KR20220024199A - Ccr2/ccr5 길항제로서의 헤테로시클로알킬류 화합물 - Google Patents

Ccr2/ccr5 길항제로서의 헤테로시클로알킬류 화합물 Download PDF

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KR20220024199A
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옌허 천
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썬전 링팡 바이오테크 컴퍼니 리미티드
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Abstract

본 발명은 헤테로시클로알킬 구조를 갖는 일련의 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 CCR2/CCR5 길항제 관련 질병의 치료를 위한 약물의 제조에서 그의 응용에 관한 것으로, 구체적으로 식 (I)로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 개시한다.

Description

CCR2/CCR5 길항제로서의 헤테로시클로알킬류 화합물
본 출원은 2019년 6월 24일 중국 국가지식재산권국에 제출된 중국 발명특허출원 제CN201910554176.4호에 대한 우선권을 주장하며, 그 내용은 전체로서 본원에 인용의 방식으로 통합되었다.
본 발명은 헤테로시클로알킬 구조를 갖는 일련의 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 CCR2/CCR5 길항제 관련 질병의 치료를 위한 약물의 제조에서 그의 응용에 관한 것으로, 구체적으로 식 (I)로 표시되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.
케모카인(chemokine)은 백혈구 화학 유인물로 작용하는 전염증성 사이토카인을 분비하는 사이토카인의 작은 계열이다. 이는 염증 신호에 반응하여 혈관층에서 주변 조직으로 백혈구의 수송을 촉진한다. 주화성은 칼슘 유량 증가, cAMP 생성 억제, 세포골격 재배열, 인테그린 활성화 및 세포 운동 과정을 포함하는 신호 전달 경로를 개시함으로써 케모카인과 수용체 결합(GPCR)에서 시작하여 접착 단백질의 발현을 증가시킨다.
화학적 유도제 사이토카인(즉, 케모카인)은 세포 이동을 자극하는 상대적으로 작은 단백질(8-10kD)이다. 제1 및 제2 고도로 보존된 시스테인 사이의 아미노산 잔기 수에 따라 케모카인 계열은 4개의 하위 계열로 나뉜다. MCP-1(Monocyte chemoattractant protein-1)은 CC 케모카인 하위 계열(여기에서 CC는 인접한 제1 및 제2 시스테인이 있는 하위 계열을 나타냄)의 구성원이며 세포 표면 CCR2(chemokine receptor type 2)에 결합된다. MCP-1은 유효한 케모카인으로, 이는 CCR2에 결합한 후 단핵구 및 림프구가 염증 부위로 이동(즉, 주화성)하는 것을 매개한다. MCP-1은 심근세포, 혈관 내피 세포, 섬유아세포, 연골세포, 평활근 세포, 사구체 메산지움 세포(Glomerular mesangial cell), 폐포 세포, T 림프구, 식도암 등에 의해서도 발현된다. 단핵구는 염증 조직에 들어간 후 CCR5를 발현하는 대식세포로 분화하여 종양 괴사 인자-α(TNF-α), 인터루킨-1(IL-1), IL-8 CXC 케모카인 하위 계열을 포함한 여러 전염증 조절제의 2차 공급원을 제공한다. 여기에서 CXC는 제1 및 제2 시스테인 사이의 아미노산 잔기, IL-12, 아라키돈산(arachidonic acid) 대사물(예를 들어 PGE 2 및 LTB 4), 산소 유래 자유 라디칼, 매트릭스 메탈로프로테이나제(matrix metalloproteinase) 및 보체 성분을 나타낸다.
CCR2(CKR-2, MCP-1RA 또는 MCIRB라고도 함)는 주로 단핵구 및 대식세포 상에서 발현되며 대식세포 의존성 염증에 필요하다. CCR2는 케모카인 MCP 계열(CCL2, CCL7, CCL8 등)의 여러 구성원에 높은 친화도로 결합하는 G 단백질 결합 수용체(GPCR)이며, 주화성 신호를 유발하고 표적 수용체를 운반하는 세포의 이동을 유도한다. 만성 염증성 질환의 동물 모델에 대한 연구에서는 길항제가 MCP-1과 CCR2 간의 결합을 억제하고 염증 반응을 억제한다는 것이 입증되었다.
CCR5는 CCL3, CCL3L1, CCL4, CCL5, CCL7, CCL11 및 CCL13을 비롯한 다양한 CC 케모카인 리간드에 결합하는 G 단백질 결합 수용체이다. CCR2에 비해 생체 내 CCR5의 기능은 비교적 명확하지 않다. CCR2와 비교하여, CCR5는 주로 활성화된 Th1 세포 및 혈액 단핵구로부터 분화된 조직 대식세포에서 발현되며, 이는 CCR2 발현의 하향 조절을 동반한다. CCR5는 염증과 감염 과정에서 대식세포의 생존에 기여하고 염증이 있는 조직 내에서 대식세포를 유지하는 역할도 할 수 있는 것으로 나타났다. 또한 CCR5는 염증에서 Th1 세포의 모집 및 활성화를 매개한다. CCR5는 파골세포 상에서도 발현되며 파골세포 형성에 중요한 역할을 한다. 이는 류마티스 관절염의 병리학적 측면에서 CCR5가 기여함을 나타낸다. CCL4/CCR5가 관여하는 혈관 평활 세포의 활성화를 통해 죽상동맥경화증 및 AIH의 병리학에 기여할 수 있다(가속 내막 증식).
CCR2와 CCR5의 상보적 세포 분포와 차등적인 세포 기능은 두 수용체의 이중 표적이 단일 수용체를 표적으로 하는 것보다 더 큰 효능을 가질 수 있다는 이론적 근거를 제공한다. 단핵구/대식세포 생물학에서 CCR2는 골수에서 혈액으로, 혈액에서 조직으로 단핵구의 이동을 매개하는 중요한 역할을 한다. 여기에서 CCR5는 주로 염증 조직에서 대식세포의 활성화, 생존 및 가능한 유지를 조절한다. 또한, CCR5 차단은 단핵구/대식세포에 대한 효과 외에 T 세포 반응을 억제함으로써 이중 길항제의 치료 가능성을 향상시킬 수 있다. CCR2와 CCR5의 이중 표적 부위의 장점을 기반으로 CCR2/CCR5 길항제에 대한 심도 있는 연구도 시작되었으며, 현재 Tobira의 Cenicriviroc, Bristol Myers Squibb의 BMS-813160, Pfizer의 PF-04634817 등 4가지 약물이 임상에 진입했다. 따라서 CCR2/CCR5 길항제는 비교적 우수한 약물 제조 잠재력을 가지고 있으며, 여기에서 우리는 CCR2/CCR5 길항제의 헤테로시클로알킬류 화합물에 대한 특허 보호를 수행하였다.
WO2003014105A1은 화합물 Cenicriviroc(CVC), 참조물 A를 보고하였으며, 이의 구조는 하기와 같다.
Figure pct00001
Figure pct00002
본 발명은 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
Figure pct00003
여기에서,
n은 1, 2 및 3으로부터 선택되고,
R1은 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬이고, 상기 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되고,
R2는 C1-6 알킬이고, 상기 C1-6 알킬은 1, 2 또는 3개 Rb로 임의 치환되고,
R3는 C1-6 알콕시이고, 상기 C1-6 알콕시는 1, 2 또는 3개 Rc로 임의 치환되고,
X1은 O, S 및 -NH-로부터 선택되고,
L1은 -(CRR)m-이고,
L2는 -CRR-이고,
m은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고,
Ra, Rb 및 Rc는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN 및 CH3로부터 선택되고,
각 R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN 및 CH로부터 선택되고,
상기 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬은 -NH-, -O-, -S- 및 N으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자 또는 헤테로원자기를 각각 포함하고,
"*" 황 원자는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 형태로 존재하는 키랄 황 원자이다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R2는 C1-3 알킬이고, 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개 Rb로 임의 치환되며, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R2는 CH2CH3이고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R3는 C4-6 알콕시이고, 상기 C4-6 알콕시는 1, 2 또는 3개 Rc로 임의 치환되고 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R3는
Figure pct00004
이고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 L1은 -CH2CH2-이고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 구조 단위
Figure pct00005
는
Figure pct00006
이고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 L2는 -CH2-이고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R1은 옥세타닐(oxetanyl), 테트라히드로푸라닐(tetrahydrofuranyl), 테트라히드로피라닐(tetrahydropyranyl), 헥사히드로피리딜(hexahydropyridyl), 모르폴리닐(morpholinyl) 및 1,4-디옥사닐(1,4-dioxanyl)으로부터 선택되고, 상기 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 헥사히드로피리딜, 모르폴리닐 및 1,4-디옥사닐은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되며, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 R1은
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
,
Figure pct00011
,
Figure pct00012
,
Figure pct00013
,
Figure pct00014
,
Figure pct00015
,
Figure pct00016
및
Figure pct00017
로부터 선택되고, 상기
Figure pct00018
,
Figure pct00019
,
Figure pct00020
,
Figure pct00021
,
Figure pct00022
,
Figure pct00023
,
Figure pct00024
,
Figure pct00025
,
Figure pct00026
,
Figure pct00027
및
Figure pct00028
은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되며, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 구조 단위
Figure pct00029
는
Figure pct00030
,
Figure pct00031
,
Figure pct00032
,
Figure pct00033
,
Figure pct00034
,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
,
Figure pct00039
및
Figure pct00040
로부터 선택되고, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 구조 단위
Figure pct00041
는
Figure pct00042
,
Figure pct00043
,
Figure pct00044
,
Figure pct00045
,
Figure pct00046
,
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
,
Figure pct00050
,
Figure pct00051
,
Figure pct00052
,
Figure pct00053
,
Figure pct00054
및
Figure pct00055
로부터 선택되며, 기타 변수는 본 발명에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기로부터 선택된다.
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
여기에서 R1, R2, R3, X1, L1, L2는 본 발명에서 정의하는 바와 같다.
본 발명의 일부 방안은 상기 각 변수의 임의 조합으로 유래된다.
본 발명은 하기 식으로 표시되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 더 제공한다.
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
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Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기로부터 선택된다.
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
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Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
본 발명의 일부 방식에 있어서, 상기 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기로부터 선택된다.
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
본 발명은 유효 성분으로 치료 유효량의 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 더 제공한다.
본 발명은 CCR2/CCR5 길항제 관련 질병의 치료를 위한 약물 제조에서 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 응용을 더 제공한다.
본 발명은 비알코올성 지방간염 관련 질병의 치료를 위한 약물 제조에서 상기 화합물의 응용을 더 제공한다.
기술적 효과
본 발명의 화합물은 CCR2 및 CCR5 수용체에 대해 현저한 길항 효과를 갖는다. 본 발명의 화합물은 약물-약물 상호작용에 의한 안전 위험성을 현저히 감소시키며, 항체와 병용 시 참조 화합물 및 항체 조합군의 항종양 효과가 현저히 향상된다.
정의 및 설명
본원에 나열된 용어 및 단어는 달리 명시되지 않는 한 다음과 같은 의미를 갖는다. 하나의 특정 용어나 단어는 특별한 정의가 없는 경우 불확실하거나 불분명한 것으로 간주되어서는 안 되며, 상기 일반적인 의미로 이해되어야 한다. 본원에 상표명이 표시될 경우, 해당 상품 또는 그 활성 성분을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 신뢰할 수 있는 의학적 판단의 범위 내에 있고 인간 및 동물 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 제형에 대한 것이며, 과도한 독성, 자극성, 알레르기 반응 또는 기타 문제나 합병증이 없이 합리적인 이익/위험 비율에 상응한다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은 본 발명에서 발견된 구체적인 특정 치환기를 갖는 화합물과 상대적으로 무독성인 산 또는 염기로부터 제조된 본 발명의 화합물의 염을 의미한다. 본 발명의 화합물에 상대적 산성의 관능기가 함유되는 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매 중에서 화합물을 충분한 양의 염기와 이러한 화합물을 접촉시키는 방식을 통해 염기 부가염을 수득할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘 염 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물에 상대적 염기성의 관능기가 함유되는 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매 중에서 화합물을 충분한 양의 산과 이러한 화합물을 접촉시키는 방식을 통해 산 부가염을 수득할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염의 예시에는 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 탄산수소염, 인산, 인산일수소, 인산이수소, 황산, 황산수소, 요오드화수소산, 아인산을 포함하는 무기산염; 및 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베르산, 푸마르산, 락트산, 만델산, 프탈산, 벤젠술폰산, p-톨루엔설포닉산, 시트르산, 타르타르산 및 메탄술폰산 등과 유사한 산을 포함하는 유기산염이 포함된다. 또한 아미노산(예를 들어 아르지닌 등)의 염, 및 글루쿠론산 등과 같은 유기산의 염이 더 포함된다. 본 발명의 특정 화합물은 염기성 및 산성 관능기를 함유하므로, 임의 하나의 염기 또는 산 부가염으로 전환될 수 있다.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 염은 산 또는 염기를 함유하는 모화합물로부터 통상적인 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 물 또는 유기 용매 또는 이 둘의 혼합물에서 유리산 또는 염기 형태의 이러한 화합물과 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산을 반응시켜 제조한다.
본 발명의 화합물은 특정한 기하학적 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 모든 이러한 화합물을 고려하며, 여기에는 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)- 이성질체, 및 그의 라세미화 혼합물과 기타 혼합물이 포함된다. 예를 들어 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 풍부 혼합물이 있다. 모든 이러한 혼합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다. 알킬 등 치환기에는 추가적인 비대칭 탄소 원자가 존재할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 범위에 포함된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "거울상 이성질체" 또는 "광학 이성질체"는 서로 거울상인 입체 이성질체를 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한 용어 "시스-트랜스 이성질체" 또는 "기하학적 이성질체"는 이중 결합 또는 고리 형성 탄소 원자 단일 결합으로 인해 자유롭게 회전할 수 없어 유발된다.
달리 명시되지 않는 한 용어 "부분입체 이성질체"는 분자가 2개 이상의 키랄 중심을 가지며 분자 간의 관계가 거울상이 아닌 입체 이성질체를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한 "(+)"는 우회전을 의미하고 "(-)"은 좌회전을 의미하며 "(±)"은 라세미화를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 쐐기형 실선 결합(
Figure pct00122
)과 쐐기형 점선 결합(
Figure pct00123
)을 사용하여 하나의 입체 중심의 절대 구성을 나타내며, 직선형 실선 결합(
Figure pct00124
)과 직선형 점선 결합(
Figure pct00125
)을 사용하여 입체 중심의 상대 구성을 나타내고, 물결선(
Figure pct00126
)을 사용하여 쐐기형 실선 결합(
Figure pct00127
) 또는 쐐기형 점선 결합(
Figure pct00128
)을 나타내거나, 또는 물결선(
Figure pct00129
)을 사용하여 직선형 실선 결합(
Figure pct00130
)과 직선형 점선 결합(
Figure pct00131
)을 나타낸다.
달리 명시되지 않는 한, 탄소-탄소 이중 결합, 탄소-질소 이중 결합, 질소-질소 이중 결합과 같은 이중 결합 구조가 화합물에 존재하고, 이중 결합 상의 각 원자에 모두 두 개의 상이한 치환기가 연결된 경우(질소 원자를 포함하는 이중 결합, 질소 원자 상의 한 쌍의 고립 전자쌍은 그 연결된 하나의 치환기로 간주함), 상기 화합물의 이중 결합 상의 원자와 그 치환기 사이를 물결선(
Figure pct00132
)을 이용해 연결한다면, 이는 상기 화합물의 (Z)형 이성질체, (E)형 이성질체 또는 두 이성질체의 혼합물을 의미한다. 예를 들어 하기 식 (A)는 상기 화합물이 식 (A-1) 또는 식 (A-2)의 단일 이성질체 형태로 존재하거나 식 (A-1)과 식 (A-2) 두 가지 이성질체의 혼합물 형태로 존재함을 나타낸다. 하기 식 (B)는 상기 화합물이 식 (B-1) 또는 식 (B-2)의 단일 이성질체 형태로 존재하거나 식 (B-1)과 식 (B-2) 두 가지 이성질체의 혼합물 형태로 존재함을 나타낸다. 하기 식 (C)는 상기 화합물이 식 (C-1) 또는 식 (C-2)의 단일 이성질체 형태로 존재하거나 식 (C-1)과 식 (C-2) 두 가지 이성질체의 혼합물 형태로 존재함을 나타낸다.
Figure pct00133
달리 명시되지 않는 한, 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질체 형태"는 실온에서 상이한 관능기의 이성질체가 동적 평형 상태에 있고 서로 빠르게 변환될 수 있음을 의미한다. 호변 이성질체가 가능한 경우(예를 들어 용액에서) 호변 이성질체의 화학적 평형에 도달할 수 있다. 예를 들어, 양성자 호변 이성질체(proton tautomer)(항양성자 호변 이성질체(prototropic tautomer)라고도 함)에는 케토-에놀 이성질체화 및 이민-엔아민 이성질체화와 같은 양성자 이동을 통한 상호 전환이 포함된다. 원자가 이성질체(valence tautomer)는 상호 변환을 수행하는 결합 전자의 일부 재조합을 포함한다. 케토-에놀 호변 이성질체화의 구체적인 예는 펜탄-2,4-디온(pentane-2,4-dione)과 4-하이드록시펜트-3-엔-2-온(4-hydroxypent-3-en-2-one)의 두 호변 이성질체 사이의 호변 이성질체화이다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "풍부한 이성질체", "이성질체 풍부", "풍부한 거울상 이성질체" 또는 "거울상 이성질체 풍부"는 그중 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 100% 미만임을 의미한다. 또한 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량은 60% 이상, 또는 70% 이상, 또는 80% 이상, 또는 90% 이상, 또는 95% 이상, 또는 96% 이상, 또는 97% 이상, 또는 98% 이상, 99% 또는 이상, 99.5% 또는 이상, 99.6% 또는 이상, 99.7% 또는 이상, 99.8% 또는 이상, 99.9% 또는 이상이다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "이성질체 과량" 또는 "거울상 이성질체 과량"은 2개의 이성질체 또는 2개의 거울상 이성질체의 상대 백분율 간의 차이를 지칭한다. 예를 들어, 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량은 90%이고, 다른 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량은 10%이면, 이성질체 또는 거울상 이성질체 과량(ee 값)은 80%이다.
키랄 합성 또는 키랄 시약 또는 기타 일반전인 기술을 통해 광학 활성 (R)- 및 (S)-이성질체 및 D 및 L 이성질체를 제조할 수 있다. 본 발명의 특정 화합물의 거울상 이성질체를 얻고자 한다면, 비대칭 합성 또는 키랄 보조제를 사용한 유도 작용을 통해 제조할 수 있으며, 여기에서 획득한 부분입체 이성질체 혼합물은 분리하고 보조기가 절단되어 순수한 원하는 거울상 이성질체를 제공한다. 또는 분자가 염기성 관능기(예를 들어 아미노) 또는 산성 관능기(예를 들어 카르복실)를 포함하는 경우, 적합한 광학 활성의 산 또는 염기와 부분입체 이성질체 염을 형성한 후, 기존의 당업계에 공지된 방법을 통해 부분입체 이성질체를 분해된 다음, 순수한 거울상 이성질체를 회수한다. 또한 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체의 분리는 일반적으로 크로마토그래피의 사용을 통해 완성되며, 상기 크로마토그래피는 키랄 고정상을 사용하며 선택적으로 화학적 유도체화와 결합된다(예를 들어 아민으로부터 아미노포름산염 생성).
본 발명의 화합물은 상기 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 삼중수소(3H), 요오드-125(125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 화합물을 표지할 수 있다. 다른 예로, 중수소로 수소를 대체하여 중수소화 약물을 형성할 수 있으며, 중수소와 탄소가 구성하는 결합은 일반 수소와 탄소에 의해 구성되는 결합보다 견고하고, 중수소화되지 않은 약물에 중수소화 약물은 독성 부작용을 감소시키고 약물 안정성을 증가시키며 치료 효능을 높이고 약물의 생물학적 반감기를 연장하는 장점 등을 제공한다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 성분의 변환은 방사성 여부에 관계없이 본 발명의 범위에 포함된다. "선택적" 또는 "선택적으로"는 후술하는 사건이나 조건이 발생할 수 있으나 반드시 일어날 필요는 없음을 의미하며, 상기 설명에는 사건 또는 조건이 발생한 상황 및 발생하지 않은 상황이 포함된다.
용어 "치환된"은 특정 원자 상의 임의 하나 이상의 수소 원자가 치환기로 치환됨을 의미하며, 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환된 화합물이 안정적인 한 중수소 및 수소 변이체를 포함할 수 있다. 치환기가 산소(즉 =O)인 경우, 두 개의 수소 원자가 치환됨을 의미한다. 방향족 그룹에서는 산소 치환이 일어나지 않는다. 용어 "임의로 치환된"은 치환 또는 비치환될 수 있음을 의미하며, 달리 명시되지 않는 한, 치환기의 종류 및 개수는 화학적으로 구현 가능한 것을 기반으로 임의적일 수 있다.
임의 변수(예를 들어 R)가 화합물의 구성이나 구조에서 1회 이상 발생하는 경우 이는 각 경우의 정의가 독립적이다. 따라서 예를 들어, 하나의 그룹이 0-2개 R로 치환되는 경우, 상기 그룹은 최대 2개 R로 임의 치환될 수 있으며, R은 각 경우에 독립적인 옵션을 갖는다. 또한 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.
-(CRR)0-와 같이 연결기의 수가 0인 경우, 상기 연결기가 단일 결합임을 의미한다.
그중 하나의 변수가 단일 결합에서 선택되면, 그 연결된 두 그룹이 직접 연결됨을 의미하며, 예를 들어 A-L-Z에서 L이 단일 결합을 나타내는 경우 상기 구조가 실제로 A-Z임을 의미한다.
하나의 치환기가 비어있다는 것은 치환기가 없음을 의미하며, 예를 들어 A-X에서 X가 비어있다는 것은 그 구조가 실제로 A임을 의미한다. 나열된 치환기에서 어느 원자를 통해 치환된 그룹에 연결되었는지 지정되지 않는 경우, 이러한 치환기는 임의의 원자를 통해 결합될 수 있다. 예를 들어, 피리딜은 치환기로서 피리딘 고리 중 임의 하나의 탄소 원자에 의해 치환된 그룹에 연결될 수 있다.
나열된 연결기에서 그 연결 방향이 지정되지 않은 경우 그 연결 방향은 임의적이다. 예를 들어
Figure pct00134
에서 연결기 L은 -M-W-이며, 이때 -M-W-는 왼쪽에서 오른쪽으로 판독하는 순서와 동일한 방향에 따라 고리 A와 고리 B를 연결하여
Figure pct00135
를 구성할 수 있으며, 왼쪽에서 오른쪽으로 판독하는 순서와 반대의 방향에 따라 고리 A와 고리 B를 연결하여
Figure pct00136
을 구성할 수도 있다. 상기 연결기, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.
달리 명시되지 않는 한, 특정 그룹에 하나 이상의 연결 가능한 부위가 있는 경우, 상기 그룹의 어느 하나 이상의 부위는 화학 결합을 통해 다른 그룹과 연결될 수 있다. 상기 화학 결합의 연결 방법이 위치가 결정적이지 않고 연결 가능한 부위에 H 원자가 존재하는 경우 상기 부위의 H 원자의 수는 상기 화학 결합의 수에 따라 감소하여 상응하는 원자가의 그룹으로 바뀔 수 있다. 상기 부위와 다른 그룹이 연결된 화학 결합은 직선형 실선 결합(
Figure pct00137
), 직선형 점선 결합(
Figure pct00138
) 또는 물결선(
Figure pct00139
)으로 표시될 수 있다. 예를 들어 -OCH3의 직선형 실선 결합은 상기 그룹 내의 산소 원자를 통해 다른 그룹과 연결됨을 나타낸다.
Figure pct00140
중의 직선형 점선 결합은 상기 그룹 내 질소 원자의 두 말단을 통해 다른 그룹과 연결됨을 나타낸다.
Figure pct00141
중의 물결선은 상기 페닐기 중의 1개 및 2개 탄소 원자를 통해 다른 그룹에 연결됨을 나타낸다.
Figure pct00142
는 피페리디닐 상기 어느 연결 가능한 부위가 상기 1개 화학 결합을 통해 다른 그룹과 연결됨을 나타내며, 적어도
Figure pct00143
,
Figure pct00144
,
Figure pct00145
및
Figure pct00146
의 4가지 연결 방식을 포함한다. -N- 상에 H 원자로 그려지더라도
Figure pct00147
은 여전히
Figure pct00148
의 연결 방식의 그룹을 포함하나, 1개의 화학 결합이 연결되면 해당 부위의 H가 이에 대응하도록 1 감소하여 해당하는 1가 피페리디닐이 된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "4-6원 헤테로시클로알킬"은 그 자체로 또는 다른 용어와 조합하여 4 내지 6개 고리 원자로 구성된 포화 고리형 기를 의미하며, 그 1, 2 또는 3개 고리 원자는 독립적으로 O, NH 및 N에서 선택되는 헤테로 원자이며 나머지는 탄소 원자이다. 여기에서 질소 원자는 임의로 4차화되며, 용어 "4-6원 헤테로시클로알킬"은 모노시클릭 시스템이다. 또한 상기 "4-6원 헤테로시클로알킬기"와 관련하여, 헤테로 원자는 헤테로시클로알킬과 분자 그 나머지 부분의 연결 위치를 차지할 수 있다. 상기 4 내지 6원 헤테로시클로알킬은 4 내지 6원, 4 내지 5원, 5 내지 6원, 4원, 5원, 6원 헤테로시클로알킬 등을 포함한다. 4 내지 6원 헤테로시클로알킬의 예에는 아제티디닐(azetidinyl), 옥세타닐(oxetanyl), 피롤리디닐(pyrrolidinyl), 피라졸리디닐(pyrazolidinyl), 이미다졸리디닐(imidazolidinyl), 테트라히드로푸라닐(tetrahydrofuranyl)(테트라히드로푸란-2-일 등 포함), 테트라히드로피라닐(tetrahydropyranyl), 피페리디닐(piperidinyl)(1-피페리디닐, 2-피페리디닐 및 3-피페리디닐 등), 피페라지닐(piperazinyl)(1-피페라지닐 및 2-피페라지닐 등 포함), 모르폴리닐(morpholinyl)(3-모르폴리닐 및 4-모르폴리닐 등 포함) 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-6 알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자로 구성된 직선형 또는 분지형의 포화 탄화수소기를 나타내는 데 사용된다. 상기 C1-6 알킬은 C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-4, C6 및 C5 알킬 등을 포함하며, 이는 1가(예를 들어 메틸), 2가(예를 들어 메틸렌) 또는 다가(예를 들어 메틴)일 수 있다. C1-6 알킬의 예에는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(n-프로필 및 이소프로필 포함), 부틸(n-부틸, 이소부틸, s-부틸 및 t-부틸 포함), 펜틸(n-펜틸, 이소펜틸 및 네오펜틸 포함), 헥실 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자로 구성된 직선형 또는 분지형의 포화 탄화수소기를 나타내는 데 사용된다. 상기 C1-3 알킬은 C1-2 및 C2-3 알킬 등을 포함하며, 이는 1가(예를 들어 메틸), 2가(예를 들어 메틸렌) 또는 다가(예를 들어 메틴)일 수 있다. C1-3 알킬의 예시에는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(n-프로필 및 이소프로필 포함) 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-6 알콕시"는 산소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착된 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬을 지칭한다. 상기 C1-6 알콕시는 C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-4, C6, C5, C4, 및 C3 알콕시 등을 포함한다. C1-6 알콕시의 예시에는 메톡시, 에톡시, 프로폭시(n-프로폭시 및 이소프로폭시 포함), 부톡시(n-부톡시, 이소부톡시, s-부톡시 및 t-부톡시), 펜톡시(n-펜톡시, 이소펜톡시 및 네오펜톡시), 헥실옥시 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C4-6 알콕시"는 산소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착된 4 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬을 지칭한다. 상기 C4-6 알콕시는 C4-6, C4-5, C6, C5, C4 알콕시 등을 포함한다. C5-6 알콕시의 예에는 부톡시(n-부톡시, 이소부톡시, s-부톡시 및 t-부톡시 포함), 펜톡시(n-펜톡시, 이소펜틸옥시 및 네오펜틸옥시 포함), 헥실옥시 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
용어 "이탈기"는 치환 반응(예를 들어 친핵성 치환 반응)을 통해 다른 관능기 또는 원자에 의해 치환될 수 있는 관능기 또는 원자를 의미한다. 예를 들어, 대표적인 이탈기로는 트리플루오로메탄술포네이트(trifluoromethanesulfonate); 염소, 브롬 및 요오드; 메탄술포네이트(methanesulfonate), 톨루엔술포네이트(toluenesulfonate), p-브로모벤젠술포네이트(p-bromobenzenesulfonate), p-톨루엔술포네이트(p-toluenesulfonate) 등과 같은 술포네이트기; 아세톡시, 트리플루오로아세톡시 등과 같은 아실옥시가 포함된다.
용어 "보호기"는 "아미노 보호기", "히드록실 보호기" 또는 "설피드릴 보호기"를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 아미노 질소 위치 상의 부반응을 방지하기에 적합한 보호기를 의미한다. 대표적인 아미노 보호기는 포르밀; 알카노일(예를 들어 아실, 트리클로로아세틸(trichloroacetyl) 또는 트리플루오로아세틸(trifluoroacetyl))과 같은 아실; tert-부톡시카보닐(Boc)과 같은 알콕시카르보닐(alkoxycarbonyl); 벤질옥시카르보닐(benzyloxycarbonyl)(Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카르보닐(9-fluorenylmethoxycarbonyl)(Fmoc)과 같은 아릴메톡시카르보닐; 벤질(Bn), 트리틸(Tr), 1,1-디-(4'-메톡시페닐)메틸과 같은 아릴메틸; 트리메틸실릴(TMS) 및 t-부틸디메틸실릴(TBS)과 같은 메틸실릴 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 용어 "히드록실 보호기"는 히드록실 부반응을 방지하기에 적합한 보호기를 의미한다. 대표적인 히드록실 보호기로는 메틸, 에틸 및 tert-부틸과 같은 알킬; 예를 들어 알카노일(예를 들어 아세틸)와 같은 아실; 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), p-플루오로메틸(Fm) 및 디페닐메틸(디페닐메틸, DPM)과 같은 아릴메틸; 트리메틸실릴(TMS) 및 t-부틸디메틸실릴(TBS)과 같은 메틸실릴 등이 포함되나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화합물은 하기에 열거된 구체적인 실시양태, 이들을 다른 화학적 합성 방법과 조합하여 형성된 실시양태, 및 당업자에게 잘 알려진 것을 포함하여 당업자에게 널리 공지된 다양한 합성 방법에 의해 제조할 수 있다. 당해 기술 분야에서 동등한 대안, 바람직한 구현은 본 발명의 실시예를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용되는 용매는 시중에서 획득할 수 있다. 본 발명은 다음 약어를 사용한다. aq는 물을 나타내고, HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우레아 헥사플루오로포스페이트(O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethylurea hexafluorophosphate)를 나타내고, EDC는 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 염산염(N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochlorid)을 나타내고, m-CPBA는 3-클로로퍼옥시벤조산(3-chloroperoxybenzoic acid)을 나타내고, CDI는 카르보닐 디이미다졸(carbonyl diimidazole)을 나타내고, DCM은 디클로로메탄(dichloromethane)을 나타내고, PE는 석유 에테르를 나타내고, DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트(diisopropyl azodicarboxylate)를 나타내고, DMF는 N,N-디메틸포름아미드(N,N-dimethylformamide)를 나타내고, DMSO는 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide)를 나타내고, EtOAc는 에틸 아세테이트를 나타내고, EtOH는 에탄올을 나타내고, MeOH는 메탄올을 나타내고, CBz는 아민 보호기인 벤질옥시카르보닐(benzyloxycarbonyl)을 나타내고, BOC는 아민 보호기인 tert-부톡시카르보닐(tert-butoxycarbonyl)를 나타내고, HOAc는 아세트산을 나타내고, NaCNBH3은 소듐 시아노보로하이드라이드(sodium cyanoborohydride)를 나타내고, THF는 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran)을 나타내고, Boc2O는 2-tert-부틸 다이카보네이트(di-tert-butyl dicarbonate)를 나타내고, TFA는 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)을 나타내고, DIPEA는 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine)을 나타내고, SOCl2는 티오닐 클로라이드(thionyl chloride)를 나타내고, CS2는 이황화탄소를 나타내고, TsOH는 p-톨루엔설포닉산을 나타내고, NFSI는 N-플루오로-N-(벤젠술포닐)벤젠술폰아미드(N-fluoro-N-(benzenesulfonyl)benzenesulfonamide)를 나타내고, n-Bu4NF는 테트라부틸암모늄 플루오라이드(tetrabutylammonium fluoride)를 나타내고, iPrOH는 2-프로판올을 나타내고, Pd(dppf)Cl2는 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 디클로라이드 팔라듐(II)(1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene dichloride palladium(II))을 나타내고, DEA는 디에틸아민을 나타내고, mp는 융점을 나타내고, LDA는 리튬 디이소프로필아미드(lithium diisopropylamide)를 나타내고, rt는 실온을 나타내고, O/N은 하룻밤을 나타내고, eq는 당량, 등가량을 나타내고, r/min은 회전 속도의 단위로 분당 회전 수를 나타낸다.
화합물은 당업계의 일반적인 명명 원칙에 따르거나 ChemDraw® 소프트웨어를 사용하여 명명하며, 시판되는 화합물은 공급업체 카탈로그 명칭을 사용한다.
도 1: 마우스 MC38 결장암 종양 모델의 종양 부피에 대한 WX001의 효과
하기 실시예는 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명을 불리한 방식으로 제한하려는 것은 아니다. 상기에서 본 발명을 상세히 설명하였으며, 여기에서 그 구체적인 실시예도 개시하였다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않는 범위에서 본 발명의 구체적인 실시예에 대하여 다양한 변경 및 수정을 진행할 수 있다.
참고예 1: 단편 BB-1A-7
Figure pct00149
단계 1: 화합물 BB-1A-2의 합성
테트라부틸암모늄 브로마이드(tetrabutylammonium bromide)(86.58g, 302.63mmol) 및 수산화칼륨(339.6g, 6.05mol)을 톨루엔(5000mL)에 현탁하고, 상기 혼합물을 16시간 동안 환류시키며, 여기에 피페리딘-2-온(500.00g, 5.04mol) 및 p-메톡시벤질 클로라이드(4-methoxybenzylchloride)(1.03kg, 6.56mol)를 첨가한다. 상기 혼합물을 100℃로 유지하고 24시간 동안 교반한다. 반응액을 상온으로 식힌 후 물(2000mL×3)로 3회 세척하고, 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조, 여과, 농축한다. 농축된 용액을 크로마토그래피 칼럼으로 분리하여 화합물 BB-1A-2를 수득한다.
단계 2: 화합물 BB-1A-4의 합성
화합물 BB-1A-2(40g)와 수산화나트륨(7.29g), 물(200mL) 용액을 80℃에서 24시간 동안 교반한다. 혼합물을 0℃에서 진한 염산(7.38mL)으로 중화하여 BB-1A-3의 혼합 용액을 얻었다. 상기 혼합물에 탄산나트륨(65.66g) 및 디메틸 술폭시드(600mL)를 실온에서 첨가하였다. 이어서, 5-브로모-2-플루오로-벤즈알데히드(5-Bromo-2-fluoro-benzaldehyde)(46.11g)를 100℃에서 혼합물에 점적하였다. 그 후 반응 혼합물을 100℃에서 48시간 동안 환류시켰다. 얼음조 냉각 하에서 염화암모늄(1mol/L) 수용액으로 반응을 pH=7로 조정하고, 에틸 아세테이트(1L x 3)로 추출하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트=200:1 내지 1:1)로 정제하였다. 화합물 BB-1A-4를 획득한다.
단계 3: 화합물 BB-1A-5의 합성
화합물 BB-1A-4(10g) 및 탄산나트륨(12.61g)의 아세토니트릴(100mL) 혼합물에 요오드화메틸(22g)과 아세토니트릴(50mL) 용액을 첨가하였다. 질소의 보호 하에, 반응 혼합물을 15 내지 30℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(300mL)로 ?칭하고, 에틸 아세테이트(400mL x 2)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50:1 내지 20:1 내지 10:1)로 정제하여 화합물 BB-1A-5를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 10.31 (s, 1H) 7.89 (d, J=2.5 Hz, 1H) 7.54 (dd, J=9.0, 2.51 Hz, 1H) 7.04 (d, J=8.5 Hz, 2H) 6.97 (d, J=9.0 Hz, 1H) 6.80 (d, J=8.5 Hz, 2H) 4.21 (s, 2H) 3.77 (s, 3H) 3.63 (s, 3H) 3.07 (t, J=6.8 Hz, 2H) 2.25 (t, J=6.8 Hz, 2H) 1.46 - 1.58 (m, 4H).
단계 4: 화합물 BB-1A-6의 합성
화합물 BB-1A-5(11g)의 용액에 디메틸 카보네이트(dimethyl carbonate)(42.8g) 용액에서 소듐 메톡시드(6.84g)를 첨가하였다. 이를 60℃로 가열하고 60℃에서 35시간 동안 교반하였다. 염화암모늄(1mol/L) 수용액으로 pH(7 내지 8)를 조절하고 반응 혼합물을 여과한다. 필터 케이크를 감압 하에 농축하여 화합물 BB-1A-6을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.74 (s, 1H) 7.26 (s, 1H) 7.05 - 7.11 (m, 3H) 6.88 (d, J=8.53 Hz, 2H) 6.53 (d, J=9.03 Hz, 1H) 4.39 (s, 2H) 3.80 (d, J=2.01 Hz, 6H) 3.48 (t, J=5.02 Hz, 2H) 2.58 (t, J=6.02 Hz, 2H) 1.47 (d, J=5.52 Hz, 2H).
단계 5: 화합물 BB-1A의 합성
화합물 BB-1A-6(10g)의 톨루엔(50mL) 용액에 트리플루오로아세트산(100mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃로 가열하고 60℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음조 냉각 하에서 포화 중탄산나트륨으로 pH=7로 중화시키고, 에틸 아세테이트(250mL x 2)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(석유 에테르/에틸 아세테이트=50:1 내지 5:1)으로 정제하여 화합물 BB-1A를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.66 (s, 1H) 7.39-7.05 (m, 1H) 6.85 (d, J=8.8 Hz, 1H) 6.36 (d, J=8.8 Hz, 1H) 3.81 (s, 3H) 3.51 (t, J=5.2 Hz 2H) 2.75 (d, J=6.8 Hz, 2H) 1.49-1.40 (m, 2H).
단계 6: 화합물 BB-1A-7의 합성
25℃에서 BB-1A(7.5g, 25.32mmol, 1eq) 및 BB-2(8.92g, 27.86mmol, 1.1eq)를 디메틸 술폭시드(62.5mL)와 물(12.5mL)에 용해시킨 후, 여기에 Pd(dppf)Cl2(926.50mg, 1.27mmol, 0.05 eq)와 탄산칼륨(10.50g, 75.97mmol, 3eq)을 첨가한 후, 질소 보호 하에 80℃에서 18시간 동안 반응시켰다. 먼저 용액을 여과한 후 여액에 물 100 mL를 넣고 에틸 아세테이트로 3회 추출(100mL×3)하며, 합한 유기상을 포화 식염수로 1회 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조 및 여과한 후 감압 농축하여 조생성물을 얻는다. 조생성물을 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 EA=20:1 내지 8:1)로 분리하여 화합물 BB-1A-7(8g)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):410.0(M+1) +
참고예 2: 단편 BB-1B
Figure pct00150
합성 경로:
Figure pct00151
단계 1: 화합물 BB-1B-2의 합성
25℃에서 반응물 BB-1B-1(45g)의 피리딘(450mL) 용액에 p-톨루엔술포닐 클로라이드(p-toluenesulfonyl chloride)(55.94g)를 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물(200mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하며, 합친 유기층을 포화 식염수(200mL)로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100:1 내지 10:1)으로 정제하였다. BB-1B-2를 획득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 10.51 (s, 1H), 8.04 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.73 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.63 - 7.59 (m, 1H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.24 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.38 (s, 3H)
단계 2: 화합물 BB-1B-3의 합성
0℃에서 BB-1B-2(59g)의 DMF(200mL) 용액에 수소나트륨(6.14g, 순도 60%) 및 DMF(50mL)를 첨가한 후, 혼합물을 질소 보호 하에서 25℃에서 2시간 동안 교반한다. 그 후 0℃에서 혼합물에 요오드화나트륨(23.02g) 및 에틸 4-브로모부티레이트(ethyl 4-bromobutyrate)(32.95g)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 질소 보호 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 그 후 0℃에서 혼합물에 나트륨 수소(6.14g, 60% 순도) 및 DMF(50mL)를 첨가한 다음, 혼합물을 80℃에서 질소 보호 하에 15시간 동안 교반하였다. 그 후 혼합물에 물(200mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(50mL x 3)로 추출하며, 합친 유기층을 포화 식염수(200mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 및 여과하였다. 감압 농축하여 황색 유상물을 수득하였다. 0℃에서 진한 황산(100mL, 98% 순도)과 아세트산(157.5g)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 90℃에서 2.5시간 동안 교반한다. 12 mol/L 수산화나트륨 수용액으로 혼합물을 pH=8로 조절한 다음, 에틸 아세테이트(300mL×3)로 추출하고, 포화 식염수(300 mL)로 합친 유기층을 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50:1 내지 5:1)으로 정제하였다. BB-1B-3를 획득한다.
단계 3: 화합물 BB-1B-4의 합성
반응물 BB-1B-3(6g) 및 Boc 무수물(15.16g)을 테트라히드로푸란(100mL)에 용해시키고, N,N-루티딘(N,N-lutidine)(4.58g)을 첨가하며, 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 물(100mL)로 ?칭하였다. 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하고, 합친 유기층을 포화 식염수(100mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 획득하였다. 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50:1 내지 20:1)로 잔류물을 정제하여 BB-1B-4를 수득하였다.
MS-ESI (m/z): 283.9[M-55]+
단계 4: 화합물 BB-1B-5의 합성
25℃에서 반응물 BB-1B-4(2.68g)의 디메틸 카보네이트(50mL) 용액에 소듐 메톡시드(2.13g)를 첨가한 다음, 혼합물을 질소 보호 하에 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(50mL)로 ?칭하였다. 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하고, 포화 식염수(100mL)로 합친 유기층을 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 획득하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(석유 에테르/에틸 아세테이트=50:1 내지 5:1)으로 정제하여 화합물 BB-1B-5를 수득하였다.
MS-ESI (m/z): 342.1[M-55]+
단계 5: 화합물 BB-1B-6의 합성
-40℃에서 반응물 BB-1B-5(1.7g)의 테트라히드로푸란(20mL) 용액에 수소화 붕소 나트륨(484.49mg)을 첨가하고 메탄올(10mL)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -15℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 물(50mL)로 ?칭하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 포화 식염수(100mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하며, 여과 및 감압 농축하여 화합물 BB-1B-6을 수득하였다.
단계 6: 화합물 BB-1B-7의 합성
반응물 BB-1B-6(1.93g)과 트리에틸아민(1.56mL)을 테트라히드로푸란(20mL) 용액에 녹이고 0℃에서 메탄술포닐 클로라이드(methanesulfonyl chloride)(1.29g)를 첨가하며 상기 혼합물을 질소 보호 하에 실온에서 15시간 동안 교반한다. 그 후 상기 혼합물에 1,8-디아자시클로[5,4,0]-운데센(1,8-diazacyclo[5,4,0]undecene)(1.14g)을 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물(50mL)로 ?칭하였다. 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기층을 포화 식염수(100mL)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조 후 여과 및 감압 농축하여 잔류물을 획득하며 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50:1~5:1)로 정제하여 화합물 BB-1B-7을 수득하였다.
MS-ESI (m/z): 326.0[M-55]+
단계 7: 화합물 BB-1B-8의 합성
질소 보호 하에 반응물 BB-1B-7(0.35g), BB-2(351.86mg) 및 탄산칼륨(379.64mg)에 디메틸 술폭시드(10mL) 및 물 용액에서 [1,1'-비스(디페닐포스핀)페로센]팔라듐 디클로라이드 디클로로메탄([1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride dichloromethane) 착화물(74.77mg)를 첨가한 후, 질소 보호 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 물(50mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(50mL x 3)로 추출하며, 합친 유기층을 염수(100mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 및 감압 하에 농축시켰다. 잔류물은 제조형 박층 크로마토그래피(PE:EA = 5:1)를 통해 정제하여 화합물 BB-1B-8을 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.74 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.51 (br d, J=8.8 Hz, 3H), 7.48 (br s, 1H), 7.01 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.20-4.16 (m, 2H), 3.85-3.80 (m, 5H), 3.56 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.92 (s, 2H), 2.05 (s, 1H), 1.66-1.58 (m, 2H), 1.56 (s, 9H), 1.45-1.35 (m, 4H), 0.94 (t, J=7.4 Hz, 3H)
단계 8: 화합물 BB-1B의 합성
반응물 BB-1B-8(0.23g)의 에틸 아세테이트(10mL) 용액에 4M 염산 에틸 아세테이트 용액(10mL)을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응액은 포화 탄산수소나트륨 수용액을 이용해 pH=8로 조절하고 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하고, 합친 유기층을 포화 식염수(100mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 및 감압 농축하여 화합물 BB-1B를 수득하였다. MS-ESI (m/z): 396.3[M+1] +
참고예 3: 단편 BB-1C
Figure pct00152
Figure pct00153
단계 1: 화합물 BB-1C-2의 합성
1M의 NaOH 수용액(381.18mL)에 메탄올(600mL), 6-아미노카프로산(6-aminocaproic acid)(50g) 및 4-메톡시벤즈알데히드(4-methoxylbenzaldehyde)(52g)를 첨가하였다. 상기 혼합물에 탄소상 팔라듐(4.5g, 10% 순도)을 첨가하고 반응 혼합물을 수소(20-30psi) 하의 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 감압 농축하며, 잔류물에 아세톤(300mL)을 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하며, 여과하여 아세톤(50mL)으로 세척하고, 필터 케이크를 진공 건조하여 화합물 BB-1C-2를 수득하였다.
MS-ESI m/z: 252.3 [M+H]+
단계 2: 화합물 BB-1C-3의 합성
BB-1C-2(86g, 342.19mmol, 1eq) 및 5-브로모-2-플루오로-벤즈알데히드(55.57g)를 디메틸 술폭시드(350mL)에 용해시키고, 여기에 탄산나트륨(90.67g) 및 물(175mL)을 첨가하며 반응액을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 물(1200mL)에 붓고 진한 염산으로 pH=3-4로 조정하고 에틸 아세테이트(500mL x 2)로 추출하며 합친 유기층을 포화 식염수(500mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨다. 여과 및 농축 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 1/1)에 적용하여 화합물 BB-1C-3을 수득하였다.
MS-ESI m/z: 434.2 [M+H]+
단계 3: 화합물 BB-1C-4의 합성
BB-1C-3(58g)의 N,N-디메틸포름아미드(300mL) 용액에 요오드화메틸(15.49mL) 및 탄산칼륨(36.91g)을 첨가하였다. 상기 반응액을 25℃에서 4시간 동안 교반한다. 반응액을 물(1000mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(500mL x 2)로 추출하며, 합친 유기층을 포화 식염수(500mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하며, 여과 및 농축시킨다. 잔류물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 7/3)를 거쳐 화합물 BB-1C-4를 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 10.31 (s, 1H), 7.90 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.98 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.81 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.22 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.06 (t, J=7.6 Hz, 2H), 2.25 (t, J=7.6 Hz, 2H), 1.58-1.51 (m, 4H), 1.27-1.25 (m, 2H).
MS-ESI m/z: 448.2 [M+H]+
단계 4: 화합물 BB-1C-5의 합성
BB-1C-4(10.8g)의 디에틸 카보네이트(diethyl carbonate)(500mL) 용액에 소듐 메톡시드(6.51g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 반응물에 물(500mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(300mL x 2)로 추출하며, 합친 유기층을 염수(500mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과 및 농축시켰다. 잔류물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(PE/EtOAc = 10/1)를 통해 화합물 BB-1C-5를 수득하였다.
MS-ESI m/z: 430.2, 432.2 [M+1, M+3]+
단계 5: 화합물 BB-1C의 합성
BB-1C-5(2.4g)의 톨루엔(10mL) 용액에 트리플루오로아세트산(10mL)를 첨가하고, 상기 반응액을 65℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액에 포화 탄산나트륨 수용액을 가하여 pH=8-9로 조절하고 에틸 아세테이트(20mL x 2)로 추출하며, 합친 유기층을 포화 식염수(20mL)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하여 여과 및 농축시킨다. 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트=5/1)로 정제하여 화합물 BB-1C를 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.55 (s, 1H), 7.29 (dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J=8.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.23 (brs, 2H), 2.23-2.20 (m, 2H), 1.74-1.70 (m, 2H), 1.65-1.59 (m, 2H).
MS-ESI m/z: 310.0 [M+H]+
참고예 4: 단편 BB-2
Figure pct00154
Figure pct00155
단계 1: 화합물 BB-2-2의 합성
화합물 BB-2-1(100g, 0.846mol), p-톨루엔술포닐 클로라이드(146.67g, 769.31mmol) 및 트리에틸아민(233.54g, 2.31mol)을 실온에서 디클로로메탄(0.5L)에 녹인 후 12시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각하고 용매를 감압 하에 제거하며 물(400 mL)을 첨가하여 잔류물을 용해시킨다. 수상은 에틸 아세테이트(1.5 L)로 3회 추출하고, 합친 유기상을 포화 식염수로 2회 세척하며(400 mL) 무수 황산나트륨으로 건조한다. 건조제를 여과 제거한 후 감압 하에서 용매를 제거하여 화합물 BB-2-2를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.73 (d, J=8.28 Hz, 2H) 7.27 (d, J=8.03 Hz, 2H) 4.05-4.10 (m, 2H) 3.50-3.55 (m, 2H) 3.30 (t, J=6.53 Hz, 2H) 2.37 (s, 3H) 1.35-1.44 (m, 2H) 1.16-1.27 (m, 2H) 0.81 (t, J=7.40 Hz, 3H).
단계 2: 화합물 BB-2의 합성
아세토니트릴(1.6L)에 화합물 BB-2-2(170.10g, 624.54mmol), p-히드록시페닐보론산피나콜에스테르(p-hydroxyphenylboronic acid pinacol ester)(137.44g, 624.54mmol)를 용해시키고, 상온에서 탄산칼륨(86.32g, 624.54mol) 및 요오드화칼륨(10.37g, 62.45mmol)을 첨가하였다. 수득한 용액을 60℃ 질소 보호 하에 가열 환류하고 12시간 동안 교반하여 반응시켰다. 실온으로 냉각한 후, 감압 하에 용매를 제거하고, 물(500 mL)을 첨가하여 잔류물을 용해시켰다. 수상을 에틸 아세테이트(2L x 3)로 3회 추출하고, 합친 다음 용매를 감압 제거하였으며, 칼럼 크로마토그래피를 통해 화합물 BB-2를 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.78-7.71 (m, 2H), 6.95-6.88 (m, 2H), 4.19-4.12 (m, 2H), 3.83-3.75 (m, 2H), 3.54 (t, J=6.8 Hz, 2H), 1.65-1.57 (m, 2H), 1.44-1.36 (m, 2H), 1.34 (s, 12H), 0.93 (t, J=7.3 Hz, 3H)。
참고예 5: 단편 BB-4A, 단편 BB-4B
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
단계 1: 화합물 BB-4-2의 합성
트리페닐포스핀(765.61g, 1.5eq)을 3.5L의 무수 테트라히드로푸란에 녹이고, 얼음조에서 기계적 교반(219r/min) 하에, DIAD(567.54mL)를 천천히 점적하였다. 내부 온도를 10℃ 이하로 제어하고 100분 동안 점적한 후 회전 속도를 400r/min까지 높이고 30분간 계속 교반하여 이를 충분히 반응시켜 백색 점성 고체를 형성하였다. 계속해서 얼음조에서 453.91 mL의 무수 에탄올을 천천히 첨가하고, 90분 후에 첨가를 완료한다(점적 반응 초기에는 발열이 상당히 심하므로 점적 가속도에 주의). 고체가 천천히 용해되고 용액이 최종적으로 투명해지면 BB-4-1(300g)을 첨가한다. 얼음조를 제거하고 오일조(oil bath)에 넣어 온도를 30 내지 35℃로 제어하며(온도가 40℃를 초과하면 선택성이 나빠지고 부산물이 증가함) 기계적 교반 200r/min 하에서 5시간 동안 교반한다. 반응액을 테트라히드로푸란을 40℃ 감압 하에서 스핀아웃하고, 4mol/L 염산 수용액(700mL)을 가하여 용액의 pH를 2로 조정하였다. 30분 동안 충분히 교반한 후, 에틸 아세테이트 용액 2L를 첨가하여 추출하였다. 5회 반복 추출한 후 TLC 플레이트와 LCMS로 관찰하여 세정한 후 유기상을 버리고 수상에 NaOH 65g을 가하여 40분간 교반한 후 pH를 10 이상으로 조절하였다(발열이 비교적 심하므로 온도에 주의). 에틸 아세테이트 용매 3L를 첨가하여 추출 수행하고, 추출을 3회 반복한 후 TLC 플레이트에서 관찰하여 세정한 후 유기상을 합쳤다. 무수 황산나트륨 40g을 첨가하여 건조하고 여과한 후 에틸 아세테이트를 감압 증발시켜 BB-4-2를 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.46 (s, 1H), 4.41 - 4.24 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 1.39 (q, J=7.4 Hz, 6H)
MS-ESI (m/z)：182.9 [M+H]+
단계 2: 화합물 BB-4-3의 합성
테트라히드로알루미늄리튬(59.36g)을 칭량하여 얼음조에서 무수 테트라히드로푸란 용액 1L를 첨가하고 속도(289r/min)로 기계적 교반을 수행하였다. 또한 화합물 BB-4-2(285g)를 무수 테트라히드로푸란 1L에 용해시키고, 얼음조에서 천천히 상기 용액을 점적하며, 온도를 10℃ 이하로 조절하여 1.5시간 점적한 후 완료하였다. 얼음조를 제거하고 기계적 교반 속도를 실온에서 변경하지 않고 유지하며 12시간 동안 반응시킨다. 얼음조 하에서 기계적 교반과 함께 탈이온수 60mL를 천천히 점적하여 반응을 완료한다. 수산화나트륨 수용액(4mol/L, 60mL)을 천천히 점적하고 15분 동안 교반한 다음, 탈이온수 180mL를 첨가하고 20분 동안 계속 교반한다. 무수 황산마그네슘 80g을 첨가하고 균일하게 교반한 후 감압 여과하였다. 필터 케이크를 디클로로메탄 5L로 5-6회 반복 세척하고, 여액을 합하여 40℃에서 감압 농축하여 BB-4-3을 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.51 (s, 1H), 4.82 (s, 3H), 4.27 (q, J=7.3 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.69 (t, J=7.3 Hz, 3H).
단계 3: 화합물 BB-4-4의 합성
화합물 BB-4-3(180g)을 무수 디클로로메탄 1.5L에 용해시키고 자기 교반한 후, 얼음조 하에서 염화티오닐(186.3mL)을 천천히 점적한 후, 얼음조를 제거하고 오일조로 바꾸어 40℃로 가열하고 질소 보호 하에 6시간 동안 교반하며 TLC 플레이트를 통해 반응이 완료된 것을 검출하였다. 반응 용액을 상온으로 냉각하고 용매를 40℃에서 감압 증발시켰다. 디클로로메탄(1L)을 첨가하여 감압 증류를 계속하고, 3회 농축을 반복한 후 워터펌프를 오일펌프로 변경하여 45분간 감압 회전을 계속하여 적색의 점성 고체 190g 조생성물을 수득하였다. 여기에 아세토니트릴 용액 380 mL를 넣고 70℃로 가열하여 2시간 동안 환류시킨 후 용해시키고, 가열을 차단하고 온도를 실온으로 낮추어 12시간 동안 계속 교반한다. 교반 하에 에틸 아세테이트 3L에 혼합 용액을 천천히 점적하고, 첨가가 완료된 후 30분 동안 교반을 계속하였다. 감압 하에서 흡인 여과하여 화합물 BB-4-4를 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.19 (s, 1H), 5.06 (s, 2H), 4.24 - 4.20 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.45 (t, J=7.3 Hz, 3H).
단계 4: 화합물 BB-4-5의 합성
p-플루오로니트로벤젠(p-fluoronitrobenzene)(97.64g)을 칭량하여 디메틸 술폭시드(1.1L)에 용해시키고, 얼음조 하에서 교반하면서 황화나트륨(59.38g)을 첨가하고 44시간 동안 계속 교반한다. 화합물 BB-4-4(90g)를 DMSO(450mL)에 용해시킨 후 반응액에 7시간 동안 천천히 점적하였다. 반응액에 염산 수용액(4M, 0.5L)을 가하여 pH를 3으로 조절하고 물 4L와 에틸 아세테이트 4L를 가하여 추출하고 30분 동안 교반하였다. 액체 분리가 완료된 후 수상에 고체 수산화나트륨을 첨가하여 pH를 10으로 조절하였다. 2L x 2 에틸 아세테이트를 첨가하여 추출을 수행하였다. 2회 추출된 유기상을 합치고, 1L의 포화 식염수로 세척하여 농축하였다. 유기상을 무수 황산나트륨을 첨가하여 건조시키고, 여과 및 농축시켰다. 회전 건조한 고체를 부수고 에틸 아세테이트 2mL 및 석유 에테르 100mL를 첨가하며 상온에서 1시간 동안 교반한 후 여과하였다. 필터 케이크를 감압 건조하여 BB-4-5를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.07 (d, J=8.78 Hz, 2H) 7.37 (s, 1H) 7.30 (d, J=8.78 Hz, 2H) 4.13 (s, 2 H) 3.92 (q, J=7.28 Hz, 2H) 2.06 (s, 3H) 1.40 (t, J=7.28 Hz, 3H).
단계 5: 화합물 BB-4-6의 합성
BB-4-5(64.72g)를 (1R,2R)-1,2-디페닐에탄-1,2-디올((1R,2R)-1,2-diphenylethane-1,2-diol)(100g)의 이소프로판올(5000mL) 용액에 첨가하고 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후 상기 혼합물에 티타늄 테트라이소프로폭사이드(titanium tetraisopropanolate)(66.32g)를 천천히 점거하고 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하여 황색 고체(95g)를 수득하였다. 수득한 고체(72g)를 디클로로메탄(360mL)에 용해시키고, 상기 용액에 tert-부탄올퍼옥시(14.17mL, 65% 순도)를 첨가하고, 상기 혼합물을 질소 하에 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 포화 수성 아황산나트륨(200mL)으로 ?칭한 다음, 2M 염산 수용액으로 pH 3으로 조절하였다. 액체를 분리하여 유기상을 버리고 수상은 8M 수산화나트륨 수용액으로 pH를 8로 조정하였다. 수상은 에틸 아세테이트(300mL x 3)로 추출하였다. 합친 유기상을 포화 식염수(300mL)로 세척 및 건조시키고, 여과 및 진공 농축하여 BB-4-6(조생성물)을 수득하였다.
단계 6: 화합물 BB-4A의 합성
반응물 BB-4-6(19g) 및 염화암모늄(34.65g)의 메탄올(250mL) 중의 용액에 아연 분말(42.35g)을 첨가하고 20℃에서 24시간 동안 교반하였다. 여과 후, 여액을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취용 제조형 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하여 화합물 BB-4A를 수득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.41 (s, 1H), 7.14-7.09 (m, J=8.5 Hz, 2H), 6.71-6.66 (m, J=8.5 Hz, 2H), 4.07-3.94 (m, 4H), 3.84 (dd, J=1.9, 7.4 Hz, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.38 (t, J=7.3 Hz, 3H)
MS-ESI (m/z):263.7(M+H)+
분리 방법: 화합물 BB-4A, BB-4B의 합성
화합물 BB-4(WO2018103757A1 중 화합물 BB-3I 합성 참조)를 초임계 유체 크로마토그래피(분리 조건 칼럼: ChiralPaK AD-3 150*4.6mm ID, 3μm 이동상: A: CO2 B: 에탄올(0.05%DEA), 구배: 5% ~40% B, 5.5분, 3분 동안 40% 유지, 그 후 1.5분 동안 5% B 유지, 유속: 2.5mL/분, 칼럼 온도: 40℃, 파장: 220nm)로 분리하여 이성질체 BB-4A(체류 시간 5.828분) 및 BB-4B(체류 시간 6.163분)를 획득하였다.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm 7.43 (s, 1H), 7.15-7.10 (m, 2H), 6.71-6.66 (m, 2H), 4.07-3.95 (m, 4H), 3.85 (dd, J=1.9, 7.3 Hz, 2H), 1.70 (s, 3H), 1.39 (t, J=7.3 Hz, 3H).
MS-ESI m/z: 264.0 [M+H] +
실시예 1
Figure pct00159
합성 경로:
Figure pct00160
단계 1: 화합물 WX001_1의 합성
25℃에서 화합물 BB-1A(3.89g, 13.14mmol)와 BB-3A(3g, 26.28mmol)를 1,2-디클로로에탄(50mL)에 용해시키고 여기에 소듐 트리아세톡시보로히드라이드(sodium triacetoxyborohydride)(11.14g,52.57mmol)를 첨가하며 25℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응액을 8M 수산화나트륨 수용액으로 pH=8로 조정하고, 에틸 아세테이트(100mL x 3)로 추출하며, 유기상을 합치고, 100mL 포화 식염수로 1회 세척하여 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하여 건조제를 제거하였다. 여액은 감압 농축하여 화합물 WX001_1을 획득하였다.
MS-ESI (m/z):394.20[M+1]+
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.69 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.23 - 7.20 (m, 1H), 6.61 (d, J=9.5 Hz, 1H), 4.00 (dd, J=4.4, 10.9 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.44 - 3.32 (m, 5H), 3.07 (d, J=7.0 Hz, 2H), 2.54 - 2.48 (m, 2H), 2.05 - 1.98 (m, 2H), 1.65 (br d, J=12.3 Hz, 2H)，1.46 - 1.41 (m, 2H).
단계 2: 화합물 WX001_2의 합성
25℃에서, 화합물 WX001_1(0.6g, 1.52mmol), 화합물 BB-2(487.29mg, 1.52mmol) 및 무수 탄산칼륨(630.91mg, 4.57mmol)을 디메틸설폭사이드(10mL) 및 물(2mL)의 혼합 용매에 용해시키고, 여기에 Pd(dppf)Cl2(222.68mg, 304.34μmol)를 첨가하였으며, 반응액은 질소 분위기 하의 80℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응액을 물(50mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(30mL×3)로 추출하며, 유기상을 합치고, 포화 식염수(100mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 후 여과하여 건조제를 제거하였다. 여액을 감압 농축하여 조생성물을 획득하였다. 조생성물을 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 WX001_2(0.603g)를 얻었다.
MS-ESI (m/z):508.20[M+1]+
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.88 (s, 1H), 7.45 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.40 (dd, J=2.4, 8.9 Hz, 1H), 7.34 (d, J=2.3 Hz, 1H), 6.96 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.82 - 6.77 (m, 1H), 4.18 - 4.14 (m, 2H), 4.01 (dd, J=3.8, 11.0 Hz, 2H), 3.83 - 3.78 (m, 7H), 3.56 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.48 (br t, J=5.3 Hz, 2H), 3.38 (t, J=11.0 Hz, 2H), 3.14 (d, J=7.0 Hz, 2H), 2.58 - 2.53 (m, 2H), 1.70 (br d, J=13.1 Hz, 2H), 1.65 - 1.60 (m, 2H), 1.51 - 1.44 (m, 3H), 1.29 - 1.26 (m, 2H), 0.94 (t, J=7.3 Hz, 3H)。
단계 3: 화합물 WX001_3의 합성
화합물 WX001_2(0.603g, 872μM)를 25℃에서 메탄올(10mL)과 물(2mL)에 용해시킨 후 수산화나트륨(520.50mg, 13.01mmol)을 첨가하고 반응액을 50℃로 가열하고, 43시간 동안 교반하였다. 반응액을 2M 묽은 염산 용액으로 pH=3으로 조정하고, 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하여 유기상을 합친다. 포화 식염수(100mL)로 1회 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하여 건조제를 제거하였다. 여액은 감압 농축 및 증발시켜 용매를 제거하여 WX001_3(0.537g)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):494.20[M+1]+
단계 4: 화합물 WX001의 합성
25℃에서 화합물 WX001_3(0.1g, 202.58μmol) 및 화합물 BB-4A(53.35mg, 202.58μmol)를 피리딘(5mL)에 용해시키고, 여기에 EDCI(77.67mg, 405.16μmol)를 첨가하였다. 반응액을 60℃로 가열하고 질소 분위기 하 6시간 동안 교반하였다. 반응액을 물(50mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(30mL×3)로 추출한 후 유기상을 합치고 포화 식염수(100mL)로 1회 세척하였다. 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하여 건조제를 제거하였으며, 여액은 감압 농축하여 용매를 제거하고 조생성물을 수득하였다. 조생성물은 제조용 HPLC(알칼리성)로 분리하여 WX001(0.032g)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):739.90[M+1]+.
1 H NMR (400MHz, CDCl3) δ= 7.92 (br s, 1H), 7.75 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 4H), 7.34 (s, 2H), 7.32 (s, 1H), 6.98 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.84 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.14 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 4.05 - 3.99 (m, 2H), 3.92 - 3.84 (m, 2H), 3.83 - 3.79 (m, 2H), 3.59 - 3.50 (m, 4H), 3.39 (br t, J=11.0 Hz, 2H), 3.17 (br d, J=7.0 Hz, 2H), 2.61 (br s, 2H), 2.10 (br s, 1H), 1.72 (br s, 1H), 1.69 (s, 4H), 1.66 - 1.63 (m, 2H), 1.46 - 1.42 (m, 2H), 1.42 - 1.36 (m, 7H), 0.94 (t, J=7.3 Hz, 3H).
실시예 18
Figure pct00161
합성 경로:
Figure pct00162
단계 1: 화합물 WX018_1의 합성
25℃에서 화합물 BB-1B(200mg, 937.77μmol)를 디클로로메탄(5mL)에 용해시키고, 화합물 BB-3B(370.88mg, 937.77μmol), 염화아연(63.91mg, 468.88μmol, 21.96μL) 및 황산마그네슘(225.75mg, 1.88mmol)를 첨가하여 2시간 동안 교반한 후, 소듐 아세테이트보로하이드라이드(596.25mg, 2.81mmol)를 첨가하고, 반응액을 질소 보호 하에 12시간 동안 교반하였다. 물(50mL)을 반응액에 첨가하고, 디클로로메탄(30mL x 2)으로 추출하고, 유기상을 합친 후 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기상을 스핀 건조하고 실리카겔 칼럼을 이용하여 분리 정제(실리카겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 10/1 내지 3/1)하여 WX018_1(360 mg)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):615.4[M+23] +
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 7.77 (s, 1H), 7.53 (d, J=2.26 Hz, 1H), 7.47 (d, J=8.53 Hz, 2H), 7.41 (dd, J=8.78, 2.26 Hz, 1H), 6.99 (d, J=8.53 Hz, 2H), 6.88 (d, J=8.53 Hz, 1H), 4.23 - 4.06 (m, 4H), 3.84 - 3.80 (m, 5H), 3.56 (t, J=6.65 Hz, 2H), 3.35 - 3.22 (m, 4H), 2.82 (br s, 2H), 2.73 - 2.60 (m, 2H), 1.89 (br s, 1H), 1.74 (br d, J=12.05 Hz, 2H), 1.66 - 1.59 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.36 (m, 2H), 1.14 (br d, J=10.54 Hz, 2H), 0.94 (t, J=7.40 Hz, 3H).
단계 2: 화합물 WX018_2의 합성
화합물 WX018_1(360mg, 607.32μmol)을 염산/에틸 아세테이트(4M, 5mL)에 용해시키고, 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 포화 탄산나트륨 용액으로 반응액의 pH를 8로 조정하고, 반응액에 물(20mL)을 첨가하였다 에틸 아세테이트(20mL×2)로 추출하여 유기상을 합친 후 포화 식염수(20mL) 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 및 여과한 후, 여액을 농축하여 화합물 WX018_2(300mg)를 획득하였다.
단계 3: 화합물 WX018_3의 합성
포름알데히드 수용액(45.34μL, 농도: 37%)을 화합물 WX018_2(300mg, 608.95μmol)의 메탄올(3mL) 및 디클로로메탄(3mL) 용액에 첨가하고 30분 동안 교반하였다. 소듐 아세테이트보로하이드라이드(193.59mg, 913.43μmol)를 첨가하고 25℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축 건조하고 물(20mL)을 첨가하며 에틸 아세테이트(20mL x 2)로 추출하여 유기층을 합친 후 포화 식염수(20mL)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 여과 후, 여액을 농축하여 화합물 WX018_3(254mg)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):507.1[M+1]+
단계 4: 화합물 WX018_4의 합성
25℃에서 화합물 WX018_3(254mg, 501.31μmol)의 에탄올(5mL) 및 물(5mL) 용액에 수산화나트륨(80.20mg, 2.01mmol)을 첨가하고 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하여 에탄올을 제거하고, 3N HCl를 이용해 pH=3으로 조정하고, 물(30mL)을 첨가하여 에틸 아세테이트(30mL x 2)로 추출하며 유기상을 합친 후 포화 식염수(50mL)로 세척하여 무수 황산나트륨을 건조 및 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 WX018_4(212mg)를 수득하였다. MS-ESI (m/z):493.0[M+1]+
단계 5: 화합물 WX018의 합성
25℃에서 화합물 WX018_4(113.33mg, 430.33μmol)를 BB-4A(212mg, 430.33μmol)의 피리딘(5mL) 용액에 첨가하고, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(82.49mg, 430.33μmol)을 첨가하여 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 물(20mL)을 반응액에 첨가하고, 에틸 아세테이트(20mL x 2)로 추출하여 유기상을 합치고, 포화 식염수(50mL)로 세척하여 무수 황산나트륨으로 건조한 후 여과하였다. 유기상을 농축하고 조생성물은 제조용 HPLC(염기성)로 분리 및 정제하였다. WX018(20mg)을 수득하였다.
MS-ESI (m/z):738.3[M+1]+
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δppm 8.44 (br s, 1H), 7.63 (d, J=8.78 Hz, 2H), 7.34 - 7.26 (m, 6H), 7.17 - 7.13 (d, J=8.78 Hz, 2H), 6.83 (m, 2H), 6.75 (d, J=8.53 Hz, 1H), 4.05 -3.96 (m, 2H), 3.91 - 4.81 (m, 2H), 3.72- 3.64 (m, 4H), 3.42 (t, J=6.65 Hz, 2H), 3.21 (br t, J=4.39 Hz, 2H), 2.13 (s, 2H) 2.80 - 2.70 (m, 4H), 2.13 (s，3H), 2.03 (br s, 2H), 1.77 (br t, J=11.17 Hz, 2H), 1.67 - 1.57 (m, 3H), 1.52 - 1.45 (m, 5H), 1.19 (t, J=7.40 Hz, 5H), 0.80 (t, J=7.40 Hz, 3H).
실시예 1의 단계 BB-1A 내지 WX001의 합성 방법을 참조하여, 하기 표 중 각 실시예를 합성한다.
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
실시예 18의 단계 BB-1B 내지 WX018의 합성 방법을 참조하여, 하기 표 중 각 실시예를 합성한다.
Figure pct00168
Figure pct00169
실시예 18의 단계 BB-1B 내지 WX018의 합성 방법을 참조하여, 하기 표 중 각 실시예를 합성한다.
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
각 실시예의 1H NMR와 MS 데이터
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
실시예 1: CCR2/CCR5 체외 시험
실험 목적:
FLIPR Calcium assay를 통해 세포내 칼슘 신호 변화를 검출하고, 화합물의 IC50 값을 지표로 삼아 CCR2 및 CCR5 수용체에 대한 화합물의 억제 작용을 평가한다.
실험 재료:
1. 세포주: 세포를 접종하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 밤새 배양한다.
CCR2/CCR5 밀도: 1 M (20k/well)
Figure pct00178
2. 시약: Fluo-4 Direct, (Invitrogen, Cat# F10471)
3. 장치 설비:
폴리라이신 코팅의 384 세포 플레이트(Greiner #781946)
384웰 화합물 플레이트(Greiner #781280)
FLIPR, 분자 장치
ECHO, Labcyte
4. 화합물:
화합물을 DMSO에 용해시켜 10mM 용액을 제조하고, 화합물 용액을 질소 상자에 넣었다.
Figure pct00179
작용제 참조 화합물:
Figure pct00180
실험 단계 및 방법:
FLIPR 측정 완충액에 프로베네시드(Probenecid) 준비: 77mg 프로베네시드에 1mL의 FLIPR 측정 완충액을 추가하여 250mM 용액을 제조한다. 매일 신선하게 제조한다.
2X(8uM) Fluo-4 DirectTM 로딩 완충액(10mL당)
Fluo-4 DirectTM 크리스탈(F10471) 한 병을 해동한다.
샘플 병에 FLIPR 측정 완충액 10mL를 첨가한다.
Fluo-Direct 10mL마다 프로베네시드 0.2mL를 첨가한다. 최종 측정 농도는 2.5mM이다.
회전하고 5분 초과 방치(차광)
매일 신선하게 제조한다.
실험 단계:
a) 작용제 화합물 제조:
MCP-1을 FLIPR 측정 완충액에서 0.5μM(최종 100nM)에서 시작하여 10개 그라디언트를 2배 희석한다. RANTES를 FLIPR 측정 완충액에서 0.5μM(최종 100nM)에서 시작하여 10개 그라디언트를 3배 희석한다. 화합물 플레이트맵(plate-map)에 따라 20μL의 연속 희석된 화합물 완충액을 DRC 플레이트의 각 웰에 첨가한다.
b) 길항제 화합물 제조: 길항제 참조 화합물
표준 화합물을 DMSO에서 1μM에서 시작하여 11개 그라디언트를 3배 희석한다. 피험 화합물을 DMSO에서 2μM에서 시작하여 11개 그라디언트를 3배 희석한다. Echo를 사용하여 250nL의 화합물 용액을 세포 플레이트에 옮긴다(Greiner#781946).
c) 배양기에서 세포 플레이트를 꺼내고 피펫을 사용하여 20μL의 2X Fluo-4 Direct 비세척 로딩 완충액을 384웰 세포 배양 플레이트에 부드럽게 분배한다. 최종 세포 플레이트의 부피는 40μL이다.
d) 37℃ 및 5% CO2에서 50분 동안 실온에서 10분 배양한다.
e) 배양기에서 세포 플레이트를 제거하고 이를 FLIPR에 놓는다. 복합 플레이트와 흡인 헤드 상자를 FLIPR에 넣는다.
f) DRC 플레이트의 경우:
1) FLIPRTETRA에서 방안 실행
2) 형광 신호 판독
3) DRC 플레이트에서 세포 플레이트로 10μL의 화합물 이동
4) 형광 신호 판독
5) Read 90에서 최대 허용 "최대-최소"까지 계산한다. FLIPR을 사용하여 각 세포주의 EC80 값을 계산한다.
6) 작용제 참조 화합물의 5 X EC80 농도 준비
g) 복합 플레이트의 경우(1-첨가):
1) FLIPRTETRA에서 방안 실행
2) 복합 플레이트에서 세포 플레이트로 5 X EC80의 농도로 작용제 참조 화합물 10μl를 옮긴다.
3) 형광 신호 판독
4) Read 90에서 최대 허용 "최대-최소"까지 계산
h) Prism을 사용하여 데이터를 분석하고 화합물의 IC50 값을 계산한다.
실험 결과는 표 1과 같다.
표 1 FLIPR 검출 IC50(nM) 테스트 결과
Figure pct00181
결론: 본 발명의 화합물은 CCR2 및 CCR5 수용체에 대해 현저한 길항 효과를 갖는다.
실험예 2 인간 간 마이크로솜 시토크롬(cytochromes) P450 동종효소(CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 및 CYP3A4) 활성의 억제작용
CYP의 5가지 동종효소의 총 5가지 특이성 프로브 기질은 페나세틴(PHenacetin, CYP1A2), 디클로페낙(Diclofenac, CYP2C9), (S)-메페니토인((S)-MepHenytoin, CYP2C19), 덱스트로메토르판(DextromethorpHan, CYP2C19), 미다졸람(Midazolam, CYP3A4)을 각각 인간 간 마이크로솜 및 시험 화합물과 함께 배양하였다. 환원성 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트(niacinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)를 첨가하여 반응을 개시하며, 반응 종료 후 샘플을 처리하고 LC-MS/MS 방법으로 특이성 기질로 인한 5가지 대사산물의 아세트아미노펜(AcetaminopHen), 4'-히드록시디클로페낙(4'-Hydroxydiclofenac), 4'-히드록시메페니토인(4'-HydroxymepHenytoin), 덱스트로판(DextrorpHan), 1'-히드록시미다졸람(1'-Hydroxymidazolam)에 대한 농도를 검출하여 상응하는 반억제 농도(IC50)를 계산하였다.
표 2 화합물의 반억제 농도
Figure pct00182
실험 결론: WX002 및 WX011은 인간 간 마이크로솜 사이토크롬 P450 동종효소(CYP1A2, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 및 CYP3A4)의 활성을 억제할 위험이 없으며, 여기에서 CYP2C19가 대사에 관여하는 약물은 시판 약물의 2%에 불과하고, CYP3A가 대사에 관여하는 약물은 시판 약물의 50%를 차지한다. 참조 화합물과 참조물 A는 CYP3A4에 대한 강력한 억제 효과가 있으며, 임상에서는 CYP3A4가 억제되어 CYP3A4에 의해 대사되는 다른 약물의 노출이 증가하여 잠재적인 안전성 위험, 즉 약물 간 상호작용이 발생할 수 있다. WX001은 약물 대사의 주요 대사 효소인 CYP3A4에 대한 억제 효과가 없으며 이러한 위험의 발생을 방지한다.
실험예 3 체내 동물 종양 모델에 대한 본 발명 화합물의 항종양 활성 테스트
실험 목적:
마우스 결장암 MC38 체내 종양 모델에서 본 발명 화합물과 마우스 항-PD-1 항체(RMP1-14, Bioxcell, 카탈로그 번호 BP0146)를 함께 사용할 때의 종양 억제 효과를 조사하였다.
실험 방법
암컷 C57BL/6 마우스에 MC38 마우스 대장암 세포주를 피하 접종하고, 접종 후 체중에 따라 무작위로 분류하여 하기 설명에 따라 투약 처리를 진행하였다.
제1군(대조군): 접종 당일 오후에 투여를 시작하였고, 용매 1(5% DMSO/95%(10% HP-β-CD: β-시클로덱스트린))을 0.1mL/10g체중의 용량으로 1일 2회 위내 투여하였다. 접종 후 11일, 14일 및 18일에 각각 용매 2(DPBS: Dulbecco's phosphate buffered saline)를 1회 0.1mL/10g체중의 용량으로 복강내 주사하였다.
제2군: 접종 후 11일, 14일, 18일에 각각 항-마우스 PD-1 항체(RMP1-14)를 1회 복강내 주사하였다. 11일째의 용량은 3mg/kg체중이고, 14일 및 18일째의 용량은 6mg/kg체중이다.
제3군: 접종 당일 오후부터 투여를 시작하며, CVC(Cenicriviroc)(5% DMSO+95%(10% HP-β-CD)에 용해, pH=4)를 매일 100mg/kg체중의 용량으로 위내 투여하였고, 동시에 접종 후 11일, 14일, 18일에 각각 항-마우스 PD-1 항체(RMP1-14)를 1회 복강내 주사하였다. 11일째의 용량은 3mg/kg체중이고, 14일 및 18일째의 용량은 6mg/kg체중이다.
제4군: 접종 당일 오후부터 투여를 시작하며, WX001(5% DMSO+95%(10% HP-β-CD)에 용해, pH=4)를 매일 100mg/kg체중의 용량으로 위내 투여하였고, 동시에 접종 후 11일, 14일, 18일에 각각 항-마우스 PD-1 항체(RMP1-14)를 1회 복강내 주사하였다. 11일째의 용량은 3mg/kg체중이고, 14일 및 18일째의 용량은 6mg/kg체중이다.
실험 기간에 매주 3회 마우스 체중을 칭량하며, 종양이 된 후 체중 칭량과 동시에 매주 3회 종양 부피를 측정하였다. 길이×너비2/2의 공식에 따라 종양 부피를 계산하였다. 공식에 따라 종양 증식률 및 억제율을 계산하였다. 종양 증식률 = 치료군 종양 부피/대조군 종양 부피 × 100%이고, 억제율 = (대조군 종양 부피-치료군 종양 부피)/대조군 종양 부피이다.
통계적 분석은 Student's t-test를 이용하였으며, p<0.05를 유의적 차이로 본다.
실험 결과:
표 3 각 군의 종양 증식률
Figure pct00183
마우스 MC38 결장암 종양 모델의 종양 부피에 대한 WX001의 영향은 명세서 첨부 도면 1과 같다.
실험 결과: 마우스 MC38 종양 모델에서 WX001+PD-1 조합군은 PD-1 단일 사용군에 비해 유의한 강화 효과가 있었고, 31일째 종양 증식률은 25.42%(용매군에 비해 p<0.01, CVC+PD-1 조합군에 비해 p<0.01)이었다.

Claims (19)

  1. 식 (I)로 표시되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서,
    Figure pct00184

    여기에서,
    n은 1, 2 및 3으로부터 선택되고,
    R1은 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬이고, 상기 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되고,
    R2는 C1-6 알킬이고, 상기 C1-6 알킬은 1, 2 또는 3개 Rb로 임의 치환되고,
    R3는 C1-6 알콕시이고, 상기 C1-6 알콕시는 1, 2 또는 3개 Rc로 임의 치환되고,
    X1은 O, S 및 -NH-로부터 선택되고,
    L1은 -(CRR)m-이고,
    L2는 -CRR-이고,
    m은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고,
    Ra, Rb 및 Rc는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN 및 CH3로부터 선택되고,
    각 R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN 및 CH로부터 선택되고,
    상기 4원 내지 6원 헤테로시클로알킬은 -NH-, -O-, -S- 및 N으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자 또는 헤테로원자기를 각각 포함하고,
    "*" 황 원자는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 형태로 존재하는 키랄 황 원자인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  2. 제1항에 있어서,
    R2는 C1-3 알킬이고, 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개 Rb로 임의 치환되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제2항에 있어서,
    R2는 CH2CH3인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항에 있어서,
    R3는 C4-6 알콕시이고, 상기 C4-6 알콕시는 1, 2 또는 3개 Rc로 임의 치환되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제4항에 있어서,
    R3는
    Figure pct00185
    인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제1항 내지 제3항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1은 -CH2CH2-인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 제6항에 있어서,
    구조 단위
    Figure pct00186
    는
    Figure pct00187
    인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  8. 제1항에 있어서,
    L2은 -CH2-인 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제8항에 있어서,
    R1은 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 헥사히드로피리딜, 모르폴리닐 및 1,4-디옥사닐으로부터 선택되고, 상기 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 헥사히드로피리딜, 모르폴리닐 및 1,4-디옥사닐은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제9항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00188
    ,
    Figure pct00189
    ,
    Figure pct00190
    ,
    Figure pct00191
    ,
    Figure pct00192
    ,
    Figure pct00193
    ,
    Figure pct00194
    ,
    Figure pct00195
    ,
    Figure pct00196
    ,
    Figure pct00197
    및
    Figure pct00198
    로부터 선택되고, 상기
    Figure pct00199
    ,
    Figure pct00200
    ,
    Figure pct00201
    ,
    Figure pct00202
    ,
    Figure pct00203
    ,
    Figure pct00204
    ,
    Figure pct00205
    ,
    Figure pct00206
    ,
    Figure pct00207
    ,
    Figure pct00208
    및
    Figure pct00209
    은 1, 2 또는 3개 Ra로 임의 치환되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    구조 단위
    Figure pct00210
    는
    Figure pct00211
    ,
    Figure pct00212
    ,
    Figure pct00213
    ,
    Figure pct00214
    ,
    Figure pct00215
    ,
    Figure pct00216
    ,
    Figure pct00217
    ,
    Figure pct00218
    ,
    Figure pct00219
    ,
    Figure pct00220
    및
    Figure pct00221
    로부터 선택되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제11항에 있어서,
    구조 단위
    Figure pct00222
    는
    Figure pct00223
    ,
    Figure pct00224
    ,
    Figure pct00225
    ,
    Figure pct00226
    ,
    Figure pct00227
    ,
    Figure pct00228
    ,
    Figure pct00229
    ,
    Figure pct00230
    ,
    Figure pct00231
    ,
    Figure pct00232
    ,
    Figure pct00233
    ,
    Figure pct00234
    ,
    Figure pct00235
    및
    Figure pct00236
    로부터 선택되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00237
    Figure pct00238

    Figure pct00239
    Figure pct00240

    Figure pct00241
    Figure pct00242
    로부터 선택되고,
    여기에서 R1, R2, R3, X1, L1, L2는 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  14. 하기 식으로 표시되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure pct00243
    Figure pct00244

    Figure pct00245
    Figure pct00246

    Figure pct00247
    Figure pct00248

    Figure pct00249
    Figure pct00250

    Figure pct00251
    Figure pct00252

    Figure pct00253
    Figure pct00254

    Figure pct00255
    Figure pct00256

    Figure pct00257
    Figure pct00258

    Figure pct00259
    Figure pct00260

    Figure pct00261
  15. 제14항에 있어서,
    하기로부터 선택되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure pct00262
    Figure pct00263

    Figure pct00264
    Figure pct00265

    Figure pct00266
    Figure pct00267

    Figure pct00268
    Figure pct00269

    Figure pct00270
    Figure pct00271

    Figure pct00272
    Figure pct00273

    Figure pct00274
    Figure pct00275

    Figure pct00276
    Figure pct00277

    Figure pct00278
    Figure pct00279

    Figure pct00280
  16. 제15항에 있어서,
    하기로부터 선택되는 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
    Figure pct00281
    Figure pct00282

    Figure pct00283
    Figure pct00284

    Figure pct00285
    Figure pct00286

    Figure pct00287
    Figure pct00288

    Figure pct00289
    Figure pct00290

    Figure pct00291
    Figure pct00292

    Figure pct00293
    Figure pct00294

    Figure pct00295
    Figure pct00296

    Figure pct00297
    Figure pct00298

    Figure pct00299
    Figure pct00300

    Figure pct00301
    Figure pct00302
  17. 유효 성분으로 치료 유효량의 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  18. CCR2/CCR5 길항제 관련 질병의 치료를 위한 약물 제조에서 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 제17항에 따른 약학 조성물의 응용.
  19. 비알코올성 지방간염 관련 질병의 치료를 위한 약물 제조에서 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 그의 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 제17항에 따른 약학 조성물의 응용.
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