CN114981309B - 结合bcma的抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种与人BCMA特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分。本申请还提供包含该抗体或其抗原结合部分的免疫偶联物、双特异性分子、嵌合抗原受体、或溶瘤病毒，以及编码该抗体或其抗原结合部分的核酸分子。

Description

结合BCMA的抗体及其用途
相关申请和引用并入
本申请要求2020年1月3日提交的美国临时专利申请US 62/956,642的优先权。
上述申请、在上述申请中引用或在其审查过程中引用的全部文件(“申请引用文件”)，在本申请中引用或提及的所有文件(包括但不限于本文引用的所有文献、专利、公开的专利申请)(“本申请引用文件”)，在本申请引用文件中引用或提及的所有文件，以及本申请或任意本申请引用文件中提及的任何产品的制造商手册、说明书、产品规格和产品页，均通过引用的方式并入本申请，且可能在实施本发明时采用。更具体而言，所有参考文件均通过引用的方式并入本申请，如同各文件具体且个别地通过引用的方式并入。在本申请中提及的任何Genbank序列通过引用的方式并入本申请，这些Genbank序列为本申请最早有效递交日的序列。
技术领域
本申请大体上涉及分离的单克隆抗体，特别是小鼠源、嵌合或人源化的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其以高亲和力和功能特异性与人BCMA结合。还提供编码该抗体或其抗原结合部分的核酸分子、表达载体、宿主细胞以及表达该抗体或其抗原结合部分的方法。本申请还提供包含该抗体或其抗原结合部分的免疫偶联物、双特异性分子、嵌合抗原受体和溶瘤病毒，以及使用本申请抗体或其抗原结合部位的诊断或治疗方法。
背景技术
B细胞成熟抗原(BCMA)，又称肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRS17)，是一种具有富含半胱氨酸的胞外结构域的跨膜蛋白(Madry C et al.，(1998)Int Immunol.10(11)：1693-702；Laabi Y et al.，(1994)Nucleic Acids Res 22(7)：1147-54；Laabi Y etal.，(1992)EMBO J 11(11)：3897-904)。BCMA，与TNFR超家族成员BAFF-R和TACI一起，调节体液免疫、B细胞发育和内稳态，尤其是B细胞增殖、生存、成熟和分化成浆细胞(PC)(MackayF et al.，(2003)Annu Rev Immunol 21：231-64；Marsters SA et al.，(2000)Curr Biol 10(13)：785-8；Gross JA et al.，(2000)，Nature 404(6781)：995-9；ThompsonJS et al.，(2000)J Exp Med 192(1)：129-35)。BCMA对于长寿浆细胞的存活也十分重要。
BCMA只表达在浆母细胞和分化的浆细胞表面，相比于正常PC，在恶性PC上表达量更高(Carpenter RO et al.，(2013)Clin Cancer Res 19(8)：2048-60；O’Connor BP etal.，(2004)J Exp Med 199(1)：91-8；Benson MJ et al.，(2008)J Immunol 180(6)：3655-9；Yang M et al.，(2005)J Immunol 175(5)：2814-24；Avery DT et al.，(2003)J ClinInvest 112(2)：286-97；Novak AJ et al.，(2004)Blood 103(2)：689-94；Chiu A et al.，(2007)Blood 109(2)：729-39；Lee L et al.，(2018)Blood 131(7)：746-58；Carpenter ROet al.，(2013)supra； Tai YT et al.，(2014)Blood 123(20)：3128-38；Claudio JO etal.，(2002)Blood 100(6)：2175-86；Seckinger A et al.，(2017)Cancer Cell 31(3)：396-410)，且报道称，与白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤有关。例如，在患有慢性淋巴细胞白血病的患者中，观察到升高的血浆BCMA水平，且与临床状态相关(Kyle A Udd et al.，(2015)Blood.126(23)：2931)。另外还发现，BCMA也在多发性骨髓瘤细胞上高表达，在这些细胞中的BCMA过表达或者APRIL与BCMA的结合明显地促进了体内细胞的生长和存活(TaiYT et al.，(2016)Blood 127(25)：3225-36；Matthes T et al.，(2011)Blood 118(7)：1838-44)。此外，APRIL和BAFF，经与BCMA和TACI的结合，进一步激活NFκB通路并上调抗凋亡蛋白(Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xL)，以保护多发性骨髓瘤细胞免受地塞米松-和血清剥夺-诱导的细胞死亡(Moreaux J et al.，(2004)Blood 103(8)：3148-57；Neri P et al.，(2007)ClinCancer Res 13(19)：5903-9；Shen X et al.，(2016)Cell Biochem Funct 34(2)：104-10)。
作为第二流行的造血系统恶性肿瘤，多发性骨髓瘤是克隆B细胞恶性肿瘤，在扩散到血液循环之前，发生在骨髓内的多个部位，或为原发性的，或由意义未明单克隆丙种球蛋白病(MGUS)发展而来。其特征通常为，病变蛋白和破骨细胞活性增加，以及高钙血症、血细胞减少、肾功能不全、高粘度和周围神经病变。也常见到正常抗体水平和中性粒细胞数量的降低，造成危及生命的感染易感性。靶向CD38和SLAMF7的两种单克隆抗体于2015年底批准用于复发性难治多发性骨髓瘤的治疗，但是由于这两个抗原在正常组织中的广泛表达，限制了它们的长期临床应用。相对地，由于BCMA受限的表达形式以及独特的跨膜结构，其成为潜在的治疗靶点。第一个治疗用的BCMA抗体-药物偶联药(ADC)，GSK2857916，快速地消除了两个小鼠模型中多发性骨髓瘤细胞，且明显延长小鼠的生存期(Tai YT et al.，(2014)同上)。另一个BCMA ADC，HDP-101，在皮摩尔级显示出了对于多发性骨髓瘤细胞的体外细胞毒性，造成显著的肿瘤消退且具有良好的耐受性。多种BCMA CAR-T细胞疗法也显示出令人印象深刻的临床结果(Shih-Feng Cho et al.，(2018)Frontiers in Immunology 9：1821)。
正持续努力地去找寻更多的更有效和安全的BCMA结合部位，包括抗体。
对于本申请中任何文件的引用或确认，并是承认这些文件是本申请的现有技术。
发明内容
本申请提供了一种分离的单克隆抗体，例如小鼠源、人源、嵌合的或人源化的单克隆抗体，或其抗原结合部分，其结合BCMA(例如，人BCMA)，其与现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位相比，具有相当的，若不是更高的话，BCMA结合亲和力以及对BCMA-BAFF结合的阻断活性。与现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位相比，本申请的BCMA抗体还在某些浓度，例如低浓度，诱导产生更高的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
本申请的抗体或其抗原结合部分可以用于许多应用，包括BCMA蛋白的检测以及BCMA相关疾病的治疗和预防，例如肿瘤和感染性疾病。
因此，在一个方面，本申请涉及一种结合BCMA的分离的单克隆抗体(例如小鼠源、嵌合的或人源化的抗体)，或其抗原结合部分，其具有i)重链可变区，其可以包含VH CDR1区、VH CDR2区和VH CDR3区，其中该VH CDR1区、VH CDR2区和VH CDR3区可以分别包含与SEQID NOs：1、2和3具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或ii)轻链可变区，其可以包含VLCDR1区、VL CDR2区和VL CDR3区，其中该VL CDR1区、VL CDR2区和VL CDR3区可以分别包含与SEQ ID NOs：4、5和6具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
重链可变区可以包含与SEQ ID NOs：7、8或9(X1＝V、X2＝R、X3＝T；X1＝M、X2＝R、X3＝T；X1＝V、X2＝S、X3＝T；X1＝V、X2＝R、X3＝K；或X1＝V、X2＝S、X3＝K)具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。SEQ ID NO：7的氨基酸序列可以由SEQ ID NOs：17或24的核苷酸序列编码。SEQ ID NO：9(X1＝V、X2＝S、X3＝T)的氨基酸序列可以由SEQ ID NO：18的核苷酸序列编码。
轻链可变区可以包含与SEQ ID NOs：10或11(X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F；X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L；X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L；X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L；或X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝F)具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。SEQ ID NO：10的氨基酸序列可由SEQ ID NO：19或25的核苷酸序列编码。SEQ ID NO：11(X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝F)的氨基酸序列可由SEQ ID NO：20的核苷酸序列编码。
本申请分离的单克隆抗体或其抗原结合部分可以包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区和轻链可变区可以分别包含(1)SEQ ID NOs：7和10；(2)SEQ ID NOs：8和11(X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F；X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L；X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L；或X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L)；(3)SEQ ID NOs：9(X1＝V、X2＝R、X3＝T；X1＝M、X2＝R、X3＝T；X1＝V、X2＝S、X3＝T；X1＝V、X2＝R、X3＝K；或X1＝V、X2＝S、X3＝K)和11(X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F)；(4)SEQ ID NOs：9(X1＝V、X2＝R、X3＝T；X1＝M、X2＝R、X3＝T；X1＝V、X2＝S、X3＝T；X1＝V、X2＝R、X3＝K；或X1＝V、X2＝S、X3＝K)和11(X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L)；(5)SEQ IDNOs：9(X1＝V、X2＝R、X3＝T；X1＝M、X2＝R、X3＝T；X1＝V、X2＝S、X3＝T；X1＝V、X2＝R、X3＝K；或X1＝V、X2＝S、X3＝K)和11(X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L)；(6)SEQ ID NOs：9(X1＝V、X2＝R、X3＝T；X1＝M、X2＝R、X3＝T；X1＝V、X2＝S、X3＝T；X1＝V、X2＝R、X3＝K；或X1＝V、X2＝S、X3＝K)和11(X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L)；(7)SEQ ID NOs：9(X1＝V、X2＝S、X3＝T)和11(X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝F)所示的氨基酸序列。
本申请分离的单克隆抗体或其抗原结合部分可以包含重链和轻链，重链包含重链可变区和重链恒定区，轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中重链可变区的C端与重链恒定区的N端相连，轻链可变区的C端与轻链恒定区的N端相连，其中重链可变区和轻链可变区包含上述氨基酸序列。重链恒定区可以是具有例如SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的人IgG1恒定区或其功能性片段，轻链恒定区可以是具有例如SEQ ID NO：13所示氨基酸序列的人κ恒定区或其功能性片段。SEQ ID NOs：12和13的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NO：21和22的核苷酸序列编码。
在一些实施方式中，本申请的抗体可以包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链组成，其中各重链包含上述重链恒定区、重链可变区或CDR序列，各轻链包含上述轻链恒定区、轻链可变区或CDR序列。本申请的抗体可以是全长抗体，例如IgG1、IgG2或IgG4同种型。在其他实施方式中，本申请的抗体可以是单链可变片段(scFv)抗体或抗体片段，例如Fab或Fab′2片段。
本申请抗体或其抗原结合部分，比起现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位，具有相当的，若不是更高的话，人BCMA的结合亲和力/能力以及BCMA-BAFF阻断活性。比起现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位，本申请抗体或其抗原结合部分还在某些浓度，例如低浓度下，诱导产生更高的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用。
本申请还提供免疫偶联物，例如抗体-药物偶联物，包含本申请的抗体或其抗原结合部分，与治疗剂例如细胞毒素连接，例如，重组蛋白DT3C，其包含缺少受体结合域的白喉毒素(DT)和链球菌蛋白G的C1、C2和C3结构域(3C)。当与例如DT3C的细胞毒素连接时，相比于现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位，本申请的抗体或其抗原结合部分更快地被细胞内化。本申请还提供一种双特异性分子，其包含本申请的抗体或其抗原结合部分，与具有不同于本抗体或其抗原结合部分结合特异性的第二功能基团(例如，第二抗体)连接。在另一方面，本申请的抗体或其抗原结合部分可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。还可提供包含该抗原嵌合受体的免疫细胞，例如T细胞。本申请的抗体或其抗原结合部分也可以由溶瘤病毒编码或与溶瘤病毒一起使用。
本申请还涉及编码本申请抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子或CAR的核酸分子，以及包含该核酸分子的表达载体和包含该表达载体的宿主细胞。本申请还提供利用宿主细胞制备本申请抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子或CAR的方法，包括以下步骤：(i)在宿主细胞中表达抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子或CAR，以及(ii)从宿主细胞或其细胞培养物中分离抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子或CAR。
还提供药物组合物，其包含本申请的抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子、CAR、免疫细胞、溶瘤病毒、核酸分子、表达载体或宿主细胞，以及药学上可接受的载体。
在另一个方面，本申请提供一种治疗与BCMA表达增加相关的肿瘤的方法，包括对受试者施用治疗有效量的本申请药物组合物。肿瘤可以是白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在一些实施方式中，本申请药物组合物可以与至少一种其他的抗癌抗体一起施用，例如VISTA抗体、PD-1抗体、PD-L1抗体、LAG-3抗体、CTLA-4抗体、TIM-3抗体、STAT3抗体、和/或ROR1抗体。在另一实施方式中，还对受试者施用细胞因子(例如IL-2、IL-21、GM-CSF、和/或IL-4)、或共刺激抗体(例如，CD137抗体和/或GITR抗体)。本申请的抗体或其抗原结合部分可以是例如小鼠源、人源、嵌合的或人源化的。
基于以下具体描述和实施例，当前公开内容的其他特征和优势之处将会更加明晰，具体描述和实施例不应解读为限制性的。在本申请中引用的所有文献、Genbank记录、专利和已公开专利申请的内容通过引用的方式明确地包含在本文中。
另外，本申请的目标是不在本申请中包含任何先前已知的产品、制造该产品的工艺或使用该产品的方法，从而申请人保留权利，并在此公开对任何先前已知的产品、过程或方法的弃权声明。需要进一步指出的是，本申请并不打算在本申请的范围内包含任何不符合USPTO(35U.S.C.§112，第一段)或EPO(EPC，第83条)书面描述要件和可实施性要求的产品、工艺、或产品制造方法或产品使用方法，从而申请人保留权利，并在此公开对任何先前描述的产品、产品制备工艺、或产品使用方法的弃权声明。在本发明的实施中，符合EPC第53条(c)和细则第28条(b)和(c)是有利的。明确保留对本申请同族或任何其他同族或任何第三方在先申请中涉及本申请人任何已授权专利的主题的任何实施方式做出明确的弃权声明的所有权利。本文中的任何内容都不应被解释为承诺。
应当注意的是，在本申请中，特别是在权利要求和/或段落中，术语例如“包含”、“包括”等可以具有美国专利法所赋予的意义；例如它们可以表示“包含在内”等；而术语例如“基本由...组成”或“基本由...构成”具有美国专利法所赋予的意义，例如允许没有明确表述的元素的存在，但将现有技术中存在的元素、或影响本发明基本或新特性的元素排除在外。
附图说明
以下以示例方式给出详细的描述，但不意在将本申请限制于所述具体实施方式中，可以结合附图更好地进行理解。
图1示出在捕获ELISA中小鼠源抗体B1H2与人BCMA的结合能力。
图2示出在基于细胞的结合FACS检测中小鼠源抗体B1H2对表达人BCMA的U266细胞的结合能力。
图3示出在竞争ELISA中小鼠源抗体B1H2对人BCMA-BAFF结合的阻断能力。
图4示出在竞争ELISA试验中小鼠源抗体B1H2对对照基准物-人BCMA结合的阻断力。
图5示出在捕获ELISA中嵌合的和人源化的B1H2抗体与人BCMA的结合能力。
图6示出在间接ELISA中嵌合的和人源化的B1H2抗体与猴BCMA的结合能力。
图7示出在基于细胞的结合FACS检测中嵌合的和人源化的B1H2抗体与表达人BCMA的293F细胞的结合能力。
图8示出在竞争ELISA中嵌合的和人源化的B1H2抗体对人BCMA-BAFF结合的阻断力。
图9示出在竞争ELISA试验中嵌合的和人源化的B1H2抗体对对照基准物-人BCMA结合的阻断力。
图10A和10B示出嵌合的和人源化的抗体huB1H2-V10(A)和huB1H2-V33(B)在体外针对U266细胞诱导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性的能力。
图11示出人源化抗体-DT3C偶联物对U266细胞的由内化介导的细胞毒性。
图12A和12B示出人源化抗体huB1H2-V10(A)和huB1H2-V33(B)的蛋白热迁移检测结果。
具体实施方式
为确保更好地理解本申请，首次定义一些术语。贯穿详细描述，阐明其他定义。
术语“BCMA”是指B细胞成熟抗原、或者肿瘤坏死因子受体超家族成员17。术语“BCMA”包括变体、同种型、同系物、直系同源物和旁系同源物。例如，对人BCMA蛋白特异的抗体可以在某种情况下与来自人以外物种(例如猴)的BCMA蛋白交叉反应。在其他实施方式中，对人BCMA蛋白特异的抗体可以完全对人BCMA蛋白特异，而对其他物种或其他类型不表现出交叉反应性，或者可以与来自某些其他物种但不是所有其他物种的BCMA交叉反应。
术语“人BCMA”是指具有人氨基酸序列的BCMA蛋白，例如具有Genbank登录号为NP_001183.2的人BCMA的氨基酸序列。术语“猴BCMA”和“小鼠BCMA”分别是指猴和小鼠BCMA序列，例如Genbank登录号分别为Nos.XP_001106892.1和NP_035738.1的氨基酸序列的那些。
本文所用的术语“抗体”包括完整的抗体及其任意抗原结合片段(即，抗原结合部分)或其单链。全抗体是包含经二硫键而内部连接的两条重链(H)和两条轻链(L)的糖蛋白。各重链由重链可变区(缩写成VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由CH1、CH2和CH3这三个结构域组成。各轻链由轻链可变区(缩写成VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由CL这一个结构域组成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，又称互补决定区(CDR)，其间穿插着更加保守的称为骨架区(FR)的区域。各VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排布。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括多种免疫系统细胞(例如，效应细胞)和传统补体系统的第一组分(C1q)，的结合。
本文所用中的术语，抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)，是指抗体上保留有特异性结合抗原(例如BCMA蛋白)能力的一个或多个片段。已显示出，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。包含在术语抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的例子包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域构成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含由铰链区二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域构成的Fd片段；(iv)由抗体单臂VL和VH结构域构成的Fv片段；(v)由VH结构域构成的dAb片段(Ward et al.，(1989)Nature 341：544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(viii)纳米抗体，包含单个可变结构域的重链可变区和两个恒定结构域。此外，尽管Fv片段的两个结构域，VL和VH，由不同的基因编码，它们可以通过重组的方法经合成接头而连接，其中合成的接头使得它们可以制备为单个蛋白链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird et al.，(1988)Science 242：423-426；和Huston et al.，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。这样的单链抗体也意在包括在术语抗体的“抗原结合部分”中。这些抗体片段通过本领域技术人员已知的常用技术而得到，且片段经与完整抗体相同的方式进行应用筛选。
本文所用的“分离的抗体”是指基本不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，分离出的与BCMA蛋白特异性结合的抗体，基本不含特异结合BCMA之外蛋白的抗体)。然而，分离出的与人BCMA蛋白特异性结合的抗体可以与其他抗原，例如其他物种的BCMA蛋白，有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本不含其他细胞材料和/或化学物质。
本文所用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组成的抗体分子的制品。单克隆抗体组成表现出对于特定表位的单结合特异性和亲和力。
本文所用的术语“小鼠源抗体”意在包括骨架和CDR区得自小鼠种系免疫球蛋白序列的可变区的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，恒定区也得自小鼠种系免疫球蛋白序列。本申请的小鼠源抗体可以包含不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变而引入的突变)。然而，本文所用的术语“小鼠源抗体”不意在包括在小鼠骨架序列中植入得自另一哺乳动物物种种系的CDR序列的抗体。
术语“嵌合抗体”是指通过组合非人源遗传物质与人源遗传物质而制备的抗体。或者更笼统地说，嵌合抗体是含有某一物种的遗传物质以及另一物种遗传物质的抗体。
本文所用的术语“人源化抗体”是指来源于非人物种但其蛋白序列已经修改成以增加与人中天然生成的抗体变体的相似度的抗体。
术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(如IgM或IgG1)。
词组“识别抗原的抗体”和“对抗原特异的抗体”在本文中与术语“特异结合抗原的抗体”交替使用。
如本文所用的，“特异结合人BCMA”的抗体是指与人BCMA蛋白(以及可能的来自一种或多种非人物种的BCMA蛋白)结合但基本不与非BCMA蛋白结合的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”，即以KD值为5.0x10-8M以下、更优选1.0x10-8M以下、更优选7.0x10-9M以下，结合人BCMA蛋白。
如本文所用的，术语“基本不结合”蛋白或细胞是指，不与蛋白或细胞结合，或者不以高亲和力与其结合，即，以KD为1x10-6M以上、更优选1x10-5M以上、更优选1x10-4M以上、更优选1x10-3M以上、更优选1x10-2M以上，结合蛋白或细胞。
术语“高亲和性”对于IgG抗体而言，是指抗体对于靶抗原的KD为1.0x10-6M以下、更优选5.0x10-8M以下、更优选1.0x10-8M以下、更优选7.0x10-9M以下、更优选1.0x10-9M以下。然而，对于其他抗体同种型而言，“高亲和性”结合可以会变化。例如，对于IgM同种型的“高亲和性”结合是指抗体的KD为10-6M以下、更优选10-7M以下、甚至更优选10-8M以下。
本文所用术语“Kassoc”或“Ka”是指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而本文所用的术语“Kdis”或“Kd”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用，术语“KD”是指从Kd与Ka的比(即Kd/Ka)获得的解离常数，表达为摩尔浓度(M)。可以使用本领域公知的方法确定抗体的KD值。用于确定抗体KD的优选方法是使用表面等离子体共振，优选使用生物传感器系统如BiacoreTM系统。
本文所用的术语“抗体依赖性细胞毒性”、“抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用”或“ADCC”是指细胞介导的免疫防御机制，其中免疫系统的效应细胞主动地裂解膜表面抗原已经被抗体例如BCMA抗体结合的靶细胞例如肿瘤细胞。
术语“EC50”，也称为半最大效应浓度，是指在特定暴露时间后引起在基线和最高值之间的中间值反应的抗体浓度。
术语“IC50”，也称为半最大抑制浓度，是指相对于不存在抗体而言，抑制50％特定生物学或生化功能的抗体浓度。
术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳类和非哺乳类，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛、马、鸡、两栖类、和爬行类，尽管优选哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛和马。
术语“治疗有效量”是指足以防止或减缓与疾病或病症(例如癌症)相关的症状和/或减轻疾病或病症的严重程度的本申请抗体的用量。治疗有效量在所治疗疾病的背景下进行理解，其中本领域技术人员可以方便地判别出实际有效量。
本申请的多个方面在以下小节中作进一步详细描述。
BCMA抗体具有更高的人BCMA结合亲和力以及更好的对BCMA-BAFF结合的阻断活性
本申请的抗体或其抗原结合部分与人BCMA特异性结合，结合亲和力/能力与之前的BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位相比相当，若不是更好的话。与现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位相比，本申请的抗体或其抗原结合部分还在某些浓度，例如低浓度下，诱导产生更高的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)。当与细胞毒素例如DT3C偶联时，本申请的抗体或其抗原结合部分，与现有技术BCMA抗体例如GSK2857916的BCMA结合部位相比，更快地被细胞内化，显示出更高的靶细胞杀伤活性。
其他功能特性包括阻断BCMA-BAFF结合的能力。
本申请优选的抗体是人源化单克隆抗体。另外或可选地，抗体可以是例如嵌合的单克隆抗体。
单克隆BCMA抗体
本申请的示例性抗体或其抗原结合部分在以下进行结构和化学表征。抗体的重/轻链可变区和CDR的氨基酸序列ID编号总结于以下表1，一些抗体共享相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是具有例如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的人IgG1重链恒定区，或其功能片段，抗体的轻链恒定区可以是具有例如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列的人κ恒定区，或其功能片段。这些抗体也可以包含小鼠IgG1重链恒定区，和小鼠κ恒定区。
表1中的重链可变区CDR和轻链可变区CDR经Kabat编号体系确定。然而，如本领域所公知的，CDR区也可以基于重链/轻链可变区序列经其他体系例如Chothia、IMGT、AbM和Contact编号体系/方法确定。
结合人BCMA的其他BCMA抗体的VH和VL序列(或CDR序列)可以与本公开的BCMA抗体的VH和VL序列“混合和匹配”。优选地，当VH和VL链(或这些链中的CDR)混合并匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列被结构上相似的VH序列代替。同样地，优选来自特定VH/VL配对的VL序列经结构类似的VL序列替换。
因此，在一个实施方式中，本申请的抗体或其抗原结合部分包括：
(a)包含表1中所列氨基酸序列的重链可变区；和
(b)包含表1中所列氨基酸序列的轻链可变区、或另一BCMA抗体的VL，其中该抗体特异性结合人BCMA。
在另一实施方式中，本申请的抗体或其抗原结合部分包括：
(a)列于表1中的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3；以及
(b)列于表1中的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3，或者另一BCMA抗体的CDR，其中该抗体特异结合人BCMA。
在另一实施方式中，抗体或其抗原结合部分包括BCMA抗体的重链可变CDR2区，结合有其他结合人BCMA抗体的CDR区，例如，不同BCMA抗体的重链可变区CDR1和/或CDR3、和/或轻链可变区CDR1、CDR2和/或CDR3。
另外，如本领域所公知的，CDR3结构域，独立于CDR1和/或CDR2结构域，可以单独决定抗体对同源抗原的结合特异性，且基于相同的CDR3序列，可预见能产生具有相同结合特异性的多个抗体。参见例如Klimka et al.，British J.of Cancer 83(2)：252-260(2000)；Beiboer et al.，J.Mol.Biol.296：833-849(2000)；Rader et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95：8910-8915(1998)；Barbas et al.，J.Am.Chem.Soc.116：2161-2162(1994)；Barbas et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92：2529-2533(1995)；Ditzel et al.，J.Immunol.157：739-749(1996)；Berezov et al.，BIAjournal 8：Scientific Review 8(2001)；Igarashi et al.，J.Biochem(Tokyo)117：452-7(1995)；Bourgeois et al.，J.Virol 72：807-10(1998)；Levi et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：4374-8(1993)；Polymenis and Stoller，J.Immunol.152：5218-5329(1994)以及Xu and Davis，Immunity 13：37-45(2000)。也可参见美国专利6,951,646；6,914,128；6,090,38；6,818,216；6,156,313；6,827,925；5,833,943；5,762,905和5,760,185。这些参考文献中的每一个都通过引用的方式整体并入本文。
因而，在另一个实施方式中，本申请的抗体包含BCMA抗体重链可变区的CDR2，至少BCMA抗体重链和/或轻链可变区的CDR3，或另一BCMA抗体重链和/或轻链可变区的CDR3，其中该抗体能够与人BCMA特异性结合。优选这些抗体(a)竞争结合BCMA；(b)保留功能特性；(c)结合相同表位；和/或(d)具有与本申请BCMA抗体相似的结合亲和力。在另一实施方式中，抗体还可以包含BCMA抗体轻链可变区的CDR2、或另一BCMA抗体轻链可变区的CDR2，其中该抗体能够与人BCMA特异性结合。在另一实施方式中，本申请的抗体可以包含BCMA抗体的重链和/或轻链可变区的CDR1，或另一BCMA抗体的重链和/或轻链可变区的CDR1，其中该抗体能够与人BCMA特异性结合。
保守修改
在另一个实施方式中，本申请的抗体包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链和/或轻链可变区序列，其与本申请的BCMA抗体的可变区相比，区别在于具有一个或多个保守修饰。如本领域所理解的，可以进行一些不消除抗原结合的保守序列修饰。参见例如Brummell etal.，(1993)Biochem 32：1180-8；de Wildt et al.，(1997)Prot.Eng.10：835-41；Komissarov et al.，(1997)J.Biol.Chem.272：26864-26870；Hall et al.，(1992)J.Immunol.149：1605-12；Kelley and O′Connell(1993)Biochem.32：6862-35；Adib-Conquy et al.，(1998)Int.Immunol.10：341-6和Beers et al.，(2000)Clin.Can.Res.6：2835-43。
因而，在一个实施方式中，抗体包含具有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和/或具有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：
(a)重链可变区CDR1序列包含如上表1所列的序列，和/或其保守修改；和/或
(b)重链可变区CDR2序列包含如上表1所列的序列，和/或其保守修改；和/或
(c)重链可变区CDR3序列包含如上表1所列的序列，及其保守修改；和/或
(d)轻链可变区CDR1、和/或CDR2、和/或CDR3序列包含如上表1所列的序列，和/或其保守修改；以及
(e)该抗体特异结合人BCMA。
本申请的抗体具有以下一个或多个上述的功能特点，例如与人BCMA的高结合亲和力、以及诱导针对表达BCMA的细胞的ADCC或CDC的能力。
在多个实施方式中，抗体可以是例如小鼠源、人源、人源化或嵌合抗体。
本文所用的术语“保守的序列修饰”是指不会显著影响或改变含有这类氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸替换、添加和缺失。可以通过领域内已知的标准技术，例如点突变和PCR介导的突变，将修饰引入本申请抗体中。保守氨基酸替换是指将氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基替换。已定义出领域内具有相似侧链的氨基酸残基组。这些组包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，本申请抗体CDR区中的一个或多个氨基酸残基可以用同一侧链组的其他氨基酸残基替换，且改造后的抗体可以使用本文所述的功能检测测试其保留功能(即上述的功能)。
工程化改造和修饰的抗体
本申请的抗体可以用具备本申请BCMA抗体的一个或多个VH/VL序列的抗体为起始原料，工程改造成修饰的抗体。抗体可以通过修饰一个或两个可变区(即，VH和/或VL)内(例如，在一个或多个CDR区和/或一个或多个骨架区)的一个或多个残基来进行基因修饰。此外以及可选地，抗体可以通过修饰恒定区的残基来进行工程改造，以例如改变抗体的效应功能。
在某些实施方式中，CDR植入可以用来工程改造抗体的可变区。抗体主要通过位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶标抗原进行相互作用。出于这个原因，在个体抗体之间，CDR内的氨基酸序列比CDR外的序列更加多样。因为CDR序列负责大部分抗体-抗原相互作用，可以通过构建包含有将来自特定天然抗体的CDR序列植入到具有不同特性的不同抗体的骨架序列中的表达载体，来表达模拟特定天然抗体的特性的重组抗体(参见例如Riechmann et al.，(1998)Nature 332：323-327；Jones et al.，(1986)Nature321：522-525；Queen et al.，(1989)Proc.Natl.Acad。又可参见U.S.A.86：10029-10033；美国专利5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6.180,370)。
因此，本申请的另一实施方式涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区和/或轻链可变区，重链可变区包含具有本申请上述序列的CDR1、CDR2和CDR3序列，轻链可变区包含具有本申请上述序列的CDR1、CDR2和CDR3序列。尽管这些抗体包含本申请单克隆抗体的VH和VL CDR序列，它们可以含有不同的骨架序列。
这些骨架序列可以从包括种系抗体基因序列的公开DNA数据库或公开参考文献中获得。例如，人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库获得(可得自www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)，也可以在Kabat et al.，(1991)，同上；Tomlinson et al.，(1992)J.Mol.Biol.227：776-798；和Cox et al.，(1994)Eur.J.Immunol.24：827-836获得；上述文件各自的内容通过引用的方式明确并入本文。作为另一个例子，用于人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Genbank数据库中得到。例如，下列HCo7 HuMAb小鼠中的重链种系序列可得自所附的Genbank登录号1-69(NG-0010109、NT--024637&BC070333)、3-33(NG--0010109&NT--024637)和3-7(NG--0010109&NT--024637)。作为另一例子，以下来自Hco12 HuMAb小鼠的重链种系序列可得自Genbank登录号1-69(NG-0010109、NT--024637&BC070333)、5-51(NG--0010109&NT--024637)、4-34(NG--0010109&NT--024637)、3-30.3(CAJ556644)&3-23(AJ406678)。
通过使用本领域公知的称为空格BLAST的序列相似性搜索方法(Altschul etal.，(1997)，同上)，将抗体蛋白序列与汇编蛋白序列数据库进行比较。
用于本申请抗体的优选骨架序列，是结构上与本申请抗体所用的骨架序列相似的那些。VHCDR1、CDR2和CDR3序列可以植入到与得到该骨架序列的种系免疫球蛋白基因具有相同序列的骨架区中，或者CDR序列可以植入到与种系序列相比包含一个或多个突变的骨架区中。例如，已发现，在一些情况下，为保持或增强抗体的抗原结合能力，在骨架区中突变残基是有益的(参见例如美国专利5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一类的可变区修饰是将VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，从而改进目标抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)。可以进行点突变或PCR介导的突变来引入突变，且其对于抗体结合或其他目标功能特性的影响可以在本领域所知的体外或体内检测中进行评价。优选地，引入(本领域所知的)保守修饰。突变可以是氨基酸替换、添加或缺失，但优选为替换。此外，通常对CDR区的改变不多于一个、两个、三个、四个或五个残基。
此外，在另一实施方式中，本申请提供分离的BCMA单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，其包含：(a)VH CDR1区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(b)VH CDR2区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(c)VH CDR3区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(d)VL CDR1区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；(e)VL CDR2区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列；和(f)VL CDR3区，其包含本申请的序列，或含有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸替换、缺失或添加的氨基酸序列。
本申请的基因改造抗体包括，例如为提高抗体特性，在VH和/或VL的骨架残基中做出基因修饰的抗体。通常而言，做出这些骨架修饰，以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个骨架残基“回复突变”成相应的种系序列。更加具体而言，经历体细胞突变的抗体可能包含不同于已得到抗体的种系序列的骨架残基。这些残基可以通过比较抗体骨架序列和得到抗体的种系序列而识别出来。
另一类的骨架修饰涉及对骨架区的、或者甚至一个或多个CDR区的一个或多个残基进行突变，以去除T细胞表位，从而减少抗体的潜在免疫原性。该方法也称为“去免疫化”，在美国专利公开20030153043中有更加详细的描述。
此外，或者作为对骨架或CDR区内修饰的另一种选择，本申请的抗体可以基因修饰成包含Fc区内的修饰，通常是为改变抗体的一个或多个功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗体依赖的细胞毒性。此外，可以对本申请的抗体进行化学修饰(例如，可以向抗体附加一个或多个化学基团)，或者修饰成改变其糖基化，同样是为改变抗体的一个或多个功能特性。
在一个实施方式中，CH1铰链区经修饰，改变，例如增加或减少，铰链区半胱氨酸残基的数量。该方法在美国专利5,677,425中作进一步描述。改变CH1铰链区中的半胱氨酸残基的数量，以例如促进轻链和重链的组装或者增加或降低抗体的稳定性。
在另一个实施方式中，抗体的Fc铰链区经突变，以降低抗体的生物半衰期。更加具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc铰链片段的CH2-CH3结构域连接区，从而相较于与天然Fc-铰链结构域的金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)结合，该抗体具有削弱的SpA结合。该方法在美国专利6,165,745中有更详细的描述。
在另一实施方式中，对抗体的糖基化进行修饰。例如，可以制备去糖基化的抗体(即，抗体缺少糖基化)。可以改变糖基化，例如增加抗体对抗原的亲和性。这样的糖化修饰可以通过例如改变抗体序列中的一个或多个糖基化位点来达成。例如，可以进行一个或多个氨基酸替换，以消除一个或多个可变区骨架糖基化位点，从而消除该位置的糖基化。这样的去糖基化可以增加抗体对抗原的亲和性。参见，例如美国专利5,714,350和6,350,861。
另外地或者可选地，可以制备糖基化类型改变的抗体，例如岩藻糖残基量减少的低岩藻糖基抗体或者具有增加的平分型GlcNac结构的抗体。经证实，这些改变的糖基化形式增加抗体的ADCC活性。这样的糖基化修饰可以通过例如在糖基化系统改变的宿主细胞中表达抗体而完成。糖基化系统改变的细胞在领域中已知，且可以用作表达本申请重组抗体的宿主细胞，以制备糖基化改变的抗体。例如，细胞系Ms704、Ms705和Ms709缺乏岩藻糖基转移酶基因FUT8(α(1，6)-岩藻糖基转移酶)，从而在Ms704、Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体在其糖中缺失岩藻糖。使用两种替换载体靶向破坏CHO/DG44细胞的FUT8基因，制备Ms704、Ms705和Ms709FUT8-/-细胞系(参见美国专利公开20040110704和Yamane-Ohnuki etal.，(2004)Biotechnol Bioeng 87：614-22)。作为另一个例子，EP 1,176,195记载了具有功能破坏的FUT8基因(其编码岩藻糖基转移酶)的细胞系，从而通过降低或消除α-1，6键相关酶，在该细胞系中表达的抗体表现出低岩藻糖基化。EP 1,176,195也描述了一种细胞系，其具有较低的向结合抗体Fc区的N-乙酰氨基葡萄糖中添加岩藻糖的活性，或不具有酶活性，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCC CRL 1662)。PCT公开文本WO 03/035835描述了CHO变体细胞系，Lec13细胞，其向Asn(297)-连接糖添加岩藻糖的能力降低，从而使得宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖基化(参见Shields et al.，(2002)J.Biol.Chem.277：26733-26740)。具有改变的糖基化图谱的抗体也可以在鸡蛋中制备，如在PCT公开文本WO 06/089231中所述的。或者，具有改变的糖基化图谱的抗体可以在植物细胞如浮萍中制备。在植物体系中制备抗体的方法在对应Alston&Bird LLP律师记录号040989/314911的2006年8月11日提交的美国专利申请中有过记载。PCT公开文本WO 99/54342记载了一种细胞系，其基因改造成表达修饰糖蛋白的糖基转移酶(例如，β(1，4)-N-乙酰葡糖胺转移酶III(GnTIII))，从而在基因改造细胞系中表达的抗体表现出增加的平分型GlcNac结构，其引起抗体的ADCC活性增强(Umana et al.，(1999)Nat.Biotech.17：176-180)。或者，可以使用岩藻糖苷酶来切除抗体的岩藻糖残基，例如α-L-岩藻糖苷酶从抗体移除岩藻糖残基(Tarentino et al.，(1975)Biochem.14：5516-23)。
包含在本申请中的本文抗体的另一修饰是聚乙二醇化。抗体可以聚乙二醇化，例如增加抗体的生物(例如，血清)半衰期。为使抗体聚乙二醇化，抗体或其片段通常与聚乙二醇(PEG)，例如PEG的活性酯或醛类衍生物，在使一个或多个PEG基团附于抗体或抗体片段的条件下反应。优选地，聚乙二醇化通过与活性PEG分子(或类似的有反应性的水溶性聚合物)的酰化反应或烷化反应进行。本文中所用的术语“聚乙二醇”意在包括任何形式的用于衍生其他蛋白的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇马来酰亚胺。在某些实施方式中，需要聚乙二醇化的抗体是去糖基化的抗体。蛋白聚乙二醇化的方法在领域内已知，且可以应用于本申请的抗体。参见，例如EPO 154 316和EP 0 401 384。
抗体的物理特性
本申请的抗体可以用它们的多种物理特性进行表征，以检测和/或区别其不同类别。
例如，抗体可以在轻链或重链可变区包含一个或多个糖基化位点。这些糖基化位点可能引起抗体的免疫原性增高，或由于抗原结合的改变引起抗体的pK变化(Marshall etal(1972)Annu Rev Biochem 41：673-702；Gala and Morrison(2004)J Immunol 1 72：5489-94；Wallick et al(1988)J Exp Med 168：1099-109；Spiro(2002)Glycobiology 12：43R-56R；Parekh et al(1985)Nature 316：452-7；Mimura et al.，(2000)Mol Immunol37：697-706)。已知糖基化发生在含有N-X-S/T序列的基序中。在一些情况下，优选不包含可变区糖基化的BCMA抗体。这可以通过选择在可变区不包含糖基化基序的抗体或者通过使糖基化区域内的残基发生突变来实现。
在优选实施方式中，抗体不包含天冬酰胺异构位点。天冬酰胺的脱酰胺可能发生在N-G或D-G序列处，引起异天冬氨酸残基的生成，其向多肽链引入链接并降低其稳定性(异天冬氨酸效果)。
各抗体将具有独特的等电点(pI)，其基本落在6-9.5的pH范围内。IgG1抗体的pI通常落在7-9.5的pH范围内，而IgG4抗体的pI基本落在6-8的pH范围内。推测pI在正常范围外的抗体可能在体内条件下具有一些展开结构和不稳定性。因此，优选pI值落在正常范围内的BCMA抗体。这可以通过选择pI在正常范围内的抗体或通过突变带电表面残基来实现。
本申请单克隆抗体的制备
可以使用Kohler and Milstein(1975)Nature 256：495的本领域所公知的体细胞杂交(杂交瘤)技术制备本申请的单克隆抗体(mAb)。制备单克隆抗体的其他实施方式包括B淋巴细胞的病毒或致癌性转化以及噬菌体展示技术。嵌合的或人源化的抗体是本领域公知的。参见，例如美国专利4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370，上述文件的内容通过引用的方式整体并入本文。
产生本申请单克隆抗体的转染瘤的生成
本申请的抗体还可以使用例如本领域所公知的重组DNA技术和基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生(例如，Morrison，S.(1985)Science 229：1202)。在一个实施方式中，将通过标准分子生物技术获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入到一个或多个表达载体中，从而使基因可操作地与转录和翻译调控序列相连接。在此背景下，术语“可操作地连接”是指将抗体基因连接到载体中，从而使载体内的转录和翻译控制序列发挥其调控抗体基因的转录和翻译的预期功能。
术语“调控序列”意在包括控制抗体基因的转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。这样的调控序列在例如Goeddel(Gene ExpressionTechnology.Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，Calif.(1990))中有过描述。优选的用于哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包括在哺乳动物细胞中引导高水平蛋白表达的病毒元件，例如得自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP)和多瘤病毒的启动子和/或增强子。或者，可以使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。另外，调控元件由不同来源的序列构成，例如SRα启动子系统，其包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病I型病毒的长末端重复(Takebe et al.，(1988)Mol.Cell.Biol.8：466-472)。选择与使用的表达宿主细胞兼容的表达载体和表达控制序列。
抗体轻链基因和抗体重链基因可以插入到同一或不同的表达载体中。在优选实施方式中，通过将可变区插入到已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中来构建任意抗体同种型的全长抗体基因，从而VH部分与载体中的CH部分可操作地连接，VL部分与载体中的CL部分可操作地连接。此外或者另外地，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。抗体链基因可以克隆到载体中，进而信号肽在框内连接到抗体链基因的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除抗体链基因和调控序列外，本申请的重组表达载体可以携带其他序列，例如，在宿主细胞中调控载体复制的序列(例如，复制起始点)和可选择标记物基因。可选择标记物基因促进已导入载体的宿主细胞的选择(参见例如，美国专利4,399,216；4,634,665和5,179,017)。例如，通常而言，可选择标记物基因赋予已导入载体的宿主细胞对药物如G418、潮霉素、或甲氨喋呤的抗性。优选的可选择标记物基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于具有甲氨喋呤选择/扩增的dhfr宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。
对于轻链和重链的表达，编码重链和轻链的表达载体通过标准技术转染到宿主细胞中。多种形式的术语“转染”意在包括多种将外源DNA导入原核或真核宿主细胞的常用技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞中表达本申请抗体在理论上是可行的，在真核细胞中表达抗体是最优选的，最优选在哺乳动物宿主细胞，因为这些真核细胞，特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更可能组装并分泌出适当折叠且有免疫活性的抗体。
优选的用于表达本申请重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括与DHFR可选择标记物一起使用的dhfr-CHO细胞，dhfr-CHO细胞在Urlaub andChasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中有过描述，DHFR可选择标记物在例如R.J.Kaufman and P.A.Sharp (1982)J.Mol.Biol.159：601-621中有过描述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。特别在使用NSO骨髓瘤细胞时，另一优选的表达系统是GS基因表达系统，记载于WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过培养宿主细胞一段足以在宿主细胞中表达抗体的时间，或优选将抗体分泌在宿主细胞生长的培养液中，来制备抗体。使用标准的蛋白纯化方法从培养基中回收抗体。
免疫偶联物
本申请的抗体可以与治疗剂结合，形成免疫偶联物，例如抗体-药物偶联物(ADC)。合适的治疗剂包括细胞毒素(例如DT3C)、烷化剂、DNA小沟结合分子、DNA嵌入剂、DNA交联剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、核输出抑制剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶I或II抑制剂、热激蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生素和抗有丝分裂剂。在ADC中，抗体和治疗剂优选地通过可切割的接头偶联，例如肽类接头、二硫类接头或腙类接头。更优选地，接头是肽类接头，例如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser或Glu。ADC可以如美国专利7,087,600；6,989,452；和7,129,261；PCT公开WO 02/096910；WO 07/038,658；WO 07/051,081；WO 07/059,404；WO 08/083,312；和WO 08/103,693；美国专利公开20060024317；20060004081；和20060247295中描述般进行制备；其公开内容通过引用的方式并入本文。
双特异性分子
另一方面，本公开涉及双特异性分子，其包含一个或多个本申请抗体与至少一个其他功能性分子例如另一个肽或蛋白(例如，另一抗体或受体的配体)相连，以生成与至少两个不同的结合位点或靶分子结合的双特异性分子。因此，如本文所用的，“双特异性分子”包括有三种或更多种特异性的分子。
在实施方式中，除Fc结合特异性和BCMA结合特异性外，双特异性分子还具有第三特异性。第三特异性可以针对增强因子(EF)，例如与细胞毒性中涉及的表面蛋白结合的分子，从而增加对靶细胞的免疫应答。例如，抗增强因子可以结合细胞毒性T细胞(例如，经由CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、或ICAM-1)或其他免疫细胞，引起对靶细胞的免疫应答增强。
双特异性分子可以以多种不同形式和尺寸出现。在尺寸谱的一端，双特异性分子保持传统抗体形式，除其具有两条结合臂且各臂具有不同特异性，而非具有两条相同特异性的结合臂外。在另一个极端的是，由两个经肽链连接的单链抗体片段(scFv)构成的双特异性分子，即所谓的Bs(scFv)2构建体。中间尺寸的双特异性分子包括由肽类接头连接的两个不同F(ab)片段。这些和其他形式的双特异性分子可以通过基因改造、体细胞杂交或化学方法进行制备。参见，例如Kufer et al，同上；Cao and Suresh，Bioconjugate Chemistry，9(6)，635-644(1998)；和van Spriel et al.，Immunology Today,21(8)，391-397(2000)，以及其中引用的文献。
编码抗体或携带抗体的溶瘤病毒
溶瘤病毒偏好侵染并杀灭癌细胞。本申请的抗体可以与溶瘤病毒一起使用。或者，编码本申请抗体的溶瘤病毒可以引入到人体中。
嵌合抗原受体
本申请还提供包含BCMA scFv的嵌合抗原受体(CAR)，该BCMA scFv可以包含本文所述的CDR、和重链/轻链可变区。
BCMACAR可以包含(a)包含BCMA scFv的胞外抗原结合域；(b)跨膜结构域；和(c)胞内信号转导域。
CAR可以在胞外抗原结合域的N-端含有信号肽，该信号肽指导新生受体进入内质网，以及在胞外抗原结合域的N-端的铰链肽，其使受体更容易结合。CAR优选地在胞内信号传导域包含主要的胞内信号传导域和一个或多个共刺激信号传导域。主要使用的和最有效的主要胞内信号传导域是CD3-ζ胞质结构域，其包含ITAM，其磷酸化引起T细胞活化。共刺激信号传导域可以衍生自共刺激蛋白，例如CD28、CD137和OX40。
CAR还可以添加增强T细胞扩增、持久性和抗肿瘤活性的因子，例如细胞因子、和共刺激配体。
还提供基因修饰的免疫效应细胞，其可以包含本文提供的CAR。在一些实施方式中，免疫效应细胞是T细胞、NK细胞、外周血单核细胞(PBMC)、造血干细胞、多能干细胞、或胚胎干细胞。在一些实施方式中，免疫效应细胞是T细胞。
编码本申请抗体的核酸分子
在另一方面，本申请提供编码本申请抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子、或CAR的核酸分子。核酸可以存在于完整细胞、细胞裂解液中或处于部分纯化或基本纯化的形式。当通过标准技术从其他细胞组分或者其他污染物例如其他细胞核酸或蛋白中纯化出来时，核酸为“分离的”或“基本纯的”。本申请的核酸可以为例如DNA或RNA，且可以包含或可以不包含内含子序列。在优选实施方式中，核酸是cDNA分子。
本申请的核酸可以使用标准的分子生物学技术获得。对于由杂交瘤(例如，由携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤，下文会进一步描述)表达的抗体，编码杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA，可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于(例如使用噬菌体展示技术)从免疫球蛋白基因库获得的抗体，可以从基因库中回收编码这类抗体的核酸。
优选的本申请核酸分子包括编码BCMA单克隆抗体的VH和VL序列或CDR的那些。一旦获得了编码VH和VL段的DNA片段，这些DNA片段可以进一步通过标准的重组DNA技术进行操作，例如将可变区基因转变为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另一蛋白(例如抗体恒定区或柔性接头)的另一DNA片段可操作地连接。在上下文中使用术语“可操作地连接”是指两个DNA片段连接在一起，从而使这两个DNA片段编码的氨基酸序列都在框内。
编码VH区的分离DNA可以通过可操作地连接编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子而转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在领域内已知，且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增而获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但是最优选为IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH区的DNA可以可操作地与仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子连接。
编码VL区的分离DNA可以通过可操作地连接编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子而转变成全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列在领域内已知，且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增而获得。在优选实施方式中，轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
为创建scFv基因，编码VH和VL的DNA片段可以可操作地与编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段连接，从而VH和VL序列可以表达成一个连续的单链蛋白，其中VL和VH区域通过该柔性接头连接(参见，例如Bird et al.，(1988)Science 242：423-426；Huston et al.，(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；McCafferty etal.，(1990)Nature 348：552-554)。
药物组合物
在另一方面，本申请提供一种药物组合物，其包含与药学上可接受的载体配制在一起的本申请的一种或多种抗体(或其抗原结合部分、双特异性分子、CAR-T细胞、溶瘤病毒、免疫偶联物、核酸分子、表达载体或宿主细胞)。当组合物中含有多于一种的抗体(或其抗原结合部分、双特异性分子、CAR-T细胞、溶瘤病毒、免疫偶联物、核酸分子、表达载体、或宿主细胞)时，抗体(或其抗原结合部分、双特异性分子、CAR-T细胞、溶瘤病毒、免疫偶联物、核酸分子、表达载体或宿主细胞)可以分开给药。组合物可以选择性地包含一种或多种其他药物活性成分，例如另一抗体或药物，例如抗肿瘤药物。
药物组合物可以包含任何数量的赋形剂。可以使用的赋形剂包括载体、表面活性剂、增稠或乳化剂、固体粘合剂、分散或混悬剂、增溶剂、染色剂、矫味剂、包衣、崩解剂、润滑剂、甜味剂、防腐剂、等渗剂及其组合。在Gennaro，ed.，Remington：The Science andPractice of Pharmacy，20th Ed.(Lippincott Williams&Wilkins 2003)中，对合适赋形剂的选择和使用有所讲解，其公开内容通过引用的方式并入本文。
优选地，药物组合物适合于静脉内、肌内、皮下、肠道外、脊柱或表皮给药(例如通过注射或输注)。基于给药途径的不同，有效成分可以包在材料中，以保护其免受酸和其他可能使其失活的自然条件的影响。本文所用的术语“肠道外给药”是指非肠内和非局部外用的给药方式，通常通过注射进行，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊膜下、蛛网膜下腔、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。或者，本申请的抗体可以通过非肠道外的途径给药，例如外用、表皮或粘膜给药，例如鼻内、经口、阴道、直肠、舌下、或局部外用。
药物组合物可以为无菌水溶液或分散液的形式。它们也可以配制在微乳剂、脂质体或其他适于高药物浓度的有序结构中。
可以与载体材料一起制备成单剂量型的有效成分的量将随着治疗主体和特定给药方式而变，且通常是产生疗效的组合物的量。基本而言，以百分比计，该量是与药学上可接受载体组合在一起的约0.01％-约99％，优选为约0.1％-约70％，最优选为约1％-约30％的有效成分。
调整给药方案以提供最佳的所需的应答(例如，治疗应答)。例如，可以施用快速灌注剂，可以随时间推移施用多个分剂量，或者剂量可以随治疗情况的危急程度成比例降低或提高。特别有利的是，为方便施用和剂量均匀，配置剂量单位型的肠道外组合物。本文所用的剂量单位型是指物理上不连续的单位，适于治疗主体的单次给药；各单位包含计算出来与所需药学载体一起产生所需疗效的预定量的有效成分。或者，抗体可以以缓释剂施用，这种情况下所需的给药频率降低。
对于组合物的给药，剂量范围可以为约0.0001-100mg/kg。示例性治疗方案需要每周给药一次。
“治疗有效剂量”的本申请BCMA抗体或其抗原结合部分、免疫偶联物、双特异性分子、CAR、免疫细胞、溶瘤病毒、核酸分子、表达载体或宿主细胞，优选地引起疾病症状严重程度的降低、疾病无症状期频率和持久度的增加、或预防疾病折磨造成的损伤或残疾。例如，对于荷瘤受试者的治疗，与未接受治疗的受试者相比，优选“治疗有效剂量”对肿瘤生长的抑制至少为约20％、更优选为至少约40％，甚至更优选为至少约60％，更优选至少为约80％。治疗有效量的治疗抗体可以减小受试者的肿瘤尺寸，或者减轻症状，受试者通常为人，或者可以是其他哺乳动物。
药物组合物可以是控释剂型，包括植入体、经皮贴剂和微胶囊递送系统。可以使用生物可降解、生物相容的聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems.J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
药学组合物可以经医学设备来给药，例如(1)无针皮下注射设备(例如，美国专利5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824和4,596,556)；(2)微量输液泵(美国专利4,487,603)；(3)经皮给药设备(美国专利4,486,194)；(4)推注设备(美国专利4,447,233和4,447,224)；和(5)渗透设备(美国专利4,439,196和4,475,196)，上述文献的公开内容通过引用的方式并入本文。
在某些实施方式中，可以配制本申请的单克隆抗体或其抗原结合部位，以确保在体内的合适分布。例如，为确保本申请的治疗抗体可以穿越血脑屏障，它们可以配制在脂质体中，其还可以额外地包含靶向功能基团，以增强对特定细胞或器官的选择性输送。参见，例如美国专利4,522,811；5,374,548；5,416,016；和5,399,331；V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29：685；Umezawa et al.，(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153：1038；Bloeman et al.，(1995)FEBS Lett.357：140；M.Owais et al.，(1995)Antimicrob.Agents Chemother.39：180；Briscoe et al.，(1995)Am.J.Physiol.1233：134；Schreier et al.，(1994)J.Biol.Chem.269：9090；Keinanen and Laukkanen(1994)FEBS Lett.346：123；和Killion and Fidler(1994)Immunomethods 4：273。
本申请的用途和方法
本申请的药物组合物具有多种体外和体内用途，涉及例如与BCMA表达增加相关的肿瘤的治疗。
鉴于本申请的BCMA抗体或其抗原结合部位抑制BCMA表达肿瘤的增殖和存活的能力，本申请提供用于抑制受试者中肿瘤细胞生长的方法，包括向受试者施用本申请的药物组合物，从而抑制受试者的肿瘤生长。本申请抗体可以治疗的非限制性肿瘤实例包括，但不限于，例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。另外地，生长可以使用本申请抗体进行抑制的难治的或复发的恶性肿瘤。
联合治疗
在另一方面，本申请提供联合治疗的方法，其中本申请的药物组合物与一种或多种有效抑制受试者中肿瘤生长的其他抗体联合施用。在一个实施方式中，本申请提供一种在受试者中抑制肿瘤生长的方法，包括向受试者施用本申请的药物组合物，以及一种或多种其他抗体，例如VISTA抗体、LAG-3抗体、PD-L1抗体、PD-1抗体、和/或CTLA-4抗体。在某些实施方式中，受试者是人。
BCMA信号通路阻断还可以与标准癌症治疗合用。例如，BCMA信号通路阻断可以与CTLA-4和/或LAG-3和/或PD-1阻断以及化疗方案相结合。例如化疗试剂可以与BCMA抗体一起施用，化疗剂可以是细胞毒试剂。例如，表阿霉素、奥沙利铂和5-FU可以给接受BCMA治疗的患者施用。
可选地，本申请的药物组合物与一种或多种其他抗体(例如，CTLA-4抗体和/或LAG-3抗体和/或PD-1抗体)的联合使用还可以与免疫原剂例如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽类和碳水化合物分子)以及转染有编码免疫刺激因子的基因的细胞(He etal.，(2004)J.Immunol.173：4919-28)结合。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑色素瘤抗原肽，例如gp100肽，MAGE抗原，Trp-2，MART1和/或酪氨酸酶，或经转染以表达细胞因子GM-CSF的肿瘤细胞。
其他可以与BCMA抗体疗法相结合的治疗方案包括，但不仅限于，施用白介素-2(IL-2)、放疗、手术治疗或激素抑制疗法。
本文讨论的治疗剂的联合使用可以作为在药学上可接受载体中的单一组合物同步给药，或者作为各药物处于药学上可接受载体中的单组合物同步给药。在另一个实施方式中，治疗剂的合用可以是按序施用。
此外，如果多于一剂的联合疗法按序施用，按序给药的顺序可以在每个给药时间点颠倒或者保持相同的顺序，按序给药可以与同步给药相结合，或其任意组合。
本申请通过以下实施例进一步阐明，实施例不应当解读为进一步限定。贯穿本申请引用的所有图片和所有参考文献、Genbank序列、专利和公开专利申请的内容，均通过引用的方式明确并入本文。
实施例
实施例1.使用杂交瘤技术制备小鼠源BCMA单克隆抗体
免疫
根据E Harlow，D.Lane，Antibody：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1998中所述的方法免疫小鼠。C-端带Fc标签的重组人BCMA蛋白(Cat#BC7-H5254，Acro biosystems)作为免疫原。人BCMA-his蛋白(Cat#BCA-H522Y，Acro biosystems)用于抗血清效价的测定和分泌抗原特异性抗体的杂交瘤的筛选。免疫剂量包含用于初次免疫和增强免疫的25μg人BCMA-Fc蛋白/小鼠/注射。为增加免疫应答，在初次免疫和增强免疫中分别使用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂(Sigma，St.Louis，Mo.，USA)。简而言之，佐剂-抗原混合物的制备如下，首先使用涡旋混合器在小瓶中轻柔地混合佐剂。将所需量的佐剂转移到高压灭菌的1.5mL微量离心管中。将抗原以0.25-0.34mg/ml的浓度配制在的PBS或盐水中。然后将计算量的抗原加到含有佐剂的微量离心管中，轻柔地涡旋2分钟混合所得的溶液，以形成油包水的乳状液。之后将佐剂-抗原乳状液吸到适当的注射器中，进行动物注射。以150-200μl的体积，注射共25μg抗原。对各个动物进行免疫，之后基于抗血清效价进行2-3次加强。在细胞融合前，通过腹腔注射对具有较好效价的动物进行最后一次加强。
杂交瘤融合和筛选
培养小鼠骨髓瘤细胞系(SP2/0-Ag14，ATCC#CRL-1581)的细胞，在细胞融合前达到对数生长期。以无菌方式制备免疫小鼠脾细胞，并根据Kohler G，and Milstein C，″Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefinedspecificity，″Nature，256：495-497(1975)中提到的方法与骨髓瘤细胞融合。之后将融合的“杂交细胞”于DMEM/20％FCS/HAT培养基中在96孔板上铺板。融合后7-10天，在显微镜下观察存活的杂交瘤群落。在两周后，使用生物素标记的人BCMA-his蛋白，将各孔的上清液进行捕获ELISA。选出分泌与人BCMA-his蛋白结合的抗体的阳性杂交瘤，并转移到24孔板中。进一步测试这些杂交瘤对人BAFF-BCMA的阻断活性。通过有限稀释，对显示出人BCMA高特异结合性和BCMA-BAFF阻断活性的抗体的产出杂交瘤克隆进行亚克隆，以确保细胞系的单克隆源性，然后纯化单克隆抗体。简单而言，使用5-10倍柱体积的PBS缓冲液冲洗蛋白A琼脂糖色谱柱(bestchrom(Shanghai)Biosciences，Cat#AA0273)。使细胞上清液通过色谱柱，然后用PBS缓冲液冲洗柱子，直至蛋白吸光度达到基线。用洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸-HCl，pH2.7)洗脱柱子，并立即收集到含有中性缓冲液(1M Tris-HCl，pH 9.0)的1.5ml管中。将含有免疫球蛋白的部分混合，并于4℃在PBS中透析过夜。随后，如下所述对纯化单克隆抗体的体外功能活性进行表征。
实施例2.小鼠源BCMA单克隆抗体的使用BIACORE表面等离子体共振技术的亲和力 测定
用Biacore T200系统(GE healthcare，Pittsburgh，PA，USA)对实施例1中产生的纯化小鼠源BCMA单克隆抗体B1H2(mAb)进行亲和力和结合动力学表征。
表2.小鼠源抗BCMA抗体B1H2与人BCMA和食蟹猴BCMA的结合亲和力
简而言之，使用Biacore(GE healthcare，Pittsburgh，PA，USA)提供的标准胺偶联试剂盒，将山羊抗小鼠IgG(GE healthcare，Cat#BR100838，小鼠抗体捕获试剂盒)经伯胺共价连接到CM5芯片(羧甲基葡聚糖包被的芯片)。生物传感器表面未反应的基团用乙醇胺阻断。蛋白G芯片(GE healthcare，Cat#29-1793-15)用于阳性对照的亲和力确定，即含有GSK2857916的BCMA结合部位的全长抗体，又称为BCMA BM1或BM，内部制备，使用的重链和轻链氨基酸序列为SEQ ID NOs：14和15。纯化的小鼠源BCMA抗体和阳性对照以2μg/mL的浓度10μL/min的流速流经芯片。然后，梯度稀释的重组人BCMA-his(Acro biosystems，Cat#BCA-H522Y)或猴BCMA-Fc蛋白(Acro biosystems，Cat#BCA-C5253)以10nM的起始浓度，2倍稀释于HBS-EP+缓冲液(Biacore提供)，以30μL/min的流速流经芯片。抗原-抗体结合动力学观测2分钟，解离动力学观测10分钟。用BIAcore评估软件将结合与解离曲线拟合到1∶1Langmuir结合模型中。确定KD、Ka和Kd值，并总结在表2中。
小鼠源抗体B1H2与人BCMA特异性结合，与对照基准物相比结合亲和力更高，但不与猴BCMA结合。
实施例3.小鼠源BCMA单克隆抗体的结合活性
通过捕获ELISA、间接ELISA和流式细胞术(FACS)测定小鼠BCMA抗体B1H2与人BCMA的结合活性。
3.1捕获ELISA
简而言之，用2μg/ml Fcγ片段特异的山羊抗小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch，Cat#115-005-071)的PBS包被96微孔板，100μl/孔，4℃孵育过夜。板用冲洗缓冲液(PBS+0.05％Tween-20，PBST)冲洗一次，然后用200μl/孔封闭缓冲液(含5％w/v脱脂奶粉的PBST)于37℃封闭2小时。再次洗涤板，分别与100μl/孔梯度稀释(5倍稀释于含2.5％脱脂奶粉的PBST，起始浓度为10000ng/ml)的纯化小鼠BCMA抗体B1H2、对照基准物和阴性对照hIgG(静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)，华兰生物工程有限公司)，37℃，40分钟，然后洗涤4次。含有捕获的BCMA抗体的板与生物素标记的人BCMA-his蛋白(Cat#BCA-H522Y，Acrobiosystems，4.125ng/mL于含2.5％脱脂奶粉的PBST，100μl/孔)37℃孵育40分钟，洗涤四次，与链霉亲和素结合的HRP(1∶10000稀释于PBST缓冲液，Jackson Immuno Research，Cat#01 6-030-084，100μl/孔)，于37℃孵育40分钟。终洗后，板与100μl/孔ELISA底物TMB(Innoreagents，Cat#TMB-S-002)孵育。在3-10分钟后于室温加入50μl/孔1M H2SO4，中止反应，在酶标仪中对各孔的吸光度进行读数，使用双波长模式，450nm用于TMB，630nm作为参照波长。用OD(450-630)值以抗体浓度做图。使用Graphpad Prism软件对数据进行分析，得出EC50值。结果如图1所示。
3.2基于细胞的FACS
通过流式细胞术(FACS)检测BCMA抗体B1H2与U266细胞表面的结合。简而言之，从细胞培养瓶中收集人骨髓瘤细胞U266(TIB-196TM)，洗涤两次，在含2％v/v胎牛血清的磷酸盐缓冲液(PBS)(FACS缓冲液)中重悬。96孔板中每孔2×105细胞，在冰上，与100μL于FACS缓冲液中的梯度稀释的BCMA抗体或对照(起始浓度为10μg/mL，5倍梯度稀释)孵育40分钟。细胞用FACS缓冲液洗涤两次，并加入100μL/孔R-藻红蛋白亲和纯化F(ab′)2山羊抗小鼠IgG(H+L)(1∶1000稀释于FACS缓冲液，Jackson Immunoresearch，Cat#115-116-146)。4℃暗室孵育40分钟后，细胞洗3次，并用FACS缓冲液重悬。使用Becton Dickinson FACS CantoII-HTS设备进行荧光测定，用MFI(平均荧光强度)对抗体浓度作图。采用Graphpad Prism软件进行数据分析，得出EC50值，其为达到BCMA抗体与U266细胞结合的50％的抗体浓度。结果如图2所示。
结果表明，小鼠源BCMA抗体B1H2与人BCMA特异性结合。在图1中，B1H2在捕获ELISA中具有低于阳性对照的EC50。根据图2，与对照基准物相比，本申请的小鼠源BCMA抗体B1H2以更低的EC50和更高的Bmax与细胞表面的人BCMA结合。数据显示B1H2抗体具有更好的BCMA结合能力。
实施例4.小鼠源BCMA单克隆抗体的竞争ELISA
4.1配体阻断ELISA
在竞争ELISA检测中，测定本申请BCMA抗体B1H2阻断BCMA-BAFF结合的能力。简而言之，用100μl 2μg/mL于碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液中的人BCMA-his蛋白(Acro biosystems，Cat#BCA-H522Y)包被96孔微孔板，37℃2小时。板用洗涤缓冲液(PBS+0.05％w/v吐温20，PBST)洗涤，再用含5％w/v脱脂奶粉的PBST缓冲液于37℃封闭2小时。板用洗涤缓冲液再次冲洗。
将梯度稀释于含2.5％w/v脱脂奶粉的PBST中的BCMA抗体B1H2或对照品(起始浓度为200nM，4倍梯度稀释)加入至BCMA-his结合的板中，每孔100μl，与人BCMA-his蛋白于37℃孵育40分钟。板用洗涤缓冲液洗涤四次，然后加入100μl/孔的10.5ng/mL生物素标记的BAFF-Fc蛋白(Sino biological inc.，Cat#10056-H01H)，于37℃孵育40分钟。再次用清洗缓冲液洗板。然后板上加入100μl/孔的链霉亲和素结合的HRP(1∶5000稀释于PBST缓冲液，Jackson Immunoresearch，Cat#016-030-084)，于37℃孵育40分钟。用清洗缓冲液洗板。最后，加入TMB，用1M H2SO4终止反应，在酶标仪中对各孔的吸光度进行读数，使用双波长模式，450nm用于TMB，630nm作为参照波长，然后用OD(450-630)值和抗体浓度做图。使用GraphpadPrism软件对数据进行分析，得出IC50值。
4.2对照基准物阻断ELISA
采用竞争ELISA检测，测定本申请中抗BCMA抗体B1H2阻断对照基准物与人BCMA结合的能力。简而言之，将于PBS中的2μg/mL BCMA BM1包被于96孔微板，100μl/孔，37℃孵育2小时。用清洗缓冲液清洗板，用含5％w/v脱脂奶粉的PBST于37℃封闭2小时。在封闭时，用生物素标记的人BCMA-his蛋白(Acro biosystems，Cat#BCA-H522Y，3.3ng/mL于含2.5％w/v脱脂奶粉的PBST中)稀释本申请的BCMA抗体或对照品，起始浓度100nM，4倍梯度稀释，然后于室温孵育40分钟。洗涤板后，将抗体/生物素标记的人BCMA-his混合物加入到BCMA BM1包被的板中，每孔100μl。37℃孵育40分钟后，用洗涤缓冲液洗涤平板。然后向板中加入100μl/孔的链霉亲和素结合的HRP，37℃孵育40分钟。板用洗涤缓冲液再洗涤一次。最后，加入TMB，用1M H2SO4终止反应。在酶标仪中对各孔的吸光度进行读数，使用双波长模式，450nm用于TMB，630nm作为参照波长，之后用OD(450-630)值和抗体浓度做图。使用Graphpad Prism软件对数据进行分析，得出IC50值。
两个测试的结果总结于图3和4。
从图3可以看出，BCMA抗体B1H2能够阻断人BCMA与BAFF的结合，阻断活性略高于BCMA BM1。
图4显示出，抗体B1H2能够阻断人BCMA-BM1结合，说明其与BCMA BM1结合相同或相似的表位。
实施例5.嵌合抗体的制备
对小鼠源BCMA mAb B1H2的重链和轻链的可变区进行测序，序列ID编码总结于表1。
将重链和轻链的可变区在可读框内分别克隆至人IgG1重链(SEQ ID NO：12)和人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：13)，其中可变区的C端与各自恒定区的N端相连。
将各个包含编码与人IgG1重链恒定区相连的重链可变区的核苷酸的载体，与各个含有编码与人κ轻链恒定区相连的轻链可变区的核苷酸的载体，瞬时转染到50ml含有1mg/mL PEI的293F悬浮细胞培养物中，轻/重链构建体比为1.1∶1。
在摇瓶中6天后，收集细胞上清液，旋转离心，使细胞成团，然后从细胞上清液中纯化出嵌合抗体。
实施例6.小鼠源BCMA单克隆抗体B1H2的人源化
将小鼠源BCMA抗体B1H2进行人源化，并进一步研究。小鼠源抗体的人源化通过领域内确立的CDR移植技术进行，其在下文中详细介绍。
为选择用于小鼠源抗体B1H2的人源化的合适受体框架，将小鼠源抗体B1H2的轻链和重链可变区序列与人免疫球蛋白基因数据库进行比对。选出同源性最高的人类种系，作为人源化的受体框架。将小鼠源抗体重链/轻链可变区CDR插入到选中的框架中，对框架中的残基进一步突变以获得更多候选的重链/轻链可变区。一共得到25个人源化B1H2抗体(即huB1H2-V1至huB1H2-V24、以及huB1H2-V33)，重链/轻链可变区序列如表1所示。
将各个包含编码与人IgG1重链恒定区(SEQ ID NO：12)相连的人源化B1H2重链可变区的核苷酸的载体，和各个包含编码与人κ轻链恒定区(SEQ ID NO：13)相连的人源化B1H2轻链可变区的核苷酸的载体，瞬时转染到50ml含有1mg/mL PEI的293F悬浮细胞培养物中，轻/重链构建体比为60％∶40％。
实施例7.人源化B1H2抗体的表征
在摇瓶中培养6天后，收集含有人源化抗体的细胞上清液，然后根据上述的操作规程，通过Octet测定其与人BCMA的结合亲和力。
使用Octet系统(Fortebio，Octet RED 96)进行Octet亲和力测试。简而言之，AHC生物传感器(抗人IgG Fc捕获，ForteBio)在10mM甘氨酸(pH 1.5)中预浸泡3秒，之后浸入含流动缓冲液(含0.5％w/v BSA的PBST)的孔中3秒，上述浸泡和浸入步骤重复三次。之后，将传感器浸入具有含人源化抗体的细胞上清液、含10μg/ml嵌合B1H2抗体的HBS-EP+或含10μg/ml BCMA BM1的HBS-EP+的孔中100秒，然后浸入含有流动缓冲液的孔中5分钟。在含有流动缓冲液的另一个孔中180秒，做出新的基线。之后将传感器浸入到含有稀释的人BCMA-his蛋白(Acro biosystems，Cat#BCA-H522Y，起始浓度80nM，2倍梯度稀释)的流动缓冲液中100秒，然后浸入基线孔中10分钟。最后，将传感器在10mM甘氨酸(pH 1.5)中预浸泡3秒，然后浸入含流动缓冲液的孔中3秒，上述浸泡和浸入步骤重复三次。使用ForteBio数据分析8.1评估软件，将结合与解离曲线拟合到1∶1 Langmuir结合模型中。确定Ka、Kd和KD值，并总结在以下表3中。
表3.人源化B1H2 mAb的亲和力
数据显示，测试的人源化抗体例如huB1H2-V1到huB1H2-V7、huB1H2-V12和huB1H2-V33展现出高的、与嵌合B1H2抗体相当的结合亲和力。
按照上述的方法纯化人源化抗体huB1H2-V10和huB1H2-V33，并经Biacore、捕获ELISA、间接ELISA、蛋白热迁移检测、基于细胞的结合FACS、竞争ELISA、内化介导的细胞毒性和抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)检测，按照上述实施例的操作规程(略作修改)以及下列操作规程，对其进行测试。
对于BIAcore检测，将山羊抗人IgG(GE healthcare，Cat#BR100839，人抗体捕获试剂盒)，而非山羊抗小鼠IgG，共价连接于CM5芯片，对照基准物使用CM5芯片而非蛋白G芯片。结果如表5所示。
对于捕获ELISA，使用Fcγ片段特异的亲和纯化山羊抗人IgG(JacksonImmunoresearch，Cat#109-005-098)来替代Fcγ片段特异的亲和纯化山羊抗小鼠IgG，100μl/孔。结果如图5所示。
如下进行间接ELISA，测试抗体与猴BCMA蛋白的结合力。简而言之，96孔微孔板用100μl 2μg/ml猴BCMA-his蛋白(Acro biosystems，Cat#BCA-C52H7)的PBS溶液包被，37℃2小时。板用清洗缓冲液(PBS+0.05％吐温-20，PBST)洗涤一次，然后用200μl/孔封闭缓冲液(含5％w/v脱脂奶粉的PBST)37℃封闭2小时。再次冲洗板，并与100μl/孔梯度稀释的本申请BCMA抗体、BCMA BM1或阴性对照hIgG(静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)，华兰生物工程有限公司)(5倍稀释于含2.5％脱脂奶粉的PBST中，起始浓度10000ng/ml)于37℃孵育40分钟。ELISA板冲洗4次，与Fcγ片段特异的过氧化物酶亲和纯化F(ab′)2片段山羊抗人IgG(1∶5000稀释于PBST缓冲液，Jackson Immunoresearch，Cat#109-036-098，100μl/孔)37℃孵育40分钟。终洗后，板与100μl/孔TMB(Innoreagents)孵育。3-10分钟后，室温下，用50μl/孔1MH2SO4中止反应，在酶标仪中对各孔的吸光度进行读数，使用双波长模式，450nm用于TMB，630nm作为参照波长。用OD(450-630)值和抗体浓度做图。使用Graphpad Prism软件对数据进行分析，得出EC50值。结果如图6所示。
在基于细胞的结合FACS中，使用博奥信内部制备的稳定表达人BCMA(SEQ ID NO.：16，uniprot#Q02223，氨基酸残基1-184)的293F-BCMA细胞代替U266细胞，2×105细胞/孔，其中293F-BCMA细胞的制备按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明书，用在NotI和XbaI位点之间插入BCMA(SEQ ID NO：16)编码序列的pcDNA3.1质粒转染293F细胞(Thermofisher Inc.，Cat#11625019)。使用R-藻红素亲和纯化Fcγ片段特异的山羊抗人IgG(Jackson Immunoresearch，Cat#109-115-098)代替R-藻红素亲和纯化F(ab′)2片段特异的山羊抗小鼠IgG(H+L)，100μl/孔。结果如图7所示。
对于热迁移测试，使用GloMeltTM热迁移蛋白稳定试剂盒(Biotium，Cat#33022-T)通过蛋白热迁移检测来测定熔融温度(Tm)。简而言之，使GloMeltTM染料融化至室温。将装有染料的小瓶进行涡旋振荡和离心。然后，通过向95μL PBS中加入5μL 200×染料，制备10×染料。向2μL 10×染料加入10μg人源化抗体，PBS加至20μL总反应体积。简单地旋转含有染料和抗体的管子，并置于实时PCR热循环仪(Roche，LightCycler 480 II)中，将其设置为具有表4参数的熔融曲线程序。结果如图12A和12B所示。
表4.熔融曲线程序参数
大概步骤 温度 升温速率 保持时间
初始保持 25℃ NA 30s
熔融曲线 25-99℃ 0.1℃/s NA
使用荧光素酶检测系统(Bio-LiteTM荧光素酶检测系统，Promega，Cat#E6120)测试BCMA人源化抗体诱导产生的ADCC活性。按照lipofectamine3000转染试剂(Thermo Fisher)的说明书，公司内部通过用pGL4.30质粒(Promega，Cat#pGL4.30[luc2P/NFAT-RE/Hygro)和pUNO1-hFCGR3Ac质粒(Invivogene，Cat#pUNO1-hFCGR3Ac)转染Jurkat细胞，来制备作为效应细胞系的在细胞膜上稳定表达CD16a的Jurkat-NFAT-CD16a稳定细胞系(clone ID#2B1-1D2)，其中pGL4.30质粒包含驱动荧光素酶受体基因luc2P(北美萤火虫)转录的NFAT应答因子(NFAT-RE)。具体地，将1.25×104个作为靶细胞的U266细胞，置于100μL补充有10％FBS(Gibco，Cat#10099-141)的RPMI1640培养基(Gibco，Cat#A10491-01)中，于96孔板中铺板，并与50μl不同浓度(133.33nM、66.67nM、6.67nM、0.67nM、0.07nM、0.01nM、0.001nM、0.0001nM、0.00001nM和0.0nM)的BCMA抗体在CO2孵育箱中于37℃孵育1小时。然后，向平板中加入于50μL补充有10％FBS的RPMI1640培养液中的7.5×104个效应细胞，与靶细胞以E/T比为6∶1的比例混合。混合物在5％CO2的加湿空气箱中于37℃孵育6小时。然后，舍弃各孔的100μl上清液。向板中加入荧光素酶检测试剂(50μL/孔，Promega，Cat#E6120)，孵育10分钟，用Tecan infinite 200Pro酶标仪分析。使用Graphpad prism软件分析荧光信号数据，得出EC50值。结果如图10A和10B所示。
在基于细胞的内化检测中，精准地评估BCMA人源化抗体在U266细胞(TIB-196)中的内化效率。首先，合成名为DT3C的重组蛋白，其由缺少受体结合域的白喉毒素(DT)和链球菌蛋白G的C1、C2和C3结构域(3C)(内部制备，SEQ ID NO：23)组成。然后，将于100μL补充有10％FBS(Gibco，Cat#10099-141)的RPMI1640培养基(Gibco，Cat#A10491-01)中的1.5×104个U266细胞，在96孔板(Coming，Cat#3903)的各孔中铺板。同时，本申请的BCMA抗体或对照(40μg/mL于含10％FBS的RPMI1640培养基中)与DT3C蛋白(40μg/mL于含10％FBS的RPMI1640培养基中)以1∶1体积比混合，于室温孵育30分钟。然后，将100μl梯度稀释的抗体/DT3C混合物(起始浓度为20μg/mL，3倍梯度稀释于培养基)加入到细胞板中，在CO2培养箱中于37℃孵育72小时。向板中加入Cell Titer Glo试剂(Promega，Cat#G7570)，孵育10分钟。然后用Tecan infinite 200Pro酶标仪对细胞培养板进行分析。使用Graphpad prism软件分析数据，得出IC50值，其为达到最大细胞活性抑制的50％时的抗体浓度。当mAb-DT3C偶联物被靶细胞内化时，靶细胞活力明显降低。如果偶联物没有被内化，游离的DT3C没有或具有很小的细胞杀伤活性。数据如图11和表6所示。
其他检测的结果如图8和9所示。
表5.人源化mAb的结合亲和力
从表5、图5和图7可以看出，小鼠源、嵌合的和人源化的B1H2抗体表现出高于BCMABM1的结合亲和力/能力。
从图6可以看出BCMA人源化抗体huB1H2-V10和huB1H2-V33不与猴BCMA结合。
图8显示，小鼠源、嵌合的和人源化的B1H2抗体展示出高于对照抗体的对于BCMA-BAFF相互作用的阻断活性。
此外，如图10A-10B所示，嵌合的和人源化的B1H2抗体以剂量依赖的方式诱导Jurkat-NFAT-CD16a细胞对U266细胞的杀伤。具体来说，相较于BCMABM1，嵌合的和人源化的B1H2抗体在较低剂量时诱导产生更高的ADCC。
从图11和表6可以看出，BCMA抗体-DT3C偶联物被U266细胞内化，造成细胞死亡，而单独的重组蛋白DT3C或同种型对照-DT3C偶联物很难进入到U266细胞，细胞杀伤活性低。与BCMA BM1-DT3C偶联物相比，huB1H2-V10-DT3C偶联物和huB1H2-V33-DT3C偶联物显示出更高的靶细胞杀伤活性，包括更低的IC50和更高的最大细胞活力抑制。
表6.抗体-DT3C偶联物的细胞杀伤活性
*没有内化
图12A-12B显示出，BCMA人源化抗体huB1H2-V10和huB1H2-V33在人体内很可能是稳定的。
尽管本申请已经结合一个或多个实施方式进行了上述阐述，应当理解的是，本申请不限于那些实施方式，且说明书意在涵盖包括在所附权利要求的宗旨和范围内的所有可选方案、修改和等同物。所有本文中引用的参考文献均通过引用的方式全文并入。
本申请中的序列总结如下。
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序列表
<110> 博奥信生物技术（南京）有限公司
<120> 结合BCMA的抗体及其用途
<130> 55532 00052
<150> US62/956,642
<151> 2020-01-03
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<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠、嵌合以及人源化的B1H2的VH CDR1
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1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 小鼠、嵌合以及人源化的B1H2的VH CDR2
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<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠、嵌合以及人源化的B1H2的VH CDR3
<400> 3
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠、嵌合以及人源化的B1H2的VL CDR1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠和嵌合的B1H2的VH
<400> 7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Met Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Val Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huB1H2-V1、huB1H2-V7、huB1H2-V13和huB1H2-V19的VH
<400> 8
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huB1H2-V2-huB1H2-V6、huB1H2-V8-huB1H2-V12、huB1H2-V14-huB1H2-V18、
huB1H2-V20-huB1H2-V24、以及huB1H2-V33的VH
<220>
<221> 其他特征
<222> (37)..(37)
<223> Xaa可以是Val、或Met
<220>
<221> 其他特征
<222> (72)..(72)
<223> Xaa可以是Arg、或Ser
<220>
<221> 其他特征
<222> (74)..(74)
<223> Xaa可以是Thr或Lys
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Xaa Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Ile Pro Phe Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu His Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Xaa Asp Xaa Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Phe Glu Gly Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠和嵌合的B1H2的VL
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile
100 105
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> huB1H2-V1-huB1H2-V24、以及huB1H2-V33的VL
<220>
<221> 其他特征
<222> (43)..(43)
<223> Xaa可以是Thr或Ala
<220>
<221> 其他特征
<222> (44)..(44)
<223> Xaa可以是Val或Pro
<220>
<221> 其他特征
<222> (71)..(71)
<223> Xaa可以是Tyr或Phe
<220>
<221> 其他特征
<222> (73)..(73)
<223> Xaa可以是Phe或Leu
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Xaa Xaa Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Xaa Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 12
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合的和人源化抗体重链恒定区
<400> 12
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合的和人源化抗体的轻链恒定区
<400> 13
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 14
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA BM1的重链
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Thr Tyr Arg Gly His Ser Asp Thr Tyr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ala Ile Tyr Asp Gly Tyr Asp Val Leu Asp Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Glu Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 15
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA BM1的轻链
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Arg Lys Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 16
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 16
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 17
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠源B1H2的VH
<400> 17
gaggtccagt tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggata cacattaact aactatgtta tgcactggat gaaacagaag 120
cctgggcagg gccttgagtg gattggattt attattcctt tcaatgatgg tactaaatac 180
aatgagcact tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccaa cacagcctac 240
atggttctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aaggtatgat 300
ttcgagggtt acttcgatgt ctggggcgca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354
<210> 18
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> huB1H2-V4、huB1H2-V10、huB1H2-V16、huB1H2-V22和huB1H2-V33的VH
<400> 18
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
agctgcaagg ccagcggcta cacactgaca aattacgtga tgcactgggt gagacaggcc 120
cctggccagg gcctggagtg gatcggattc atcatcccct tcaacgatgg caccaagtac 180
aatgagcact tcaagggcag agtgaccatc accagcgata cctccatctc caccgcctac 240
atgcagctgt ccagcctgag gtccgaggat accgccgtgt actactgcgc caggtacgac 300
ttcgagggct acttcgacgt gtggggccag ggcaccctgg tgaccgtgtc cagc 354
<210> 19
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠源B1H2的VL
<400> 19
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
atcagttgca gtgcaagtca ggacattacc aattttttaa actggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctattcc acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat tattctctca ccatcagcaa cctggaacct 240
gaagatattg ccacttacta ttgtcagcag tatagtaacc ttccgtggac gttcggtggc 300
ggcaccaacc tggaaatcaa a 321
<210> 20
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> huB1H2-V33的VL
<400> 20
gacatccaga tgacacagag cccctccagc ctgagcgcca gcgtgggaga tagggtgacc 60
atcacctgta gcgcctccca ggatatcacc aacttcctga attggtatca acagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctactcc acctccagac tgcacagcgg cgtgccttcc 180
aggttcagcg gctccggctc cggcacagac ttcaccttca ccatctccag cctgcagcct 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaatc tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa g 321
<210> 21
<211> 993
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合的和人源化抗体重链恒定区
<400> 21
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 993
<210> 22
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合的和人源化抗体的轻链恒定区
<400> 22
cgtacggtgg cggcgccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg ttga 324
<210> 23
<211> 594
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组蛋白DT3C
<400> 23
Met Gly Ala Asp Asp Val Val Asp Ser Ser Lys Ser Phe Val Met Glu
1 5 10 15
Asn Phe Ser Ser Tyr His Gly Thr Lys Pro Gly Tyr Val Asp Ser Ile
20 25 30
Gln Lys Gly Ile Gln Lys Pro Lys Ser Gly Thr Gln Gly Asn Tyr Asp
35 40 45
Asp Asp Trp Lys Gly Phe Tyr Ser Thr Asp Asn Lys Tyr Asp Ala Ala
50 55 60
Gly Tyr Ser Val Asp Asn Glu Asn Pro Leu Ser Gly Lys Ala Gly Gly
65 70 75 80
Val Val Lys Val Thr Tyr Pro Gly Leu Thr Lys Val Leu Ala Leu Lys
85 90 95
Val Asp Asn Ala Glu Thr Ile Lys Lys Glu Leu Gly Leu Ser Leu Thr
100 105 110
Glu Pro Leu Met Glu Gln Val Gly Thr Glu Glu Phe Ile Lys Arg Phe
115 120 125
Gly Asp Gly Ala Ser Arg Val Val Leu Ser Leu Pro Phe Ala Glu Gly
130 135 140
Ser Ser Ser Val Glu Tyr Ile Asn Asn Trp Glu Gln Ala Lys Ala Leu
145 150 155 160
Ser Val Glu Leu Glu Ile Asn Phe Glu Thr Arg Gly Lys Arg Gly Gln
165 170 175
Asp Ala Met Tyr Glu Tyr Met Ala Gln Ala Cys Ala Gly Asn Arg Val
180 185 190
Arg Arg Ser Val Gly Ser Ser Leu Ser Cys Ile Asn Leu Asp Trp Asp
195 200 205
Val Ile Arg Asp Lys Thr Lys Thr Lys Ile Glu Ser Leu Lys Glu His
210 215 220
Gly Pro Ile Lys Asn Lys Met Ser Glu Ser Pro Asn Lys Thr Val Ser
225 230 235 240
Glu Glu Lys Ala Lys Gln Tyr Leu Glu Glu Phe His Gln Thr Ala Leu
245 250 255
Glu His Pro Glu Leu Ser Glu Leu Lys Thr Val Thr Gly Thr Asn Pro
260 265 270
Val Phe Ala Gly Ala Asn Tyr Ala Ala Trp Ala Val Asn Val Ala Gln
275 280 285
Val Ile Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Thr Ala Ala
290 295 300
Leu Ser Ile Leu Pro Gly Ile Gly Ser Val Met Gly Ile Ala Asp Gly
305 310 315 320
Ala Val His His Asn Thr Glu Glu Ile Val Ala Gln Ser Ile Ala Leu
325 330 335
Ser Ser Leu Met Val Ala Gln Ala Ile Pro Leu Val Gly Glu Leu Val
340 345 350
Asp Ile Gly Phe Ala Ala Tyr Asn Phe Val Glu Ser Ile Ile Asn Leu
355 360 365
Phe Gln Val Val His Asn Ser Tyr Asn Arg Pro Ala Tyr Ser Pro Gly
370 375 380
His Lys His Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro Lys Thr Asp Thr
385 390 395 400
Tyr Lys Leu Ile Leu Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr
405 410 415
Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys Val Phe Lys Gln Tyr Ala
420 425 430
Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys
435 440 445
Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val Ile Asp Ala Ser Glu Leu
450 455 460
Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val Ile Asn Gly Lys Thr Leu
465 470 475 480
Lys Gly Glu Thr Thr Thr Glu Ala Val Asp Ala Ala Thr Ala Glu Lys
485 490 495
Val Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly Val Asp Gly Glu Trp Thr
500 505 510
Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val Thr Glu Lys Pro Glu Val
515 520 525
Ile Asp Ala Ser Glu Leu Thr Pro Ala Val Thr Thr Tyr Lys Leu Val
530 535 540
Ile Asn Gly Lys Thr Leu Lys Gly Glu Thr Thr Thr Lys Ala Val Asp
545 550 555 560
Ala Glu Thr Ala Glu Lys Ala Phe Lys Gln Tyr Ala Asn Asp Asn Gly
565 570 575
Val Asp Gly Val Trp Thr Tyr Asp Asp Ala Thr Lys Thr Phe Thr Val
580 585 590
Thr Glu
<210> 24
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合的B1H2的VH
<400> 24
gaggtgcagc tgcagcagag cggccctgag ctggtgaagc ccggcgcttc cgtgaagatg 60
agctgcaagg ccagcggcta cacactgaca aattacgtga tgcactggat gaagcagaag 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggcttc atcatccctt ttaacgacgg caccaagtac 180
aacgagcact ttaagggcaa ggccacactg acatccgaca agagcagcaa taccgcctac 240
atggtgctgt ccagcctgac cagcgaggac tccgccgtgt actactgtgc caggtacgat 300
tttgagggct acttcgacgt gtggggcgcc ggcaccacag tgaccgtgag cagc 354
<210> 25
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 嵌合B1H2的VL
<400> 25
gacatccaga tgacccagac aacaagcagc ctgagcgcct ccctgggcga cagggtgaca 60
atctcctgca gcgccagcca ggacatcaca aacttcctga actggtatca acagaagccc 120
gacggcacag tgaagctgct gatctactcc acatccagac tgcactccgg cgtgccctcc 180
aggttctccg gctccggatc cggcacagat tactccctga ccatcagcaa cctggagcct 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaatc tgccttggac ctttggcggc 300
ggcaccaatc tggagatcaa g 321

Claims (18)

1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与B细胞成熟抗原(BCMA)结合，包含
i)重链可变区，其包含VH CDR1区、VH CDR2区和VH CDR3区，其中VH CDR1区、VH CDR2区和VH CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：1、2和3所示；和
ii)轻链可变区，其包含VL CDR1区、VL CDR2区和VL CDR3区，其中VL CDR1区、VL CDR2区和VL CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：4、5和6所示。
2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中重链可变区包含SEQID NOs：7、8或9所示的氨基酸，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝R、X3＝T，X1＝M、X2＝R、X3＝T，X1＝V、X2＝S、X3＝T，X1＝V、X2＝R、X3＝K，或X1＝V、X2＝S、X3＝K。
3.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中轻链可变区包含SEQID NOs：10或11所示的氨基酸序列，其中，在SEQ ID NO：11中，X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F，X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L，X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L，X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L，或X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝F。
4.如权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中重链可变区和轻链可变区分别包含如下所示的氨基酸序列：
(1)SEQ ID NOs：7和10；
(2)SEQ ID NOs：8和11，其中在SEQ ID NO：11中，X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F，X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L，X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L，或X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L；
(3)SEQ ID NOs：9和11，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝R、X3＝T，X1＝M、X2＝R、X3＝T，X1＝V、X2＝S、X3＝T，X1＝V、X2＝R、X3＝K，或X1＝V、X2＝S、X3＝K，在SEQ ID NO：11中，X1＝T、X2＝V、X3＝Y、X4＝F；
(4)SEQ ID NOs：9和11，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝R、X3＝T，X1＝M、X2＝R、X3＝T，X1＝V、X2＝S、X3＝T，X1＝V、X2＝R、X3＝K，或X1＝V、X2＝S、X3＝K，在SEQ ID NO：11中，X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝L；
(5)SEQ ID NOs：9和11，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝R、X3＝T，X1＝M、X2＝R、X3＝T，X1＝V、X2＝S、X3＝T，X1＝V、X2＝R、X3＝K，或X1＝V、X2＝S、X3＝K，在SEQ ID NO：11中，X1＝A、X2＝P、X3＝Y、X4＝L；
(6)SEQ ID NOs：9和11，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝R、X3＝T，X1＝M、X2＝R、X3＝T，X1＝V、X2＝S、X3＝T，X1＝V、X2＝R、X3＝K，或X1＝V、X2＝S、X3＝K，在SEQ ID NO：11中，X1＝A、X2＝V、X3＝F、X4＝L；或
(7)SEQ ID NOs：9和11，其中在SEQ ID NO：9中，X1＝V、X2＝S、X3＝T，在SEQ ID NO：11中，X1＝A、X2＝P、X3＝F、X4＝F。
5.如权利要求4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含重链恒定区和轻链恒定区，该重链恒定区包含SEQ ID NO：12所示的氨基酸，且与重链可变区相连，该轻链恒定区包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列，且与轻链可变区相连。
6.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其(a)结合人BCMA；(b)阻断人BCMA-人BAFF的结合；和(c)诱导对于BCMA表达细胞的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用。
7.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其为小鼠源、嵌合的或人源化的。
8.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其为IgG1、IgG2或IgG4亚型。
9.一种免疫偶联物，其包含权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分。
10.如权利要求9所述的免疫偶联物，其中单克隆抗体或其抗原结合部分与治疗剂偶联。
11.如权利要求10所述的免疫偶联物，其中治疗剂为细胞毒性剂。
12.如权利要求11所述的免疫偶联物，其中细胞毒性剂为重组DT3C蛋白，其中重组DT3C蛋白包含SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列。
13.一种核酸分子，其编码权利要求1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分。
14.一种表达载体，其包含权利要求13所述的核酸分子。
15.一种宿主细胞，其包含权利要求14所述的表达载体。
16.一种药物组合物，其包含
i)权利要求1至8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、权利要求9-12中任一项所述的免疫偶联物、权利要求13所述的核酸分子、权利要求14所述的表达载体、和/或权利要求15所述的宿主细胞，以及
ii)药学上可接受的载体。
17.权利要求16所述的药物组合物在制备一种用于治疗与BCMA表达增加相关的肿瘤的药物中的用途。
18.如权利要求17所述的用途，其中所述肿瘤为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
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