수 있다.
단일 투여형을 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 대상, 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이고, 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 이 양은 활성 성분 약 0.01% 내지 약 99%, 바람직하게는 약학적으로 허용되는 담체와 조합된 활성 성분 약 0.1% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 1% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
투여량 요법은 최적의 요망되는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 용량이 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 비례적으로 감소하거나 증가할 수 있다. 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위형으로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여 단위형은 치료될 대상체를 위한 단위 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개인 단위를 지칭하며; 각 단위는 필요한 약학적 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유한다. 대안적으로, 항체는 서방형 제형으로 투여될 수 있고, 이러한 경우에 투여가 덜 빈번하게 필요하다.
조성물의 투여의 경우, 투여량은 약 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 범위일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 주 1 회 투여를 수반한다.
본 개시의 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 면역접합체, 이중특이적 분자, CAR, 면역 세포, 종양용해 바이러스, 핵산 분자, 발현 벡터 또는 숙주 세포의 "치료적 유효 투여량"은 바람직하게는 질환 증상의 중증도 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속 증가, 또는 질환 발병으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 초래한다. 예를 들어, 종양-보유 대상체의 치료를 위해, "치료적 유효 투여량"은 바람직하게는 비치료 대상체에 비해 적어도 약 20%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40%, 더욱더 바람직하게는 적어도 약 60%, 및 또한 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%만큼 종양 성장을 억제한다. 치료용 항체의 치료적 유효량은, 전형적으로 인간이고 또 다른 포유동물일 수 있는 대상체에서 종양 크기를 감소시키거나, 달리 증상을 개선할 수 있다.
약학적 조성물은 임플란트, 경피 패치, 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형일 수 있다. 생분해성, 생체적합성 폴리머, 예컨대, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
치료 조성물은 (1) 무니들 피하 주사 장치(예를 들어, 미국 특허 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호; 및 제4,596,556호); (2) 미세주입 펌프(미국 특허 제4,487,603호); (3) 경피 장치(미국 특허 제4,486,194호); (4) 주입 장치(미국 특허 제4,447,233호 및 제4,447,224호); 및 (5) 삼투 장치(미국 특허 제4,439,196호 및 제4,475,196호)와 같은 의료 장치를 통해 투여될 수 있고, 이의 개시는 본원에 참조로 포함된다.
특정 구현예에서, 본 개시의 단클론성 항체는 생체내에서 적절한 분배를 보장하도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 치료용 항체가 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 것을 보장하기 위해, 이들은 리포좀 내에서 제형화될 수 있는데, 이는 추가적으로 특정 세포 또는 기관으로의 선택적 수송을 향상시키기 위해 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 제5,416,016호; 및 제5,399,331호; 문헌[V. V. Ranade (1989) J. Clin.Pharmacol.29:685; Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038; Bloeman et al., (1995) FEBS Lett.357:140; M. Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180; Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134; Schreier et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:9090; Keinanen and Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; 및 Killion and Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참조한다.
본 개시의 용도 및 방법
본 개시의 약학적 조성물은, 예를 들어, 증가된 BCMA 발현과 관련된 종양의 처리를 포함하는 수많은 시험관내 및 생체내 유용성을 갖는다.
BCMA-발현 종양 세포의 증식 및 생존을 억제하는 본 개시의 항-BCMA 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 능력을 고려할 때, 본 개시는 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하도록 본 개시의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하기 위한 방법을 제공한다. 본 개시의 항체에 의해 치료될 수 있는 종양의 비제한적인 예는 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 추가로, 본 개시의 항체를 사용하여 불응성 또는 재발성 악성종양의 성장이 억제될 수 있다.
조합 치료
또 다른 양태에서, 본 개시는, 본 개시의 약학적 조성물이 대상체에서 종양 성장을 억제하는 데 효과적인 하나 이상의 추가의 항체와 공동투여되는 조합 치료의 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 개시는 본 개시의 약학적 조성물 및 하나 이상의 추가 항체, 예컨대, 항-VISTA 항체, 항-LAG-3 항체, 항-PD-L1 항체, 및 항-PD-1 항체 및/또는 항-CTLA-4 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양 성장을 억제하기 위한 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
BCMA 신호전달 활성화도 또한 표준 암 치료와 추가로 조합될 수 있다. 예를 들어, BCMA 신호전달 활성화는 CTLA-4 및/또는 LAG-3 및/또는 PD-1 차단 및 또한 화학치료 요법과 조합될 수 있다. 예를 들어, 화학치료제를 항-BCMA-항체와 함께 투여할 수 있으며, 상기 화학치료제는 세포독성제일 수 있다. 예를 들어, 에피루비신, 옥살리플라틴 및 5-FU를 항-BCMA 요법을 받는 환자에게 투여한다.
선택적으로, 본 개시의 약학적 조성물과 하나 이상의 추가 항체(예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-LAG-3 및/또는 항-PD-1 항체)의 조합은 면역원성 제제, 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원(재조합 단백질, 펩티드 및 탄수화물 분자 포함), 및 면역 자극 사이토카인을 인코딩하는 유전자로 형질감염된 세포와 추가로 조합될 수 있다(He et al., (2004) J. Immunol. 173:4919-28). 사용될 수 있는 종양 백신의 비제한적 예는 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대, gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1 및/또는 티로시나제, 또는 사이토카인 GM-CSF를 발현하도록 형질감염된 종양 세포의 펩티드를 포함한다.
항-BCMA 요법과 조합될 수 있는 다른 요법은 인터루킨-2(IL-2) 투여, 방사선, 수술 또는 호르몬 박탈을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 논의되는 치료제의 조합은 약학적으로 허용되는 담체에서 단일 조성물로서 동시에, 또는 약학적으로 허용되는 담체에서 각 작용제를 갖는 별개의 조성물로서 동시에 투여될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 조합되는 치료제는 순차적으로 투여될 수 있다.
또한, 조합 치료의 1 회 초과의 용량이 순차적으로 투여되는 경우, 순차적 투여의 순서는 각 투여 시점에 역전되거나 동일한 순서로 유지될 수 있고, 순차적 투여는 동시 투여, 또는 이들의 임의의 조합과 조합될 수 있다.
본 개시는 하기 실시예에 의해 추가로 예시되며, 하기 실시예는 추가로 한정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 도면 및 모든 참고문헌, 젠뱅크 서열, 특허 및 공개 특허 출원의 내용은 명백히 참조로 본원에 포함된다.
실시예
실시예 1 하이브리도마 기술을 이용한 마우스 항-BCMA 단클론성 항체의 생성
면역화
문헌[E Harlow, D. Lane, Antibody: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998]에 기재된 방법에 따라 마우스를 면역화시켰다. C-말단에 Fc 태그가 있는 재조합 인간 BCMA 단백질(Cat#BC7-H5254, Acro biosystems)을 면역원으로 사용하였다. 인간 BCMA-His 단백질(Cat#BCA-H522Y, Acro biosystems)을 항-혈청 역가를 결정하고 항원-특이적 항체를 분비하는 하이브리도마를 스크리닝하기 위해 사용하였다. 면역화 투여량은 일차 면역화와 부스트 면역화 둘 모두의 경우 25 ㎍의 인간 BCMA-Fc 단백질/마우스/주사를 함유하였다. 면역 반응을 증가시키기 위해, 완전 프로이트 애주번트(complete Freud's adjuvant) 및 불완전 프로이트 애주번트(incomplete Freud's adjuvant)(Sigma, St. Louis, Mo., USA)를 각각 일차 면역화 및 부스트 면역화에 사용하였다. 간략히, 먼저 볼텍스를 사용하여 바이알에서 애주번트를 약하게 혼합함으로써 애주번트-항원 혼합물을 제조하였다. 요망되는 양의 애주번트를 오토클레이브처리된 1.5 ㎖ 마이크로-원심분리기 튜브로 옮겼다. 0.25 mg/㎖ 내지 0.34 mg/㎖ 범위의 농도로 PBS 또는 식염수에서 항원을 제조하였다. 이어서, 계산된 양의 항원을 애주번트와 함께 마이크로-원심분리기 튜브에 첨가하고, 생성된 혼합물을 2 분 동안 약하게 볼텍싱함으로써 혼합하여 유중수 에멀션을 생성하였다. 그 후에, 애주번트-항원 에멀션을 동물 주사에 적절한 주사기 내에 넣었다. 총 25 ㎍의 항원을 150 ㎕ 내지 200 ㎕의 부피로 주사하였다. 각 동물을 면역화시킨 후, 항-혈청 역가에 따라 2 회 내지 3 회 부스트시켰다. 역가가 우수한 동물에게 융합 전에 복강내 주사에 의해 마지막 부스트 용량을 제공하였다.
하이브리도마 융합 및 스크리닝
뮤린 골수종 세포주의 세포(SP2/0-Ag14, ATCC#CRL-1581)를 융합 직전에 대수 성장기에 이를 때까지 배양하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장 세포를 멸균 제조하고, 문헌[Kohler G, and Milstein C, "Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity," Nature, 256: 495-497(1975)]에 기재된 바와 같은 방법에 따라 골수종 세포와 융합하였다. 이어서, 융합된 "하이브리드 세포"를 DMEM/20% FCS/HAT 배지의 96-웰 플레이트에 분배하였다. 융합 7 일 내지 10 일 후, 현미경으로 하이브리도마 콜로니의 생존을 관찰하였다. 2 주 후, 비오틴-표지 인간 BCMA-his 단백질을 사용하여 각 웰로부터의 상청액을 포획 ELISA로 처리하였다. 이어서, 인간 BCMA-his 단백질에 결합한 양성 하이브리도마 분비 항체를 선택하고, 24-웰 플레이트로 옮겼다. 이들 하이브리도마를 인간 BAFF-BCMA 차단 활성에 대하여 추가로 시험하였다. 높은 특이성의 인간 BCMA 결합 및 BCMA-BAFF 차단 활성을 나타낸 항체를 생성한 하이브리도마 클론을 희석을 제한 희석으로 서브클로닝하여 세포주의 클론성을 보장한 후 단클론성 항체를 정제하였다. 간략히, PBS 완충액을 사용하여 5 내지 10 컬럼 부피로 단백질 A 세파로스 컬럼(출처 bestchrom(Shanghai) Biosciences, Cat#AA0273)을 세척하였다. 세포 상청액을 이후 컬럼에 통과시키고, 단백질의 흡광도가 기준선에 도달할 때까지 PBS 완충액을 사용하여 컬럼을 세척하였다. 컬럼을 용리 완충액(0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7)으로 용출하고, 즉시 중화 완충액(1 M Tris-HCl, pH 9.0)을 사용하여 1.5 ㎖ 튜브에 수집하였다. 면역글로불린을 함유하는 분획을 풀링하고, 4℃에서 밤새 PBS 중에 투석하였다. 이어서, 정제된 단클론성 항체의 시험관내 기능 활성을 하기와 같이 특징화하였다.
실시예 2 BIACORE 표면 플라즈몬 공명 기법을 이용한 마우스 항-BCMA 단클론성 항체의 친화성 결정
BIAcore T200 시스템(GE healthcare, Pittsburgh, PA, USA)에 의해 실시예 1에서 생성된 정제된 항-BCMA 마우스 단클론성 항체 B1H2(mAb)를 친화성 및 결합 동역학에 대해 특징화하였다.
간략히, BIAcore에 의해 제공되는 표준 아민 커플링 키트(GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA)를 사용하여 일차 아민을 통해 CM5 칩(카르복시 메틸 덱스트란 코팅된 칩)에 염소 항-마우스 IgG(GE healthcare, Cat#BR100838, 마우스 항체 포획 키트)를 공유 연결하였다. 바이오센서 표면 상의 미반응 모이어티를 에탄올아민으로 차단하였다. 단백질 G 칩(GE Healthcare, Cat#29-1793-15)을 사용하여, 양성 대조군, 즉, SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15에 기재된 중쇄 및 경쇄 아미노산을 사용하여 자체 제조된 BCMA BM1 또는 BM으로도 지칭되는 GSK2857916의 BCMA-결합 부분을 함유하는 전장 항체의 친화성을 결정하였다. 2 ㎍/㎖ 농도의 정제된 마우스 항-BCMA 항체 및 양성 대조군을 10 ㎕/min의 유량으로 칩 상에 흘렸다. 이어서, 연속 희석된 재조합 인간 BCMA-his(Acro biosystems, Cat#BCA-H522Y) 또는 시노몰구스 원숭이 BCMA-Fc 단백질(Acro biosystems, Cat#BCA-C5253), HBS-EP+ 완충액(Biacore에서 제공)에서 2 배 희석을 10 nM에서 시작하여 30 ㎕/min의 유량으로 칩 상에 흘렸다. 항원-항체 결합 동역학을 2 분 동안 추적하고, 해리 동역학을 10 분 동안 추적하였다. 결합 및 해리 곡선을 BIAcore 평가 소프트웨어를 사용하여 1:1 Langmuir 결합 모델에 피팅시켰다. KD, Ka 및 Kd 값을 결정하고, 하기 표 2에 요약하였다.
[표 2]
인간 BCMA 및 시노몰구스 BCMA에 대한 마우스 항-BCMA 항체 B1H2의 결합 친화성
Figure pct00002
마우스 항체 B1H2는 벤치마크보다 더 높은 결합 친화성으로 인간 BCMA에 특이적으로 결합하였으나 원숭이 BCMA에는 결합하지 않았다.
실시예 3 마우스 항-BCMA 단클론성 항체의 결합 활성
인간 BCMA에 대한 마우스 항-BCMA 항체 B1H2의 결합 활성을 포획 ELISA, 간접 ELISA 및 유세포 분석(FACS)에 의해 결정하였다.
3.1 포획 ELISA
간략히, 96-웰 마이크로 플레이트를 PBS 중 2 ㎍/㎖의 염소 항-마우스 IgG Fcγ 특이적 단편(Jackson Immuno Research, Cat#115-005-071)으로 100 ㎕/웰로 코팅하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척 완충액(PBS + 0.05% Tween-20, PBST)으로 1 회 세척한 다음, 37℃에서 2 시간 동안 200 ㎕/웰의 차단 완충액(PBST 중 5% w/v 무지방 우유)으로 차단하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 10000 ng/㎖에서 시작하여 PBST 중 2.5% 무지방 우유에서 5 배 희석의, 100 ㎕/웰의 연속 희석된 정제된 마우스 항-BCMA B1H2 항체, 벤치마크 및 음성 대조군 hIgG(정맥 주사용 인간 면역글로불린(pH4), Hualan Biological Engineering Inc.)를 각각 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션한 후, 다시 4 회 세척하였다. 포획된 항-BCMA 항체를 함유하는 플레이트를 비오틴-표지 인간 BCMA-his 단백질(Cat#BCA-H522Y, Acro biosystems, PBST 중 2.5% 무지방 우유에서 4.125 ng/㎖, 100 ㎕/웰)과 함께 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하고, 4 회 세척하고, 스트렙타비딘 접합 HRP(PBST 중 1:10000 희석, Jackson Immuno Research, Cat#016-030-084, 100 ㎍/웰)과 함께 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하였다. 최종 세척 후, 플레이트를 100 ㎕/웰의 ELISA 기질 TMB(Innoreagents, Cat#TMB-S-002)와 함께 인큐베이션하였다. 50 ㎕/웰의 1 M H2SO4를 사용하여 실온에서 3 분 내지 10 분 이내에 반응을 중단하고, TMB의 경우 450 nm이고 참조 파장이 630 nm인 이중 파장 모드를 이용하여 마이크로플레이트 리더에서 각 웰의 흡광도를 판독하였다. OD(450-630) 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. OD(450-630) 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, EC50 값을 보고하였다. 결과는 도 1에 나타나 있다.
3.2 세포 기반 결합 FACS
U266 세포의 표면에 대한 항-BCMA 항체 B1H2의 결합을 유세포 분석(FACS)에 의해 시험하였다. 간략히, 인간 골수종 세포 U266(ATCC® TIB-196??)를 세포 배양 플라스크로부터 수확하고, 2 회 세척하고, 2% v/v 소 태아 혈청(FACS 완충액)을 함유하는 인산염 완충 식염수(PBS)에 재현탁시켰다. 96 웰-플레이트에서 웰 당 2 Х 105 개 세포를 FACS 완충액 중 100 ㎕의 연속 희석된 항-BCMA 항체 또는 대조군(10 ㎍/㎖로부터 시작, 5 배 연속 희석)와 40 분 동안 얼음 위에서 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2 회 세척한 다음, 100 ㎕/웰의 R-피코에리트린 AffiniPure F(ab')2 단편 염소 항-마우스 IgG (H+L) (FACS 완충액 중 1:1000 희석, Jackson Immunoresearch, Cat#115-116-146)를 첨가하였다. 암소에서 4℃에서 40 분 동안 인큐베이션한 후, 세포를 3 회 세척하고, FACS 완충액에 재현탁시켰다. 형광을 Becton Dickinson FACS Canto II-HTS 장비를 사용하여 측정하고, MFI(평균 형광 강도)를 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, EC50 값을 U266 세포에 대한 최대 항-BCMA 결합의 50%를 달성하는 항체 농도로서 보고하였다. 결과는 도 2에 나타나 있다.
결과는 마우스 항-BCMA 항체 B1H2가 인간 BCMA에 특이적으로 결합했다는 것을 시사하였다. 도 1에서, B1H2는 포획 ELISA에서 양성 대조군보다 낮은 EC50을 가졌다. 도 2에 따르면, 본 개시의 마우스 항-BCMA 항체 B1H2는 벤치마크보다 더 낮은 EC50 및 더 높은 Bmax로 세포 표면 상에서 인간 BCMA에 결합하였다. 데이터는 B1H2 항체가 더 우수한 BCMA 결합능을 가짐을 시사하였다.
실시예 4 마우스 항-BCMA 단클론성 항체의 경쟁 ELISA
4.1 리간드 차단 ELISA
BCMA-BAFF 결합을 차단하는 본 개시의 항-BCMA 항체 B1H2의 능력을 경쟁 ELISA 검정으로 측정하였다. 간단히, 100 ㎕의 인간 BCMA-his 단백질(Acro biosystems, Cat#BCA-H522Y)을 37℃에서 2 시간 동안 탄산염/중탄산염 완충액 중에 2 ㎍/㎖로 96-웰 마이크로플레이트 상에 코팅하였다. 플레이트를 세척 완충액(PBS+0.05% w/v Tween-20, PBST)으로 세척하고, 37℃에서 2 시간 동안 PBST 중 5% w/v 무지방 우유로 차단하였다. 그 다음, 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다.
2.5% w/v 무지방 우유로 PBST에서 연속 희석된 항-BCMA B1H2 항체 또는 대조군(4 배 연속 희석으로 200 nM에서 시작)을 BCMA-his 결합 플레이트에 웰 당 100 ㎕로 첨가하고, 인간 BCMA-his 단백질과 함께 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 4 회 세척한 다음, 100 ㎕/웰로 10.5 ng/㎖의 비오틴-표지 BAFF-Fc 단백질(Sino biological inc., Cat#10056-H01H)을 첨가하고, 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 그 후에, 플레이트에 100 ㎕/웰의 스트렙타비딘 접합 HRP(PBST 완충액 중 1:5000 희석, Jackson Immunoresearch, Cat#016-030-084)를 첨가하고 37℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 마지막으로, TMB를 첨가하고, 1 M H2SO4를 사용하여 반응을 중단하였다. TMB의 경우 450 nm이고 참조 파장이 630 nm인 이중 파장 모드를 이용하여 마이크로플레이트 리더에서 각 웰의 흡광도를 판독한 후, OD(450-630) 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, IC50 값을 보고하였다.
4.2 벤치마크 차단 ELISA
경쟁 ELISA 검정을 이용하여 벤치마크-인간 BCMA 결합을 차단하는 본 개시의 항-BCMA 항체 B1H2의 능력을 측정하였다. 간략히, PBS 중 2 ㎍/㎖에서 96-웰 마이크로 플레이트에서 웰 당 100 ㎕로 BCMA BM1을 코팅하고, 37℃에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 플레이트를 세척 완충액으로 세척하고, 37℃에서 2 시간 동안 PBST 중 5% w/v 무지방 우유로 차단하였다. 차단하면서, 본 개시의 항-BCMA 항체 또는 대조군을 4 배 연속 희석으로 100 nM에서 시작하여 비오틴 표지 인간 BCMA-his 단백질(Acro biosystems, Cat#BCA-H522Y, 2.5% 무지방 우유로 PBST 중 3.3 ng/㎖)으로 희석하고, 40 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 플레이트 세척 후, 항체/비오틴 표지 인간 BCMA-his 혼합물을 웰 당 100 ㎕로 BCMA BM1 코팅 플레이트에 첨가하였다. 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 세척 완충액을 사용하여 세척하였다. 이어서, 플레이트를 첨가하고, 37℃에서 40 분 동안 100 ㎕/웰의 스트렙타비딘 접합 HRP와 함께 인큐베이션하였다. 세척 완충액을 사용하여 플레이트를 다시 세척하였다. 마지막으로, TMB를 첨가하고, 1 M H2SO4를 사용하여 반응을 중단하였다. TMB의 경우 450 nm이고 참조 파장이 630 nm인 이중 파장 모드를 이용하여 마이크로플레이트 리더에서 각 웰의 흡광도를 판독하고, 이후 OD(450-630) 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, IC50 값을 보고하였다.
두 가지 검정의 결과는 도 3 및 도 4에 요약되어 있다.
도 3으로부터, 항-BCMA 항체 B1H2는 BCMA BM1보다 약간 더 높은 차단 활성으로 인간 BCMA가 BAFF에 결합하는 것을 차단할 수 있었다는 것을 알 수 있다.
도 4는 항체 B1H2가 인간 BCMA-BM1 결합을 차단할 수 있었음을 보여주었는데, 이는 항체 B1H2가 BCMA BM1이 한 것과 동일하거나 유사한 에피토프에 결합하였음을 시사한다.
실시예 5 키메라 항체의 생성
항-BCMA 마우스 mAb B1H2의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 시퀀싱하였고, 서열 ID 번호는 표 1에 요약되어 있다.
중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 각각 인간 IgG1 중쇄(SEQ ID NO: 12) 및 인간 카파 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO: 13)에 프레임내에서 클로닝하였고, 여기서 가변 영역의 C-말단은 각각의 불변 영역의 N-말단에 연결되었다.
인간 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드를 각각 함유하는 벡터, 및 인간 카파 경쇄 불변 영역에 연결된 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드를 각각 함유하는 벡터를 1 mg/㎖의 PEI와 함께 1.1:1 비율의 경쇄 대 중쇄 작제물에서 50 ㎖의 293F 현탁 세포 배양물에 일시적으로 형질감염시켰다.
세포 상청액을 진탕 플라스크에서 6 일 후에 수확하고, 펠렛 세포로 하향 회전시킨 다음, 세포 상청액으로부터 키메라 항체를 정제하였다.
실시예 6 항-BCMA 마우스 단클론성 항체 B1H2의 인간화
마우스 항-BCMA 항체 B1H2를 인간화시키고, 추가로 특징화하였다. 하기에서 상세히 기술되는 바와 같이 잘-확립된 CDR-접목 방법을 이용하여 이러한 마우스 항체의 인간화를 수행하였다.
마우스 항체 B1H2의 인간화를 위한 억셉터 프레임워크를 선택하기 위해, 이러한 마우스 항체 B1H2의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열을 인간 면역글로불린 유전자 데이터베이스에 대해 블라스팅하였다. 가장 높은 상동성을 갖는 인간 생식계열을 인간화를 위한 억셉터 프레임워크로서 선택하였다. 마우스 항체 중쇄/경쇄 가변 영역 CDR을 선택된 프레임워크에 삽입하고, 프레임워크 내의 잔기(들)를 추가로 돌연변이시켜 더 많은 후보 중쇄/경쇄 가변 영역을 수득하였다. 총 25 개의 인간화 B1H2 항체(즉, huB1H2-V1 내지 huB1H2-V24 및 huB1H2-V33)를 수득하였고, 이의 중쇄/경쇄 가변 영역 서열은 표 1에 있다.
인간 IgG1 중쇄 불변 영역(SEQ ID NO: 12)에 연결된 인간화 B1H2 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드를 각각 함유하는 벡터 및 인간 카파 경쇄 불변 영역(SEQ ID NO: 13)에 연결된 인간화 B1H2 경쇄 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드를 각각 함유하는 벡터를 1 mg/㎖의 PEI와 함께 60% 대 40%의 비율의 경쇄 대 중쇄 작제물에서 50 ㎖의 293F 현탁 세포 배양물에 일시적으로 형질감염시켰다.
실시예 7 인간화 B1H2 항체의 특징화
인간화 항체를 함유하는 세포 상청액을 진탕 플라스크에서 6 일 후에 수확하고, 후술되는 프로토콜에 따라 Octect에 의해 인간 BCMA에 대한 결합 친화성에 대하여 시험하였다.
Octet 시스템(Fortebio, Octet RED 96)을 사용하여 Octet 친화성 시험을 수행하였다. 간략히, AHC 바이오센서(ForteBio로부터의 항-인간 IgG Fc 포획)를 10 mM 글리신(pH 1.5)으로 3 초 동안 사전소킹시킨 다음, 3 초 동안 러닝 완충액(PBST 중 0.5% w/v BSA)로 웰에 침지시키고, 소킹 및 침지 단계를 3 회 반복하였다. 이어서, 센서를 인간화 항체를 함유하는 세포 상청액, 10 ㎍/㎖의 HBS-EP+ 중 키메라 B1H2 항체, 또는 10 ㎍/㎖의 HBS-EP+ 중 BCMA BM1이 있는 웰에 100 초 동안 침지시킨 후, 5 min 동안 러닝 완충액과 함께 웰에 함침시켰다. 새로운 기준선은 러닝 완충액과 함께 또 다른 웰에서 180 초 동안 러닝시켰다. 그 후에, 센서를 100 초 동안 러닝 완충액 중에 희석된 인간 BCMA-his 단백질(Acro biosystems, Cat#BCA-H522Y, 2 배 연속 희석으로 80 nM에서 시작)로 웰에 침지시킨 다음, 기준선 웰에 10 min 동안 함침시켰다. 마지막으로, 센서를 10 mM 글리신(pH 1.5)으로 3 초 동안 사전소킹시킨 다음, 3 초 동안 러닝 완충액으로 웰에 침지시키고, 소킹 및 침지 단계를 3 회 반복하였다. 결합 및 해리 곡선을 ForteBio 데이터 분석 8.1 평가 소프트웨어를 사용하여 1:1 Langmuir 결합 모델에 피팅시켰다. Ka, Kd 및 KD 값을 결정하고, 하기 표 3에 요약하였다.
데이터는 시험된 바와 같은 인간화 항체, 예컨대, huB1H2-V1 내지 huB1H2-V7, huB1H2-V12 및 huB1H2-V33이 키메라 B1H2 항체와 비교하여 비슷하게 높은 결합 친화성을 나타냈다는 것을 시사하였다.
[표 3]
인간화 B1H2 mAb의 친화성
Figure pct00003
인간화 항체 huB1H2-V10 및 huB1H2-V33을 상술된 바와 같이 정제하고, 약간 수정된 상기 실시예에서의 프로토콜 및 후술되는 프로토콜에 따라 Biacore, 포획 ELISA, 간접 ELISA, 단백질 열 이동 검정, 세포-기반 결합 FACS, 경쟁 ELISA, 내부화-매개 세포독성 및 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC) 검정으로 시험하였다.
BIAcore 검정의 경우, 염소 항-인간 IgG(GE healthcare, Cat#BR100839, 인간 항체 포획 키트)를 염소 항-마우스 IgG 대신에 CM5 칩에 공유 연결하고, CM5 칩을 단백질 G 칩 대신에 벤치마크용으로 사용하였다. 결과는 표 5에 나타나 있다.
포획 ELISA의 경우, AffiniPure 염소 항-인간 IgG, Fcγ 특이적 단편(Jackson Immunoresearch, Cat#109-005-098)을 AffiniPure 염소 항-마우스 IgG, Fcγ 특이적 단편, 100 ㎕/웰 대신에 사용하였다. 결과는 도 5에 나타나 있다.
시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합능을 시험하기 위한 간접 ELISA를 다음과 같이 수행하였다. 간략히, 96-웰 마이크로 플레이트를 37℃에서 2 시간 동안 PBS 중 2 ㎍/㎖의 시노몰구스 BCMA-his 단백질(Acro biosystems, Cat#BCA-C52H7) 100 ㎕로 코팅하였다. 플레이트를 세척 완충액(PBS + 0.05% Tween-20, PBST)으로 1 회 세척한 다음, 37℃에서 2 시간 동안 200 ㎕/웰의 차단 완충액(PBST 중 5% w/v 무지방 우유)으로 차단하였다. 플레이트를 다시 세척하고, 100 ㎕/웰의 연속 희석된 본 개시의 항-BCMA 항체, BCMA BM1 또는 음성 대조군 hIgG(정맥 주사용 인간 면역글로불린(pH 4), Hualan Biological Engineering Inc.)(10000 ng/㎖에서 시작하여 PBST 중 2.5% 무지방 우유로 5 배 희석)와 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하였다. ELISA 플레이트를 4 회 세척하고, 퍼옥시다제 AffiniPure F(ab')2 단편 염소 항-인간 IgG, Fcγ 특이적 단편(PBST 완충액 중에 1:5000 희석, Jackson Immunoresearch, Cat#109-036-098, 100 ㎕/웰)과 함께 37℃에서 40 분 동안 인큐베이션하였다. 최종 세척 후, 플레이트를 100 ㎕/웰의 TMB(Innoreagents)와 함께 인큐베이션하였다. 50 ㎕/웰의 1 M H2SO4를 사용하여 실온에서 3 분 내지 10 분 후에 반응을 중단하고, TMB의 경우 450 nm이고 참조 파장이 630 nm인 이중 파장 모드를 이용하여 마이크로플레이트 리더에서 각 웰의 흡광도를 판독하였다. OD(450-630) 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, EC50 값을 보고하였다. 결과는 도 6에 나타나 있다.
세포-기반 결합 FACS에서, 인간 BCMA(SEQ ID NO: 16, uniprot #Q02223의 아미노산 잔기 1 내지 184)를 안정적으로 발현하는 Biosion 자체 제조 293F-BCMA 세포를 U266 세포, 2 Х 105 개 세포/웰 대신에 사용하였고, 여기서 293F-BCMA 세포는 293F 세포(Thermofisher Inc., Cat# 11625019)를 NotI 및 XbaI 부위 사이에 BCMA(SEQ ID NO: 16) 코딩 서열이 삽입된 pcDNA3.1 플라스미드로 리포펙타민 3000 형질감염 시약(Thermo Fisher)의 지침에 따라 형질감염시킴으로써 제조하였다. R-피코에리트린 AffiniPure 염소 항-인간 IgG, Fcγ 특이적 단편(Jackson Immunoresearch, Cat#109-115-098)을 R-피코에리트린 AffiniPure F(ab')2 단편 염소 항-마우스 IgG(H+L), 100 ㎕/웰 대신에 사용하였다. 결과는 도 7에 나타나 있다.
열 이동 검정의 경우, GloMelt?? 열 이동 단백질 안정성 키트(Biotium, Cat# 33022-T)를 사용함으로써 단백질 열 이동 검정을 이용하여 용융 온도(Tm)를 결정하였다. 간략히, GloMelt?? 염료가 해동되고 실온에 도달하도록 하였다. 염료가 들어 있는 바이알을 볼텍싱하고 원심분리하였다. 그 후에, 5 ㎕의 200x 염료를 95 ㎕의 PBS에 첨가함으로써 10x 염료를 제조하였다. 총 20 ㎕ 반응 부피까지 2 ㎕의 10x 염료를 10 ㎍의 인간화 항체와 함께 첨가하고 PBS를 첨가하였다. 염료 및 항체가 들어 있는 튜브를 잠시 회전시키고, 표 4에서의 매개변수를 갖는 용융 곡선 프로그램으로 설정된 실시간 PCR 열 순환기(Roche, LightCycler 480 II)에 배치하였다. 결과는 도 12a 및 도 12b에 나타나 있다.
[표 4]
용융 곡선 프로그램에 대한 매개변수
Figure pct00004
루시페라제 검출 시스템(Bio-LiteTM 루시페라제 검정 시스템, Promega, Cat#E6120)을 사용하여 항-BCMA 인간화 항체에 의해 유도된 ADCC 활성을 시험하였다. Jurkat-NFAT-CD16a 안정 세포주(클론 ID#2B1-1D2)는 세포막에서 CD16a를 안정적으로 발현하는 효과기 세포주로서, 리포펙타민 3000 형질감염 시약(Thermo Fisher)의 지침에 따라 루시페라제 리포터 유전자 luc2P(Photinus pyralis) 및 pUNO1-hFCGR3Ac 플라스미드(Invivogene, Cat#pUNO1-hFCGR3Ac)의 전사를 유도하는 NFAT 반응 요소(NFAT-RE)를 함유하는 pGL4.30 플라스미드(Promega, Cat#pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro)로 Jurkat 세포를 형질감염시킴으로써 자체 제조된 것이었다. 구체적으로, 10% FBS(Gibco, Cat#10099-141)가 보충된 100 ㎕의 RPMI1640 배지(Gibco, Cat#A10491-01)에서 표적 세포로서 1.25 Х 104 개 세포의 U266 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고, 37℃의 CO2 인큐베이터에서 1 시간 동안 다양한 농도(133.33 nM, 66.67 nM, 6.67 nM, 0.67 nM, 0.07 nM, 0.01 nM, 0.001 nM, 0.0001 nM, 0.00001 nM 및 0.0 nM)의 50 ㎕의 항-BCMA 항체와 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트에 10% FBS가 보충된 50 ㎕의 RPMI1640 배지에 7.5 Х 104 개 효과기 세포를 첨가하고, 6:1의 E/T 비율로 표적 세포와 혼합하였다. 혼합물을 5% CO2로 가습된 분위기 케이싱에서 37℃에서 6 시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 웰 당 100 ㎕의 상청액을 폐기하였다. 플레이트를 첨가하고, 10 분 동안 루시페라제 검출 시약(50 ㎕/웰, Promega, Cat#E6120)과 인큐베이션하고, Tecan infinite 200Pro 플레이트-리더에 의해 분석하였다. Graphpad prism 소프트웨어를 사용하여 발광 신호의 데이터를 분석하고, EC50 값을 보고하였다. 결과는 도 10a 및 도 10b에 나타나 있다.
세포-기반 내부화 검정에서, 항-BCMA 인간화 항체를 U266 세포(ATCC® TIB-196)에서 이들의 내부화 효율에 대해 정확하게 평가하였다. 먼저, 수용체-결합 도메인 및 연쇄구균 단백질 G(3C)(자체 제조, SEQ ID NO: 23)의 C1, C2, 및 C3 도메인을 결여하는 디프테리아 독소(DT)로 이루어진 DT3C로 칭해지는 재조합 단백질을 합성하였다. 그 후에, 10% FBS(Gibco, Cat#10099-141)가 보충된 100 ㎕의 RPMI1640 배지(Gibco, Cat#A10491-01)에서 1.5 Х l04 개 U266 세포를 96-웰 플레이트(Corning, Cat#3903)의 각 웰 상에 플레이팅하였다. 한편, 10% FBS를 갖는 RPMI1640 배지 중 40 ㎍/㎖인 본 개시의 항-BCMA 항체 또는 대조군을 10% FBS를 갖는 RPMI1640 배지 중 40 ㎍/㎖의 DT3C 단백질과 1:1 부피비로 혼합하고, 30 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이어서, 100 ㎕의 연속 희석된 항체/DT3C 혼합물(20 ㎍/㎖로부터 시작, 배양 배지에서 3배 연속 희석)을 세포 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 72 시간 동안 CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 플레이트에 Cell Titer Glo 시약(Promega, Cat#G7570)을 첨가하고, 10 분 동안 인큐베이션하였다. 세포 배양 플레이트를 이후 Tecan infinite 200Pro 플레이트-리더로 분석하였다. Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고, IC50 값을 세포 생존력에 대한 최대 억제의 50%를 달성한 항체 농도로서 보고하였다. mAb-DT3C 접합체가 표적 세포에 의해 내부화되었을 때, 표적 세포 생존력이 현저하게 감소되었다. 접합체가 내부화되지 않은 경우, 유리 DT3C는 세포 사멸 활성이 없거나 거의 없었다. 데이터는 도 11 및 표 6에 나타나 있다.
다른 검정의 결과는 도 8 및 도 9에 나타나 있다.
[표 5]
인간화 mAb의 결합 친화성
Figure pct00005
표 5 및 도 5 및 도 7로부터, 마우스, 키메라 및 인간화 B1H2 항체가 BCMA BM1과 비교하여 더 높은 결합 친화성/결합능을 나타냈다는 것을 알 수 있다.
도 6으로부터, 항-BCMA 인간화 항체 huB1H2-V10 및 huB1H2-V33이 시노몰구스 BCMA에 결합하지 않았다는 것을 알 수 있다.
도 8은 마우스, 키메라 및 인간화 B1H2 항체가 대조군 항체보다 BCMA-BAFF 상호 작용에 더 높은 차단 능력을 나타냈다는 것을 보여주었다.
또한, 도 10a 및 도 10b에 도시된 바와 같이, 키메라 및 인간화 B1H2 항체는 용량 의존적 방식으로 Jurkat-NFAT-CD16a 세포에 의한 U266 세포의 사멸을 유도하였다. 구체적으로, 키메라 및 인간화 B1H2 항체는 BCMA BM1보다 낮은 용량에서 더 높은 ADCC를 유도하였다.
도 11 및 표 6으로부터, 항-BCMA 항체-DT3C 접합체는 U266 세포에 의해 내부화되고 세포 사멸을 야기한 반면, 재조합 단백질 DT3C 단독 또는 이소형 대조군-DT3C 접합체는 U266 세포로 진입하기 어려웠고 낮은 세포 사멸 활성을 제공하였다는 것을 알 수 있다. BCMA BM1-DT3C 접합체와 비교하여, huB1H2-V10-DT3C 접합체 및 huB1H2-V33-DT3C 접합체는 더 낮은 IC50 및 더 높은 최대 세포 생존력 억제를 포함하여 더 높은 표적 세포 사멸 활성을 나타냈다.
[표 6]
항체-DT3C 접합체의 세포 사멸 활성
Figure pct00006
도 12a 및 도 12b는 항-BCMA 인간화 항체 huB1H2-V10 및 huB1H2-V33이 개연성 있게 인체에서 안정했다는 것을 보여주었다.
본 개시는 하나 이상의 구현예와 연관되어 상술되었지만, 본 개시는 이들 구현예로 제한되지 않고, 본 설명은 첨부된 청구항의 사상 및 범위 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형, 및 등가물을 포괄하는 것으로 하고자 함이 이해되어야 한다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은 추가로 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본 출원의 서열은 하기에서 요약된다.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
SEQUENCE LISTING <110> Biosion Inc. <120> ANTIBODIES BINDING BCMA AND USES THEREOF <130> 55532 00026 <150> US62/956,642 <151> 2020-01-03 <160> 25 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 1 Asn Tyr Val Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 2 Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 3 Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR1 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 4 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe Leu Asn 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR2 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 5 Ser Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR3 for mouse, chimeric and humanized B1H2 <400> 6 Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for mouse and chimeric B1H2 <400> 7 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Met Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Val Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for huB1H2-V1, huB1H2-V7, huB1H2-V13, and huB1H2-V19 <400> 8 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 9 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for huB1H2-V2 to huB1H2-V6, huB1H2-V8 to huB1H2-V12, huB1H2-V14 to huB1H2-V18, huB1H2-V20 to huB1H2-V24, and huB1H2-V33 <220> <221> misc_feature <222> (37)..(37) <223> Xaa can be Val or Met <220> <221> misc_feature <222> (72)..(72) <223> Xaa can be Arg or Ser <220> <221> misc_feature <222> (74)..(74) <223> Xaa can be Thr or Lys <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Xaa Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa Asp Xaa Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL for mouse and chimeric B1H2 <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL for huB1H2-V1 to huB1H2-V24 and huB1H2-V33 <220> <221> misc_feature <222> (43)..(43) <223> Xaa can be Thr or Ala <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> Xaa can be Val or Pro <220> <221> misc_feature <222> (71)..(71) <223> Xaa can be Tyr or Phe <220> <221> misc_feature <222> (73)..(73) <223> Xaa can be Phe or Leu <400> 11 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Xaa Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Xaa Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 12 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 12 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 13 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 13 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 14 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of BCMA BM1 <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Glu Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of BCMA BM1 <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys 115 120 125 Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe 130 135 140 Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys 145 150 155 160 Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu 165 170 175 Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg 180 <210> 17 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for mouse B1H2 <400> 17 gaggtccagt tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattaact aactatgtta tgcactggat gaaacagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggattt attattcctt tcaatgatgg tactaaatac 180 aatgagcact tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccaa cacagcctac 240 atggttctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggtatgat 300 ttcgagggtt acttcgatgt ctggggcgca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 18 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for huB1H2-V4, huB1H2-V10, huB1H2-V16, huB1H2-V22, and huB1H2-V33 <400> 18 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ctggcgcctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta cacactgaca aattacgtga tgcactgggt gagacaggcc 120 cctggccagg gcctggagtg gatcggattc atcatcccct tcaacgatgg caccaagtac 180 aatgagcact tcaagggcag agtgaccatc accagcgata cctccatctc caccgcctac 240 atgcagctgt ccagcctgag gtccgaggat accgccgtgt actactgcgc caggtacgac 300 ttcgagggct acttcgacgt gtggggccag ggcaccctgg tgaccgtgtc cagc 354 <210> 19 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL for mouse B1H2 <400> 19 gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gtgcaagtca ggacattacc aattttttaa actggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctattcc acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat tattctctca ccatcagcaa cctggaacct 240 gaagatattg ccacttacta ttgtcagcag tatagtaacc ttccgtggac gttcggtggc 300 ggcaccaacc tggaaatcaa a 321 <210> 20 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL for huB1H2-V33 <400> 20 gacatccaga tgacacagag cccctccagc ctgagcgcca gcgtgggaga tagggtgacc 60 atcacctgta gcgcctccca ggatatcacc aacttcctga attggtatca acagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctactcc acctccagac tgcacagcgg cgtgccttcc 180 aggttcagcg gctccggctc cggcacagac ttcaccttca ccatctccag cctgcagcct 240 gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaatc tgccctggac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggagatcaa g 321 <210> 21 <211> 993 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 21 gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 993 <210> 22 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain constant region for chimeric and humanized antibodies <400> 22 cgtacggtgg cggcgccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg ttga 324 <210> 23 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Recombinant protein DT3C <400> 23 Met Gly Ala Asp Asp Val Val Asp Ser Ser Lys Ser Phe Val Met Glu 1 5 10 15 Asn Phe Ser Ser Tyr His Gly Thr Lys Pro Gly Tyr Val Asp Ser Ile 20 25 30 Gln Lys Gly Ile Gln Lys Pro Lys Ser Gly Thr Gln Gly Asn Tyr Asp 35 40 45 Asp Asp Trp Lys Gly Phe Tyr Ser Thr Asp Asn Lys Tyr Asp Ala Ala 50 55 60 Gly Tyr Ser Val Asp Asn Glu Asn Pro Leu Ser Gly Lys Ala Gly Gly 65 70 75 80 Val Val Lys Val Thr Tyr Pro Gly Leu Thr Lys Val Leu Ala Leu Lys 85 90 95 Val Asp Asn Ala Glu Thr Ile Lys Lys Glu Leu Gly Leu Ser Leu Thr 100 105 110 Glu Pro Leu Met Glu Gln Val Gly Thr Glu Glu Phe Ile Lys Arg Phe 115 120 125 Gly Asp Gly Ala Ser Arg Val Val Leu Ser Leu Pro Phe Ala Glu Gly 130 135 140 Ser Ser Ser Val Glu Tyr Ile Asn Asn Trp Glu Gln Ala Lys Ala Leu 145 150 155 160 Ser Val Glu Leu Glu Ile Asn Phe Glu Thr Arg Gly Lys Arg Gly Gln 165 170 175 Asp Ala Met Tyr Glu Tyr Met Ala Gln Ala Cys Ala Gly Asn Arg Val 180 185 190 Arg Arg Ser Val Gly Ser Ser Leu Ser Cys Ile Asn Leu Asp Trp Asp 195 200 205 Val Ile Arg Asp Lys Thr Lys Thr Lys Ile Glu Ser Leu Lys Glu His 210 215 220 Gly Pro Ile Lys Asn Lys Met Ser Glu Ser Pro Asn Lys Thr Val Ser 225 230 235 240 Glu Glu Lys Ala Lys Gln Tyr Leu Glu Glu Phe His Gln Thr Ala Leu 245 250 255 Glu His Pro Glu Leu Ser Glu Leu Lys Thr Val Thr Gly Thr Asn Pro 260 265 270 Val Phe Ala Gly Ala Asn Tyr Ala Ala Trp Ala Val Asn Val Ala Gln 275 280 285 Val Ile Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Thr Ala Ala 290 295 300 Leu Ser Ile Leu Pro Gly Ile Gly Ser Val Met Gly Ile Ala Asp Gly 305 310 315 320 Ala Val His His Asn Thr Glu Glu Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu 325 330 335 Ser Ser Leu Met Val Ala Gln Ala Ile Pro Leu Val Gly Glu Leu Val 340 345 350 Asp Ile Gly Phe Ala Ala Tyr Asn Phe Val Glu Ser Ile Ile Asn Leu 355 360 365 Phe Gln Val Val His Asn Ser Tyr Asn Arg Pro Ala Tyr Ser Pro Gly 370 375 380 His Lys His Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Lys Thr Asp Thr 385 390 395 400 Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr 405 410 415 Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala 420 425 430 Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys 435 440 445 Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile Asp Ala Ser Glu Leu 450 455 460 Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu 465 470 475 480 Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys 485 490 495 Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr 500 505 510 Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val 515 520 525 Ile Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val 530 535 540 Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp 545 550 555 560 Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly 565 570 575 Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val 580 585 590 Thr Glu <210> 24 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH for chimeric B1H2 <400> 24 gaggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtgaagc ccggcgcttc cgtgaagatg 60 agctgcaagg ccagcggcta cacactgaca aattacgtga tgcactggat gaagcagaag 120 cccggccagg gcctggagtg gatcggcttc atcatccctt ttaacgacgg caccaagtac 180 aacgagcact ttaagggcaa ggccacactg acatccgaca agagcagcaa taccgcctac 240 atggtgctgt ccagcctgac cagcgaggac tccgccgtgt actactgtgc caggtacgat 300 tttgagggct acttcgacgt gtggggcgcc ggcaccacag tgaccgtgag cagc 354 <210> 25 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL for chimeric B1H2 <400> 25 gacatccaga tgacccagac aacaagcagc ctgagcgcct ccctgggcga cagggtgaca 60 atctcctgca gcgccagcca ggacatcaca aacttcctga actggtatca acagaagccc 120 gacggcacag tgaagctgct gatctactcc acatccagac tgcactccgg cgtgccctcc 180 aggttctccg gctccggatc cggcacagat tactccctga ccatcagcaa cctggagcct 240 gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaatc tgccttggac ctttggcggc 300 ggcaccaatc tggagatcaa g 321

Claims (14)

  1. B 세포 성숙화 항원(B cell maturation antigen; BCMA)에 결합하는 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분으로서,
    i) VH CDR1 영역, VH CDR2 영역 및 VH CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역으로서, VH CDR1 영역, VH CDR2 영역 및 VH CDR3 영역은 각각 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 및 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하는, 중쇄 가변 영역, 및/또는
    ii) VL CDR1 영역, VL CDR2 영역 및 VL CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역으로서, VL CDR1 영역, VL CDR2 영역 및 VL CDR3 영역은 각각 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는, 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, 또는 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  3. 제1항에 있어서, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 SEQ ID NO: 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F; X1=A, X2=P, X3=F, X4=L; X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L; X1=A, X2=V, X3=F, X4=L; 또는 X1=A, X2=P, X3=F, X4=F)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  4. 제2항에 있어서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 (1) 각각 SEQ ID NO: 7 및 SEQ ID NO: 10; (2) 각각 SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F; X1=A, X2=P, X3=F, X4=L; X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L; 또는 X1=A, X2=V, X3=F, X4=L); (3) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 SEQ ID NO: 11(X1=T, X2=V, X3=Y, X4=F); (4) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 SEQ ID NO: 11(X1=A, X2=P, X3=F, X4=L); (5) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 SEQ ID NO: 11(X1=A, X2=P, X3=Y, X4=L); (6) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=R, X3=T; X1=M, X2=R, X3=T; X1=V, X2=S, X3=T; X1=V, X2=R, X3=K; 또는 X1=V, X2=S, X3=K) 및 SEQ ID NO: 11(X1=A, X2=V, X3=F, X4=L); 또는 (7) 각각 SEQ ID NO: 9(X1=V, X2=S, X3=T) 및 SEQ ID NO: 11(X1=A, X2=P, X3=F, X4=F)의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  5. 제4항에 있어서, 중쇄 가변 영역에 연결된 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 불변 영역, 및 경쇄 가변 영역에 연결된 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  6. 제1항에 있어서, (a) 인간 BCMA에 결합하고; (b) 인간 BCMA-인간 BAFF 결합을 차단하고; (c) BCMA 발현 세포에 대한 항체 의존적 세포 매개 세포독성을 유도하는, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  7. 제1항에 있어서, 마우스, 인간, 키메라 또는 인간화 항체인, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  8. 제1항에 있어서, IgG1, IgG2 또는 IgG4 이소형인, 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분.
  9. 제1항의 단리된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는, 면역접합체.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 단리된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는, 핵산 분자.
  11. 제10항의 핵산 분자를 포함하는, 발현 벡터.
  12. i) 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 단리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, 제9항의 면역접합체, 제10항의 핵산 분자, 및/또는 제11항의 발현 벡터, 및
    ii) 약학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는, 약학적 조성물.
  13. 대상체에서 증가된 BCMA 발현과 관련된 종양을 치료하기 위한 방법으로서, 치료적 유효량의 제12항의 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 종양은 백혈병, 림프종 또는 다발성 골수종인, 방법.
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