KR20210107731A - Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체 - Google Patents

Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20210107731A
KR20210107731A KR1020217022296A KR20217022296A KR20210107731A KR 20210107731 A KR20210107731 A KR 20210107731A KR 1020217022296 A KR1020217022296 A KR 1020217022296A KR 20217022296 A KR20217022296 A KR 20217022296A KR 20210107731 A KR20210107731 A KR 20210107731A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
heavy chain
light chain
cdr2
cdr3
Prior art date
Application number
KR1020217022296A
Other languages
English (en)
Inventor
매튜 버거
조셉 앤소니 달레시오
토니 플레밍
비베크 라우니야르
유세비오 만차도 로블레스
Original Assignee
노파르티스 아게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 노파르티스 아게 filed Critical 노파르티스 아게
Priority to KR1020247012014A priority Critical patent/KR20240052881A/ko
Publication of KR20210107731A publication Critical patent/KR20210107731A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3053—Skin, nerves, brain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 출원은 항-PMEL17 항체, 이의 항원 결합 단편, GNAQ/GNA11 억제제에 접합된 상기 항체 또는 항원 결합 단편의 항체 약물 접합체를 개시한다. 본 발명은 또한, 항체, 항원 결합 단편, 및 항체 약물 접합체를 사용하여 암을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본원에는 항체, 항원 결합 단편, 및 항체 약물 접합체의 제조 방법, 및 상기 항체 및 항원 결합 단편을 진단 시약으로서 사용하는 방법이 개시되어 있다

Description

PMEL17에 대한 항체 및 이의 접합체
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되고, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된 서열 목록을 포함한다. 2019년 12월 6일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 PAT057400-WO-PCT_SL.txt이며, 크기가 285,253 바이트이다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 항-PMEL17 항체 또는 이의 단편, GNAQ/GNA11 억제제 접합체를 포함하는 이의 접합체 및 암의 치료 또는 예방을 위한 이들의 용도에 관한 것이다.
PMEL17(gp100 및 SILV로도 지칭됨)은 멜라닌 세포에 의해 생성되고 멜라닌 합성에 관여하는 단일-패스 유형 I 막관통 단백질이다. 그의 성숙에 따라, PMEL17은 세포 표면에서 일시적으로 발현된 후 멜라노좀으로 이동하며, 멜라노좀에서 PMEL17은 다중화되어 원섬유 시트를 형성하는 다양한 도메인으로 분해된다. 그런 다음 이러한 패턴은 멜라닌을 트랩하는 지지체 역할을 한다. 멜라노좀 PMEL17 발현은 계보 종양유전자인 MITF에 의해 조절되며, 다양한 원발성 및 전이성 피하 및 포도막 흑색종에서 상향 조절되는 것으로 밝혀졌다. PMEL17의 일시적인 세포 표면 발현 및 후속 내재화는 흑색종 치료를 위한 항체 약물 접합체(ADC) 개발에 적합한 표적이 된다.
PMEL17 및 암
성숙 과정에서, PMEL17은 프로-단백질 전환효소에 의해 과다하게 처리된다. 단백질은 N-말단의 Mα 및 C-말단의 Mβ를 형성하며, 아마도 이황화 가교를 통해 유지되는 2개의 하위 도메인을 형성하는 V467/K468 사이에서 절단된다. 골지 장치를 떠난 후, 일부 PMEL17 분자는 세포 표면에서 일시적으로 발현된다. 대부분의 PMEL17은 추가 성숙을 위해 멜라닌세포로 다시 향하는 반면, 일부 PMEL17은 떨어져 나가는 것처럼 보인다. 추가적인 효소적 절단 후, PMEL17은 멜라닌이 중합되는 원섬유 시트를 재구성하고 형성하는 다양한 도메인으로 분해된다(문헌[Valencia JC, et al. Sorting of Pmel17 to melanosomes through the plasma membrane by AP1 and AP2: evidence for the polarized nature of melanocytes. J Cell Sci. 2006 Mar 15;119(Pt 6):1080-91]; 문헌[Theos AC, et al. The Silver locus product Pmel17/gp100/Silv/ME20: controversial in name and in function. Pigment Cell Res. 2005 Oct;18(5):322-36)].
PMEL17은 흑색종 치료를 위한 잠재적인 치료 표적을 구성한다. PMEL17은 mRNA 발현 연구에서 관찰된 바와 같이, 흑색종의 계통 종양유전자인 MITF의 직접 전사 표적이다(문헌[Du J, et al. MLANA/MART1 and SILV/PMEL17/GP100 are transcriptionally regulated by MITF in melanocytes and melanoma. Am J Pathol. 2003 Jul;163(1):333-43]). PMEL17 발현은 피부 멜라닌세포, 모구 멜라닌세포, 망막 색소 상피, 색소 섬모 상피 및 가능하게는 망막의 맥락막 멜라닌 세포를 포함하는 멜라닌세포 계통으로 제한된다. PMEL17은 또한 피하 및 포도막 흑색종과 같은 멜라닌세포 계통 종양에서 고도로 발현된다. 대조적으로, mRNA 연구는 PMEL17 발현이 다른 종양 유형 및 정상 조직에 한정됨을 입증하였다(문헌[Wagner SN, Wagner C, Schultewolter T, Goos M. Analysis of Pmel17/gp100 expression in primary human tissue specimens: implications for melanoma immuno-and gene-therapy. Cancer Immunol Immunother. 1997 Jun;44(4):239-47]). 또한, PMEL17을 표적으로 하는 ADC 및 ImmTAC 화합물은 생체 내 및 시험관 내에서 흑색종의 사멸을 특이적으로 유도하는 것으로 이전에 설명되었으며, 현재 임상 시험에서 평가되고 있다(문헌[Chen Y, et al. The melanosomal protein PMEL17 as a target for antibody drug conjugate therapy in melanoma. J Biol Chem. 2012 Jul 13;287(29):2408291. doi:10.1074/jbc.M112.361485. Epub 2012 May 21]).
GNAQ/GNA11 및 암
GNAQ 및 GNA11 유전자는 이종삼량체 G 단백질 Gq/11의 알파 서브유닛을 암호화하며, 이는 거의 보편적으로 발현되고, 활성 구아노신 트리포스페이트(GTP)-결합 상태와 비활성 구아노신 디포스페이트(GDP)-결합 상태 사이를 순환하는 이원 분자 스위치 역할을 한다. GTP-결합 Gαq 및 Gα11은 포스포리파제 C의 β-이소형을 활성화하여, 두번째 메신저 IP3 및 DAG의 생성을 통해 여러 신호 전달 경로를 유발한다. 신호전달 종료는 이러한 Gα 단백질의 고유한 GTPase 활성에 의해 매개되는 GTP 가수분해에 의해 유발된다. Gq 및 G11은 혈소판 활성화, 심근 비대, 및 평활근 긴장도 등 다양한 생리적 기능에 관여하는 것으로 나타났다.
GNAQ 또는 GNA11에서 발암성 돌연변이는 포도막 흑색종(UM)의 사례의 최대 90% 및 피부 흑색종의 약 2~3%에서 발생한다. 이러한 돌연변이의 대략 95%는 Ras-유사 도메인의 코돈 209(Q209)에 영향을 미쳐, GTPase 활성의 완전한 또는 부분적 손실을 초래하여, GNAQ/11을 그의 활성 상태로 잠근다. Q209 GNAQ/11은 PKC/MAPK, Rho/Rac, β-카테닌, 및 YAP를 포함한 여러 경로의 활성화를 촉발시켜 멜라닌세포를 변형시키는 우세한 작용 종양유전자이다. PKC/MAPK 경로가 GNAQ-매개된 종양형성에 기여하는 한 요소로 표시되었지만, 여러 증거에 따르면 돌연변이체 GNAQ/11이 UM 종양발생에서 역할을 할 가능성이 있는 추가 경로(즉, YAP, β-카테닌)를 지배한다는 것을 시사한다. 흥미롭게도, GNAQ(R183Q)의 다른 체세포 활성화 돌연변이는 최근 모세관 기형(포트-와인 스테인), 맥락막 및 연수막 혈관 기형을 특징으로 하는 신경피부 질환인 스터지-웨버 증후군(SWS)의 원인으로 설명되었다. 따라서, GNAQ 및 GNA11은 포도막 및 피부 흑색종의 치료를 위한 잠재적인 치료 표적을 구성한다.
항체 약물 접합체
항체 약물 접합체("ADC")는 암 치료에서 세포독성제의 국소 전달을 위해 사용되어왔다(예를 들어, 문헌[Lambert, Curr. Opinion In Pharmacology 5:543549, 2005] 참고). ADC는 최소한의 독성으로 최대 효능이 달성될 수 있는 약물 모이어티의 표적 전달을 허용한다. ADC는 세포증식억제 또는 세포독성 활성을 위해 선택된 약물에 연결된, 치료적 개입을 위해 표적화된 세포에 결합하는 능력을 위해 선택된 항체를 포함한다. 항체를 표적화된 세포에 결합함으로써 치료 효과가 필요한 부위에 약물을 전달한다.
표적화된 세포, 예를 들어, 암 세포를 인식하고 이에 선택적으로 결합하는 많은 항체가 ADC에 사용하기 위해 개시되었다. ADC에 대한 광범위한 연구에도 불구하고, 특정 관심 표적에 대한 항체 결합은 ADC 용도의 성공을 예측하기에 충분하지 않다. ADC의 치료 효과에 영향을 줄 수 있는 인자의 예(표적-고유 기능 외)에는 표적-매개 배치(TMDD)와 효능-유도 노출 간의 균형으로서 최적의 항체 친화도, Fc-매개 기능(항체-의존성 세포-매개 세포독성, ADCC), 접합 방법(부위-특이적 여부), 각 항체에 접합하는 약물/페이로드 분자의 비율("DAR" 또는 "약물 항체 비율"), 링커의 절단성 또는 안정성, ADC의 안정성, 및 ADC가 응집하는 경향과 같은 맞춤형 미세-조정이 필요한 다양한 양태가 포함된다.
효과적인 ADC 치료 조성물 및 방법으로서 사용하기 위한 개선된 특성을 갖는 항체, 부착 방법 및 세포독성 페이로드에 대한 요구가 남아있다.
일 구현예에서, 본 출원은 하기를 포함하는 PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 개시한다:
a. SEQ ID NO: 1, 4, 5 또는 7의 중쇄 CDR1(상보성 결정 영역 1), SEQ ID NO: 2, 6 또는 8의 중쇄 CDR2(상보성 결정 영역 2), 및 SEQ ID NO: 3 또는 9의 중쇄 CDR3(상보성 결정 영역 3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 14, 17 또는 20의 경쇄 CDR1(상보성 결정 영역 1), SEQ ID NO: 15 또는 18의 경쇄 CDR2(상보성 결정 영역 2), 및 SEQ ID NO: 16 또는 19의 경쇄 CDR3(상보성 결정 영역 3)을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b. SEQ ID NO: 33, 36, 37 또는 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34, 38 또는 40의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 35 또는 41의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 46, 49 또는 52의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 48 또는 51의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
c. SEQ ID NO: 5, 7, 57 또는 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58, 61 또는 62의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 59 또는 63의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 68, 71 또는 74의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 69 또는 72의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 70 또는 73의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
d. SEQ ID NO: 79, 82, 83 또는 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80, 84 또는 86의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 81 또는 87의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 92, 95 또는 98의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 93 또는 96의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 94 또는 97의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
e. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 105 또는 111의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 117 또는 118의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
f. SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 125 또는 131의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 138 또는 141의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
g. SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 147 또는 148의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 155 또는 157의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
h. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 163 또는 164의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 169 또는 170의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
i. SEQ ID NO: 175, 178, 179 또는 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176, 180 또는 182의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 177 또는 183의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 188 또는 189의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
j. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 194 또는 195의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 200 또는 201의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
k. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 208 또는 214의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 219 또는 220의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
l. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 225 또는 226의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 231 또는 232의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
m. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237 또는 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 243, 245 또는 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 47 또는 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244 또는 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역;
n. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252 또는 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50 또는 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258 또는 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역;
o. SEQ ID NO: 1의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
p. SEQ ID NO: 4의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
q. SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 6의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 17의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 19의 경쇄 CDR3;
r. SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 9의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 20의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
s. SEQ ID NO: 33의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
t. SEQ ID NO: 36의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
u. SEQ ID NO: 37의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 38의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 51의 경쇄 CDR3;
v. SEQ ID NO: 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 40의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 41의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
w. SEQ ID NO: 57의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
x. SEQ ID NO: 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
y. SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 61의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 71의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 73의 경쇄 CDR3;
z. SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 62의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 63의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 74의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
aa. SEQ ID NO: 79의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
bb. SEQ ID NO: 82의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
cc. SEQ ID NO: 83의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 84의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 95의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 97의 경쇄 CDR3;
dd. SEQ ID NO: 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 86의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 87의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 98의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
ee. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
ff. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
gg. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 118의 경쇄 CDR3;
hh. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 111의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
ii. SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
jj. SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
kk. SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 141의 경쇄 CDR3;
ll. SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 131의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
mm. SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
nn. SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
oo. SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 157의 경쇄 CDR3;
pp. SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 148의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
qq. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
rr. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
ss. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 170의 경쇄 CDR3;
tt. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 164의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
uu. SEQ ID NO: 175의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
vv. SEQ ID NO: 178의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
ww. SEQ ID NO: 179의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 180의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 189의 경쇄 CDR3;
xx. SEQ ID NO: 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 182의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 183의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
yy. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
zz. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
aaa. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 201의 경쇄 CDR3;
bbb. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 195의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
ccc. SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
ddd. SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
eee. SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 220의 경쇄 CDR3;
fff. SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 214의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
ggg. SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
hhh. SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
iii. SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 232의 경쇄 CDR3;
jjj. SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 226의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
kkk. SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
lll. SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
mmm. SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 245의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
nnn. SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ooo. SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
ppp. SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
qqq. SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 156의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
rrr. SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역.
본 출원의 PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 하기를 포함할 수 있다:
a. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
b. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
c. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
d. SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
e. SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
f. SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
g. SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
h. SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
i. SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
j. SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
k. SEQ ID NO: 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
l. SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
m. SEQ ID NO: 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
n. SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
o. SEQ ID NO: 239의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 248의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
p. SEQ ID NO: 254의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 260의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
다른 구현예에서, PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
a. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
b. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
c. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
d. SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
e. SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
f. SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
g. SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
h. SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
i. SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
j. SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
k. SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 192의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
l. SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
m. SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 223의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
n. SEQ ID NO: 229의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
o. SEQ ID NO: 241의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 250의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
p. SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 262의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
본원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 시스테인 치환을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄의 S152C, S375C 또는 S152C 및 S375C 둘 모두로부터 선택된 하나 이상의 시스테인 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 본원에 개시된 항체는 단일클론 항체일 수 있다.
일 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체는 화학식 (C)의 접합체이다:
[화학식 (C)]
Ab-(LA-(D)n)y
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
LA는 링커이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
y는 1, 2, 3 또는 4이고,
여기서 링커-약물 모이어티 -(LA-(D)n)는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 공유적으로 부착된다.
화학식 (C)의 항체 약물 접합체의 다른 양태에서, LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 카보네이트 기 및 2가 펩티드 링커로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이다.
다른 양태에서, 화학식 (C)의 항체 약물 접합체는 화학식 (C-1)의 접합체이다:
[화학식 (C-1)]
Figure pct00001
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00002
,
Figure pct00003
,
Figure pct00004
,
Figure pct00005
,
Figure pct00006
,
Figure pct00007
,
Figure pct00008
또는
Figure pct00009
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
본 출원은 또한 본원에 개시된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 개시한다. 본 출원은 또한 본원에 개시된 항체 약물 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 개시한다.
본 출원은 또한 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 본원에 개시된 항체 약물 접합체 또는 약제학적 조성물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시하며, 상기 암은 PMEL17을 발현하고 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하거나, 또는 상기 암은 PMEL17을 발현하고 GNAQ, GNA11, 또는 둘 다의 돌연변이를 함유한다.
암 치료 또는 예방 방법의 일부 구현예에서, 항체 약물 접합체 또는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료 화합물과 조합하여 환자에게 투여된다. 일 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료 화합물은 표준 치료 화학요법제, MDM2 억제제, MRC2 억제제, PKC 억제제, MAPK 억제제, 공동자극 분자 또는 체크포인트 억제제로부터 선택된다. 일 구현예에서, 공동 자극 분자는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, STING, 또는 CD83 리간드의 작용제로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타의 억제제로부터 선택된다.
본 출원은 또한 약제로 사용하기 위한, 본원에 개시된 항체 약물 접합체 또는 약제학적 조성물을 개시한다. 일 구현예에서, 본원에 개시된 항체 약물 접합체 또는 약제학적 조성물은 치료를 필요로 하는 환자에서 PMEL17 발현 암 또는 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하는 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 것이다.
일 구현예에서, 본 출원은 치료를 필요로 하는 환자에서 PMEL17 발현 암을 치료 또는 예방하기 위한, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항체 약물 접합체, 또는 약제학적 조성물의 용도를 개시한다.
일 구현예에서, 본 출원은 치료를 필요로 하는 환자에서 PMEL17 발현 암 또는 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하는 암을 치료 또는 예방하기 위한, 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항체 약물 접합체, 또는 약제학적 조성물의 용도를 개시한다. 일 구현예에서, 본 출원은 약제를 제조하는 데 있어서 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항체 약물 접합체, 또는 약제학적 조성물의 용도를 개시한다.
일 구현예에서, 암은 PMEL17을 발현하거나 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 포함한다. 일 구현예에서, 암은 포도막 흑색종, 피하 흑색종, 간세포 암종 또는 이의 전이성 암이다.
본 출원은 또한, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산을 개시한다. 일 구현예에서, 핵산은 하기의 뉴클레오티드 서열을 포함한다: SEQ ID NO: 13, 24, 28, 32, 45, 56, 67, 78, 91, 102, 115, 122, 135, 146, 152, 162, 168, 174, 187, 193, 199, 205, 218, 224, 230, 236, 242, 251, 257, 또는 26. 본 출원은 또한 핵산을 포함하는 벡터, 및 벡터 또는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 개시한다. 본 출원은 또한 숙주 세포를 배양하는 단계 및 세포 배양물로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 생산하는 방법을 개시한다. 일 구현예에서, 세포 배양물로부터 항체를 회수하는 방법은 하기 단계를 포함한다:
a) 세포를 제거하고 배양물을 여과하는 단계;
b) 친화성 크로마토그래피에 의해 배양물을 정제하는 단계;
c) pH를 3.4~3.6으로 조정하여 배양물 내 임의의 바이러스를 비활성화한 다음, pH를 5.8~6.2로 재조정하고 배양물을 여과하는 단계;
d) 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 배양물을 정제하고 배양물의 온-컬럼 환원을 수행하는 단계;
e) 배양물에 대해 음이온 교환 크로마토그래피를 수행하는 단계;
f) 나노여과에 의해 바이러스를 제거하는 단계;
g) 항체를 함유하는 배양물을 여과하는 단계; 및
h) 정제된 항체를 수득하는 단계.
본 출원은 또한, 하기를 포함하는 항-PMEL17 항체 약물 접합체의 제조 방법을 개시한다:
(a) 하기 화학식 (B)의 링커-약물 모이어티를 사전-형성하는 단계:
[화학식 (B)]
R8-LB-(D)n
(상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
R8은 반응성 기이고;
LB는 절단 가능한 또는 절단-불가능한 링커이고,
n은 1, 2, 3 또는 4임);
(b) 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 생산하는 방법을 사용하여 세포 배양물로부터 회수된 항체에 상기 링커-약물 모이어티를 접합시켜, 항체 약물 접합체를 생산하는 단계; 및
(c) 상기 항체 약물 접합체를 정제하는 단계.
본 출원은 또한 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 진단 시약을 개시한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성 표지, 형광단, 발색단, 영상화제 또는 금속 이온으로 표지된다.
도 1a~1b는 GNAQ/11 억제제 화합물(A1) 및 화합물(A2)의 시험관 내 항-UM 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 2는 포도막 흑색종 세포에서 아폽토시스를 유도하기 위한 GNAQ/11 억제제 화합물(A1) 및 화합물(A2)의 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 3a~3c는 화합물(A1) 및 화합물(A2)에 의한 GNAQ/11 억제에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 화합물(A1) 및 화합물(A2)은 92.1 세포에서 IP1 수준(도 3a) 및 상대적 증식(도 3b)을 감소시켰다. 화합물(A1) 및 화합물(A2)로 처리된 92.1 세포의 면역블롯은 감소된 ERK 신호전달을 나타냈다(도 3c).
도 4a~4d는 화합물(A1)의 대사 안정성 및 PK 특성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 화합물(A1)의 소실(도 4a) 및 개환 형태 화합물(A8)의 출현(도 4b) 모두 24시간에 걸쳐 모니터링하였다. 래트를 제외하고, % 남은 화합물(A1) 및 % 형성된 화합물(A8)을 첨가하면, 24시간에 걸쳐 화학량론을 나타낸다(도 4c). 마우스에서 정맥 내 투여후 화합물(A1)의 PK는 매우 높은 클리어런스 및 중간 내지 높은 부피의 분포를 특징으로 한다(도 4d).
도 5a~5d는 화합물(A1) 및 화합물(A8)의 대사 안정성 및 PK 특성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 화합물(A2)의 시험관 내 안정성은 다른 종의 혈장 및 혈액에서 테스트되었다(도 5a). 화합물(A2)는 세가지 다른 시스템에서 우수한 화학적 안정성을 나타냈다(도 5b). 암컷 balb/c 마우스에서 화합물(A2)의 PK는 높은 클리어런스와 짧은 제거 반감기를 보여주었다(도 5c). 화합물(A1) 및 화합물(A2)은 pH 5.6의 완충액과 리소좀에서 4시간에 걸쳐 안정적이었다(도 5d).
도 6a~6b는 항-PMEL17-(B1) ADC의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다.
도 7은 포도막 흑색종 세포에서 아폽토시스를 유도하는 항-PMEL17-(B1) ADC에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다.
도 8a~8b는 항-PMEL17-(B2) ADC 및 항-PMEL17 mAb의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다.
도 9는 포도막 흑색종 세포에서 항-PMEL17-(B1) 및 항-PMEL17-(B2) ADC에 의한 GNAQ/11 억제에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 IP1 수준(nM)이 제시되었다.
도 10a~10d는 온전한 혈소판 및 포도막 흑색종 세포에 대한 항-PMEL17 항체의 결합 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 11a~11c는 인간 혈소판 응집에 대한 화합물(A1) 및 항-PMEL17-(B1) ADC의 영향에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 12a~12e는 항-PMEL17-(B1) ADC의 생체 내 항-종양 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. G1-(B1)는 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 억제하였다(도 12a). 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~12마리의 마우스). 0일차에 초기 종양 부피는 대략 200~250 mm3이었다. 치료 후 최대 14일 동안 체중 감소가 관찰되지 않았다(도 12b). 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=4마리의 마우스). G1-(B1) 처리는 각각 감소된 수준의 pERK 및 Ki67에 의해 나타난 바와 같이 GNAQ 신호전달 억제 및 종양 세포 증식 억제를 초래하였다(도 12c). 또한, G1-(B1)은 비히클- 및 이소타입 대조군 3207-(B1)-처리된 마우스와 비교하여 세포 아포톱시스를 유도하였으며, 이는 IgG 염색에 의해 검출된 바와 같은 G1-(B1) ADC의 종양 세포 축적과 상관관계가 있다(도 12c). GNAQ 억제 후 MITF 및 PMEL17 수준에서는 변화가 관찰되지 않았다(도 12c). 최대 7일 동안 G1-(B1) 처리된 마우스에서 혈소판 응집 억제가 관찰되지 않았다(도 12d&e).
도 13a~13c는 포도막 흑색종의 간 및 폐 전이 마우스 모델에 대한 G1-(B1) ADC의 효과에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 각 마우스의 개별 사진은 92.1-루시퍼라제 세포를 정맥내 주사후 45일 후(치료 시작 직전) 및 치료후 12일 후에 제공된다(도 13a 및 13b); 샘플 크기, (그룹 당 n=6마리의 마우스). 0일차에 간 전이에 대한 초기 BLI는 대략 2.8 *109 p/sec/cm2이었다. 도 13b의 폐 종양(생체발광 신호)은 검정색 화살표로 표시된다. 상응하는 체중 조절(% 대 15일)을 G1-(B1) 20 mg/kg(회색 원)으로 처리 전 및 처리 후 2~3회 평가하였다. 도 13c의 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~6마리의 마우스). 15일차의 초기 체중은 대략 21 g이었다.
도 14a~14e는 G1-(B1) ADC의 PK 특성들에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. G1-(B1)의 약동학적 프로파일(총 IgG 수준)은 누드 마우스에서 7.5 ~ 30 mg/kg의 용량으로 노출이 약간 과도하게 증가하는 것을 보여주었다(도 14a). 종양 보유 마우스에서, 표적 결합 G1-(B1) 또는 이소타입 대조군 3207-(B1)을 투여한 후 유리 페이로드 농도를 측정하였다. 표적화된 ADC를 사용하여 화합물(A1)페이로드의 종양 전달의 명확한(>4배) 증가를 관찰할 수 있었다(도 14b). 항체에 접합되는 동안 화합물(A1)(개방 원)의 그의 개환 형태 화합물(A8)(채워진 원)로의 전환이 마우스의 생체 내에서 나타났다(도 14c). 2개의 상이한 DAR2 형식을 G1-(B1)의 DAR4 형식 및 DAR4 Fc-침묵 형식과 비교한 생체 내 효능 연구에서 노출은 DAR2(E152C) 및 DAR4 Fc-침묵 ADC에 대해 가장 낮은 클리어런스를 나타낸 반면, DAR2(S375C) 노출은 더 빨리 감소한다(도 14d). 도 14e는 시간 경과에 따른 3207(이소타입 대조군 항체)-(B1) DAR4(E152C, S375C) 및 3207(이소타입 대조군 항체)-(B1) DAR4 Fc-침묵 접합체의 농도를 보여준다.
도 15a~15c는 완충액, 마우스, 래트, 및 인간 혈장의 항-PMEL17-GNAQ/11i ADC의 시험관 내 안정성 및 마우스의 항-PMEL17-GNAQ/11i ADC의 생체 내 안정성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 16a~16b는 포도막 흑색종의 이종이식 모델에서 G1-E152C-DAR2-(B1), G1-S375C-DAR2-(B1), Fc-침묵 G1-(B1)의 생체 내 효능에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. 값은 평균 ± SEM을 나타내며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~6마리의 마우스). 0일차에 초기 종양 부피는 대략 300~325 mm3이었다.
도 17a~17b는 항-PMEL17-(B1) ADC의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여준다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다.
도 18은 항-PMEL17-(B1) ADC의 생체 내 항-종양 활성에 대한 예시적인 데이터를 보여주는 예시적인 데이터를 나타낸다.
도 19a~19b는 전이성 포도막 흑색종 환자로부터의 종양 생검의 면역조직화학적 분석에 대한 예시적인 데이터를 보여준다.
도 20a~20c는 항-PMEL 항체의 에피토프 비닝을 평가하기 위한 예시적인 센서그램 데이터를 보여준다. 도 20a는 결합 단계를 예시한다. 도 20b는 항체 G1 3J LC가 먼저 고정되고 17A9가 넘칠 때 센서그램을 보여준다. 도 20c는 17A9가 먼저 고정되고 G1 3J LC가 넘칠 때 센서그램을 보여준다. 두 경우 모두 두 번째 항체가 넘칠 때 결합이 관찰되며, 이는 G1 3J LC 및 17A9가 인간 PMEL의 상이한 에피토프에 결합함을 시사한다.
정의
달리 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 다음의 용어 및 어구는 다음의 의미를 갖는다:
용어 "알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 갖는 1가 포화 탄화수소 사슬을 지칭한다. 예를 들어, C1-C6알킬은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다. 알킬기는 직선형 또는 분지형일 수 있다. 대표적인 분지형 알킬기는 1개, 2개 또는 3개의 분지를 갖는다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, 프로필(n-프로필 및 이소프로필), 부틸(n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 t-부틸), 펜틸(n-펜틸, 이소펜틸 및 네오펜틸) 및 헥실을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 "절단 가능한"은 공유 연결에 의해 두 모이어티를 연결하지만 분해되어 생리적으로 관련 있는 조건 하에서 모이어티 사이의 공유 연결을 절단하는 연결 기 또는 링커 성분을 지칭하고, 전형적으로 절단 가능한 연결 기는 세포 외부에 있을 때보다는 세포내 환경에서 더욱 빠르게 생체 내 절단되어, 페이로드의 방출이 표적화된 세포 내부에서 우선적으로 발생하게 한다. 절단은 효소적 또는 비효소적일 수 있지만, 일반적으로는 항체를 분해하지 않고 항체로부터 페이로드를 방출시킨다. 절단은 연결 기 또는 링커 성분의 일부 부분이 페이로드에 부착되게 둘 수 있거나, 연결 기의 임의의 잔기 없이 페이로드를 방출시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "절단 불가능한"은 생리학적 조건 하에서 특별히 분해에 취약하지 않은 연결 기 또는 링커 성분을 지칭하고, 예를 들어 이는 적어도 접합체의 항체 또는 항원 결합 단편 부분만큼 안정적이다. 이러한 연결 기는 때때로 '안정적'이라 지칭되는데, 항체 또는 항원 결합 단편 그 자체가 적어도 부분적으로 분해될 때까지 항체 또는 항원 결합 단편에 페이로드가 연결된 상태를 유지하도록 그것들이 분해에 대해 충분히 저항성을 나타냄을 의미한다. 즉, 항체 또는 항원 결합 단편의 분해가 생체 내에서 연결 기의 절단에 선행한다. 안정적 또는 절단 불가능한 연결 기를 갖는 ADC의 항체 부분의 분해는 연결 기의 일부 또는 전부, 예컨대, 항체로부터의 1개 이상의 아미노산 기를, 페이로드 또는 생체 내로 전달되는 약물 모이어티에 부착된 채로 둘 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "항체"는 비공유적으로, 가역적으로 그리고 특정 방식으로 상응하는 항원에 결합할 수 있는 면역글로불린 패밀리의 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 천연 발생 IgG 항체는 이황화 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄를 포함하는 사량체이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3인 3개의 도메인으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)으로 불리는 초가변성의 영역들로 더 세분될 수 있으며, 이들 사이에는 프레임워크 영역(FR: framework region)으로 불리는 더 보존된 영역들이 산재되어 있다. 각각의 VH 및 VL은 다음 순서로 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적인 보체계의 첫 번째 구성요소(C1q)를 포함한, 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
"항체"라는 용어는 단일클론성 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 및 항이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어, 본 발명의 항체에 대한 항-Id 항체를 포함)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 항체는 임의의 아이소타입/부류(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY) 또는 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)일 수 있다.
"상보성 결정 도메인" 또는 "상보성 결정 영역"("CDR")은 상호 교환적으로 VL 및 VH의 초가변 영역을 지칭한다. CDR은 표적 단백질에 대한 특이성을 보유하는 항체 사슬의 표적 단백질 결합 부위이다. 각각의 인간 VL 또는 VH에 3개의 CDR(N-말단으로부터 순차적으로 넘버링된 CDR1 내지 3)이 있고, 이들은 가변 도메인의 약 15% 내지 20%를 구성한다. CDR은 표적 단백질의 에피토프에 대해 구조적으로 상보적이며, 따라서 결합 특이성의 직접적인 원인이 된다. VL 또는 VH의 나머지 스트레치(stretch), 소위 프레임워크 영역은 아미노산 서열의 보다 적은 변형을 보인다(문헌[kuby, Immunology, 4th ed., Chapter 4. W.H. Freeman & Co., New York, 2000]).
CDR 및 프레임워크 영역의 위치는 당 업계에 잘 알려진 다양한 정의, 예를 들어, Kabat, Chothia, 국제 ImMunoGeneTics 데이터베이스(IMGT)(월드와이드 웹사이트 www.imgt.org/), 및 AbM(예를 들어, 문헌[Johnson et al., Nucleic Acids Res., 29:205206 (2001)]; 문헌[Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901917 (1987)]; 문헌[Chothia et al., Nature, 342:877883 (1989); Chothia et al., J. Mol. Biol., 227:799817 (1992)]; 문헌[Al-Lazikani et al., J.Mol.Biol., 273:927748 (1997)] 참고)를 사용하여 결정될 수 있다. 항원 결합 부위의 정의는 또한, 하기에 설명되어 있다: 문헌[Ruiz et al., Nucleic Acids Res., 28:219221 (2000)]; 및 문헌[Lefranc, M.P., Nucleic Acids Res., 29:207209 (2001)]; 문헌[MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732745 (1996)]; 및 문헌[Martin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:92689272 (1989)]; 문헌[Martin et al., Methods Enzymol., 203:121153 (1991)]; 및 문헌[Rees et al., In Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction, Oxford University Press, Oxford, 141172 (1996)].
경쇄와 중쇄 둘 다는 구조적 및 기능적 상동성 영역으로 나뉜다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이 점과 관련하여, 경쇄(VL) 및 중쇄(VH) 부분의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정한다는 점이 인정될 것이다. 역으로, 경쇄의 불변 도메인(CL) 및 중쇄의 불변 도메인(CH1, CH2, 또는 CH3)은 분비, 태반 통과 이동성, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등과 같은 중요한 생물학적 성질을 부여한다. 관례상, 불변 영역 도메인의 넘버링은 불변 영역 도메인이 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노 말단으로부터 멀어질수록 증가된다. N 말단은 가변 영역이고, C 말단에는 불변 영역이 있으며; CH3 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카복시 말단 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원 결합 단편"은 항원의 에피토프와 (예를 들어, 결합, 입체 장해, 안정화/탈안정화, 공간 분포에 의해) 특이적으로 상호작용하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 부분을 지칭한다. 결합 단편의 예는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 단일쇄 Fv(scFv), 카멜리드 항체, 이황화-결합 Fvs(sdFv), Fab 단편, F(ab') 단편; 힌지 영역에서 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab)2 단편; VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341:544-546, 1989]); 및 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 또는 항체의 다른 에피토프-결합 단편을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
나아가, Fv 단편의 두 도메인 VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 암호화될 수 있지만, 그것들은, VL 및 VH 영역이 짝을 지어 (단쇄 Fv("scFv")로 알려져 있는) 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄로서 제조될 수 있게 하는 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 이용하여, 연결될 수 있다; 예컨대, 문헌[Bird et al., Science 242:423426, 1988]; 및 [Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85:58795883, 1988] 참고). 이러한 단쇄 항체 또한, 용어 "항원 결합 단편"에 포괄된다. 이들 항원 결합 단편은 당업자에게 알려진 통상적인 기법을 사용하여 얻어지며, 이들 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 유용성을 위해 스크리닝된다.
항원 결합 단편은 또한 단일 도메인 항체, 맥시바디, 미니바디, 단일 도메인 항체, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv 내에 혼입될 수 있다(예를 들어 문헌[Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:11261136, 2005] 참조). 항원 결합 단편은 폴리펩티드, 예컨대 피브로넥틴 III형(Fn3)을 기반으로 한 스캐폴드 내로 그라프트될 수 있다(피브로넥틴 폴리펩티드 모노바디를 기술한 미국 특허 번호 6,703,199 참조).
항원 결합 단편은, 상보성 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 한 쌍의 탠덤 Fv 단편(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 단쇄 분자 내로 통합될 수 있다(Zapata et al., Protein Eng. 8:10571062, 1995; 및 미국 특허 번호 5,641,870).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"은 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나 동일한 유전적 출처로부터 유래하는 항체 및 항원 결합 단편을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이 용어는 또한 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 포함한다. 단일클론 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 "인간 항체"라는 용어는 프레임워크 영역과 CDR 영역이 둘 다 인간 유래의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하면, 불변 영역 또한, 이러한 인간 서열, 예를 들어, 인간 생식계열 서열, 또는 인간 생식계열 서열의 돌연변이 버전, 또는 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 공통 프레임워크 서열을 함유하는 항체로부터 유래된다(예를 들어, 문헌[Knappik et al., J. Mol. Biol. 296:5786, 2000] 참고). 또한 친화성 성숙 또는 제조/페이로드 접합 목적을 위해 하나 이상의 CDR이 돌연변이된 인간 서열로부터 유래된 항체가 포함된다. 문헌[Kilpatrick et al., "Rapid development of affinity matured monoclonal antibodies using RIMMS," Hybridoma. 1997 Aug;16(4):3819]를 참고한다.
본 발명의 인간 항체는 인간 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유도에 의해 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이, 또는 안정성 또는 제조의 촉진을 위한 보존적 치환)를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인식하다"는, 에피토프가 선형인지 입체적인지와 관계 없이, 자신의 에피토프를 확인하고 이와 상호작용하는(예를 들어, 결합하는) 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 지칭한다. 용어 "에피토프"는 본 개시의 항체 또는 항원 결합 단편이 특이적으로 결합하는 항원 상의 위치를 지칭한다. 에피토프는 인접한 아미노산들로부터 형성되거나 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 인접하지 않은 아미노산들로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산들로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 변성 용매 처리 시 전형적으로 상실된다. 에피토프는 독특한 공간적 입체 형태로 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산을 전형적으로 포함한다. 에피토프의 공간적 입체 형태를 결정하는 방법은 당해 분야의 기술, 예를 들어, x선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다(예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)] 참조).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서의 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 의미한다. 각각의 항원성 위치 내에서, 항체 "아암"의 가변 영역은 다수의 위치에서 약한 비 공유 결합력을 통해 항원과 상호 작용하는데, 상호 작용이 많을수록, 친화도가 강하다.
용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다. 그러나, 하나의 항원에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원에 대해 교차 반응성을 가질 수 있다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "상응하는 인간 생식선 서열"은 인간 생식선 면역글로불린 가변 영역 서열에 의해 암호화되는 모든 다른 공지된 가변 영역 아미노산 서열과 비교하여 기준 가변 영역 아미노산 서열 또는 하위 서열과 가장 높게 결정된 아미노산 서열 동일성을 공유하는 인간 가변 영역 아미노산 서열 또는 하위 서열을 암호화하는 핵산 서열을 지칭한다. 상응하는 인간 생식선 서열은 또한 모든 다른 평가된 가변 영역 아미노산 서열과 비교하여 기준 가변 영역 아미노산 서열 또는 하위서열과 아미노산 서열 동일성이 가장 높은 인간 가변 영역 아미노산 서열 또는 하위서열을 지칭할 수 있다. 상응하는 인간 생식선 서열은 프레임워크 영역 단독, 상보성 결정 영역 단독, 프레임워크 및 상보성 결정 영역, (위에 정의된 바와 같은) 가변 분절, 또는 가변 영역을 포함하는 서열 또는 하위서열의 기타 조합일 수 있다. 본원에 기재된 방법을 이용하여, 예를 들어, 2개의 서열을 BLAST, ALIGN, 또는 당해 분야에 공지된 다른 정렬 알고리즘을 사용하여 정렬하여, 서열 동일성을 결정할 수 있다. 상응하는 인간 생식선 핵산 또는 아미노산 서열은 기준 가변 영역 핵산 또는 아미노산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 가질 수 있다. 예를 들어, 공개적으로 사용 가능한 국제 ImMunoGeneTics 데이터베이스(IMGT)(월드와이드 웹사이트 www.imgt.org/) 및 V-베이스(월드와이드 웹사이트 vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk)를 통해 상응하는 인간 생식선 서열이 결정될 수 있다.
항원(예를 들어, 단백질)과 항체, 항체 단편 또는 항체 유래 결합제 사이의 상호작용을 기술하는 맥락에서 사용될 때 어구 "특이적으로 결합한다" 또는 "선택적으로 결합한다"는 단백질 및 기타 생물제제의 비균질 집단, 예를 들어, 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 샘플 내의 항원의 존재를 결정짓는 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 특정한 지정된 면역검정 조건 하에, 특정한 결합 특이성이 있는 항체 또는 제제는 특정 항원에 배경값의 적어도 2배로 결합하고, 샘플 내에 존재하는 다른 항원에는 실질적으로 유의미한 양으로 결합하지 않는다. 일 구현예에서, 지정된 면역검정 조건 하에, 특정한 결합 특이성이 있는 항체 또는 결합제는 특정 항원에 배경값의 적어도 10배로 결합하고, 샘플 내에 존재하는 다른 항원에는 실질적으로 유의미한 양으로 결합하지 않는다. 이러한 조건 하에서의 항체 또는 결합제에 대한 특이적인 결합은 이 항체 또는 결합제가 특정 단백질에 대한 이의 특이성에 대해 선택됨을 요구할 수 있다. 원한다면 또는 적합하다면, 이러한 선택은 다른 종(예를 들어, 마우스 또는 래트) 또는 다른 하위유형으로부터의 분자와 교차반응하는 항체를 제외시키는 것에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 일부 구현예에서, 특정한 원하는 분자와 교차반응하는 항체 또는 항체 단편이 선택된다.
다양한 면역검정 형식을 이용하여 특정 단백질과 특이적으로 면역반응성을 나타내는 항체를 선택할 수 있다. 예를 들어, 고상 ELISA 면역검정은 단백질과 특이적으로 면역반응성을 나타내는 항체를 선택하는 데 통상적으로 사용된다(예를 들어, 특이적 면역반응성을 결정하는 데 사용될 수 있는 면역검정 형식 및 조건에 대한 설명은 문헌[Harlow & Lane, Using 항체, A Laboratory Manual (1998)] 참조). 전형적으로, 특이적 또는 선택적 결합 반응은 배경 신호에 비해 적어도 2배, 더욱 전형적으로는 배경에 대해 적어도 10배 내지 100배의 신호를 생성할 것이다.
용어 "평형 해리 상수(KD, M)"는 결합 속도 상수(ka, 시간-1, M-1)로 나눈 해리 속도 상수(kd, 시간-1)를 지칭한다. 당해 분야의 임의의 공지된 방법을 이용하여 평형 해리 상수를 측정할 수 있다. 본 발명의 항체는 일반적으로 평형 해리 상수가 약 10-7 또는 10-8 M 미만, 예를 들어, 약 10-9 M 또는 10-10 M 미만, 일부 구현예에서는 약 10-11 M, 10-12 M 또는 10-13 M 미만일 것이다.
용어 "생체이용률"은 환자에 투여된 주어진 양의 약물의 전신 이용률(즉, 혈액/혈장 수준)을 지칭한다. 생체이용률은 투여된 투여 형태로부터 일반 순환에 도달하는 약물의 시간(속도) 및 총량(정도)의 측정치를 가리키는 절대적인 용어이다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "본질적으로 이루어지는"은 방법 또는 조성물에 포함된 활성 약제의 속 또는 종 뿐만 아니라 방법 또는 조성물의 의도된 목적에 대해 불활성인 임의의 부형제도 지칭한다. 일부 구현예에서, 어구 "본질적으로 이루어지는"은 본 발명의 항체 약물 접합체 이외의 1종 이상의 추가의 활성제의 포함을 명백하게 배제한다. 일부 구현예에서, 어구 "본질적으로 이루어지는"은 본 발명의 항체 약물 접합체 및 제2의 공동-투여 제제 이외의 1종 이상의 추가의 활성제의 포함을 명백하게 배제한다.
용어 "아미노산"은 자연 발생, 합성, 및 비천연 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 암호화되는 것들뿐만 아니라 추후에 변형된 아미노산, 예를 들어 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소, 카복실기, 아미노기 및 R 기에 결합된 α-탄소가 있는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭시드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학적 화합물을 지칭한다.
용어 "보존적으로 변형된 변이체"는 아미노산 서열 및 핵산 서열 둘 다에 적용된다. 특정 핵산 서열과 관련하여, 보존적으로 변형된 변이체는 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 지칭하거나, 또는 핵산이 아미노산 서열을 암호화하지 않는 경우, 본질적으로 동일한 서열을 지칭한다. 유전 코드의 축퇴성으로 인해, 다수의 기능적으로 동일한 핵산이 임의의 주어진 단백질을 암호화한다. 예를 들어, GCA, GCC, GCG 및 GCU 코돈은 모두 알라닌 아미노산을 암호화한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정되는 모든 위치에서, 이 코돈은 암호화되는 폴리펩티드를 바꾸지 않으면서 기재된 상응하는 코돈 중 임의의 것으로 변경될 수 있다. 이러한 핵산 변이는 "침묵 변이"이고, 이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종류이다. 폴리펩티드를 암호화하는 본원에서의 모든 핵산 서열은 또한 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 설명한다. 당업자는 핵산 내의 각각의 코돈(통상적으로 메티오닌에 대한 유일한 코돈인 AUG, 그리고 통상적으로 트립토판에 대한 유일한 코돈인 TGG 제외)이 기능적으로 동일한 분자를 생성하도록 변형될 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 암호화하는 핵산의 각각의 침묵 변이가 각각의 기술된 서열에 내포된다.
폴리펩티드 서열에 대해, "보존적으로 변형된 변이체"는, 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환시키는, 폴리펩티드 서열에서의 개별 치환, 결실 또는 부가를 포함한다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당해 분야에 잘 알려져있다. 상기 보존적으로 변형된 변이체는 본 발명의 다형성 변이체, 종간 동족체 및 대립유전자에 추가되고, 이를 배제하지 않는다. 다음의 8개 군이 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다: 1) 알라닌(A), 글리신(G); 2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E); 3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q); 4) 아르기닌(R), 리신(K); 5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W); 7) 세린(S), 트레오닌(T); 및 8) 시스테인(C), 메티오닌(M)(예를 들어, 문헌[Creighton, Proteins (1984)] 참조). 일부 구현예에서, 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의미하게 영향을 미치지 않거나 이를 유의미하게 변경하지 않는 아미노산 변형을 지칭하도록 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "최적화된"은 생산 세포 또는 유기체, 일반적으로는 진핵생물 세포, 예를 들어 효모 세포, 피키아(Pichia) 세포, 진균 세포, 트리코데르마(Trichoderma) 세포, 중국 햄스터 난소 세포(CHO) 또는 인간 세포에서 선호되는 코돈을 사용하여 아미노산 서열을 암호화하도록 변경된 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 최적화된 뉴클레오티드 서열은 "모체" 서열로도 알려져있는 시작 뉴클레오티드 서열에 의해 원래 암호화되는 아미노산 서열을 완전히 또는 가능한 한 많이 유지하도록 조작된다.
2종 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "동일한 비율" 또는 "동일성(%)"은 2개 이상의 서열 또는 하위서열이 동일한 정도를 지칭한다. 비교되는 영역에 걸쳐 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 동일하다면 2개의 서열은 "동일"하다. 다음의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정하였을 때, 비교창 또는 지정된 영역에 걸친 최대 상응성을 비교 및 정렬한 경우, 2개의 서열에 소정의 백분율(즉, 소정의 영역에 걸쳐, 또는 특정되지 않은 경우 전체 서열에 걸쳐, 60% 동일성, 선택적으로는 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성)의 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드가 있으면 2개의 서열은 "실질적으로 동일"하다. 선택적으로, 동일성은 적어도 약 30개의 뉴클레오티드(또는 10개의 아미노산) 길이의 영역에 걸쳐, 또는 더욱 바람직하게는 100개 내지 500개 또는 1000개 이상의 뉴클레오티드(또는 20개, 50개, 200개 이상의 아미노산) 길이의 영역에 걸쳐 존재한다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 테스트 서열이 비교되는 기준 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우에, 테스트 및 기준 서열은 컴퓨터에 입력되고, 필요한 경우에 하위 서열 좌표가 지정되고, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 디폴트 프로그램 파라미터가 사용될 수 있거나, 대안적인 파라미터가 지정될 수 있다. 그런 다음, 서열 비교 알고리즘은 프로그램 파라미터에 기초하여, 기준 서열에 대한 테스트 서열의 서열 동일성(%)을 계산한다.
본원에 사용된 바와 같이 "비교창"은 20 내지 600, 통상 약 50 내지 약 200, 보다 통상 약 100 내지 약 150으로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 하나의 수의 인접한(contiguous) 위치들의 분절에 대한 참조를 포함하며, 여기서 서열 및 참조 서열이 최적으로 정렬된 후, 서열이 동일한 수의 인접한 위치들의 참조 서열과 비교될 수 있다. 비교를 위한 서열의 정렬 방법은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어 문헌[Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482c (1970)]의 국소 상동성 알고리즘, 문헌[Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 상동성 정렬 알고리즘, 문헌[Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)]의 유사성 검색 방법에 의해, 이들 알고리즘의 컴퓨터 구현(Wisconsin Genetics 소프트웨어 패키지(미국 위스콘신 주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재 Genetics Computer Group)의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해, 또는 수동 정렬 및 육안 검사(예를 들어, 문헌[Brent et al., Current Protocols in Molecular Biology, 2003)] 참조)에 의해 수행될 수 있다.
퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하는 데 적합한 알고리즘의 2가지 예는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이며, 이들은 각각 문헌 [Altschul et al., Nuc. Acids Res. 25:33893402, 1977]; 및 문헌[Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403410, 1990]에 기술된 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립 생명공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 이용 가능하다. 이 알고리즘은 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 일부 양수 값의 임계 점수 T와 일치하거나 이를 만족하는 조회 서열에서 길이가 W인 짧은 단어를 확인함으로써 높은 점수를 매기는 서열 쌍(HSP: high scoring sequence pair)을 처음에 확인하는 것을 포함한다. T는 인접 단어 스코어 임계값으로 지칭된다(Altschul 등, 상동). 상기 초기 이웃 단어 적중은 검색을 개시하기 위한 기초(seed)로 작용되어, 이를 포함하는 더 긴 HSP를 찾는다. 누적 정렬 점수가 증가할 수 있는 한, 워드 히트는 각각의 서열을 따라 양 방향으로 확장한다. 뉴클레오티드 서열에 대해, 매개변수 M(한 쌍의 매치되는 잔기에 대한 보상 점수; 항상 > 0) 및 N(미스매치된 잔기에 대한 페널티 점수; 항상 < 0)을 사용하여 누적 점수가 계산된다. 아미노산 서열의 경우, 누적 점수를 계산하기 위해 득점 행렬이 사용된다. 누적 정렬 점수가 최대 달성 값에서 X 양만큼 떨어질 때 각각의 방향의 단어 히트의 확장이 중단되며; 누적 점수는 하나 이상의 음수 스코어링 잔기 정렬의 누적으로 인해 0 이하가 되거나; 서열 중 어느 하나의 끝에 도달한다. BLAST 알고리즘 매개변수인 W, T 및 X는 정렬의 민감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열의 경우)은 디폴트로서 워드 길이(W) 11, 기대값(E) 또는 10, M=5, N=-4 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 워드 길이 3, 및 예상값(E) 10, 및 BLOSUM62 채점 행렬(문헌[Henikoff and Henikoff, (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915) 참조) 정렬 (B) 50, 기대값(E) 10, M=5, N=-4, 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다.
BLAST 알고리즘은 또한, 2개의 서열들 사이에서 유사성의 통계학적 분석을 수행한다(예를 들어 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:58735787, 1993] 참조). BLAST 알고리즘이 제공하는 유사성의 한 척도는 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 매치가 우연히 일어날 확률의 지표를 제공하는 최소 합계 확률(P(N))이다. 예를 들어, 기준 핵산에 대한 시험 핵산의 비교에서 최소 합계 확률이 약 0.2 미만, 더욱 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만이면 핵산은 기준 서열과 유사한 것으로 간주된다.
2개의 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 또한, PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내에 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller, Comput. Appl. Biosci. 4:1117, (1988)]의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있다. 또한, 두 아미노산 서열들 사이의 동일성(%)은 문헌[Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:444453, (1970)]의 알고리즘을 이용하여 결정될 수 있는데, 이는 BLOSUM62 행렬 또는 PAM250 행렬, 및 갭 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용하여, GCG 소프트웨어 패키지(www.gcg.com에서 이용 가능함) 내의 GAP 프로그램 내로 혼입된 것이다.
상기 주지된 서열 동일성 퍼센트 외에, 2개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드들이 실질적으로 동일하다는 다른 표시는, 제1 핵산에 의해 암호화된 폴리펩티드가, 하기 기재된 바와 같이 제2 핵산에 의해 암호화된 폴리펩티드에 대해 생성된 항체와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 예를 들어, 2개의 펩티드가 보존적 치환만이 상이한 경우에, 폴리펩티드는 전형적으로 제2의 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 다른 표시는, 하기 기재된 바와 같이, 2개의 분자 또는 이들의 보체가 엄격한 조건 하에 서로 혼성화한다는 점이다. 2개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또 다른 표시는 서열을 증폭시키는 데 동일한 프라이머가 사용될 수 있다는 점이다.
용어 "핵산"은 본원에 사용된 바와 같이 용어 "폴리뉴클레오티드"와 상호호환적으로 사용되고, 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 이의 중합체를 지칭한다. 이러한 용어는 합성, 자연 발생적 및 비자연 발생적이고, 기준 핵산과 결합 성질이 유사하며, 기준 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는, 알려진 뉴클레오티드 유사체 또는 변형된 골격 잔기 또는 연결을 함유하는 핵산을 포함한다. 이러한 유사체의 예는 제한 없이 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트, 메틸 포스포네이트, 키랄-메틸 포스포네이트, 2-O-메틸 리보뉴클레오티드, 펩티드-핵산(PNA)을 포함한다.
달리 표시하지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체(예컨대 축퇴 코돈 치환) 및 상보적 서열뿐만 아니라 명백하게 표시된 서열을 함축적으로 포함한다. 구체적으로는, 이하에 상술하는 바와 같이, 축퇴성 코돈 치환은 1개 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환되는 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer et al., (1991) Nucleic Acid Res. 19:5081; Ohtsuka et al., (1985) J. Biol. Chem. 260:2605-2608; 및 Rossolini et al., (1994) Mol. Cell. Probes 8:9198).
핵산의 맥락에서 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2개 이상의 폴리뉴클레오티드(예를 들어, DNA) 분절 간의 기능적인 관계를 지칭한다. 전형적으로, 이는 전사된 서열에 대한 전사 조절 서열의 기능적 관계를 지칭한다. 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서 서열이 적절한 숙주 세포 또는 기타 발현 시스템에서의 암호화 서열의 전사를 자극하거나 조절할 경우, 이 서열이 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, 전사된 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터 전사 조절 서열은 전사된 서열에 물리적으로 인접해 있고, 즉 이들은 시스(cis)-작용성이다. 그러나, 일부 전사 조절 서열, 예컨대 인핸서는 자신이 전사를 강화하는 암호화 서열에 물리적으로 인접해 있거나 이에 근접하여 위치할 필요가 없다.
용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호호환적으로 사용된다. 이 용어는 자연 발생 아미노산 중합체 및 자연 비발생 아미노산 중합체뿐만 아니라 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공적인 화학적 모방체인 아미노산 중합체에도 적용된다. 달리 표시되지 않는 한, 특정 폴리펩티드 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체를 암시적으로 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체 약물 접합체" 또는 "면역 접합체"는 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 다른 제제, 예컨대 화학요법제, 독소, 면역요법제, 영상화 프로브 등의 연결을 지칭한다. 이러한 연결은 공유 결합, 또는 비공유적 상호 작용, 예컨대 정전기력을 통한 비공유적 상호작용일 수 있다. 당해 분야에 공지된 다양한 링커가 항체 약물 접합체를 형성하기 위해 사용될 수 있다. 추가적으로, 항체 약물 접합체는 면역접합체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로부터 발현될 수 있는 융합 단백질 형태로 제공될 수 있다. 본 설명에 사용된 "융합 단백질"은 본래는 별개의 (펩티드 및 폴리펩티드를 포함하는) 단백질을 암호화하는 2개 이상의 유전자 또는 유전자 단편의 연결을 통해 생성된 단백질을 지칭한다. 융합 유전자의 번역은 본래의 단백질 각각으로부터 유래된 기능적 성질이 있는 단일 단백질을 초래한다.
용어 "대상체"는 인간 및 비인간 동물을 포함한다. 비인간 동물은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류 및 파충류를 포함한다. 언급된 경우를 제외하고, 용어 "환자" 또는 "대상체"는 본 설명에서 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "세포독소" 또는 "세포독성제"는 세포의 성장 및 증식에 해롭고, 세포 또는 악성 종양의 감소, 억제 또는 파괴 작용을 할 수 있는 임의의 제제를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항암제"는 비제한적인 예로서 세포독성제, 화학요법제, 방사선요법 및 방사선요법제, 표적화된 항암제 및 면역요법제를 포함하는 암과 같은 세포 증식성 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있는 임의의 제제를 지칭한다.
본 설명에 사용된 용어 "약물 모이어티" 또는 "페이로드(payload)"는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편에 접합된 화학적 모이어티를 지칭하고, 임의의 치료제 또는 진단제, 예를 들어, 항암제, 항염증제, 항감염제(예를 들어, 항진균제, 항박테리아제, 항기생충제, 항바이러스제), 또는 마취제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약물 모이어티는 세포독소와 같은 항암제일 수 있다. 특정 구현예에서, 약물 모이어티는 표적 억제제 화합물이다. 또한, 페이로드는 생물물리학적 프로브, 형광단, 스핀 표지, 적외선 프로브, 친화성 프로브, 킬레이터, 분광 프로브, 방사성 프로브, 지질 분자, 폴리에틸렌 글리콜, 중합체, 스핀 표지, DNA, RNA, 단백질, 펩티드, 표면, 항체, 항체 단편, 나노입자, 양자점, 리포솜, PLGA 입자, 당류 또는 다당류일 수 있다.
일부 구현예에서, 약물 모이어티 또는 페이로드는 GNAQ 억제제, a GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)이다. 일부 구현예에서, GNAQ/11 억제제는 IP3의 GNAQ/11-매개 생산을 억제하고/하거나 GNAQ/11 신호전달에 의존하는 세포에서 용량-반응 항증식 효과를 나타내는 분자(즉, GNAQ/11 돌연변이 포도막 흑색종 세포)이다. 일부 구현예에서, GNAQ/11 억제제는 비활성 GDP-결합 상태에서 GNAQ/11을 안정화시키고, GDP 방출을 방지하거나, 또는 활성 GTP-결합 상태에 결합하고 다운스트림 이펙터와의 GNAQ/11 상호작용을 방지하는 화합물이다. 일부 구현예에서, GNAQ/11 억제제는 돌연변이 GNAQ 및/또는 GNA11, 예컨대 Q209L/P 돌연변이를 포함하는 것을 억제함으로써 기능한다. 이러한 약물 모이어티를 표적화 모이어티와 호환되는 링커에 부착하는 방법은 당 업계에 공지된 방법과 함께 본 개시내용에 제공된다. 예를 들어, 문헌[Singh et al., (2009) Therapeutic Antibodies: Methods and Protocols, vol. 525, 445457] 참조.
GNAQ(구아닌 뉴클레오티드-결합 단백질 G(q) 서브유닛 알파, CMC1, G-ALPHA-q, GAQ, SWS, 및 G 단백질 서브유닛 알파 q로도 알려져 있음) 및 GNA11(구아닌 뉴클레오티드-결합 단백질 서브유닛 알파-11, FBH, FBH2, FHH2, GNA-11, HHC2, HYPOC2, 및 G 단백질 서브유닛 알파 11로도 알려져 있음)은 G 단백질-결합 수용체(GPCR)의 하류에서 작용하는 이종삼 합체 G 단백질의 α 서브유닛을 구성하는 밀접하게 관련된 GTPase이다. α 서브유닛은 구아노신 디포스페이트(GDP)를 구아노신 트리포스페이트(GTP)로 교환함으로써 G 단백질의 활성화를 위한 스위치 역할을 하여, 별개의 다운스트림 이펙터를 활성화한다. GTP가 GDP로 가수분해되므로 고유한 GTPase 활성에 의해 활성화가 종료된다(문헌[Van Raamsdonk et al., 2010, N Engl J Med.; 363(23):21919]). Gq 단백질 캐스케이드의 고전적인 활성화는 인지질 포스파티딜이노시톨 4,5-비포스페이트를 가수분해하여 2개의 강력한 제2 메신저: D-미오-이노시톨 1,4,5-트리포스페이트(IP3) 및 디아실글리세롤(DAG)을 방출하는, 포스포리파제 C-β (PLC-β)를 통해 발생한다. 세포내 Ca2+의 일시적인 증가에 따라, IP3은 IP2, IP1, 및 미오-이노시톨로 빠르게 전환된다. 반면, DAG는 단백질 키나제 C(PKC)를 활성화하여, RAF, MEK, 및 ERK의 인산화를 연속적으로 유도하며, 이는 핵으로 이동하여 세포 증식 및 생존을 조절한다(문헌[Krantz et al., 2017, Clin Ophthalmol.; 11:279289]).
인간 GNAQ의 핵산 및 아미노산 서열은 하기 수탁 번호로 GenBank에 개시되었다:
NP_002063(SEQ ID NO: 268)
Figure pct00010
NM_002072(SEQ ID NO: 269)
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
인간 GNA11의 핵산 및 아미노산 서열은 하기 수탁 번호로 GenBank에 개시되었다:
NP_002058(SEQ ID NO: 270)
Figure pct00014
NM_002067(SEQ ID NO: 271)
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
"종양"은 악성이든 양성이든 신생물 세포 성장 및 증식, 그리고 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직을 의미한다.
용어 "항-종양 활성"은 종양 세포 증식 속도, 생존율, 또는 전이 활성의 감소를 의미한다. 예를 들어, 항-종양 활성은 치료 중 발생하는 비정상 세포의 성장속도 감소 또는 종양 크기 안정성 또는 감소, 또는 치료가 없는 대조군과 비교하여 치료로 인한 더 긴 생존에 의해 나타날 수 있다. 이러한 활성은 이종이식 모델, 동종이식 모델, MMTV 모델 및 항-종양 활성을 조사하기 위해 당 업계에 공지된 다른 공지된 모델을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 허용된 시험관 내 또는 생체 내 종양 모델을 사용하여 평가될 수 있다.
용어 "악성종양"은 비양성 종양 또는 암을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "암"은 탈조절되거나, 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 악성종양을 포함한다. 예시적인 암은: 암종, 육종, 백혈병 및 림프종을 포함한다.
용어 "암"은 원발성 악성 종양(예를 들어, 종양 세포가 원래의 종양 위치 이외의 대상체의 신체 내의 위치로 이동하지 않은 종양) 및 2차 악성 종양(예를 들어, 종양 세포가 원래 종양의 위치와 상이한 2차 위치로 이동하는 것인 전이로부터 발생된 종양)을 포함한다.
용어 "PMEL17"(프리멜라노좀 단백질(PMEL), D12S53E, ME20, ME20-M, ME20M, P1, P100, gp100, SI, SIL, 및 은 유전자좌 단백질 동족체(SILV)라고도 함)은 멜라닌세포에 의해 생성되고 멜라닌 합성에 관여하는 단일-통과 유형 I 막관통 단백질을 지칭한다. 인간 PMEL17의 핵산 및 아미노산 서열은 하기 수탁 번호로 GenBank에 개시되었다: NP_008859, NP_001307050, NP_001307051, NP_001186982, NP_001186983(아미노산 서열), 및 NM_006928, NM_001200053, NM_001200054, NM_001320121, NM_001320122(뉴클레오티드 서열). 본 설명에 사용된 용어 "PMEL17"은 PMEL17 단백질의 모든 자연 발생적인 이소형, 또는 이의 변이체를 집합적으로 지칭하는 데 사용된다.
NP_008859(SEQ ID NO: 272)
Figure pct00018
NP_001307050(SEQ ID NO: 273)
Figure pct00019
NP_001307051(SEQ ID NO: 274)
Figure pct00020
NP_001186982(SEQ ID NO: 275)
Figure pct00021
NP_001186983(SEQ ID NO: 276)
Figure pct00022
NM_006928(SEQ ID NO: 277)
Figure pct00023
Figure pct00024
NM_001200053(SEQ ID NO: 278)
Figure pct00025
NM_001200054(SEQ ID NO: 279)
Figure pct00026
NM_001320121(SEQ ID NO: 280)
Figure pct00027
Figure pct00028
NM_001320122(SEQ ID NO: 281)
Figure pct00029
Figure pct00030
용어 "변이체"는 기준 폴리펩티드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 가지거나, 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고, 기준 폴리펩티드의 하나 이상의 활성을 가질 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 변이체는 기준 폴리펩티드의 하나 이상의 활성을 보유하면서, 기준 폴리펩티드에 대해 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다.
본원에 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애의 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 일 실시 형태에서, 질환 또는 장애를 개선하는 것(즉, 질환 또는 이의 임상 증상 중 적어도 하나의 발현을 늦추거나 저지하거나 감소시키는 것)을 지칭한다. 또 다른 구현예에서, "치료한다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자가 구별할 수 없는 것을 포함하여 적어도 하나의 신체 매개변수를 완화하거나 경감시키는 것을 지칭한다. 또 다른 구현예에서, "치료하다" "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애를 신체적으로, (예를 들어, 식별 가능한 증상의 안정화), 생리적으로, (예를 들어, 신체적 파라미터의 안정화), 또는 둘 다에 대해 조절하는 것을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애를 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"이라는 용어는 질환 또는 장애의 예방적 처치; 또는 질환 또는 장애의 개시 또는 진행을 지연시키는 것을 지칭한다.
용어 "치료적으로 허용 가능한 양" 또는 "치료학적 유효 용량"은 상호교환적으로 원하는 결과(즉, 종양 크기 감소, 종양 성장 억제, 전이 방지, 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생충 감염의 억제 또는 방지)를 일으키는 데 충분한 양을 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료적으로 허용 가능한 양은 바람직하지 않은 부작용을 유도하거나 야기하지 않는다. 일부 구현예에서, 치료적으로 허용 가능한 양은 환자의 상태를 고려하여 의료 제공자가 허용할 수 있는 것 외에는 부작용을 유도하거나 유발한다. 치료적으로 허용 가능한 양은, 먼저 낮은 용량을 투여한 후, 원하는 효과가 달성될 때까지 그 용량을 점증적으로 증가시켜 결정할 수 있다. 본 발명의 분자의 "예방적 유효 투여량" 및 "치료적 유효 투여량"은 각각 암과 관련된 증상을 포함한 질병 증상의 발병을 방지하거나 이의 중증도의 감소를 초래할 수 있다.
용어 "동시-투여(co-administer)"는 개체의 혈액 중 2종의 활성제의 존재를 지칭한다. 동시 투여되는 활성제는 동시에 또는 순차적으로 전달될 수 있다.
본 발명은 PMEL17에 결합하는 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 이의 약물 접합체, 즉, 항체 약물 접합체 또는 ADC를 제공한다. 특히, 본 발명은 PMEL17에 결합하고, 이러한 결합에 내재화하는 항체 및 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공한다. 본 발명의 항체 및 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 항체 약물 접합체를 생산하는 데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명은 바람직한 약동학적 특성 및 기타 바람직한 특성을 갖는 항체 약물 접합체를 제공하여 PMEL17을 발현하는 암의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 본 발명은 추가로 본 발명의 항체 약물 접합체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 암의 치료 또는 예방을 위한 이러한 약제학적 조성물의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
약물 모이어티(D)
일 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제, 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 GNAQ 억제제이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 GNA11 억제제이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티(D)는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티는 하기 화학식 (A)의 구조를 갖는 화합물이며:
[화학식 (A)]
Figure pct00031
,
상기 식에서, R0은 메틸 또는 에틸이고, R1은 메틸 또는 i-프로필이고, R2는 메틸 또는 에틸이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티는 하기 구조를 갖는 화합물 (A1)이다:
[화합물 (A1)]
Figure pct00032
.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티는 하기 구조를 갖는 화합물(A2)이다:
[화합물 (A2)]
Figure pct00033
.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 약물 모이어티는 하기 구조를 갖는 화합물 (A3)이다:
[화합물 (A3)]
Figure pct00034
.
표 1은 실시예 5에 기재된 분석을 사용하여 수득된 화합물들 (A1), (A2) 및 (A3)의 억제 활성을 제공한다.
[표 1]
Figure pct00035
링커-약물 모이어티(L A -(D) n )
제2 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNA11 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNA11 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 불가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 불가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 불가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNA11 억제제로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 링커(LA)에 공유적으로 부착된 하나 이상의 약물 모이어티를 포함하며, 여기서 링커(LA)는 절단 불가능한 링커이며, 하나 이상의 약물 모이어티는 각각 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))의 링커(LA)는 하기 화학식을 가지며:
Figure pct00036
상기 식에서,
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00037
,
Figure pct00038
,
Figure pct00039
,
Figure pct00040
,
Figure pct00041
,
Figure pct00042
,
Figure pct00043
또는
Figure pct00044
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 다른 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체의 링커-약물 모이어티((LA-(D)n)))는 하기 화학식을 가지며:
Figure pct00045
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00046
,
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
,
Figure pct00050
,
Figure pct00051
,
Figure pct00052
또는
Figure pct00053
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
링커-약물 화합물(L B -(D) n )
일 양태에서, 본 발명의 링커-약물은 하기 화학식 (B)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
[화학식 (B)]
R8-LB-(D)n
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
R8은 반응성 기이고;
LB는 절단 가능한 링커 또는 절단-불가능한 링커이고,
n은 1, 2, 3 또는 4이다.
일 양태에서, 본 발명의 링커-약물은 하기 화학식 (B)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이며, 상기 식에서
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
R8은 반응성 기이고;
LB는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 카보네이트 기 및 2가 펩티드 링커로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이고,
n은 1, 2, 3 또는 4이다.
일 양태에서, 본 발명의 링커-약물은 하기 화학식 (B-1)의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
[화학식 (B-1)]
Figure pct00054
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
R8은 반응성 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00055
,
Figure pct00056
,
Figure pct00057
,
Figure pct00058
,
Figure pct00059
,
Figure pct00060
,
Figure pct00061
또는
Figure pct00062
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
본 발명의 링커-약물 화합물의 소정의 양태 및 예가 추가의 열거된 구현예의 하기 목록에 제공된다. 각각의 구현예에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 구현예를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
구현예 1. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 GNAQ 억제제이다.
구현예 2. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 GNA11 억제제이다.
구현예 3. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이다.
구현예 4. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 하기이며:
Figure pct00063
,
여기서, R0은 메틸 또는 에틸이며, R1은 메틸 또는 이소프로필이며, R2는 메틸 또는 에틸이며, ***는 LB 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 5. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 하기이며:
Figure pct00064
,
여기서, ***는 LB 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 6. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 하기이며:
Figure pct00065
,
여기서, ***는 LB 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 7. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로서, D는 하기이며:
Figure pct00066
,
여기서, ***는 LB 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 8. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 화학식 (B-2)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-2)]
Figure pct00067
,
상기 식에서,
R0은 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2은 메틸 또는 에틸이고;
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 9. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물, 또는 화학식 (B-2a)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-2a)]
Figure pct00068
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 10. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물, 또는 화학식 (B-2b)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-2b)]
Figure pct00069
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 11. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물, 또는 화학식 (B-2c)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-2c)]
Figure pct00070
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 12. 화학식 (B) 또는 화학식 (B-1)의 화합물, 또는 화학식 (B-3)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-3)]
Figure pct00071
,
상기 식에서,
R0은 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2은 메틸 또는 에틸이고;
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 13. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물, 또는 화학식 (B-3a)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-3a)]
Figure pct00072
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 14. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물, 또는 화학식 (B-3b)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-3b)]
Figure pct00073
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 15. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물, 또는 화학식 (B-3c)의 구조를 갖는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
[화학식 (B-3c)]
Figure pct00074
,
상기 식에서,
X2, L1, L2 및 R8은 상기 화학식 (B-1)의 화합물에서 정의한 바와 같다.
구현예 16. 구현예 8의 화학식 (B-2), 구현예 12의 화학식 (B-3)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
X2는
Figure pct00075
,
Figure pct00076
,
Figure pct00077
,
Figure pct00078
,
Figure pct00079
,
Figure pct00080
및
Figure pct00081
로부터 선택되는 자기-희생적 스페이서이며, 여기서, X2의 *은 L1에 대한 부착 지점을 나타내며, X2의 **은
Figure pct00082
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00083
기에 대한 부착 지점을 나타내며;
L1은 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이며;
L2는 링커이고,
R8은
Figure pct00084
, -N3, -ONH2, -NR4C(=O)CH=CH2, SH, -SSR13, -S(=O)2(CH=CH2), -NR4S(=O)2(CH=CH2), -NR4C(=O)CH2Br, -NR4C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(=O)NHNH2,
Figure pct00085
, -CO2H, -NH2,
Figure pct00086
,
Figure pct00087
,
Figure pct00088
,
Figure pct00089
,
Figure pct00090
,
Figure pct00091
,
Figure pct00092
,
Figure pct00093
,
Figure pct00094
,
Figure pct00095
또는
Figure pct00096
로부터 선택되고, 여기서:
각각의 R4는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
및
각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 17. 구현예 1 내지 구현예 16 중 어느 하나에 있어서, X2는
Figure pct00097
,
Figure pct00098
,
Figure pct00099
,
Figure pct00100
,
Figure pct00101
,
Figure pct00102
및
Figure pct00103
로부터 선택되는 자기-희생적 스페이서이고, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내며, X2의 **는 Y1에 대한 부착 지점,
Figure pct00104
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00105
기에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 18. 구현예 1 내지 구현예 17 중 어느 하나에 있어서, X2는
Figure pct00106
이며, 여기서, X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내며, X2의 **는 Y1에 대한 부착 지점,
Figure pct00107
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00108
기에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 19. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은 2 내지 4개의 아미노산 잔기들을 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 20. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 21. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은 적어도 하나의 발린(Val) 또는 시트룰린(Cit) 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 22. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은 ValCit, PheLys, ValAla 및 ValLys으로부터 선택되는 2가 디펩티드 링커인, 화합물.
구현예 23. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은
Figure pct00109
(ValCit),
Figure pct00110
(PheLys),
Figure pct00111
(ValAla),
Figure pct00112
(ValLys) 및
Figure pct00113
(LeuCit)로부터 선택되는 2가 디펩티드 링커이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 24. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, L1은 ValCit이다.
구현예 25. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서,
L1은
Figure pct00114
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 26. 구현예 1 내지 구현예 25 중 어느 하나에 있어서, L2는 링커이다.
구현예 27. 구현예 1 내지 구현예 25 중 어느 하나에 있어서, L2는 하기로부터 선택되는 링커이고:
-*C(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**-, -* ((CH2)mO)p(CH2)m**-, -*((CH2)mO)p(CH2)m**-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, -* (CH2)mNHC(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m**-, -*((CH2)mO)p(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, -* *((CH2)mO)pCH2)mC(=O)NH(CH2)m**-, -*(CH2)mC(R3)2**-, 및 -*(CH2)mC(R3)2SS(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고;
여기서:
각각의 R3는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 독립적으로 선택되고,
각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 및 14로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 28. 구현예 1 내지 구현예 25 중 어느 하나에 있어서, L2는 -*C(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**- 또는 -*C(=O)(CH2)m**-이며, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고,
여기서, 각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10으로부터 독립적으로 선택되고, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14이다.
구현예 29. 구현예 1 내지 구현예 25 중 어느 하나에 있어서, L2는
Figure pct00115
,
Figure pct00116
, 또는
Figure pct00117
이며, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 30. 구현예 1 내지 구현예 29 중 어느 하나에 있어서, R8은
Figure pct00118
, -N3, -ONH2, -NR4C(=O)CH=CH2, SH, -SSR13, -S(=O)2(CH=CH2), -NR4S(=O)2(CH=CH2), -NR4C(=O)CH2Br, -NR4C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -C(=O)NHNH2,
Figure pct00119
, -CO2H, -NH2,
Figure pct00120
,
Figure pct00121
,
Figure pct00122
,
Figure pct00123
,
Figure pct00124
,
Figure pct00125
,
Figure pct00126
,
Figure pct00127
,
Figure pct00128
,
Figure pct00129
또는
Figure pct00130
이며, 여기서:
각각의 R4는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
및
각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 31. 구현예 1 내지 구현예 29 중 어느 하나에 있어서, R8은
Figure pct00131
, -ONH2,
Figure pct00132
,
Figure pct00133
또는
Figure pct00134
이다.
구현예 32. 구현예 1 내지 구현예 29 중 어느 하나에 있어서, R8은
Figure pct00135
이다.
구현예 33. 구현예 8의 화학식 (B-2)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
X2는
Figure pct00136
이고, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는
Figure pct00137
기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은
Figure pct00138
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L2는
Figure pct00139
또는
Figure pct00140
이고, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고,
및
R8은
Figure pct00141
이다.
구현예 34. 구현예 12의 화학식 (B-3)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서:
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
X2는
Figure pct00142
이고, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는
Figure pct00143
기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은
Figure pct00144
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L2는
Figure pct00145
또는
Figure pct00146
이고, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고,
및
R8은
Figure pct00147
이다.
구현예 35. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B1)]
Figure pct00148
이다.
구현예 36. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B2)]
Figure pct00149
이다.
구현예 37. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B3)]
Figure pct00150
이다.
구현예 38. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B4)]
Figure pct00151
이다.
구현예 39. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B5)]
Figure pct00152
이다.
구현예 40. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-2)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B6)]
Figure pct00153
이다.
구현예 41. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B7)]
Figure pct00154
이다.
구현예 42. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B8)]
Figure pct00155
이다.
구현예 43. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B9)]
Figure pct00156
이다.
구현예 44. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B10)]
Figure pct00157
이다.
구현예 45. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B11)]
Figure pct00158
이다.
구현예 46. 화학식 (B), 화학식 (B-1) 또는 화학식 (B-3)의 화합물로서, 상기 화합물은
[화합물 (B12)]
Figure pct00159
이다.
항체 약물 접합체
일 양태에서, 본 발명의 항체 약물 접합체는 화학식 (C)의 접합체이다:
[화학식 (C)]
Ab-(LA-(D)n)y
상기 식에서,
D는 약물 모이어티이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
LA는 링커이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
y는 1, 2, 3 또는 4이고,
여기서 링커-약물 모이어티(LA-(D)n)는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 공유적으로 부착된다.
일 양태에서, 화학식 (C)의 구조를 갖는 본 발명의 항체 약물 접합체로서, 여기서:
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 카보네이트 기 및 2가 펩티드 링커로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이고;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
y는 1, 2, 3 또는 4이고,
여기서 링커-약물 모이어티(LA-(D)n)는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 공유적으로 부착된다.
일 양태에서, 화학식 (C)의 항체 약물 접합체는 화학식 (C-1)의 접합체이며:
[화학식 (C-1)]
Figure pct00160
상기 식에서,
D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00161
,
Figure pct00162
,
Figure pct00163
,
Figure pct00164
,
Figure pct00165
,
Figure pct00166
,
Figure pct00167
또는
Figure pct00168
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 D에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
화학식 (C)의 접합체에서, 하나 이상의 링커-약물 모이어티(LB-(D)n)는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab에 공유적으로 부착될 수 있으며, 이에 의해 하나 이상의 약물 모이어티, D를 링커, LA를 통해 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab에 공유적으로 부착할 수 있다. LA는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab를 하나 이상의 약물 모이어티 D에 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이다. 하나 이상의 약물 모이어티 D가 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab에 공유 연결된 화학식 (C)의 접합체는 동일하거나 상이한 하나 이상의 반응성 기능 기를 갖는 이작용성 또는 다작용성 링커 시약을 사용하여 형성될 수 있다. 이작용성 또는 다작용성 링커 시약의 반응성 작용기 중 하나는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab 상의 기, 예로서, 티올 또는 아민(예를 들어, 시스테인, N-말단 또는 아미노산 측쇄, 예컨대, 리신)과 반응하여 링커 LA의 한쪽 말단과 공유 연결을 형성하도록 사용된다. 이작용성 또는 다작용성 링커 시약의 이러한 반응성 작용기는 말레이미드, 티올 및 NHS 에스테르를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이작용성 또는 다작용성 링커 시약의 다른 반응성 작용기 또는 기들은 하나 이상의 약물 모이어티 D를 링커 LA에 공유 부착시키도록 사용된다.
일 양태에서, LA는 절단 가능한 링커이다. 다른 양태에서, LA는 절단 불가능한 링커이다. 일부 양태에서, LA는 산 불안정 링커, 광 불안정 링커, 펩티다아제 절단 가능한 링커, 에스테라아제 절단 가능한 링커, 글리코시다아제 절단 가능한 링커, 포스포디에스테라아제 절단 가능한 링커, 디설파이드 결합 환원성 링커, 친수성 링커, 또는 디카복실산 기반 링커이다.
일 양태에서, LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 카보네이트 기 및 2가 펩티드 링커로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이다.
일 양태에서, LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 카보네이트 기, 2가 펩티드 링커 및 2가 커플링 기로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이다.
일 양태에서, LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 및 2가 펩티드 링커로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이다.
일 양태에서, LA는 자기-희생 스페이서, 포스페이트 기, 2가 펩티드 링커 및 2가 커플링 기로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분을 포함하는 절단 가능한 링커이다.
다른 양태에서, 링커(LA)는 하기 화학식을 가지며:
Figure pct00169
상기 식에서,
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00170
,
Figure pct00171
,
Figure pct00172
,
Figure pct00173
,
Figure pct00174
,
Figure pct00175
,
Figure pct00176
또는
Figure pct00177
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고, Y1의 **는 다른 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
다른 양태에서, 링커(LA)는 하기 화학식을 가지며:
Figure pct00178
상기 식에서,
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00179
,
Figure pct00180
,
Figure pct00181
또는
Figure pct00182
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
다른 양태에서, 링커(LA)는 하기 화학식을 가지며:
Figure pct00183
상기 식에서,
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
Y1은
Figure pct00184
,
Figure pct00185
,
Figure pct00186
또는
Figure pct00187
이고, 여기서 Y1의 *는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은 2가 펩티드 링커이고,
L2는 결합 또는 링커이다.
약물 대 항체 비율은 소정의 접합체 분자의 경우 정확한 정수 값을 갖지만(예를 들어, 화학식 (C)의 n과 y의 곱), 이 값이 여러 분자를 함유하는 샘플을 설명하기 위하여 사용될 때에는 전형적으로는 접합 단계와 연관된 어느 정도의 이질성으로 인해 종종 평균 값일 것임이 이해된다. 접합체의 샘플에 대한 평균 부하량은 본원에서 약물 대 항체 비율, 또는 "DAR"로 지칭된다. 일부 양태에서, DAR은 약 1 내지 약 5이고, 전형적으로는 약 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 양태에서, 샘플의 적어도 50중량%는 평균 DAR±2를 갖는 화합물이고, 바람직하게는 샘플의 적어도 50%는 평균 DAR±1을 함유하는 접합체이다. 다른 양태는 DAR이 약 2인 접합체를 포함한다. 일부 양태에서, '약 y'의 DAR은 DAR에 대해 측정된 값이 화학식 I의 n과 y의 곱셈값의 20% 이내임을 의미한다. 일부 양태에서, '약 n'의 DAR은 DAR에 대해 측정된 값이 화학식 II의 n의 20% 이내임을 의미한다.
일 양태에서, 화학식 (C)의 접합체에서 약물 대 항체 단편(Fab 또는 Fab')의 평균 몰 비율(즉, 약물 대 항체 비율(DAR)로도 공지된 n과 y의 곱의 평균 값)은 약 1 내지 약 10, 약 1 내지 약 6(예를 들어, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0), 약 1 내지 약 5, 약 1.5 내지 약 4.5, 또는 약 2 내지 약 4이다.
본 발명에 의해 제공된 일 양태에서, 접합체는 실질적으로 높은 순도를 가지며, 다음 특징 중 하나 이상을 갖는다: (a) 약 90% 초과(예를 들어, 약 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 이상), 바람직하게는 약 95% 초과의 접합체 종이 단량체성임, (b) 접합체 제제 내의 비접합된 링커 수준이 (전체 링커에 대해) 약 10% 미만임(예를 들어, 약 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0% 이하), (c) 접합체 종의 10% 미만(예를 들어, 약 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0% 이하)이 가교됨, (d) 접합체 제제 내의 유리 약물(ADP-유도된 혈소판 응집 억제제, 예를 들어, GNAQ 억제제, GNA11 억제제, 또는 GNAQ 및 GNA11 억제제) 수준이 약 2% 미만임(예를 들어, 약 1.5%, 1.4%, 1.3%, 1.2%, 1.1%, 1.0%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 또는 0% 이하임)(전체 약물에 대한, mol/mol).
본 발명의 항체 약물 접합체의 소정의 양태 및 예가 추가의 열거된 구현예의 하기 목록에 제공된다. 각각의 구현예에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 구현예를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
구현예 47. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는 GNAQ 억제제이다.
구현예 48. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는 GNA11 억제제이다.
구현예 49. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이다.
구현예 50. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는
Figure pct00188
이며,
여기서, R0은 메틸 또는 에틸이며, R1은 메틸 또는 이소프로필이며, R2는 메틸 또는 에틸이며, ***는 LA 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 51. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는
Figure pct00189
,
여기서, ***는 LA 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 52. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는
Figure pct00190
이며,
여기서, ***는 LA 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 53. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, D는
Figure pct00191
이며,
여기서, ***는 LA 또는 Y1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 54. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-2)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-2)]
Figure pct00192
,
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 55. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-2a)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-2a)]
Figure pct00193
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 56. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-2b)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-2b)]
Figure pct00194
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 57. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-2c)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-2c)]
Figure pct00195
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 58. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-3)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-3)]
Figure pct00196
,
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 59. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-3a)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-3a)]
Figure pct00197
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 60. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-3b)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-3b)]
Figure pct00198
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 61. 화학식 (C) 또는 화학식 (C-1)의 접합체로서, 화학식 (C-3c)의 구조를 가지며:
[화학식 (C-3c)]
Figure pct00199
,
상기 식에서,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X1은 2가 커플링 기이고;
X2는 자기-희생적 스페이서이고;
L1은 2가 펩티드 링커이고;
L2는 결합 또는 링커이며,
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 62. 구현예 54의 화학식 (C-2)의 접합체 또는 구현예 58의 화학식 (C-3)의 접합체로서:
상기 식에서,
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
X2는
Figure pct00200
,
Figure pct00201
,
Figure pct00202
,
Figure pct00203
,
Figure pct00204
,
Figure pct00205
및
Figure pct00206
로부터 선택되는 자기-희생적 스페이서이며, 여기서, X2의 *은 L1에 대한 부착 지점을 나타내며, X2의 **은
Figure pct00207
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00208
기에 대한 부착 지점을 나타내며;
L1은 2 내지 4개의 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이며;
L2는 링커이고;
X1은
Figure pct00209
,
Figure pct00210
,
Figure pct00211
,
Figure pct00212
,
Figure pct00213
,
Figure pct00214
, -*NR4C(=O)CH2**-, -*NHC(=O)CH2**-, -*S(=O)2CH2CH2**-, -* (CH2)2S(=O)2CH2CH2**-, -*NR4S(=O)2CH2CH2**-, -*NR4C(=O)CH2CH2**-, -NH-, -C(=O)-, -*NHC(=O)**-, -*CH2NHCH2CH2**-, -*NHCH2CH2**-, -S-,
Figure pct00215
,
Figure pct00216
,
Figure pct00217
,
Figure pct00218
,
Figure pct00219
,
Figure pct00220
,
Figure pct00221
,
Figure pct00222
,
Figure pct00223
, **-,로부터 선택되는 2가 커플링 기이고, 여기서 X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
여기서:
각각의 R4는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
및
각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택되고;
및
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 63. 구현예 54 내지 구현예 62 중 어느 하나에 있어서, X2는
Figure pct00224
,
Figure pct00225
,
Figure pct00226
,
Figure pct00227
,
Figure pct00228
,
Figure pct00229
및
Figure pct00230
로부터 선택되는 자기-희생적 스페이서이며, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는 Y1에 대한 부착 지점, 또는
Figure pct00231
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00232
기에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 64. 구현예 54 내지 구현예 63 중 어느 하나에 있어서, 여기서 X2는
Figure pct00233
이며, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는 Y1에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00234
기에 대한 부착 지점 또는
Figure pct00235
기에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 65. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서, L1은 2 내지 4개의 아미노산 잔기들을 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 66. 구현예 54 내지 구현예 65 중 어느 하나에 있어서, L1은 발린, 시트룰린, 리신, 이소류신, 페닐알라닌, 메티오닌, 아스파라긴, 프롤린, 알라닌, 류신, 트립토판 및 티로신으로부터 선택되는 아미노산 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 67. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서, L1은 적어도 하나의 발린(Val) 또는 시트룰린(Cit) 잔기를 포함하는 2가 펩티드 링커이다.
구현예 68. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서, L1은 ValCit, PheLys, ValAla 및 ValLys으로부터 선택되는 2가 디펩티드 링커이다.
구현예 69. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서, L1은
Figure pct00236
(ValCit),
Figure pct00237
(PheLys),
Figure pct00238
(ValAla),
Figure pct00239
(ValLys) 및
Figure pct00240
(LeuCit)로부터 선택되는 2가 디펩티드 링커이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 70. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서, L1은 ValCit이다.
구현예 71. 구현예 54 내지 구현예 64 중 어느 하나에 있어서,
L1은
Figure pct00241
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 72. 구현예 54 내지 구현예 71 중 어느 하나에 있어서, L2는 링커이다.
구현예 73. 구현예 54 내지 구현예 71 중 어느 하나에 있어서, L2는 하기로부터 선택되는 링커이고:
-*C(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)nNHC(=O)(CH2)m**-, -*C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**-, -* ((CH2)mO)p(CH2)m**-, -*((CH2)mO)p(CH2)m**-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, -* (CH2)mNHC(=O)(CH2)mC(=O)NH(CH2)m**-, -* ((CH2)mO)p(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, -* *((CH2)mO)pCH2)mC(=O)NH(CH2)m**-, -* (CH2)mC(R3)2**-, 및 -* (CH2)mC(R3)2SS(CH2)mNHC(=O)(CH2)m**-, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 X1에 대한 부착 지점을 나타내고;
여기서:
각각의 R3는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 독립적으로 선택되고,
각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 및 14로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 74. 구현예 54 내지 구현예 71 중 어느 하나에 있어서, L2는 -*C(=O)((CH2)mO)p(CH2)m**- 또는 -*C(=O)(CH2)m**-이며, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 X1에 대한 부착 지점을 나타내고,
여기서, 각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10으로부터 독립적으로 선택되고, p는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14이다.
구현예 75. 구현예 54 내지 구현예 71 중 어느 하나에 있어서, L2는
Figure pct00242
,
Figure pct00243
또는
Figure pct00244
이며, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 X1에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 76. 구현예 54 내지 구현예 75 중 어느 하나에 있어서,
여기서, X1은
Figure pct00245
,
Figure pct00246
,
Figure pct00247
,
Figure pct00248
,
Figure pct00249
,
Figure pct00250
, -*NR4C(=O)CH2**-, -*NHC(=O)CH2**-, -*S(=O)2CH2CH2**-, -*(CH2)2S(=O)2CH2CH2**-, -*NR4S(=O)2CH2CH2**-, -*NR4C(=O)CH2CH2**-, -NH-, -C(=O)-, -*NHC(=O)**-, -*CH2NHCH2CH2**-, -*NHCH2CH2**-, -S-,
Figure pct00251
,
Figure pct00252
,
Figure pct00253
,
Figure pct00254
,
Figure pct00255
,
Figure pct00256
,
Figure pct00257
,
Figure pct00258
,
Figure pct00259
, **-로부터 선택되는 2가 커플링 기이고, 여기서 X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고;
여기서:
각각의 R4는 H 및 C1-C6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5은 H, C1-C6알킬, F, Cl, 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 H, C1-C6알킬, F, Cl, -NH2, -OCH3, -OCH2CH3, -N(CH3)2, -CN, -NO2 및 -OH로부터 독립적으로 선택되고;
및
각각의 R7은 H, C1-6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1-4알콕시, 및 -C(=O)OH로 치환된 C1-4알킬로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 77. 구현예 54 내지 구현예 75 중 어느 하나에 있어서,
상기 X1은
Figure pct00260
,
Figure pct00261
,
Figure pct00262
,
Figure pct00263
,
Figure pct00264
및
Figure pct00265
로부터 선택되는 2가 커플링 기이며, 여기서 X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 78. 구현예 54 내지 구현예 75 중 어느 하나에 있어서,
상기 X1은
Figure pct00266
,
Figure pct00267
, 및
Figure pct00268
로부터 선택되는 2가 커플링 기이며, 여기서 X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타낸다.
구현예 79. 구현예 54의 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
X1은
Figure pct00269
,
Figure pct00270
, 및
Figure pct00271
로부터 선택되는 2가 커플링 기이고, X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고,
X2는
Figure pct00272
이고, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는
Figure pct00273
기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은
Figure pct00274
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L2는
Figure pct00275
또는
Figure pct00276
이고, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고,
및
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 80. 구현예 58의 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
R0는 메틸 또는 에틸이고;
R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
R2는 메틸 또는 에틸이고;
X1은
Figure pct00277
,
Figure pct00278
, 및
Figure pct00279
로부터 선택되는 2가 커플링 기이고, X1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, X1의 **는 Ab에 대한 부착 지점을 나타내고,
X2는
Figure pct00280
이고, 여기서 X2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, X2의 **는
Figure pct00281
기에 대한 부착 지점을 나타내고;
L1은
Figure pct00282
(ValCit)이며, 여기서 L1의 *는 L2에 대한 부착 지점을 나타내고, L1의 **는 X2에 대한 부착 지점을 나타내고;
L2는
Figure pct00283
또는
Figure pct00284
이고, 여기서 L2의 *는 L1에 대한 부착 지점을 나타내고, L2의 **는 R8에 대한 부착 지점을 나타내고,
및
y는 1, 2, 3 또는 4이다.
구현예 81. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00285
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 82. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00286
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 83. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00287
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 84. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00288
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 85. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00289
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 86. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-2)의 접합체로서:
Figure pct00290
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 87. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00291
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 88. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00292
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 89. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00293
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 90. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00294
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 91. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00295
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
구현예 92. 하기 구조를 갖는 화학식 (C), 화학식 (C-1) 또는 화학식 (C-3)의 접합체로서:
Figure pct00296
상기 식에서,
y는 2 또는 4이며,
Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
또한, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 주어진 생물학적 반응을 변형시키는 약물 모이어티에 접합될 수 있다. 약물 모이어티는 고전적인 화학적 치료제로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 약물 모이어티는 요망되는 생물학적 활성을 갖는 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드일 수 있다. 이러한 단백질은 예를 들어, 독소, 예컨대 아브린(abrin), 리신(ricin) A, 슈도모나스 외독소, 콜레라 독소 또는 디프테리아 독소; 단백질, 예컨대 종양 괴사 인자, α-인터페론, β-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판-유래 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화제, 사이토카인, 아폽토시스 제제, 항-혈관형성 제제; 또는 생물학적 반응 변경제, 예컨대 림포카인을 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 약물 모이어티, 예컨대 세포독소, 약물(예를 들어, 면역억제제) 또는 방사성독소에 접합된다. 세포독소의 예는 탁산(예를 들어, 국제(PCT) 특허 출원 번호 WO 01/38318 및 PCT/US03/02675 참고), DNA-알킬화제(예를 들어, CC-1065 유사체), 안트라사이클린, 튜불리신 유사체, 듀오카르마이신 유사체, 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 F, 메이탄시노이드, 피롤로벤조디아지핀(PBD), 및 반응성 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하는 세포독성제(예를 들어, 문헌[Sasse et al., J. Antibiot. (Tokyo), 53, 87985 (2000)], 문헌[Suzawa et al., Bioorg. Med. Chem., 8, 217584 (2000)], 문헌[Ichimura et al., J. Antibiot. (Tokyo), 44, 104553 (1991)], 문헌[Francisco et al., Blood (2003)] (인쇄물 공보 전 전자 공보), 미국 특허 제5,475,092호, 제6,340,701호, 제6,372,738호, 및 제6,436,931호, 미국 특허 출원 공개 번호 2001/0036923 A1, 계류중인 미국 특허 출원 시리얼 번호 10/024,290 및 10/116,053, 및 국제(PCT) 특허 출원 번호 WO 01/49698), 탁손, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, t. 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 퓨로마이신 및 이의 유사체 및 동족체를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 치료제는 예를 들어, 항대사물질(예를 들어, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 흡열제(예를 들어, 메클로르에타민, 티오테파 클로람부실, 메이팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 플래티넘(II)(DDP) 시스플라틴, 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(예전 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(예전 액티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신(AMC)), 및 항-유사분열 제제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)를 포함한다. (예를 들어, Seattle Genetics US20090304721 참고).
본 발명의 항체, 항체 단편(항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물에 접합될 수 있는 세포독소의 다른 예는 듀오카르마이신, 칼리케아미신, 메이탄신 및 아우리스타틴, 및 이들의 유도체를 포함한다.
항체에 치료제를 접합하기 위한 다양한 유형의 세포독소, 링커 및 방법이 당 업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Saito et al., (2003) Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199215]; 문헌[Trail et al., (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328337]; 문헌[Payne, (2003) Cancer Cell 3:207212]; 문헌[Allen, (2002) Nat. Rev. Cancer 2:750763]; 문헌[Pastan and Kreitman, (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3:10891091]; 문헌[Senter and Springer, (2001) Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247264]을 참조한다.
본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 또한 방사성 동위원소에 접합되어 세포독성 방사성 약제를 생성할 수 있으며, 방사성 면역접합체로도 지칭된다. 진단적 또는 치료적 사용을 위해 항체에 접합될 수 있는 방사성 동위원소의 예는 요오드-131, 인듐-111, 이트륨-90, 및 루테튬-177을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다. 방사성 면역접합체의 제조 방법은 당 업계에 확립되어 있다. 방사성 면역접합체의 예는 ZevalinTM(DEC Pharmaceuticals) 및 BexxarTM(Corixa Pharmaceuticals)을 포함하여, 상업적으로 이용 가능하며, 본 발명의 항체를 사용하여 방사성 면역접합체를 제조하는 데 유사한 방법들이 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 거대환식 킬레이터는 링커 분자를 통해 항체에 부착될 수 있는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N'',N'''-테트라아세트산(DOTA)이다. 이러한 링커 분자는 당업계에 일반적으로 공지되어 있고, 각각 그 전체가 참고로 포함된 문헌[Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4 (10):248390]; 문헌[Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10 (4):5537]; 및 문헌[Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26 (8):94350]에 기재되어 있다.
본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능성 등가물은 또한, 이종 단백질 또는 폴리펩티드(또는 이의 단편, 바람직하게는 적어도 10, 적어도 20, 적어도 30, 적어도 40, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 70, 적어도 80, 적어도 90 또는 적어도 100개 아미노산의 폴리펩티드)에 접합하여 융합 단백질을 생성할 수 있다. 특히, 본 발명은 본원에 기재된 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)(예를 들어, Fab 단편, Fd 단편, Fv 단편, F(ab)2 단편, VH 도메인, VH CDR, VL 도메인 또는 VL CDR) 및 이종 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다.
추가의 융합 단백질은 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링 및/또는 코돈-셔플링("DNA 셔플링"으로 총칭됨) 기술을 통해 생성될 수 있다. DNA 셔플링은 본 발명의 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 더 높은 친화도 및 더 낮은 해리 속도를 갖는 항체 또는 이의 단편)의 활성을 변경하도록 이용될 수 있다. 일반적으로, 미국 특허 번호 제5,605,793, 5,811,238, 5,830,721, 5,834,252, 및 5,837,458호; 문헌[Patten et al., (1997) Curr. Opinion Biotechnol. 8:72433]; 문헌[Harayama, (1998) Trends Biotechnol. 16(2):7682]; 문헌[Hansson et al., (1999) J. Mol. Biol. 287:26576; 및 Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24 (2):308313]을 참조한다(이들 특허 및 공개는 각각 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함됨). 항체 또는 이의 단편, 또는 암호화된 항체 및 이의 단편은 재조합 이전에, 오류-유발 PCR, 무작위 뉴클레오티드 삽입 또는 다른 방법에 의해 무작위 돌연변이유발 처리됨으로써 변경될 수 있다. 항원에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 구성성분, 모티프, 섹션, 파트, 도메인, 단편 등과 재조합될 수 있다.
더욱이, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 정제를 용이하게 하기 위해 펩티드와 같은 마커 서열에 접합될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 마커 아미노산 서열은 많은 것들이 상업적으로 이용 가능한 다른 것들 중에서 헥사-히스티딘 펩티드(SEQ ID NO: 267), 예컨대 pQE 벡터에 제공된 태그(QIAGEN, Inc., 캘리포니아주 91311 채츠워스 9259 이튼 애비뉴)이다. 문헌[Gentz et al., (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821824]에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘(SEQ ID NO: 267)은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는, 인플루엔자 혈구응집소 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응하는 혈구응집소("HA"; 헤마글루티닌) 태그(문헌[Wilson et al., (1984) Cell 37:767]) 및 "플래그(flag)" 태그를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(문헌[A. Einhauer et al., J. Biochem. Biophys. Methods 49: 455465, 2001]). 본 발명에 따르면, 항체 또는 항원 결합 단편은 그의 효능을 개선시키기 위해 종양-침투 펩티드에 접합될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 진단 또는 검출 가능한 작용제에 접합된다. 이러한 면역접합체는 임상 테스트 절차의 일부로서 질환 또는 장애의 발병, 발달, 진행 및/또는 중증도를 모니터링하거나 전망(prognose)하는 데, 예컨대 특정 요법의 효능을 결정하는 데 유용할 수 있다. 이러한 진단 및 검출은 항체를 비제한적인 예로서 다양한 효소, 예컨대, 비제한적인 예로서 겨자무 과산화효소, 알칼리 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스터라제; 보결분자단, 예컨대, 비제한적인 예로서 스트렙타비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴; 형광 재료, 예컨대 비제한적인 예로서 Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 405, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 500, Alexa Fluor 514, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 555, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 610, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680, Alexa Fluor 700, Alexa Fluor 750, 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린 발광 재료, 예컨대, 비제한적인 예로서 루미놀; 생물발광 재료, 예컨대 비제한적인 예로서 루시퍼라제, 루시페린 및 에쿠오린; 방사성 재료, 예컨대, 비제한적인 예로서 요오드(131I, 125I, 123I 및 121I,), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(115In, 113In, 112In 및 111In,), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga, 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브덴(99Mo), 크세논(133Xe), 불소(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 64Cu, 113Sn, 및 117Sn; 및 다양한 양전자 방출 단층촬영을 이용한 양전자 방출 금속 및 비방사성 상자성 금속 이온을 포함하는 검출 가능한 물질에 커플링하여 달성될 수 있다.
본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 기능적 등가물은 또한, 표적 항원의 면역분석 또는 정제에 특히 유용한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 이러한 고체 지지체는 유리, 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
3. ADC의 접합 및 제조
화학식 (C), 화학식 (C-1) 및 화학식 (C-2)의 항체 접합체를 제조하는 방법
화학식 (C)의 접합체 형성을 위한 일반적인 반응식은 하기 반응식 1에 도시되어 있다:
[반응식 1]
Figure pct00297
여기서, RG1은 링커-약물 화합물에 부착된 적합한 반응성 기 R8과 반응하여, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 Ab를 하나 이상의 링커-약물 모이어티에 공유 연결하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab 상의 반응성 기이며, 오로지 예로서, 티올, 아민 또는 케톤이다. RG1 및 R8 기의 이러한 반응의 비제한적인 예는 티올(RG1)과 반응하여 석신이미드 고리를 제공하는 말레이미드(R8) 또는 케톤(RG1)과 반응하여 옥심을 제공하는 하이드록실아민(R8)이다.
일 구현예에서, D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제, 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)이고, La는 RG1과 R8이 반응할때 형성되는 2가 커플링 기를 추가로 포함하는 링커이고, n은 1, 2, 3 또는 4이며, y는 1, 2, 3 또는 4이다.
화학식 (C-1)의 접합체 형성을 위한 일반적인 반응식은 하기 반응식 2에 도시되어 있다:
[반응식 2]
Figure pct00298
여기서, RG1은 링커-약물 모이어티에 부착된 적합한 반응성 기 R8과 반응하여, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 Ab를 하나 이상의 링커-약물 모이어티에 공유 연결하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab 상의 반응성 기이며, 오로지 예로서, 티올, 아민 또는 케톤이다. RG1 및 R8 기의 이러한 반응의 비제한적인 예는 티올(RG1)과 반응하여 석신이미드 고리를 제공하는 말레이미드(R8) 또는 케톤(RG1)과 반응하여 옥심을 제공하는 하이드록실아민(R8)이다.
일 구현예에서, D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제, 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제(GNAQ/GNA11 억제제)이고, X1은 RG1과 R8이 반응할 때 형성되는 2가 커플링 기이고(예를 들어, 석신이미드 고리 또는 옥심), Y1은 포스페이트 기이며, X2는 자기-희생적 스페이서이고, L1은 2가 펩티드 링커이고, L2는 결합 또는 링커이며, y는 1, 2, 3 또는 4이다.
화학식 (C-2)의 접합체 형성을 위한 일반적인 반응식은 하기 반응식 3에 도시되어 있다:
[반응식 3]
Figure pct00299
여기서, RG1은 링커-약물 모이어티에 부착된 적합한 반응성 기 R8과 반응하여, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 Ab를 하나 이상의 링커-약물 모이어티에 공유 연결하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab 상의 반응성 기이며, 오로지 예로서, 티올, 아민 또는 케톤이다. RG1 및 R8 기의 이러한 반응의 비제한적인 예는 티올(RG1)과 반응하여 석신이미드 고리를 제공하는 말레이미드(R8) 또는 케톤(RG1)과 반응하여 옥심을 제공하는 하이드록실아민(R8)이다.
여기에서, R0은 메틸 또는 에틸이며, R1은 메틸 또는 이소프로필이고, R2는 메틸 또는 에틸이고, X1은 RG1과 R8이 반응할 때 형성되는 2가 커플링 기이고(예를 들어, 석신이미드 고리 또는 옥심), X2는 자기-희생적 스페이서이고, L1은 2가 펩티드 링커이고, L2는 결합 또는 링커이며, y는 1, 2, 3 또는 4이다.
화학식 (C-2)의 접합체 형성을 위한 일반적인 반응식은 하기 반응식 4에 도시되어 있다:
[반응식 4]
Figure pct00300
여기서, RG1은 링커-약물 모이어티에 부착된 적합한 반응성 기 R8과 반응하여, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 Ab를 하나 이상의 링커-약물 모이어티에 공유 연결하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, Ab 상의 반응성 기이며, 오로지 예로서, 티올, 아민 또는 케톤이다. RG1 및 R8 기의 이러한 반응의 비제한적인 예는 티올(RG1)과 반응하여 석신이미드 고리를 제공하는 말레이미드(R8) 또는 케톤(RG1)과 반응하여 옥심을 제공하는 하이드록실아민(R8)이다.
여기에서, R0은 메틸 또는 에틸이며, R1은 메틸 또는 이소프로필이고, R2는 메틸 또는 에틸이고, X1은 RG1과 R8이 반응할 때 형성되는 2가 커플링 기이고(예를 들어, 석신이미드 고리 또는 옥심), X2는 자기-희생적 스페이서이고, L1은 2가 펩티드 링커이고, L2는 결합 또는 링커이며, y는 1, 2, 3 또는 4이다.
조작된 시스테인 항체 잔기에 접합하는 방법
본 발명의 접합체는 예를 들어 부위-지정 돌연변이유발에 의해 항체로 조작된 시스테인 잔기를 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 부위-특이적 접합체는 균질하고, 개선된 특성을 갖는다(Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925932.)
포유동물 세포에서 발현된 항체 내의 조작된 시스테인은 그들의 생합성 중에 부가물(이황화물) 예컨대 글루타티온(GSH) 및/또는 시스테인에 의해 변형되기 때문에(Chen et al. 2009), 처음에 발현된 생성물내 조작된 시스테인 잔기는 티올 반응성 시약, 예컨대 말레이미도 또는 브로모-또는 요오도-아세트아미드 기에 대해 비반응성이다. 발현 후 조작된 시스테인 잔기에 페이로드를 접합시키기 위해서는, 이러한 이황화물 부가물을 환원시켜 글루타티온 또는 시스테인 부가물을 제거할 필요가 있으며, 이는 또한 일반적으로 발현 단백질 내 천연 이황화물의 환원을 수반한다. 부가된 조작된 시스테인의 탈보호는 먼저 항체를 환원제, 예를 들어 디티오트레이톨(DTT), TCEP, 또는 환원된 시스테인에 노출시킨 다음, 항체의 모든 천연 이황화 결합을 재-산화시키는 과정에 의해 기능적 항체 구조를 복원 및/또는 안정화시킴으로써 달성될 수 있다.
항체 약물 접합체의 제조를 위해 조작된 시스테인 잔기로 항체를 환원시키고 재-산화하기 위해 여러 방법들이 사용될 수 있다. 고농도의 CuSO4를 사용하여 이전에 문헌에 설명된 재-산화 프로토콜을 따르려는 시도는 단백질 침전을 초래했다(Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925). 본 발명자들은 여러 가지 환원 및 항체 재-산화 방법으로 항체 약물 접합체를 성공적으로 제조하고 수득했다.
하기는 항체 약물 접합체의 제조를 위해 조작된 시스테인 잔기로 항체를 환원시키고 재-산화하기 위한 방법이다: 새로 제조된 DTT를 정제된 Cys 돌연변이 항체에 10 mM의 최종 농도로 첨가한다. 실온에서 1시간 동안 DTT로 인큐베이션한 후, 매일 완충액을 교환하면서 혼합물을 3일 동안 PBS에 대해 4℃에서 투석하여 DTT를 제거하고 항체의 천연 이황화 결합을 재산화시켰다. 대체 방법은 PBS로 평형화된 Sephadex G-25와 같은 탈염 컬럼을 통해 환원 시약을 제거하는 것이다. 단백질이 완전히 환원되면, 1 mM 산화된 아스코르베이트(데하이드로-아스코르브 산)가 선택적으로 탈염된 샘플에 첨가되고, 재-산화 인큐베이션이 20~24시간 동안 수행된다.
다른 예시적인 방법에서, 조작된 Cys 잔기의 탈보호는 단백질 A-세파로스 수지에 결합된 항체에 20 mM 농도의 완전히 환원된 시스테인을 첨가함으로써 달성된다. Cys 부가물의 환원은 실온에서 약 30~60분 동안 인큐베이션하여 달성한 다음, 50개의 PBS 베드로 수지를 세척하여 환원제를 신속하게 제거한다. 환원된 항체의 재-산화는 촉진제로서 50~2000 nM CuCl2를 첨가하거나 첨가하지 않으면서 실온에서 세척된 슬러리를 인큐베이션함으로써 달성된다. 황산구리의 사용을 제외하고, 본원의 예는 유사한 결과와 함께 본원에 기재된 각각의 프로토콜을 사용한다. 재산화는 사슬 내 이황화물을 복원하는 반면, 투석, 탈염 또는 단백질 A 크로마토그래피는 환원제뿐만 아니라 항체의 조작된 시스테인에 처음 연결된 시스테인 및 글루타티온을 제거한다. HPLC 역상 크로마토그래피는 전형적으로 재산화 과정을 모니터링하는 데 사용된다: 80℃로 가열된 PLRP-S 컬럼(4000 Å, 50 mm × 2.1 mm, Agilent) 상에 항체를 로드하고, 0.1% TFA를 함유하는 물 중의 30~45% CH3CN의 선형 구배 및 215, 254, 및 280 nm에서 피크 검출을 사용하여 1.5 mL/분으로 용리하였다.
재-산화 후, 항체는 예를 들어 화학식 (B), 화학식 (B-1), 화학식 (B-2) 또는 화학식 (B-3)의 링커-약물 화합물에 접합된다(반응식 1~4 참고). 예를 들어 화학식 (B), 화학식 (B-1), 화학식 (B-2) 또는 화학식 (B-3)의 화합물은 PBS 완충액(pH 7.2)의 항체에 대해 5~10몰 당량으로 재-산화된 Cys 돌연변이 항체에 첨가된다. 인큐베이션은 1~2시간 동안 수행된다. 접합 과정은 역상 HPLC로 모니터링되며, 이는 접합된 항체를 접합되지 않은 항체와 분리할 수 있다. 접합 반응 혼합물을 80℃로 가열된 PRLP-S 컬럼(4000Å, 50 mm x 2.1 mm, Agilent)에서 분석하고, 0.1% TFA를 함유하는 물 중의 30~60% 아세토니트릴의 선형 구배에 의해 1.5 ml/분의 유량으로 컬럼 용리를 수행하였다. 컬럼에서 단백질의 용리는 280 nm, 254 nm 및 215 nm에서 모니터링된다.
대안적으로, 단백질 A 수지에 결합된 항체의 경우, 항체가 재-산화되면 수지를 10 컬럼 부피의 PBS로 세척한 다음, 수지를 동일한 부피의 PBS에 재현탁하고, 화학식 (B), 화학식 (B-1), 화학식 (B-2) 또는 화학식 (B-3)의 (DMSO 중) 8배 과량의 화합물을 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 그 다음 수지를 50 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 수득된 항체 약물 접합체를 단백질 A 수지에서 용리하고, 1/10 부피 1 M Tris pH 9.0으로 중화하고, 완충액을 적당한 완충액으로 교환하여 분취 크기 배제 크로마토그래피를 수행한다(필요한 경우).
면역접합체는 또한, 일반적으로 약물-대-항체 비율(DAR)로 지칭되는, 항체 결합 모이어티에 대한 약물 모이어티의 평균 로딩 측면에서 특징화된다. DAR 값은 예를 들어, 환원된 및 탈글리코시화된 샘플에 대한 LC-MS 데이터로부터 외삽된다. LC/MS는 ADC 내의 항체에 부착된 페이로드(약물 모이어티)의 평균 분자 수의 정량화를 가능하게 한다. HPLC는 항체를 경쇄와 중쇄로 분리하고, 또한 쇄당 링커-페이로드 기의 수에 따라 중쇄(HC)와 경쇄(LC)를 분리한다. 질량 스펙트럼 데이터는 혼합물의 성분 종, 예를 들어 LC, LC+1, LC+2, HC, HC+1, HC+2 등의 확인을 가능하게 한다. LC 및 HC 쇄의 평균 로딩으로부터, ADC에 대한 평균 DAR을 계산할 수 있다. 주어진 면역접합체 샘플에 대한 DAR은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사합체 항체에 부착된 약물(페이로드) 분자의 평균 수를 나타낸다.
본 출원의 본문의 전체에 걸쳐, 명세서의 본문과 서열 목록 사이에 차이가 존재할 경우, 본 명세서의 본문이 우선한다.
[표 2]
Figure pct00301
Figure pct00302
Figure pct00303
Figure pct00304
Figure pct00305
Figure pct00306
Figure pct00307
Figure pct00308
Figure pct00309
Figure pct00310
Figure pct00311
Figure pct00312
Figure pct00313
Figure pct00314
Figure pct00315
Figure pct00316
Figure pct00317
Figure pct00318
Figure pct00319
Figure pct00320
Figure pct00321
Figure pct00322
Figure pct00323
Figure pct00324
Figure pct00325
Figure pct00326
Figure pct00327
Figure pct00328
Figure pct00329
Figure pct00330
Figure pct00331
Figure pct00332
Figure pct00333
Figure pct00334
Figure pct00335
Figure pct00336
Figure pct00337
Figure pct00338
Figure pct00339
Figure pct00340
Figure pct00341
Figure pct00342
Figure pct00343
Figure pct00344
Figure pct00345
Figure pct00346
Figure pct00347
Figure pct00348
Figure pct00349
Figure pct00350
Figure pct00351
Figure pct00352
Figure pct00353
Figure pct00354
Figure pct00355
Figure pct00356
Figure pct00357
본 발명의 다른 항체는, 아미노산 또는 아미노산을 암호화하는 핵산이 돌연변이되었으나, 표 2에 기재된 서열과 적어도 60, 70, 80, 90 또는 95%의 동일성을 갖는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 표 2에 기재된 서열에 도시된 가변 영역과 비교할 때 가변 영역에서 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산이 돌연변이되지만 표 2에 열거된 항체들과 실질적으로 동일한 치료 활성을 보유한다.
이들 각각의 항체는 PMEL17에 결합할 수 있으므로, VH, VL, 전장 경쇄, 및 전장 중쇄 서열(아미노산 서열 및 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열)은 "혼합 및 매칭"되어, 본 발명의 다른 PMEL17-결합 항체를 생성할 수 있다. 이러한 "혼합 및 매칭된" PMEL17-결합 항체는 당업계에 공지된 결합 검정법(예컨대 ELISA, 및 실시예 섹선에 기재된 다른 검정법)을 사용하여 시험될 수 있다. 이들 사슬이 혼합 및 매치될 때, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 교체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 중쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 중쇄 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 교체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 경쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 경쇄 서열로 대체되어야 한다. 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 10, 42, 64, 88, 112, 132, 149, 165, 184, 196, 215, 227, 239 또는 254로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 21, 25, 29, 53, 75, 99, 119, 143, 159, 171, 190, 202, 221, 233, 248 또는 260으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서, 항체는 PMEL17에 특이적으로 결합한다.
다른 양태에서, 본 발명은 (i) SEQ ID NO: 12, 44, 66, 90, 114, 134, 151, 167, 186, 198, 217, 229, 241 또는 256으로 이루어진 군으로부터 선택되는 포유동물 발현 시스템의 세포내 발현을 위해 최적화된 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄; 및 SEQ ID NO: 23, 27, 31, 55, 77, 101, 121, 145, 161, 173, 192, 204, 223, 235, 250 또는 262로 이루어진 군으로부터 선택되는 포유동물의 세포내 발현을 위해 최적화된 아미노산 서열을 포함하는 전장 경쇄를 갖는 단리된 단일클론 항체; 또는 (ii) 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 표 2에 기재된 바와 같은 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합을 포함하는 PMEL17-결합 항체를 제공한다. 항체의 VH CDR1의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 1, 4, 5, 7, 33, 36, 37, 39, 57, 60, 79, 82, 83, 85, 103, 106, 107, 109, 123, 126, 127, 129, 175, 178, 179, 181, 206, 209, 210, 및 212로 예시되어 있다. 항체의 VH CDR2의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 2, 6, 8, 34, 38, 40, 58, 61, 62, 80, 84, 86, 104, 108, 110, 124, 128, 130, 176, 180, 182, 207, 211, 및 213으로 예시되어 있다. 항체의 VH CDR3의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 3, 9, 35, 41, 59, 63, 81, 87, 105, 111, 125, 131, 147, 148, 163, 164, 177, 183, 194, 195, 208, 214, 225, 226, 237, 238, 252, 및 253으로 예시되어 있다. 항체의 VL CDR1의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 14, 17, 20, 46, 49, 52, 68, 71, 74, 92, 95, 98, 116, 136, 139, 142, 153, 156, 158, 243, 245, 및 247로 예시되어 있다. 항체의 VL CDR2의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 15, 18, 47, 50, 69, 72, 93, 96, 137, 140, 및 154로 예시되어 있다. 항체의 VL CDR3의 아미노산 서열은 예를 들어, SEQ ID NO: 16, 19, 48, 51, 70, 73, 94, 97, 117, 118, 138, 141, 155, 157, 169, 170188, 189, 200, 201, 219, 220, 231, 232, 244, 246, 258, 및 259로 예시되어 있다.
이들 항체가 각각 PMEL17에 결합할 수 있고, 항원-결합 특이성이 주로 CDR1, 2 및 3 영역에 의해 제공됨을 고려하면, VH CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 "혼합 및 매칭"될 수 있다(즉, 상이한 항체들로부터의 CDR들은 혼합 및 매칭될 수 있음). 이러한 "혼합 및 매칭된" PMEL17-결합 항체는 당업계에 알려진 결합 분석법 및 실시예에 기재된 분석법(예를 들어, ELISA)을 이용하여 테스트될 수 있다. VH CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 마찬가지로, VL CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우, 특정 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 본 발명의 단일클론 항체에 대해 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을 본원에 예시된 CDR 서열로부터의 구조적으로 유사한 서열로 치환함으로써 새로운 VH 및 VL 서열이 생성될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1, 4, 5, 7, 33, 36, 37, 39, 57, 60, 79, 82, 83, 85, 103, 106, 107, 109, 123, 126, 127, 129, 175, 178, 179, 181, 206, 209, 210, 및 212로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR1; SEQ ID NO: 2, 6, 8, 34, 38, 40, 58, 61, 62, 80, 84, 86, 104, 108, 110, 124, 128, 130, 176, 180, 182, 207, 211, 및 213으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 3, 9, 35, 41, 59, 63, 81, 87, 105, 111, 125, 131, 147, 148, 163, 164, 177, 183, 194, 195, 208, 214, 225, 226, 237, 238, 252, 및 253으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 14, 17, 20, 46, 49, 52, 68, 71, 74, 92, 95, 98, 116, 136, 139, 142, 153, 156, 158, 243, 245, 및 247로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 15, 18, 47, 50, 69, 72, 93, 96, 137, 140, 및 154로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 16, 19, 48, 51, 70, 73, 94, 97, 117, 118, 138, 141, 155, 157, 169, 170, 188, 189, 200, 201, 219, 220, 231, 232, 244, 246, 258, 및 259로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 영역을 제공하며; 여기서, 항체는 인간 PMEL17에 특이적으로 결합한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 1, 4, 5 또는 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2, 6 또는 8의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 3 또는 9의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 14, 17 또는 20의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 15 또는 18의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 16 또는 19의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 33, 36, 37 또는 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34, 38 또는 40의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 35 또는 41의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 46, 49 또는 52의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 48 또는 51의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 5, 7, 57 또는 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58, 61 또는 62의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 59 또는 63의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 68, 71 또는 74의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 69 또는 72의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 70 또는 73의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 79, 82, 83 또는 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80, 84 또는 86의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 81 또는 87의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 92, 95 또는 98의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 93 또는 96의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 94 또는 97의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 105 또는 111의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 117 또는 118의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 125 또는 131의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 138 또는 141의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 147 또는 148의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 155 또는 157의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 163 또는 164의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 169 또는 170의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 175, 178, 179 또는 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176, 180 또는 182의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 177 또는 183의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 188 또는 189의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 194 또는 195의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 200 또는 201의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 208 또는 214의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 219 또는 220의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 225 또는 226의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 231 또는 232의 경쇄 CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237 또는 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 243, 245 또는 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 47 또는 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244 또는 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252 또는 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50 또는 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258 또는 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 1의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 4의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 6의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 17의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 19의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 9의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 20의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 33의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 36의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 37의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 38의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 51의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 40의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 41의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 57의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 61의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 71의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 73의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 62의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 63의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 74의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 79의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 82의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 83의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 84의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 95의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 97의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 86의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 87의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 98의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 118의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 111의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 141의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 131의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 157의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 148의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 170의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 164의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 175의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 178의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 179의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 180의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 189의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 182의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 183의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 201의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 195의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 220의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 214의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
b) SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
c) SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 232의 경쇄 CDR3; 또는
d) SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 226의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
c) SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 245의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
d) SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은:
a) SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
b) SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
c) SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 156의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
d) SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역으로부터 선택되는 CDR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 239의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 248의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 254의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 260의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 192의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 223의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 229의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 241의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 250의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 SEQ ID NO: 262의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, PMEL17에 특이적으로 결합하는 항체는 표 2에 기재된 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)이다.
1. 에피토프 및 동일한 에피토프에 결합하는 항체의 확인
본 발명은 또한, 표 2에 기재된 항-PMEL17 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하거나, 표 2에 기재된 항체와 교차 경쟁하는 항체 및 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 제공한다. 따라서, 예를 들어, 결합을 측정하기 위해 당업자에게 공지된 BIACORE 또는 분석을 통해 PMEL17 결합 분석에서 본 발명의 다른 항체와 교차-경쟁(예를 들어, 통계적으로 유의한 방식으로 결합을 경쟁적으로 억제)하는 능력에 기초하여 추가의 항체 및 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)이 확인될 수 있다. PMEL17(예를 들어, 인간 PMEL17)에 대한 본 발명의 항체 및 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)의 결합을 억제하는 시험 항체의 능력은 시험 항체가 PMEL17과 결합하기 위해 해당 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)과 경쟁할 수 있음을 입증하며; 이러한 항체는 비제한적인 이론에 따라, 그것이 경쟁하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)으로서 PMEL17 단백질 상의 동일한 또는 관련된(예를 들어, 구조적으로 유사한, 또는 공간적으로 인접하거나 중첩되는) 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 표 2에 기재된 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)으로서 PMEL17 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 인간 또는 인간화 단일클론 항체이다. 이러한 인간 또는 인간화 단일클론 항체는 본원에 기재된 바와 같이 제조되고 단리될 수 있다.
2 Fc 영역의 프레임워크의 추가 변경
본 발명의 면역접합체는, 예를 들어 항체의 특성을 향상시키기 위해 VH 및/또는 VL 내에 프레임워크 잔기에 대한 변형을 추가로 포함하는 변형된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 한 접근법은 1개 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역-돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 거친 항체는, 항체가 유래된 생식세포 계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을, 항체가 유래된 생식세포 계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열들을 이들의 생식세포 계열 배열로 복귀시키기 위해, 체세포 돌연변이는 예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발에 의해 생식세포 계열 서열로 "역-돌연변이화될" 수 있다. 이러한 "역-돌연변이된" 항체도 본 발명에 포함되는 것이다.
다른 유형의 프레임워크 개질에는, 프레임워크 영역 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이화하여, T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것이 관여된다. 이 접근법은 "탈면역화"라고도 하며, Carr et al.의 미국 특허 공개 20030153043호에 더 상세히 기술되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형 외에도 또는 대안적으로, 본 발명의 항체는 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합, 및/또는 항원-의존성 세포독성(ADCC)을 변경시키기 위해 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체는 화학적으로 변형될 수 있거나(예컨대 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음), 항체의 글리코실화를 변경시키기 위해, 즉, 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 다시 변경시키기 위해 변형될 수 있다. 이들 구현예는 각각 아래에 더 상세히 기술된다.
일 구현예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수가 변경(예를 들어 증가 또는 감소)되도록 변형된다. 이 접근법은 Bodmer et al.에 의한 미국 특허 5,677,425호에 더 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 어셈블리를 용이하게 하거나 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변경된다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 항체 또는 항체 단편은 약물 모이어티에 대한 접합 부위로서, 변형된 또는 조작된 아미노산 잔기, 예를 들어 1개 이상의 시스테인 잔기를 포함한다(문헌[Junutula JR, et al., Nat Biotechnol 2008, 26:925-932]). 일 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 위치에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하는 변형된 항체 또는 항체 단편을 제공한다. 시스테인 치환 부위는 항체 또는 항체 단편의 불변 영역이므로, 다양한 항체 또는 항체 단편에 적용될 수 있고, 이들 부위는 안정적이고 균일한 접합체를 제공하도록 선택된다. 변형된 항체 또는 단편은 1개, 2개 이상의 시스테인 치환을 가질 수 있고, 이들 치환은 본원에 기재된 바와 같은 다른 변형 및 접합 방법과 조합하여 사용될 수 있다. 시스테인을 항체의 특정 위치에 삽입하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Lyons et al, (1990) Protein Eng., 3:703708], WO 2011/005481호, WO2014/124316호, WO 2015/138615호를 참조한다. 소정의 구현예에서, 변형된 항체는 항체의 중쇄의 117번, 119번, 121번, 124번, 139번, 152번, 153번, 155번, 157번, 164번, 169번, 171번, 174번, 189번, 191번, 195번, 197번, 205번, 207번, 246번, 258번, 269번, 274번, 286번, 288번, 290번, 292번, 293번, 320번, 322번, 326번, 333번, 334번, 335번, 337번, 344번, 355번, 360번, 375번, 382번, 390번, 392번, 398번, 400번 및 422번 위치로부터 선택된 불변 영역 상에서 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 여기서 이 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된다. 일부 구현예에서, 변형된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 경쇄의 위치 107, 108, 109, 114, 129, 142, 143, 145, 152, 154, 156, 159, 161, 165, 168, 169, 170, 182, 183, 197, 199, 및 203으로부터 선택되는 불변 영역에 1개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 인간 카파 경쇄이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에 2개 이상의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 이 조합은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 또는 항체 경쇄의 위치 107에서의 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 불변 영역에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 치환은 항체 중쇄의 위치 375, 항체 중쇄의 위치 152, 항체 중쇄의 위치 360, 항체 경쇄의 위치 107, 항체 경쇄의 위치 165, 또는 항체 경쇄의 위치 159이고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 카파쇄이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 그의 불변 영역에 2개의 아미노산의 시스테인으로의 치환의 조합을 포함하며, 그 조합은 항체 중쇄의 위치 375 및 항체 중쇄의 위치 152에 치환을 포함하고, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 중쇄의 위치 360에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이다. 다른 특정 구현예에서, 변형된 항체 또는 이의 항체 단편은 항체 경쇄의 위치 107에 1개의 아미노산의 시스테인으로의 치환을 포함하며, 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링된 것이고, 경쇄는 카파쇄이다.
추가의 구현예에서, 본 발명의 면역접합체에 유용한 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 변형되거나 조작된 항체, 예컨대 천연 서열의 적어도 하나의 아미노산 대신, Pcl, 피롤리신, 펩티드 태그(예컨대, S6, A1, 및 ybbR 태그)를 포함하는 하나 이상의 (시스테인 이외의) 다른 반응성 아미노산, 및 비천연 아미노산을 도입하도록 변형된 항체를 포함하므로, 상보적 반응성을 갖는 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 대한 접합을 위한 항체 또는 항원 결합 단편 상의 반응성 부위를 제공한다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편은 Pcl 또는 피롤리신(문헌[W. Ou, et al., (2011) PNAS 108 (26), 10437-10442]; WO2014124258) 또는 비천연 아미노산(문헌[J.Y. Axup, et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (2012), pp. 16101-16106]을 포함하도록 변형될 수 있으며; 약물에 대한 접합 부위로서 검토를 위해 문헌[C.C. Liu and P.G. Schultz (2010) Annu Rev Biochem 79, 413-444]; 문헌[C.H. Kim, et al., (2013) Curr Opin Chem Biol. 17, 412-419])을 참고한다. 유사하게, 효소 접합 방법을 위한 펩티드 태그는 항체에 도입될 수 있다(문헌[Strop P., et al., Chem Biol. 2013, 20(2):161-7]; 문헌[Rabuka D., Curr Opin Chem Biol. 2010 Dec;14(6):790-6]; 문헌[Rabuka D, et al., Nat Protoc. 2012 (6): 1052-67]). 하나의 다른 예는 조효소 A 유사체의 접합을 위한 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제(PPTase)의 사용이다(WO2013184514호), 그리고 (문헌[Gr
Figure pct00358
newald et al., (2015) Bioconjugate Chem. 26 (12), 255462]). 이러한 변형되거나 조작된 항체를 페오로드(payload) 또는 링커-페이로드 조합과 접합시키는 방법은 당해 분야에 알려져 있다.
다른 구현예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항체의 생물학적 반감기를 저하하도록 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이는, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 나빠진 스타필로코커스 단백질 A(SpA) 결합성을 갖도록, Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내로 도입된다. 이 접근법은 Ward et al.의 미국 특허 6,165,745호에 더 상세히 기술되어 있다.
또 다른 구현예에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능을 변경시키기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 교체함으로써 변경된다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산은, 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력은 보유하도록 상이한 아미노산 잔기로 교체될 수 있다. 친화도가 변경된 이펙터 리간드는 예를 들어, Fc 수용체 또는 보체의 C1 구성성분일 수 있다. 이 접근법은 예를 들어 Winter et al.의 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에 더 상세히 기술되어 있다.
다른 구현예에서, 아미노산 잔기로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산은 항체가 C1q 결합을 변경시키고/시키거나 보체 의존성 세포독성(CDC)을 감소시키거나 없애도록 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이 접근법은 예를 들어 Idusogie et al.의 미국 특허 6,194,551호에 기술되어 있다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경됨으로써 보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이 접근법은, 예를 들어 Bodmer et al.의 PCT 공개 WO 94/29351에 기술되어 있다. 동종이형 아미노산 잔기는 IgG1, IgG2 및 IgG3 하위종류의 중쇄의 불변 영역뿐만 아니라 문헌에 기재된 바와 같은 카파 이소형의 경쇄의 불변 영역을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(문헌[Jefferis et al., MAbs. 1:332-338 (2009)]).
이러한 돌연변이를 함유하는 항체 융합 단백질 복합체는 감소된 항체-의존성 세포독성(ADCC) 또는 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개하거나, 매개하지 않는다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 L234 및 L235는 A234 및 A235가 되도록 치환된다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 N267은 A267이 되도록 치환된다. 일부 구현예에서, IgG1 불변 영역의 아미노산 잔기 D265 및 P329는 A265 및 A329가 되도록 치환된다. 다른 항체 Fc 침묵 돌연변이도 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경되어 항체가 보체를 고정시키는 능력을 변경시킨다. 이 접근법은, 예를 들어 Bodmer et al.의 PCT 공개 WO 94/29351에 기술되어 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 하나 이상의 아미노산은 하나 이상의 동종이형 아미노산 잔기로 대체된다. 동종이형 아미노산 잔기는 IgG1, IgG2 및 IgG3 하위종류의 중쇄의 불변 영역뿐만 아니라 문헌에 기재된 바와 같은 카파 이소형의 경쇄의 불변 영역을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(문헌[Jefferis et al., MAbs. 1:332-338 (2009)]).
또 다른 구현예에서, 항체의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 아글리코실화된 항체(즉, 글리코실화가 결여된 항체)가 제조될 수 있다. 글리코실화는, 예를 들어 "항원"에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경함으로써 이루어질 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 초래하여, 이로써 해당 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 이 접근법은, 예를 들어 Co et al.의 미국 특허 5,714,350호 및 6,350,861호에 기술되어 있다.
다른 구현예에서, 항체는 이의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법들이 가능하다. 예를 들어, 하나 이상의 하기 돌연변이가 도입될 수 있다: Ward의 미국 특허 번호 6,277,375호에 기재된 바와 같은, T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는, Presta et al.의 미국 특허 번호 5,869,046 및 6,121,022에 기재된 바와 같이 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개의 루프들로부터 취한 구제 수용체(salvage receptor) 결합 에피토프를 함유하도록 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
3. 항-PMEL17 항체의 생산
항-PMEL17 항체 및 이의 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)은 당해 분야에 알려진 임의의 수단(재조합 발현, 화학적 합성, 및 항체 사량체의 효소적 분해를 포함하지만 이에 한정되지 않음)에 의해 제조될 수 있는 반면, 전장 단일클론 항체는, 예를 들어 하이브리도마 또는 재조합 생성에 의해 얻을 수 있다. 재조합 발현은 당해 분야에 알려진 임의의 적절한 숙주세포, 예를 들어 포유동물 숙주세포, 박테리아 숙주세포, 효모 숙주세포, 곤충 숙주세포 등에서 일어날 수 있다.
본원에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 분절을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 또한 본 발명에 제공된다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 11, 43, 65, 89, 113, 133, 150, 166, 185, 197, 216, 228, 240, 및 255로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 22, 26, 30, 54, 76, 100, 120, 144, 160, 172, 191, 203, 222, 234, 249, 및 261로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
일부 구현예에서, 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 13, 45, 67, 91, 115, 135, 152, 168, 187, 199, 218, 230, 242, 및 257의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 SEQ ID NO: 24, 28, 32, 56, 78, 102, 122, 146, 162, 174, 193, 205, 224, 236, 251, 및 263의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 핵산 서열 동일성을 갖는다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 항-PMEL17 항체의 가변 영역 서열만을 암호화할 수 있다. 이들은 또한 항체의 가변 영역 및 불변 영역 둘 다를 암호화할 수 있다. 일부 폴리뉴클레오티드 서열은 예시된 마우스 항-PMEL17 항체 중 하나의 중쇄 및 경쇄 모두의 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 다른 폴리뉴클레오티드는 마우스 항체들 중 하나의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역과 각각 실질적으로 동일한 2개의 폴리펩티드 분절을 암호화한다.
폴리뉴클레오티드 서열은 신생 고상 DNA 합성에 의해, 또는 항-PMEL17 항체 또는 이의 결합 단편을 암호화하는 기존의 서열(예컨대, 아래 실시예에 기술된 바와 같은 서열들)의 PCR 돌연변이 유발에 의해 생산될 수 있다. 핵산의 직접적인 화학적 합성은 당해 분야에 공지된 방법, 예컨대, 문헌[Narang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979]의 포스포트리에스테르 방법; 문헌[Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979]의 포스포디에스테르 방법; 문헌[Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981]의 디에틸포스포르아미다이트 방법; 및 미국 특허 번호 4,458,066의 고체 지지체 방법에 의해 달성될 수 있다. PCR에 의해 폴리뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하는 것은, 예를 들어, 문헌 [PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992]; [PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990]; [Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991]; 및 [Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991]에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
또한, 본 발명에, 상기 기재된 항-PMEL17 항체의 생산을 위한 발현 벡터 및 숙주 세포가 제공된다. 항-PMEL17 항체 사슬 또는 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해 다양한 발현 벡터들이 이용될 수 있다. 바이러스 기반 발현 벡터와 비바이러스 발현 벡터 둘 다가 포유동물 숙주 세포에서 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 비바이러스 벡터 및 시스템은 플라스미드, 에피솜 벡터(전형적으로는, 단백질 또는 RNA 발현을 위한 발현 카세트가 있음), 및 인간 인공 염색체(예를 들어, 문헌[Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997] 참조)를 포함한다. 예를 들어, 포유동물(예를 들어, 인간) 세포에서의 항-PMEL17 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 발현에 유용한 비바이러스 벡터는 pThioHis A, B & C, pcDNATM3.1/His, pEBVHis A, B & C(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재), MPSV 벡터, 및 다른 단백질 발현을 위한, 당해 분야에 공지된 다수의 기타 벡터를 포함한다. 유용한 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노연관 바이러스, 헤르페스 바이러스를 기초로 한 벡터, SV40, 유두종 바이러스, HBP 엡스타인 바 바이러스, 백시나 바이러스 벡터 및 셈리키 포레스트 바이러스(SFV; Semliki Forest Virus)를 기초로 한 벡터를 포함한다. 문헌[Brent et al., supra]; [Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995]; 및 [Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992] 참조.
발현 벡터의 선택은 벡터가 발현되는 의도된 숙주 세포에 따라 다르다. 일반적으로, 발현 벡터는 항-PMEL17 항체 쇄 또는 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된 프로모터 및 기타 조절 서열(예를 들어, 인핸서)을 포함한다. 일부 구현예에서, 유도 조건인 경우를 제외하고는, 삽입된 서열의 발현을 방지하기 위해 유도성 프로모터가 사용된다. 유도성 프로모터는, 예를 들어 아라비노스, lacZ, 메탈로티오네인 프로모터 또는 열 충격 프로모터를 포함한다. 발현 생성물이 숙주 세포에 의해 더 잘 허용되는 암호화 서열에 대해 집단을 편향시키지 않으면서, 형질전환된 유기체의 배양물을 비 유도 조건 하에 증식시킬 수 있다. 프로모터 외에도, 항-PMEL17 항체 쇄 또는 단편의 효율적인 발현을 위한 다른 조절 요소가 또한 필요하거나 요구될 수 있다. 이러한 요소는 전형적으로 ATG 개시 코돈 및 인접한 리보솜 결합 부위 또는 기타 서열을 포함한다. 또한, 사용되는 세포 시스템에 적합한 인핸서를 포함하는 것에 의해 발현 효율을 증진시킬 수 있다(예를 들어, 문헌[Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994]; 및 [Bittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987] 참조). 예를 들어, SV40 인핸서 또는 CMV 인핸서가 포유동물 숙주 세포에서의 발현을 증가시키기 위하여 사용될 수 있다.
발현 벡터는 삽입된 항-PMEL17 항체 서열에 의해 암호화된 폴리펩티드와 융합 단백질을 형성하기 위해 분비 신호 서열 위치를 또한 제공할 수 있다. 삽입된 항-PMEL17 항체 서열은 벡터에 포함되기 전에 종종 신호 서열에 연결된다. 항-PMEL17 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 암호화하는 서열을 수용하는 데 사용되는 벡터는 또한, 때때로 불변 영역 또는 그 일부를 암호화한다. 이러한 벡터는 가변 영역이 불변 영역과의 융합 단백질로서 발현되게 하고, 이에 의해 온전한 항체 또는 이의 단편을 생산할 수 있게 한다. 전형적으로, 이러한 불변 영역은 인간 불변 영역이다.
항-PMEL17 항체 사슬을 갖고 발현시키는 숙주 세포는 원핵 또는 진핵일 수 있다. 이. 콜라이는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 클로닝하고 발현시키는 데 유용한 하나의 원핵 숙주이다. 사용하기에 적절한 다른 미생물 숙주는 바실루스(bacillus), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 다른 엔테로박테리아세아에(enterobacteriaceae), 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종을 포함한다. 이러한 원핵생물 숙주에서, 숙주 세포와 적합한 발현 제어 서열(예를 들어, 복제 기원)을 전형적으로 함유하는 발현 벡터를 또한 제조할 수 있다. 또한, 임의의 수의 다양한 주지된 프로모터, 예컨대 락토스 프로모터 시스템, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 베타-락타마아제 프로모터 시스템, 또는 파지 람다로부터의 프로모터 시스템이 존재할 것이다. 프로모터는 전형적으로, 선택적으로 오퍼레이터 서열과 함께, 발현을 제어하고, 전사 및 번역을 개시하고 완료하기 위한 리보솜 결합 부위 서열 등을 가지고 있다. 다른 미생물, 예컨대 효모가 또한, 본 발명의 항-PMEL17 폴리펩티드를 발현시키기 위해 이용될 수 있다. 바큘로바이러스 벡터와 함께 곤충 세포를 또한 사용할 수 있다.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항-PMEL17 폴리펩티드를 발현시키고 생성하기 위해 포유동물 숙주세포가 사용된다. 예를 들어, 이들은 내인성 면역글로불린 유전자를 발현하는 하이브리도마 세포주(예를 들어, 실시예에 기술된 바와 같은 골수종 하이브리도마 클론), 또는 외인성 발현 벡터를 보유하는 포유동물 세포주(예를 들어, 아래에 예시된 SP2/0 골수종 세포)일 수 있다. 이들은 임의의 정상적인 사멸성 또는 정상적 또는 비정상적인 불멸성 동물 또는 인간 세포를 포함한다. 예를 들어, CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 형질변환된 B 세포 및 하이브리도마를 포함하여, 온전한 면역글로불린을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주들이 개발되어 왔다. 폴리펩티드를 발현시키기 위해 포유동물 조직 세포 배양을 사용하는 것은 예를 들어 문헌[Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987]에 일반적으로 논의되어 있다. 포유동물 숙주 세포용 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 기점, 프로모터, 및 인핸서(예를 들어, 문헌[Queen et al., Immunol. Rev. 89:4968, 1986] 참조), 및 필요한 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결자 서열을 포함할 수 있다. 이러한 발현 벡터는 보통 포유동물 유전자로부터 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터를 함유한다. 적합한 프로모터는 구성적, 세포 유형 특이적, 단계 특이적, 및/또는 조정 가능 또는 조절 가능한 프로모터일 수 있다. 유용한 프로모터는 메탈로티오네인 프로모터, 구성적 아데노바이러스 주요 후기 프로모터, 덱사메타손-유도성 MMTV 프로모터, SV40 프로모터, MRP polIII 프로모터, 구성적 MPSV 프로모터, 테트라사이클린-유도성 CMV 프로모터(예컨대 인간 극초기 CMV 프로모터), 구성적 CMV 프로모터, 및 당해 분야에 공지된 프로모터-인핸서 조합을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
관심 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 발현 벡터를 도입하는 방법은 세포 숙주의 유형에 따라 다르다. 예를 들어, 염화칼슘 형질주입이 원핵생물 세포에 통상적으로 사용되는 반면, 인산칼슘 처리 또는 전기천공은 다른 세포 숙주에 사용될 수 있다(일반적으로, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th ed.] 참고). 다른 방법은, 예를 들어 전기천공, 인산칼슘 처리, 리포솜-매개 형질전환, 주입 및 미세주입, 발리스틱(ballistic) 방법, 비로좀, 면역리포솜, 다가양이온:핵산 콘쥬게이트, 네이키드 DNA, 인공 비리온, 헤르페스 바이러스 구조 단백질 Vp22에 대한 융합(Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997), DNA의 작용제-개선된 흡수, 및 생체 외 형질도입을 포함한다. 재조합 단백질을 장기간 고수율로 제조하기 위해서는, 안정적인 발현이 흔히 요망될 것이다. 예를 들어, 항-PMEL17 항체 사슬 또는 결합 단편을 안정하게 발현하는 세포주는, 바이러스 복제 기원 또는 내인성 발현 요소 및 선별 마커 유전자를 함유하는 본 발명의 발현 벡터를 사용하여 제조될 수 있다. 벡터의 도입 후, 선별 배지로 전환하기 전에 세포를 강화 배지에서 1일 내지 2일 동안 성장시킬 수 있다. 선별 마커의 목적은 선택에 대한 저항성을 부여하는 것이며, 선별 마커의 존재는 선별 배지에서 도입 서열을 성공적으로 발현시키는 세포가 성장할 수 있게 한다. 안정적으로 형질주입된 저항성 세포는 세포 유형에 적합한 조직 배양 기술을 이용해 증식될 수 있다.
치료학적 용도
본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 항체 약물 접합체는 고형암 또는 헴 악성종양과 같은 암의 치료 또는 예방을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 다양한 용도에 유용하다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 항체 약물 접합체는 종양 성장 억제, 분화 유도, 종양 부피 감소 및/또는 종양의 종양원성 감소에 유용하다. 사용 방법은 시험관 내, 생체 외, 또는 생체 내 방법일 수 있다.
일 양태에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 항체 약물 접합체는 생물학적 샘플에서 PMEL17의 존재를 검출하는 데 유용하다. 본원에서 사용되는 용어 "검출"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 특정 구현예에서, 이러한 조직은 다른 조직에 비해 더 높은 수준으로 PMEL17을 발현하는 정상 및/또는 암 조직을 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 PMEL17의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 방법은 항체와 항원의 결합을 허용하는 조건 하에서 생물학적 샘플을 항-PMEL17 항체와 접촉시키는 단계, 및 항체와 항원 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 PMEL17의 증가된 발현과 관련된 장애를 진단하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 방법은 시험 세포를 항-PMEL17 항체와 접촉시키는 단계; PMEL17 항원에 대한 항-PMEL17 항체의 결합을 검출함으로써 시험 세포 상의 PMEL17의 발현 수준(정량적 또는 정성적)을 결정하는 단계; 및 시험 세포에서의 PMEL17의 발현 수준을 대조군 세포(예를 들어, 시험 세포와 동일한 조직 기원의 정상 세포 또는 이러한 정상 세포와 유사한 수준에서 PMEL17을 발현하는 세포) 상의 PMEL17의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대조군 세포와 비교하여 시험 세포에서 PMEL17의 더 높은 수준의 발현은 PMEL17의 증가된 발현과 관련된 장애의 존재를 나타낸다. 특정 구현예에서, 시험 세포는 PMEL17의 증가된 발현과 관련된 장애를 갖는 것으로 의심되는 개체로부터 수득된다. 특정 구현예에서, 장애는 암 또는 종양과 같은 세포 증식성 장애이다. 특정 구현예에서, 방법은 시험 세포에서 PMEL17 유전자의 복제 수를 측정하는 단계를 포함한다.
특정 구현예에서, 상기 기재된 것과 같은 진단 또는 검출 방법은, 세포 표면 상에서, 또는 그의 표면 상에서 PMEL17을 발현하는 세포로부터 수득된 막 제제에서 발현된 PMEL17에 대한 항-PMEL17 항체의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 세포 표면 상에서 발현된 PMEL17에 대한 항-PMEL17 항체의 결합을 검출하기 위한 예시적인 분석은 "FACS" 분석이다.
PMEL17에 대한 항-PMEL17 항체의 결합을 검출하기 위해 특정 다른 방법이 사용될 수 있다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯, 방사성 면역분석, ELISA(효소 결합 면역흡착 분석), "샌드위치" 면역분석, 면역침전 분석, 형광 면역분석, 단백질 A 면역분석, 및 면역조직화학(IHC)과 같이 당 업계에 잘 알려진 항원-결합 분석을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
특정 구현예에서, 항-PMEL17 항체가 표지된다. 라벨에는 직접 검출되는 라벨 또는 모이어티(예컨대, 형광, 발색, 전자-밀도, 화학발광 및 방사성 라벨), 뿐만 아니라 예를 들어, 효소 반응 또는 분자 상호작용을 통해 간접적으로 검출되는 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드가 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다.
특정 구현예에서, 항-PMEL17 항체는 불용성 매트릭스 상에 고정된다. 고정화는 용액에 남아있는 임의의 PMEL17 단백질로부터 항-PMEL17 항체를 분리하는 것을 수반한다. 이것은 통상적으로 수 불용성 매트릭스 또는 표면에의 흡착(Bennich et al, 미국 특허 번호 제3,720,760호)에 의해, 또는 공유 결합(예를 들어, 글루타르알데히드 가교 사용)에 의해, 또는 예를 들어, 면역침전에 의해 항-PMEL17 항체와 PMEL17 단백질 사이에 복합체 형성후 항-PMEL17 항체를 불용화시킴에 의해, 분석 과정 전에 항-PMEL17 항체를 불용화함으로써 달성된다.
상기 진단 또는 검출의 임의의 구현예는 항-PMEL17 항체 대신에 또는 이에 추가하여 본 발명의 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 환자의 질환을 치료 또는 예방하기 위한 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 항체 약물 접합체의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 질병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체를 제공한다. 추가 구현예에서, 본 발명은 환자의 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 용도를 제공한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 항체 약물 접합체로 치료되는 질환은 암이다. 특정 구현예에서, 암은 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 및 항체 약물 접합체가 결합하는 PMEL17 발현 세포를 특징으로 한다. 특정 구현예에서, 암은 건강한 환자에 비해 PMEL17의 발현 증가를 특징으로 한다. 일부 구현예에서, PMEL17의 발현은 PMEL17 RNA의 증가에 의해 측정될 수 있다. 다른 구현예에서, 암은 PMEL17의 DNA 복제 수의 증가를 특징으로 한다. PMEL17 발현 수준을 측정하거나 결정하는 다른 방법은 당업자에게 알려져있다. 특정 구현예에서, 암은 GNAQ 및/또는 GNA11 유전자에서 돌연변이, 예를 들어 Q209 또는 R183에 영향을 미치는 활성화 돌연변이를 특징으로 한다. 치료 및/또는 예방할 수 있는 질환의 예는 흑색종, 포도막 흑색종, 간세포 암종 및 이의 전이성 암을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명은 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 암은 고형 암, 예컨대 흑색종, 포도막 흑색종, 포도막 흑색종, 간세포 암종 또는 이의 전이성 암이다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다. 특정 구현예에서, 암은 내성 암 및/또는 재발성 암이다.
특정 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 특정 구현예에서, 종양은 고형 암, 예컨대 흑색종, 포도막 흑색종, 간세포 암종 또는 이의 전이성 암이다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다. 특정 구현예에서, 대상체는 종양이 있거나 종양이 제거되었다.
특정 구현예에서, 종양은 항-PMEL17 항체가 결합하는 PMEL17을 발현한다. 특정 구현예에서, 종양은 인간 PMEL17을 과발현한다. 특정 구현예에서, 종양은 PMEL17 유전자의 증가된 복제 수를 갖는다. 특정 구현예에서, 종양은 GNAQ 및/또는 GNA11 유전자에서 돌연변이, 예를 들어 Q209 또는 R183에 영향을 미치는 활성화 돌연변이를 특징으로 한다.
본 발명은 또한 상기 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 치료적으로 유효한 양을 투여하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체로 치료하기 위한 환자를 선택하는 방법을 제공한다. 본 발명의 특정 양태에서 상기 방법은 PMEL17의 발현을 측정함으로써 환자를 선택하는 단계를 포함한다. 본 발명의 특정 양태에서 방법은 GNAQ 또는 GNA11 유전자에서 돌연변이, 예를 들어 Q209 또는 R183에 영향을 미치는 활성화 돌연변이를 확인함으로써 환자를 선택하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 방법은 환자에서 PMEL17 발현 수준을 측정하는 단계 뿐만 아니라 GNAQ 및/또는 GNA11 유전자를 검출하는 단계를 포함한다.
질환의 치료 또는 예방을 위해, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 적당한 투여량은 치료되는 질환의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 질환의 반응성, 이전 치료, 환자의 임상 기록 등과 같은 다양한 요인들에 따라 달라진다. 항체 또는 작용제는 1회, 또는 수 일에서 수 개월까지 지속되는 일련의 치료에 걸쳐, 또는 치료가 이루어지거나 질병 상태의 감소(예를 들어, 종양 크기의 감소)가 달성될 때까지 투여될 수 있다. 최적의 투여 일정은 환자의 신체 내 약물 축적 측정으로부터 계산될 수 있으며, 개별 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체의 상대적 효능에 따라 달라질 것이다. 치료하는 의사는 체액 또는 체조직 내 약물의 측정된 체류 시간 및 농도에 기초하여 투여의 반복률을 추정할 수 있다.
병용 요법
특정 예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체는 다른 치료적 치료, 예컨대 수술 및 방사선 요법, 치료제, 예컨대 다른 항암제, 항-알레르기제, 항-오심제(또는 항-구토제), 진통제, 세포보호제, 및 이들의 조합과 조합된다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체는 항암 특성을 갖는 제2의 화합물과 약제학적 조합 제형 내에서, 또는 병용 요법으로서 투약 계획 내에서 조합된다. 약제학적 조합 제형 또는 투약 계획의 제2의 화합물은 그것들이 서로 부정적으로 영향을 미치지 않도록 이 조합의 항체 또는 면역접합체에 대해 상보적 활성을 가질 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편), 또는 항체 약물 접합체는 화학요법제, 면역조절제, 티로신 키나제 억제제, GNAQ/GNA11 다운스트림 신호전달 경로 억제제, IAP 억제제, Bcl2 억제제, Mcl1 억제제, 및 다른 GNAQ/GNA11 억제제와 조합하여 투여될 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "약제학적 조합"은 하나의 투여량 단위 형태의 고정 조합 또는 비고정 조합 또는 조합 투여를 위한 부품 키트를 나타내며, 여기서 2개 이상의 치료제가 동시에 독립적으로 또는 시간 간격 내에서 별도로 투여될 수 있고, 특히 이러한 시간 간격은 조합 파트너가 협동, 예를 들어 상승 효과를 나타낼 수 있게 한다.
용어 "병용 요법"은 본 발명에 기술된 치료적 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 2가지 이상의 치료제의 투여를 지칭한다. 이러한 투여는 이들 치료제를 실질적으로 동시적인 방식으로, 예컨대 고정된 비율의 활성 성분을 갖는 단일 캡슐로 공동투여하는 것을 포괄한다. 대안적으로, 이러한 투여는 각각의 활성 성분을 위한 다수의 또는 별도의 용기(예를 들어, 캡슐, 분말 및 액체)에서의 공동투여를 포함한다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 원하는 용량으로 재구성되거나 희석될 수 있다. 또한, 이러한 투여는 거의 동시에 또는 다른 시간에 각각의 유형의 치료제를 순차적으로 사용하는 것도 포함한다. 어느 경우든, 치료 요법은 본 명세서에 기재된 병태 또는 장애의 치료 또는 예방에 있어서 약물 조합의 이로운 효과를 제공할 것이다.
병용 요법은 "상승 효과"를 제공할 수 있고, "상승적임"을 증명할 수 있고, 즉 활성 성분들이 함께 사용될 때 달성된 효과가 화합물을 별도로 사용함으로써 발생하는 효과의 총 합계보다 크다. 상승적 효과는 활성 성분이 (1) 공동 제형화되어 투여되거나 조합된, 단위 투여 제형으로 동시에 전달될 때; (2) 별도의 제형으로 교대로 또는 병행하여 전달될 때; 또는 (3) 일부 다른 계획에 의해 전달될 때, 얻어질 수 있다. 교대 요법으로 전달될 때, 상승적 효과는 화합물이 순차적으로, 예를 들어 별도의 주사기로 상이한 주사에 의해 투여되거나 전달될 때 얻어질 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안에는, 각각의 유효 성분의 유효 투여량이 순차적으로, 즉 연속하여 투여되는 반면, 병용 요법에서는 2가지 이상의 유효 성분의 유효 투여량이 함께 투여된다.
병용 요법에서의 사용에 고려되는 일반적인 화학요법제는 아나스트로졸(Arimidex®), 비칼루타미드(Casodex®), 블레오마이신 설페이트(Blenoxane®), 부술판(Myleran®), 부술판 주사제(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카보플라틴(Paraplatin®), 카르무스틴(BiCNU®), 클로람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 시클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 시타라빈, 시토신 아라비노시드(Cytosar-U®), 시타라빈 리포솜 주사제(DepoCyt®), 다카르바진(DTIC-Dome®), 닥티노마이신(Actinomycin D, Cosmegan), 다우노루비신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 다우노루비신 시트레이트 리포솜 주사제(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 하이드로클로라이드(Adriamycin®, Rubex®), 에토포시드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자시티빈, 젬시타빈(디플루오로데옥시시티딘), 하이드록시우레아(Hydrea®), 이다루비신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란(Alkeran®), 6-메르캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론(Novantrone®), 밀로타르그, 파클리탁셀(Taxol®), 휘닉스(이트륨90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 폴리페프로산 20 + 카르무스틴 이식물(Gliadel®), 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포시드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazone®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®) 및 비노렐빈(Navelbine®), 및 페메트렉세드를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 MDM2 억제제, PKC 억제제, PRC2 억제제, MAPK 억제제, GPCR 억제제, 티로신 키나제 억제제, BTK 억제제, EGFR 억제제, Her2 억제제, Her3 억제제, IGFR 억제제, 및 Met 억제제를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 억제제와 조합하여, 본 발명의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
예를 들어, MDM2 억제제는 RG7112(RO5045337); RG7388(RO5503781, 이다사누틀린); MI-77301(SAR405838); MK-8242(SCH-900242); AMG232; CGM097; DS3032b; HDM201; 및 ALRN-6924를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
예를 들어, PKC 억제제는 발라놀; 릴루졸; 스타우로스포린; 엔자스타우린; δV1-1(KAI-9803 또는 델카세르팁); εV1-2(KAI-1678); 아프리노카르센; 미도스타우린(PKC412); UCN-01 (7-하이드록시-스타우로스포린); 로틀러린(5, 7, 디하이드록시-2,2-디메틸-6-(2,4,6-트리하이드록시-3-메틸-5-아세틀리벤질)-8-신나모일-1,2-크로멘); 및 브리오스타틴 1을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
예를 들어, PRC2 억제제는 EI1; EPZ011989; EPZ005687; 테트라메틸피페리디닐 벤즈아미데스; UNC1999; 및 GSK126을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
예를 들어, MAPK 억제제는 베무라페닙(젤보라프(Zelboraf)); 다라페닙(타핀라(Tafinlar)); 엔코라페닙(브라프토비(Braftovi)); 트라메티닙(메키니스트(Mekinist)); 코비메티닙(코텔릭(Cotellic)); 비니메티닙(메크토비(Mektovi)); 및 울릭서티닙을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
예를 들어, 티로신 키나제 억제제는 이브루티닙(PCI-32765); 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®); 리니파닙(N-[4-(3-아미노-1H-인다졸-4-일)페닐]-N'-(2-플루오로-5-메틸페닐)우레아(ABT 869로도 알려짐, Genentech에서 입수 가능); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 보수티닙(4-[(2,4-디클로로-5-메톡시페닐)아미노]-6-메톡시-7-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시]퀴놀린-3-카르보니트릴(SKI-606으로도 알려져 있고, 미국 특허 제6,780,996호에 기재되어 있음); 다사티닙(Sprycel®); 파조파닙(Votrient®); 소라페닙(Nexavar®); 자크티마(ZD6474); 및 이마티닙 또는 이마티닙 메실레이트(Gilvec® 및 Gleevec®)를 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제는 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®), 게피티닙(Iressa®); N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3''S'')-테트라하이드로-3-퓨란일]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드, Tovok®); 반데타닙(Caprelsa®); 라파티닙(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(CI-1033); 6-[4-[(4-에틸-1-피페라진일)메틸]페닐]-N-[(1R)-1-페닐에틸]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(AEE788, CAS 497839-62-0); 무브리티닙(TAK165); 펠리티닙(EKB569); 아파티닙(BIBW2992); 네라티닙(HKI-272); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS599626); N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸시클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]- 4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 및 4-[4-[[(1R)-1-페닐에틸]아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀(PKI166, CAS 18772461-4)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
EGFR 항체는 세툭시맙(Erbitux®); 판티투무맙(Vectibix®); 마투주맙(EMD-72000); 니모투주맙(hR3); 잘루투무맙; TheraCIM h-R3; MDX0447(CAS 339151-96-1); 및 ch806(mAb-806, CAS 946414-09-1)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
인간 표피 성장 인자 수용체 2(Her2 수용체)(Neu, ErbB-2, CD340 또는 p185로도 알려짐) 억제제는 트라스투주맙(Herceptin®); 퍼투주맙(Omnitarg®); 트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla®); 네라티닙(HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-클로로-4-[(피리딘-2-일)메톡시]페닐]아미노]-3-시아노-7-에톡시퀴놀린-6-일]-4-(디메틸아미노)부트-2-엔아미드, PCT 공개 WO 05/028443호에 기재되어 있음); 라파티닙 또는 라파티닙 디토실레이트(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); (2E)-N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3S)-테트라하이드로-3-퓨라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4-(디메틸아미노)-2-부텐아미드(BIBW-2992, CAS 850140-72-6); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르(BMS 599626, CAS 714971-09-2); 카네르티닙 디하이드로클로라이드(PD183805 또는 CI-1033); 및 N-(3,4-디클로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
Her3 억제제는 LJM716, MM-121, AMG-888, RG7116, REGN-1400, AV-203, MP-RM-1, MM-111, 및 MEHD-7945A를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
MET 억제제는 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 포레티닙(GSK1363089, 이전 명칭 XL880, CAS 849217-64-7); 티반티닙(ARQ197, CAS 1000873-98-2); 1-(2-하이드록시-2-메틸프로필)-N-(5-(7-메톡시퀴놀린-4-일옥시)피리딘-2-일)-5-메틸-3-옥소-2-페닐-2,3-디하이드로-1H-피라졸-4-카복사미드(AMG 458); 크리조티닙(Xalkori®, PF-02341066); (3Z)-5-(2,3-디하이드로-1H-인돌-1-일설포닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(SU11271); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-({3,5-디메틸-4-[(4-메틸피페라진-1-일)카보닐]-1H-피롤-2-일}메틸렌)-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11274); (3Z)-N-(3-클로로페닐)-3-{[3,5-디메틸-4-(3-모르폴린-4-일프로필)-1H-피롤-2-일]메티렌}-N-메틸-2-옥소인돌린-5-설폰아미드(SU11606); 6-[디플루오로[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진-3-일]메틸]-퀴놀린(JNJ38877605, CAS 943540-75-8); 2-[4-[1-(퀴놀린-6-일메틸)-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피라진-6-일]-1H-피라졸-1-일]에탄올(PF04217903, CAS 956905-27-4); N-((2R)-1,4-디옥산-2-일메틸)-N-메틸-N'-[3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-옥소-5H-벤조[4,5]시클로헵타[1,2-b]피리딘-7-일]설파미드(MK2461, CAS 917879-39-1); 6-[[6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸로[4,3-b]피리다진 3-일]티오]-퀴놀린(SGX523, CAS 1022150-57-7); 및 (3Z)-5-[[(2,6-디클로로페닐)메틸]설포닐]-3-[[3,5-디메틸-4-[[(2R)-2-(1-피롤리디닐메틸)-1-피롤리디닐]카보닐]-1H-피롤-2-일]메틸렌]-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(PHA665752, CAS 477575-56-7)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
IGF1R 억제제는 BMS-754807, XL-228, OSI-906, GSK0904529A, A-928605, AXL1717, KW-2450, MK0646, AMG479, IMCA12, MEDI-573, 및 BI836845를 포함하지만 이들로 한정되지 않는다. 검토를 위해, 예를 들어 문헌[Yee, JNCI, 104; 975 (2012)]을 참조한다.
다른 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 GNAQ/GNA11 다운스트림 신호전달 경로 억제제, β-아레스틴 억제제, GRK 억제제, MAPK 억제제, PI3K 억제제, JAK 억제제 등을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 억제제와 조합하여, 본 발명의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다
예를 들어, 포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 억제제는 이델라리십(Zydelig, GS-1101, Cal-101), 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸설포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린(GDC 0941로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO 09/036082 및 WO 09/055730에 기재됨); 2-메틸-2-[4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디하이드로이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐]프로피오니트릴(BEZ 235 또는 NVP-BEZ 235로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO 06/122806에 기재됨); 4-(트리플루오로메틸)-5-(2,6-디모르폴리노피리미딘-4-일)피리딘-2-아민(BKM120 또는 NVP-BKM120로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO2007/084786에 기재됨); 토자세르팁(VX680 또는 MK-0457, CAS 63908954-6); (5Z)-5-[[4-(4-피리디닐)-6-퀴놀리닐]메틸렌]-2,4-티아졸리딘디온(GSK1059615, CAS 958852-01-2); (1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(아세틸옥시)-1-[(디-2-프로페닐아미노)메틸렌]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-옥타하이드로-11-하이드록시-4-(메톡시메틸)-4a,6a-디메틸-사이클로펜타[5,6]나프토[1,2-c]피란-2,7,10(1H)-트리온(PX866, CAS 502632-66-8); 및 8-페닐-2-(모르폴린-4-일)-크로멘-4-온(LY294002, CAS 15444736-6)을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 항체 약물 접합체를 IAP 억제제, Bcl2 억제제, MCl1 억제제, 트레일(Trail) 작용제, Chk 억제제를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 하나 이상의 전구세포사멸 촉진제와 조합하여 투여함으로써 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
예를 들어, IAP 억제제는 LCL161, GDC-0917, AEG-35156, AT406, 및 TL32711을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. IAP 억제제의 다른 예는 WO04/005284호, WO 04/007529호, WO05/097791호, WO 05/069894호, WO 05/069888호, WO 05/094818호, US2006/0014700호, US2006/0025347호, WO 06/069063호, WO 06/010118호, WO 06/017295호, 및 WO08/134679호(이들 전부는 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것들을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
BCL-2 억제제는 베네토클락스(GDC-0199, ABT-199, RG7601로도 알려져 있음); 4-[4-[[2-(4-클로로페닐)-5,5-디메틸-1-시클로헥센-1-일]메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-모르폴리닐)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-[(트리플루오로메틸)설포닐]페닐]설포닐]벤즈아미드(ABT-263로도 알려져 있고 PCT 공개 WO 09/155386호에 기재되어 있음); 테트로카신 A; 안티마이신; 고시폴((-)BL-193); 오바토클락스; 에틸-2-아미노-6-시클로펜틸-4-(1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸)-4H크로몬-3-카복실레이트(HA14-1); 오블리머센(G3139, Genasense®); Bak BH3 펩티드; (-)-고시폴 아세트산(AT-101); 4-[4-[(4'-클로로[1,1'-바이페닐]-2-일)메틸]1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(디메틸아미노)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-니트로페닐]설포닐]-벤즈아미드(ABT-737, CAS 852808-04-9); 및 나비토클락스(ABT-263, CAS 923564-51-6)를 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
DR4(TRAILR1) 및 DR5(TRAILR2)를 포함하는 전구세포사멸촉진 수용체 작용제(PARA)는 둘라너민(AMG-951, RhApo2L/TRAIL); 마파투무맙(HRS-ETR1, CAS 658052-09-6); 렉사투무맙(HGS-ETR2, CAS 845816-02-6); 아포맙(Apomab®); 코나투무맙(AMG655, CAS 896731-82-1); 및 티가투주맙(CS1008, CAS 946415-34-5, Daiichi Sankyo에서 입수 가능)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
체크포인트 키나제(CHK) 억제제는 7-하이드록시스타우로스포린(UCN-01); 6-브로모-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-5-(3R)-3-피페리디닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-아민(SCH900776, CAS 891494-63-6); 5-(3-플루오로페닐)-3-우레이도티오펜-2-카복실산 N-[(S)-피페리딘-3-일]아미드(AZD7762, CAS 860352-01-8); 4-[((3S)-1-아자바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일)아미노]-3-(1H-벤즈이미다졸-2-일)-6-클로로퀴놀린-2(1H)-온(CHIR 124, CAS 405168-58-3); 7-아미노닥티노마이신(7-AAD), 이소그라눌라티미드, 디브로모하이메니알디신; N-[5-브로모-4-메틸-2-[(2S)-2-모르폴리닐메톡시]-페닐]-N'-(5-메틸-2-피라지닐)우레아(LY2603618, CAS 91122245-2); 설포라판(CAS 4478-93-7, 4-메틸설피닐부틸 이소티오시아네이트); 9,10,11,12-테트라하이드로-9,12-에폭시-1H-디인돌로[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]피롤로[3,4-i][1,6]벤조디아조신-1,3(2H)-디온(SB-218078, CAS 135897-06-2); 및 TAT-S216A (YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL(SEQ ID NO: 282)), 및 CBP501((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.
추가 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 면역조절제(예를 들어, 하기 중 하나 이상)와 조합하여 본 발명의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다: 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제.
특정 구현예에서, 면역조절제는 공동자극 분자의 활성화제이다. 일 구현예에서, 공동자극 분자의 작용제는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, STING, 또는 CD83 리간드의 작용제(예를 들어, 효능 작용 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 가용성 융합체)로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 면역조절제는 면역 체크포인트 분자의 억제제이다. 일 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타의 억제제이다. 일 구현예에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 또는 CTLA4, 또는 이의 임의의 조합을 억제한다. 용어 "억제" 또는 "억제제"는 특정 파라미터, 예를 들어 소정의 분자, 예를 들어 면역 체크포인트 억제제의 활성의 감소를 포함한다. 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 이상의 활성(예를 들어 PD-1 또는 PD-L1 활성)의 억제가 이 용어에 포함된다. 따라서, 억제는 100%일 필요는 없다.
억제 분자의 억제는 DNA, RNA, 또는 단백질 수준에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 분자의 발현을 억제하기 위해 억제 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA, 또는 shRNA)이 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 억제 신호의 억제제는 억제 분자에 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 가용성 리간드(예를 들어, PD-1-Ig 또는 CTLA-4 Ig), 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 예를 들어, PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 베타, 또는 이들의 조합에 결합하는 항체 또는 이의 단편(본원에서 "항체 분자"라고도 함)이다.
일 구현예에서, 항체 분자는 전장 항체 또는 이의 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv 단편(svFv))이다. 또 다른 구현예에서, 항체 분자는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는, 구체적으로는, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 중쇄 불변 영역, 보다 구체적으로 IgG1 또는 IgG4(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택되는 중쇄 불변 영역(Fc)을 갖는다. 일 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 또는 IgG4이다. 일 구현예에서, 불변 영역은 변경, 예를 들어, 돌연변이되어, 항체 분자의 특성을 수정할 수 있다(예를 들어, 하기 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시킬 수 있다: Fc 수용체 결합, 항체 글리코실화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능, 또는 보체 기능).
특정 구현예에서, 항체 분자는 이중특이적 또는 다중특이적 항체 분자의 형태이다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 제1 결합 특이성, 및 제2 결합 특이성, 예를 들어, TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2에 대한 제2 결합 특이성을 갖는다. 일 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 TIM-3에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 LAG-3에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 및 PD-L1에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L2에 결합한다. 다른 구현예에서, 이중특이적 항체 분자는 TIM-3 및 LAG-3에 결합한다. 상기 분자들의 임의의 조합은 다중특이적 항체 분자, 예를 들어 PD-1 또는 PD-1에 대한 제1 결합 특이성, 및 TIM-3, LAG-3, 또는 PD-L2 중 둘 이상에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함하는 삼중특이적 항체에서 이루어질 수 있다.
특정 구현예에서, 면역조절제는 PD-1, 예를 들어 인간 PD-1의 억제제이다. 다른 구현예에서, 면역조절제는 PD-L1, 예를 들어 인간 PD-L1의 억제제이다. 일 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 항체 분자이다. PD-1 또는 PD-L1 억제제는 단독으로, 또는 다른 면역조절제와 조합하여, 예를 들어 LAG-3, TIM-3, 또는 CTLA4의 억제제와 조합하여 투여될 수 있다. 예시적 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 다른 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 또는 PD-L1의 억제제, 예를 들어 항-PD-1 항체 분자는 LAG-3 억제제, 예를 들어 항-LAG-3 항체 분자, 및 TIM-3 억제제, 예를 들어 항-TIM-3 항체 분자와 조합하여 투여된다. PD-1 억제제(예를 들어, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, 및/또는 TGFR 중 하나 이상)와 면역조절제의 다른 조합도 본 발명에 속한다. 당해 분야에 알려져 있거나 본원에 개시된 임의의 항체 분자가 체크포인트 분자의 억제제의 상기 조합에 사용될 수 있다.
일 구현예에서, PD-1 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 또는 피딜리주맙으로부터 선택된 항-PD-1 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙에 대한 대안적인 명칭은 MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, 또는 BMS-936558을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙(CAS 등록 번호: 946414944)이다. 니볼루맙은 PD1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단일클론 항체이다. 니볼루맙(클론 5C4), 및 PD1에 특이적으로 결합하는 다른 인간 단일클론 항체는 미국 특허 제8,008,449호 및 PCT 공개 WO2006/121168호에 개시되어 있다.
다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙(상표명 KEYTRUDA, 이전 명칭 람브롤리주맙, Merck 3745, MK-3475, 또는 SCH-900475로도 알려짐)은 PD1에 결합하는 인간화 IgG4 단일클론 항체이다. 펨브롤리주맙은 예를 들어, 전체가 참조로 포함되는 문헌 [Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 13444], PCT 공개 WO2009/114335호, 및 미국 특허 제8,354,509호에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 피딜리주맙이다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD1에 결합하는 인간화 IgG1k 단일클론 항체이다. 피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 단일클론 항체는 PCT 공개 번호 WO2009/101611호에 개시되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 미국 특허 제8,609,089호, 미국 공개 2010028330호, 및/또는 미국 공개 20120114649호에 개시되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 스파르탈리주맙으로도 알려진 PDR001, 또는 WO2015/112900에 개시된 임의의 다른 항-PD-1 항체이다.
일부 구현예에서, PD-1 억제제는 불변 영역(예를 들어, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 면역접착소(예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역접착소)이다. 일부 구현예에서, PD-1 억제제는 AMP-224이다.
일부 구현예에서, PD-Ll 억제제는 항-PD-Ll 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 억제제는, 본원에 개시된 서열(또는 이와 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어 특정된 서열과 적어도 85%, 90%, 95% 이상 동일한 서열)을 갖는, 예를 들어 WO 2013/0179174호에 개시된 YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, 또는 MDX-1105MSB-0010718C(A09-246-2라고도 함)로부터 선택된다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 MDX-1105이다. BMS-936559로도 알려진 MDX-1105는 PCT 공개 WO 2007/005874호에 기재된 항-PD-L1 항체이다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 YW243.55.S70이다. YW243.55.S70 항체는 PCT 공개 번호 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-Ll(각각 SEQ ID NO: 20 및 21에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열)이다.
일 구현예에서, PD-L1 억제제는 MDPL3280A(Genentech/Roche)이다. MDPL3280A는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단일클론 항체이다. MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 단일클론 항체는 미국 특허 제7,943,743호 및 미국 특허 공개 제 20120039906에 개시되어 있다.
다른 구현예에서, PD-L2 억제제는 AMP-224이다. AMP-224는 PD1과 B7-H1(예를 들어 PCT 공개 WO2010/027827호 및 WO2011/066342호에 개시된 B7-DCIg; Amplimmune) 사이의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
일 구현예에서, LAG-3 억제제는 항-LAG-3 항체 분자이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는 BMS-986016이다. 일 구현예에서, LAG-3 억제제는 LAG525 또는 WO2015/138920에 개시된 임의의 항-LAG3 항체이다.
일 구현예에서, TIM-3 억제제는 항-TIM-3 항체 분자이다. 일 구현예에서, TIM-3 억제제는 MBG453 또는 WO2015/117002에 개시된 임의의 항-TIM3 항체이다.
약제학적 조성물
면역접합체를 포함하는 약제학적 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 본 발명의 면역접합체는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합된다. 상기 조성물은 PMEL17 발현 암(피하 흑색종, 포도막 흑색종, 간세포 암종 및 이의 전이성 암을 포함하지만, 이들로 한정되지 않음)을 치료 또는 예방하는 데 적합한 하나 이상의 다른 치료제를 추가로 함유할 수 있다.
치료제 및 진단제의 제형은 생리적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와, 예를 들어 동결건조 분말, 슬러리, 수용액, 로션, 또는 현탁액의 형태로 혼합하여 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y., 2001; Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y., 2000; Avis, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY, 1993; Lieberman, et al. (eds.), Pharmaceutical Dosage Forms: tablets, Marcel Dekker, NY, 1990; Lieberman, et al. (eds.) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY, 1990; Weiner and Kotkoskie, Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., 2000] 참조).
치료제에 대한 투여 요법의 선택은 개체의 혈청 또는 조직 전환율, 증상의 수준, 개체의 면역원성, 및 생물학적 매트릭스 내의 표적 세포의 접근성을 포함하는 여러 인자에 따라 다르다. 소정의 구현예에서, 투여 요법은 허용 가능한 부작용 수준에 맞게 환자에게 전달되는 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달되는 생물제제의 양은 부분적으로 특정 개체 및 치료되는 병태의 중증도에 따라 다르다. 항체, 사이토카인 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 데 있어서 지침을 이용할 수 있다(예를 들어, 문헌[Wawrzynczak, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK, 1996; Kresina (ed.), Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1991; Bach (ed.), Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N.Y., 1993; Baert et al., New Engl. J. Med. 348:601608, 2003; Milgrom et al., New Engl. J. Med. 341:19661973, 1999; Slamon et al., New Engl. J. Med. 344:783792, 2001; Beniaminovitz et al., New Engl. J. Med. 342:613619, 2000; Ghosh et al., New Engl. J. Med. 348:2432, 2003; Lipsky et al., New Engl. J. Med. 343:15941602, 2000] 참고).
적절한 용량의 결정은 예를 들어 치료 또는 예방에 영향을 미치는 것으로 당해 분야에 알려져 있거나 그러한 것으로 추정되는, 또는 치료 또는 예방에 영향을 미칠 것으로 예상되는 파라미터 또는 인자를 이용해 임상의에 의해 이루어진다. 일반적으로, 투여량은 최적 용량보다 다소 적은 양으로 시작하여, 이후 임의의 부정적 부작용에 비해 원하는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 조금씩 증가한다. 중요한 진단 조치는 예를 들어 염증의 증상 또는 생성된 염증성 사이토카인의 수준의 조치를 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물 내 유효 성분의 실제 투여량 수준은, 환자에게 독성이 없으면서 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 원하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 유효 성분의 양이 되도록 달라질 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용되는 본 발명의 특정 조성물, 또는 이의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 지속기간, 사용되는 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 전반적 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 항체들 또는 이의 단편들을 포함하는 조성물은 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어 1일, 1주의 간격으로, 또는 1주에 1~7회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 또는 8주에 1회 투여함으로써 제공될 수 있다. 투여는 정맥내로, 피하로, 국소적으로, 경구로, 비강으로, 직장으로, 근육내로, 뇌내로, 또는 흡입에 의해 제공될 수 있다. 구체적인 투여량 프로토콜은 바람직하지 않은 심각한 부작용을 피하는 최대 용량 또는 투여 빈도를 포함하는 것이다.
본 발명의 면역접합체의 경우, 환자에게 투여되는 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.0001 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏일 수 있다. 투여량은 환자 체중을 기준으로 0.0001 mg/kg 내지 30 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 20 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 5 mg/kg, 0.0001 내지 2 mg/kg, 0.0001 내지 1 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 0.75 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 0.5 mg/kg, 0.0001 mg/kg 내지 0.25 mg/kg, 0.0001 내지 0.15 mg/kg, 0.0001 내지 0.10 mg/kg, 0.001 내지 0.5 mg/kg, 0.01 내지 0.25 mg/kg 또는 0.01 내지 0.10 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 항체들 또는 이의 단편들의 투여량은 환자의 체중(kg)에 투여될 용량(mg/kg)을 곱하여 계산될 수 있다.
본 발명의 면역접합체의 투여는 반복될 수 있고, 투여 간격은 1일 미만, 적어도 1일, 2일, 3일, 5일, 10일, 15일, 30일, 45일, 2개월, 75일, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 적어도 6개월일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 또는 그 이하의 빈도로 제공될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체의 투여는 2주마다 반복된다.
특정 환자에 대한 유효량은, 치료되는 병태, 환자의 전반적 건강, 투여의 방법, 경로 및 용량, 및 부작용의 심각성과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다(예를 들어, 문헌[Maynard et al., A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Raton, Fla., 1996; Dent, Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., London, UK, 2001] 참조).
투여 경로는, 예를 들어 국소 또는 피부 적용, 피하, 정맥 내, 복강 내, 뇌 내, 근육 내, 안 내, 동맥 내, 뇌척수 내, 병변 내 투여에 의한 주사 또는 주입, 또는 지효성 방출 시스템 또는 이식에 의한 것일 수 있다(예를 들어, 문헌[Sidman et al., Biopolymers 22:547556, 1983]; 문헌[Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 15:167277, 1981]; 문헌[Langer, Chem. Tech. 12:98105, 1982]; 문헌[Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:36883692, 1985]; 문헌[Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:40304034, 1980]; 미국 특허 번호 제6,350,466호 및 제6,316,024호 참조). 필요한 경우에, 조성물은 또한, 주사 부위에서의 통증을 경감하기 위해 가용화제 또는 국부 마취제, 예컨대 리도카인, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 또한, 예를 들어 흡입기 또는 네뷸라이저, 및 에어로졸화제 함유 제형의 사용에 의해 폐 투여가 이용될 수도 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 그리고 PCT 공개 번호 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, 및 WO 99/66903(이들 각각은 전체가 본 설명에 참조로 포함됨) 참조한다.
본 발명의 조성물은 당업계에 공지된 다양한 방법 중 하나 이상을 이용하는 하나 이상의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 당업자가 인식하고 있는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다. 본 발명의 면역접합체에 대한 선택된 투여 경로는 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 진피내, 복강내, 피하, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 비경구 투여는 일반적으로 보통 주사에 의한, 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 나타낼 수 있고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 낭내, 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 낭하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입이 포함된다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 비-비경구 경로, 예컨대 국소, 상피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어, 비강내, 경구, 질내, 직장내, 설하 또는 국소를 통해 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 주입에 의해 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 피하로 투여된다.
본 발명의 면역접합체가 제어 방출 또는 지효성 방출 시스템으로 투여되는 경우, 펌프를 사용하여 제어 또는 지효성 방출을 달성할 수 있다(문헌[Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref Biomed. Eng. 14:20, 1987]; 문헌[Buchwald et al., Surgery 88:507, 1980]; 문헌[Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574, 1989] 참조). 본 발명의 요법의 제어 또는 지효성 방출을 달성하기 위해 중합체 물질이 사용될 수 있다(예를 들어, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla., 1974; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York, 1984; Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61, 1983 참고; 또한 문헌[Levy et al., Science 228:190, 1985]; 문헌[During et al., Ann. Neurol. 25:351, 1989]; 문헌[Howard et al., J. Neurosurg. 7 1:105, 1989]; 미국 특허 제5,679,377호; 미국 특허 제5,916,597호; 미국 특허 제5,912,015호; 미국 특허 제5,989,463호; 미국 특허 제5,128,326호; PCT 공개 번호 WO 99/15154호; 및 PCT 공개 번호 WO 99/20253호 참고. 지효성 방출 제형에서 사용되는 중합체의 예는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 폴리언하이드라이드, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드(PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA) 및 폴리오르토에스테르를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일 구현예에서, 지효성 방출 제형에서 사용되는 중합체는 비활성이고, 다공성 불순물 없으며, 저장에 대해 안정하고, 무균이고 생분해성이다. 제어 방출 또는 지효성 방출 시스템은 예방적 또는 치료학적 표적 근처에 위치될 수 있고, 따라서 전신 용량의 분획만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌[Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115138, 1984] 참조).
제어 방출 시스템은 Langer에 의한 검토에서 논의된다(문헌[Langer, Science 249:15271533, 1990]). 당업자에게 공지된 임의의 기법은 본 발명의 하나 이상의 면역접합체를 포함하는 지효성 방출 제형을 생성하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,526,938호, PCT 공개 WO 91/05548호, PCT 공개 WO 96/20698, 문헌[Ning et al., Radiotherapy & Oncology 39:179189, 1996]; [Song et al., PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372397, 1995]; [Cleek et al., Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853854, 1997]; 및 문헌[Lam et al., Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759760, 1997]을 참고하고, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.
본 발명의 면역접합체가 국소로 투여된다면, 이들은 연고, 크림, 경피 패치, 로션, 겔, 스프레이, 에어로졸, 용액, 에멀션의 형태 또는 당업계에 잘 공지된 다른 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 19th ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (1995)]을 참조한다. 분무 가능하지 않은 국소 투약 형태에 대해, 국소 도포에 적합하고, 일부 예에서, 물보다 더 큰 역학적 점도를 갖는 담체 또는 1종 이상의 부형제를 포함하는 반고체 또는 고체 형태에 대한 점성이 전형적으로 사용된다. 적합한 제형은, 원한다면, 멸균되거나, 다양한 특성, 예를 들어, 삼투압에 영향을 미치는 보조제(예를 들어, 보존제, 안정제, 습윤제, 완충제 또는 염)와 혼합되는 용액, 현탁액, 에멀션, 크림, 연고, 분말, 도찰제, 살브 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 다른 적합한 국소 투약 형태는 분무 가능한 에어로졸 제제를 포함하되, 활성 성분은, 일부 예에서, 고체 또는 액체 비활성 담체와 조합하여, 가압 휘발물(예를 들어, 기체 추진제, 예컨대 프레온)과의 혼합물로 또는 스퀴즈 보틀(squeeze bottle)로 패키징된다. 보습제 또는 습윤제는 또한 원한다면, 약제학적 조성물 및 투약 형태에 첨가될 수 있다. 이러한 추가 성분의 예는 당해 분야에 잘 알려져 있다.
면역접합체를 포함하는 조성물이 비강내로 투여된다면, 그것은 에어로졸 형태, 스프레이, 미스트로 또는 점적의 형태로 제형화될 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 사용을 위한 예방학적 또는 치료학적 작용제는 적절한 추진제(예를 들어, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체)의 사용과 함께 가압 팩 또는 네뷸라이저로부터의 에어로졸 분무 제공 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우에, 투약 단위는 정량을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 캡슐 및 카트리지(예를 들어, 젤라틴으로 구성)는 화합물과 적합한 분말 베이스, 예컨대 락토스 또는 전분의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화될 수 있다.
제2 치료제, 예를 들어 사이토카인, 스테로이드, 화학요법제, 항생제 또는 방사선을 이용한 공동 투여 또는 치료 방법은 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Hardman et al.,eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10.sup.th ed., McGraw-Hill, New York, N.Y.]; 문헌[Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA]; 문헌[Chabner and Longo(eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., Pa.] 참조). 유효량의 치료제는 증상을 적어도 10%; 적어도 20%; 적어도 약 30%; 적어도 40% 또는 적어도 50%만큼 감소시킬 수 있다.
본 발명의 면역접합체와 조합하여 투여될 수 있는 추가 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 본 발명의 면역접합체와 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 약 12시간 내지 18시간의 간격, 18시간 내지 24시간의 간격, 24시간 내지 36시간의 간격, 36시간 내지 48시간의 간격, 48시간 내지 52시간의 간격, 52시간 내지 60시간의 간격, 60시간 내지 72시간의 간격, 72시간 내지 84시간의 간격, 84시간 내지 96시간의 간격, 또는 96시간 내지 120시간의 간격을 두고 투여될 수 있다. 하나의 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 치료제가 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 면역접합체는 생체 내에서 적절히 분포되도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 혈액 뇌 장벽(blood-brain barrier: BBB)은 매우 고도로 친수성인 화합물을 제외한다. 본 발명의 치료학적 화합물이 (원한다면) BBB를 가로지르는 것을 보장하기 위해, 이들은 예를 들어 리포솜에서 제형화될 수 있다. 리포솜을 제조하는 방법에 대해서는, 예를 들어, 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 및 제5,399,331호를 참고한다. 리포솜은 특정 세포 또는 기관에 선택적으로 수송되어, 표적화된 약물 전달을 향상시키는 하나 이상의 모이어티를 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Ranade, (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685] 참조). 예시적인 표적화 모이어티는 폴레이트 또는 비오틴(예를 들어, 미국 특허 제5,416,016호, Low et al.); 만노사이드(문헌[Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038]); 항체(문헌[Bloeman et al., (1995) FEBS Lett. 357:140]; 문헌[Owais et al., (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180]); 계면활성제 단백질 A 수용체(문헌[Briscoe et al., (1995) Am. J. Physiol. 1233:134]); p 120을 포함하며(문헌[Schreier et al., (1994) J. Biol. Chem. 269:9090]); 또한 문헌[K. Keinanen; M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123]; 문헌[J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273]을 참고한다.
본 발명은 본 발명의 면역접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 단독으로 또는 다른 요법과 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 프로토콜을 제공한다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 주기적으로 투여될 수도 있다. 요법(예를 들어, 제제) 중 하나에 대한 내성 발생의 감소, 요법(예를 들어, 제제) 중 하나의 부작용의 방지 또는 감소, 및/또는 요법의 효능 개선을 위해, 주기 요법은 일정 기간 동안의 제1 요법(예를 들어, 제1 예방제 또는 치료제)의 투여에 이은 일정 기간 동안의 제2 요법(예를 들어, 제2 예방제 또는 치료제)의 투여, 및 이러한 순차적 투여, 즉 사이클의 반복을 포함한다.
본 발명의 병용 요법의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 대상체에게 병행적으로 투여될 수 있다.
용어 "병행적으로"는 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)을 정확히 동시에 투여하는 것으로 제한되는 것이 아니라, 본 발명의 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약학적 조성물이, 본 발명의 항체 약물 접합체가 다른 요법(들)과 함께 작용하여 이들이 달리 투여되는 경우보다 증가된 이점을 제공할 수 있도록 일정 순서로 일정 시간 간격 내에 대상체에게 투여되는 것을 의미한다. 예를 들어, 각각의 요법은 동시에 또는 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 대상체에 투여될 수 있지만; 동시에 투여되지 않는 경우, 이들은 원하는 치료 효과 또는 예방 효과를 제공하도록 충분히 가까운 시간 내에 투여되어야 한다. 각각의 요법은 임의의 적절한 형태로, 임의의 적합한 경로에 의해 개별적으로 대상체에게 투여될 수 있다. 다양한 구현예에서, 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)은 5분 미만의 간격, 15분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 미만의 간격, 약 1시간의 간격, 약 1시간 내지 약 2시간의 간격, 약 2시간 내지 약 3시간의 간격, 약 3시간 내지 약 4시간의 간격, 약 4시간 내지 약 5시간의 간격, 약 5시간 내지 약 6시간의 간격, 약 6시간 내지 약 7시간의 간격, 약 7시간 내지 약 8시간의 간격, 약 8시간 내지 약 9시간의 간격, 약 9시간 내지 약 10시간의 간격, 약 10시간 내지 약 11시간의 간격, 약 11시간 내지 약 12시간의 간격, 24시간의 간격, 48시간의 간격, 72시간의 간격, 또는 1주의 간격을 두고 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 동일한 환자 방문 내에서 둘 이상의 요법(예를 들어, 예방제 또는 치료제)이 투여된다.
병용 요법의 예방제 또는 치료제는 동일한 약제학적 조성물로 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 병용 요법의 예방제 또는 치료제는 개별 약학적 조성물로 대상체에게 병행적으로 투여될 수 있다. 예방제 또는 치료제는 동일한 또는 상이한 투여 경로로 대상체에게 투여될 수 있다. 병용 요법의 예방제 또는 치료제는 동일한 약제학적 조성물로 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 병용 요법의 예방제 또는 치료제는 개별 약학적 조성물로 대상체에게 병행적으로 투여될 수 있다. 예방제 또는 치료제는 동일한 또는 상이한 투여 경로로 대상체에게 투여될 수 있다.
실시예
실시예 1: 예시적인 링커-약물 화합물의 합성
실시예 1-1: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B1)의 합성
단계 1: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((하이드록시하이드로포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(1-1)의 합성:
Figure pct00359
이미다졸(102 mg, 1.49 mmol, 15당량)을 아세토니트릴(ACN)(1.4 mL)에 용해시키고, 여전히 차갑지만 빙욕에서 냉각시켰다(ImH의 충돌이 관찰되고, 혼합물을 빙욕에서 올려, ImH를 가용화함). 그런 다음, 삼염화 인(ACN 중 1.0 M)(499 μl, 0.499 mmol, 5당량)을 적가하고(흰색 현탁액이 생성됨), 혼합물을 10분간 교반하였다. 그런 다음, 트리에틸아민(250 μl, 1.796 mmol, 18당량)을 첨가하고, 혼합물을 40분간 교반한 후 ACN(1.7 mL) 중 (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-하이드록시-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(A1)(100 mg, 0.100 mmol, 1.0당량, 화합물(A1)은 실시예 3-1에 기재된 방법을 사용하여 수득됨)를 첨가하였다 황색-주황색의 이종 혼합물을 실온으로 가온하고, 총 60분 동안 교반하였다. 혼합물을 물(0.2 mL)로 처리하고, 물질을 역상 플래쉬 크로마토그래피(0~100% ACN/물, 40 그램 C18 컬럼, 중성 이동상)로 정제하고, 생성물 분획을 수집하고, 동결건조하여, H-포스포네이트(1-1)를 황백색 비정질 분말로서 수득하였다. LCMS: MH+ = 1066.3, 0.78분(Acquity UPLC BEH C18 1.7um 컬럼, 물/MeCN +0.1% NH4OH로 2~98% 2분 실행, 염기성 방법).
단계 2: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트 (B1)의 합성:
Figure pct00360
(R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((하이드록시하이드로포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(1-1)(100 mg, 0.094 mmol, 1.0당량) 및 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(108 mg, 0.188 mmol, 2.0당량, CAS#는 2055041-37-5임)(동결건조된 분말 모두 10 mL 바이알로 옮김)를 피리딘(4 mL)에 용해시켰다. 그런 다음, 피발로일 클로라이드(0.058 mL, 0.469 mmol, 5당량)를 적가하여, 연황색 용액을 수득하였다. 혼합물을 실온에서 10분간 교반한 다음, 1.0당량 추가의 피발로일 클로라이드를 첨가하였다. 피리딘-물(14:1, 750 uL) 중의 새로 준비된 요오드 용액(47.6 mg, 0.188 mmol, 2.0당량)을 첨가하여 암갈색 투명한 용액을 얻었다. 혼합물을 25분 동안 교반하고, 역상 플래쉬 크로마토그래피(40 g C-18 컬럼, 0%Ac/MeCN 3분, 이어서 15분에 걸쳐 0~60% ACN/물, 중성 방법)로 직접 정제하여 (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B-1)를 수득하였다. HRMS; MH+ = 1638.7700, 2.84분.
실시예 1-2: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸펜타노에이트(B2)의 합성
단계 1: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((하이드록시하이드로포스포릴)옥시)-4-메틸펜타노에이트(1-2)의 합성:
Figure pct00361
이미다졸(85 mg, 1.25 mmol, 15당량 )을 아세토니트릴(ACN)(2.5 mL)에 용해시키고, 여전히 차갑지만 빙욕에서 냉각시켰다(ImH의 충돌이 관찰되고, 혼합물을 빙욕에서 올려, ImH를 가용화함). 그런 다음, 삼염화 인(0.5 mL MeCN에 용해된 36.4 μl, 0.417 mmol, 5당량)을 적가하고(흰색 현탁액이 생성됨) 혼합물을 10분간 교반하였다. 그런 다음, 트리에틸아민(174 μl, 1.25 mmol, 15당량)을 첨가하고, 혼합물을 40분간 교반한 후 ACN(1.7 mL) 중 (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-하이드록시-4-메틸펜타노에이트(A2)(80 mg, 0.084 mmol, 1.0당량, 화합물(A2)은 실시예 3-2에 기재된 방법을 사용하여 수득됨)를 첨가하였다. 황색-주황색의 이종 혼합물을 실온으로 가온하고, 총 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 물(1 mL)로 처리하고, 물질을 역상 플래쉬 크로마토그래피(0~100% ACN/물, 40 그램 C18 컬럼, 중성 이동상)로 정제하고, 생성물 분획을 수집하고, 동결건조하여, H-포스포네이트(1-2)를 황백색 비정질 분말로서 수득하였다. LCMS: MH+ = 1024.3, 0.78분(Acquity UPLC BEH C18 1.7um 컬럼, 물/MeCN +0.1% NH4OH로 2~98% 2분 실행, 염기성 방법).
단계 2: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸펜타노에이트의 합성:
Figure pct00362
(R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((하이드록시하이드로포스포릴)옥시)-4-메틸펜타노에이트(1-2)(50 mg, 0.049 mmol, 1.0당량) 및 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS# 2055041-37-5)(33.7 mg, 0.059 mmol, 1.2당량) (동결건조된 분말 모두 10 mL 바이알로 옮김)를 피리딘(1 mL)에 용해시켰다. 그런 다음, 피발로일 클로라이드(0.042 mL, 0.342 mmol, 7당량)를 적가하여, 연황색 용액을 수득하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 피리딘-물(20:1, 500 uL) 중의 새로 준비된 요오드 용액(49.6 mg, 0.195 mmol, 4당량)을 첨가하여 암갈색 투명한 용액을 얻었다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 역상 플래쉬 크로마토그래피(40 g C-18 컬럼, 0%Ac/MeCN 3분, 이어서 15분에 걸쳐 0~70% ACN/물, 중성 방법)로 직접 정제하여 (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B2)를 수득하였다. HRMS; MH+ = 1595.7200, 2.25분.
실시예 1-3: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B3)의 합성
Figure pct00363
(B3)
화합물(B3)은 화합물(A1) 대신 (실시예 3-3으로부터의) 화합물(A3)을 사용하는 단계 1을 제외하고는, 실시예 1-1에 기재된 방법과 유사한 과정들을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-4: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B4)의 합성
Figure pct00364
(B4)
화합물(B4)은 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS#는 2055041-37-5임) 대신 (S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS# 1949793-46-7)를 사용하는 단계 2를 제외하고는, 실시예 1-1에 기재된 방법과 유사한 과정들을 사용하여 수득하였다. HRMS; MH+ = 1594.5400, 2.88분.
실시예 1-5: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸펜타노에이트(B5)의 합성
Figure pct00365
(B5)
화합물(B5)은 화합물(A1) 대신에 (실시예 3-2로부터의) 화합물(A2)를 사용하는 단계 1, 및 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS#는 2055041-37-5임) 대신에 (S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS# 1949793-46-7)를 사용하는 단계 2를 제외하고는, 실시예 1-1에 기재된 방법과 유사한 과정들을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-6: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)(하이드록시)포스포릴)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B6)의 합성
Figure pct00366
(B6)
화합물(B6)은 화합물(A1) 대신에 (실시예 3-3으로부터의) 화합물(A3)를 사용하는 단계 1, 및 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS#는 2055041-37-5임) 대신에 (S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS# 1949793-46-7)를 사용하는 단계 2를 제외하고는, 실시예 1-1에 기재된 방법과 유사한 과정들을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-7: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B7)의 합성
Figure pct00367
화합물(B7)은 클로로포르메이트(1-3)를 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS#는 2055041-37-5임)와 반응시킴으로써 수득될 수 있다. 클로로포르메이트(1-3)는 화합물(A1)을 포스겐과 반응시킴으로써 수득될 수 있다.
실시예 1-8: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸펜타노에이트(B8)의 합성
Figure pct00368
(B8)
화합물(B8)은 화합물(A1) 대신 화합물(A2)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1-7에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-9: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B9)의 합성
Figure pct00369
(B9)
화합물(B9)은 화합물(A1) 대신 화합물(A3)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1-7에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-10: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B10)의 합성
Figure pct00370
(B10)
화합물(B10)은 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS#는 2055041-37-5임) 대신에 (S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N-(4-(하이드록시메틸)페닐)-5-우레이도펜탄아미드(CAS# 1949793-46-7)를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 1-7에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-11: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸펜타노에이트(B11)의 합성
Figure pct00371
(B11)
화합물(B11)은 화합물(A1) 대신 화합물(A2)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1-10에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 1-12: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2,5-디옥소-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-일)프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)옥시)-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(B12)의 합성
Figure pct00372
(B12)
화합물(B12)은 화합물(A1) 대신 화합물(A3)를 사용한 것을 제외하고는, 실시예 1-10에 기재된 방법을 사용하여 수득될 수 있다.
실시예 2: 항-PMEL17 항체의 생성
실시예 2-1: PMEL17을 발현하는 세포주의 제조
GenBank 또는 Uniprot 데이터베이스로부터의 아미노산 서열을 기반으로 전장 인간, 사이노 및 래트 PMEL17 유전자를 합성하였다. 합성된 모든 DNA 단편을 적절한 발현 벡터로 클로닝하였다.
조작된 안정한 PMEL17-발현 세포주를 생성하고,적당한 선택 조건 하에서 배양하여 안정한 PMEL17-발현 세포주를 생산하였다.
실시예 2-2: PMEL17에 대한 전체 세포 패닝
파지미드 라이브러리는 HuCAL PLATINUM®(문헌[Knappik et al., 2000]) 및 Ylanthia 개념(문헌[Tiller et al., 2013])을 기반으로 하며, 파지 표면 상에 Fab를 디스플레이하기 위해 CysDisplayTM 기술을 사용한다(문헌[Lohning, 2001]).
각 패닝에 대해, 약 4 × 1013 HuCAL PLATINUM® 또는 약 1x1014 Ylanthia® 파지-항체 파지-항체를 PBS/5% FCS에서 차단하였다. 동시에, 항원 PMEL17을 발현하는 0.5 - 1.0 × 107 표적 세포 및 파지 풀 당 항원 PMEL17의 발현이 없는 0.5 - 1.0 × 107 흡착 세포를 얼음 상에서 차단하기 위해, 1 ml PBS/5% FCS에 재현탁시켰다. 차단된 표적 세포를 회전시키고, 사전-차단된 파지 입자에 재현탁시키고, 회전자에서 4℃에서 2시간 동안 배양하였다. 파지-세포 복합체를 PBS/5% FCS로 3회 세척하였다. 표적 세포로부터 특이적으로 결합된 파지의 용리는 0.1 M 글리신-HCl/0.5 M NaCl, pH 2.2로 10분 산성 용출에 의해 수행하였다. 원심분리 후, 2M 완충되지 않은 Tris를 첨가하여 상청액(용리액)을 중화시켰다. 표적 항원 이외의 세포 표면 분자에 결합하는 파지를 제거하기 위해, 각각 0.5 - 1.0 × 107 흡착 세포로 후-흡착을 3회 수행하였다. 최종 상청액은 0.6~0.8의 OD600으로 성장한 14 ml E. coli TG1 배양물의 감염에 사용하였다. 파지 감염을 위해 37℃의 수조에서 45분 동안 배양물을 인큐베이션하였다. 박테리아 펠릿을 2xYT 배지에 재현탁하고, LB/Cam 한천 플레이트 상에 플레이팅하고, 30℃에서 o/n 인큐베이션하였다. 콜로니를 플레이트에서 긁어내고, 파지 구조 및 파지 증폭에 사용하였다. 증폭된 파지는 다음 패닝 라운드에 사용하였다. 전체 세포 패닝의 제2 및 제3 라운드는 제1 라운드의 프로토콜에 따라 수행하였다.
실시예 2-3: Fab 단편의 서브클로닝, 발현 및 스크리닝
가용성 Fab의 신속한 발현을 촉진하기 위해, 선택된 HuCAL PLATINUM® 파지의 Fab 인코딩 삽입물을 pMORPH®30 디스플레이 벡터로부터 pMORPH®x11_FH 발현 벡터로 서브클로닝했다. EcoRI, XbaI 및 BmtI를 통해 삼중 분해에 의해 서브클로닝을 수행하였다. E. coli TG1-F- 단일클론의 형질전환후, HuCAL®-Fab 단편을 함유하는 주변세포질 추출물의 발현 및 제조를 이전에 설명한 대로 수행하였다(문헌[Rauchenberger et al., 2003]).
선택된 Ylanthia® 파지의 Fab 암호화 삽입물을 pYPdis10 디스플레이 벡터로부터 pYBex10_Fab_FH 발현 벡터로 서브클로닝하였다. 서브클로닝은 XbaI, EcoRI-HF 및 PstI-HF를 통해 삼중 분해에 의해 수행하였다. E. coli TG1-F- 단일클론의 형질전환후, Ylanthia®-Fab 단편을 함유하는 주변세포질 추출물의 발현 및 제조를 이전에 설명한 대로 수행하였다(문헌[Rauchenberger et al., 2003]).
E. coli TG1 F- 세포에서 pMORPH®x11_Fab_FH 및 pYBex10_Fab_FH에 의해 암호화된 Fab 단편의 발현은 0.1% 글루코스 및 34 μg/ml의 클로람페니콜이 보충된 500 ml의 2xYT 배지를 사용하여 진탕 플라스크 배양에서 수행하였다. OD600이 0.5의 값에 도달할 때까지 30℃에서 배양물을 진탕하였다. IPTG(이소프로필-ß-D-티오갈락토피라노시드)를 0.75 mM의 최종 농도로 첨가하고 30℃에서 20시간 동안 추가 배양하여 Fab 발현을 유도하였다. 세포를 수확하고, 리소자임을 사용하여 파괴하였다. His6-태그된(SEQ ID NO: 267) Fab 단편을 IMAC(Bio-Rad, Germany)를 통해 단리시키고, 이미다졸을 사용하여 용리하였다. PD10 컬럼(GE Healthcare, Germany)을 사용하여 1x 둘베코 PBS(pH 7.2)로의 완충액 교환을 수행하였다. 샘플을 멸균 여과하였다(0.2 μm). 단백질 농도를 UV-분광광도법에 의해 결정하였다. 샘플의 순도를 변성, 환원 15% SDS-PAGE에서 분석하였다. Fab 제제의 균질성은 보정 표준을 사용하는 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC)에 의해 네이티브 상태에서 결정되었다.
FACS 스크리닝에서, 정제된 Fab는 다양한 PMEL17 발현 및 PMEL17 비발현 세포주(대조군용)에서 적정하였다. 아큐타제(Accutase)를 사용하여 세포를 수확하고, FACS 완충액(PBS, 3% FCS 및 0,02% Na-Azide)으로 약 4 × 106 세포/ml로 조정하고, 내재화를 피하기 위해 얼음 위에서 보관하였다. 15 μl의 세포 현탁액/웰을 384 웰 V-바닥 플레이트(Greiner, Cat# 781280)로 옮기고, 다른 농도(가장 일반적으로 200 내지 3,5 × 10-3nm)의 Fab 15 μl와 함께 4℃에서 1시간 동안 조심스럽게 진탕하면서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충액으로 3회 세척하였다. 각 세척 단계 후, 세포를 원심분리(250xg, 4분, 4℃)하고, 조심스럽게 재현탁시켰다. PE(PE-접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab`)2 단편 특이적, FACS 완충액에서 1:150; Jackson Immuno Research, #109-116-097) 또는 Alexa Fluor(Alexa Fluor-접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab`)2 단편 특이적, FACS 완충액에서 1:150; Jackson Immuno Research, #109-606-097)에 접합된 15 μl의 검출 항체를 첨가하고, 샘플을 암실내 얼음 위에서 조심스럽게 진탕하면서 45분 내지 1시간 동안 인큐베이션하였다. 3단계 세척 후, 세포를 30 μl의 FACS 완충액에 재현탁하고, IntelliCyt HTFC 장치를 사용하여 샘플을 측정하였다.
확인된 항체의 특이성을 추가로 확인하기 위해, 항원을 세포 용해물로부터 면역-포획하고, ELISA 기반 스크리닝을 위한 코팅 재료로 사용하였다. PMEL17 발현 및 PMEL17 비 발현 세포(음성 대조군으로 사용됨)를 원심분리하고(250 g, 5분), 1 × 107 내지 1 × 108 세포/mL의 프로테아제 억제제(완전 EDTA 무 프로테아제 억제제 칵테일, Roche, 11 873 580 001)를 함유하는 용해 완충액(MSD Tris Lysis Buffer, Meso Scale Discovery, R60TX-2)에 재현탁하고, 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 용해물을 13000 rpm에서 5분 동안 회전시켜, 세포 파편을 버리고, 상청액을 분취하고, -80℃에 보관하였다. 예비 테스트는 용해물이 ELISA에서 큰 신호 손실없이 3회 동결 및 해동될 수 있음을 입증하였다.
스크리닝을 수행하기 위해, ELISA 항-His IgG를 maxisorb 384 웰 플레이트(R&D systems, MAB050, 10 μg/ml, 웰 당 20 μl) 상에서 하룻밤 동안 코팅하였다. 플레이트를 3% BSA로 차단하고, 20 μl의 정제된 Fab를 다른 농도(가장 일반적으로 400 내지 0.2 nM)로 각 웰로 1시간 동안 옮겼다. 플레이트를 3회 세척하고, 세포 용해물을 함유하는 20 μl PMEL17을 1시간 동안 웰 당 2 × 105 용해된 세포의 농도로 첨가하였다. 3회 추가 세척후, 도구 항체 PMEL17 비오티닐화된(5 μg/ml, 웰 당 20 μl) 및 스트렙타비딘-ECL(Dianova, 13MSA37, 1:1500, 웰 당 20 μl)을 사용하여 PMEL17의 존재가 밝혀졌다. MSD 판독 완충액 1X(Meso Scale Discovery, R92TC-2)의 웰 당 20 μl를 플레이트에 첨가하고, MSD Sector Imager 6000을 통해 신호를 검출하였다.
실시예 2-4: IgG로의 전환
선택된 Fab의 IgG로의 전환은 96-웰 포맷의 PCR-기반 방법으로 달성되었다. Fab 박테리아 발현 벡터 pMORPH®x11_FH 및 pYBex10_Fab_FH를 IgG 포유류 발현 벡터 pMORPH®4 및 pYMex10(각각 HuCAL 및 Ylanthia 클론용)으로 전환하였다.
phoA 리더 영역에 특이적인 비오티닐화 프라이머 및 박테리아 CL 도메인에 특이적인 비-비오티닐화된 프라이머를 사용하여 pMORPHx11_FH 플라스미드 DNA를 PCR에 의해 먼저 증폭하였다. 증폭된 생성물을 스트렙타비딘 비드에 포획하고, BsiWI 또는 HpaI(각각 VLkappa 또는 VLlambda 클론용)로 소화시키고, 세척한 다음, MfeI로 다시 소화시켰다. 이 과정으로 인해 정제된 벡터 백본이 상청액으로 방출되어, 이제 박테리아 불변 경쇄 영역(CL) 및 phoA 중쇄 리더가 부족하다. 카파 또는 람다 특이적 포유류 pIN 발현 카세트를 포유류 CL, polyA 부위, CMV 프로모터 및 포유류 중쇄 리더 서열을 운반하는 벡터 백본으로 클로닝했다. 제2 PCR 단계에서, 새로 생성된 Fab 삽입물은 CH1 영역에 특이적인 비오티닐화된 프라이머와 박테리아 ompA 리더 내에서 결합하는 비-비오티닐화된 프라이머를 사용하여 다시 증폭되었다. PCR 생성물을 스트렙타비딘 비드에 포획하고, EcoRV로 소화시키고, 세척하고 BlpI로 소화하여 정제된 삽입물을 상청액으로 방출시켰다. 삽입물은 포유류 세포에서의 발현을 위해 Fab_Cys 수용체 벡터로 최종적으로 클로닝되었다.
phoA 리더 영역에 특이적인 비오티닐화 프라이머 및 박테리아 CL 도메인에 특이적인 비-비오티닐화된 프라이머를 사용하여 pYBex10_Fab_FH 플라스미드 DNA를 PCR에 의해 먼저 증폭하였다. 증폭된 생성물을 스트렙타비딘 비드에 포획하고, NheI로 소화시키고, 세척한 다음, KpnI로 다시 소화시켰다. 이 과정으로 인해 정제된 벡터 백본이 상청액으로 방출되어, 이제 박테리아 불변 경쇄 영역(CL) 및 phoA 중쇄 리더가 부족하다. 카파 또는 람다 특이적 포유류 pIN 발현 카세트를 포유류 CL, polyA 부위, CMV 프로모터 및 포유류 중쇄 리더 서열을 운반하는 벡터 백본으로 클로닝했다. 제2 PCR 단계에서, 새로 생성된 Fab 삽입물은 CH1 영역에 특이적인 비오티닐화된 프라이머와 박테리아 ompA 리더 내에서 결합하는 비-비오티닐화된 프라이머를 사용하여 다시 증폭되었다. PCR 생성물을 스트렙타비딘 비드에 포획하고, XhoI로 소화시키고, 세척하고 NdeI로 소화하여 정제된 삽입물을 상청액으로 방출시켰다. 삽입물은 포유류 세포에서의 발현을 위해 Fab_Cys 수용체 벡터로 최종적으로 클로닝되었다.
E. coli XL-1 청색 세포의 형질전환후, 단일클론을 콜로니 PCR 및 전체 삽입 영역의 시퀀싱을 통해 제어하였다.
실시예 2-5: 인간 IgG의 확인 스크리닝
BioRobot®8000 장치와 함께 적당한 DNA 제제 키트를 사용하여 단일 콜로니의 DNA 제제를 제조하였다. 개별 DNA 농도를 UV-분광광도법에 의해 결정하였다. 진핵 HEK293 c18 세포(ATCC #CRL-10852)는 전장 IgG를 함유하는 조건화된 세포 배양 상청액의 생성을 위해 96-웰 발현 시스템에서 사용되었다. 약 4 × 104 세포/50 μl/웰의 밀도로 전날 96-웰 편평-바닥 플레이트에 진핵 HEK293 c18 세포를 시딩하고, 동일한 양의 Ig 발현 벡터 DNA로 형질감염시켰다. 37℃ 및 6% CO2에서 40~50시간 동안 인큐베이션한 후, 배양 상청액을 96-웰 U-바닥 플레이트로 옮기고, 원심분리로 제거하였다. 생성된 Ig 상청액은 알려진 표준을 참조하여 Ig 농도를 계산하기 위해 항-Fd 포획 ELISA에 의해 테스트되었고, 나중에 특이성 및/또는 기능적 스크리닝 분석에 사용하기 위해 -20℃에 저장하였다.
관심 클론의 DNA를 VH 도메인에 대한 프라이머 CMV_HC_for(CTC TAG CGC CAC CAT GAA ACA(SEQ ID NO: 264)) 및 Fc 도메인에 대한 IgG_const_for(AGC CCA GCA ACA CCA AGG(SEQ ID NO: 265))로 시퀀싱한 다음, T7 프로모터 프라이머(TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG(SEQ ID NO: 266))로 경쇄 시퀀싱하여 완전한 IgG 서열 정보를 수득하였다.
FACS 스크리닝은 IntelliCyt로부터의 HTFC 스크리닝 플랫폼을 사용하여 384-웰 플레이트 포맷으로 수행되었다. 아큐타제(Accutase)를 사용하여 세포를 수확하고, FACS 완충액(PBS, 3% FCS 및 0,02% Na-Azide)으로 약 4 × 106 세포/ml로 조정하고, 내재화를 피하기 위해 얼음 위에서 보관하였다. 15 μl의 세포 현탁액/웰을 384 웰 V-바닥 플레이트(Greiner, Cat# 781280)로 옮기고, 상청액(또는 희석된 정제된 대조군 항체)을 함유하는 15 μl의 IgG와 함께 4℃에서 1시간 동안 조심스럽게 진탕하면서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충액으로 3회 세척하였다. 각 세척 단계 후, 세포를 원심분리(250×g, 4분, 4℃)하고, 조심스럽게 재현탁시켰다. PE(PE-접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab`)2 단편 특이적, FACS 완충액에서 1:150; Jackson Immuno Research, #109-116-097)에 접합된 15 μl의 검출 항체를 첨가하고, 샘플을 암실내 얼음 위에서 조심스럽게 진탕하면서 45분 내지 1시간 동안 인큐베이션하였다. 3단계 세척 후, 세포를 30 μl의 FACS 완충액에 재현탁하고, IntelliCyt HTFC 장치를 사용하여 샘플을 측정하였다.
실시예 2-6: 인간 IgG 및 인간 Fab_Cys의 생산
진핵 HKB11 세포는 IgG의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화하는 pMORPH®4 또는 pYMex10 발현 벡터 DNA로 형질감염시켰다. 세포 배양 상청액을 형질감염 후 3일 또는 7일에 수확하였다. 세포 배양 상청액을 각각 인간 IgG 및 인간 Fab_Cys에 대한 표준 단백질 A 친화성 크로마토그래피(MabSelect SURE, GE Healthcare) 및 Capture Select IgG-CH1(BAC)에 적용하였다. 달리 언급되지 않는 한, 완충액 교환을 1× 둘베코 PBS(pH 7.2, Invitrogen)로 수행하고 샘플을 살균 여과하였다(0.2 μm의 기공 크기). IgG의 순도는 Labchip 시스템(GXII, Perkin Elmer, USA) 또는 SDS-PAGE를 사용하여 변성, 환원 및 비-환원 조건에서 분석하였다. 단백질 농도는 UV-분광광도법에 의해 결정하고, HP-SEC를 수행하여 네이티브 상태에서 IgG 제제를 분석하였다.
실시예 2-7: 항-PMEL17 G1 및 G4 항체의 생산
제1 패닝 라운드를 위해, 약 4 × 1013 HuCAL PLATINUM® 파지를 PBS/5% FBS로 차단하였다. 동시에, 항원 PMEL17을 발현하는 1.0 × 107 표적 세포 및 파지 풀 당 항원 PMEL17의 발현이 없는 1.53.0 × 107 흡착 세포를 얼음 상에서 차단하기 위해, 1 ml PBS/5% FCS에 재현탁시켰다. 비특이적 결합을 미리 제거하기 위해, 얼음 위에서 30분 동안 파지 풀당 항원 PMEL17의 발현없이 파지를 0.5 × 107 흡착 세포와 함께 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 원심분리에 의해 펠렛화하고, 항원 PMEL17의 발현 없이 0.5 × 107 흡착 세포를 갖는 새로운 샘플에 상청액을 첨가하였다. 동일한 인큐베이션 조건을 적용하고, 총 3회의 사전-흡수 라운드 동안 항원 PMEL17의 발현없이 0.5 × 107 흡착 세포의 새로운 샘플에 사전-흡수를 다시 적용했다. 최종 사전-흡수 후, 상청액을 항원 PMEL17을 발현하는 1.0 × 107개의 표적 세포에 첨가하고, 가끔 혼합하면서 얼음 위에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 파지-세포 복합체를 PBS/5% FCS로 3회 세척하였다. 표적 세포로부터 특이적으로 결합된 파지의 용리는 0.1 M 글리신-HCl/0.5 M NaCl, pH 2.5로 10분 산성 용출에 의해 수행하였다. 원심분리 후, 2M 완충되지 않은 Tris를 첨가하여 상청액(용리액)을 중화시키고, 상기 용리액을 사용하여 0.6~0.8의 OD600로 성장한 14 ml E. coli TG1 F’ 배양물을 감염시켰다. 배양물을 37℃에서 20분 동안 인큐베이션한 다음, 파지 감염을 위해 200 rpm에서 진탕하면서 37℃에서 25분간 첨가하였다. 박테리아 펠릿을 2xYT 배지에 재현탁하고, LB/클로람페니콜 한천 플레이트 상에 플레이팅하고, 30℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션하였다. 콜로니를 플레이트에서 긁어내고, 파지 구조 및 파지 증폭에 사용하였다. 증폭된 파지는 다음 패닝 라운드에 사용하였다. 제2 및 제3 패닝 라운드는 약 1 × 1012 HuCAL 파지만 사용하여 배경을 줄이고 사전 청소의 효과를 개선하는 데 사용되었다는 점을 제외하고 유사하게 수행되었다. 패닝의 최종 라운드후, 각 파지 출력으로부터 플라스미드 DNA를 준비하고, Fab-함유 삽입물을 박테리아 발현 벡터에 클로닝하였다. 결찰 및 형질전환 후, 개별 콜로니를 2XT/클로람페니콜로 골라서 배양하였다. 25℃에서 96 웰 마이크로타이터 플레이트에서 밤새 성장한 배양물에 0.25 mM IPTG를 첨가하여 Fab 발현을 유도하였다. 세포 펠렛을 PBS에서 0.1% 리소자임으로 용해시킨 다음, BSA를 최종 농도 1%로 첨가하여 차단했다. FACS 염색은 PMEL17-발현 및 대조군 세포에서 수행되었다.
실시예 2-8: 항-PMEL17 항체의 겉보기 친화도
정제된 IgG는 다양한 PMEL17 발현 및 PMEL17 비발현 세포주(대조군용)에서 적정하여, EC50 값을 결정하였다. 아큐타제를 사용하여 세포를 수확하고, FACS 완충액(PBS, 3% FCS 및 0,02% Na-Azide)으로 약 4 × 106 세포/ml로 조정하고, 내재화를 피하기 위해 얼음 위에서 보관하였다. 15 μl의 세포 현탁액/웰을 384 웰 V-바닥 플레이트(Greiner, Cat# 781280)로 옮기고, 다른 농도(가장 일반적으로 200 내지 3,5 × 10-3 nM)의 IgG 15 μl와 함께 4℃에서 1시간 동안 조심스럽게 진탕하면서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충액으로 3회 세척하였다. 각 세척 단계 후, 세포를 원심분리(250×g, 5분, 4℃)하고, 조심스럽게 재현탁시켰다. PE(PE-접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab`)2 단편 특이적, FACS 완충액에서 1:150; Jackson Immuno Research, #109-116-097) 또는 Alexa Fluor(Alexa Fluor-접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab`)2 단편 특이적, FACS 완충액에서 1:150; Jackson Immuno Research, #109-606-097)에 접합된 15 μl의 검출 항체를 첨가하고, 샘플을 암실내 얼음 위에서 조심스럽게 진탕하면서 45분 내지 1시간 동안 인큐베이션하였다. 3단계 세척 후, 세포를 30 μl의 FACS 완충액에 재현탁하고, IntelliCyt HTFC 장치를 사용하여 샘플을 측정하였다. EC50 값은 Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다. G-361 흑색종 세포주는 HKB11-인간 PMEL17 과발현 세포주에 비해 인간 PMEL17을 더 낮은 수준으로 발현하므로, 세포에 대한 겉보기 친화도에 따라 클론의 더 정확한 순위를 지정할 수 있다. 표 3에 예시된 바와 같이, 약 200 pM에서 약 70 nM까지 다양한 EC50 범위에 도달했다.
[표 3]
Figure pct00373
실시예 2-9: 항-PMEL17 항체의 교차-반응성
IgG의 교차-특이성은 G-361(인간 흑색종), HKB11-사이노-PMEL17, HKB11-래트 PMEL17 및 B16-F10(흑색종을 발현하는 마우스 PMEL17)에 대한 용량 반응 FACS로 평가하였다(표 3). G-361에 대한 테스트는 PE로 표지된 검출 항체를 사용하여 수행되었다. 대조적으로, Alexa-Fluor 표지된 검출 항체는 검출 가능한 신호에 도달하기 위해 다른 세포주에서 후보를 테스트하는 데 사용되어야 했다.
IgG는 그들의 교차-특이성 프로파일에 따라 여러 에피토프 그룹으로 분류되었다. 그럼에도 불구하고 IgG의 다양한 교차-반응성 프로파일은 그들의 표적이 적어도 4개의 에피토프(인간/사이노/래트/마우스, 인간/사이노/래트, 인간/사이노/마우스 및 인간/사이노)를 시사한다.
실시예 2-10: ADC 분석
IgG는 피기백 ADC 분석시에 및 직접 접합 후에 다양한 PMEL17 발현 세포를 내재화하고 사멸을 유도하는 능력에 대해 용량 반응으로 테스트되었다.
피기백(piggyback) ADC 분석을 위해, 인간 Fc에 특이적으로 결합하고 세포독소 요소인, 사포린에 커플링된 Fab-ZAP(염소 항-hu-mAb-사포린-커플링됨; ATS Biotechnology, Cat# IT-51) 화합물을 사용하였다. 아큐타제를 사용하여 세포를 수확하고, 5 × 104 세포/ml로 조정하였다. 50 μl의 세포 현탁액을 웰 당 96-웰 평평한 투명 바닥 백색 플레이트(Corning, 3610)로 옮기고, 37℃, 5% CO2에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 다음날, 항체 후보는 37℃에서 30분 동안 8 nM에서 IgG - Fab-ZAP 화합물과 함께 상이한 농도(가장 통상적으로 44 내지 7 × 10-3 nM)로 인큐베이션하였다. 그 다음, Fab-ZAP 복합체의 웰 당 50 μl를 표적 세포에 첨가하였다. 대조군의 경우, 세포만 있는 웰, 후보 IgG(=100% 생존율 대조군)와 함께 단독 인큐베이션된 세포가 있는 웰 및 Fab-ZAP와 단독 인큐베이션된 세포(2차 시약의 비특이적 사멸을 체크하기 위해)가 있는 웰을 제조하였다. IgG의 최종 농도는 22 내지 3,5 × 10-3 nM 및 Fab-ZAP 4 nM이었다. 플레이트는 37℃ 및 5% CO2에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. CellTiter-Glo(Promega #G7571)를 사용하여 생존 세포의 양을 평가하고, Tecan Infinite 500으로 발광을 검출하였다. 그런 다음, 생존율을 세포 + IgG 단독 대조군으로 표준화하였다.
거의 모든 IgG는 G-361 흑색종을 효율적으로 사멸시킬 수 있었으며(>80% 최대 사멸), 비 PMEL17 발현 293T 세포 상에서는 제한된 사멸을 나타냈다(<30% 최대 사멸). G-361 사멸은 또한, 친화성 또는 에피토프 관련될 수 있는 다양한 EC50으로 달성되었다. 교차 특이성은 인간/사이노/래트/마우스, 인간/사이노/래트 및 인간/사이노/마우스에 반응하는 대부분의 IgG, 즉, 마우스 PMEL17에 특이적인 IgG에 대해서도 B16-F10 (마우스 흑색종)도 사멸시킬 수 있음을 확인할 수 있다.
실시예 2-11: 항-PMEL17 항체의 조작
일반적으로 모든 조작 과정들은 PCR-기반 전략을 사용하여 수행되었다. 조작 과정들은 하기 양태들을 포함한다: 생식세포화(Germlining), PTM 부위 제거, pI 조작, 및 코돈 최적화. 중복 확장 PCR에 의한 합성 및 조립 후, 재조작된 VH 및 VL 단편을 후속 IgG 발현을 위해 적당한 벡터 백본으로 서브클로닝하였다.
실시예 3: 화합물 A1-A3의 합성
실시예 3-1: 백량금(Ardisia crenata)의 건조된 잎으로부터의 (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-22-이소프로필-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16-펜타메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-하이드록시-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(A1)의 단리 방법
Figure pct00374
(A1)
화합물 A1은 일본 특허 공개 번호 JP62283999에 기재된 방법을 기반으로 단리하였다. 단계 1: 추출: 백량금(Ardisia crenata)의 건조된 잎 25 kg을 미세 분말로 분쇄하고, 500 L 메탄올로 추출하였다. 여과 후, 추출물을 증발 건조시켰다. 잔류물을 100 L 에틸 아세테이트에 용해시키고, 100 L 탈이온수로 5회 추출하였다(상 분리를 개선시키기 위해 염화나트륨을 첨가하였다. 유기 층을 증발 건조시켰다. 잔류물을 50 L 아세토니트릴/물(9/1)에 용해시키고, 50 L 헵탄으로 추출하였다. 물만 남을 때까지 아세토니트릴/물 층을 증발시켰다. 그런 다음, 이것을 50 L 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 증발 건조시켜, 미정제 추출물 109 g을 수득하였다.
단계 2: 탈지: 미정제 추출물을 25 L 아세토니트릴/물(9/1)에 용해시키고, 25 L 헵탄으로 3회 추출하였다. 물만 남을 때까지 아세토니트릴/물 층을 증발시켰다. 그런 다음, 이것을 25 L 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 증발 건조시켜, 미정제 추출물 40 g을 수득하였다.
단계 3: 플래쉬 크로마토그래피: 미정제 추출물을 아세톤/메탄올(1/1)에 용해시키고, 100 g Isolute(규조토) 상에 흡착시키고, 증발 건조시켰다. 사이클로헥산(용리액 A), 에틸 아세테이트(용리액 B) 및 메탄올(용리액 C)을 사용하는 삼원 용매 시스템에 의해 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다(실험 세부사항: 컬럼: RediSep Rf 120 g; 유속: 85 mL/분; 구배: 0분: 75% A, 25% B, 0% C; 3분: 75% A, 25% B, 0% C; 10분: 0% A, 100% B, 0% C; 17.5분: 0% A, 90% B 10% C; 25분: 0% A, 50% B, 50% C; 30분: 0% A, 50% B, 50% C; 구배의 다른 세그먼트는 시간에 따른 선형 변화로 연결된다). 각각 10 g 추출물로 4회의 실행을 수행하였다. 시간 기반 분획을 적용하고, 수집된 분획을 UPLC-UV-MS로 화합물(A1)의 존재에 대해 분석했다. 화합물(A1)을 함유하는 분획을 모으고, 증발 건조시켜 25 g의 분획을 얻었다.
단계 4: 크기-배제 크로마토그래피(SEC): 25 g 분획을 400 mL 메탄올에 용해시키고, 용리액으로서 Sephadex LH20 및 메탄올이 채워진 컬럼(길이 25 cm, 직경 12.5 cm) 상에서 SEC에 의해 추가로 분획화하였다. 각각 200 mL의 분획을 수집하고, 수집된 분획을 UPLC-UV-MS로 화합물(A1)의 존재에 대해 분석했다. 화합물(A1)을 함유하는 분획을 모으고, 증발 건조시켜 6.2 g의 농축 분획을 얻었다.
단계 5: 제1 분취 HPLC: 6.2 g의 농축된 분획을 12 mL 메탄올/디메틸설폭사이드(1/1)에 용해시키고, 분취 HPLC에 의해 추가로 분획화하였다(실험 세부사항: 컬럼: Sunfire C18, 30 × 150 mm, 5 μm 입자 크기; 용리액 A: 0.1% 포름산과 함께 탈이온수, 용리액 B: 0.1% 포름산과 함께 메탄올; 유속 60 mL/분; 구배: 0분: 35% A, 65% B; 0.5분: 35% A, 65% B; 17분: 15% A, 85% B; 15.0분: 0% A, 100% B; 19분: 0% A, 100% B; 19.1분: 35% A, 65% B; 20분: 35% A, 65% B; 구배의 다른 세그먼트는 시간에 따른 선형 변화로 연결된다). 분획화는 질량 분석법에 의해 시작되었다. 각각 410 mg 농축된 분획으로 15회의 실행을 수행하였다. 화합물(A1)을 함유하는 분획을 모으고, 증발 건조시켜 70% 화합물(A1)의 추정 함량과 함께 488 mg의 반-순수 분획을 생성했다.
단계 6: 제2 분취 HPLC: 488 mg의 반-순수 분획을 4 mL 메탄올에 용해시키고, 분취 HPLC에 의해 추가로 분획화하였다(실험 세부사항: 컬럼: X-Select PFP, 19 × 250 mm, 5 μm 입자 크기; 용리액 A: 0.1% 포름산과 함께 탈이온수, 용리액 B: 0.1% 포름산과 함께 아세토니트릴; 유속 30 mL/분; 구배: 0분: 45% A, 55% B; 0.5분: 45% A, 55% B; 24분: 25% A, 75% B; 24.0분: 0% A, 100% B; 27.5분: 0% A, 100% B; 27.6분: 45% A, 55% B; 30.5분: 45% A, 55% B; 구배의 다른 세그먼트는 시간에 따른 선형 변화로 연결된다). 분획화는 질량 분석법에 의해 시작되었다. 각각 98 mg 반-순수 분획으로 5회의 실행을 수행하였다. 화합물(A1)을 함유하는 분획을 모으고, 증발 건조시켜 95% 초과의 순도를 갖는 287 mg 화합물(A1)을 얻었다.
화합물(A1): 체류 시간: 4.73분, 분자식 [M+H]+: C49H76N7O15+, 계산된 단일동위원소 질량 [M+H]+: 1002.5394 Da, 관찰된 질량: 1002.5391 Da. 실험 세부사항: 컬럼: ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 × 100 mm, 1.7 μm 입자 크기; 용리액 A: 0.1% 포름산과 함께 탈이온수, 용리액 B: 0.1% 포름산과 함께 아세토니트릴; 유속 0.9 mL/분; 선형 구배: 0분: 95% A, 5% B 내지 6.4분: 0% A, 100% B. 1H NMR (600 MHz, 아세토니트릴-d 3 ) δ 8.36 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.38 - 7.22 (m, 6H), 6.94 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.39 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.34 (dd, J = 8.8, 3.8 Hz, 1H), 5.31 - 5.25 (m, 2H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 5.11 (dd, J = 9.9, 1.9 Hz, 1H), 4.90 - 4.84 (m, 1H), 4.70 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 7.7, 2.1 Hz, 1H), 4.10 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 3.60 (ddd, J = 9.8, 4.4, 2.0 Hz, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.16 - 3.11 (m, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.84 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.55 - 2.43 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.96 - 1.90 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 2H), 1.37 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.32 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.19 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 7.7 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.77 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 3-2: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-2-아세트아미도-3-하이드록시-4-메틸펜타노에이트(A2)에 대한 생성 방법
Figure pct00375
(A2)
문헌 [M. Taniguchi et al., Tetrahedron 59 (2003) 4533-4538]에 기재된 방법들을 사용하여 화합물(A2)을 수득하였다. 실시예 3-1에서 화합물(A1)에 대해 기재된 방법들을 사용하여 단리를 수행하였다. 그 다음, 물질을 UPLC-UV-HRMS, 1D-NMR- 및 2D-NMR-실험으로 특성화하였다. 화합물(A2): 체류 시간: 4.20분, 분자식 [M+H]+: C46H70N7O15+, 계산된 단일동위원소 질량 [M+H]+: 960.4924 Da, 관찰된 질량: 960.4914 Da. 1H NMR (600 MHz, 1,4-디옥산-d 8 ) δ 8.36 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.31 - 7.21 (m, 4H), 7.21 - 7.16 (m, 2H), 6.79 - 6.72 (m, 2H), 5.40 - 5.37 (m, 1H), 5.36 - 5.33 (m, 1H), 5.30 - 5.28 (m, 2H), 5.20 (dd, J = 9.0, 3.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 9.9, 1.4 Hz, 1H), 4.89 - 4.82 (m, 1H), 4.73 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.80 - 3.73 (m, 1H), 3.65 (ddd, J = 9.8, 4.3, 1.9 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.11 (dd, J = 14.7, 3.7 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 14.7, 8.9 Hz, 1H), 2.84 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.99 - 1.90 (m, 1H), 1.75 - 1.69 (m, 1H), 1.35 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.18 - 1.14 (m, 6H), 1.11 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.04 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.6 Hz, 4H).
실시예 3-3: (R)-1-((3S,6S,9S,12S,18R,21S,22R)-21-아세트아미도-18-벤질-3-((R)-1-메톡시에틸)-4,9,10,12,16,22-헥사메틸-15-메틸렌-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥소-1,19-디옥사-4,7,10,13,16-펜타아자사이클로도코산-6-일)-2-메틸프로필 (2S,3R)-3-하이드록시-4-메틸-2-프로피온아미도펜타노에이트(A3)에 대한 생성 방법
Figure pct00376
(A3)
문헌 [M. Taniguchi et al. Tetrahedron 59 (2003) 4533-4538]에 기재된 방법들을 사용하여 화합물(A3)을 수득하였다. 실시예 3-1에서 화합물(A1)에 대해 기재된 방법들을 사용하여 단리를 수행하였다. 그 다음, 물질을 UPLC-UV-HRMS, 1D-NMR- 및 2D-NMR-실험으로 특성화하였다. 화합물(A3): 체류 시간: 4.42분, 분자식 [M+H]+: C47H72N7O15+, 계산된 단일동위원소 질량 [M+H]+: 974.5081 Da, 관찰된 질량: 974.5098 Da. 1H NMR (600 MHz, 1,4-디옥산-d 8 ) δ 8.37 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.23 (m, 4H), 7.22 - 7.16 (m, 1H), 7.12 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.78 - 6.72 (m, 2H), 5.41 - 5.33 (m, 2H), 5.32 - 5.26 (m, 2H), 5.20 (dd, J = 8.8, 3.7 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 9.9, 1.7 Hz, 1H), 4.89 - 4.81 (m, 1H), 4.72 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 7.8, 2.1 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 3.81 - 3.73 (m, 1H), 3.68 - 3.64 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 3.11 (dd, J = 14.6, 3.7 Hz, 1H), 2.89 (dd, J = 14.7, 8.9 Hz, 1H), 2.83 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.51 - 2.41 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.99 - 1.89 (m, 1H), 1.78 - 1.68 (m, 1H), 1.34 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.18 - 1.14 (m, 6H), 1.13 - 1.08 (m, 6H), 1.04 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 4: 항-PMEL17 항체 약물 접합체의 생산 방법
PBS에서 10 mg Ab 대 1 ml 수지의 비율로 RMP 단백질 A 수지(GE)와 함께 적당한 크기의 일회용 컬럼에서 혼합하면서 항체를 15분 동안 인큐베이션하였다. 시스테인 HCl을 최종 농도 20 mM까지 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하면서 인큐베이션하여 반응성 시스테인이 탈블로킹되도록 하였다. 수지를 진공 매니폴드상에서 50 컬럼 부피의 PBS로 빠르게 세척하였다. 그런 다음, 수지를 250 nM CuCl2를 함유하는 동일한 부피의 PBS에 재현탁시켰다. 항체 사슬간 이황화물의 개질은 시점을 기록하여 모니터링하였다. 각 시점에서 수지 슬러리 25 μL를 제거하고, 20 mM의 화합물(B1) 또는 화합물(B2) 1 μL를 첨가한 다음, 튜브를 여러번 튕겼다. 수지를 스핀 다운하고, 상청액을 제거한 다음, 50 μL 항체 용리 완충액(Thermo)으로 용리하였다. 수지를 펠릿화하고, 상청액을 Agilent PLRP-S 4000A 5 um, 4.6 × 50 mm 컬럼을 사용하여 역상 크로마토그래피로 분석하였다(완충액 A는 물, 0.1% TFA, 완충액 B 아세토니트릴, 0.1% TFA, 80℃에서 컬럼 유지, 유속 1.5 ml/분).
항체가 사슬간 이황화 결합을 개질한 것으로 확인되면, 수지를 10 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 수지를 동일한 부피의 PBS에 재현탁하고, DMSO에 있는 8 당량의 링커-페이로드(20 mM)를 첨가한 다음, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음, 수지를 50 컬럼 부피의 PBS로 세척하였다. 항체 용리 완충액을 사용하여 단백질 A 수지에서 ADC를 용리하고, 1/10 부피 1 M Tris pH 9.0으로 중화했다. 그런 다음, ADC를 PBS 또는 다른 적합한 완충액으로 완충액 교환하고, 필요에 따라 응집체를 제거하기 위한 분취 크기 배제 크로마토그래피를 수행하였다(S200 Increase; GE). 모노머 퍼센트를 결정하기 위한 분석 SEC, DAR을 결정하기 위한 질량 분광법, 내독소 부하를 결정하기 위한 LAL 테스트와 같은 분석들을 수행하고, 항체의 소멸 계수 및 분자량을 사용하여 A280에 의해 단백질 농도를 결정하였다.
실시예 5: GNAQ/11 억제제 화합물(A1) 및 화합물(A2)의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성
92.1 포도막 흑색종 및 MIAPACA 췌관 선암종 세포들을 96-웰 플레이트에 낮은 세포 밀도로 시딩하고, 지시된 바와 같이 증가하는 농도의 화합물(A1) 또는 화합물(A2)로 처리하였다. 96 또는 120시간 동안 약물 처리한 후, 레자주린-기반 생존율 분석을 사용하여 세포 생존율 및 증식을 결정했다. 간단히 말해서, 세포를 레자주린-기반 용액과 함께 인큐베이션하고 분광 광도계로 흡광도에 의해 색 변화를 감지하고, 세포 생존율의 판독으로 사용하였다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다. 표 4는 화합물(A2) 및 화합물(A1)에 대한 성장 억제 50%(GI50)를 나타낸다. 화합물(A2) 및 화합물(A1)은 강력한 표적-의존적 항-UM 활성을 나타냈다(도 1).
[표 4]
Figure pct00377
실시예 6: 화합물(A1) 및 화합물(A2)은 포도막 흑색종 세포에서 아폽토시스를 유도한다
92.1 및 MIAPACA 세포를 96-웰 플레이트(웰 당 5000개 세포)에 시딩하고, 증가하는 농도의 화합물(A1), 화합물(A2) 및 고정 용량의 스타우로스포린(100 nM, 양성 대조군)을 다음과 같이 처리하였다. 96에 대한 약물 처리 후, 세포를 형광 염료에 접합된 Annexin V 항체를 사용하여 형광-활성화 유세포분석에 적용하였다. 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다. 화합물(A2) 및 화합물(A1)은 GNAQ/11 의존적 방식으로 UM 세포에서 아폽토시스를 유도하였다(도 2).
실시예 7: 포도막 흑색종 세포에서 화합물(A1) 및 화합물(A2)에 의한 GNAQ/11 억제 분석
92.1 포도막 흑색종을 지시된 바와 같이 증가하는 농도의 화합물(A1) 또는 화합물(A2)로 처리하였다. 하룻밤 동안 약물 처리 후, TR-FRET(시간-분해 형광 공명 에너지 전달)를 사용하여 IP1 수준을 결정하거나 웨스턴-블롯팅에 의해 단백질 수준을 결정하기 위해 세포를 처리하였다. 도 3a는 DMSO(대조군), 화합물(A2) 또는 화합물(A1)로 처리된 92.1 세포에서의 IP1 수준(nM)을 보여준다. 도 3b는 화합물(A1)-처리된 92.1 세포에서 IP1 수준과 상대적 증식 사이의 상관 관계를 보여준다. 도 3c는 ERK 신호 전달에 대한 효과를 결정하기 위해 화합물(A1) 및 화합물(A2)로 처리된 92.1 세포의 면역 블롯을 보여준다.
실시예 8: 화합물(A1)의 대사 안정성 및 PK 특성들
화합물(A1)의 혈장 안정성을 마우스, 래트, 원숭이 및 인간 혈장에서 조사하고, 완충액과 비교하였다. 화합물(A1)의 소실(도 4a)과 화합물(A4)
Figure pct00378
, 화합물(A6)
Figure pct00379
, 또는 화합물(A8)
Figure pct00380
의 구조를 갖는 화합물(A1)의 개환 형태의 출현(도 4b) 모두 24시간 동안 모니터링하였다. 다른 종에 비해 인간 혈장에서 변형이 약간 더 빠른 것 같다. 래트를 제외하고, % 남은 화합물(A1) 및 % 형성된 화합물(A8)을 첨가하면, 24시간에 걸쳐 화학량론을 나타내며, 이는 다른 변형이 중요한 역할을 하지 않는 것으로 보임을 보여준다(도 4c).
마우스에서 정맥 내 투여후 화합물(A1)의 PK는 매우 높은 클리어런스 및 중간 내지 높은 부피의 분포를 특징으로 하였다. 0.2~0.8 mg/kg의 범위에서 용량에 따른 노출의 약간 과-비례하는 증가가 관찰되었다(도 4d). 모든 PK 값을 요약한 표 5는 하기에 개시되어 있다.
[표 5]
Figure pct00381
실시예 9: 화합물(A2)의 대사 안정성 및 PK 특성들
화합물(A2)의 시험관 내 안정성은 다른 종의 혈장 및 혈액에서 테스트되었다(도 5a). 화합물(A2)는 세가지 다른 시스템에서 우수한 화학적 안정성을 나타냈다(도 5b). 암컷 balb/c 마우스에서 화합물(A2)의 PK는 높은 클리어런스와 짧은 제거 반감기를 보여주었다(도 5c). 표 6에는 일부 PK 값이 요약되어 있다. 화합물(A2)는 마우스, 래트 및 인간의 간 마이크로솜에서 높은 고유 클리어런스를 보였지만, 아마도 제한된 막 투과성으로 인해 간세포에서 낮은 클리어런스를 나타냈다(표 7). 간 S9 분획 및 혈장에서 화합물(A2)의 배양은 유사한 반감기를 나타냈다. 화합물(A2) 및 화합물(A1)은 pH 5.6의 완충액과 리소좀에서 4시간에 걸쳐 안정적이었다(도 5d).
[표 6]
Figure pct00382
[표 7]
Figure pct00383
실시예 10: 항-PMEL17-(B1) ADC의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성
부모 및 비-표적 대조군(NT)- 또는 PMEL17-shRNA 형질도입된 92.1 세포를 96-웰 플레이트에 낮은 세포 밀도로 시딩하고, 지시된 대로 독시사이클린의 존재 또는 부재하에 증가하는 농도의 3207-(B1)(이소형 대조군), G4-(B1) 및 G1-(B1)으로 처리하였다. 96 또는 120시간 동안 약물 처리한 후, 레자주린-기반 생존율 분석을 사용하여 세포 생존율 및 증식을 결정했다. 간단히 말해서, 세포를 레자주린-기반 용액과 함께 인큐베이션하고 분광 광도계로 흡광도에 의해 색 변화를 감지하고, 세포 생존율의 판독으로 사용하였다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다(도 6). 항-PMEL17-(B1) ADC는 PMEL17- 및 용량-의존적 방식으로 포도막 흑색종 세포의 증식을 억제한다.
실시예 11: 항-PMEL17-(B1) ADC는 포도막 흑색종 세포에서 아폽토시스를 유도한다
92.1 세포를 96-웰 플레이트(웰 당 5000개 세포)에 시딩하고, 증가하는 농도의 화합물(A1), 3207-(B1)(이소형 대조군), G4-(B1), 및 G1-(B1)로 지시된 대로 처리하였다. 96에 대한 약물 처리 후, 세포를 형광 염료에 접합된 Annexin V 항체를 사용하여 형광-활성화 유세포분석에 적용하였다. 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다. Both G4-(B1)과 G1-(B1) 모두 용량-의존적 방식으로 92.1 세포에서 아폽토시스를 유도하였다(도 7).
실시예 12: 항-PMEL17-(B2) ADC 및 항-PMEL17 mAb의 시험관 내 항-포도막 흑색종 활성
92.1 포도막 흑색종 세포를 96-웰 플레이트에 낮은 세포 밀도로 시딩하고, 지시된대로 증가하는 농도의 3207-(B2)(이소형 대조군), G4-(B2), 및 G1-(B2), 및 항-PMEL17-B1 및 -G4 mAb로 처리하였다. 96 또는 120시간 동안 약물 처리한 후, 레자주린-기반 생존율 분석을 사용하여 세포 생존율 및 증식을 결정했다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다(도 8). 항-PMEL17-(B2) ADC 및 항-PMEL17 mAb는 포도막 흑색종 세포에서 최소한의 항-증식 효과를 나타낸다.
실시예 13: 포도막 흑색종 세포에서 항-PMEL17-(B1) 및 항-PMEL17-(B2) ADC에 의한 GNAQ/11 억제의 분석
92.1 포도막 흑색종을 지시된 대로 DMSO, 화합물(A1)(8 nM) 및 증가하는 농도의 이소형-(B1), 항-PMEL17-(B1) 및 항-PMEL17-(B2) ADC로 처리하였다. 2일 동안 약물 처리 후, TR-FRET(시간-분해 형광 공명 에너지 전달)를 사용하여 IP1 수준을 결정하기 위해 세포를 처리하였다. 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 IP1 수준(nM)이 제시되었다. 감소된 수준의 IP1에서 알 수 있는 바와 같이, G1-(B1) 및 G1-(B2) 모두 용량-의존적 방식으로 돌연변이 GNAQ 및 GNA11을 억제한다(도 9).
실시예 14: 온전한 혈소판 및 포도막 흑색종 세포에 대한 항-PMEL17 항체의 결합 분석
항-PMEL17 항체 G1(흑색 선) 및 G4(회색 선), 및 형광 염료에 접합된 항-인간 IgG 이차 항체 또는 접합된 이차 항체 단독(연회색 선)을 사용하여, 포도막 흑색종 세포주 92.1 및 인간 혈소판 풍부 혈장으로부터 단리된 혈소판(3명의 인간 공여자로부터의 PRP)을 형광-활성화된 유세포분석에 적용하였다(도 10). 92.1 포도막 흑색종 세포와 대조적으로, 인간 혈소판은 PMEL17의 세포 표면 발현을 나타내지 않는다.
실시예 15: 인간 혈소판 응집에 대한 화합물(A1) 및 항-PMEL17-(B1) ADC의 영향
인간 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 ADC 17A9-(B1), B1에 접합된 항-PMEL Ab, 또는 화합물(A1)(0.1, 1, 및 150 nM)과 함께 4, 16 또는 24시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음, 32 uM의 트롬빈 수용체 활성화 펩티드 6(TRAP6)으로 처리한 후 혈소판 응집을 측정하였다. 화합물(A1)은 혈소판 응집을 유도한 반면, 항-PMEL17-(B1)은 최대 24시간까지 혈소판 응집을 유도하지 않았다(도 11).
실시예 16: 마우스 모델에서 항-PMEL17-(B1) ADC는 종양 성장을 억제한다
92.1-루시페라제 피하 이종이식편을 보유한 암컷 누드 마우스를 3207-(B1), G1-(B1) 또는 비히클을 표시된 용량으로 단일 정맥내 주사하여 처리하였다. 치료(단일 용량 정맥내 주사)는 종양 접종 후 17일에 수행되었다. 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~12마리의 마우스). 0일차에 초기 종양 부피는 대략 200~250 mm3이었다. G1-(B1)는 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 억제하였다(도 12a).
G1-(B1)로 처리한 후 암컷 나이브 누드 마우스의 체중 변화를 지시된 용량으로 모니터링하였다. 치료(단일 용량 정맥내 주사)는 0일에 수행되었다. 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=4마리의 마우스). 0일에 초기 체중은 약 24 g이었다. 약물 치료 후 14일 동안 매일 체중을 측정하였다. 치료 후 최대 14일 동안 체중 감소가 관찰되지 않았다(도 12b).
비히클, 3207-(B1)(7.5 mg/kg 체중), 또는 G1-(B1)(7.5 mg/kg 체중)으로 처리된 92.1-루시퍼라제 피하 이종이식편으로부터 종양 조직의 면역조직화학적 분석을 수행하였다. 종양을 10%(vol/vol) 중성 완충 포르말린에 실온에서 24시간 동안 고정한 다음, PBS로 세정하고, 탈수를 위해 처리하고, 클리어링하고, 파라핀에 포매하였다. 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색 및 면역조직화학을 위해 3 μm 섹션을 준비하고 처리했다. 항-hIgG(ThermoFischer) 및 항-gp100 (PMEL17)(클론 EP4863; Abcam) 염색을 위한 Bond-RX(Leica) 완전 자동화 시스템, 및 항-Ki67(클론 Sp6; NeoMarkers), 항-pERK1/2(클론 D13.14.4E; 세포 신호전달), 항-MITF(Sigma) 및 항-제거된 카스파제-3(세포 신호전달) 염색을 위한 Discovery XT(Ventana Medical System) 완전 자동화 시스템을 사용하여, 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 조직 섹션 상에서 면역조직화학 염색을 수행하였다. 간단히 말해서, G1-(B1) 처리는 각각 감소된 수준의 pERK 및 Ki67에 의해 나타난 바와 같이 GNAQ 신호전달 억제 및 종양 세포 증식 억제를 초래하였다(도 12c). 또한, G1-(B1)은 비히클- 및 3207-(B1)-처리된 마우스와 비교하여 세포 아포톱시스를 유도하였으며, 이는 IgG 염색에 의해 검출된 바와 같은 G1-(B1) ADC의 종양 세포 축적과 상관관계가 있다(도 12c). G1-(A1) 처리 후 MITF 및 PMEL17 수준에서는 변화가 관찰되지 않았다(도 12c).
비히클, G1-(B1)(20 mg/kg 체중), 또는 화합물(A1)(0.01, 0.03, 0.1, 및 0.3 mg/kg 체중)으로 처리된 나이브 마우스의 전혈 혈소판 응집을 테스트하였다. 동물을 단일 정맥내 투여후 5분 후에 안락사시키고, 대정맥을 통해 혈액을 수집하였다. 1시간 후, 6.5 uM의 ADP로 혈소판 활성화후 전혈 응집을 측정하였다(도 12d). 화합물(A1)과 대조적으로, G1-(B1)은 생체 내 ADP-유도된 혈소판 응집에 임의의 유의한 영향을 미치지 않았다.
투여후 24시간 또는 7일에 비히클 및 G1-(B1)(7.5 및 30 mg/kg 체중)으로 처리된 나이브 마우스의 전혈 혈소판 응집을 측정하였다. 마우스를 단일 정맥내 투여후 24시간 또는 7일 후에 안락사시키고, 대정맥을 통해 혈액을 수집하였다. 1시간 후, 6.5 uM의 ADP로 혈소판 활성화후 전혈 응집을 측정하였다. 최대 7일 동안 G1-(B1) 처리된 마우스에서 혈소판 응집 억제가 관찰되지 않았다(도 12e).
실시예 17: 포도막 흑색종의 간 및 폐 전이 마우스 모델에 대한 G1-(B1)의 효과
암컷 NOD-Scid 마우스에 92.1-루시페라제 세포(동물 당 약 2백만개의 세포)를 정맥내 주사하고, 생물발광을 주 2회 측정하여 종양 형성을 평가하였다. 45일후, 모든 주사된 마우스는 생물발광 신호(BLI)에 의해 검출된 바와 같이 간 및 폐 전이가 발생했다(도 13a 및 13b). 종양 보유 마우스를 G1-(B1)(20 mg/kg 체중)의 단일 정맥내 주사에 의해 처리하고, 종양 진행의 판독으로 시간이 지남에 따라 생물 발광을 모니터링하였다. 각 마우스의 개별 사진은 92.1-루시퍼라제 세포를 정맥내 주사후 45일 후(치료 시작 직전) 및 치료후 12일 후에 제공된다(도 13a 및 13b); 샘플 크기, (그룹 당 n=6마리의 마우스). 0일차에 간 전이에 대한 초기 BLI는 대략 2.8 *109 p/sec/cm2이었다. 도 13b의 폐 종양(생체발광 신호)은 검정색 화살표로 표시된다. 감소된 생체 내 및 생체 외 생물발광으로 나타낸 바와 같이, G1-(B1)은 20 mg/kg의 단일정맥내 투여 후 간 및 폐 전이의 퇴행을 유도했다.
상응하는 체중 조절(% 대 15일)을 G1-(B1) 20 mg/kg(회색 원)으로 처리 전 및 처리 후 2~3회 평가하였다. 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~6마리의 마우스). 15일차의 초기 체중은 대략 21 g이었다. G1-(B1) 치료는 포도막 흑색종의 간 및 폐 전이 모델에서 체중 회복을 초래하였다.
실시예 18: G1-(B1) ADC의 PK 특성들.
G1-(B1)의 약동학적 프로파일은 누드 마우스에서 7.5 ~ 30 mg/kg의 용량으로 노출이 약간 과도하게 증가하는 것을 보여주었다(도 14a). 클리어런스, 분배 부피 및 반감기는 ADC의 일반적인 범위에 있다. 표 8에는 일부 PK 값이 요약되어 있다.
종양 보유 마우스에서, 표적 결합 G1-(B1) 또는 이소타입 대조군 3207-(B1)을 투여한 후 유리 페이로드 농도를 측정하였다. 표적화된 ADC를 사용하여 화합물(A1)페이로드의 종양 전달의 명확한(>4배) 증가를 관찰할 수 있었다(도 14b). 항체에 접합되는 동안 화합물(A1)(개방 원)의 화합물(A4)
Figure pct00384
, 화합물(A6)
Figure pct00385
, 또는 화합물(A8)
Figure pct00386
의 구조를 갖는, 그의 개환 형태 화합물(A1)(채워진 원)로의 전환은 마우스에서 생체 내에서 보여졌다(도 14c). 2개의 상이한 DAR2 형식을 G1-(B1)의 DAR4 형식 및 DAR4 Fc-침묵 형식과 비교한 생체 내 효능 연구에서 노출은 DAR2(E152C) 및 DAR4 Fc-침묵 ADC에 대해 가장 낮은 클리어런스를 나타낸 반면, DAR2(S375C) 노출은 더 빨리 감소한다(도 14d). 비-표적화된 3207-ADC(도 14e)의 PK를 비교함으로써, Fc-침묵이 DAR4 형식의 클리어런스를 낮추는 데 상당한 영향을 미친다는 것을 추론할 수 있다.
[표 8]
Figure pct00387
실시예 19: 완충액, 마우스, 래트, 및 인간 혈장의 항-PMEL17-GNAQ/11i ADC의 시험관 내 안정성 및 마우스의 항-PMEL17-GNAQ/11i ADC의 생체 내 안정성
항-PMEL17G1_E152C_S375C_(B2)(G1-(B2))를 각각의 매트릭스에 100 μg/mL로 스파이크하고, 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플을 0, 1, 2, 및 4시간에 -70℃에서 급속 동결하여 수집하였다. 각 샘플의 분취량을 Capture Select FcXL 비드를 사용하여 면역-침전시키고, 파파인을 함유하는 완충액과 함께 인큐베이션하여 비드 포획 ADC로부터 페이로드를 방출했다. 그런 다음, 방출된 페이로드를 HPLC MS로 분석하여, 화합물(A2)-PO4(즉
Figure pct00388
로부터
Figure pct00389
실시예 1.2 참조), 및 화합물(A5)-PO4 (즉, 화합물(A5)-PO4,
Figure pct00390
로부터
Figure pct00391
), 화합물(A7)-PO4,
Figure pct00392
또는 화합물(A9)-PO4,
Figure pct00393
, (여기서, 개환 화합물(A2)-PO4 - 비활성 페이로드)의 구조를 갖는 개환 화합물(A2)-PO4의 상대 수준을 결정하였다. 그래프는 실험 시간과정 동안 화합물(A2)-PO4로 존재하는 방출된 페이로드의 백분율을 나타낸다(도 15a).
항-PMEL17G1_E152C_S375C_(B1)(G1-(B1)), 항-PMEL17G1_E152C_(B1)(G1-E152C-DAR2-(B1)), 항-PMEL17G1_S375C_(B1)(G1-S375C-DAR2-(B1)), 및 Fc-침묵 항-PMEL17G1_E152C_S375C_(B1)(Fc-침묵 G1-(B1))을 각각의 매트릭스에 100 μg/mL로 스파이크하고 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플을 0, 2, 4, 및 6시간에 -70℃에서 급속 동결하여 수집하였다. 각 샘플의 분취량을 Capture Select FcXL 비드를 사용하여 면역-침전시키고, 파파인을 함유하는 완충액과 함께 인큐베이션하여 비드 포획 ADC로부터 페이로드를 방출했다. 그런 다음, 방출된 페이로드를 HPLC MS로 분석하여, 화합물(A1)-PO4,
Figure pct00394
, 및 화합물(A4)-PO4,
Figure pct00395
, 화합물(A6)-PO4,
Figure pct00396
, 또는 화합물(A8)-PO4,
Figure pct00397
의 구조를 갖는, 개환 화합물(A1)-PO4(여기서, 화합물(A1)-PO4,
Figure pct00398
의 개환 화합물은 -비활성 페이로드임)의 상대 수준을 결정하였다. 그래프는 상이한 ADC 작제물들의 각각에 대한 실험 시간과정 동안 화합물(A1)-PO4로 존재하는 방출된 페이로드의 백분율을 나타낸다(도 15b).
항-PMEL17G1_E152C_S375C_(B1)(G1-(B1)), 항-PMEL17G1_E152C_(B1)(G1-E152C-DAR2-(B1)), 항-PMEL17G1_S375C_(B1)(G1-S375C-DAR2-(B1)), 및 Fc-침묵 항-PMEL17G1_E152C_S375C_(B1)(Fc-침묵 G1- (B1))를 각각 누드 마우스에 20 mg/kg(체중)으로 정맥내 주사하였다. 상기 기재된 ADC 작제물 각각을 9마리 마우스에 투여하였다. 그룹 당 3마리의 동물들(ADC 작제물)을 최종 채열하여, 투여후 24시간, 7일, 및 14일에 분석을 위해 혈청 샘플을 수집하였다. 각 샘플의 분취량을 Capture Select FcXL 비드를 사용하여 면역-침전시키고, 파파인을 함유하는 완충액과 함께 인큐베이션하여 비드 포획 ADC로부터 페이로드를 방출했다. 그런 다음, 방출된 페이로드를 HPLC MS로 분석하여, 화합물(A1)-PO4,
Figure pct00399
, 및 화합물(A4)-PO4,
Figure pct00400
, 화합물(A6)-PO4,
Figure pct00401
, 또는 화합물(A8)-PO4,
Figure pct00402
의 구조를 갖는, 개환 화합물(A1)-PO4(여기서, 화합물(A1)-PO4의 개환 화합물은 비활성 페이로드임)의 상대 수준을 결정하였다. 그래프는 활성 형태의 화합물(A1)-PO4에서 ADC에 존재하는 페이로드의 백분율을 보여준다(화합물(A1)-PO4 + 화합물(A8)-PO4 = 100%라고 가정함)(도 15c). 초기 값은 시험관 내 실험 결과를 기반으로 추정되었다.
실시예 20: 포도막 흑색종의 이종이식 모델에서 G1-E152C-DAR2-(B1), G1-S375C-DAR2-(B1), Fc-침묵 G1-(B1)의 생체 내 효능
92.1-루시페라제 피하 이종이식편을 보유하는 암컷 누드 마우스를 7.5 mg/kg의 3207-E152C_S375C-DAR4-(B1), G1-E152C_S375C-DAR4-(B1), G1-E152C-DAR2-(B1), G1-S375C-DAR2-(B1), Fc-침묵 3207-(B1), 및 Fc-침묵 G1-DAR4로 치료하였다. 치료(단일 용량 정맥내 주사)는 종양 접종 후 17일에 수행되었다. 값은 평균 ± SEM을 나타내며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~6마리의 마우스). 0일차에 초기 종양 부피는 대략 300~325 mm3이었다. (도 16). G1-E152C-DAR2-(B1), Fc-침묵 G1-DAR4, 및 G1-E152C_S375C-DAR4-(B1)은 포도막 흑색종의 92.1 이종이식 모델에서 유사한 항종양 활성을 나타내는 반면, G1-S375C-DAR2-(B1) 및 비-표적화 3207-ADC는 종양 성장에 영향을 미치지 않는다.
실시예 21: G1-3J-DAR4-(B1), G1-3R-DAR4-(B1), G1-DAR4-(B1), G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1), Fc 침묵 G1-3J -DAR2 (E152C)-(B1), 3207-DAR2 (E152C)-(B1), 및 G1-DAR2 (E152C)-(B1)의 시험관 내 활성
도 17a에서, 92.1(왼쪽 패널) 및 MP41(오른쪽 패널) 세포들을 96-웰 플레이트에 낮은 세포 밀도로 시딩하고, 지시된 대로 증가하는 농도의 G1-3J-DAR4-(B1), G1-3R-DAR4-(B1), G1-DAR4-(B1)로 처리하였다. 96 또는 120시간 동안 약물 처리한 후, 레자주린-기반 생존율 분석을 사용하여 세포 생존율 및 증식을 결정했다. 간단히 말해서, 세포를 레자주린-기반 용액과 함께 인큐베이션하고 분광 광도계로 흡광도에 의해 색 변화를 감지하고, 세포 생존율의 판독으로 사용하였다. PBS-처리된 세포들(대조군)과 비교하여 3개의 독립적인 복제의 평균으로서 데이터가 제시되었다. 각 ADC 및 세포주에 대한 GI50(세포 증식의 최대 억제의 50%에 대한 농도) 값은 표 9에 개시되어 있다. 항-PMEL17-(B1) ADC는 PMEL17- 및 용량-의존적 방식으로 포도막 흑색종 세포의 증식을 억제한다.
[표 9]
Figure pct00403
도 17b는 도 17a에 기재된 바와 같이, G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1), Fc 침묵 G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1), 3207-DAR2 (E152C)-(B1), 및 G1-DAR2 (E152C)-(B1)에 의한 92.1 세포주에서 세포 증식 분석 결과를 도시한다. GI50은 표 10에 도시되어 있다.
[표 10]
Figure pct00404
실시예 22: 마우스 모델에서 항-PMEL17-(B1) ADC는 종양 성장을 억제한다
92.1-루시페라제 피하 이종이식편을 보유한 암컷 누드 마우스를 3207-(B1), G1-3J(E152C), G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1), Fc 침묵 G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1), G1-DAR2 (E152C)-(B1) 또는 비히클을 표시된 용량으로 단일 정맥내 주사하여 처리하였다. 치료(단일 용량 정맥내 주사)는 종양 접종 후 14~17일에 수행되었다. 값은 평균 ± SEM이며; 샘플 크기, (그룹 당 n=5~12마리의 마우스). 0일차에 초기 종양 부피는 대략 200~250 mm3이었다. G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1) 및 Fc 침묵 G1-3J-DAR2 (E152C)-(B1)은 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 억제하였다(도 18).
실시예 23: 전이성 포도막 흑색종 환자의 종양 생검의 면역조직화학적 분석
종양을 10%(vol/vol) 중성 완충 포르말린에 실온에서 24시간 동안 고정한 다음, PBS로 세정하고, 탈수를 위해 처리하고, 클리어링하고, 파라핀에 포매하였다. 3 μm 섹션을 준비하고 면역조직화학을 위해 처리하였다. 항-gp100(PMEL17)(마우스 단일클론 HMB45) 염색을 위한 Bond-RX (Leica) 완전 자동화 시스템을 사용하여, 포르말린-고정된, 파라핀-포매된 조직 섹션 상에서 면역조직화학 염색을 수행하였다. 전이성 포도막 흑색종 샘플은 PMEL17의 높고 비교적 균질한 발현을 나타낸다(도 19a). 전이성 포도막 흑색종 환자 샘플에서 PMEL17 발현 수준의 정량화 및 PMEL17 양성 세포의 비율(도 19b, 도 19c).
실시예 24: 경쟁적 결합 분석
SPR은 T200 Biacore 기기(카탈로그 #28975001, GE Healthcare Life Sciences) 상에서 항-PMEL 항체에 대한 에피토프 비닝을 평가하는 데 사용되었다.
표면 플라스몬 공명(SPR)은 라벨이 없는 환경에서 실시간으로 이분자 상호작용을 측정하는 기술이다. 분자는 샘플 용액이 흐르는 센서 표면에 고정된다. 고정된 분자와 흐르는 샘플 사이의 상호작용은 굴절률 변화를 일으킨다. 굴절률 변화는 감소된 강도의 편광이 지지 유리면에서 반사되는 각도의 변화이다. 이 각도 변화는 센서 표면에서 분자의 결합 또는 해리로 인해 발생하며, 결합된 물질의 질량에 비례하며, 기기에 의해 센서그램에 기록된다. 센서그램은 분자가 상호 작용함에 따라 증가하는 반응을 보여주고, 상호작용이 평형에 도달하면 반응은 일정하게 유지되며, 샘플이 완충액으로 대체되고 상호작용 파트너가 해리됨에 따라 반응이 감소한다. 결합 및 해리 이벤트 반응으로부터, 결합율(ka), 해리율(kd) 및 전체 친화도(KD)가 결정된다. 에피토프 비닝의 경우, KD는 결정되지 않는다.
제1 단계에서, 아민 커플링을 통해 G1 LC 3J 및 17A9 항체를 CM5 칩 표면 상에 직접 고정시켜 Fc2 및 Fc3에 각각 대략 2000Ru를 달성하였다. 플로우 셀 1에는 항체가 고정되지 않았으며, 참조 Fc로 사용되었다. Fc2 및 Fc3에 고정된 항체는 실험에서 염기 항체이다.
고정화 후, 인간 PMEL은 제2 단계에서 모든 플로우 셀에 대해 20 nM에서 30 ul/분으로 60초 동안 주위로 유동되었다.
제3 및 최종 단계는 G1 LC 3J 항체 단독 또는 G1 LC 3J 항체 + Fc2 위에 유동하는 17A9 항체 또는 17A9 항체 단독 또는 17A9 항체 + Fc3 위에 유동하는 G1 LC 3J 항체를 갖는다(도 20a). 항체는 결합을 위해 30 ul/분에서 120초 동안 두 플로우 셀에 걸쳐 총 500 nM 농도로 유동하여 넘치고, 이어서 실행 완충액을 사용하여 30 ul/분에서 120초의 해리 단계가 이어졌다.
예상대로, G1 LC 3J가 염기 항체인 경우, G13J가 유동하여 넘쳤을때 빙잉(binging) 신호가 관찰되지 않았다. 17A9가 유동하여 넘쳤을때 100RU 결합이 관찰되었으며, 이는 G1 LC 3J와 상이한 에피토프에 결합함을 시사한다(도 20b). 17A9가 염기 항체 항체일 때 유사한 경향이 관찰되었다. 단계 3에서, 그 자체로는 결합이 관찰되지 않았지만, G1 LC 3J가 유동하여 넘쳤을때 결합이 관찰되었다(도 20c). 이것은 G1 LC 3J 및 17A9가 서로 다른 에피토프에 결합함을 나타낸다.
재생은 모든 플로우 셀에서 각 사이클이 끝날 때 수행되었다. 재생 완충액은 Glycine 2.0이며, 이는 30 μl/분으로 30 초 동안 유동한다.
데이터는 Biacore T200 평가 소프트웨어 버전 3.0을 사용하여 분석하였다.
본원에 기술된 실시예 및 구현예가 오직 예시적인 목적을 위한 것이고, 이의 견지에서 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 제안될 것이고, 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함됨이 이해된다.
SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> ANTIBODIES TO PMEL17 AND CONJUGATES THEREOF <130> PAT058359-WO-PCT <140> <141> <150> 62/803,110 <151> 2019-02-08 <150> 62/783,565 <151> 2018-12-21 <160> 282 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr Ala Ile Thr 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Glu Gly Gly Leu Leu Thr Asp Ile Ser Tyr Ser Arg Tyr Trp Phe Ala 1 5 10 15 Tyr <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Asp Tyr Ala Ile Thr 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 5 Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 1 5 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 6 Ile Pro Ile Phe Gly Thr 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 7 Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr Ala 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 8 Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala 1 5 <210> 9 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 9 Ala Arg Glu Gly Gly Leu Leu Thr Asp Ile Ser Tyr Ser Arg Tyr Trp 1 5 10 15 Phe Ala Tyr <210> 10 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Leu Leu Thr Asp Ile Ser Tyr Ser Arg Tyr Trp 100 105 110 Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 11 <211> 378 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 11 caggtgcaat tggtgcagag cggtgccgaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtt 60 agctgcaaag catccggagg gacgttttct gactacgcta tcacttgggt gcgccaggcc 120 ccgggccagg gcctcgagtg gatgggcggt atcatcccga tcttcggcac tgcgaactac 180 gcccagaaat ttcagggccg ggtgaccatt accgccgatg aaagcaccag caccgcctat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaaggt 300 ggtctgctga ctgacatctc ttactctcgt tactggttcg cttactgggg ccaaggcacc 360 ctggtgactg ttagctca 378 <210> 12 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Leu Leu Thr Asp Ile Ser Tyr Ser Arg Tyr Trp 100 105 110 Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 130 135 140 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 145 150 155 160 Cys Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170 175 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 180 185 190 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 195 200 205 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 210 215 220 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 225 230 235 240 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 245 250 255 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 260 265 270 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 275 280 285 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 290 295 300 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 305 310 315 320 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 325 330 335 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 340 345 350 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 355 360 365 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys 370 375 380 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 385 390 395 400 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 405 410 415 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 420 425 430 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 13 <211> 1368 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 13 caggtgcaat tggtgcagag cggtgccgaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtt 60 agctgcaaag catccggagg gacgttttct gactacgcta tcacttgggt gcgccaggcc 120 ccgggccagg gcctcgagtg gatgggcggt atcatcccga tcttcggcac tgcgaactac 180 gcccagaaat ttcagggccg ggtgaccatt accgccgatg aaagcaccag caccgcctat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaaggt 300 ggtctgctga ctgacatctc ttactctcgt tactggttcg cttactgggg ccaaggcacc 360 ctggtgactg ttagctcagc tagcaccaag ggcccaagtg tgtttcccct ggcccccagc 420 agcaagtcta cttccggcgg aactgctgcc ctgggttgcc tggtgaagga ctacttcccc 480 tgtcccgtga cagtgtcctg gaactctggg gctctgactt ccggcgtgca caccttcccc 540 gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtgacagt gccctccagc 600 tctctgggaa cccagaccta tatctgcaac gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg 660 gacaagagag tggagcccaa gagctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgcccagct 720 ccagaactgc tgggagggcc ttccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg 780 atgatcagca ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca 840 gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc 900 agagaggagc agtacaacag cacctacagg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag 960 gactggctga acggcaaaga atacaagtgc aaagtctcca acaaggccct gccagcccca 1020 atcgaaaaga caatcagcaa ggccaagggc cagccacggg agccccaggt gtacaccctg 1080 ccccccagcc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc 1140 ttctacccct gtgatatcgc cgtggagtgg gagagcaacg gccagcccga gaacaactac 1200 aagaccaccc ccccagtgct ggacagcgac ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc 1260 gtggacaagt ccaggtggca gcagggcaac gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc 1320 ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg agcctgagcc ccggcaag 1368 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val Tyr 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 15 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 16 Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu Val Val 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 17 Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe 1 5 <210> 18 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 18 Asp Asp Asn 1 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 19 Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu Val 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 20 Ala Leu Arg Asp Lys Phe 1 5 <210> 21 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 21 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 22 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 22 gatatcgaac tgacccagcc gccgagcgtg agcgtgagcc cgggccagac cgcgagcatt 60 acctgtagcg gcgatgctct gcgtgacaaa ttcgtttact ggtaccagca gaaaccgggc 120 caggcgccgg tgctggtgat ctacgacgac aacaaccgtc cgagcggcat cccggaacgt 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac ccaggcggaa 240 gacgaagcgg attattactg ccagtcttgg gaccattctt actctctggt tgtgtttggc 300 ggcggcacga agttaactgt cctg 324 <210> 23 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 23 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 24 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 24 gatatcgaac tgacccagcc gccgagcgtg agcgtgagcc cgggccagac cgcgagcatt 60 acctgtagcg gcgatgctct gcgtgacaaa ttcgtttact ggtaccagca gaaaccgggc 120 caggcgccgg tgctggtgat ctacgacgac aacaaccgtc cgagcggcat cccggaacgt 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac ccaggcggaa 240 gacgaagcgg attattactg ccagtcttgg gaccattctt actctctggt tgtgtttggc 300 ggcggcacga agttaactgt cctgggacaa cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 ccccccagct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtgtgcct gatcagcgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gcagccccgt gaaggccggc 480 gtggagacaa ccacccccag caagcagagc aacaacaagt acgccgccag cagctacctg 540 agcctgaccc ccgagcagtg gaagagccac agaagctaca gctgccaggt cacccacgag 600 ggcagcaccg tggagaaaac cgtggccccc accgagtgca gc 642 <210> 25 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 25 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 26 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 26 agctacgagc tgacccagcc gctgtcggtg tcagtcgccc tgggacaaac tgccaggatc 60 acttgttccg gggacgcatt gcgggacaag ttcgtgtact ggtaccagca gaagccgggt 120 caagccccag tgctcgtgat ctacgacgac aacaaccggc cttccggtat ccccgaacgc 180 ttctccggat ccaatagcgg aaacaccgcc accctgacca tttcgagagc tcaggccggg 240 gatgaagcgg actactactg ccagtcatgg gatcactcgt actccctcgt cgtgtttgga 300 ggcggcacga agcttactgt gctg 324 <210> 27 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 27 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 28 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 28 agctacgagc tgacccagcc gctgtcggtg tcagtcgccc tgggacaaac tgccaggatc 60 acttgttccg gggacgcatt gcgggacaag ttcgtgtact ggtaccagca gaagccgggt 120 caagccccag tgctcgtgat ctacgacgac aacaaccggc cttccggtat ccccgaacgc 180 ttctccggat ccaatagcgg aaacaccgcc accctgacca tttcgagagc tcaggccggg 240 gatgaagcgg actactactg ccagtcatgg gatcactcgt actccctcgt cgtgtttgga 300 ggcggcacga agcttactgt gctgggccag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 ccccccagct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtgtgcct gatcagcgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gcagccccgt gaaggccggc 480 gtggagacaa ccacccccag caagcagagc aacaacaagt acgccgccag cagctacctg 540 agcctgaccc ccgagcagtg gaagagccac agaagctaca gctgccaggt cacccacgag 600 ggcagcaccg tggagaaaac cgtggccccc accgagtgca gc 642 <210> 29 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 29 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 30 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 30 tcgtacgagc tcactcaacc gccttctgtg tccgtgtcac ccgggcagac tgcctccatt 60 acctgttcgg gagatgccct gcgcgacaag tttgtgtact ggtaccagca gaagcccgga 120 cagtcgccag tgctcgtcat ctatgacgac aacaacagac cttccggtat cccggaacgg 180 ttcagcggaa gcaattccgg caacaccgct accctgacca ttagcggcac tcaggccatg 240 gacgaagcgg attactactg ccaatcctgg gaccactcat actcccttgt ggtgttcggt 300 ggcggaacga agctgaccgt cctg 324 <210> 31 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 31 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Asp Lys Phe Val 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp His Ser Tyr Ser Leu 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 32 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 32 tcgtacgagc tcactcaacc gccttctgtg tccgtgtcac ccgggcagac tgcctccatt 60 acctgttcgg gagatgccct gcgcgacaag tttgtgtact ggtaccagca gaagcccgga 120 cagtcgccag tgctcgtcat ctatgacgac aacaacagac cttccggtat cccggaacgg 180 ttcagcggaa gcaattccgg caacaccgct accctgacca ttagcggcac tcaggccatg 240 gacgaagcgg attactactg ccaatcctgg gaccactcat actcccttgt ggtgttcggt 300 ggcggaacga agctgaccgt cctgggccag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 ccccccagct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtgtgcct gatcagcgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gcagccccgt gaaggccggc 480 gtggagacaa ccacccccag caagcagagc aacaacaagt acgccgccag cagctacctg 540 agcctgaccc ccgagcagtg gaagagccac agaagctaca gctgccaggt cacccacgag 600 ggcagcaccg tggagaaaac cgtggccccc accgagtgca gc 642 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 33 Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Ile Ser 1 5 10 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 34 Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 35 Glu Val Arg Met Ile Phe Asp Tyr 1 5 <210> 36 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 36 Thr Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 37 Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 38 Ile Pro Ile Leu Gly Ile 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 39 Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ala 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 40 Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala 1 5 <210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 41 Ala Arg Glu Val Arg Met Ile Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 42 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Met Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 43 caggtgcaat tggtgcagag cggtgccgaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtt 60 agctgcaaag catccggagg gacgttttct acttacgcta tctcttgggt gcgccaggcc 120 ccgggccagg gcctcgagtg gatgggccgt atcatcccga tcctgggcat cgcgaactac 180 gcccagaaat ttcagggccg ggtgaccatt accgccgatg aaagcaccag caccgcctat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaagtt 300 cgtatgatct tcgattactg gggccaaggc accctggtga ctgttagctc a 351 <210> 44 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 44 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Val Arg Met Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 45 <211> 1341 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 45 caggtgcaat tggtgcagag cggtgccgaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtt 60 agctgcaaag catccggagg gacgttttct acttacgcta tctcttgggt gcgccaggcc 120 ccgggccagg gcctcgagtg gatgggccgt atcatcccga tcctgggcat cgcgaactac 180 gcccagaaat ttcagggccg ggtgaccatt accgccgatg aaagcaccag caccgcctat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaagtt 300 cgtatgatct tcgattactg gggccaaggc accctggtga ctgttagctc agcctctacg 360 aaaggcccaa gcgtatttcc cctggctcct tctagtaaat caacctcagg tggtacagca 420 gcccttggct gcctggtcaa agactatttc ccctgtccgg tgaccgtctc atggaactca 480 ggtgctttga catctggtgt gcatacattc ccagctgtgc tgcaaagtag tggactgtac 540 agcctttcca gcgtggtcac ggtgccaagt agctccttgg gtactcagac ttatatctgc 600 aatgtgaacc acaagccctc taacacgaag gtggacaagc gcgtggagcc caaatcttgc 660 gataagacgc atacttgtcc cccatgccct gctcctgagc tgttgggagg cccgtcagtg 720 ttcttgttcc ctccgaagcc taaggacact ttgatgataa gtaggacacc agaggtgact 780 tgcgtggtgg ttgatgtgtc ccatgaagat cccgaggtca aatttaattg gtacgtagat 840 ggtgtcgaag ttcacaatgc taagactaag ccaagggaag agcagtacaa cagtacatat 900 agggtagtct ccgtgctgac agtcctccac caggactggt tgaacggcaa ggaatacaaa 960 tgtaaggtgt caaacaaagc tctgcctgct cccattgaga aaacaatctc taaagccaaa 1020 ggccagccga gagagcccca agtctacact ttgcccccga gcagggagga aatgaccaag 1080 aatcaggtga gtctgacgtg cctcgtcaaa ggattttatc catgcgatat tgcagttgaa 1140 tgggagagca atggccagcc agagaacaac tataaaacca caccacccgt gctcgactct 1200 gatggcagct tcttcctcta tagcaagctg acagtcgata aatctcgctg gcagcaaggc 1260 aatgtgttct cctgctccgt catgcacgag gctttgcata accattatac tcaaaaatct 1320 ctgtccctgt cacctggtaa a 1341 <210> 46 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 46 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 47 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 48 Gln Gln Ser Tyr Asp Tyr Tyr Thr 1 5 <210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 49 Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 1 5 <210> 50 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 50 Ala Ala Ser 1 <210> 51 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 51 Ser Tyr Asp Tyr Tyr 1 5 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 52 Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 1 5 <210> 53 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 53 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Tyr Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 54 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 54 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgca gagccagcca gtctatttct tcttacctgg cttggtacca gcagaaaccg 120 ggcaaagcgc cgaaactatt aatctacgct gcttcttctc tgcaaagcgg cgtgccgagc 180 cgctttagcg gcagcggatc cggcaccgat ttcaccctga ccattagctc tctgcaaccg 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tcttacgact actacacctt tggccagggc 300 acgaaagttg aaattaaa 318 <210> 55 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 55 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Tyr Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 56 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 56 gatatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tcgcgtgacc 60 attacctgca gagccagcca gtctatttct tcttacctgg cttggtacca gcagaaaccg 120 ggcaaagcgc cgaaactatt aatctacgct gcttcttctc tgcaaagcgg cgtgccgagc 180 cgctttagcg gcagcggatc cggcaccgat ttcaccctga ccattagctc tctgcaaccg 240 gaagactttg cgacctatta ttgccagcag tcttacgact actacacctt tggccagggc 300 acgaaagttg aaattaaacg tacggtggca gctccgtctg ttttcatctt tccacctagc 360 gacgagcaac tcaaaagtgg tacagcatcc gtggtttgtc tgctgaacaa tttttacccc 420 agggaggcta aggtccagtg gaaagtcgat aacgctcttc agtctggcaa cagtcaggag 480 agcgtcacag agcaggactc taaggatagc acttatagtc tgtcctccac gctgacactg 540 tctaaagcgg attatgagaa gcacaaggtt tacgcctgtg aggtaacgca ccaaggactc 600 tcctccccag ttaccaaatc tttcaacaga ggagaatgt 639 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 57 Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr Ala Ile Ser 1 5 10 <210> 58 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 58 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 59 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Glu Gly Ser Ser Tyr Phe Tyr Met Ala Tyr 1 5 10 <210> 60 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 60 Asp Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 61 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 61 Ile Pro Ile Phe Gly Asp 1 5 <210> 62 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 62 Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asp Ala 1 5 <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 63 Ala Arg Glu Gly Ser Ser Tyr Phe Tyr Met Ala Tyr 1 5 10 <210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 64 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Ser Tyr Phe Tyr Met Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 65 caggttcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaaag caagcggcgg caccttcagc gattacgcca tctcttgggt ccgacaggcc 120 cctggacaag gcttggaatg gatgggcggc atcatcccca tcttcggcga cgccaattac 180 gcccagaaat tccagggcag agtgaccatc accgccgacg agtctacaag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagagagggc 300 agcagctact tctacatggc ctattggggc cagggcaccc tggtcacagt tagctct 357 <210> 66 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asp Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ser Ser Tyr Phe Tyr Met Ala Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 67 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 67 caggttcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcagcag cgtgaaggtg 60 tcctgcaaag caagcggcgg caccttcagc gattacgcca tctcttgggt ccgacaggcc 120 cctggacaag gcttggaatg gatgggcggc atcatcccca tcttcggcga cgccaattac 180 gcccagaaat tccagggcag agtgaccatc accgccgacg agtctacaag caccgcctac 240 atggaactga gcagcctgag aagcgaggac accgccgtgt actactgtgc cagagagggc 300 agcagctact tctacatggc ctattggggc cagggcaccc tggtcacagt tagctctgct 360 agcaccaagg gcccaagtgt gtttcccctg gcccccagca gcaagtctac ttccggcgga 420 actgctgccc tgggttgcct ggtgaaggac tacttcccct gtcccgtgac agtgtcctgg 480 aactctgggg ctctgacttc cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540 ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgacagtg ccctccagct ctctgggaac ccagacctat 600 atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt ggagcccaag 660 agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgcccagctc cagaactgct gggagggcct 720 tccgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag gacccccgag 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccag aggtgaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gagaggagca gtacaacagc 900 acctacaggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagaa 960 tacaagtgca aagtctccaa caaggccctg ccagccccaa tcgaaaagac aatcagcaag 1020 gccaagggcc agccacggga gccccaggtg tacaccctgc cccccagccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtgaagggct tctacccctg tgatatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc cccagtgctg 1200 gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc caggtggcag 1260 cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctga gcctgagccc cggcaag 1347 <210> 68 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 68 Ser Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 10 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 69 Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 70 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 70 Ala Ala Thr Ala Gly Asp Arg Trp Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 71 Asp Asn Ile Gly Ser Lys Leu 1 5 <210> 72 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 72 Asp Asp Ser 1 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 73 Thr Ala Gly Asp Arg Trp Ala Tyr 1 5 <210> 74 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 74 Asn Ile Gly Ser Lys Leu 1 5 <210> 75 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 75 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Leu Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Thr Ala Gly Asp Arg Trp Ala 85 90 95 Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 76 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 76 agctatgagc tgacacagcc tctgtccgtg tctgtggctc tgggacagac cgccagaatc 60 acctgtagcg gcgacaacat cggcagcaag ctggcctctt ggtatcagca gaagcctgga 120 caggcccctg tgctggtcat ctacgacgac agcaatagac ccagcggcat ccccgagaga 180 ttcagcggca gcaatagcgg caataccgcc acactgacca tcagcagagc acaggctggc 240 gacgaggccg attactattg tgctgccaca gccggcgaca gatgggccta tgtttttggc 300 ggcggaacaa agctgaccgt gctg 324 <210> 77 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 77 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Leu Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Thr Ala Gly Asp Arg Trp Ala 85 90 95 Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 78 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 78 agctatgagc tgacacagcc tctgtccgtg tctgtggctc tgggacagac cgccagaatc 60 acctgtagcg gcgacaacat cggcagcaag ctggcctctt ggtatcagca gaagcctgga 120 caggcccctg tgctggtcat ctacgacgac agcaatagac ccagcggcat ccccgagaga 180 ttcagcggca gcaatagcgg caataccgcc acactgacca tcagcagagc acaggctggc 240 gacgaggccg attactattg tgctgccaca gccggcgaca gatgggccta tgtttttggc 300 ggcggaacaa agctgaccgt gctgggacag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 ccccccagct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtgtgcct gatcagcgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gcagccccgt gaaggccggc 480 gtggagacaa ccacccccag caagcagagc aacaacaagt acgccgccag cagctacctg 540 agcctgaccc ccgagcagtg gaagagccac agaagctaca gctgccaggt cacccacgag 600 ggcagcaccg tggagaaaac cgtggccccc accgagtgca gc 642 <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 79 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser 1 5 10 <210> 80 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 80 Ala Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 81 Asp Val Gly Val Met Asp Tyr 1 5 <210> 82 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 82 Ser Phe Gly Met Ser 1 5 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 83 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 1 5 <210> 84 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 84 Ser Tyr Ser Gly Ser Asp 1 5 <210> 85 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 85 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly 1 5 <210> 86 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 86 Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asp Thr 1 5 <210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 87 Ala Arg Asp Val Gly Val Met Asp Tyr 1 5 <210> 88 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 88 Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Val Gly Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 89 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 89 caggttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctttggca tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgaatg ggtgtccgcc atcagctaca gcggcagcga tacctactac 180 gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagagatgtg 300 ggcgtgatgg actattgggg ccagggcaca ctggtcaccg ttagctct 348 <210> 90 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 90 Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Val Gly Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 91 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 91 caggttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctttggca tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgaatg ggtgtccgcc atcagctaca gcggcagcga tacctactac 180 gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagagatgtg 300 ggcgtgatgg actattgggg ccagggcaca ctggtcaccg ttagctctgc tagcaccaag 360 ggcccaagtg tgtttcccct ggcccccagc agcaagtcta cttccggcgg aactgctgcc 420 ctgggttgcc tggtgaagga ctacttcccc tgtcccgtga cagtgtcctg gaactctggg 480 gctctgactt ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgacagt gccctccagc tctctgggaa cccagaccta tatctgcaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag tggagcccaa gagctgcgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgcccagct ccagaactgc tgggagggcc ttccgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca ggacccccga ggtgacctgc 780 gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaaaga atacaagtgc 960 aaagtctcca acaaggccct gccagcccca atcgaaaaga caatcagcaa ggccaagggc 1020 cagccacggg agccccaggt gtacaccctg ccccccagcc gggaggagat gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccct gtgatatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc ccccagtgct ggacagcgac 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaagt ccaggtggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320 agcctgagcc ccggcaag 1338 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 92 Ser Gly Asp Asn Leu Gly Thr Tyr Tyr Ala His 1 5 10 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 93 Ser Gln Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 94 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 94 Gly Ala Trp Asp Ala Pro Ser Pro Glu Leu Val 1 5 10 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 95 Asp Asn Leu Gly Thr Tyr Tyr 1 5 <210> 96 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 96 Ser Gln Ser 1 <210> 97 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 97 Trp Asp Ala Pro Ser Pro Glu Leu 1 5 <210> 98 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 98 Asn Leu Gly Thr Tyr Tyr 1 5 <210> 99 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 99 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Leu Gly Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Ser Gln Ser His Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Asp Ala Pro Ser Pro Glu 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 100 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 100 agctatgagc tgacacagcc tctgtccgtg tctgtggctc tgggacagac cgccagaatc 60 acctgtagcg gcgataacct gggcacctac tacgcccact ggtatcagca gaagcctgga 120 caggctcccg tgctggtcat ctacagccag tctcacagac ccagcggcat ccccgagaga 180 ttcagcggca gcaatagcgg caataccgcc acactgacca tcagcagagc acaggctggc 240 gacgaggccg attactattg tggcgcttgg gacgccccat ctcctgagct tgtttttggc 300 ggaggcacca agctgacagt gctg 324 <210> 101 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 101 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Leu Gly Thr Tyr Tyr Ala 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Ser Gln Ser His Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Asp Ala Pro Ser Pro Glu 85 90 95 Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210 <210> 102 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 102 agctatgagc tgacacagcc tctgtccgtg tctgtggctc tgggacagac cgccagaatc 60 acctgtagcg gcgataacct gggcacctac tacgcccact ggtatcagca gaagcctgga 120 caggctcccg tgctggtcat ctacagccag tctcacagac ccagcggcat ccccgagaga 180 ttcagcggca gcaatagcgg caataccgcc acactgacca tcagcagagc acaggctggc 240 gacgaggccg attactattg tggcgcttgg gacgccccat ctcctgagct tgtttttggc 300 ggaggcacca agctgacagt gctgggacag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 ccccccagct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtgtgcct gatcagcgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gcagccccgt gaaggccggc 480 gtggagacaa ccacccccag caagcagagc aacaacaagt acgccgccag cagctacctg 540 agcctgaccc ccgagcagtg gaagagccac agaagctaca gctgccaggt cacccacgag 600 ggcagcaccg tggagaaaac cgtggccccc accgagtgca gc 642 <210> 103 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 103 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 104 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 104 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 105 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 105 Ala Phe Arg Leu Tyr Trp Leu Asp Val 1 5 <210> 106 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 106 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 107 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 107 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 1 5 <210> 108 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 108 Ser Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 109 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 109 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 110 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 110 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 111 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 111 Ala Arg Ala Phe Arg Leu Tyr Trp Leu Asp Val 1 5 10 <210> 112 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 112 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Phe Arg Leu Tyr Trp Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 113 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 113 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc cagagccttc 300 cggctgtact ggctggatgt ttggggacag ggcaccctgg tcacagtgtc atct 354 <210> 114 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 114 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Phe Arg Leu Tyr Trp Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 115 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 115 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc cagagccttc 300 cggctgtact ggctggatgt ttggggacag ggcaccctgg tcacagtgtc atctgctagc 360 accaagggcc caagtgtgtt tcccctggcc cccagcagca agtctacttc cggcggaact 420 gctgccctgg gttgcctggt gaaggactac ttcccctgtc ccgtgacagt gtcctggaac 480 tctggggctc tgacttccgg cgtgcacacc ttccccgccg tgctgcagag cagcggcctg 540 tacagcctga gcagcgtggt gacagtgccc tccagctctc tgggaaccca gacctatatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagc 660 tgcgacaaga cccacacctg ccccccctgc ccagctccag aactgctggg agggccttcc 720 gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac accctgatga tcagcaggac ccccgaggtg 780 acctgcgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagaatac 960 aagtgcaaag tctccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagacaat cagcaaggcc 1020 aagggccagc cacgggagcc ccaggtgtac accctgcccc ccagccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccctgtga tatcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc agtgctggac 1200 agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaagtccag gtggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 tccctgagcc tgagccccgg caag 1344 <210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 116 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 117 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 117 Gln Gln Val Tyr Ser Ala Pro Val Thr 1 5 <210> 118 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 118 Val Tyr Ser Ala Pro Val 1 5 <210> 119 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 119 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ala Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 120 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 120 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gtctacagcg cccctgtgac atttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 121 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 121 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ala Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 122 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 122 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gtctacagcg cccctgtgac atttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 123 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 123 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp Ile Ser 1 5 10 <210> 124 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 124 Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Glu Pro 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 125 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 125 Thr Ser Arg Arg Ser Tyr Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 126 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 126 Asn Tyr Trp Ile Ser 1 5 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 127 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 1 5 <210> 128 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 128 Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr 1 5 <210> 129 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 129 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp 1 5 <210> 130 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 130 Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 131 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 131 Ala Arg Thr Ser Arg Arg Ser Tyr Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 132 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 132 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Glu 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Thr Ser Arg Arg Ser Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 133 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 133 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aactactgga tcagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agacctacgg cggcaccacc 180 gattatgccg agcctgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 accagcagaa gaagctacgc cttcgactac tggggccagg gcacactggt taccgttagc 360 tct 363 <210> 134 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 134 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Glu 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Thr Ser Arg Arg Ser Tyr Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 135 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 135 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aactactgga tcagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agacctacgg cggcaccacc 180 gattatgccg agcctgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 accagcagaa gaagctacgc cttcgactac tggggccagg gcacactggt taccgttagc 360 tctgctagca ccaagggccc aagtgtgttt cccctggccc ccagcagcaa gtctacttcc 420 ggcggaactg ctgccctggg ttgcctggtg aaggactact tcccctgtcc cgtgacagtg 480 tcctggaact ctggggctct gacttccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg acagtgccct ccagctctct gggaacccag 600 acctatatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc cagctccaga actgctggga 720 gggccttccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct acagggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaagaataca agtgcaaagt ctccaacaag gccctgccag ccccaatcga aaagacaatc 1020 agcaaggcca agggccagcc acgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta cccctgtgat 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccca 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtccagg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaagt ccctgagcct gagccccggc aag 1353 <210> 136 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 136 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 137 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 137 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 138 Gln Gln Ile Thr Arg Tyr Pro Val Thr 1 5 <210> 139 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 139 Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 140 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 140 Asp Ala Ser 1 <210> 141 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 141 Ile Thr Arg Tyr Pro Val 1 5 <210> 142 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 142 Gln Ser Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 143 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 143 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Thr Arg Tyr Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 144 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 144 gacatccaga tgacacagag ccccagcaca ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatctcc tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgat gccagcagcc tggaaagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgag ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag atcacaagat accccgtgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 145 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 145 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Thr Arg Tyr Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 146 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 146 gacatccaga tgacacagag ccccagcaca ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatctcc tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgat gccagcagcc tggaaagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgag ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag atcacaagat accccgtgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 147 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 147 Val Ser Gly Tyr Tyr Ser His Ser Gly Gly Phe Asp Val 1 5 10 <210> 148 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 148 Ala Arg Val Ser Gly Tyr Tyr Ser His Ser Gly Gly Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 149 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 149 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Glu 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Val Ser Gly Tyr Tyr Ser His Ser Gly Gly Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 150 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 150 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aactactgga tcagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agacctacgg cggcaccacc 180 gattatgccg agcctgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gtgtctggct actactctca cagcggcggc tttgatgtgt ggggccaggg aacactggtc 360 accgttagtt ct 372 <210> 151 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 151 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Tyr Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Glu 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Val Ser Gly Tyr Tyr Ser His Ser Gly Gly Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 152 <211> 1362 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 152 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aactactgga tcagctgggt ccgacaggcc 120 cctggcaaag gacttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agacctacgg cggcaccacc 180 gattatgccg agcctgtgaa gggcagattc accatcagcc gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gtgtctggct actactctca cagcggcggc tttgatgtgt ggggccaggg aacactggtc 360 accgttagtt ctgctagcac caagggccca agtgtgtttc ccctggcccc cagcagcaag 420 tctacttccg gcggaactgc tgccctgggt tgcctggtga aggactactt cccctgtccc 480 gtgacagtgt cctggaactc tggggctctg acttccggcg tgcacacctt ccccgccgtg 540 ctgcagagca gcggcctgta cagcctgagc agcgtggtga cagtgccctc cagctctctg 600 ggaacccaga cctatatctg caacgtgaac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 agagtggagc ccaagagctg cgacaagacc cacacctgcc ccccctgccc agctccagaa 720 ctgctgggag ggccttccgt gttcctgttc ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc 780 agcaggaccc ccgaggtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga cccagaggtg 840 aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag 900 gagcagtaca acagcaccta cagggtggtg tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 960 ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaagtc tccaacaagg ccctgccagc cccaatcgaa 1020 aagacaatca gcaaggccaa gggccagcca cgggagcccc aggtgtacac cctgcccccc 1080 agccgggagg agatgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac 1140 ccctgtgata tcgccgtgga gtgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1200 acccccccag tgctggacag cgacggcagc ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1260 aagtccaggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1320 aaccactaca cccagaagtc cctgagcctg agccccggca ag 1362 <210> 153 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 153 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 154 Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 155 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 155 Gln Lys Thr Trp Arg Thr Pro Gly Thr 1 5 <210> 156 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 156 Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 1 5 <210> 157 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 157 Thr Trp Arg Thr Pro Gly 1 5 <210> 158 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 158 Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 1 5 <210> 159 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 159 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Thr Trp Arg Thr Pro Gly 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 160 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 160 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgtcagaaa acctggcgga cccctggcac atttggccag 300 ggaacaaagg tggaaatcaa g 321 <210> 161 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 161 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Thr Trp Arg Thr Pro Gly 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 162 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 162 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgtcagaaa acctggcgga cccctggcac atttggccag 300 ggaacaaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 163 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 163 Ser Arg Leu Ile Ala Pro Trp Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 164 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 164 Ala Arg Ser Arg Leu Ile Ala Pro Trp Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 165 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 165 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Leu Ile Ala Pro Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 166 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 166 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcaga 300 ctgatcgccc cttggctgga ttattggggc cagggcacac tggtcaccgt gtcatct 357 <210> 167 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 167 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Arg Leu Ile Ala Pro Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 168 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 168 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc cagaagcaga 300 ctgatcgccc cttggctgga ttattggggc cagggcacac tggtcaccgt gtcatctgct 360 agcaccaagg gcccaagtgt gtttcccctg gcccccagca gcaagtctac ttccggcgga 420 actgctgccc tgggttgcct ggtgaaggac tacttcccct gtcccgtgac agtgtcctgg 480 aactctgggg ctctgacttc cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540 ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgacagtg ccctccagct ctctgggaac ccagacctat 600 atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt ggagcccaag 660 agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgcccagctc cagaactgct gggagggcct 720 tccgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag gacccccgag 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccac gaggacccag aggtgaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gagaggagca gtacaacagc 900 acctacaggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagaa 960 tacaagtgca aagtctccaa caaggccctg ccagccccaa tcgaaaagac aatcagcaag 1020 gccaagggcc agccacggga gccccaggtg tacaccctgc cccccagccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtgaagggct tctacccctg tgatatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc cccagtgctg 1200 gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagtc caggtggcag 1260 cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctga gcctgagccc cggcaag 1347 <210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 169 Gln Gln Val Tyr Gly Ser Pro Pro Thr 1 5 <210> 170 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 170 Val Tyr Gly Ser Pro Pro 1 5 <210> 171 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 171 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Gly Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 172 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 172 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gtctacggca gccctcctac atttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 173 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 173 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Gly Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 174 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 174 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gtctacggca gccctcctac atttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 175 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 175 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 176 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 176 Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 177 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 177 Gly Ser Ser Ala Ala Ser Gly Leu Ser Gly Asp Leu 1 5 10 <210> 178 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 178 Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5 <210> 179 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 179 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 1 5 <210> 180 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 180 Tyr Pro Gly Asp Ser Asp 1 5 <210> 181 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 181 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 1 5 <210> 182 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 182 Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr 1 5 <210> 183 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 183 Ala Arg Gly Ser Ser Ala Ala Ser Gly Leu Ser Gly Asp Leu 1 5 10 <210> 184 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 184 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ser Ser Ala Ala Ser Gly Leu Ser Gly Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 185 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 185 gaagttcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 tcctgcaaag gcagcggcta cagcttcacc agctactgga tcggctgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gccttgagtg gatgggcatc atctaccccg gcgacagcga caccagatac 180 agccctagct ttcagggcca agtgaccatc agcgccgaca agagcatcag cacagcctac 240 ctgcagtggt ccagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgtgc cagaggaagc 300 tctgccgcct ctggactgtc tggcgatctt tggggacagg gcacactggt cacagtgtct 360 agt 363 <210> 186 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 186 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ser Ser Ala Ala Ser Gly Leu Ser Gly Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 187 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 187 gaagttcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 tcctgcaaag gcagcggcta cagcttcacc agctactgga tcggctgggt ccgacagatg 120 cctggcaaag gccttgagtg gatgggcatc atctaccccg gcgacagcga caccagatac 180 agccctagct ttcagggcca agtgaccatc agcgccgaca agagcatcag cacagcctac 240 ctgcagtggt ccagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgtgc cagaggaagc 300 tctgccgcct ctggactgtc tggcgatctt tggggacagg gcacactggt cacagtgtct 360 agtgctagca ccaagggccc aagtgtgttt cccctggccc ccagcagcaa gtctacttcc 420 ggcggaactg ctgccctggg ttgcctggtg aaggactact tcccctgtcc cgtgacagtg 480 tcctggaact ctggggctct gacttccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg acagtgccct ccagctctct gggaacccag 600 acctatatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc cagctccaga actgctggga 720 gggccttccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct acagggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaagaataca agtgcaaagt ctccaacaag gccctgccag ccccaatcga aaagacaatc 1020 agcaaggcca agggccagcc acgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta cccctgtgat 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccca 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtccagg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaagt ccctgagcct gagccccggc aag 1353 <210> 188 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 188 Gln Gln Asp Tyr Tyr Ser Pro Phe Thr 1 5 <210> 189 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 189 Asp Tyr Tyr Ser Pro Phe 1 5 <210> 190 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 190 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Tyr Ser Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 191 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 191 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gactactaca gccccttcac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 192 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 192 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Tyr Ser Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 193 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 193 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag gactactaca gccccttcac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 194 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 194 Ala Tyr Lys Leu Ser Trp Leu Asp Leu 1 5 <210> 195 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 195 Ala Arg Ala Tyr Lys Leu Ser Trp Leu Asp Leu 1 5 10 <210> 196 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 196 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Tyr Lys Leu Ser Trp Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 197 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 197 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc cagagcctac 300 aagctgagct ggctggatct ttggggccag ggcacactgg tcacagtgtc atct 354 <210> 198 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 198 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Tyr Lys Leu Ser Trp Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 199 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 199 gaagttcagc tgctggaatc tggcggagga ctggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60 tcttgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgagctgggt ccgacaggct 120 cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atctctggct ctggcggcag cacatattac 180 gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc cagagcctac 300 aagctgagct ggctggatct ttggggccag ggcacactgg tcacagtgtc atctgctagc 360 accaagggcc caagtgtgtt tcccctggcc cccagcagca agtctacttc cggcggaact 420 gctgccctgg gttgcctggt gaaggactac ttcccctgtc ccgtgacagt gtcctggaac 480 tctggggctc tgacttccgg cgtgcacacc ttccccgccg tgctgcagag cagcggcctg 540 tacagcctga gcagcgtggt gacagtgccc tccagctctc tgggaaccca gacctatatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagc 660 tgcgacaaga cccacacctg ccccccctgc ccagctccag aactgctggg agggccttcc 720 gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac accctgatga tcagcaggac ccccgaggtg 780 acctgcgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaagaatac 960 aagtgcaaag tctccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagacaat cagcaaggcc 1020 aagggccagc cacgggagcc ccaggtgtac accctgcccc ccagccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccctgtga tatcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc agtgctggac 1200 agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaagtccag gtggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 tccctgagcc tgagccccgg caag 1344 <210> 200 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 200 Gln Gln Val Trp Tyr Ala Pro Val Thr 1 5 <210> 201 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 201 Val Trp Tyr Ala Pro Val 1 5 <210> 202 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 202 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Trp Tyr Ala Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 203 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 203 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcaa gtttggtacg cccctgtgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 204 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 204 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Trp Tyr Ala Pro Val 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 205 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 205 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatcagc agctacctga actggtatca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaaactgct gatctatgcc gccagctctc tgcagtctgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcaa gtttggtacg cccctgtgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 206 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 206 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp Met Ser 1 5 10 <210> 207 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 207 Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 208 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 208 Thr Ile Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 209 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 209 Asn Ala Trp Met Ser 1 5 <210> 210 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 210 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 1 5 <210> 211 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 211 Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr 1 5 <210> 212 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 212 Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp 1 5 <210> 213 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 213 Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr 1 5 10 <210> 214 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 214 Ala Arg Thr Ile Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Ser Ser Leu Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 215 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 215 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Thr Ile Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Ser Ser Leu Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 216 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 216 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 acaatctacc ccagcgctcc tagcagcagc ctggattatt ggggccaggg cacactggtc 360 accgtgtcat ct 372 <210> 217 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 217 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Thr Ile Tyr Pro Ser Ala Pro Ser Ser Ser Leu Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 218 <211> 1362 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 218 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 acaatctacc ccagcgctcc tagcagcagc ctggattatt ggggccaggg cacactggtc 360 accgtgtcat ctgctagcac caagggccca agtgtgtttc ccctggcccc cagcagcaag 420 tctacttccg gcggaactgc tgccctgggt tgcctggtga aggactactt cccctgtccc 480 gtgacagtgt cctggaactc tggggctctg acttccggcg tgcacacctt ccccgccgtg 540 ctgcagagca gcggcctgta cagcctgagc agcgtggtga cagtgccctc cagctctctg 600 ggaacccaga cctatatctg caacgtgaac cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 660 agagtggagc ccaagagctg cgacaagacc cacacctgcc ccccctgccc agctccagaa 720 ctgctgggag ggccttccgt gttcctgttc ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc 780 agcaggaccc ccgaggtgac ctgcgtggtg gtggacgtgt cccacgagga cccagaggtg 840 aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag 900 gagcagtaca acagcaccta cagggtggtg tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 960 ctgaacggca aagaatacaa gtgcaaagtc tccaacaagg ccctgccagc cccaatcgaa 1020 aagacaatca gcaaggccaa gggccagcca cgggagcccc aggtgtacac cctgcccccc 1080 agccgggagg agatgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac 1140 ccctgtgata tcgccgtgga gtgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc 1200 acccccccag tgctggacag cgacggcagc ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 1260 aagtccaggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1320 aaccactaca cccagaagtc cctgagcctg agccccggca ag 1362 <210> 219 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 219 Gln Gln Leu Ile Phe Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 220 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 220 Leu Ile Phe Phe Pro Leu 1 5 <210> 221 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 221 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ile Phe Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 222 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 222 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ttgccagcag ctgatcttct tccctctgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 223 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 223 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ile Phe Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 224 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 224 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ttgccagcag ctgatcttct tccctctgac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 225 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 225 Ala Ser His Arg Leu His Ser Leu Phe Asp Val 1 5 10 <210> 226 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 226 Ala Arg Ala Ser His Arg Leu His Ser Leu Phe Asp Val 1 5 10 <210> 227 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 227 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Ser His Arg Leu His Ser Leu Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 228 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 228 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgccaga 300 gcctctcaca gactgcacag cctgtttgac gtgtggggcc agggaacact ggtcaccgtt 360 agttct 366 <210> 229 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 229 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Ala Ser His Arg Leu His Ser Leu Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 230 <211> 1356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 230 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgccaga 300 gcctctcaca gactgcacag cctgtttgac gtgtggggcc agggaacact ggtcaccgtt 360 agttctgcta gcaccaaggg cccaagtgtg tttcccctgg cccccagcag caagtctact 420 tccggcggaa ctgctgccct gggttgcctg gtgaaggact acttcccctg tcccgtgaca 480 gtgtcctgga actctggggc tctgacttcc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540 agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgacagtgc cctccagctc tctgggaacc 600 cagacctata tctgcaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtg 660 gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gcccagctcc agaactgctg 720 ggagggcctt ccgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagcagg 780 acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgtcccacg aggacccaga ggtgaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcccag agaggagcag 900 tacaacagca cctacagggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960 ggcaaagaat acaagtgcaa agtctccaac aaggccctgc cagccccaat cgaaaagaca 1020 atcagcaagg ccaagggcca gccacgggag ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctgg tgaagggctt ctacccctgt 1140 gatatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200 ccagtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc 1260 aggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320 tacacccaga agtccctgag cctgagcccc ggcaag 1356 <210> 231 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 231 Gln Gln Gly Leu Phe Tyr Pro His Thr 1 5 <210> 232 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 232 Gly Leu Phe Tyr Pro His 1 5 <210> 233 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 233 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Leu Phe Tyr Pro His 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 234 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 234 gacatccaga tgacacagag ccccagcaca ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatctcc tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgat gccagcagcc tggaaagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgag ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ttgtcagcag ggcctgttct accctcacac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 235 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 235 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Leu Phe Tyr Pro His 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 236 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 236 gacatccaga tgacacagag ccccagcaca ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gagcatctcc tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgat gccagcagcc tggaaagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgag ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ttgtcagcag ggcctgttct accctcacac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 237 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 237 Asp Glu Tyr Pro Trp Gly Trp Phe Asp Val 1 5 10 <210> 238 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 238 Ala Arg Asp Glu Tyr Pro Trp Gly Trp Phe Asp Val 1 5 10 <210> 239 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 239 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Tyr Pro Trp Gly Trp Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 240 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 240 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gatgagtacc cctggggatg gttcgatgtg tggggacagg gaaccctggt caccgttagt 360 tct 363 <210> 241 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 241 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Glu Tyr Pro Trp Gly Trp Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 242 <211> 1353 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 242 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gatgagtacc cctggggatg gttcgatgtg tggggacagg gaaccctggt caccgttagt 360 tctgctagca ccaagggccc aagtgtgttt cccctggccc ccagcagcaa gtctacttcc 420 ggcggaactg ctgccctggg ttgcctggtg aaggactact tcccctgtcc cgtgacagtg 480 tcctggaact ctggggctct gacttccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg acagtgccct ccagctctct gggaacccag 600 acctatatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc cagctccaga actgctggga 720 gggccttccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900 aacagcacct acagggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaagaataca agtgcaaagt ctccaacaag gccctgccag ccccaatcga aaagacaatc 1020 agcaaggcca agggccagcc acgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta cccctgtgat 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccca 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtccagg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaagt ccctgagcct gagccccggc aag 1353 <210> 243 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 243 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 244 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 244 Gln Gln Tyr Ile Phe Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 245 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 245 Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 246 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 246 Tyr Ile Phe Tyr Pro Leu 1 5 <210> 247 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 247 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 248 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 248 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ile Phe Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 249 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 249 gacatccaga tgacacagag ccctagctcc gtgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatctct tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctatgcc gcttccagtc tgcagagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacatcttct accctctgac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 250 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 250 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ile Phe Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 251 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 251 gacatccaga tgacacagag ccctagctcc gtgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatctct tcttggctgg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctatgcc gcttccagtc tgcagagcgg cgtgccaagc 180 agattttctg gcagcggctc tggcaccgac ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacatcttct accctctgac cttcggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 252 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 252 Val Ala Ser Pro Ser Ala Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 253 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 253 Ala Arg Val Ala Ser Pro Ser Ala Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 254 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 254 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Val Ala Ser Pro Ser Ala Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 255 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 255 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gtggcttctc cttctgctcc cggcggattc gattattggg gccagggaac actggtcacc 360 gtgtctagt 369 <210> 256 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 256 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Arg Ile Lys Ser Lys Thr Asp Ala Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala 50 55 60 Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Val Ala Ser Pro Ser Ala Pro Gly Gly Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Cys Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Cys Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 257 <211> 1359 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 257 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga cttgtgaaac ctggcggctc tctgagactg 60 agctgtgccg cttccggctt caccttcagc aatgcctgga tgagctgggt ccgacaggcc 120 cctggaaaag gccttgagtg ggtcggacgg atcaagagca agaccgatgc cggcaccacc 180 gattatgctg cccctgtgaa gggcagattc accatcagca gggacgacag caagaacacc 240 ctgtacctgc agatgaacag cctgaaaacc gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga 300 gtggcttctc cttctgctcc cggcggattc gattattggg gccagggaac actggtcacc 360 gtgtctagtg ctagcaccaa gggcccaagt gtgtttcccc tggcccccag cagcaagtct 420 acttccggcg gaactgctgc cctgggttgc ctggtgaagg actacttccc ctgtcccgtg 480 acagtgtcct ggaactctgg ggctctgact tccggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg 540 cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgacag tgccctccag ctctctggga 600 acccagacct atatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660 gtggagccca agagctgcga caagacccac acctgccccc cctgcccagc tccagaactg 720 ctgggagggc cttccgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct gatgatcagc 780 aggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc acgaggaccc agaggtgaag 840 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggag 900 cagtacaaca gcacctacag ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaaag aatacaagtg caaagtctcc aacaaggccc tgccagcccc aatcgaaaag 1020 acaatcagca aggccaaggg ccagccacgg gagccccagg tgtacaccct gccccccagc 1080 cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtgtcc ctgacctgtc tggtgaaggg cttctacccc 1140 tgtgatatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 cccccagtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag 1260 tccaggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cactacaccc agaagtccct gagcctgagc cccggcaag 1359 <210> 258 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 258 Gln Gln Ser Leu Phe Ala Pro Phe Thr 1 5 <210> 259 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 259 Ser Leu Phe Ala Pro Phe 1 5 <210> 260 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 260 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Phe Ala Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 261 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 261 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgtcagcag agcctgttcg cccctttcac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 262 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 262 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Phe Ala Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 263 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 263 gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca gggcatcagc aactacctgg cctggtatca gcagaaaccc 120 ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacgct gccagcacac tgcagagcgg agtgcctagc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatatctag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccacctacta ctgtcagcag agcctgttcg cccctttcac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360 agcgacgagc agctgaagag tggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642 <210> 264 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 264 ctctagcgcc accatgaaac a 21 <210> 265 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 265 agcccagcaa caccaagg 18 <210> 266 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 266 taatacgact cactataggg 20 <210> 267 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag" <400> 267 His His His His His His 1 5 <210> 268 <211> 359 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 268 Met Thr Leu Glu Ser Ile Met Ala Cys Cys Leu Ser Glu Glu Ala Lys 1 5 10 15 Glu Ala Arg Arg Ile Asn Asp Glu Ile Glu Arg Gln Leu Arg Arg Asp 20 25 30 Lys Arg Asp Ala Arg Arg Glu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Gly Thr Gly 35 40 45 Glu Ser Gly Lys Ser Thr Phe Ile Lys Gln Met Arg Ile Ile His Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Ser Asp Glu Asp Lys Arg Gly Phe Thr Lys Leu Val Tyr 65 70 75 80 Gln Asn Ile Phe Thr Ala Met Gln Ala Met Ile Arg Ala Met Asp Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Pro Tyr Lys Tyr Glu His Asn Lys Ala His Ala Gln Leu 100 105 110 Val Arg Glu Val Asp Val Glu Lys Val Ser Ala Phe Glu Asn Pro Tyr 115 120 125 Val Asp Ala Ile Lys Ser Leu Trp Asn Asp Pro Gly Ile Gln Glu Cys 130 135 140 Tyr Asp Arg Arg Arg Glu Tyr Gln Leu Ser Asp Ser Thr Lys Tyr Tyr 145 150 155 160 Leu Asn Asp Leu Asp Arg Val Ala Asp Pro Ala Tyr Leu Pro Thr Gln 165 170 175 Gln Asp Val Leu Arg Val Arg Val Pro Thr Thr Gly Ile Ile Glu Tyr 180 185 190 Pro Phe Asp Leu Gln Ser Val Ile Phe Arg Met Val Asp Val Gly Gly 195 200 205 Gln Arg Ser Glu Arg Arg Lys Trp Ile His Cys Phe Glu Asn Val Thr 210 215 220 Ser Ile Met Phe Leu Val Ala Leu Ser Glu Tyr Asp Gln Val Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Asp Asn Glu Asn Arg Met Glu Glu Ser Lys Ala Leu Phe Arg 245 250 255 Thr Ile Ile Thr Tyr Pro Trp Phe Gln Asn Ser Ser Val Ile Leu Phe 260 265 270 Leu Asn Lys Lys Asp Leu Leu Glu Glu Lys Ile Met Tyr Ser His Leu 275 280 285 Val Asp Tyr Phe Pro Glu Tyr Asp Gly Pro Gln Arg Asp Ala Gln Ala 290 295 300 Ala Arg Glu Phe Ile Leu Lys Met Phe Val Asp Leu Asn Pro Asp Ser 305 310 315 320 Asp Lys Ile Ile Tyr Ser His Phe Thr Cys Ala Thr Asp Thr Glu Asn 325 330 335 Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn 340 345 350 Leu Lys Glu Tyr Asn Leu Val 355 <210> 269 <211> 6343 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 269 agactatccg ctcccaccgc gcccccggcc cacctggtgg ccccggccct ggccgccgcc 60 cccgcggcgg ttcccggagc tcgtcccgga cgcgcgcccg ggcggcgggg gctcggcggc 120 caccgctgcc tcgggggagc gagggcggga gggtgtgtgt gcgcgctgtg agcagggggt 180 gccggcgggg ctgcagcgga ggcactttgg aagaatgact ctggagtcca tcatggcgtg 240 ctgcctgagc gaggaggcca aggaagcccg gcggatcaac gacgagatcg agcggcagct 300 ccgcagggac aagcgggacg cccgccggga gctcaagctg ctgctgctcg ggacaggaga 360 gagtggcaag agtacgttta tcaagcagat gagaatcatc catgggtcag gatactctga 420 tgaagataaa aggggcttca ccaagctggt gtatcagaac atcttcacgg ccatgcaggc 480 catgatcaga gccatggaca cactcaagat cccatacaag tatgagcaca ataaggctca 540 tgcacaatta gttcgagaag ttgatgtgga gaaggtgtct gcttttgaga atccatatgt 600 agatgcaata aagagtttat ggaatgatcc tggaatccag gaatgctatg atagacgacg 660 agaatatcaa ttatctgact ctaccaaata ctatcttaat gacttggacc gcgtagctga 720 ccctgcctac ctgcctacgc aacaagatgt gcttagagtt cgagtcccca ccacagggat 780 catcgaatac ccctttgact tacaaagtgt cattttcaga atggtcgatg tagggggcca 840 aaggtcagag agaagaaaat ggatacactg ctttgaaaat gtcacctcta tcatgtttct 900 agtagcgctt agtgaatatg atcaagttct cgtggagtca gacaatgaga accgaatgga 960 ggaaagcaag gctctcttta gaacaattat cacatacccc tggttccaga actcctcggt 1020 tattctgttc ttaaacaaga aagatcttct agaggagaaa atcatgtatt cccatctagt 1080 cgactacttc ccagaatatg atggacccca gagagatgcc caggcagccc gagaattcat 1140 tctgaagatg ttcgtggacc tgaacccaga cagtgacaaa attatctact cccacttcac 1200 gtgcgccaca gacaccgaga atatccgctt tgtctttgct gccgtcaagg acaccatcct 1260 ccagttgaac ctgaaggagt acaatctggt ctaattgtgc ctcctagaca cccgccctgc 1320 ccttccctgg tgggctattg aagatacaca agagggactg tatttctgtg gaaaacaatt 1380 tgcataatac taatttattg ccgtcctgga ctctgtgtga gcgtgtccac agagtttgta 1440 gtaaatatta tgattttatt taaactattc agaggaaaaa cagaggatgc tgaagtacag 1500 tcccagcaca tttcctctct atcttttttt taggcaaaac cttgtgactc agtgtatttt 1560 aaattctcag tcatgcactc acaaagataa gacttgtttc tttctgtctc tctctctttt 1620 tcttttctat ggagcaaaac aaagctgatt tccctttttt cttcccccgc taattcatac 1680 ctccctcctg atgtttttcc caggttacaa tggcctttat cctagttcca ttcttggtca 1740 agtttttctc tcaaatgata cagtcaggac acatcgttcg atttaagcca tcatcagctt 1800 aatttaagtt tgtagttttt gctgaaggat tatatgtatt aatacttacg gttttaaatg 1860 tgttgctttg gatacacaca tagtttcttt tttaatagaa tatactgtct tgtctcactt 1920 tggactggga cagtggatgc ccatctaaaa gttaagtgtc atttctttta gatgtttacc 1980 ttcagccata gcttgattgc tcagagaaat atgcagaagg caggatcaaa gacacacagg 2040 agtcctttct tttgaaatgc cacgtgccat tgtctttcct cccttctttg cttctttttc 2100 ttaccctctc tttcaattgc agatgccaaa aaagatgcca acagacacta cattacccta 2160 atggctgcta cccagaacct ttttataggt tgttcttaat ttttttgttg ttgttgttca 2220 agcttttcct ttcttttttt tcttggtgtt tgggccacga ttttaaaatg acttttatta 2280 tgggtatgtg ttgccaaagc tggctttttg tcaaataaaa tgaatacgaa cttaaaaaat 2340 aaaagctggt atcttaaaat gtaagagagt aagactgtga agcctaaaat gactggctga 2400 gaatgaacca gaaatgccat ttgccaaaca gttgtaacta gaaatttgat tctcacggtc 2460 cattcttttc tttgtcctta agatgacatt gttagtgttc acgtcccatg ttcagtgtcc 2520 aaaccggcaa tgtaaaaagt atcctgtgtg gtttaacagg aaatctgttt atgtctcttt 2580 atttgaaacc agttttactc tcagtggttc tttaagttca atgaagtctg ccaggaacat 2640 tggttggtag tattattccg acacctttaa tttccaaaat ctgaagttcc tgctagttta 2700 ccaccttcat gatcttcttg aactggtaac tgattaggtt gaacttatgg aagatttgtg 2760 gacttaactc aaaagtaacc tctcagtgtt ctatagaaca tgtatttgtg taactgaacc 2820 taccaggaga aatgtttgga attctatatg tgcaattttt caacaaatgc aaaaaaaata 2880 cagcacatgt attgacaagc ttctgtcaag cagcttgagt tgaaatttga tttaagaaaa 2940 taaatcatga ttgttcaaag ctgctgggac gttagaatta ggccatgata ctggtctcat 3000 tttaactaca gtggtatttg gcactagtgt aaacttccat ataaatcact cttttggaac 3060 aacaaagggg gagggagaaa aatcacggcc tgttaaatga gtaccaaagc cgcccaacag 3120 taatgagatg ttctcatcct tgattctccc agcctcaaac aacacagctt actttttttt 3180 tcccttgctc agaaagtacc tgtaatttaa caaacagact gcctgtaggt atagtgcaat 3240 tacaaatgct ctaatcattg tacatacatc tctcttgata ttgcagcatc catactggct 3300 ttgtaatcat taattttttg gcagattgaa tgtgctgtat tgatatgtat ctatgtaatt 3360 gtattgtatg tctatagcta attcacgttt tgaataatgt tattttattt acttttttaa 3420 gagaggagaa tgtaaatttg tcagtttatt tctgactagg gatattttct ttccatttag 3480 aaaagaagaa aaaaaaaaaa ccttactgtc atacagagcg gtactagcgt cgtgctgtat 3540 aaaatcattt gcacattcct gagtagaggt atactgatta taagacccaa aggtaatttc 3600 atagcaaaat acataaaatc agtcggagct tttatacaaa catggaaacc aactttgtag 3660 aacttttgcc atttgatcta ggattggaat atgagctttt atacaattca tattcttatt 3720 tggcaaatgc acagtttagt attacctctc tgatggcctt tactagaaag gcagttttag 3780 aagctattgt gatccactaa ggaaatgttt taacagctag agaccactgc ttgcctgaaa 3840 gggcgttctt aaatttggtg cagcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa ttaaacaaca 3900 acatttgaag gcctacagtg tgtatagaga aaacctcatc acaagatcat aagtgttaca 3960 gttttaggga atcaagatat tctatttaat agagctatag taaatgtagt caattaaacc 4020 tgatctcaaa gcttgaagaa gctgagcaaa acagggaaag attgttatat ttgtctttat 4080 gaaattggga tggaatttgc tatgcagaat tgaggtttgt ggcttcgctg ttcctgtagg 4140 gtgcatgaca agatcccttc tcttgagaaa ggaaaaaatt gatcacccta gcagcagtga 4200 tgcatagaaa cctaatttta gccacaccag tcaatcgaag ctaaaggatt ttcttttttg 4260 tttcttcggg gttttattga aggggctagg ggcgggacgg gattcttttc agttttgtat 4320 aaaaacaaag tttactcatg ctttatatta tattgtgatt gcaagcgtta taagcgtgtg 4380 ccactggcct cctattgttg atgcttaggt aatggaggcc tgtggtgagt tttatggtga 4440 cttgggcatg tcttattcaa aaacaaaaac ataaaacaca gaaacctttc ttcagcatac 4500 caaggcaagc agccatttca tgactcactt aacacattgc agtgtaccag tttacagatg 4560 atttttccct ttttgcgtga catggcagtt ctaaccccca gagaattcct tatttgtaaa 4620 ttggaagttt ctactatgcc ttacagagct taaattcaga agtttgtgcc tcatatctga 4680 aacaaaggga aataacacac ccattcaaaa gtaaataaat ctcctagaag tttttgtttt 4740 taacatttcc atataaagag ctctgttgaa tgtcatgaat agactggaaa aaaaaatttt 4800 aagaacctgc atatgttgtt tactagcaga tgacaactac aaaaggaatc tgaagaacac 4860 gtaaaacttg tatttttttt tttttggtag attaactagc aggcctattt taaaaaggta 4920 attcagctaa agggcaattt acttttttgt acttcagact atcttgattg tcaaagtgta 4980 cgaactgtaa ttttaaaatt tatactgcca catgattgta aattttagtt gtcttaagtt 5040 aggaattggt gaaaagctat ttatgctgga tttgggtcaa aatgacttat ttgcaaaaaa 5100 ataaataatg ggaagaaagg gctgtataat gaaatactgc aagactcaca tattggttgg 5160 aaatttccct caaatcacct accgattacc cttgatttcc ctttgttttc agtttctcaa 5220 aacgaatgaa atgaaatata gcagaatgtt aacccatata aaaataaagt gtacccaaat 5280 attgtaatgt atattgctgc tcttcttcaa attaaataag ggtttaaaac cacttaattg 5340 gtaatcaaca tctcaattga tacaaataag gtgtgcttgg tatacattaa tattttcttc 5400 caaagatata tctttggtta gaaacacaaa aaaataaaac tagtaatatt gtatgtttat 5460 ctatctctac atatttccag catatgtagc gttaatagat ctgtcctggt aactgtgtct 5520 ttgggatttc attttggttc catcaaatta ggaaaagaaa tggcttagtt gtatatgatt 5580 agctagagat ttttggagcc agacacctgc tgtttagtag ataacttagt acagacccta 5640 aacttgtcat ttgtttttct cacagaatag ccatttcctg ctgtcttccc aatgatcact 5700 gccctttcaa taacactctt gcctctagaa tcatatgttc aaagtatgaa tacacaccta 5760 gcacatagta ggtgctcaaa tattaatttc ctccttgcct tccttatcta ccctgtgtcc 5820 tccatttccc cgtatgattc caacccaata tagcaaatga catttacatg ttatgaaaac 5880 atctattggg taaaatcaga tcttggataa agaaattctg acttttatat aagcttttgg 5940 tagacagaaa aaacagaaag gtattcgttg gtagaacatt tttaagttca ggaaagaaag 6000 ctggaataat actacgtaac tttgtccagg ttactttgac tgaaacacgt ttttggtgga 6060 tttcttttcc tcaaagaact ctctaaatgc aactccttgc tggattcctc acccatcatc 6120 ctgttggaaa cccttactag acctatgtat ttagggagtt ttgtcagaaa acatttttaa 6180 cttgcagtat ttaaaagaat atttactgtt cctaaaatgt cattcaaatg catgtactgt 6240 ctattgtttg gggatgggaa ctagttttgc aaaaaacacc taatgttgta taataatgcc 6300 ccaatgatct tgctggttaa aaatacagta tttttggcca taa 6343 <210> 270 <211> 359 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 270 Met Thr Leu Glu Ser Met Met Ala Cys Cys Leu Ser Asp Glu Val Lys 1 5 10 15 Glu Ser Lys Arg Ile Asn Ala Glu Ile Glu Lys Gln Leu Arg Arg Asp 20 25 30 Lys Arg Asp Ala Arg Arg Glu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Gly Thr Gly 35 40 45 Glu Ser Gly Lys Ser Thr Phe Ile Lys Gln Met Arg Ile Ile His Gly 50 55 60 Ala Gly Tyr Ser Glu Glu Asp Lys Arg Gly Phe Thr Lys Leu Val Tyr 65 70 75 80 Gln Asn Ile Phe Thr Ala Met Gln Ala Met Ile Arg Ala Met Glu Thr 85 90 95 Leu Lys Ile Leu Tyr Lys Tyr Glu Gln Asn Lys Ala Asn Ala Leu Leu 100 105 110 Ile Arg Glu Val Asp Val Glu Lys Val Thr Thr Phe Glu His Gln Tyr 115 120 125 Val Ser Ala Ile Lys Thr Leu Trp Glu Asp Pro Gly Ile Gln Glu Cys 130 135 140 Tyr Asp Arg Arg Arg Glu Tyr Gln Leu Ser Asp Ser Ala Lys Tyr Tyr 145 150 155 160 Leu Thr Asp Val Asp Arg Ile Ala Thr Leu Gly Tyr Leu Pro Thr Gln 165 170 175 Gln Asp Val Leu Arg Val Arg Val Pro Thr Thr Gly Ile Ile Glu Tyr 180 185 190 Pro Phe Asp Leu Glu Asn Ile Ile Phe Arg Met Val Asp Val Gly Gly 195 200 205 Gln Arg Ser Glu Arg Arg Lys Trp Ile His Cys Phe Glu Asn Val Thr 210 215 220 Ser Ile Met Phe Leu Val Ala Leu Ser Glu Tyr Asp Gln Val Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Asp Asn Glu Asn Arg Met Glu Glu Ser Lys Ala Leu Phe Arg 245 250 255 Thr Ile Ile Thr Tyr Pro Trp Phe Gln Asn Ser Ser Val Ile Leu Phe 260 265 270 Leu Asn Lys Lys Asp Leu Leu Glu Asp Lys Ile Leu Tyr Ser His Leu 275 280 285 Val Asp Tyr Phe Pro Glu Phe Asp Gly Pro Gln Arg Asp Ala Gln Ala 290 295 300 Ala Arg Glu Phe Ile Leu Lys Met Phe Val Asp Leu Asn Pro Asp Ser 305 310 315 320 Asp Lys Ile Ile Tyr Ser His Phe Thr Cys Ala Thr Asp Thr Glu Asn 325 330 335 Ile Arg Phe Val Phe Ala Ala Val Lys Asp Thr Ile Leu Gln Leu Asn 340 345 350 Leu Lys Glu Tyr Asn Leu Val 355 <210> 271 <211> 4190 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 271 aggttgtccg gcgctgtcgc tcggttgcgg cggctgcggt tggcggtggc tgcggcggcg 60 gcgcgggctg agtgcggccg cgcgggagtc cgcggctggc gcggcccgag cggggacccg 120 gcggctcgcc aggcggcggc cgaggcgggg cgggccggcc cggggccgag ggccggtggc 180 cgaggccgga gggccgcggc gggcggcggc cgaggcggct ccggccaggg ccgggccggg 240 ggccgggggg cggcggcggg caggcggccg cgtcggccgg ggccgggacg atgactctgg 300 agtccatgat ggcgtgttgc ctgagcgatg aggtgaagga gtccaagcgg atcaacgccg 360 agatcgagaa gcagctgcgg cgggacaagc gcgacgcccg gcgcgagctc aagctgctgc 420 tgctcggcac gggcgagagc gggaagagca cgttcatcaa gcagatgcgc atcatccacg 480 gcgccggcta ctcggaggag gacaagcgcg gcttcaccaa gctcgtctac cagaacatct 540 tcaccgccat gcaggccatg atccgggcca tggagacgct caagatcctc tacaagtacg 600 agcagaacaa ggccaatgcg ctcctgatcc gggaggtgga cgtggagaag gtgaccacct 660 tcgagcatca gtacgtcagt gccatcaaga ccctgtggga ggacccgggc atccaggaat 720 gctacgaccg caggcgcgag taccagctct ccgactctgc caagtactac ctgaccgacg 780 ttgaccgcat cgccaccttg ggctacctgc ccacccagca ggacgtgctg cgggtccgcg 840 tgcccaccac cggcatcatc gagtaccctt tcgacctgga gaacatcatc ttccggatgg 900 tggatgtggg gggccagcgg tcggagcgga ggaagtggat ccactgcttt gagaacgtga 960 catccatcat gtttctcgtc gccctcagcg aatacgacca agtcctggtg gagtcggaca 1020 acgagaaccg gatggaggag agcaaagccc tgttccggac catcatcacc tacccctggt 1080 tccagaactc ctccgtcatc ctcttcctca acaagaagga cctgctggag gacaagatcc 1140 tgtactcgca cctggtggac tacttccccg agttcgatgg tccccagcgg gacgcccagg 1200 cggcgcggga gttcatcctg aagatgttcg tggacctgaa ccccgacagc gacaagatca 1260 tctactcaca cttcacgtgt gccaccgaca cggagaacat ccgcttcgtg ttcgcggccg 1320 tgaaggacac catcctgcag ctcaacctca aggagtacaa cctggtctga gcgcccaggc 1380 ccagggagac gggatggaga cacggggcag gaccttcctt ccacggagcc tgcggctgcc 1440 gggcgggtgg cgctgccgag tccgggccgg ggcctctgcc cgcgggagga gatttttttt 1500 tttcatattt ttaacaaatg gtttttattt cacagttatc aggggatgta catctctccc 1560 tccgtacact tcgcgcacct tctcaccttt tgtcaacggc aaaggcagcc tttttctggc 1620 cttgacttat ggctcgcttt tttctaaaaa aaaaaaaaaa agaaagaaag aaaaaaagca 1680 acgaaacata aaacacacaa gcgccccgtg cccccagtga ctctgggcct cacagagccc 1740 ccgccagcca gcatggggcc ccgccctgca gccagtcacg cgcccccaca ccgcagcccc 1800 ccgtggctgt ccttccaacc ccacgtgctt tttctttctc ctgcccgctt cttttcttca 1860 tcacaaaagg cgtggagact cggagacgga cgtttttccc cttttttaag ttattgacgc 1920 ccagcgcgcc tcgcctcttc acccatcaac gctgtgcttt gcccactgga ctcctgaaga 1980 gggggtgggg ggctccctcg gtcgcccacc ctgggaagtg cctaaccttt tattttattt 2040 tatttttttg aggaaaaaga acgcctgact cacaggttga agaaacaccc tgggccctct 2100 ctcatggccg ggttccccgt ccctctgcag aggctgggaa gggtccccgg gctggagcca 2160 cgggggcttc tctgggctgt gcctccgggg ccaacactgg ctgcttgggg ctgcccgggg 2220 actccagagg gctgcacggc caccctgccc tggctagagc gcaccccacc ggagcccacg 2280 tgggctgggc ggctggaggg atggtccccc ggtgacactg ggagaaaggc cacttggatg 2340 ggggcgtttc tgttttgttc cgctttgtga tgtcaccaat ttggaaacag cgagggtggg 2400 tggggacttt tacagaatat tctcaggtgt gtacccgaga ggcagagaga gggacgtggc 2460 cggcagctct gtgcgtggcc ttgtcccaag cacttgcgcc cgcccccgag cgccgccccc 2520 ggggagcggg aagccagcac tcgcactttg gccaggggcg cgtggaaggt ggtggcaggc 2580 accggcctgg gcagcttcca ggcctggctg gccacgacca cggcccgagg gggagcccgc 2640 caggccacgc cgcactgagc cacagccccg ggggccgcct cccggggccc cttgaggcac 2700 tgaggcaccg agactggttc tccccgagag actcggaagg tggggaacga ggggactgtg 2760 tttggggagg tggctttttc gtctgctgtt gactgaacac tacagcgccc tgtggttccg 2820 ggcttcgcac agctgtccca gggatggatc gcctgtgctg ccttcgcccg ccgccacacc 2880 gggaccctgc acggctgctt ctggcctcga cagatgacaa aagaaacagc cccaaaatac 2940 gaccactcca accagcagtt cccgcctgcc tgcccgccac tgtcaggcct gccctggcct 3000 cctcgtccgc agggctgtct gctggcttct gggggcagaa gagcggggag ccccgtggaa 3060 gggtcagggg agaccaggtc agggcagcta catttctggt gatcagcccc atggggagac 3120 ggggctggcg ggataccccc cccccggctt ccccacacca cttctgtctc acccggaagc 3180 gtcctttttt tgtgccaggt gtctacctaa gagggttggt gccagaagcc ccccatggcg 3240 agtgctgggg cccggcggtg ccctggggga gcagatgggg ccacccctgg cagggccgct 3300 acaacctttt ccagcagcgg agccctctgg ggggcctgtg cttgtggcat ctctgagggc 3360 ctagattgca caaggtgacc tggccgtggc ctgagggtgg agtcgcccag cacgcaggcc 3420 ggggcgctgc ggggctaagt attaggcctt cccagggagg gggcgtgcca agcatcccag 3480 agccgggctg ggaccgccaa aacgtcgtgg cctggatcct ctgggtctga gtgcctgatc 3540 ccctgccccc caaaaaagca gaggtaggtg ttgcaggccc agggcagggg tgcctgcccc 3600 aggagagtcc caggcagtgg ttctcgtgcc agtggcaccc aggggcaagg acagccaacc 3660 cccacccttg ccacgtgtgg ggccacgtgg gcatgtgggg tgtgtgtttt taccttggtg 3720 aatctcacct gccaacgatt tctcgtgagt gccgaccacc ttctccgacc atgttacgcc 3780 cgggcggcag cagcccccgg ccactgcaaa cccatgccct gggtcccccg gctcccccag 3840 ggaggcatcc ccgtgccaat gtcccccagt ggtggcagca gatcctgtgg ccggcctggc 3900 ggacgggacc cagtgatact tgtatattac acagtcctga tttcagacaa tttcaacctt 3960 aatctattta aaaaagaata ttctatacaa gctgttttta agccttttac catttgaaat 4020 gcatgtgttg tgcgcgttgg ggatgggagg aggggctgag gagcggctca gtgtcacctc 4080 ccacagccac cggccctgac ccttaatcca gacaccgatg gaagtcgact tttcatatct 4140 ttctcctgaa atgaactctg ttttaaattg gaataaattt tgttcctaaa 4190 <210> 272 <211> 661 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 272 Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Cys Leu Leu His Leu Ala Val Ile Gly 1 5 10 15 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp 20 25 30 Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu Arg Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu 35 40 45 Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp Cys Trp Arg Gly Gly 50 55 60 Gln Val Ser Leu Lys Val Ser Asn Asp Gly Pro Thr Leu Ile Gly Ala 65 70 75 80 Asn Ala Ser Phe Ser Ile Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys Val 85 90 95 Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Trp Val Asn Asn Thr Ile Ile Asn Gly 100 105 110 Ser Gln Val Trp Gly Gly Gln Pro Val Tyr Pro Gln Glu Thr Asp Asp 115 120 125 Ala Cys Ile Phe Pro Asp Gly Gly Pro Cys Pro Ser Gly Ser Trp Ser 130 135 140 Gln Lys Arg Ser Phe Val Tyr Val Trp Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp 145 150 155 160 Gln Val Leu Gly Gly Pro Val Ser Gly Leu Ser Ile Gly Thr Gly Arg 165 170 175 Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg Arg 180 185 190 Gly Ser Arg Ser Tyr Val Pro Leu Ala His Ser Ser Ser Ala Phe Thr 195 200 205 Ile Thr Asp Gln Val Pro Phe Ser Val Ser Val Ser Gln Leu Arg Ala 210 215 220 Leu Asp Gly Gly Asn Lys His Phe Leu Arg Asn Gln Pro Leu Thr Phe 225 230 235 240 Ala Leu Gln Leu His Asp Pro Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Ala Asp Leu 245 250 255 Ser Tyr Thr Trp Asp Phe Gly Asp Ser Ser Gly Thr Leu Ile Ser Arg 260 265 270 Ala Leu Val Val Thr His Thr Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala 275 280 285 Gln Val Val Leu Gln Ala Ala Ile Pro Leu Thr Ser Cys Gly Ser Ser 290 295 300 Pro Val Pro Gly Thr Thr Asp Gly His Arg Pro Thr Ala Glu Ala Pro 305 310 315 320 Asn Thr Thr Ala Gly Gln Val Pro Thr Thr Glu Val Val Gly Thr Thr 325 330 335 Pro Gly Gln Ala Pro Thr Ala Glu Pro Ser Gly Thr Thr Ser Val Gln 340 345 350 Val Pro Thr Thr Glu Val Ile Ser Thr Ala Pro Val Gln Met Pro Thr 355 360 365 Ala Glu Ser Thr Gly Met Thr Pro Glu Lys Val Pro Val Ser Glu Val 370 375 380 Met Gly Thr Thr Leu Ala Glu Met Ser Thr Pro Glu Ala Thr Gly Met 385 390 395 400 Thr Pro Ala Glu Val Ser Ile Val Val Leu Ser Gly Thr Thr Ala Ala 405 410 415 Gln Val Thr Thr Thr Glu Trp Val Glu Thr Thr Ala Arg Glu Leu Pro 420 425 430 Ile Pro Glu Pro Glu Gly Pro Asp Ala Ser Ser Ile Met Ser Thr Glu 435 440 445 Ser Ile Thr Gly Ser Leu Gly Pro Leu Leu Asp Gly Thr Ala Thr Leu 450 455 460 Arg Leu Val Lys Arg Gln Val Pro Leu Asp Cys Val Leu Tyr Arg Tyr 465 470 475 480 Gly Ser Phe Ser Val Thr Leu Asp Ile Val Gln Gly Ile Glu Ser Ala 485 490 495 Glu Ile Leu Gln Ala Val Pro Ser Gly Glu Gly Asp Ala Phe Glu Leu 500 505 510 Thr Val Ser Cys Gln Gly Gly Leu Pro Lys Glu Ala Cys Met Glu Ile 515 520 525 Ser Ser Pro Gly Cys Gln Pro Pro Ala Gln Arg Leu Cys Gln Pro Val 530 535 540 Leu Pro Ser Pro Ala Cys Gln Leu Val Leu His Gln Ile Leu Lys Gly 545 550 555 560 Gly Ser Gly Thr Tyr Cys Leu Asn Val Ser Leu Ala Asp Thr Asn Ser 565 570 575 Leu Ala Val Val Ser Thr Gln Leu Ile Met Pro Gly Gln Glu Ala Gly 580 585 590 Leu Gly Gln Val Pro Leu Ile Val Gly Ile Leu Leu Val Leu Met Ala 595 600 605 Val Val Leu Ala Ser Leu Ile Tyr Arg Arg Arg Leu Met Lys Gln Asp 610 615 620 Phe Ser Val Pro Gln Leu Pro His Ser Ser Ser His Trp Leu Arg Leu 625 630 635 640 Pro Arg Ile Phe Cys Ser Cys Pro Ile Gly Glu Asn Ser Pro Leu Leu 645 650 655 Ser Gly Gln Gln Val 660 <210> 273 <211> 626 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 273 Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Cys Leu Leu His Leu Ala Val Ile Gly 1 5 10 15 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp 20 25 30 Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu Arg Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu 35 40 45 Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp Cys Trp Arg Gly Gly 50 55 60 Gln Val Ser Leu Lys Val Ser Asn Asp Gly Pro Thr Leu Ile Gly Ala 65 70 75 80 Asn Ala Ser Phe Ser Ile Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys Val 85 90 95 Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Trp Val Asn Asn Thr Ile Ile Asn Gly 100 105 110 Ser Gln Val Trp Gly Gly Gln Pro Val Tyr Pro Gln Glu Thr Asp Asp 115 120 125 Ala Cys Ile Phe Pro Asp Gly Gly Pro Cys Pro Ser Gly Ser Trp Ser 130 135 140 Gln Lys Arg Ser Phe Val Tyr Val Trp Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp 145 150 155 160 Gln Val Leu Gly Gly Pro Val Ser Gly Leu Ser Ile Gly Thr Gly Arg 165 170 175 Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg Arg 180 185 190 Gly Ser Arg Ser Tyr Val Pro Leu Ala His Ser Ser Ser Ala Phe Thr 195 200 205 Ile Thr Asp Gln Val Pro Phe Ser Val Ser Val Ser Gln Leu Arg Ala 210 215 220 Leu Asp Gly Gly Asn Lys His Phe Leu Arg Asn Gln Pro Leu Thr Phe 225 230 235 240 Ala Leu Gln Leu His Asp Pro Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Ala Asp Leu 245 250 255 Ser Tyr Thr Trp Asp Phe Gly Asp Ser Ser Gly Thr Leu Ile Ser Arg 260 265 270 Ala Leu Val Val Thr His Thr Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala 275 280 285 Gln Val Val Leu Gln Ala Ala Ile Pro Leu Thr Ser Cys Gly Ser Ser 290 295 300 Pro Val Pro Gly Thr Thr Asp Gly His Arg Pro Thr Ala Glu Ala Pro 305 310 315 320 Asn Thr Thr Ala Gly Gln Val Pro Thr Thr Glu Val Val Gly Thr Thr 325 330 335 Pro Gly Gln Ala Pro Thr Ala Glu Pro Ser Gly Thr Thr Ser Val Gln 340 345 350 Val Pro Thr Thr Glu Val Ile Ser Thr Ala Pro Val Gln Met Pro Thr 355 360 365 Ala Glu Ser Thr Ala Ala Gln Val Thr Thr Thr Glu Trp Val Glu Thr 370 375 380 Thr Ala Arg Glu Leu Pro Ile Pro Glu Pro Glu Gly Pro Asp Ala Ser 385 390 395 400 Ser Ile Met Ser Thr Glu Ser Ile Thr Gly Ser Leu Gly Pro Leu Leu 405 410 415 Asp Gly Thr Ala Thr Leu Arg Leu Val Lys Arg Gln Val Pro Leu Asp 420 425 430 Cys Val Leu Tyr Arg Tyr Gly Ser Phe Ser Val Thr Leu Asp Ile Val 435 440 445 Gln Gly Ile Glu Ser Ala Glu Ile Leu Gln Ala Val Pro Ser Gly Glu 450 455 460 Gly Asp Ala Phe Glu Leu Thr Val Ser Cys Gln Gly Gly Leu Pro Lys 465 470 475 480 Glu Ala Cys Met Glu Ile Ser Ser Pro Gly Cys Gln Pro Pro Ala Gln 485 490 495 Arg Leu Cys Gln Pro Val Leu Pro Ser Pro Ala Cys Gln Leu Val Leu 500 505 510 His Gln Ile Leu Lys Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Cys Leu Asn Val Ser 515 520 525 Leu Ala Asp Thr Asn Ser Leu Ala Val Val Ser Thr Gln Leu Ile Met 530 535 540 Pro Val Pro Gly Ile Leu Leu Thr Gly Gln Glu Ala Gly Leu Gly Gln 545 550 555 560 Val Pro Leu Ile Val Gly Ile Leu Leu Val Leu Met Ala Val Val Leu 565 570 575 Ala Ser Leu Ile Tyr Arg Arg Arg Leu Met Lys Gln Asp Phe Ser Val 580 585 590 Pro Gln Leu Pro His Ser Ser Ser His Trp Leu Arg Leu Pro Arg Ile 595 600 605 Phe Cys Ser Cys Pro Ile Gly Glu Asn Ser Pro Leu Leu Ser Gly Gln 610 615 620 Gln Val 625 <210> 274 <211> 619 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 274 Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Cys Leu Leu His Leu Ala Val Ile Gly 1 5 10 15 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp 20 25 30 Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu Arg Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu 35 40 45 Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp Cys Trp Arg Gly Gly 50 55 60 Gln Val Ser Leu Lys Val Ser Asn Asp Gly Pro Thr Leu Ile Gly Ala 65 70 75 80 Asn Ala Ser Phe Ser Ile Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys Val 85 90 95 Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Trp Val Asn Asn Thr Ile Ile Asn Gly 100 105 110 Ser Gln Val Trp Gly Gly Gln Pro Val Tyr Pro Gln Glu Thr Asp Asp 115 120 125 Ala Cys Ile Phe Pro Asp Gly Gly Pro Cys Pro Ser Gly Ser Trp Ser 130 135 140 Gln Lys Arg Ser Phe Val Tyr Val Trp Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp 145 150 155 160 Gln Val Leu Gly Gly Pro Val Ser Gly Leu Ser Ile Gly Thr Gly Arg 165 170 175 Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg Arg 180 185 190 Gly Ser Arg Ser Tyr Val Pro Leu Ala His Ser Ser Ser Ala Phe Thr 195 200 205 Ile Thr Asp Gln Val Pro Phe Ser Val Ser Val Ser Gln Leu Arg Ala 210 215 220 Leu Asp Gly Gly Asn Lys His Phe Leu Arg Asn Gln Pro Leu Thr Phe 225 230 235 240 Ala Leu Gln Leu His Asp Pro Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Ala Asp Leu 245 250 255 Ser Tyr Thr Trp Asp Phe Gly Asp Ser Ser Gly Thr Leu Ile Ser Arg 260 265 270 Ala Leu Val Val Thr His Thr Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala 275 280 285 Gln Val Val Leu Gln Ala Ala Ile Pro Leu Thr Ser Cys Gly Ser Ser 290 295 300 Pro Val Pro Gly Thr Thr Asp Gly His Arg Pro Thr Ala Glu Ala Pro 305 310 315 320 Asn Thr Thr Ala Gly Gln Val Pro Thr Thr Glu Val Val Gly Thr Thr 325 330 335 Pro Gly Gln Ala Pro Thr Ala Glu Pro Ser Gly Thr Thr Ser Val Gln 340 345 350 Val Pro Thr Thr Glu Val Ile Ser Thr Ala Pro Val Gln Met Pro Thr 355 360 365 Ala Glu Ser Thr Ala Ala Gln Val Thr Thr Thr Glu Trp Val Glu Thr 370 375 380 Thr Ala Arg Glu Leu Pro Ile Pro Glu Pro Glu Gly Pro Asp Ala Ser 385 390 395 400 Ser Ile Met Ser Thr Glu Ser Ile Thr Gly Ser Leu Gly Pro Leu Leu 405 410 415 Asp Gly Thr Ala Thr Leu Arg Leu Val Lys Arg Gln Val Pro Leu Asp 420 425 430 Cys Val Leu Tyr Arg Tyr Gly Ser Phe Ser Val Thr Leu Asp Ile Val 435 440 445 Gln Gly Ile Glu Ser Ala Glu Ile Leu Gln Ala Val Pro Ser Gly Glu 450 455 460 Gly Asp Ala Phe Glu Leu Thr Val Ser Cys Gln Gly Gly Leu Pro Lys 465 470 475 480 Glu Ala Cys Met Glu Ile Ser Ser Pro Gly Cys Gln Pro Pro Ala Gln 485 490 495 Arg Leu Cys Gln Pro Val Leu Pro Ser Pro Ala Cys Gln Leu Val Leu 500 505 510 His Gln Ile Leu Lys Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Cys Leu Asn Val Ser 515 520 525 Leu Ala Asp Thr Asn Ser Leu Ala Val Val Ser Thr Gln Leu Ile Met 530 535 540 Pro Gly Gln Glu Ala Gly Leu Gly Gln Val Pro Leu Ile Val Gly Ile 545 550 555 560 Leu Leu Val Leu Met Ala Val Val Leu Ala Ser Leu Ile Tyr Arg Arg 565 570 575 Arg Leu Met Lys Gln Asp Phe Ser Val Pro Gln Leu Pro His Ser Ser 580 585 590 Ser His Trp Leu Arg Leu Pro Arg Ile Phe Cys Ser Cys Pro Ile Gly 595 600 605 Glu Asn Ser Pro Leu Leu Ser Gly Gln Gln Val 610 615 <210> 275 <211> 575 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 275 Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Cys Leu Leu His Leu Ala Val Ile Gly 1 5 10 15 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys Gly Ser Gln Val Trp Gly Gly 20 25 30 Gln Pro Val Tyr Pro Gln Glu Thr Asp Asp Ala Cys Ile Phe Pro Asp 35 40 45 Gly Gly Pro Cys Pro Ser Gly Ser Trp Ser Gln Lys Arg Ser Phe Val 50 55 60 Tyr Val Trp Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp Gln Val Leu Gly Gly Pro 65 70 75 80 Val Ser Gly Leu Ser Ile Gly Thr Gly Arg Ala Met Leu Gly Thr His 85 90 95 Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg Arg Gly Ser Arg Ser Tyr Val 100 105 110 Pro Leu Ala His Ser Ser Ser Ala Phe Thr Ile Thr Asp Gln Val Pro 115 120 125 Phe Ser Val Ser Val Ser Gln Leu Arg Ala Leu Asp Gly Gly Asn Lys 130 135 140 His Phe Leu Arg Asn Gln Pro Leu Thr Phe Ala Leu Gln Leu His Asp 145 150 155 160 Pro Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Ala Asp Leu Ser Tyr Thr Trp Asp Phe 165 170 175 Gly Asp Ser Ser Gly Thr Leu Ile Ser Arg Ala Leu Val Val Thr His 180 185 190 Thr Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala Gln Val Val Leu Gln Ala 195 200 205 Ala Ile Pro Leu Thr Ser Cys Gly Ser Ser Pro Val Pro Gly Thr Thr 210 215 220 Asp Gly His Arg Pro Thr Ala Glu Ala Pro Asn Thr Thr Ala Gly Gln 225 230 235 240 Val Pro Thr Thr Glu Val Val Gly Thr Thr Pro Gly Gln Ala Pro Thr 245 250 255 Ala Glu Pro Ser Gly Thr Thr Ser Val Gln Val Pro Thr Thr Glu Val 260 265 270 Ile Ser Thr Ala Pro Val Gln Met Pro Thr Ala Glu Ser Thr Gly Met 275 280 285 Thr Pro Glu Lys Val Pro Val Ser Glu Val Met Gly Thr Thr Leu Ala 290 295 300 Glu Met Ser Thr Pro Glu Ala Thr Gly Met Thr Pro Ala Glu Val Ser 305 310 315 320 Ile Val Val Leu Ser Gly Thr Thr Ala Ala Gln Val Thr Thr Thr Glu 325 330 335 Trp Val Glu Thr Thr Ala Arg Glu Leu Pro Ile Pro Glu Pro Glu Gly 340 345 350 Pro Asp Ala Ser Ser Ile Met Ser Thr Glu Ser Ile Thr Gly Ser Leu 355 360 365 Gly Pro Leu Leu Asp Gly Thr Ala Thr Leu Arg Leu Val Lys Arg Gln 370 375 380 Val Pro Leu Asp Cys Val Leu Tyr Arg Tyr Gly Ser Phe Ser Val Thr 385 390 395 400 Leu Asp Ile Val Gln Gly Ile Glu Ser Ala Glu Ile Leu Gln Ala Val 405 410 415 Pro Ser Gly Glu Gly Asp Ala Phe Glu Leu Thr Val Ser Cys Gln Gly 420 425 430 Gly Leu Pro Lys Glu Ala Cys Met Glu Ile Ser Ser Pro Gly Cys Gln 435 440 445 Pro Pro Ala Gln Arg Leu Cys Gln Pro Val Leu Pro Ser Pro Ala Cys 450 455 460 Gln Leu Val Leu His Gln Ile Leu Lys Gly Gly Ser Gly Thr Tyr Cys 465 470 475 480 Leu Asn Val Ser Leu Ala Asp Thr Asn Ser Leu Ala Val Val Ser Thr 485 490 495 Gln Leu Ile Met Pro Gly Gln Glu Ala Gly Leu Gly Gln Val Pro Leu 500 505 510 Ile Val Gly Ile Leu Leu Val Leu Met Ala Val Val Leu Ala Ser Leu 515 520 525 Ile Tyr Arg Arg Arg Leu Met Lys Gln Asp Phe Ser Val Pro Gln Leu 530 535 540 Pro His Ser Ser Ser His Trp Leu Arg Leu Pro Arg Ile Phe Cys Ser 545 550 555 560 Cys Pro Ile Gly Glu Asn Ser Pro Leu Leu Ser Gly Gln Gln Val 565 570 575 <210> 276 <211> 668 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 276 Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Cys Leu Leu His Leu Ala Val Ile Gly 1 5 10 15 Ala Leu Leu Ala Val Gly Ala Thr Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp 20 25 30 Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu Arg Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu 35 40 45 Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp Cys Trp Arg Gly Gly 50 55 60 Gln Val Ser Leu Lys Val Ser Asn Asp Gly Pro Thr Leu Ile Gly Ala 65 70 75 80 Asn Ala Ser Phe Ser Ile Ala Leu Asn Phe Pro Gly Ser Gln Lys Val 85 90 95 Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Trp Val Asn Asn Thr Ile Ile Asn Gly 100 105 110 Ser Gln Val Trp Gly Gly Gln Pro Val Tyr Pro Gln Glu Thr Asp Asp 115 120 125 Ala Cys Ile Phe Pro Asp Gly Gly Pro Cys Pro Ser Gly Ser Trp Ser 130 135 140 Gln Lys Arg Ser Phe Val Tyr Val Trp Lys Thr Trp Gly Gln Tyr Trp 145 150 155 160 Gln Val Leu Gly Gly Pro Val Ser Gly Leu Ser Ile Gly Thr Gly Arg 165 170 175 Ala Met Leu Gly Thr His Thr Met Glu Val Thr Val Tyr His Arg Arg 180 185 190 Gly Ser Arg Ser Tyr Val Pro Leu Ala His Ser Ser Ser Ala Phe Thr 195 200 205 Ile Thr Asp Gln Val Pro Phe Ser Val Ser Val Ser Gln Leu Arg Ala 210 215 220 Leu Asp Gly Gly Asn Lys His Phe Leu Arg Asn Gln Pro Leu Thr Phe 225 230 235 240 Ala Leu Gln Leu His Asp Pro Ser Gly Tyr Leu Ala Glu Ala Asp Leu 245 250 255 Ser Tyr Thr Trp Asp Phe Gly Asp Ser Ser Gly Thr Leu Ile Ser Arg 260 265 270 Ala Leu Val Val Thr His Thr Tyr Leu Glu Pro Gly Pro Val Thr Ala 275 280 285 Gln Val Val Leu Gln Ala Ala Ile Pro Leu Thr Ser Cys Gly Ser Ser 290 295 300 Pro Val Pro Gly Thr Thr Asp Gly His Arg Pro Thr Ala Glu Ala Pro 305 310 315 320 Asn Thr Thr Ala Gly Gln Val Pro Thr Thr Glu Val Val Gly Thr Thr 325 330 335 Pro Gly Gln Ala Pro Thr Ala Glu Pro Ser Gly Thr Thr Ser Val Gln 340 345 350 Val Pro Thr Thr Glu Val Ile Ser Thr Ala Pro Val Gln Met Pro Thr 355 360 365 Ala Glu Ser Thr Gly Met Thr Pro Glu Lys Val Pro Val Ser Glu Val 370 375 380 Met Gly Thr Thr Leu Ala Glu Met Ser Thr Pro Glu Ala Thr Gly Met 385 390 395 400 Thr Pro Ala Glu Val Ser Ile Val Val Leu Ser Gly Thr Thr Ala Ala 405 410 415 Gln Val Thr Thr Thr Glu Trp Val Glu Thr Thr Ala Arg Glu Leu Pro 420 425 430 Ile Pro Glu Pro Glu Gly Pro Asp Ala Ser Ser Ile Met Ser Thr Glu 435 440 445 Ser Ile Thr Gly Ser Leu Gly Pro Leu Leu Asp Gly Thr Ala Thr Leu 450 455 460 Arg Leu Val Lys Arg Gln Val Pro Leu Asp Cys Val Leu Tyr Arg Tyr 465 470 475 480 Gly Ser Phe Ser Val Thr Leu Asp Ile Val Gln Gly Ile Glu Ser Ala 485 490 495 Glu Ile Leu Gln Ala Val Pro Ser Gly Glu Gly Asp Ala Phe Glu Leu 500 505 510 Thr Val Ser Cys Gln Gly Gly Leu Pro Lys Glu Ala Cys Met Glu Ile 515 520 525 Ser Ser Pro Gly Cys Gln Pro Pro Ala Gln Arg Leu Cys Gln Pro Val 530 535 540 Leu Pro Ser Pro Ala Cys Gln Leu Val Leu His Gln Ile Leu Lys Gly 545 550 555 560 Gly Ser Gly Thr Tyr Cys Leu Asn Val Ser Leu Ala Asp Thr Asn Ser 565 570 575 Leu Ala Val Val Ser Thr Gln Leu Ile Met Pro Val Pro Gly Ile Leu 580 585 590 Leu Thr Gly Gln Glu Ala Gly Leu Gly Gln Val Pro Leu Ile Val Gly 595 600 605 Ile Leu Leu Val Leu Met Ala Val Val Leu Ala Ser Leu Ile Tyr Arg 610 615 620 Arg Arg Leu Met Lys Gln Asp Phe Ser Val Pro Gln Leu Pro His Ser 625 630 635 640 Ser Ser His Trp Leu Arg Leu Pro Arg Ile Phe Cys Ser Cys Pro Ile 645 650 655 Gly Glu Asn Ser Pro Leu Leu Ser Gly Gln Gln Val 660 665 <210> 277 <211> 2195 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 277 cccagcgctc ctccccgcaa atgatcccgc cccaggggcc tatcccagtc cccccagtgc 60 ctttggttgc tggagggaag aacacaatgg atctggtgct aaaaagatgc cttcttcatt 120 tggctgtgat aggtgctttg ctggctgtgg gggctacaaa agtacccaga aaccaggact 180 ggcttggtgt ctcaaggcaa ctcagaacca aagcctggaa caggcagctg tatccagagt 240 ggacagaagc ccagagactt gactgctgga gaggtggtca agtgtccctc aaggtcagta 300 atgatgggcc tacactgatt ggtgcaaatg cctccttctc tattgccttg aacttccctg 360 gaagccaaaa ggtattgcca gatgggcagg ttatctgggt caacaatacc atcatcaatg 420 ggagccaggt gtggggagga cagccagtgt atccccagga aactgacgat gcctgcatct 480 tccctgatgg tggaccttgc ccatctggct cttggtctca gaagagaagc tttgtttatg 540 tctggaagac ctggggccaa tactggcaag ttctaggggg cccagtgtct gggctgagca 600 ttgggacagg cagggcaatg ctgggcacac acaccatgga agtgactgtc taccatcgcc 660 ggggatcccg gagctatgtg cctcttgctc attccagctc agccttcacc attactgacc 720 aggtgccttt ctccgtgagc gtgtcccagt tgcgggcctt ggatggaggg aacaagcact 780 tcctgagaaa tcagcctctg acctttgccc tccagctcca tgaccccagt ggctatctgg 840 ctgaagctga cctctcctac acctgggact ttggagacag tagtggaacc ctgatctctc 900 gggcacttgt ggtcactcat acttacctgg agcctggccc agtcactgcc caggtggtcc 960 tgcaggctgc cattcctctc acctcctgtg gctcctcccc agttccaggc accacagatg 1020 ggcacaggcc aactgcagag gcccctaaca ccacagctgg ccaagtgcct actacagaag 1080 ttgtgggtac tacacctggt caggcgccaa ctgcagagcc ctctggaacc acatctgtgc 1140 aggtgccaac cactgaagtc ataagcactg cacctgtgca gatgccaact gcagagagca 1200 caggtatgac acctgagaag gtgccagttt cagaggtcat gggtaccaca ctggcagaga 1260 tgtcaactcc agaggctaca ggtatgacac ctgcagaggt atcaattgtg gtgctttctg 1320 gaaccacagc tgcacaggta acaactacag agtgggtgga gaccacagct agagagctac 1380 ctatccctga gcctgaaggt ccagatgcca gctcaatcat gtctacggaa agtattacag 1440 gttccctggg ccccctgctg gatggtacag ccaccttaag gctggtgaag agacaagtcc 1500 ccctggattg tgttctgtat cgatatggtt ccttttccgt caccctggac attgtccagg 1560 gtattgaaag tgccgagatc ctgcaggctg tgccgtccgg tgagggggat gcatttgagc 1620 tgactgtgtc ctgccaaggc gggctgccca aggaagcctg catggagatc tcatcgccag 1680 ggtgccagcc ccctgcccag cggctgtgcc agcctgtgct acccagccca gcctgccagc 1740 tggttctgca ccagatactg aagggtggct cggggacata ctgcctcaat gtgtctctgg 1800 ctgataccaa cagcctggca gtggtcagca cccagcttat catgcctggt caagaagcag 1860 gccttgggca ggttccgctg atcgtgggca tcttgctggt gttgatggct gtggtccttg 1920 catctctgat atataggcgc agacttatga agcaagactt ctccgtaccc cagttgccac 1980 atagcagcag tcactggctg cgtctacccc gcatcttctg ctcttgtccc attggtgaga 2040 acagccccct cctcagtggg cagcaggtct gagtactctc atatgatgct gtgattttcc 2100 tggagttgac agaaacacct atatttcccc cagtcttccc tgggagacta ctattaactg 2160 aaataaatac tcagagcctg aaaaaaaaaa aaaaa 2195 <210> 278 <211> 1902 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 278 gggcctatcc cagtcccccc agtgcctttg gttgctggag ggaagaacac aatggatctg 60 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgctggc tgtgggggct 120 acaaaaggga gccaggtgtg gggaggacag ccagtgtatc cccaggaaac tgacgatgcc 180 tgcatcttcc ctgatggtgg accttgccca tctggctctt ggtctcagaa gagaagcttt 240 gtttatgtct ggaagacctg gggccaatac tggcaagttc tagggggccc agtgtctggg 300 ctgagcattg ggacaggcag ggcaatgctg ggcacacaca ccatggaagt gactgtctac 360 catcgccggg gatcccggag ctatgtgcct cttgctcatt ccagctcagc cttcaccatt 420 actgaccagg tgcctttctc cgtgagcgtg tcccagttgc gggccttgga tggagggaac 480 aagcacttcc tgagaaatca gcctctgacc tttgccctcc agctccatga ccccagtggc 540 tatctggctg aagctgacct ctcctacacc tgggactttg gagacagtag tggaaccctg 600 atctctcggg cacttgtggt cactcatact tacctggagc ctggcccagt cactgcccag 660 gtggtcctgc aggctgccat tcctctcacc tcctgtggct cctccccagt tccaggcacc 720 acagatgggc acaggccaac tgcagaggcc cctaacacca cagctggcca agtgcctact 780 acagaagttg tgggtactac acctggtcag gcgccaactg cagagccctc tggaaccaca 840 tctgtgcagg tgccaaccac tgaagtcata agcactgcac ctgtgcagat gccaactgca 900 gagagcacag gtatgacacc tgagaaggtg ccagtttcag aggtcatggg taccacactg 960 gcagagatgt caactccaga ggctacaggt atgacacctg cagaggtatc aattgtggtg 1020 ctttctggaa ccacagctgc acaggtaaca actacagagt gggtggagac cacagctaga 1080 gagctaccta tccctgagcc tgaaggtcca gatgccagct caatcatgtc tacggaaagt 1140 attacaggtt ccctgggccc cctgctggat ggtacagcca ccttaaggct ggtgaagaga 1200 caagtccccc tggattgtgt tctgtatcga tatggttcct tttccgtcac cctggacatt 1260 gtccagggta ttgaaagtgc cgagatcctg caggctgtgc cgtccggtga gggggatgca 1320 tttgagctga ctgtgtcctg ccaaggcggg ctgcccaagg aagcctgcat ggagatctca 1380 tcgccagggt gccagccccc tgcccagcgg ctgtgccagc ctgtgctacc cagcccagcc 1440 tgccagctgg ttctgcacca gatactgaag ggtggctcgg ggacatactg cctcaatgtg 1500 tctctggctg ataccaacag cctggcagtg gtcagcaccc agcttatcat gcctggtcaa 1560 gaagcaggcc ttgggcaggt tccgctgatc gtgggcatct tgctggtgtt gatggctgtg 1620 gtccttgcat ctctgatata taggcgcaga cttatgaagc aagacttctc cgtaccccag 1680 ttgccacata gcagcagtca ctggctgcgt ctaccccgca tcttctgctc ttgtcccatt 1740 ggtgagaaca gccccctcct cagtgggcag caggtctgag tactctcata tgatgctgtg 1800 attttcctgg agttgacaga aacacctata tttcccccag tcttccctgg gagactacta 1860 ttaactgaaa taaatactca gagcctgaaa aaaaaaaaaa aa 1902 <210> 279 <211> 2181 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 279 gggcctatcc cagtcccccc agtgcctttg gttgctggag ggaagaacac aatggatctg 60 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgctggc tgtgggggct 120 acaaaagtac ccagaaacca ggactggctt ggtgtctcaa ggcaactcag aaccaaagcc 180 tggaacaggc agctgtatcc agagtggaca gaagcccaga gacttgactg ctggagaggt 240 ggtcaagtgt ccctcaaggt cagtaatgat gggcctacac tgattggtgc aaatgcctcc 300 ttctctattg ccttgaactt ccctggaagc caaaaggtat tgccagatgg gcaggttatc 360 tgggtcaaca ataccatcat caatgggagc caggtgtggg gaggacagcc agtgtatccc 420 caggaaactg acgatgcctg catcttccct gatggtggac cttgcccatc tggctcttgg 480 tctcagaaga gaagctttgt ttatgtctgg aagacctggg gccaatactg gcaagttcta 540 gggggcccag tgtctgggct gagcattggg acaggcaggg caatgctggg cacacacacc 600 atggaagtga ctgtctacca tcgccgggga tcccggagct atgtgcctct tgctcattcc 660 agctcagcct tcaccattac tgaccaggtg cctttctccg tgagcgtgtc ccagttgcgg 720 gccttggatg gagggaacaa gcacttcctg agaaatcagc ctctgacctt tgccctccag 780 ctccatgacc ccagtggcta tctggctgaa gctgacctct cctacacctg ggactttgga 840 gacagtagtg gaaccctgat ctctcgggca cttgtggtca ctcatactta cctggagcct 900 ggcccagtca ctgcccaggt ggtcctgcag gctgccattc ctctcacctc ctgtggctcc 960 tccccagttc caggcaccac agatgggcac aggccaactg cagaggcccc taacaccaca 1020 gctggccaag tgcctactac agaagttgtg ggtactacac ctggtcaggc gccaactgca 1080 gagccctctg gaaccacatc tgtgcaggtg ccaaccactg aagtcataag cactgcacct 1140 gtgcagatgc caactgcaga gagcacaggt atgacacctg agaaggtgcc agtttcagag 1200 gtcatgggta ccacactggc agagatgtca actccagagg ctacaggtat gacacctgca 1260 gaggtatcaa ttgtggtgct ttctggaacc acagctgcac aggtaacaac tacagagtgg 1320 gtggagacca cagctagaga gctacctatc cctgagcctg aaggtccaga tgccagctca 1380 atcatgtcta cggaaagtat tacaggttcc ctgggccccc tgctggatgg tacagccacc 1440 ttaaggctgg tgaagagaca agtccccctg gattgtgttc tgtatcgata tggttccttt 1500 tccgtcaccc tggacattgt ccagggtatt gaaagtgccg agatcctgca ggctgtgccg 1560 tccggtgagg gggatgcatt tgagctgact gtgtcctgcc aaggcgggct gcccaaggaa 1620 gcctgcatgg agatctcatc gccagggtgc cagccccctg cccagcggct gtgccagcct 1680 gtgctaccca gcccagcctg ccagctggtt ctgcaccaga tactgaaggg tggctcgggg 1740 acatactgcc tcaatgtgtc tctggctgat accaacagcc tggcagtggt cagcacccag 1800 cttatcatgc ctgtgcctgg gattcttctc acaggtcaag aagcaggcct tgggcaggtt 1860 ccgctgatcg tgggcatctt gctggtgttg atggctgtgg tccttgcatc tctgatatat 1920 aggcgcagac ttatgaagca agacttctcc gtaccccagt tgccacatag cagcagtcac 1980 tggctgcgtc taccccgcat cttctgctct tgtcccattg gtgagaacag ccccctcctc 2040 agtgggcagc aggtctgagt actctcatat gatgctgtga ttttcctgga gttgacagaa 2100 acacctatat ttcccccagt cttccctggg agactactat taactgaaat aaatactcag 2160 agcctgaaaa aaaaaaaaaa a 2181 <210> 280 <211> 2041 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 280 gggcctatcc cagtcccccc agtgcctttg gttgctggag ggaagaacac aatggatctg 60 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgctggc tgtgggggct 120 acaaaagtac ccagaaacca ggactggctt ggtgtctcaa ggcaactcag aaccaaagcc 180 tggaacaggc agctgtatcc agagtggaca gaagcccaga gacttgactg ctggagaggt 240 ggtcaagtgt ccctcaaggt cagtaatgat gggcctacac tgattggtgc aaatgcctcc 300 ttctctattg ccttgaactt ccctggaagc caaaaggtat tgccagatgg gcaggttatc 360 tgggtcaaca ataccatcat caatgggagc caggtgtggg gaggacagcc agtgtatccc 420 caggaaactg acgatgcctg catcttccct gatggtggac cttgcccatc tggctcttgg 480 tctcagaaga gaagctttgt ttatgtctgg aagacctggg gccaatactg gcaagttcta 540 gggggcccag tgtctgggct gagcattggg acaggcaggg caatgctggg cacacacacc 600 atggaagtga ctgtctacca tcgccgggga tcccggagct atgtgcctct tgctcattcc 660 agctcagcct tcaccattac tgaccaggtg cctttctccg tgagcgtgtc ccagttgcgg 720 gccttggatg gagggaacaa gcacttcctg agaaatcagc ctctgacctt tgccctccag 780 ctccatgacc ccagtggcta tctggctgaa gctgacctct cctacacctg ggactttgga 840 gacagtagtg gaaccctgat ctctcgggca cttgtggtca ctcatactta cctggagcct 900 ggcccagtca ctgcccaggt ggtcctgcag gctgccattc ctctcacctc ctgtggctcc 960 tccccagttc caggcaccac agatgggcac aggccaactg cagaggcccc taacaccaca 1020 gctggccaag tgcctactac agaagttgtg ggtactacac ctggtcaggc gccaactgca 1080 gagccctctg gaaccacatc tgtgcaggtg ccaaccactg aagtcataag cactgcacct 1140 gtgcagatgc caactgcaga gagcacagct gcacaggtaa caactacaga gtgggtggag 1200 accacagcta gagagctacc tatccctgag cctgaaggtc cagatgccag ctcaatcatg 1260 tctacggaaa gtattacagg ttccctgggc cccctgctgg atggtacagc caccttaagg 1320 ctggtgaaga gacaagtccc cctggattgt gttctgtatc gatatggttc cttttccgtc 1380 accctggaca ttgtccaggg tattgaaagt gccgagatcc tgcaggctgt gccgtccggt 1440 gagggggatg catttgagct gactgtgtcc tgccaaggcg ggctgcccaa ggaagcctgc 1500 atggagatct catcgccagg gtgccagccc cctgcccagc ggctgtgcca gcctgtgcta 1560 cccagcccag cctgccagct ggttctgcac cagatactga agggtggctc ggggacatac 1620 tgcctcaatg tgtctctggc tgataccaac agcctggcag tggtcagcac ccagcttatc 1680 atgcctgtgc ctgggattct tctcacaggt caagaagcag gccttgggca ggttccgctg 1740 atcgtgggca tcttgctggt gttgatggct gtggtccttg catctctgat atataggcgc 1800 agacttatga agcaagactt ctccgtaccc cagttgccac atagcagcag tcactggctg 1860 cgtctacccc gcatcttctg ctcttgtccc attggtgaga acagccccct cctcagtggg 1920 cagcaggtct gagtactctc atatgatgct gtgattttcc tggagttgac agaaacacct 1980 atatttcccc cagtcttccc tgggagacta ctattaactg aaataaatac tcagagcctg 2040 a 2041 <210> 281 <211> 2020 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 281 gggcctatcc cagtcccccc agtgcctttg gttgctggag ggaagaacac aatggatctg 60 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgctggc tgtgggggct 120 acaaaagtac ccagaaacca ggactggctt ggtgtctcaa ggcaactcag aaccaaagcc 180 tggaacaggc agctgtatcc agagtggaca gaagcccaga gacttgactg ctggagaggt 240 ggtcaagtgt ccctcaaggt cagtaatgat gggcctacac tgattggtgc aaatgcctcc 300 ttctctattg ccttgaactt ccctggaagc caaaaggtat tgccagatgg gcaggttatc 360 tgggtcaaca ataccatcat caatgggagc caggtgtggg gaggacagcc agtgtatccc 420 caggaaactg acgatgcctg catcttccct gatggtggac cttgcccatc tggctcttgg 480 tctcagaaga gaagctttgt ttatgtctgg aagacctggg gccaatactg gcaagttcta 540 gggggcccag tgtctgggct gagcattggg acaggcaggg caatgctggg cacacacacc 600 atggaagtga ctgtctacca tcgccgggga tcccggagct atgtgcctct tgctcattcc 660 agctcagcct tcaccattac tgaccaggtg cctttctccg tgagcgtgtc ccagttgcgg 720 gccttggatg gagggaacaa gcacttcctg agaaatcagc ctctgacctt tgccctccag 780 ctccatgacc ccagtggcta tctggctgaa gctgacctct cctacacctg ggactttgga 840 gacagtagtg gaaccctgat ctctcgggca cttgtggtca ctcatactta cctggagcct 900 ggcccagtca ctgcccaggt ggtcctgcag gctgccattc ctctcacctc ctgtggctcc 960 tccccagttc caggcaccac agatgggcac aggccaactg cagaggcccc taacaccaca 1020 gctggccaag tgcctactac agaagttgtg ggtactacac ctggtcaggc gccaactgca 1080 gagccctctg gaaccacatc tgtgcaggtg ccaaccactg aagtcataag cactgcacct 1140 gtgcagatgc caactgcaga gagcacagct gcacaggtaa caactacaga gtgggtggag 1200 accacagcta gagagctacc tatccctgag cctgaaggtc cagatgccag ctcaatcatg 1260 tctacggaaa gtattacagg ttccctgggc cccctgctgg atggtacagc caccttaagg 1320 ctggtgaaga gacaagtccc cctggattgt gttctgtatc gatatggttc cttttccgtc 1380 accctggaca ttgtccaggg tattgaaagt gccgagatcc tgcaggctgt gccgtccggt 1440 gagggggatg catttgagct gactgtgtcc tgccaaggcg ggctgcccaa ggaagcctgc 1500 atggagatct catcgccagg gtgccagccc cctgcccagc ggctgtgcca gcctgtgcta 1560 cccagcccag cctgccagct ggttctgcac cagatactga agggtggctc ggggacatac 1620 tgcctcaatg tgtctctggc tgataccaac agcctggcag tggtcagcac ccagcttatc 1680 atgcctggtc aagaagcagg ccttgggcag gttccgctga tcgtgggcat cttgctggtg 1740 ttgatggctg tggtccttgc atctctgata tataggcgca gacttatgaa gcaagacttc 1800 tccgtacccc agttgccaca tagcagcagt cactggctgc gtctaccccg catcttctgc 1860 tcttgtccca ttggtgagaa cagccccctc ctcagtgggc agcaggtctg agtactctca 1920 tatgatgctg tgattttcct ggagttgaca gaaacaccta tatttccccc agtcttccct 1980 gggagactac tattaactga aataaatact cagagcctga 2020 <210> 282 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 282 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Tyr Arg Ser Pro 1 5 10 15 Ala Met Pro Glu Asn Leu 20

Claims (39)

  1. 하기를 포함하는, PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a. SEQ ID NO: 1, 4, 5 또는 7의 중쇄 CDR1(상보성 결정 영역 1), SEQ ID NO: 2, 6 또는 8의 중쇄 CDR2(상보성 결정 영역 2), 및 SEQ ID NO: 3 또는 9의 중쇄 CDR3(상보성 결정 영역 3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 14, 17 또는 20의 경쇄 CDR1(상보성 결정 영역 1), SEQ ID NO: 15 또는 18의 경쇄 CDR2(상보성 결정 영역 2), 및 SEQ ID NO: 16 또는 19의 경쇄 CDR3(상보성 결정 영역 3)을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    b. SEQ ID NO: 33, 36, 37 또는 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34, 38 또는 40의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 35 또는 41의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 46, 49 또는 52의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 48 또는 51의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    c. SEQ ID NO: 5, 7, 57 또는 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58, 61 또는 62의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 59 또는 63의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 68, 71 또는 74의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 69 또는 72의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 70 또는 73의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    d. SEQ ID NO: 79, 82, 83 또는 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80, 84 또는 86의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 81 또는 87의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 92, 95 또는 98의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 93 또는 96의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 94 또는 97의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    e. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 105 또는 111의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 117 또는 118의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    f. SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 125 또는 131의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 138 또는 141의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    g. SEQ ID NO: 123, 126, 127 또는 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124, 128 또는 130의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 147 또는 148의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 155 또는 157의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    h. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 163 또는 164의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 169 또는 170의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    i. SEQ ID NO: 175, 178, 179 또는 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176, 180 또는 182의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 177 또는 183의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 188 또는 189의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    j. SEQ ID NO: 103, 106, 107 또는 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104, 108 또는 110의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 194 또는 195의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 49, 52 또는 116의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 47 또는 50의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 200 또는 201의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    k. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 208 또는 214의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 50 또는 154의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 219 또는 220의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    l. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 중쇄 CDR2; SEQ ID NO: 225 또는 226의 중쇄 CDR3; SEQ ID NO: 136, 139 또는 142의 경쇄 CDR1; SEQ ID NO: 137 또는 140의 경쇄 CDR2; 및 SEQ ID NO: 231 또는 232의 경쇄 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    m. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237 또는 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 243, 245 또는 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 47 또는 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244 또는 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    n. SEQ ID NO: 206, 209, 210 또는 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 207, 211 또는 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252 또는 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 SEQ ID NO: 153, 156 또는 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50 또는 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258 또는 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    o. SEQ ID NO: 1의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
    p. SEQ ID NO: 4의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 2의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 14의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 15의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
    q. SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 6의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 3의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 17의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 19의 경쇄 CDR3;
    r. SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 8의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 9의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 20의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 18의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 16의 경쇄 CDR3;
    s. SEQ ID NO: 33의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
    t. SEQ ID NO: 36의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 34의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 46의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
    u. SEQ ID NO: 37의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 38의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 35의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 51의 경쇄 CDR3;
    v. SEQ ID NO: 39의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 40의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 41의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 48의 경쇄 CDR3;
    w. SEQ ID NO: 57의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
    x. SEQ ID NO: 60의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 58의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 68의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 69의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
    y. SEQ ID NO: 5의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 61의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 59의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 71의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 73의 경쇄 CDR3;
    z. SEQ ID NO: 7의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 62의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 63의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 74의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 72의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 70의 경쇄 CDR3;
    aa. SEQ ID NO: 79의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
    bb. SEQ ID NO: 82의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 80의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 92의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 93의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
    cc. SEQ ID NO: 83의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 84의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 81의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 95의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 97의 경쇄 CDR3;
    dd. SEQ ID NO: 85의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 86의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 87의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 98의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 96의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 94의 경쇄 CDR3;
    ee. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
    ff. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
    gg. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 105의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 118의 경쇄 CDR3;
    hh. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 111의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 117의 경쇄 CDR3;
    ii. SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
    jj. SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
    kk. SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 125의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 141의 경쇄 CDR3;
    ll. SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 131의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 CDR3;
    mm. SEQ ID NO: 123의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
    nn. SEQ ID NO: 126의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 124의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
    oo. SEQ ID NO: 127의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 128의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 147의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 157의 경쇄 CDR3;
    pp. SEQ ID NO: 129의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 130의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 148의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 155의 경쇄 CDR3;
    qq. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
    rr. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
    ss. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 163의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 170의 경쇄 CDR3;
    tt. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 164의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 169의 경쇄 CDR3;
    uu. SEQ ID NO: 175의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
    vv. SEQ ID NO: 178의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 176의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
    ww. SEQ ID NO: 179의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 180의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 177의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 189의 경쇄 CDR3;
    xx. SEQ ID NO: 181의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 182의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 183의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 188의 경쇄 CDR3;
    yy. SEQ ID NO: 103의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
    zz. SEQ ID NO: 106의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 104의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 116의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 47의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
    aaa. SEQ ID NO: 107의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 108의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 194의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 49의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 201의 경쇄 CDR3;
    bbb. SEQ ID NO: 109의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 110의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 195의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 52의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 200의 경쇄 CDR3;
    ccc. SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
    ddd. SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 153의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 154의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
    eee. SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 208의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 156의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 220의 경쇄 CDR3;
    fff. SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 214의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 158의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 50의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 219의 경쇄 CDR3;
    ggg. SEQ ID NO: 206의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
    hhh. SEQ ID NO: 209의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 207의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 136의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 137의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
    iii. SEQ ID NO: 210의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 211의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 225의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 139의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 232의 경쇄 CDR3;
    jjj. SEQ ID NO: 212의 중쇄 CDR1, SEQ ID NO: 213의 중쇄 CDR2, SEQ ID NO: 226의 중쇄 CDR3, SEQ ID NO: 142의 경쇄 CDR1, SEQ ID NO: 140의 경쇄 CDR2, 및 SEQ ID NO: 231의 경쇄 CDR3;
    kkk. SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    lll. SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 243의 LCDR1, SEQ ID NO: 47의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    mmm. SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 237의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 245의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 246의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    nnn. SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 238의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 247의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 244의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ooo. SEQ ID NO: 206의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    ppp. SEQ ID NO: 209의 HCDR1, SEQ ID NO: 207의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 153의 LCDR1, SEQ ID NO: 154의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    qqq. SEQ ID NO: 210의 HCDR1, SEQ ID NO: 211의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 252의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 156의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 259의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    rrr. SEQ ID NO: 212의 HCDR1, SEQ ID NO: 213의 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 253의 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO: 158의 LCDR1, SEQ ID NO: 50의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 258의 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  2. 하기를 포함하는, PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    b. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    c. SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    d. SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    e. SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    f. SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    g. SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    h. SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    i. SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    j. SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    k. SEQ ID NO: 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    l. SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    m. SEQ ID NO: 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    n. SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL);
    o. SEQ ID NO: 239의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 248의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL); 또는
    p. SEQ ID NO: 254의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 260의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL).
  3. 하기를 포함하는, PMEL17에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    b. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    c. SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    d. SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    e. SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    f. SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    g. SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    h. SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    i. SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    j. SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    k. SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 192의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    l. SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    m. SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 223의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    n. SEQ ID NO: 229의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
    o. SEQ ID NO: 241의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 250의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    p. SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO: 262의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 시스테인 치환을 포함하는, 항체.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄의 S152C, S375C 또는 S152C 및 S375C 둘 모두로부터 선택된 하나 이상의 시스테인 치환을 포함하며, 여기서 위치는 EU 시스템에 따라 넘버링되는, 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 단일클론 항체인, 항체.
  7. 하기 화학식 (C)를 포함하는 항체 약물 접합체로서:
    [화학식 (C)]
    Ab-(LA-(D)n)y
    상기 식에서,
    D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
    Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    LA는 링커이고;
    n은 1, 2, 3 또는 4이고;
    y는 1, 2, 3 또는 4인, 항체 약물 접합체.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 n은 1인, 항체 약물 접합체.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    상기 y는 약 1 내지 약 4인, 항체 약물 접합체.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 링커는 절단 가능한 링커 또는 절단 불가능한 링커인, 항체 약물 접합체.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 링커는 ValCit 펩티드 링커를 포함하는, 항체 약물 접합체.
  12. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약물 모이어티는 GNAQ 및 GNA11의 억제제인, 항체 약물 접합체.
  13. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 D는 하기인, 항체 약물 접합체:
    Figure pct00405
    .
  14. 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 D는 하기인, 항체 약물 접합체:
    Figure pct00406
    .
  15. 제7항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 구조를 갖는, 항체 약물 접합체:
    Figure pct00407
    .
  16. 제7항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 구조를 갖는, 항체 약물 접합체:
    Figure pct00408
    .
  17. 하기 화학식 (C-2)를 갖는 항체 약물 접합체로서:
    [화학식 (C-2)]
    Figure pct00409
    ,
    상기 식에서,
    R0는 메틸 또는 에틸이고;
    R1은 메틸 또는 이소프로필이고;
    R2는 메틸 또는 에틸이고;
    Ab는 인간 PMEL17 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이고;
    X1은 2가 커플링 기이고;
    X2는 자기-희생적 스페이서이고;
    L1은 2가 펩티드 링커이고;
    L2는 결합 또는 링커이며,
    y는 1, 2, 3 또는 4인, 항체 약물 접합체.
  18. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 항원 결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  19. 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  20. 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체 또는 제18항 또는 제19항의 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 환자에서 암을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 암은 PMEL17을 발현하고 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하거나, 또는 상기 암은 PMEL17을 발현하고, GNAQ, GNA11, 또는 둘 다의 돌연변이를 함유하는, 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 항체 약물 접합체 또는 약제학적 조성물은 하나 이상의 추가 치료 화합물과 조합하여 환자에게 투여되는, 방법.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 하나 이상의 추가 치료 화합물은 표준 치료 화학요법제, MDM2 억제제, MRC2 억제제, PKC 억제제, MAPK 억제제, 공동자극 분자 또는 체크포인트 억제제로부터 선택되는, 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 공동 자극 분자는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, STING, 또는 CD83 리간드의 작용제로부터 선택되는, 방법.
  24. 제22항에 있어서,
    상기 체크포인트 억제제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타의 억제제로부터 선택되는, 방법.
  25. 약제로서 사용하기 위한, 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체, 또는 제18항 또는 제19항의 약제학적 조성물.
  26. 치료를 필요로 하는 환자에서 PMEL17 발현 암 또는 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하는 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체, 또는 제18항 또는 제19항의 약제학적 조성물.
  27. 치료를 필요로 하는 환자에서 PMEL17 발현 암 또는 GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하는 암을 치료 또는 예방하기 위한, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체, 또는 제18항 또는 제19항의 약제학적 조성물의 용도.
  28. 약제를 제조하는 데 있어서의, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 제7항 내지 제17항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체, 또는 제18항 또는 제19항의 약제학적 조성물의 용도.
  29. 제20항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 PMEL17을 발현하거나, GNAQ 또는 GNA11 유전자의 돌연변이를 함유하는, 방법, 항체 약물 접합체 또는 용도.
  30. 제28항에 있어서,
    상기 암은 포도막 흑색종, 피하 흑색종, 간세포 암종 또는 이의 전이성 암인, 방법, 항체 약물 접합체 또는 용도.
  31. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 핵산은 SEQ ID NO: 13, 24, 28, 32, 45, 56, 67, 78, 91, 102, 115, 122, 135, 146, 152, 162, 168, 174, 187, 193, 199, 205, 218, 224, 230, 236, 242, 251, 257, 또는 263의 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산.
  33. 제31항 또는 제32항의 핵산을 포함하는 벡터.
  34. 제33항의 벡터, 또는 제31항 또는 제32항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  35. 제34항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 세포 배양물로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편을 생산하는 방법.
  36. 제35항에 있어서,
    세포 배양물로부터 항체를 회수하는 과정은 하기 단계를 포함하는, 방법:
    a) 세포를 제거하고 배양물을 여과하는 단계;
    b) 친화성 크로마토그래피에 의해 배양물을 정제하는 단계;
    c) pH를 3.4~3.6으로 조정하여 배양물 내 임의의 바이러스를 비활성화한 다음, pH를 5.8~6.2로 재조정하고 배양물을 여과하는 단계;
    d) 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 배양물을 정제하고 배양물의 온-컬럼 환원을 수행하는 단계;
    e) 배양물에 대해 음이온 교환 크로마토그래피를 수행하는 단계;
    f) 나노여과에 의해 바이러스를 제거하는 단계;
    g) 항체를 함유하는 배양물을 여과하는 단계; 및
    h) 정제된 항체를 수득하는 단계.
  37. 하기를 포함하는 항-PMEL17 항체 약물 접합체의 제조 방법:
    (a) 하기 화학식 (B)의 링커-약물 모이어티를 사전-형성하는 단계:
    [화학식 (B)]
    R8-LB-(D)n
    (상기 식에서,
    D는 GNAQ 억제제, GNA11 억제제 또는 GNAQ 및 GNA11의 억제제이고;
    R8은 반응성 기이고;
    LB는 절단 가능한 또는 절단-불가능한 링커이고,
    n은 1, 2, 3 또는 4임);
    (b) 제35항의 세포 배양물로부터 회수된 항체에 상기 링커-약물 모이어티를 접합시켜, 항체 약물 접합체를 생산하는 단계; 및
    (c) 상기 항체 약물 접합체를 정제하는 단계.
  38. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 진단 시약.
  39. 제38항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성 표지, 형광단, 발색단, 영상화제 또는 금속 이온으로 표지되는, 진단 시약.
KR1020217022296A 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체 KR20210107731A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020247012014A KR20240052881A (ko) 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862783565P 2018-12-21 2018-12-21
US62/783,565 2018-12-21
US201962803110P 2019-02-08 2019-02-08
US62/803,110 2019-02-08
PCT/IB2019/001333 WO2020128612A2 (en) 2018-12-21 2019-12-18 Antibodies to pmel17 and conjugates thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247012014A Division KR20240052881A (ko) 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210107731A true KR20210107731A (ko) 2021-09-01

Family

ID=69723993

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247012014A KR20240052881A (ko) 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체
KR1020217022296A KR20210107731A (ko) 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247012014A KR20240052881A (ko) 2018-12-21 2019-12-18 Pmel17에 대한 항체 및 이의 접합체

Country Status (21)

Country Link
US (1) US11779649B2 (ko)
EP (1) EP3898697A2 (ko)
JP (1) JP2022515760A (ko)
KR (2) KR20240052881A (ko)
CN (1) CN113195541A (ko)
AU (2) AU2019409132A1 (ko)
BR (1) BR112021011900A2 (ko)
CA (2) CA3234463A1 (ko)
CL (1) CL2021001607A1 (ko)
CO (1) CO2021007968A2 (ko)
CR (1) CR20210324A (ko)
CU (1) CU20210047A7 (ko)
EC (1) ECSP21044421A (ko)
IL (1) IL284027A (ko)
JO (1) JOP20210159A1 (ko)
MX (1) MX2021007593A (ko)
PE (1) PE20211296A1 (ko)
SG (1) SG11202106629PA (ko)
TW (1) TW202039569A (ko)
UY (1) UY38520A (ko)
WO (1) WO2020128612A2 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111686085B (zh) * 2020-06-30 2022-09-06 贵州益佰女子大药厂有限责任公司 一种咽喉清喉制剂的制备方法
WO2022183185A1 (en) * 2021-02-23 2022-09-01 Pandion Operations, Inc. Pd-1 antibodies, polypeptides and uses thereof
EP4323526A1 (en) 2021-04-16 2024-02-21 Novartis AG Antibody drug conjugates and methods for making thereof

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2429008A (en) 1945-12-01 1947-10-14 Diamond Chain & Mfg Company Sprocket or gear
US3720760A (en) 1968-09-06 1973-03-13 Pharmacia Ab Method for determining the presence of reagin-immunoglobulins(reagin-ig)directed against certain allergens,in aqueous samples
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
ATE37983T1 (de) 1982-04-22 1988-11-15 Ici Plc Mittel mit verzoegerter freigabe.
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
JPH06798B2 (ja) 1986-06-02 1994-01-05 藤沢薬品工業株式会社 Ｆｒ−９００３５９物質およびその医薬として許容される塩
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
EP0550436A1 (en) 1989-11-06 1993-07-14 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Protein microspheres and methods of using them
JPH06507404A (ja) 1991-05-01 1994-08-25 ヘンリー　エム．ジャクソン　ファウンデイション　フォー　ザ　アドバンスメント　オブ　ミリタリー　メディスン 感染性の呼吸性疾患の治療方法
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
AU4116793A (en) 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5834252A (en) 1995-04-18 1998-11-10 Glaxo Group Limited End-complementary polymerase reaction
US5837458A (en) 1994-02-17 1998-11-17 Maxygen, Inc. Methods and compositions for cellular and metabolic engineering
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
US6132764A (en) 1994-08-05 2000-10-17 Targesome, Inc. Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents
ATE252894T1 (de) 1995-01-05 2003-11-15 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
CA2230494A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Composition for sustained release of an agent
ATE508733T1 (de) 1996-03-04 2011-05-15 Penn State Res Found Materialien und verfahren zur steigerung der zellulären internalisierung
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
ES2236832T3 (es) 1997-01-16 2005-07-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparacion de particulas para inhalacion.
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0983303B1 (en) 1997-05-21 2006-03-08 Biovation Limited Method for the production of non-immunogenic proteins
ES2301198T3 (es) 1997-06-12 2008-06-16 Novartis International Pharmaceutical Ltd. Polipeptidos artificiales de anticuerpos.
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
AU747231B2 (en) 1998-06-24 2002-05-09 Alkermes, Inc. Large porous particles emitted from an inhaler
NZ517772A (en) 1999-11-24 2004-03-26 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
ES2274823T3 (es) 1999-12-29 2007-06-01 Immunogen, Inc. Agentes cototoxicos que comprenden doxorrubicinas y daunorrubicinas y su utilizacion terapeutica.
WO2004007529A2 (en) 2002-07-15 2004-01-22 The Trustees Of Princeton University Iap binding compounds
JP2003210190A (ja) 2002-01-18 2003-07-29 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd 環状ペプチド化合物とその製造法
TWI275390B (en) 2002-04-30 2007-03-11 Wyeth Corp Process for the preparation of 7-substituted-3- quinolinecarbonitriles
GB0215823D0 (en) 2002-07-09 2002-08-14 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
AU2003288675B2 (en) 2002-12-23 2010-07-22 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses therefor
US7399865B2 (en) 2003-09-15 2008-07-15 Wyeth Protein tyrosine kinase enzyme inhibitors
CA2553871A1 (en) 2004-01-16 2005-08-04 The Regents Of The University Of Michigan Smac peptidomimetics and the uses thereof
US7932382B2 (en) 2004-01-16 2011-04-26 The Regents Of The University Of Michigan Conformationally constrained Smac mimetics and the uses thereof
AU2005228950B2 (en) 2004-03-23 2012-02-02 Genentech, Inc. Azabicyclo-octane inhibitors of IAP
AR048927A1 (es) 2004-04-07 2006-06-14 Novartis Ag Compuestos heterociclicos como inhibidores de proteinas de apoptosis (iap); composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa
RS53734B1 (en) 2004-07-02 2015-06-30 Genentech Inc. IAP INHIBITORS
US7674787B2 (en) 2004-07-09 2010-03-09 The Regents Of The University Of Michigan Conformationally constrained Smac mimetics and the uses thereof
EP1773348A4 (en) 2004-07-12 2009-05-20 Idun Pharmaceuticals Inc TETRA PEPTIDE ANALOGS
WO2006020060A2 (en) 2004-07-15 2006-02-23 Tetralogic Pharmaceuticals Corporation Iap binding compounds
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
NZ589670A (en) 2004-12-20 2013-01-25 Genentech Inc Pyrrolidine inhibitors of iap
CN109485727A (zh) 2005-05-09 2019-03-19 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
MX2007015942A (es) 2005-07-01 2008-03-07 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada.
US20090304721A1 (en) 2005-09-07 2009-12-10 Medlmmune, Inc Toxin conjugated eph receptor antibodies
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
MX2009011783A (es) 2007-04-30 2009-12-04 Genentech Inc Inhibidores de iap.
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
AR068402A1 (es) 2007-09-12 2009-11-18 Genentech Inc Combinaciones de compuestos inhibidores de fosfoinositida 3-quinasa y agentes quimioterapeuticos y los metodos de uso
ES2439705T3 (es) 2007-10-25 2014-01-24 Genentech, Inc. Proceso para la preparación de compuestos de tienopirimidina
ES2639857T3 (es) 2008-02-11 2017-10-30 Cure Tech Ltd. Anticuerpos monoclonales para el tratamiento del tumor
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US8168784B2 (en) 2008-06-20 2012-05-01 Abbott Laboratories Processes to make apoptosis promoters
CA2734908A1 (en) 2008-08-25 2010-03-11 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
AU2009288289B2 (en) 2008-08-25 2012-11-08 Amplimmune, Inc. PD-1 antagonists and methods of use thereof
TWI686405B (zh) 2008-12-09 2020-03-01 建南德克公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其於增進ｔ細胞功能之用途
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
US20120213705A1 (en) 2009-06-22 2012-08-23 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
US20130102653A1 (en) 2010-04-16 2013-04-25 The Univeristy Of British Columbia Gna11 and gnaq exon 4 mutations in melanoma
US20140065590A1 (en) 2012-02-20 2014-03-06 Knowre Korea Inc Method, system, and computer-readable recording medium for providing education service based on knowledge units
KR20150006000A (ko) * 2012-05-01 2015-01-15 제넨테크, 인크. 항-pmel17 항체 및 면역접합체
WO2013179174A1 (en) 2012-05-29 2013-12-05 Koninklijke Philips N.V. Lighting arrangement
JP6321633B2 (ja) 2012-06-04 2018-05-09 ノバルティス アーゲー 部位特異的標識法およびそれによって生成される分子
WO2014124258A2 (en) 2013-02-08 2014-08-14 Irm Llc Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
AU2014214751B2 (en) 2013-02-08 2017-06-01 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US20170021033A1 (en) 2014-03-12 2017-01-26 Novartis Ag Specific sites for modifying antibodies to make immunoconjugates
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
US10550190B2 (en) 2014-04-04 2020-02-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphate based linkers for intracellular delivery of drug conjugates
PE20181953A1 (es) * 2016-03-02 2018-12-17 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco basados en eribulina y metodos para su uso
EP3433621A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 H. Hoffnabb-La Roche Ag Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
AR113224A1 (es) * 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
EP3639033A1 (en) 2017-06-14 2020-04-22 Servizo Galego de Saude In vitro method for detecting tumor growth and diagnosing or prognosticating the risk of metastasis in a human subject that has been diagnosed with uveal melanoma
US20200282015A1 (en) 2017-09-22 2020-09-10 Washington University Targeted pharmacological therapeutics in uveal melanoma
EP4323526A1 (en) 2021-04-16 2024-02-21 Novartis AG Antibody drug conjugates and methods for making thereof

Also Published As

Publication number Publication date
MX2021007593A (es) 2021-09-10
CN113195541A (zh) 2021-07-30
EP3898697A2 (en) 2021-10-27
TW202039569A (zh) 2020-11-01
KR20240052881A (ko) 2024-04-23
CU20210047A7 (es) 2022-01-13
CO2021007968A2 (es) 2021-07-19
UY38520A (es) 2020-07-31
WO2020128612A2 (en) 2020-06-25
CR20210324A (es) 2021-07-14
CL2021001607A1 (es) 2022-02-11
AU2024202263A1 (en) 2024-05-02
JP2022515760A (ja) 2022-02-22
JOP20210159A1 (ar) 2023-01-30
IL284027A (en) 2021-08-31
AU2019409132A1 (en) 2021-07-15
CA3123996A1 (en) 2019-12-18
BR112021011900A2 (pt) 2021-09-08
US11779649B2 (en) 2023-10-10
SG11202106629PA (en) 2021-07-29
US20200197528A1 (en) 2020-06-25
CA3234463A1 (en) 2019-12-18
ECSP21044421A (es) 2021-07-30
WO2020128612A3 (en) 2020-08-27
PE20211296A1 (es) 2021-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8841424B2 (en) Humanized AXL antibodies
AU2015302959B2 (en) Anti-CDH6 antibody drug conjugates
KR20190140472A (ko) 톨-유사 수용체 작용제를 포함하는 항체 접합체 및 병용 요법
KR20170084202A (ko) 항체 약물 접합체
KR20150130333A (ko) 항체 약물 접합체 및 상응하는 항체
KR20170123723A (ko) 항­ｇｃｃ 항체 분자와 관련 조성물 및 방법
TW202323292A (zh) 抗體藥物結合物
WO2016020791A1 (en) Ckit antibody drug conjugates
US11779649B2 (en) Antibodies to PMEL17 and conjugates thereof
JP2023540526A (ja) ネクチン－４抗体およびそれの使用
KR20230170738A (ko) 항체 약물 접합체 및 이의 제조 방법
RU2777662C2 (ru) Конъюгаты антитела к ccr7 и лекарственного средства
US11999786B2 (en) Anti-CD48 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
US20220162308A1 (en) Anti-cd48 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
KR20230002910A (ko) 암 치료를 위한 ccr7 항체 약물 접합체
AU2021388021A9 (en) Anti-cd48 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof