KR20210095586A - off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물 - Google Patents
off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20210095586A KR20210095586A KR1020210009773A KR20210009773A KR20210095586A KR 20210095586 A KR20210095586 A KR 20210095586A KR 1020210009773 A KR1020210009773 A KR 1020210009773A KR 20210009773 A KR20210009773 A KR 20210009773A KR 20210095586 A KR20210095586 A KR 20210095586A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cancer
- cells
- gene
- cell
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 29
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 43
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 40
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 28
- 101100382122 Homo sapiens CIITA gene Proteins 0.000 claims description 22
- 102100026371 MHC class II transactivator Human genes 0.000 claims description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 22
- 108700002010 MHC class II transactivator Proteins 0.000 claims description 20
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 20
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 claims description 19
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 18
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 18
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 17
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 17
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 17
- 210000003014 totipotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 claims description 11
- 101150082143 CD24 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 101000983747 Homo sapiens MHC class II transactivator Proteins 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003911 head and neck carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 101150082072 14 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101150091887 Ctla4 gene Proteins 0.000 claims 1
- 201000001342 Fallopian tube cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000013452 Fallopian tube neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 206010061336 Pelvic neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 3
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 16
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 13
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 13
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 12
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 7
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 7
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 101150076800 B2M gene Proteins 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- -1 for example Proteins 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 102100021983 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 9 Human genes 0.000 description 3
- 101710135787 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 9 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 3
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 101100257359 Caenorhabditis elegans sox-2 gene Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000000529 Costimulatory and Inhibitory T-Cell Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010041504 Costimulatory and Inhibitory T-Cell Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 101100257363 Mus musculus Sox2 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 2
- 102100027164 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Human genes 0.000 description 2
- 101710143293 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 1
- 101000984190 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100025584 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 201000003761 Vaginal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000003914 endometrial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 201000001343 fallopian tube carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 102000044489 human CD24 Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 210000004287 null lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 208000011571 secondary malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 101150069263 tra gene Proteins 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 201000004916 vulva carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000013013 vulvar carcinoma Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4614—Monocytes; Macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0648—Splenocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/602—Sox-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/603—Oct-3/4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/604—Klf-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/606—Transcription factors c-Myc
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/13—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells
- C12N2506/1307—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from connective tissue cells, from mesenchymal cells from adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Abstract
본 발명은 B2M(Beta-2 microglobulin) 유전자의 발현이 억제되고, CD24(cluster of differentiation 24) 유전자를 발현함으로써, 면역 거부 반응이 억제된 분화전능성 줄기세포, 면역세포 및 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
암(악성 종양)은 현대사회에서 사망률 1위를 차지하는 주요 질병으로 현재까지 많은 연구에도 불구하고 획기적인 치료법이 없는 실정이다. 암의 치료에 있어 항암제와 같은 화학요법제를 이용한 치료는 어느 정도 효과를 거두고는 있으나 암의 다양한 발병기작과 항암제 내성 발현으로 인하여 많은 연구가 요구되고 있다.
최근 수십 년간 진단과 치료기술의 발달로 암치료에 대해 제한적으로나마 치료율의 향상과 기능적 보존이라는 긍정적인 결과를 얻기도 했지만 많은 진행성 암에 있어서 5년 생존율은 5 내지 50%에 맴돌고 있다. 이러한 암은 공격적인 침습, 림프절전이, 원격전이와 이차 암의 발생을 특징이라 할 수 있는데 일부암에 있어서는 다양한 연구와 치료에도 불구하고 지난 20년간 생존율이 크게 변하지 못한 상태이다. 최근에는 이러한 암에 대해 분자생물학적인 접근을 통해 치료효과를 높이려는 시도가 많아지고, 암의 증식, 전이와 세포사멸과 관련된 표적치료에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
인간 T 세포 요법은 환자에서 암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위해, 풍부화되거나 변형된 인간 T 세포에 의존한다. T 세포가 특정한 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 능력을 증가시키기 위해, T 세포를 특정한 표적 암 세포로 지시하는 구축물을 발현하도록 T 세포를 조작하는 방법이 개발되어 왔다. 특정한 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 T 세포가 특정한 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 것을 가능하게 한다.
이러한 배경하에서, 본 발명자들은 면역거부반응 없이 안정적으로 암치료에 사용할 수 있는 세포독성을 나타내는 T 세포를 개발하기 위하여, 예의 연구노력한 결과, B2M, CIITA, TCR, PD1 및 CTLA4 유전자의 발현이 억제되고, CD24 및 CD19CAR 유전자의 발현수준이 증진된 세포독성 T 세포(cytotoxic T cell)이 효과적인 암 치료활성을 나타냄을 확인하였으며, 또한 B2M, CIITA 유전자의 발현이 억제되고, CD24 유전자의 발현수준이 증진된 줄기세포로부터 유도한 면역세포가 효과적인 암 치료 활성을 나타내며 NK세포에 의한 공격을 회피하여 면역거부반응이 적게 일어나는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 면역거부반응이 억제된 분화전능성 줄기세포를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 면역거부반응이 억제된 면역세포를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 상기 면역세포를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 B2M(Beta-2 microglobulin) 유전자의 발현이 억제되고, CD24(cluster of differentiation 24) 유전자를 발현하는 분화전능성 줄기세포에 관한 것이다.
본 발명은 상기 줄기세포로부터 유도된 면역세포에 관한 것이다.
본 발명은 상기 면역세포를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 제공하는 줄기세포 및 면역세포를 사용하면, 면역거부반응을 나타내지 않아, 범용적으로 사용할 수 있는 바 기존의 환자맞춤형 CAR-T 치료보다 경제적으로, 보다 안전하게 사용할 수 있으므로, 보다 효과적인 질병의 치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.
도 1은 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- iPSC 형태를 나타낸 것이다.
도 2는 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- iPSC genotype을 나타낸 것이다. 각 도면에서 위의 가닥이 WT allele, 아래의 가닥이 KO allele이다.
도 3은 B2M-/- CIITA-/- iPSC genotype (B2M = HLA class I, CIITA = HLA class II)을 나타낸 것이다.
도 4는 Novel “Don’t eat me 유전자 CD24” 선별을 위한 평가 결과이다.
도 5는 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC 제작을 확인한 것이다.
도 6은 TRA 유전자의 CDS에서 1개 이상의 base deletion이 일어난 것을 증명하는 sequencing 데이터이다. 즉, B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- TRA-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC 제작을 확인한 것이다.
도 7은 PBMC와 NK 세포의 inhibitory receptor heterogenicity를 확인한 것이다.
도 2는 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- iPSC genotype을 나타낸 것이다. 각 도면에서 위의 가닥이 WT allele, 아래의 가닥이 KO allele이다.
도 3은 B2M-/- CIITA-/- iPSC genotype (B2M = HLA class I, CIITA = HLA class II)을 나타낸 것이다.
도 4는 Novel “Don’t eat me 유전자 CD24” 선별을 위한 평가 결과이다.
도 5는 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC 제작을 확인한 것이다.
도 6은 TRA 유전자의 CDS에서 1개 이상의 base deletion이 일어난 것을 증명하는 sequencing 데이터이다. 즉, B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- TRA-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC 제작을 확인한 것이다.
도 7은 PBMC와 NK 세포의 inhibitory receptor heterogenicity를 확인한 것이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 B2M(Beta-2 microglobulin) 유전자의 발현이 억제되고, CD24(cluster of differentiation 24) 유전자를 발현하는 분화전능성 줄기세포에 관한 것이다.
B2M 유전자는 HLA class I의 역할을 수행하는 유전자로서, B2M 유전자의 발현이 억제/결실되면, HLA class I의 활성이 저해/결핍된다.
CD24 유전자는 신규한 Don't eat me gene으로서, HLA class I의 활성이 결핍된 세포는 이식 후 natural killer cell의 공격을 받지만, 상기 Don't eat me 유전자는 natural killer cell의 공격을 방어한다.
본 발명의 분화전능성 줄기세포는 B2M 유전자의 발현이 억제되고, CD24 유전자를 발현함으로써 면역 거부 반응을 나타내지 않을 수 있다.
유전자의 발현 억제는 발현 억제 또는 결실을 의미하는 것으로서, 이는 당 분야에 공지된 방법에 의한 것일 수 있고, 예를 들면 CRISPR 등을 사용할 수 있다.
CRISPR에 의하는 경우, B2M 유전자의 발현 억제를 위해 예를 들면 서열번호 1의 sgRNA를 사용할 수 있다.
CD24 유전자는 내재적 또는 외인적으로 발현하는 것일 수 있고, 그 발현이 증가된 것일 수 있다. 외래 유전자가 도입된 경우, 예를 들면 인간 유래의 유전자일 수 있고, 구체적으로는 서열번호 6(NM_013230)의 서열로 이루어진 유전자일 수 있다.
유전자의 도입은 당 분야에 공지된 방법에 의할 수 있고, 예를 들면 전기 천공법 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
유전자 도입시에는 다양한 벡터를 사용할 수 있고, 이는 공지된 플라스미드, 바이러스성 벡터, 비바이러스성 벡터 등을 포함한다.
본 발명의 분화전능성 줄기세포는 배아줄기세포 또는 유도만능줄기세포(iPSC)일 수 있다.
본 발명의 분화전능성 줄기세포는 CIITA(class II, major histocompatibility complex, transactivator), PDCD1(Programmed cell death protein 1), CTLA4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4) 및 TCR(T-cell receptor)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1개의 유전자의 발현이 더 억제된 것일 수 있다.
CIITA는 HLA class II의 역할을 수행하는 유전자로서, CIITA 유전자가 억제/결실되면, HLA class II의 활성이 저해/결핍된다. 상기 유전자가 억제됨으로써 면역 거부 반응이 보다 억제된다.
PDCD1은 T cell inhibitory receptor의 일종으로서, 암세포가 T cell의 PD1에 결합하면 T 세포의 기능이 억제된다. 상기 유전자가 억제됨으로써 상기 줄기세포로부터 분화된 면역세포의 활성이 암세포에 의해 억제되는 것을 방지할 수 있다.
CTLA4는 T cell inhibitory receptor의 일종으로서, 암세포가 T cell의 CTLA4에 결합하면 T 세포의 기능이 억제된다. 상기 유전자가 억제됨으로써 상기 줄기세포로부터 분화된 면역세포의 활성이 암세포에 의해 억제되는 것을 방지할 수 있다.
TCR은 T cell antigen recognition receptor의 역할을 수행하는 유전자이다. 상기 유전자가 억제됨으로써 상기 줄기세포로부터 분화된 면역세포가 이식편대숙주병(Graft-versus-host disease, GVHD)을 유발하는 것을 방지할 수 있다. TCR은 예를 들면 TRA(T cell receptor Alpha)일 수 있다.
유전자의 발현 억제는 발현 억제 또는 결실을 의미하는 것으로서, 이는 당 분야에 공지된 방법에 의한 것일 수 있고, 예를 들면 CRISPR 등을 사용할 수 있다.
CRISPR에 의하는 경우, CIITA의 발현 억제를 위해 서열번호 2의 sgRNA, PDCD1의 발현 억제를 위해 서열번호 3의 sgRNA, CTLA4의 발현 억제를 위해 서열번호 4의 sgRNA, TCR의 발현 억제를 위해 서열번호 5의 sgRNA를 사용할 수 있다.
본 발명의 분화 전능성 줄기세포는 암세포 표면 항원 특이적 CAR(Chimeric Antigen Receptor, 키메라 항원 수용체)를 발현하는 것일 수 있다. 그러한 경우 이로부터 분화된 면역 세포가 항암 활성을 나타낼 수 있다.
CAR는 암세포 표면 항원에 특이적인 것으로서, 암세포 표면 항원의 종류는 제한되지 않으며, 적용하고자 하는 암종, 그 특정의 암세포 표면의 항원일 수 있다. 예를 들면 CD19일 수 있다.
CAR는 적용하고자 하는 암세포 표면 항원에 특이적인 항원 결합 도메인을 갖는 것이라면, 그 세대, 각 도메인의 종류, 배치, 서열 등은 제한되지 않고 사용될 수 있다.
CD19 CAR의 경우의 구체적인 예를 들면, 항원 결합 도메인의 서열은 FMC63 클론 서열로 이루어진 것일 수 있고, 예를 들면 전체 서열은 서열번호 7의 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명의 분화 전능성 줄기세포는 앞서 예시한 다양한 조합의 유전자의 발현이 억제된 것일 수 있고, CD24 및/또는 암세포 표면 항원 특이적 CAR를 발현하는 것일 수 있다.
구체적인 예를 들자면 B2M, CIITA, PDCD1 및 CTLA4 유전자의 발현이 억제되고, CD24 유전자 및 암세포 표면 항원 특이적 CAR를 발현하는 것일 수 있고, 여기에 TCR 유전자의 발현이 더 억제된 것일 수 있다. TCR은 예를 들면 TRA일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 분화 전능성 줄기세포로부터 분화된 면역세포에 관한 것이다.
상기 줄기세포로부터 분화된 면역세포는 상기 줄기세포가 발현하는 유전자를 발현하고, 발현이 억제된 유전자의 발현이 억제된 것일 수 있다. 이에 의해 면역 거부 반응을 나타내지 않을 수 있다.
또한, 암세포 표면 항원 특이적 CAR를 발현하는 경우 항암 활성을 나타낼 수 있다.
면역세포는 예를 들면 세포독성 T 세포(cytotoxic T cell), NK(Natural kill) 세포 또는 대식세포일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 면역 세포를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 면역 세포는 암세포 표면 항원 특이적 CAR를 발현하는 것일 수 있다.
CAR에 사용될 수 있는 항원 결합 도메인의 종류가 제한되지 않고, 적용하고자 하는 암종에 맞는 항원 결합 도메인을 사용할 수 있는 것이므로, 본 발명의 약학 조성물은 다양한 암종에 대한 항암 활성을 나타낼 수 있다. 일 예로서, 고형암 또는 혈액암이 될 수 있고, 다른 예로서, 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종, 중추신경계 종양 등의 고형암이 될 수 있고, 또 다른 예로서, 백혈병 등의 혈액암이 될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 또는 좌제의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.
또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 약학 조성물은 1일 0.01 내지 500 mg/kg으로, 구체적으로 10 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다.
상기 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예
1. Wild type iPSC의 제작
피부세포에 reprogramming gene을 도입하여 iPSC를 제작하였다.
구체적으로, 야생형 iPSC를 제조하기 위해, 인간 섬유아세포 (Human dermal fibroblasts; hDF)에 reprogramming gene (Oct-4, Sox-2, c-Myc, Klf-4)을 발현하는 레트로바이러스 혹은 플라스미드를 도입하였다. MOI 5-20의 레트로바이러스를 spinfection 방법으로 hDF에 도입하였다. 플라스미드는 전기천공법으로 hDF에 도입하였다. Reprogramming gene이 도입된 hDF를 3주간 일반적인 iPSC 배양 조건에서 배양하여 최종적으로 미분화 iPSC 군집을 형성하였다. 미분화 iPSC 군집을 피펫을 이용하여 메커니컬하게 픽킹하였고, 계대배양을 통해 증식시켜서 이후 유전자 편집 실험에 사용하였다. 본 발명에서는 주로 레트로바이러스를 이용하여 제작한 iPSC를 사용하여 유전자 편집 실험을 진행하였다. 사용된 서열은 하기와 같다.
서열번호 | 타깃유전자 | 코딩 서열 (CDS) |
8 | Oct-4 | NM_203289 |
9 | Sox-2 | NM_003106 |
10 | c-Myc | NM_002467 |
11 | Klf-4 | NM_001314052 |
2. B2M
-/-
CIITA
-/-
PDCD1
-/-
CTLA4
-/-
iPSC의 제작
상기 Wild type iPSC에 non-viral plasmid로 4종의 sgRNA/Cas9을 전기천공법으로 도입하였다.
B2M의 넉아웃을 위해 서열번호 1의 sgRNA, CIITA의 넉아웃을 위해 서열번호 2의 sgRNA, PDCD1의 넉아웃을 위해 서열번호 3의 sgRNA, CTLA4의 넉아웃을 위해 서열번호 4의 sgRNA를 사용하였다.
15개의 single cell 유래 콜로니를 독립적으로 배양하여, 넉아웃 여부를 sequencing으로 검증하였다.
Genotype | Colony number | Ratio (%) |
B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- |
1 | 6.7 |
B2M-/- CIITA-/- | 2 | 13.3 |
B2M-/- | 5 | 33.3 |
Wild type | 7 | 46.7 |
15개의 콜로니 중 1개가 B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/-임을 확인하였고, 이는 유전자 편집 이후에도 전형적인 미분화 콜로니 형태를 유지하였고(도 1), 그 genotype은 도 2와 같다.
B2M-/- CIITA-/- iPSC genotype은 도 3과 같다.
3. Novel Don't eat me 유전자의 스크리닝
Novel Don't eat me 유전자를 스크리닝하기 위해 CD24, HLA-G (B2M linked), PSG9 (Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 9) 유전자를 레트로바이러스 벡터 (pMX)에 클로닝 하였다. HLA class I null (B2M-/-) iPSC 유래 분화세포에 각각의 레트로바이러스를 spinfection으로 도입하였다 (MOI=10). qRT-PCR 기법으로 대조군 대비 50배이상 각각의 유전자가 과발현 되었음을 확인하였다. 이 세포를 NK 세포(Natural killer cell)와 반응시켜 세포 독성 정도를 비교하였다. 사용된 서열은 하기와 같다.
서열번호 | 후보 인간 유전자 | 코딩 서열 (CDS) |
12 | HLA-G | NM_002127 |
13 | PSG9 | NM_001301707 |
이를 통해 기존에 잘 알려진 Don't eat me 유전자인 HLA-G와 비슷한 수준의 기능을 보이는 CD24 유전자를 선별하였다(도 4).
B2M-/- 세포 (HLA class I 넉아웃 세포)는 NK 세포의 공격을 받아 죽게 된다 (Death rate = 약 50%). 하지만 B2M-/- 세포에 전통적인 Don’t eat me 유전자인 HLA-G를 과발현시키면 NK 세포가 HLA-G와 상호 작용하여 해당 세포를 공격하지 않게 된다. 그래서 cell death rate가 약 60% 떨어지게 된다 (Death rate = 약 20%). 본 발명자들은 CD24를 B2M-/- 세포에 과발현시켜서 HLA-G와 거의 동일한 cell death 감소 효과를 확인하였다. 이는 NK 세포에 CD24와 결합하는 inhibitory receptor가 존재하기 때문인 것으로 판단된다.
4. B2M
-/-
CIITA
-/-
PDCD1
-/-
CTLA4
-/-
CD24
+
CD19 CAR
+
iPSC 제작
B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- iPSC에 retroviral 인간 CD24 (pMX CD24; 서열번호 6, NM_013230), 2세대 lentiviral CD19 (FMC63 clone) CAR (pHR CD19 CAR; 서열번호 12)를 도입하고, 24개의 single cell 유래 콜로니를 독립적으로 배양한 뒤, CD24, CD19 CAR의 세포 내 도입여부를 PCR로 검증하였다.
24개의 콜로니 중 18개가 CD24+ CD19 CAR+ iPSC임을 확인하였다(도 5).
5. B2M
-/-
CIITA
-/-
PDCD1
-/-
CTLA4
-/-
TRA
-/-
CD24
+
CD19 CAR
+
iPSC 제작
T cell receptor (TCR)는 TRA, TRB 유전자로 구성된다. B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC에 TRA knockout을 위한 CRISPR/Cas9을 전기천공법으로 도입하여 TRA-/-를 추가하였다. 이를 위해 서열번호 5의 sgRNA를 사용하였다. 결과적으로, B2M-/- CIITA-/- PDCD1-/- CTLA4-/- TRA-/- CD24+ CD19 CAR+ iPSC가 제작되었다.
6. NK 세포의 heterogenicity 확인
Novel Don't eat me 유전자인 CD24의 기능에 대한 메커니즘을 분석하기 위해 PBMC와 NK 세포에서 발현하는 inhibitory receptor를 FACS로 분석하였다. 결과적으로, PBMC와 NK 세포는 HLA-G와 결합하는 receptor인 CD85j를 발현하였다. 또한, 이와는 별개로 CD24 와 결합하는 receptor인 Siglec-10을 발현하였다. 종합하면, HLA class I null 세포에 과별현 된 CD24는 NK세포의 Siglec-10 receptor와 결합하여 don't eat me 유전자로 기능하는 것으로 설명될 수 있다.
<110> KANGSTEM BIOTECH CO., LTD.
<120> Off-the-shelf stem cell and immune cell, and a pharmaceutical
composition
<130> 210122
<150> KR 10-2020-0009273
<151> 2020-01-23
<160> 13
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> B2M sgRNA
<400> 1
actcacgctg gatagcctcc 20
<210> 2
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CIITA sgRNA
<400> 2
gatattggca taagcctccc 20
<210> 3
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PDCD1 sgRNA
<400> 3
atgtggaagt cacgcccgtt 20
<210> 4
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CTLA4 sgRNA
<400> 4
gtgcggcaac ctacatgatg 20
<210> 5
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRA sgRNA
<400> 5
ctctcagctg gtacacggca 20
<210> 6
<211> 243
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
atgggcagag caatggtggc caggctcggg ctggggctgc tgctgctggc actgctccta 60
cccacgcaga tttattccag tgaaacaaca actggaactt caagtaactc ctcccagagt 120
acttccaact ctgggttggc cccaaatcca actaatgcca ccaccaaggc ggctggtggt 180
gccctgcagt caacagccag tctcttcgtg gtctcactct ctcttctgca tctctactct 240
taa 243
<210> 7
<211> 10843
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD19 CAR whole vector
<400> 7
tggacggcga cgtaaacggc cacaagcgat accgtcgacc tcgagggaat taattcgagc 60
tcggtacctt taagaccaat gacttacaag gcagctgtag atcttagcca ctttttaaaa 120
gaaaaggggg gactggaagg gctaattcac tcccaacgaa gacaagatct gctttttgct 180
tgtactgggt ctctctggtt agaccagatc tgagcctggg agctctctgg ctaactaggg 240
aacccactgc ttaagcctca ataaagcttg ccttgagtgc ttcaagtagt gtgtgcccgt 300
ctgttgtgtg actctggtaa ctagagatcc ctcagaccct tttagtcagt gtggaaaatc 360
tctagcagca tctagaatta attccgtgta ttctatagtg tcacctaaat cgtatgtgta 420
tgatacataa ggttatgtat taattgtagc cgcgttctaa cgacaatatg tacaagccta 480
attgtgtagc atctggctta ctgaagcaga ccctatcatc tctctcgtaa actgccgtca 540
gagtcggttt ggttggacga accttctgag tttctggtaa cgccgtcccg cacccggaaa 600
tggtcagcga accaatcagc agggtcatcg ctagccagat cctctacgcc ggacgcatcg 660
tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc gacatcaccg 720
atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc gtgggtatgg 780
tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca ccattccttg 840
cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg caggagtcgc 900
ataagggaga gcgtcgaatg gtgcactctc agtacaatct agctctgatg ccgcatagtt 960
aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc 1020
ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc 1080
accgtcatca ccgaaacgcg cgagacgaaa gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt 1140
taatgtcatg ataataatgg tttcttagac gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg 1200
cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca 1260
ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt 1320
ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga 1380
aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga 1440
actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat 1500
gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca 1560
agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt 1620
cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac 1680
catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct 1740
aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga 1800
gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac 1860
aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat 1920
agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg 1980
ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc 2040
actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc 2100
aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg 2160
gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta 2220
atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg 2280
tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga 2340
tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt 2400
ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag 2460
agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa 2520
ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag 2580
tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca 2640
gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac 2700
cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa 2760
ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc 2820
agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg 2880
tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc 2940
ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc 3000
ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag 3060
ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa 3120
accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tgtggaatgt gtgtcagtta 3180
gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat gcatctcaat 3240
tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc 3300
atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat cccgccccta 3360
actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt tatttatgca 3420
gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg cttttttgga 3480
ggcctaggct tttgcaaaaa gcttggacac aagacaggct tgcgagatat gtttgagaat 3540
accactttat cccgcgtcag ggagaggcag tgcgtaaaaa gacgcggact catgtgaaat 3600
actggttttt agtgcgccag atctctataa tctcgcgcaa cctattttcc cctcgaacac 3660
tttttaagcc gtagataaac aggctgggac acttcacatg agcgaaaaat acatcgtcac 3720
ctgggacatg ttgcagatcc atgcacgtaa actcgcaagc cgactgatgc cttctgaaca 3780
atggaaaggc attattgccg taagccgtgg cggtctgtac cgggtgcgtt actggcgcgt 3840
gaactgggta ttcgtcatgt cgataccgtt tgtatttcca gctacgatca cgacaaccag 3900
cgcgagctta aagtgctgaa acgcgcagaa ggcgatggcg aaggcttcat cgttattgat 3960
gacctggtgg ataccggtgg tactgcggtt gcgattcgtg aaatgtatcc aaaagcgcac 4020
tttgtcacca tcttcgcaaa accggctggt cgtccgctgg ttgatgacta tgttgttgat 4080
atcccgcaag atacctggat tgaacagccg tgggatatgg gcgtcgtatt cgtcccgcca 4140
atctccggtc gctaatcttt tcaacgcctg gcactgccgg gcgttgttct ttttaacttc 4200
aggcgggtta caatagtttc cagtaagtat tctggaggct gcatccatga cacaggcaaa 4260
cctgagcgaa accctgttca aaccccgctt taaacatcct gaaacctcga cgctagtccg 4320
ccgctttaat cacggcgcac aaccgcctgt gcagtcggcc cttgatggta aaaccatccc 4380
tcactggtat cgcatgatta accgtctgat gtggatctgg cgcggcattg acccacgcga 4440
aatcctcgac gtccaggcac gtattgtgat gagcgatgcc gaacgtaccg acgatgattt 4500
atacgatacg gtgattggct accgtggcgg caactggatt tatgagtggg ccccggatct 4560
ttgtgaagga accttacttc tgtggtgtga cataattgga caaactacct acagagattt 4620
aaagctctaa ggtaaatata aaatttttaa gtgtataatg tgttaaacta ctgattctaa 4680
ttgtttgtgt attttagatt ccaacctatg gaactgatga atgggagcag tggtggaatg 4740
cctttaatga ggaaaacctg ttttgctcag aagaaatgcc atctagtgat gatgaggcta 4800
ctgctgactc tcaacattct actcctccaa aaaagaagag aaaggtagaa gaccccaagg 4860
actttccttc agaattgcta agttttttga gtcatgctgt gtttagtaat agaactcttg 4920
cttgctttgc tatttacacc acaaaggaaa aagctgcact gctatacaag aaaattatgg 4980
aaaaatattc tgtaaccttt ataagtaggc ataacagtta taatcataac atactgtttt 5040
ttcttactcc acacaggcat agagtgtctg ctattaataa ctatgctcaa aaattgtgta 5100
cctttagctt tttaatttgt aaaggggtta ataaggaata tttgatgtat agtgccttga 5160
ctagagatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc 5220
ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt taacttgttt 5280
attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca 5340
tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc 5400
tggatcaact ggataactca agctaaccaa aatcatccca aacttcccac cccataccct 5460
attaccactg ccaattacct agtggtttca tttactctaa acctgtgatt cctctgaatt 5520
attttcattt taaagaaatt gtatttgtta aatatgtact acaaacttag tagttggaag 5580
ggctaattca ctcccaaaga agacaagata tccttgatct gtggatctac cacacacaag 5640
gctacttccc tgattagcag aactacacac cagggccagg ggtcagatat ccactgacct 5700
ttggatggtg ctacaagcta gtaccagttg agccagataa ggtagaagag gccaataaag 5760
gagagaacac cagcttgtta caccctgtga gcctgcatgg gatggatgac ccggagagag 5820
aagtgttaga gtggaggttt gacagccgcc tagcatttca tcacgtggcc cgagagctgc 5880
atccggagta cttcaagaac tgctgatatc gagcttgcta caagggactt tccgctgggg 5940
actttccagg gaggcgtggc ctgggcggga ctggggagtg gcgagccctc agatcctgca 6000
tataagcagc tgctttttgc ctgtactggg tctctctggt tagaccagat ctgagcctgg 6060
gagctctctg gctaactagg gaacccactg cttaagcctc aataaagctt gccttgagtg 6120
cttcaagtag tgtgtgcccg tctgttgtgt gactctggta actagagatc cctcagaccc 6180
ttttagtcag tgtggaaaat ctctagcagt ggcgcccgaa cagggacttg aaagcgaaag 6240
ggaaaccaga ggagctctct cgacgcagga ctcggcttgc tgaagcgcgc acggcaagag 6300
gcgaggggcg gcgactggtg agtacgccaa aaattttgac tagcggaggc tagaaggaga 6360
gagatgggtg cgagagcgtc agtattaagc gggggagaat tagatcgcga tgggaaaaaa 6420
ttcggttaag gccaggggga aagaaaaaat ataaattaaa acatatagta tgggcaagca 6480
gggagctaga acgattcgca gttaatcctg gcctgttaga aacatcagaa ggctgtagac 6540
aaatactggg acagctacaa ccatcccttc agacaggatc agaagaactt agatcattat 6600
ataatacagt agcaaccctc tattgtgtgc atcaaaggat agagataaaa gacaccaagg 6660
aagctttaga caagatagag gaagagcaaa acaaaagtaa gaccaccgca cagcaagcgg 6720
ccggtgatct tcagacctgg acgatatata tgagggacaa ttggagaagt gaattatata 6780
aatataaagt agtaaaaatt gaaccattag gagtagcacc caccaaggca aagagaagag 6840
tggtgcagag agaaaaaaga gcagtgggaa taggagcttt gttccttggg ttcttgggag 6900
cagcaggaag cactatgggc gcagcgtcaa tgacgctgac ggtacaggcc agacaattat 6960
tgtctggtat agtgcagcag cagaacaatt tgctgagggc tattgaggcg caacagcatc 7020
tgttgcaact cacagtctgg ggcatcaagc agctccaggc aagaatcctg gctgtggaaa 7080
gatacctaaa ggatcaacag ctcctgggga tttggggttg ctctggaaaa ctcatttgca 7140
ccactgctgt gccttggaat gctagttgga gtaataaatc tctggaacag atttggaatc 7200
acacgacctg gatggagtgg gacagagaaa ttaacaatta cacaagctta atacactcct 7260
taattgaaga atcgcaaaac cagcaagaaa agaatgaaca agaattattg gaattagata 7320
aatgggcaag tttgtggaat tggtttaaca taacaaattg gctgtggtat ataaaattat 7380
tcataatgat agtaggaggc ttggtaggtt taagaatagt ttttgctgta ctttctatag 7440
tgaatagagt taggcaggga tattcaccat tatcgtttca gacccacctc ccaaccccga 7500
ggggacccga caggcccgaa ggaatagaag aagaaggtgg agagagagac agagacagat 7560
ccattcgatt agtgaacgga tctcgacggt atcgccaaat ggcagtattc atccacaatt 7620
ttaaaagaaa aggggggatt ggggggtaca gtgcagggga aagaatagta gacataatag 7680
caacagacat acaaactaaa gaattacaaa aacaaattac aaaaattcaa aattttcggg 7740
tttattacag ggacagcaga gatccagttt ggatcgataa gcttgatatc gaattcctgc 7800
agccccgata aaataaaaga ttttatttag tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc 7860
cacctgtagg tttggcaagc tagctgcagt aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac 7920
caaaccaaga atagagaagt tcagatcaag ggcgggtaca tgaaaatagc taacgttggg 7980
ccaaacagga tatctgcggt gagcagtttc ggccccggcc cggggccaag aacagatggt 8040
caccgcagtt tcggccccgg cccgaggcca agaacagatg gtccccagat atggcccaac 8100
cctcagcagt ttcttaagac ccatcagatg tttccaggct cccccaagga cctgaaatga 8160
ccctgcgcct tatttgaatt aaccaatcag cctgcttctc gcttctgttc gcgcgcttct 8220
gcttcccgag ctctataaaa gagctcacaa cccctcactc ggcgcgccag tcctccgaca 8280
gactgagtcg cccggggggg atctggagct ctcgagaatt ctcacgcgtg ccaccatggc 8340
cttaccagtg accgccttgc tcctgccgct ggccttgctg ctccacgccg ccaggccgga 8400
catccagatg acacagacta catcctccct gtctgcctct ctgggagaca gagtcaccat 8460
cagttgcagg gcaagtcagg acattagtaa atatttaaat tggtatcagc agaaaccaga 8520
tggaactgtt aaactcctga tctaccatac atcaagatta cactcaggag tcccatcaag 8580
gttcagtggc agtgggtctg gaacagatta ttctctcacc attagcaacc tggagcaaga 8640
agatattgcc acttactttt gccaacaggg taatacgctt ccgtacacgt tcggaggggg 8700
gaccaagctg gagatcacag gtggcggtgg ctcgggcggt ggtgggtcgg gtggcggcgg 8760
atctgaggtg aaactgcagg agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc 8820
cgtcacatgc actgtctcag gggtctcatt acccgactat ggtgtaagct ggattcgcca 8880
gcctccacga aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg ggtagtgaaa ccacatacta 8940
taattcagct ctcaaatcca gactgaccat catcaaggac aactccaaga gccaagtttt 9000
cttaaaaatg aacagtctgc aaactgatga cacagccatt tactactgtg ccaaacatta 9060
ttactacggt ggtagctatg ctatggacta ctggggccaa ggaacctcag tcaccgtctc 9120
ctcaaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg cccaccatcg cgtcgcagcc 9180
cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc acacgagggg 9240
gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg gccgggactt gtggggtcct 9300
tctcctgtca ctggttatca ccctttactg cagacgactc aagatccagg tccgaaaggc 9360
agctatagcc agccgtgaga aagcagatgc tgtctacacg ggcctgaaca cccggagcca 9420
ggagacatat gagactctga agcatgagaa accaccccag ggatccggaa gtatggtgag 9480
caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt 9540
aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct 9600
gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac 9660
caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga 9720
cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga 9780
cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg 9840
catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga 9900
gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa 9960
ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta 10020
ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag 10080
cacccagtcc aagctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga 10140
gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aaagcggccg 10200
cgactctaga gtcgacctgc aggcatgcaa gcttgatatc aagcttatcg ataatcaacc 10260
tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg ctccttttac 10320
gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc gtatggcttt 10380
cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt tgtggcccgt 10440
tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca ctggttgggg 10500
cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc ctattgccac 10560
ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc tgttgggcac 10620
tgacaattcc gtggtgttgt cggggaaatc atcgtccttt ccttggctgc tcgcctgtgt 10680
tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc tcaatccagc 10740
ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc ttcgccttcg 10800
ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg cat 10843
<210> 8
<211> 573
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
ctgggggttc tatttgggaa ggtattcagc caaacgacca tctgccgctt tgaggctctg 60
cagcttagct tcaagaacat gtgtaagctg cggcccttgc tgcagaagtg ggtggaggaa 120
gctgacaaca atgaaaatct tcaggagata tgcaaagcag aaaccctcgt gcaggcccga 180
aagagaaagc gaaccagtat cgagaaccga gtgagaggca acctggagaa tttgttcctg 240
cagtgcccga aacccacact gcagcagatc agccacatcg cccagcagct tgggctcgag 300
aaggatgtgg tccgagtgtg gttctgtaac cggcgccaga agggcaagcg atcaagcagc 360
gactatgcac aacgagagga ttttgaggct gctgggtctc ctttctcagg gggaccagtg 420
tcctttcctc tggccccagg gccccatttt ggtaccccag gctatgggag ccctcacttc 480
actgcactgt actcctcggt ccctttccct gagggggaag cctttccccc tgtctccgtc 540
accactctgg gctctcccat gcattcaaac tga 573
<210> 9
<211> 954
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
atgtacaaca tgatggagac ggagctgaag ccgccgggcc cgcagcaaac ttcggggggc 60
ggcggcggca actccaccgc ggcggcggcc ggcggcaacc agaaaaacag cccggaccgc 120
gtcaagcggc ccatgaatgc cttcatggtg tggtcccgcg ggcagcggcg caagatggcc 180
caggagaacc ccaagatgca caactcggag atcagcaagc gcctgggcgc cgagtggaaa 240
cttttgtcgg agacggagaa gcggccgttc atcgacgagg ctaagcggct gcgagcgctg 300
cacatgaagg agcacccgga ttataaatac cggccccggc ggaaaaccaa gacgctcatg 360
aagaaggata agtacacgct gcccggcggg ctgctggccc ccggcggcaa tagcatggcg 420
agcggggtcg gggtgggcgc cggcctgggc gcgggcgtga accagcgcat ggacagttac 480
gcgcacatga acggctggag caacggcagc tacagcatga tgcaggacca gctgggctac 540
ccgcagcacc cgggcctcaa tgcgcacggc gcagcgcaga tgcagcccat gcaccgctac 600
gacgtgagcg ccctgcagta caactccatg accagctcgc agacctacat gaacggctcg 660
cccacctaca gcatgtccta ctcgcagcag ggcacccctg gcatggctct tggctccatg 720
ggttcggtgg tcaagtccga ggccagctcc agcccccctg tggttacctc ttcctcccac 780
tccagggcgc cctgccaggc cggggacctc cgggacatga tcagcatgta tctccccggc 840
gccgaggtgc cggaacccgc cgcccccagc agacttcaca tgtcccagca ctaccagagc 900
ggcccggtgc ccggcacggc cattaacggc acactgcccc tctcacacat gtga 954
<210> 10
<211> 1365
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
ctggattttt ttcgggtagt ggaaaaccag cagcctcccg cgacgatgcc cctcaacgtt 60
agcttcacca acaggaacta tgacctcgac tacgactcgg tgcagccgta tttctactgc 120
gacgaggagg agaacttcta ccagcagcag cagcagagcg agctgcagcc cccggcgccc 180
agcgaggata tctggaagaa attcgagctg ctgcccaccc cgcccctgtc ccctagccgc 240
cgctccgggc tctgctcgcc ctcctacgtt gcggtcacac ccttctccct tcggggagac 300
aacgacggcg gtggcgggag cttctccacg gccgaccagc tggagatggt gaccgagctg 360
ctgggaggag acatggtgaa ccagagtttc atctgcgacc cggacgacga gaccttcatc 420
aaaaacatca tcatccagga ctgtatgtgg agcggcttct cggccgccgc caagctcgtc 480
tcagagaagc tggcctccta ccaggctgcg cgcaaagaca gcggcagccc gaaccccgcc 540
cgcggccaca gcgtctgctc cacctccagc ttgtacctgc aggatctgag cgccgccgcc 600
tcagagtgca tcgacccctc ggtggtcttc ccctaccctc tcaacgacag cagctcgccc 660
aagtcctgcg cctcgcaaga ctccagcgcc ttctctccgt cctcggattc tctgctctcc 720
tcgacggagt cctccccgca gggcagcccc gagcccctgg tgctccatga ggagacaccg 780
cccaccacca gcagcgactc tgaggaggaa caagaagatg aggaagaaat cgatgttgtt 840
tctgtggaaa agaggcaggc tcctggcaaa aggtcagagt ctggatcacc ttctgctgga 900
ggccacagca aacctcctca cagcccactg gtcctcaaga ggtgccacgt ctccacacat 960
cagcacaact acgcagcgcc tccctccact cggaaggact atcctgctgc caagagggtc 1020
aagttggaca gtgtcagagt cctgagacag atcagcaaca accgaaaatg caccagcccc 1080
aggtcctcgg acaccgagga gaatgtcaag aggcgaacac acaacgtctt ggagcgccag 1140
aggaggaacg agctaaaacg gagctttttt gccctgcgtg accagatccc ggagttggaa 1200
aacaatgaaa aggcccccaa ggtagttatc cttaaaaaag ccacagcata catcctgtcc 1260
gtccaagcag aggagcaaaa gctcatttct gaagaggact tgttgcggaa acgacgagaa 1320
cagttgaaac acaaacttga acagctacgg aactcttgtg cgtaa 1365
<210> 11
<211> 1542
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
atgaggcagc cacctggcga gtctgacatg gctgtcagcg acgcgctgct cccatctttc 60
tccacgttcg cgtctggccc ggcgggaagg gagaagacac tgcgtcaagc aggtgccccg 120
aataaccgct ggcgggagga gctctcccac atgaagcgac ttcccccagt gcttcccggc 180
cgcccctatg acctggcggc ggcgaccgtg gccacagacc tggagagcgg cggagccggt 240
gcggcttgcg gcggtagcaa cctggcgccc ctacctcgga gagagaccga ggagttcaac 300
gatctcctgg acctggactt tattctctcc aattcgctga cccatcctcc ggagtcagtg 360
gccgccaccg tgtcctcgtc agcgtcagcc tcctcttcgt cgtcgccgtc gagcagcggc 420
cctgccagcg cgccctccac ctgcagcttc acctatccga tccgggccgg gaacgacccg 480
ggcgtggcgc cgggcggcac gggcggaggc ctcctctatg gcagggagtc cgctccccct 540
ccgacggctc ccttcaacct ggcggacatc aacgacgtga gcccctcggg cggcttcgtg 600
gccgagctcc tgcggccaga attggacccg gtgtacattc cgccgcagca gccgcagccg 660
ccaggtggcg ggctgatggg caagttcgtg ctgaaggcgt cgctgagcgc ccctggcagc 720
gagtacggca gcccgtcggt catcagcgtc agcaaaggca gccctgacgg cagccacccg 780
gtggtggtgg cgccctacaa cggcgggccg ccgcgcacgt gccccaagat caagcaggag 840
gcggtctctt cgtgcaccca cttgggcgct ggaccccctc tcagcaatgg ccaccggccg 900
gctgcacacg acttccccct ggggcggcag ctccccagca ggactacccc gaccctgggt 960
cttgaggaag tgctgagcag cagggactgt caccctgccc tgccgcttcc tcccggcttc 1020
catccccacc cggggcccaa ttacccatcc ttcctgcccg atcagatgca gccgcaagtc 1080
ccgccgctcc attaccaagg tcagtcccgg ggatttgtag ctcgggctgg ggagccctgt 1140
gtgtgctggc cccacttcgg gacacacggg atgatgctca ccccaccttc ttcaccccta 1200
gagctcatgc cacccggttc ctgcatgcca gaggagccca agccaaagag gggaagacga 1260
tcgtggcccc ggaaaaggac cgccacccac acttgtgatt acgcgggctg cggcaaaacc 1320
tacacaaaga gttcccatct caaggcacac ctgcgaaccc acacaggtga gaaaccttac 1380
cactgtgact gggacggctg tggatggaaa ttcgcccgct cagatgaact gaccaggcac 1440
taccgtaaac acacggggca ccgcccgttc cagtgccaaa aatgcgaccg agcattttcc 1500
aggtcggacc acctcgcctt acacatgaag aggcattttt aa 1542
<210> 12
<211> 1017
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
atggtggtca tggcgccccg aaccctcttc ctgctgctct cgggggccct gaccctgacc 60
gagacctggg cgggctccca ctccatgagg tatttcagcg ccgccgtgtc ccggcccggc 120
cgcggggagc cccgcttcat cgccatgggc tacgtggacg acacgcagtt cgtgcggttc 180
gacagcgact cggcgtgtcc gaggatggag ccgcgggcgc cgtgggtgga gcaggagggg 240
ccggagtatt gggaagagga gacacggaac accaaggccc acgcacagac tgacagaatg 300
aacctgcaga ccctgcgcgg ctactacaac cagagcgagg ccagttctca caccctccag 360
tggatgattg gctgcgacct ggggtccgac ggacgcctcc tccgcgggta tgaacagtat 420
gcctacgatg gcaaggatta cctcgccctg aacgaggacc tgcgctcctg gaccgcagcg 480
gacactgcgg ctcagatctc caagcgcaag tgtgaggcgg ccaatgtggc tgaacaaagg 540
agagcctacc tggagggcac gtgcgtggag tggctccaca gatacctgga gaacgggaag 600
gagatgctgc agcgcgcgga cccccccaag acacacgtga cccaccaccc tgtctttgac 660
tatgaggcca ccctgaggtg ctgggccctg ggcttctacc ctgcggagat catactgacc 720
tggcagcggg atggggagga ccagacccag gacgtggagc tcgtggagac caggcctgca 780
ggggatggaa ccttccagaa gtgggcagct gtggtggtgc cttctggaga ggagcagaga 840
tacacgtgcc atgtgcagca tgaggggctg ccggagcccc tcatgctgag atggaagcag 900
tcttccctgc ccaccatccc catcatgggt atcgttgctg gcctggttgt ccttgcagct 960
gtagtcactg gagctgcggt cgctgctgtg ctgtggagaa agaagagctc agattga 1017
<210> 13
<211> 1002
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
atggggcccc tcccagcccc ttcctgcaca cagcgcatca cctggaaggg gctcctgctc 60
acagcatcac ttttaaactt ctggaacccg cccaccactg ccgaagtcac gattgaagcc 120
cagccaccca aagtttctga ggggaaggat gttcttctac ttgtccacaa tttgccccag 180
aatcttcctg gctacttctg gtacaaaggg gaaatgacgg acctctacca ttacattata 240
tcgtatatag ttgatggtaa aataattata tatgggcctg catacagtgg aagagaaaca 300
gtatattcca acgcatccct gctgatccag aatgtcaccc ggaaggatgc aggaacctac 360
accttacaca tcataaagcg aggtgatgag actagagaag aaattcgaca tttcaccttc 420
accttatact cgaagctgcc catcccctac atcaccatca acaacttaaa ccccagggag 480
aataaggatg tcttagcctt cacctgtgaa cctaagagtg agaactacac ctacatttgg 540
tggctaaacg gtcagagcct ccccgtcagt cccggggtaa agcgacccat tgaaaacagg 600
atactcattc tacccagtgt cacgagaaat gaaacaggac cctatcaatg tgaaatacgg 660
gaccgatatg gtggcctccg cagtaaccca gtcatcctaa atgtcctcta tggtccagac 720
ctccccagaa tttacccttc attcacctat taccgttcag gagaaaacct cgacttgtcc 780
tgcttcacgg aatctaaccc accggcagag tatttttgga caattaatgg gaagtttcag 840
caatcaggac aaaagctctt tatcccccaa attactagaa atcatagcgg gctctatgct 900
tgctctgttc ataactcagc cactggcaag gaaatctcca aatccatgac agtcaaagtc 960
tctggtccct gccatggaga cctgacagag tctcagtcat ga 1002
Claims (13)
- B2M(Beta-2 microglobulin) 유전자의 발현이 억제되고, CD24(cluster of differentiation 24) 유전자를 발현하는 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1에 있어서, CIITA(class II, major histocompatibility complex, transactivator), PDCD1(Programmed cell death protein 1), CTLA4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4) 및 TCR(T-cell receptor)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1개의 유전자의 발현이 억제된, 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1에 있어서, 암세포 표면 항원 특이적 CAR(Chimeric Antigen Receptor, 키메라 항원 수용체)를 발현하는, 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1에 있어서, B2M, CIITA, PDCD1 및 CTLA4 유전자의 발현이 억제되고, CD24 유전자 및 암세포 표면 항원 특이적 CAR를 발현하는, 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 4에 있어서, TCR의 발현이 억제된, 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1에 있어서, 상기 TCR은 TRA(T cell receptor Alpha)인, 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1에 있어서, 상기 암세표 표면 항원은 CD19(Cluster of Differentiation 19)인 분화전능성 줄기세포.
- 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항의 줄기세포로부터 유도된 면역세포.
- 청구항 8에 있어서, 세포독성 T 세포(cytotoxic T cell), NK(Natural kill) 세포 또는 대식세포인, 면역세포.
- 청구항 3의 면역세포를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 청구항 10에 있어서, 상기 암은 고형암 또는 혈액암인 것인, 약학 조성물.
- 청구항 11에 있어서, 상기 고형암은 췌장암, 유방암, 전립선암, 뇌종양, 두경부암종, 흑색종, 골수종, 간암, 위암, 결장암, 골암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 결장암, 나팔관암, 질암, 음문암, 호지킨병, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암, 신장골반암, 중추신경계 종양 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 암종인 것인, 약학 조성물.
- 청구항 11에 있어서, 상기 혈액암은 백혈병인, 약학 조성물.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020200009273 | 2020-01-23 | ||
KR20200009273 | 2020-01-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20210095586A true KR20210095586A (ko) | 2021-08-02 |
Family
ID=76991783
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020210009773A KR20210095586A (ko) | 2020-01-23 | 2021-01-22 | off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210254005A1 (ko) |
EP (1) | EP4183868A1 (ko) |
JP (1) | JP2023511965A (ko) |
KR (1) | KR20210095586A (ko) |
CN (1) | CN115335508A (ko) |
WO (1) | WO2021150078A1 (ko) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11661459B2 (en) | 2020-12-03 | 2023-05-30 | Century Therapeutics, Inc. | Artificial cell death polypeptide for chimeric antigen receptor and uses thereof |
US11883432B2 (en) | 2020-12-18 | 2024-01-30 | Century Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptor system with adaptable receptor specificity |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20190130024A (ko) | 2017-04-03 | 2019-11-20 | 카이트 파마 인코포레이티드 | 최적화된 다기능 t 세포를 포함하는 키메라 수용체 t 세포를 사용하는 치료 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2782125T3 (es) * | 2014-03-11 | 2020-09-10 | Cellectis | Método para generar linfocitos T compatibles para trasplante alogénico |
KR20230152175A (ko) * | 2014-04-18 | 2023-11-02 | 에디타스 메디신, 인코포레이티드 | 암 면역요법을 위한 crispr-cas-관련 방법, 조성물 및 구성성분 |
EP3215166B1 (en) * | 2014-10-31 | 2024-04-24 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Altering gene expression in car-t cells and uses thereof |
EP3215623A4 (en) * | 2014-11-06 | 2018-09-26 | President and Fellows of Harvard College | Cells lacking b2m surface expression and methods for allogeneic administration of such cells |
EP3234193B1 (en) * | 2014-12-19 | 2020-07-15 | Massachusetts Institute of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
CN108368520B (zh) * | 2015-11-04 | 2023-01-17 | 菲特治疗公司 | 多能细胞的基因组工程改造 |
US20180362975A1 (en) * | 2015-12-04 | 2018-12-20 | Novartis Ag | Compositions and methods for immunooncology |
JP2020530997A (ja) * | 2017-08-08 | 2020-11-05 | サンガモ セラピューティクス, インコーポレイテッド | キメラ抗原受容体媒介性細胞標的化 |
US20200384022A1 (en) * | 2017-11-13 | 2020-12-10 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for targeting developmental and oncogenic programs in h3k27m gliomas |
US20210040449A1 (en) * | 2018-02-16 | 2021-02-11 | Kite Pharma, Inc. | Modified pluripotent stem cells and methods of making and use |
-
2021
- 2021-01-22 WO PCT/KR2021/000942 patent/WO2021150078A1/ko unknown
- 2021-01-22 JP JP2022545049A patent/JP2023511965A/ja active Pending
- 2021-01-22 US US17/156,476 patent/US20210254005A1/en active Pending
- 2021-01-22 KR KR1020210009773A patent/KR20210095586A/ko active IP Right Grant
- 2021-01-22 EP EP21745031.1A patent/EP4183868A1/en active Pending
- 2021-01-22 CN CN202180024155.7A patent/CN115335508A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20190130024A (ko) | 2017-04-03 | 2019-11-20 | 카이트 파마 인코포레이티드 | 최적화된 다기능 t 세포를 포함하는 키메라 수용체 t 세포를 사용하는 치료 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2021150078A1 (ko) | 2021-07-29 |
EP4183868A1 (en) | 2023-05-24 |
CN115335508A (zh) | 2022-11-11 |
US20210254005A1 (en) | 2021-08-19 |
JP2023511965A (ja) | 2023-03-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110650975B (zh) | 双顺反子嵌合抗原受体及其用途 | |
KR20200131867A (ko) | 항-cd33 키메라 항원 수용체 및 이의 용도 | |
KR20220066914A (ko) | 부정맥 유발성 우심실 심근병증의 유전자 요법 조성물 및 치료 | |
CN112680466B (zh) | 一种表达人源ace2的动物模型及其用途 | |
KR101258949B1 (ko) | 활성형 재조합 혈액응고 9인자의 대량생산 방법 | |
CN109414483A (zh) | 对补体灭活作用具有抗性的用于治疗癌症的包膜病毒 | |
CN111269888B (zh) | 一种adipsin基因修饰的脂肪干细胞、制备方法及其应用 | |
CN112522271B (zh) | 一种sgRNA及其应用 | |
KR20210095586A (ko) | off-the-shelf 줄기세포 및 면역세포, 이를 포함하는 약학적 조성물 | |
CN117715660A (zh) | 右心室致心律失常性心肌病的基因治疗组合物和治疗 | |
CN112877351A (zh) | 一种用于防治新冠病毒感染的重组质粒、重组乳酸杆菌表达系统及其应用 | |
CN114107390B (zh) | 一种用于表达抗体IgG1的rAAV载体及其应用 | |
CN110438053B (zh) | 一种适用于聚球藻的生物封存系统、构建方法及应用 | |
KR101885438B1 (ko) | 유전자치료 벡터시스템 및 전구약물 유전자 | |
CN110225977B (zh) | 基因治疗载体系统和药物前体基因 | |
CN108277208B (zh) | 携带绿色荧光蛋白以及转铁蛋白的水疱性口炎病毒感染性克隆及制备方法和应用 | |
CN109735558B (zh) | 一种重组car19-il24基因、慢病毒载体、car19-il24-t细胞及应用 | |
US20020103144A1 (en) | Retroviral gene transfer vectors | |
CN114277190A (zh) | 一种hiPSC中外源基因残留检测用特异性DNA片段、引物、试剂盒和检测方法 | |
CN111088204A (zh) | 表达Caspase-3重组scFv78的重组大肠杆菌及其功能验证方法 | |
RU2791051C2 (ru) | Оболочечный вирус, резистентный к инактивации комплементом, для лечения злокачественных новообразований | |
CN115161294B (zh) | 新城疫疫苗株及其构建方法、禽类免疫识别方法、应用 | |
CN110938648A (zh) | 一种真菌分泌表达载体、构建方法及其应用 | |
RU2805173C1 (ru) | Способ получения генно-модифицированных лабораторных животных с нуль-аллелем гена P2rx3 | |
CN109872774A (zh) | 一种基于yess分析原核生物中蛋白相互作用的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal | ||
AMND | Amendment | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
AMND | Amendment | ||
X701 | Decision to grant (after re-examination) |